用于肝細胞癌的診斷、預后、監(jiān)測和治療的方法【專利摘要】本發(fā)明首次公開了由肝線粒體代謝的辛酸的水平，如在使用同位素標記的辛酸的呼吸測試中所反映的，與活躍的HCC的存在相關，并可被用于檢測和監(jiān)測HCC。特別地，現在公開了同位素標記的辛酸呼吸測試（OBT），例如13C-辛酸呼吸測試的較低的值指示活躍的HCC。出人意料地發(fā)現與患有非活躍的HCC的受試者和未患有HCC的對照受試者相比，觀察到患有活躍HCC的受試者的顯著較低的13C-辛酸呼吸測試值。本文下面示例的患有非活躍HCC的受試者已經受TACE治療并在緊鄰該過程之后和直至該過程之后的3個月被評價?！緦＠f明】用于肝細胞癌的診斷、預后、監(jiān)測和治療的方法發(fā)明領域[0001]本發(fā)明涉及肝細胞癌(HCC)的診斷、預后、監(jiān)測和治療。具體地，本發(fā)明涉及在HCC的檢測和監(jiān)測中使用基于同位素標記的辛酸的呼吸測試。[0002]發(fā)明背景[0003]肝細胞癌(HCC，也稱為惡性肝細胞瘤)是肝的原發(fā)惡性腫瘤。HCC最常出現在患有慢性病毒性肝炎(例如，乙型肝炎)和/或具有任何病因的肝硬化的患者中。非酒精性脂肪性肝炎(NASH)也被發(fā)現是形成HCC的危險因素。其他危險因素的實例包括高黃曲霉毒素暴露和鐵過載病癥諸如血色素沉著癥。在某些情況下，隱源性HCC在無肝病歷史或已知危險因素的患者中形成。[0004]世界范圍內的HCC發(fā)病率不斷增加。在世界的一些地方，諸如撒哈拉以南非洲、中國、香港和臺灣，可能由于高的肝炎病毒像乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的暴露及由于環(huán)境病原體的區(qū)域暴露，HCC是主要的健康問題。[0005]HCC的發(fā)病機理不是完全已知，然而，線粒體功能障礙被暗示參與其中。HCC細胞顯示具有減弱的線粒體功能的遺傳和代謝變化(Warburg0(1956)."Ontheoriginofcancercells".Sciencel23(3191):309-14)。[0006]HCC的治療可針對治愈，或集中在癥狀的緩解和生命的延長。典型地根據腫瘤的大小和階段選擇治療的類型。當腫瘤是小的(小于2-3cm)、限于肝的一葉、不具有肝血管系統(tǒng)的侵入的跡象并呈保存好的肝功能時，可執(zhí)行手術切除。其他治療選項包括肝移植、射頻消蝕(RFA)和動脈化療栓塞(TACE)(關于治療方法(algorithm)，見，例如，巴塞羅那臨床肝癌(BCLC)分期系統(tǒng))。在RFA中，`通過在圖像指導(諸如X-射線篩查、CT掃描或超聲)下進入到腫瘤的針電極將射頻能量傳送至腫瘤。穿過針的射頻波通過熱凝固和蛋白變性導致腫瘤破壞。在TACE中，通過導管向腫瘤直接施用化學治療，并切斷至腫瘤的血液供給。除了以上描述的程序之外，還可施用口服藥物。例如，甲苯磺酸索拉非尼(Nexavar?)，一種通過活化內在的線粒體通路阻斷腫瘤生長的口服藥物(Kurosu,“SorafenibinducesapoptosisspecificallyincellsexpressingBCR/ABLbyinhibitingitskinaseactivitytoactivatetheintrinsicmitochondrialpathway，，，CancerResearch2009Mayl;69(9):3927-36.)，被批準用于患有晚期HCC的患者。[0007]通常，如果早期診斷，小的或緩慢生長的腫瘤可被成功治愈。然而，早期診斷是困難的，部分因為形成HCC的大多數患者，除了與他們的長期存在的肝病相關的癥狀之外不具有癥狀。通常執(zhí)行高風險組，諸如肝硬化患者的監(jiān)控以便于HCC的早期檢測(見，例如，AASLDGuidelines)。[0008]HCC的檢測和診斷典型地基于成像測試、血清學測試和有時的活組織檢查。成像測試包括，例如，腹部超聲、螺旋計算機斷層掃描(CT)掃描、三相CT掃描和磁共振成像(MRI)。血清學測試包括甲胎蛋白(AFP)的血液水平的測量，其中AFP的高水平與HCC相關。典型的策略是用AFP和超聲每隔6個月監(jiān)控。[0009]還執(zhí)行HCC的評價作為治療后監(jiān)測的部分。通常使用對比增強的CT或MRI放射執(zhí)行治療療效的評價和活躍的對非活躍的HCC的確定。示例性的對比介質(contrastmedia)是破油R(Iipiodolii)，一種選擇性保持在腫瘤微血管內的碘化油劑。被治療的病灶中血管增強的缺乏典型指示對治療的積極響應。AFP作為隨訪工具不是足夠準確，且治療后AFP水平的監(jiān)測無法代替成像。理想的成像間隔是不清楚的，但初始治療后通常使用最初3-4個月的間隔以監(jiān)測HCC病灶。[0010]用于HCC診斷和隨訪的標準技術具有幾個缺點。例如,基于CT或MRI的成像方法被認為是昂貴的、必須由熟練的從業(yè)者在醫(yī)院執(zhí)行、并與強輻射和副作用相關，諸如在CT/MRI情況下對比介質引起的腎病。另外，諸如AFP測量的方法不是足夠地靈敏或特異。[0011]基于監(jiān)測13CO2水平的呼吸測試，其是由肝代謝的13C標記的物質的副產物，已被提出作為用于評價肝功能的工具。如果測試化合物的肝代謝導致二氧化碳的形成，且適當的碳被標記，那么標記的CO2(其在例如，質譜或無色散紅外分析儀中是可測量的)的呼氣則反映原始標記的化合物的肝清除并可被用于評價特定的肝功能。例如，由肝細胞細胞色素P450酶代謝的化合物可被用于評價肝微粒體功能。示例性的化合物是美沙西丁(methacetin)。作為另一個實例,在肝線粒體中經過代謝的化合物可被用于評價肝線粒體功能并可被用于檢測某些肝病癥(見例如，Grattagliano等人(2010)EurJClinInvest,40(9):843-850和Portincasa等人(2010)ClujulMedical,83:23-26)。[0012]一種示例性的分子是酮異己酸(KICA)，一種在肝線粒體中經過脫羧反應的化合物。已報道了在HCC患者的肝功能評價中使用KICA呼吸測試(Palmieri等人(2009)JournalofSurgicalResearchl57,199-207)。在本研究中，評價了兩種不同的HCC治療對肝功能的影響。除了其他的之外，使用KICA脫羧反應測試患有和未患有HCC的肝硬化患者。在基線狀態(tài)，與健康的對照和未患有HCC的肝硬化患者相比，患有HCC的患者具有顯著較低的13C-KICA呼吸測試值。在未患有HCC的肝硬化患者和健康的對照之間出現13C-KICA呼吸測試值中不重要但顯著的變化(minorbutsignificantchanges)(與健康的對照相t匕，觀察到未患有HCC的肝硬化患者的較低的值)?