用于抑制化療引起的副作用的藥物治療以及相關(guān)藥物組合物、診斷試劑、篩選技術(shù)和試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了治療方法，其包括通過(guò)向接受可能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療的患者聯(lián)合施用藥學(xué)有效量的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)降低所述誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分在患者中的治療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(TIAE)，包括化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(CIAE)，諸如化療誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病變(CIPN)和/或化療誘導(dǎo)的心血管不良反應(yīng)(CICAE)。還提供了相關(guān)的藥物組合物、診斷劑和篩選技術(shù)。
【專利說(shuō)明】用于抑制化療引起的副作用的藥物治療以及相關(guān)藥物組合物、診斷試劑、篩選技術(shù)和試劑盒
[0001]相關(guān)申請(qǐng)和政府支持
[0002]本申請(qǐng)要求2011年4月27日提交的題為“Drug therapy to preventchemotherapy-1nduced polyneuropathy(Repositioning of Li Salt and otheragents to treat bipolar disorders)” 的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào) 61/479,431 及2011 年 4 月 27 日提交的題為 “Drug therapy to prevent chemotherapy-1nducedpolyneuropathy (Repositioning of AV-411 (ibudilast) ” 的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)61/479,471的優(yōu)先權(quán)，它們的全部公開(kāi)內(nèi)容據(jù)此以引用的方式完整地并入。
[0003]本文所描述的本發(fā)明部分受美國(guó)國(guó)防部基金號(hào)W81XWH-10-1-0033資助。因此，美國(guó)聯(lián)邦政府享有本發(fā)明的一定權(quán)利。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0004]本發(fā)明涉及醫(yī)療方法，其包括通過(guò)向有需要的病人聯(lián)合施用藥學(xué)上有效劑量的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)降低治療引起的副作用(TIAE)包括化療引起的副作用其一般包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、尤其包括神經(jīng)病變/外周神經(jīng)病變(CIN/CIPN)和心血管副作用例如心律不齊/心功能失常(CICAE)及相關(guān)癥狀、包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用例如認(rèn)知影響(尤其是認(rèn)知功能減退)和由髓鞘退化引起的副作用。另外還提供了相關(guān)的藥物組合物、診斷試劑、篩選技術(shù)及藥物發(fā)現(xiàn)與選擇。
[0005]發(fā)明背景
[0006]包括外周神經(jīng)病變和心血管副作用等在內(nèi)的化療引起的不良反應(yīng)(CIAE)是影響許多經(jīng)受化療的癌癥患者的讓人痛苦且常常不可逆轉(zhuǎn)的副作用。CIAE干擾患者的日常生活并且損害生活質(zhì)量。更重要地，因?yàn)檫@些不良反應(yīng)可導(dǎo)致減低化療劑量及中斷治療，所以CIAE引起關(guān)注。造成CIAE的細(xì)胞機(jī)制尚不清楚，而且沒(méi)有可用于預(yù)防或處理CIAE的標(biāo)準(zhǔn)治療，所述CIAE包括化療誘導(dǎo)的鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、神經(jīng)病變/外周神經(jīng)病變(CIN/CIPN)以及化療誘導(dǎo)的心血管不良反應(yīng)(CICAE)等等副作用。
[0007]例如， 紫杉醇(paclitaxel，Taxol? )是用于治療乳腺癌和卵巢癌的最有效藥物。