；颊弑籘ACE或RFA治療之后，在第I天、第30天及第180天再次測試了13C-KICA水平。作者總結:“酮異己酸脫羧反應未受TACE影響但在RFA之后被減弱(_27%，P〈0.05)”，并得出結論:RFA而非TACE呈現解除(spare)剩余(微粒體)肝質量，但對線粒體功能引起如此短暫的擊昏效應。[0013]由肝線粒體代謝的另一種示例性分子是辛酸。辛酸是進入線粒體并經過β_氧化產生乙酰輔酶A(乙酰-CoA)的中鏈脂肪酸。除非其被用于其他高能化合物的合成，乙酰-CoA進入Krebs循環(huán)并被氧化為CO2。[0014]本發(fā)明的申請人:的W02007/054940公開了用于肝功能和代謝能力的評價或評價肝健康和/或肝損傷的程度的呼吸測試裝置和方法。例如，公開了評價肝病癥的方法，該方法包括在向受試者施用同位素標記的辛酸、其鹽或衍生物之后，在線監(jiān)測受試者呼吸中辛酸、辛酸的鹽或衍生物的代謝產物。作為另一個實例，公開了用于評價肝病癥的裝置，該裝置包括適于在線監(jiān)測受試者呼吸中標記的辛酸、或其鹽或衍生物的代謝產物的同位素水平的一個或多個傳感器，和在連續(xù)模式下適于一個或多個傳感器的樣品測量的控制器。該方法和裝置可被用于區(qū)別受試者的非酒精性脂肪性肝病癥和非酒精性脂肪性肝炎病癥。[0015]本發(fā)明的申請人:的W02010/013235公開了可被用于肝功能和代謝能力的評價或評價肝健康和/或肝損傷的程度的呼吸測試裝置和方法。例如，公開了檢測與胰島素耐受性或酒精性肝病或非酒精性脂肪性肝病或代謝綜合征相關的異常β-氧化的方法，該方法包括在向受試者施用同位素標記的辛酸、其鹽或衍生物之后，監(jiān)測受試者呼吸中辛酸、辛酸的鹽或衍生物的代謝產物。[0016]肝代謝的復雜性加強了對評價其功能的挑戰(zhàn)，并因此呼吸測試結果的解讀并非總是明確的。關于呼吸測試結果的解讀的潛在局限性的實例包括混雜變量(例如，運動)的存在、胃排空動力學的類型學、被施用的物質的肝首過代謝、和化合物的消除和代謝的競爭性通路的存在。應被考慮的另外的因素包括，例如，在除了肝以外的器官中發(fā)生的線粒體代謝的存在(當肝代謝是目的代謝時，肝之外的代謝將負面影響測試相關性)、外源標記的化合物在未標記化合物的較大的池中的可能的稀釋、和在受試者之間可基本上不同的未標記的CO2的內源產生。此外，存在導致高的患者內和患者間可變性的許多因素，且不同的疾病病因可影響肝的不同功能并可導致不同的呼吸測試結果。[0017]對用于監(jiān)控、檢測、預后和監(jiān)測對肝細胞癌的治療的響應的經濟有效、準確并簡單的方法和系統(tǒng)仍然存在需求。[0018]發(fā)明概述[0019]本發(fā)明提供了用于改進的HCC檢測、評價并監(jiān)測對治療的響應的方法和系統(tǒng)，該方法和系統(tǒng)利用辛酸(octanoate)或其鹽或衍生物。[0020]本發(fā)明首次公開了由肝線粒體代謝的辛酸的水平，如在使用同位素標記的辛酸的呼吸測試中所反映的，與活躍的HCC的存在相關，并可被用于檢測和監(jiān)測HCC。特別地，現在公開了同位素標記的辛酸呼吸測試(0ΒΤ)，例如13C-辛酸呼吸測試的較低的值指示活躍的HCC0出人意料地發(fā)現與患有非活躍的HCC的受試者和未患有HCC的對照受試者相比，觀察到患有活躍HCC的受試者的顯著較低的13C-辛酸呼吸測試值。本文下面示例的患有非活躍HCC的受試者已經受TACE治療并在緊鄰該過程之后并直至該過程之后的3個月被評價。所觀察到的結果是出人意料的，除了其他的以外，鑒于較早的公開物說明:“TACE未引起線粒體功能的早期下降，如針對RFA所觀察到的，表明該過程對線粒體功能沒有特異性干擾?！?Palmieri等人(2009)JournalofSurgicalResearchl57,199-207)。[0021]本發(fā)明還公開了OBT值可被用于檢測即使處于早期階段的HCC。明顯地，發(fā)現即使是在患有HCC〈2cm的患者中，其代表肝質量的非常小的部分，OBT測量是顯著下降的。本發(fā)明還公開了OBT值可被用于患有HCC的患者的治療后隨訪，以評價對治療和/或疾病的復發(fā)的響應。[0022]本發(fā)明的方法和系統(tǒng)可適用于小的和較大的腫瘤的篩查/監(jiān)控和早期檢測。本發(fā)明的方法和系統(tǒng)還可適用于監(jiān)測對幾種類型的HCC治療，例如，TACE和RFA治療的響應。OBT還可使得腫瘤的切除之后或肝移植之后的復發(fā)的早期檢測成為可能。[0023]根據一個方面，本發(fā)明提供了用于受試者中HCC檢測、確定預后和/或隨訪的方法，該方法包括:[0024](i)在施用同位素標記的辛酸之后，監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物；[0025](ii)將受試者中的辛酸代謝和參考辛酸代謝比較，其中顯著減弱的辛酸代謝指示活躍的HCC。[0026]在一些實施方案中，該方法還包括根據疾病病因標準化呼吸測試值，如以下詳細描述的。在另外的或可選的實施方案中，該方法還包括根據治療標準化呼吸測試值，如以下詳細描述的。在一些實施方案中，該方法還包括基于比較區(qū)分活躍的和非活躍的HCC。[0027]根據本發(fā)明的實施方案的方法，用于活躍的HCC，例如，小于2cm的HCC的早期檢測是有用的。在患有小的活躍的HCC(例如，<2cm)的患者中OBT的下降，其可被由絕大部分肝質量的代謝間和代謝內可變性掩飾，基于現有技術不能夠被透徹解釋。不希望被任何特定理論或作用機制限制，其可反映由腫瘤細胞分泌的、影響這些患者的肝中的整體線粒體功能的一種因子(afactor)或多種因子(factors)。阻礙該因子或這些因子的任何類型的治療可對惡性過程的緩和具有影響。可選地或另外地，這可能由于將辛酸捕獲在腫瘤中，例如進入腫瘤的過度血管供應區(qū)或在腫瘤細胞中或在細胞之間和在血管中。與腫瘤相關的血管中的變化可歸因于腫瘤的直接質量之外的作用的增強。潛在的捕獲作用可用作用于向腫瘤遞送對比劑或治療劑的方法。向HCC的遞送機制可使得能夠在腫瘤中實現高濃度的治療劑而不具有全身性副作用。[0028]本發(fā)明解決了現有技術測試，例如，13C-KICA呼吸測試的一些局限性。與用于現有技術的KICA相反，辛酸代謝不受整體肝功能的影響并在肝硬化患者中保持正常。有利地，辛酸呼吸測試允許具有損傷的肝(由于纖維化階段或肝硬化)而不具有HCC的患者和患有HCC的患者之間的較大的區(qū)分，前者將具有與正常受試者相似的辛酸代謝并且不像在KICA中那樣由于減少的肝保留而被減弱。[0029]如本文所用的，術語“辛酸(octanoate)”包含辛酸(octanoate)和其鹽或衍生物，諸如辛酸(octanoicacid)。13C-標記的“辛酸(octanoate)”通過辛酸的鈉鹽(sodiumsaltofcaprylicacid),辛酸鈉(sodiumcaprylate)的通用名稱而被了解。辛酸鈉(sodiumcaprylate)的IUPAC名稱為1-13C-辛酸鈉(1-13C-OctanoateSodium)。另外的同義詞包括:1-13C_辛酸鈉；辛酸鈉(SodiumOctanoate)、辛酸鈉鹽(OctanoicAcidSodiumSalt)、正辛酸鈉(Sodiumn-Octanoate)、辛酸鈉(SodiumOctoate)。[0030]如本文所用的，“監(jiān)測辛酸的同位素標記的代謝產物”指檢測并測量經預定時間段的受試者的呼出氣中同位素比的變化。術語“同位素比”指被選擇用于辛酸標記的同位素和天然豐度的同位素的比。在一些實施方案中，在標記的辛酸的單次施用之后，通過經預定時間段的連續(xù)測量執(zhí)行監(jiān)測。在其他實施方案中，在標記的辛酸的單次施用之后，在以定期間隔收集自受試者的呼吸樣品中測量同位素比。根據這些實施方案，經預定時間段收集多個樣品。[0031]在一些典型的實施方案中，代謝產物是C02。在一些實施方案中，同位素選自由以下組成的組--碳-13、碳-14和氧-18。在一些典型的實施方案中，同位素是13C。[0032]在一些實施方案中，將受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較包括產生關于受試者的超基準δ值(deltaoverbaseline,DOB)曲線、回收劑量百分比(percentagedoserecovery,PDR)曲線和累積PDR(CPDR)曲線的至少一種，并將所述DOB、PDR或CPDR的至少一種參數與參考DOB、PDR,CPDR或其組合的至少一種參數比較。[0033]在一些實施方案中，將受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較包括產生I3DR曲線并將所述TOR曲線的至少一種參數與參考TOR的至少一種參數比較。[0034]在一些實施方案中，至少一種參數選自由以下組成的組:PDR最大水平(峰高)、峰出現的時間(至峰時間)和代謝速率的斜率。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0035]在一些特定實施方案中，參數是峰高。根據這些實施方案，下降的峰高指示HCC。[0036]在另外特定的實施方案中，參數是至峰時間。根據這些實施方案，較長的至峰時間指示HCC。[0037]在又另外的特定實施方案中，至少一種參數是在選擇的時間點的一個或多個I3DR值(％劑量/小時)。根據這些實施方案，在選擇的時間點的下降的PDR值指示HCC。[0038]在一些特定的實施方案中，至少一種參數是在選擇的時間點的一個或多個CPDR值。根據這些實施方案，在選擇的時間點的下降的CPDR值指示HCC。[0039]在一些特定的實施方案中，至少一種參數是在選擇的時間點的一個或多個DOB值。根據這些實施方案，在選擇的時間點的下降的DOB值指示HCC。[0040]在一些典型的實施方案中，口服施用標記的辛酸。在其他實施方案中，靜脈內或鼻腔內施用標記的辛酸。[0041]在一些典型的實施方案中，以預定的、單次劑量(例如，每一名患者IOOmg)施用標記的辛酸。在其他實施方案中，基于患者的體重施用標記的辛酸(例如，2mg每千克)。[0042]在一些實施方案中，該方法適于隨訪及檢測對患者的HCC治療的響應。[0043]在一些實施方案中，該方法包括在同位素標記的辛酸的首次施用之后，通過監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物執(zhí)行肝功能的首次評價，和在同位素標記的辛酸的第二次施用之后，通過監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物在預定時間段之后執(zhí)行肝功能的第二次評價。[0044]在一些實施方案中`，在預定時間段之后執(zhí)行第二次評價的步驟被重復許多次。[0045]應被理解的是術語“肝功能的首次評價”和“肝功能的第二次評價”不限于初始評價單元(session)和其后的接連的單元，而可涉及任何兩個單獨的評價單元。[0046]如本文所用的，“下降”、“顯著下降”或“顯著差異”典型指統(tǒng)計顯著的差異，如可由本領域已知的標準方法定義的。[0047]在一些實施方案中，參考辛酸代謝指對照辛酸代謝，如在未罹患HCC的對照受試者中確定的。在一些實施方案中，對照受試者患有至少一種慢性肝病而未患有HCC。在一些示例性實施方案中，對照受試者是未患有HCC的肝硬化患者。在其他實施方案中，對照受試者是未患有肝病的健康個體。[0048]在其他實施方案中，參考辛酸代謝指在肝功能的首次評價過程中確定的辛酸代謝，例如，測試的受試者中先前測量的辛酸代謝。例如，如果本發(fā)明的方法被用于監(jiān)測對治療的應答，那么在來自特定受試者的首次測量中獲得的呼吸測試結果可被用作來自相同的受試者的第二次測量中獲得的呼吸測試結果的參考。例如，可在開始治療之前執(zhí)行首次測量并可在治療之后的預定時間段之后執(zhí)行第二次測量。在這種情況下，與首次測量相比，第二次測量中增加的辛酸呼吸測試值指示對治療的積極響應。[0049]在一些典型的實施方案中，測試的受試者是哺乳動物，優(yōu)選人。[0050]在一些實施方案中，測試的受試者選自由以下組成的組:處于形成HCC的風險中的受試者、懷疑患有HCC的受試者和罹患HCC的受試者。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0051]在一些實施方案中，受試者罹患HCC并已經受或正經受治療。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0052]在一些實施方案中，治療選自由以下組成的組:TACE和RFA或用于HCC的任何其他藥物，包括任何類型的酪氨酸激酶抑制劑、任何類型的化學治療劑包括但不限于阿霉素、和用于HCC的任何類型的免疫治療包括但不限于脈沖的樹突狀細胞(pulseddendriticcells)、及治療的任何組合。這還包括針對經受手術切除或肝移植的患者中的任何輔助治療的應答的隨訪。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0053]在一些實施方案中，測試的受試者患有至少一種慢性肝病。在一些實施方案中，慢性肝病選自由以下組成的組:非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、乙型肝炎、丙型肝炎或由于任何病因患有肝硬化的患者。通常，疾病可以是具有或不具有肝硬化的任何其他類型的慢性肝病，包括患有特發(fā)性肝硬化的患者、將患者暴露于原發(fā)性肝癌和/或轉移。