紫杉醇治療的一種主要副作用是外周神經(jīng)病變。大約30%的經(jīng)紫杉醇治療的婦女會(huì)受到不可逆轉(zhuǎn)的CIPN影響并且遭受不適和疼痛。迄今為止，闡明紫杉醇及包括長(zhǎng)春新堿在內(nèi)的數(shù)種其他常用抗癌藥物導(dǎo)致包括CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE的細(xì)胞機(jī)制已證明很困難，而且許多紫杉醇(Taxol?)治療的患者因不能耐受CIAE而面臨著中斷潛在延長(zhǎng)生命的治療的風(fēng)險(xiǎn)。
[0008]已證明用紫杉醇治療的患者會(huì)出現(xiàn)與鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)相關(guān)的心律不齊和心功能障礙(化療引起的心血管不良反應(yīng)或CICAE)。參見(jiàn)，例如，Yeh,等人，Cardiovascularcomplications of cancer therapy:1ncidence,pathogenesis，diagnosis,andmanagement.Journal of the American College of Cardiology53，2231-2247(2009)，及 Zhang,等人，Paclitaxel accelerates spontaneous calcium oscillations incardiomyocytes by interacting with NCS-1and the InsP3R.Journal of molecular andcellular cardiology49, 829-835 (2010)。從用紫杉醇處理的小鼠分離的心肌細(xì)胞表現(xiàn)出自發(fā)性鈣振蕩頻率的增加。心肌細(xì)胞的這些變化是由于NCS-1與InsP3R31的相互作用增強(qiáng)所致。
[0009]因而，需要在不改變治療癌癥的能力的情況下預(yù)防包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的不希望的CIAE相關(guān)的化療副作用的策略。需要減輕經(jīng)受一種或
多種抗癌藥物諸如紫杉醇(Taxol?)治療的患者經(jīng)常遭受的外周神經(jīng)病變的治療方法。
[0010]發(fā)明概述
[0011]到目前為止，還沒(méi)有證據(jù)表明已批準(zhǔn)的藥物能用于預(yù)防CIAE，所述CIAE包括以下的至少一者或多者:鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)(CSD)、CIN/CIPN和/或CICAE以及其它副作用(諸如認(rèn)知功能減退/認(rèn)知功能損傷的有關(guān)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應(yīng)及由髓鞘退化引起的副作用)。由于我們對(duì)某些類別的化療的脫靶毒性的獨(dú)特理解，我們已發(fā)現(xiàn)如何通過(guò)聯(lián)合施用某些神經(jīng)保護(hù)性組合物和抗癌藥物來(lái)緩解和/或預(yù)防CIAE，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE以及其它不良反應(yīng)(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其包括認(rèn)知功能減退)和由髓磷脂降解引起的副作用)。本文所描述的新型治療方案和藥物組合物保護(hù)細(xì)胞免受不必要的損害并且維持確認(rèn)的化療藥物的抗癌功效。值得注意地，改善和/或預(yù)防與許多批準(zhǔn)的抗癌治療相關(guān)聯(lián)的CIAE (包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE以及其它副作用(諸如認(rèn)知功能減退/認(rèn)知功能衰退的中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)以及由髓鞘退化引起的不良反應(yīng)))既延長(zhǎng)癌癥患者的生命并提高癌癥患者的生活質(zhì)量，又產(chǎn)生顯著的近期臨床益處例如腫瘤體積縮小。
[0012]在本發(fā)明的一方面，我們已發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元鈣感受器I(NCS-1)是常用于治療常見(jiàn)腫瘤的三類藥物:紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿類和放射增敏劑的新型結(jié)合蛋白。這些化療藥物類別中的兩類，紫杉烷和長(zhǎng)春花生物堿通過(guò)靶向微管組裝來(lái)遏制細(xì)胞分裂。明顯地，盡管這些藥物的作用機(jī)制不同，但是它們都在經(jīng)由獨(dú)立于微管的機(jī)制結(jié)合至NCS-1后啟動(dòng)導(dǎo)致CIAE的級(jí)聯(lián)，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIPN和/或CICAE以及其它副作用(諸如認(rèn)知功能減退/認(rèn)知功能衰退的中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用及由髓鞘降解引起的不良反應(yīng))。利用NCS-1的晶體結(jié)構(gòu)，我們已為以結(jié)構(gòu)為導(dǎo)向研發(fā)在不結(jié)合至NCS-1的情況下靶向微管組裝并將CIAE減至最低的紫杉烷和長(zhǎng)春花生物堿類似物奠定基礎(chǔ)，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE以及其它副作用(諸如認(rèn)知功能減退/認(rèn)知功能衰退的中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)及由髓鞘降解引起的不良反應(yīng))。