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0054]在一些實施方案中，慢性肝病選自由以下組成的組:NASH和NAFLD。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。根據這些實施方案，該方法還包括OBT值的標準化。已知NASH/NAFLD影響肝線粒體功能(見，例如，Grattagliano1.等人,13Obreathtestsforclinicalinvestigationoflivermitochondrialfunction;EurJClinInvest2010;40(9):843_850)。在一些實施方案中，算法被用于修正NASH/NAFLD患者的值。在一些實施方案中，確定用于患有NASH/NAFLD的受試者的不同的截止值(cut-offvalue)。[0055]在一些實施方案中，測試的受試者患有除了NASH之外的肝病。在一些實施方案中，測試的受試者患有除了NAFLD之外的肝病。在一些實施方案中，將患有選自由NASH和NAFLD組成的組的肝病的受試者從使用本發(fā)明方法的測試中排除。[0056]在一些實施方案中,用索拉非尼(sorafenib)(已知增強線粒體功能)治療測試的受試者。根據這些實施方案，該方法還包括OBT值的標準化。在一些實施方案中，算法被用于修正索拉非尼治療的患者的值。在一些實施方案中，確定用于用索拉非尼治療的受試者的不同的截止值。[0057]這還可適用于任何其他類型的治療，包括任何化學治療放射治療和輔助治療、免疫治療或細胞內機制的抑制劑或以上的組合。[0058]在其他實施方案中，未用索拉非尼或任何其他癌癥藥物治療受試者。在一些實施方案中，用索拉非尼或任何其他癌癥藥物治療的受試者從使用本發(fā)明方法的測試中排除。[0059]因此，在一些實施方案中，該方法還包括根據疾病病因將在步驟(i)中獲得的值標準化。在另外的或可選的實施方案中，該方法還包括根據治療將在步驟(i)中獲得的值標準化。[0060]在一些實施方案中，該方法還包括例如通過二氧化碳描記術同時監(jiān)測呼吸中的總CO2。這可使得能夠最小化測試長度和將引入不相關的變量至肝測試評價的代謝速率和/或CO2產生的變化。[0061]本發(fā)明的這些和另外的方面和特征將從下面的附圖、詳述、實施例和權利要求而變得明顯。[0062]附圖簡述[0063]圖1.活躍的HCC對非活躍的HCC和對照中13C-辛酸呼吸測試值的箱線圖和平均值菱形表示。[0064]圖2.活躍的HCC對非活躍的HCC和對照中13C-辛酸呼吸測試值的ROC曲線。[0065]圖3.除了索拉非尼治療的患者之外，活躍的HCC對非活躍的HCC和對照中13C-辛酸呼吸測試值的ROC曲線。[0066]圖4.除了患有HCC的NASH受試者和索拉非尼治療的患者之外，活躍的HCC對非活躍的HCC和對照中13C-辛酸呼吸測試值的箱線圖和平均值菱形的表示。[0067]圖5.未患有HCC的61歲男性HCV患者的13C-辛酸呼吸測試的I3DR曲線。[0068]圖6.患有活躍的HCC的74歲女性HCV患者的13C-辛酸呼吸測試的I3DR曲線。[0069]圖7.在對HCC復發(fā)的治療之前和之后，患有HCC的69歲女性NASH患者的三次連續(xù)的13C-辛酸呼吸測試的I3DR曲線。[0070]圖8.在成功的HCC治療之前和之后，患有隱源性肝硬化的61歲男性的三次連續(xù)的13C-辛酸呼吸測試的I3DR曲線。[0071]圖9.在成功的HCC治療之前和之后，患有HCV肝硬化的58歲男性的兩次連續(xù)的13C-辛酸呼吸測試的roR曲線。[0072]發(fā)明詳述[0073]本發(fā)明涉及使用同位素標記的辛酸或其鹽或衍生物用于HCC的診斷、預后和隨訪。[0074]本發(fā)明的方法和系`統(tǒng)有效區(qū)分患有活躍的HCC的受試者與患有非活躍的HCC或未患有HCC的受試者。因此，本發(fā)明的方法和系統(tǒng)用于檢測、診斷和監(jiān)測受試者的HCC是有用的。本發(fā)明的方法和系統(tǒng)用于HCC篩查、腫瘤進展的檢測、復發(fā)、預后和分期也可以是有用的。本發(fā)明的方法用于評價腫瘤大小和對任何類型的治療的響應也可以是有用的。本發(fā)明的方法用于檢測HCC復發(fā)也可以是有用的。[0075]本發(fā)明的方法基于呼吸測試參數的分析。將已知數量的同位素標記的外源物質，即，同位素標記的辛酸施用至受試者，并定量及定性地追蹤標記的物質的代謝。將獲得的呼吸測試參數與參考數據比較。獲得的參數指示受試者中HCC狀態(tài)。根據本發(fā)明實施方案的呼吸測試，基于檢測受試者呼吸中同位素標記的代謝產物并測量標記的和未標記的代謝產物之間的比。例如，通過計算標記的代謝產物的呼出的速率并產生TOR曲線還可進一步處理數據。[0076]盡管呼吸測試中評價肝狀況存在困難，但觀察到辛酸代謝的水平與受試者的HCC的狀態(tài)之間的相關性。[0077]根據一個方面，本發(fā)明提供了用于受試者中HCC的早期檢測、預后和隨訪的方法，該方法包括:[0078](i)在施用同位素標記的辛酸之后，通過監(jiān)測受試者的呼出氣樣品中辛酸的同位素標記的代謝產物，確定受試者中的辛酸代謝；和[0079](ii)將受試者中的辛酸代謝和參考辛酸代謝比較，其中顯著減弱的辛酸代謝指示HCC。[0080]在一些實施方案中，本文提供了用于受試者中HCC的檢測、確定預后和/或隨訪的方法，該方法包括將如通過以下確定的受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較:在施用同位素標記的辛酸之后，監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物，其中顯著下降的辛酸代謝指示活躍的HCC。[0081]在肝硬化患者中，整體的肝功能是損傷的?，F有技術中使用的KICA的代謝，已知受整體肝功能的影響，且與未患有肝硬化的患者中正常值相比，肝硬化導致的損傷影響KICA呼吸測試值并降低它們。然而，已知一些HCC患者不是肝硬化患者。因此，預期未患有肝硬化但患有HCC的患者不能夠被KICA有效地檢測出。有利地，根據本發(fā)明實施方案的方法，利用其代謝不受整體肝功能影響的化合物。關于健康的受試者、患有肝硬化的對照或患有非活躍的HCC的受試者對患有HCC的受試者的OBT峰值是相似的(獨立于他們的實際肝損傷)。因此，預期未患有肝硬化但患有HCC的患者可被辛酸呼吸測試檢測出。[0082]典型地，向受試者施用同位素標記的辛酸，并收集呼吸樣品。在一些實施方案中，通過經預定時間段的連續(xù)測量執(zhí)行監(jiān)測。在一些實施方案中，使用例如Breath丨Du系統(tǒng)(ExalenzBioscienceLtd.)執(zhí)行連續(xù)測量。此測量使得PDR峰的準確評價成為可能,其是當前用于HCC的存在的優(yōu)選的指示測量，并可被用于小的腫瘤的早期檢測。[0083]在其他實施方案中，標記的辛酸的單次施用之后，通過經預定時間段以定期間隔或在確定的時間點收集來自受試者的多個呼吸樣品執(zhí)行監(jiān)測，并測量所述樣品中的同位素比。[0084]在一些實施方案中，通過連續(xù)在線取樣收集樣品。[0085]在一些實施方案中，預定時間段從約0.1-1小時、從約0.1-2小時、從約0.1-3小時、從約1-2小時、從約1-3小時、從約1-4小時、從約2-4小時的范圍。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0086]在一些實施方案中，用于收集呼吸樣品的定期間隔從約0.5_30min、從約10-30min、從約20_60min、從約30_60min的范圍。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0087]在一些實施方案中，監(jiān)測僅在標記的物質的施用之后開始。在其他實施方案中，監(jiān)測在施用標記的物質之前開始。在一些實施方案中，產生基線讀數或基線值。[0088]在一些實施方案中，在至少三個時間點處測量呼氣的同位素標記的代謝產物，例如，以產生回收劑量百分比(PDR)曲線。可從PDR確定代謝活性。[0089]在一些實施方案中，該方法包括在向受試者施用同位素標記的辛酸之后，在線監(jiān)測受試者的呼吸中辛酸的代謝產物。[0090]在一些典型的實施方案中，代謝產物是C02。在一些實施方案中，同位素選自由以下組成的組:碳-13、碳-14和氧-18。在一些典型的實施方案中，同位素是13C。例如，可通過測量呼出氣中13C/12C的比評價13C-辛酸的肝代謝。碳-13是穩(wěn)定的非放射性同位素，其可被摻入(incorporate)測試物質的分子內特定的位置以致其被肝代謝并產生13CO2之后，其將被釋放?？煽诜┯?3C-化合物，由肝快速吸收并代謝，且隨后可在預定時間段內在呼出氣中測量13CO2。[0091]在一些實施方案中，監(jiān)測包括產生回收劑量百分比(PDR)曲線、累積的回收劑量百分比(CPDR)曲線和超基準δ值(DOB)曲線的至少一種，并計算所述H)R、CPDR和DOB曲線的至少一種參數。[0092]在一些實施方案中，比較包括將計算的至少一種參數與參考H)R、CPDR和DOB曲線的至少一種參數比較。[0093]在一些實施方案中，將受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較包括產生關于受試者的回收劑量百分比(PDR)曲線并將所述TOR曲線的至少一種參數與參考PDR曲線的至少一種參數比較。PDR曲線是本領域已知的。此類曲線以％劑量/小時(施用劑量的回收百分數每小時)描繪標記的物質的代謝速率，如在呼吸中測量的。PDR曲線反映肝的動態(tài)響應。[0094]在一些實施方案中，至少一種參數選自由以下組成的組:峰高、峰出現的時間和代謝速率的斜率。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。在可選的或另外的實施方案中，參數是在選擇的時間點的一個或多個I3DR值(％劑量/小時)。[0095]在一些實施方案中，將受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較包括產生關于受試者的累積的回收劑量百分比(CPDR)曲線并將所述CPDR曲線的至少一種參數與參考CPDR曲線的至少一種參數比較。CPDR曲線是本領域已知的。此類曲線以％劑量描繪被代謝的標記的物質的量(施用劑量隨時間推移的累積回收百分數)，如在呼吸中測量的?？蓪⒑粑袠擞浀腃O2的累積回收計算為I3DR的曲線下面積(AUC)。[0096]在一些實施方案中，參數是在選擇的時間點的一個或多個CPDR值，例如，在30、40和/或45分鐘時的CPDR值。[0097]在一些實施方案中，將受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較包括產生超基準δ值(DOB)曲線并將所述DOB曲線的至少一種參數與參考DOB曲線的至少一種參數比較。DOB曲線是本領域已知的。此類曲線描繪了特定時間點收集的測試樣品中同位素比(例如，13co2/12co2)和基線樣品中相應的比之間的差異。[0098]在一些實施方案中，參數是在選擇的時間點的一個或多個DOB值。[0099]PDR曲線展示基于身高和體重及施用的物質的量考慮受試者的CO2產率將DOB每受試者標準化。在一些實施方案中，基于受試者的體重向受試者施用辛酸的劑量(例如，Img或2mg或3mg每千克)。根據這些實施方案,DOB曲線更優(yōu)選用于分析。在其他實施方案中，受試者被施用辛酸的固定的、預定的劑量(例如，lOOmg)。根據這些實施方案，PDR曲線更優(yōu)選用于分析。[0100]典型地，根據本發(fā)明的實施方案選擇用于分析的呼吸測試參數處理肝外代謝或克服肝外代謝的問題。通常，僅針對直至峰被檢測到而獲得的信息，例如-峰高和峰時間執(zhí)行分析。[0101]在一些特定實施方案中，參數是峰高。根據這些實施方案，下降的峰高指示HCC。[0102]在一些典型的實施方案中，口服、靜脈內或鼻腔內施用標記的辛酸。[0103]在一些實施方案中，該方法適于隨訪及監(jiān)測對患者的HCC治療的響應。在一些實施方案中，該方法包括在同位素標記的辛酸施用之后，通過監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物執(zhí)行肝功能的首次評價，并在預定時間段之后，通過監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物執(zhí)行肝功能的第二次評價。在一些實施方案中，在預定時間段之后執(zhí)行第二次評價的步驟被重復許多次。[0104]術語“許多”可以指大于I的任何數目。在一些實施方案中，術語“許多”指大于2的任何數目。在其他實施方案中，術語“許多”指大于3的任何數目。[0105]如本文所用的，“下降”、“顯著下降”或“顯著差異”典型指統(tǒng)計顯著的差異，如可由本領域已知的標準方法定義的。[0106]典型地，在未罹患HCC的受試者中確定對照辛酸代謝。在一些實施方案中，對照受試者患有至少一種慢性肝病而未患有HCC。在一些示例性實施方案中，對照受試者是未患有HCC的肝硬化患者。在其他實施方案中，對照受試者是未患有肝病的健康個體。[0107]根據本發(fā)明的原理，在至少一名受試者、優(yōu)選多名受試者中確定對照辛酸代謝?？蓪⒃趯φ帐茉囌咧写_定的一組對照參數儲存為參考數據集。[0108]在一些典型的實施方案中，測試的受試者是哺乳動物，優(yōu)選人。[0109]在一些實施方案中，測試的受試者選自由以下組成的組:處于形成HCC的風險中的受試者、懷疑患有HCC的受試者和罹患HCC的受試者。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0110]在一些實施方案中，受試者罹患HCC并已經受或正經受治療。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。在一些實施方案中，治療選自由以下組成的組:TACE和RFA或用于HCC的任何其他藥物，包括任何類型的酪氨酸激酶抑制劑、任何類型的化學治療劑包括但不限于阿霉素、和用于HCC的任何類型的免疫治療包括但不限于脈沖的樹突狀細胞、及治療的任何組合。這還包括針對經受手術切除或肝移植的患者中的任何輔助治療的應答的隨訪。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0111]在一些實施方案中，該方法還包括根據疾病病因將步驟(i)中獲得的值標準化。在一些實施方案中，疾病病因選自由以下組成的組=NASH和NAFLD。[0112]在可選的或另外的實施方案中，該方法還包括根據一種或多種血液測試結果將步驟(i)中獲得的值標準化。在一些實施方案中，一種或多種血液測試選自由以下組成的組:空腹葡萄糖水平、胰島素水平、ALT水平、AST水平、ALP水平、GGTP水平、膽紅素水平、白蛋白水平和鈉水平。[0113]在可選的或另外的實施方案中，該方法還包含根據受試者正在接受或已接受的HCC治療將步驟(i)中獲得的值標準化。在一些實施方案中，治療是索拉非尼施用。[0114]在一些實施方案中，光譜法測量呼出的同位素標記的代謝產物，例如，通過紅外光譜法或用質量分析儀。[0115]在一些實施方案中，監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物包括使用選自由以下組成的組的至少一種技術:氣相色譜(GC)、GC-質譜聯用(GC-MS)、質子轉移反應質譜(PTR-MS)、電子鼻裝置和石英晶體微量天平(QCM)。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0116]在一些實施方案中，測試的受試者患有至少一種慢性肝病。在一些實施方案中，慢性肝病選自由以下組成的組:非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、乙型肝炎和丙型肝炎或患有或未患有將患者暴露于原發(fā)性肝癌和/或轉移的肝硬化的任何其他類型的慢性肝病，。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0117]在一些實施方案中，慢性肝病選自由以下組成的組:NASH和NAFLD。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。根據這些實施方案，該方法還包括OBT值的標準化。已知NASH/NAFLD影響肝線粒體功能(見，例如，Grattagliano1.等人13Obreathtestsforclinicalinvestigationoflivermitochondrialfunction;EurJClinInvest2010;40(9):843-850)。[0118]在一些實施方案中，算法和/或不同的截止值被用于修正NASH/NAFLD患者的值。適合的算法可包括代表那些患者的疾病嚴重程度的某些血液測試結果，包括，但不限于，空腹葡萄糖水平、胰島素水平和/或肝功能(liverpanel)(例如，ALT、AST、ALP、GGTP、膽紅素、白蛋白、鈉水平)。[0119]在一些實施方案中，測試的受試者患有不同于NASH/NAFLD的肝病。[0120]在一些實施方案中，用索拉非尼(增強線粒體功能)治療測試的受試者。根據這些實施方案，該方法還包括OBT值的標準化和/或不同的截止值的使用。在一些實施方案中，算法被用于修正索拉非尼治療的患者的值。例如，可將呼吸測試結果標準化為索拉非尼劑量、頻率和已完成治療的時間的函數。[0121]這還可適用于任何其他類型的治療，包括任何化學治療放射治療和輔助治療、免疫治療或細胞內機制的抑制劑或以上的組合。在其他實施方案中，受試者是除用索拉非尼治療的受試者外的受試者。[0122]該方法還可包括監(jiān)測呼吸中的總C02?？衫缤ㄟ^二氧化碳描記術監(jiān)測C02。這可最小化測試長度和將引入不相關的變量至HCC評價的代謝速率和/或CO2產生的變化。[0123]該方法還可包括分析通過監(jiān)測辛酸的代謝產物獲得的至少一種呼吸相關的參數與通過監(jiān)測呼吸中的總CO2獲得的至少一種呼吸相關的參數的組合。該方法還可包括分析通過監(jiān)測辛酸的代謝產物獲得的至少一種呼吸相關的參數與至少一種生理和/或醫(yī)學參數的組合。生理和/或醫(yī)學參數可包括年齡、性別、體重、身高、血液相關的參數、身體質量指數(BMI)、腰圍、藥物治療相關的參數、基礎疾病或其任何組合。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0124]在一些實施方案中，將辛酸呼吸測試結果與受試者的人口統(tǒng)計學和臨床數據結合以產生預測分數。[0125]在一些實施方案中，還考慮并評價了人口統(tǒng)計學參數。[0126]在一些實施方案中，該方法還包括至少基于一種呼吸測試相關的參數和人口統(tǒng)計學參數計算肝損傷分數(HIS)。[0127]人口統(tǒng)計學參數的非限制性實例包括身高、體重、年齡、性別、吸煙習慣、疾病病因、關于并發(fā)癥的已知信息或其任何組合。人口統(tǒng)計學信息可被用于:[0128](i)補償影響呼吸測試的患者之間因素；和/或[0129](ii)處理影響疾病的因素和與呼吸測試數據一起可允許提供疾病嚴重程度和/或狀態(tài)的可靠預測的因素。該信息可涉及來自下面列表的任何一個或多個條目(和/或任何其他相關信息):身高和體重、年齡、性別、吸煙習慣、疾病病因、關于并發(fā)癥的已知信息(包括但不限于，分流術、門靜脈高壓、腦病、靜脈曲張、靜脈曲張出血、異常血液測試諸如膽紅素、水腫和/或腹水、失代償期肝硬化、可影響辛酸的代謝途徑的某些藥物的消耗)和評價肝病嚴重程度的一般分數諸如肝功能分級(CTP)、終末期肝病模型(MELD)和/或鈉MELD(Na-MELD)分數。[0130]關于計算HIS分數的信息可見于國際專利申請公布號W02010/013235。[0131]通常，如本文涉及的檢測、監(jiān)測、區(qū)別、評價、測量、區(qū)分、定量，等等，可通過本文描述的任何裝置、呼吸收集系統(tǒng)、分析儀單元、校準裝置、算法和方法實現，和/或作為非限制性實例，通過在美國專利號6，186，958,6,491，643和6，656，127;和美國專利申請公布號2003/0216660和2001/0021815中公開的任何裝置、呼吸收集系統(tǒng)、分析儀單元、校準裝置、算法和方法實現。[0132]適于本發(fā)明的方法的裝置的另外的非限制性實例是在國際專利申請公布號W02007/054940和W02010/013235中描述的裝置。[0133]典型地，適于本發(fā)明的方法的裝置包括呼吸測試分析儀，包括能夠測量具有不同的分子量的兩種化學性質相同的氣體的比的非常靈敏的氣體分析儀。氣體分析儀能夠測量可存在于受試者的呼吸中的少量的同位素標記的氣體。[0134]在一些實施方案中，存在分析呼吸樣品的至少兩種模式。分析儀可執(zhí)行其關于個體呼出氣的分析，或其可執(zhí)行其關于連續(xù)采集自患者的患者呼吸的多個樣品的在線分析。[0135]在一些實施方案中，呼吸測試分析儀包括呼吸分析室、用于傳送來自患者的呼出氣至呼吸分析室的呼吸進口導管；和操作以分析呼吸分析室中的氣體并進行患者呼出氣的首次分析的氣體分析儀。[0136]在一些實施方案中，通過連續(xù)的測量執(zhí)行監(jiān)測辛酸的同位素標記的代謝產物。在一些實施方案中，實時執(zhí)行在線監(jiān)測，同時受試者連續(xù)提供呼吸用于后續(xù)分析。用于在線監(jiān)測的適合的裝置可包括，例如，適于監(jiān)測標記的辛酸、或辛酸的鹽或衍生物的代謝產物內同位素水平的一種或多種呼吸傳感器，和適于在連續(xù)模式下一種或多種傳感器的在線樣品測量的控制器。[0137]該裝置可適于連續(xù)模式下一種或多種傳感器的樣品測量，同時在采集呼吸樣品期間患者通過例如鼻套管與該裝置連接。該裝置可適于自動收集并分析呼吸樣品。[0138]該裝置還可包括一個或多個呼吸傳感器，諸如適于監(jiān)測呼吸中CO2的二氧化碳描記術傳感器。[0139]該裝置還可包括適于分析通過監(jiān)測標記的物質，諸如，辛酸的代謝產物中同位素水平獲得的至少一種呼吸相關`的參數與通過監(jiān)測呼吸中CO2獲得的至少一種呼吸相關的參數的組合的處理器。處理器可修正整個呼吸測試過程中受試者的CO2呼出/產生中的變化。[0140]在一些實施方案中，基于便攜式辦公的系統(tǒng)(portableoffice-basedsystem)可連續(xù)感測并收集呼出氣并實時在線分析通過受試者所戴的鼻套管的CO2，并可使能夠實時評價HCC狀態(tài)，從而提供臨床肝病學中的隨訪方法。在一些實施方案中，設計此測試旨在提供13co2/12co2比小至1/1000的臨床相關變化的準確檢測所需的靈敏性和準確性。[0141]在一些實施方案中，在醫(yī)療點執(zhí)行根據本發(fā)明的實施方案的呼吸測試。[0142]不希望被任何理論或作用機制限制，在一些實施方案中，患有活躍的HCC、即使小于2cm的活躍的HCC的患者中OBT的下降可反映由腫瘤細胞分泌的影響這些患者中整體線粒體功能的一種因子或多種因子。[0143]在一些實施方案中，阻礙該假定的因子或這些假定的因子的任何類型的治療可對惡性過程的緩和具有影響。[0144]不希望被任何理論或作用機制限制，在一些實施方案中，由于腫瘤的過度血管供應，將辛酸捕獲在腫瘤中或在腫瘤細胞內或在細胞之間。[0145]在一些實施方案中，兩種機制，辛酸的捕獲和由腫瘤細胞分泌一種因子或多種因子可同時起作用。[0146]在一些實施方案中，可將辛酸綴合至化學治療劑作為將化學治療遞送至腫瘤內的方法，因此預防或減少不想要的藥物的全身性副作用并使能夠在腫瘤內使用高濃度的藥物。[0147]在一些實施方案中，這些治療劑還包括任何類型的化學治療,放射治療包括但不限于放射性物質諸如銥，免疫治療，基因治療或以上的任何組合。辛酸因此可用作用于遞送治療的劑或載體。[0148]在一些實施方案中，由于辛酸在腫瘤中被濃縮，其還可被用作用于成像的工具，作為目前已知的劑的有效的替代，例如在其中碘油被用于CT或MRI的情況下。[0149]本發(fā)明的方法基于通過肝線粒體代謝辛酸(C8H16O2)。脂肪酸(諸如辛酸)的代謝和13C-碳呈13CO2形式的釋放需要多個步驟，包括β-氧化、13C標記的乙酰輔酶A(AcCoA)的產生和后續(xù)13C碳在三羧酸(TCA)循環(huán)(還稱為檸檬酸循環(huán)或Krebs循環(huán))中的釋放。不適當的TCA功能可導致AcCoA的積累。已知存在關于AcCoA的可替代的通路，其導致在呼吸測試中將不會被檢出的酮體產生或脂肪生成。繼續(xù)在TCA循環(huán)中的標記的辛酸的百分數對轉到酮體產生的標記的辛酸的百分數可取決于受試者的生理條件。例如，在饑餓/禁食條件下，可能需要導致不太有效的TCA過程的草酰乙酸(如其在葡萄糖合成/糖異生中被細胞使用)?！安扇　盩CA循環(huán)途徑的標記的辛酸的量和“采取”可替代的途徑的標記的辛酸的量之間的不同(且有時不可預測)的比可影響呼吸測試的準確性。在一些實施方案中，提供了以下步驟，彼此獨立或呈任何組合，用于增加辛酸呼吸測試的診斷準確性:[0150]a.使用低劑量(諸如，約IOOmg的范圍內)的辛酸或辛酸鹽以避免TCA循環(huán)的飽和。通常，可根據體重選擇待被施用的辛酸劑量，例如，約lmg/kg-3mg/kg,允許從約15mg(兒童，lmg/kg)至約450mg(肥胖患者,3mg/kg)的范圍的劑量。[0151]b.可在>8小時禁食之后測試患者，以確保代謝條件幾乎穩(wěn)定并對由于進餐的變化較少敏感。[0152]c.測試餐可包括葡萄糖和13C辛酸。[0153]d.測試餐可包括阿斯巴甜(和13C辛酸鹽)，其提供作為草酰乙酸的來源的天冬氨酸。[0154]e.c和/或d的替代是其中在測試之前施用葡萄糖/阿斯巴甜。[0155]f.使用阻斷/減少酮產生通路的藥物(例如，HMG-CoA還原酶抑制劑)。[0156]g.用生物化學測試(酮尿和/或血漿血清酮體濃度)與13C-辛酸呼吸測試配合測量酮體產生以改進測試的診斷準確性。[0157]h.尋找血液中13C-辛酸的蹤跡。[0158]根據另一個方面，本發(fā)明提供了用于受試者中HCC的檢測、預后和/或隨訪的裝置，該裝置包括被配置以檢測受試者中的辛酸代謝和對照辛酸代謝之間差異的處理器，其中減少的辛酸代謝指示HCC。[0159]在一些實施方案中，處理器被配置以在施用同位素標記的辛酸之后，監(jiān)測受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物，并將受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較，其中顯著降低的辛酸代謝指示活躍的HCC。[0160]在一些實施方案中，處理器適于根據疾病的病因、治療或其組合標準化呼吸測試值。[0161]在一些實施方案中，處理器適于計算并產生DOB曲線、PDR曲線和CPDR曲線的至少一種，并將所述DOB、PDR或CPDR的至少一種參數與至少一種參考參數比較。[0162]在一些實施方案中，至少一種參數選自由以下組成的組:PDR最大水平(峰高)、峰出現的時間(至峰時間)和代謝速率的斜率。每一種可能性都代表本發(fā)明單獨的實施方案。[0163]在一些實施方案中，處理器還適于基于辛酸代謝的差異計算與HCC相關的輸出指示。[0164]在一些實施方案中，處理器還適于基于D0B、PDR和/或CPDR的至少一種參數的差異計算與HCC相關的輸出指示。[0165]在一些實施方案中，處理器還適于并發(fā)地監(jiān)測呼吸中的總C02。[0166]呈現下面的實施例是為了更全面地說明本發(fā)明的某些實施方案。然而，它們不應以任何方式被解釋為限制本發(fā)明的寬范圍。本領域技術人員可容易設計本文公開的原理的許多變化形式和修改形式而不偏離本發(fā)明的范圍。實施例[0167]實施例1:活躍的HCC對非活躍的HCC和對照中13C-辛酸呼吸測試值[0168]招募患有活躍的或非活躍的HCC(成功治療之后)的患者?；谧⑸鋵Ρ冉橘|(碘油?)根據CT和/或MRI確定活性的程度。另外，還招募了無任何HCC跡象的肝硬化患者(用作對照組)。關于研究人群的信息在下文的表1、2和3中提供。[0169]表1【權利要求】1.一種用于受試者中肝細胞癌(HCC)檢測、確定預后和/或隨訪的方法，所述方法包括:(i)在同位素標記的辛酸的施用之后，監(jiān)測所述受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物；和(ii)將所述受試者中的辛酸代謝和參考辛酸代謝比較，其中顯著減弱的辛酸代謝指示活躍的肝細胞癌。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述參考辛酸代謝是在未罹患HCC的受試者中確定的對照辛酸代謝。3.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括基于所述比較區(qū)別活躍的和非活躍的肝細胞癌。4.根據權利要求1所述的方法，其中在標記的辛酸的單次施用之后，通過經預定時間段的連續(xù)測量執(zhí)行監(jiān)測。5.根據權利要求1所述的方法，其中在標記的辛酸的單次施用之后，經預定時間段以定期間隔收集來自所述受試者的多個呼吸樣品。6.根據權利要求1所述的方法，其中所述代謝產物是C02。7.根據權利要求1所述的方法，其中所述同位素選自由以下組成的組--碳-13、碳-14和氧_18。8.根據權利要求7所述的方法，其中所述同位素是13C。9.根據權利要求1所述的方法，其中將所述受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較包括產生關于所述受試者的超基準δ值(DOB)曲線、回收劑量百分比(PDR)曲線和累積TOR(CPDR)曲線的至少一種，并將所述DOB、PDR或CPDR的至少一種參數與參考DOB、PDR、CPDR曲線或其組合的至少一種參數比較。10.根據權利要求9所述的方法，其中將所述受試者中的辛酸代謝與參考辛酸代謝比較包括產生I3DR曲線并將所述I3DR曲線的至少一種參數與參考I3DR的至少一種參數比較。11.根據權利要求10所述的方法，其中所述至少一種參數選自由以下組成的組:峰高、峰出現的時間和代謝速率的斜率。12.根據權利要求11所述的方法，其中所述參數是峰高。13.根據權利要求12所述的方法，其中降低的峰高指示HCC。14.根據權利要求11所述的方法，其中所述參數是至峰時間。15.根據權利要求14所述的方法，其中較長的至峰時間指示HCC。16.根據權利要求9所述的方法，其中所述至少一種參數選自以下:在選擇的時間點的一個或多個I3DR(%劑量/小時)值、在選擇的時間點的一個或多個CPDR值和在選擇的時間點的一個或多個DOB值。17.根據權利要求16所述的方法，其中在所述選擇的時間點的降低的H)R、CPDR和/或DOB值指示HCC。18.根據權利要求1所述的方法，所述方法包括在同位素標記的辛酸的首次施用之后，通過監(jiān)測所述受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物執(zhí)行肝功能的首次評價，和在同位素標記的辛酸的第二次施用之后，通過監(jiān)測所述受試者的呼出氣中辛酸的同位素標記的代謝產物在預定時間段之后執(zhí)行肝功能的第二次評價。19.根據權利要求18所述的方法，其中在預定時間段之后執(zhí)行第二次評價的所述步驟被重復許多次。20.根據權利要求17所述的方法，其中所述參考辛酸代謝是在肝功能的首次評價過程中確定的辛酸代謝。21.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括根據疾病病因將步驟(i)中獲得的值標準化。22.根據權利要求21所述的方法，其中所述疾病病因選自由以下組成的組:NASH和NAFLD。23.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括根據一種或多種血液測試的結果將步驟(i)中獲得的值標準化。24.根據權利要求23所述的方法，其中所述一種或多種血液測試選自由以下組成的組:空腹葡萄糖水平、胰島素水平、ALT水平、AST水平、ALP水平、GGTP水平、膽紅素水平、白蛋白水平和鈉水平。25.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括根據治療將步驟(i)中獲得的值標準化。26.根據權利要求25所述的方法，其中所述治療是索拉非尼施用。27.根據權利要求1所述的方法，其中所述受試者選自由以下組成的組:處于形成肝細胞癌的風險中的受試者、懷疑患有肝細胞癌的受試者和罹患肝細胞癌的受試者。28.根據權利要求27所述的方法，其中所述受試者罹患肝細胞癌并已經受或正經受治療。29.根據權利要求28所述的方法，其中所述治療不同于索拉非尼施用。30.根據權利要求1所述的方法，其中所述受試者患有至少一種慢性肝病。31.根據權利要求30所述的方法，其中所述慢性肝病選自由以下組成的組:NASH、NAFLD、乙型肝炎、丙型肝炎和由于任何病因的肝硬化。32.根據權利要求30所述的方法，其中所述慢性肝病不同于NASH或NAFLD。33.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括監(jiān)測所述受試者的呼出氣中的總CO2。34.根據權利要求1所述的方法，其中口服、靜脈內或鼻腔內施用所述同位素標記的辛酸?！疚臋n編號】A61B5/083GK103764026SQ201280029124【公開日】2014年4月30日申請日期:2012年4月5日優(yōu)先權日:2011年4月14日【發(fā)明者】吉爾·古根海姆,伊蘭·本-奧倫,亞夫拉罕·赫什科維茨,亞龍·伊蘭申請人:艾克薩倫茨生物科技有限公司