[0013]更具體地說(shuō)，我們已注意到使用化療藥物時(shí)Ca2+信號(hào)增強(qiáng)，其導(dǎo)致神經(jīng)元的超激活及致使神經(jīng)元發(fā)生病理變化(鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào))的酶的激活。我們先前的研究顯示了紫杉醇、NCS-1和1，4，5-三磷酸肌醇受體(InsP3R)之間的功能相互作用。Ehrlich, et al，Paclitaxel induces calcium oscillations via an inositoll, 4，5—trisphosphatereceptor and neuronal calcium sensor1-dependent mechanism, Proc Natl Acad Sci US A.2006November28;103(48): 18356-18361。我們還發(fā)現(xiàn)加入紫杉醇激活的鈣蛋白酶會(huì)導(dǎo)致NCS-1降解。在初步研究中，我們能夠通過(guò)抑制鈣蛋白酶預(yù)防NCS-1降解。在這種背景下，我們闡明了牽涉于NCS-1降解的分子機(jī)制并從而鑒定出保護(hù)細(xì)胞中的NCS-1水平的最佳途徑。因此，本文所描述的方法和組合物干擾這些病理級(jí)聯(lián)并且避免與化療治療相關(guān)聯(lián)的外周神經(jīng)病變。
[0014]在本發(fā)明的第二方面，我們已鑒定出阻止導(dǎo)致與使用紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和放射增敏劑治療癌癥相關(guān)聯(lián)的CIAE的病理級(jí)聯(lián)的藥物(“保護(hù)藥物”或“NCS-1-保護(hù)性組合物”)，包括如本文所描述的鋰鹽和AV411 (異丁司特(ibudilast))等，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)，尤其包括神經(jīng)病變/外周神經(jīng)病變(CIN/CIPN)和心血管不良反應(yīng)諸如心律不齊/心功能失常(CICAE)和相關(guān)癥狀，包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓磷脂降解引起的不良反應(yīng))。NCS-1-保護(hù)性組合物是如本文另外描述的緩解或抑制CIAE的任何化合物或組合物。在用可靠地CIAE誘導(dǎo)水平的紫杉烷處理的細(xì)胞和小鼠中的測(cè)試表明，當(dāng)保護(hù)劑藥物與如本文描述的紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿或放射增敏劑同時(shí)(即，在大約相同的時(shí)間、之前包括之前很長(zhǎng)時(shí)間或甚至之后)施用時(shí)，保護(hù)劑藥物可抑制和/或預(yù)防CIAE，所述CIAE包括CIPN和/或CICAE以及其它副作用(諸如認(rèn)知功能減退/認(rèn)知損傷的中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用及由髓磷脂降解引起的不利影響)。如本文所描述的具有保護(hù)性的NCS-1-保護(hù)性組合物結(jié)合至NCS-1并避免不希望的CIAE病理級(jí)聯(lián)的進(jìn)展。它們還具有很好的耐受性，在大多數(shù)情況下已獲得上市許可，并且非常適合于符合現(xiàn)有護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)的組合制劑或施用。進(jìn)一步地，它們不干擾紫杉烷和長(zhǎng)春花生物堿的微管作用(圖2和 2A)。
[0015]因此，根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)施用預(yù)先選擇的化療藥物類似物(包括藥學(xué)上可接受的鹽)或通過(guò)及時(shí)施用或共施用一種或多種如本文所描述的NCS-1-保護(hù)性組合物(包括藥學(xué)上可接受的鹽)可緩解和/或預(yù)防CIAE，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE以及其它相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)及由髓磷脂降解引起的不良反應(yīng))。
[0016]在本發(fā)明的第三方面，我們已發(fā)現(xiàn)保護(hù)劑藥物(如本文所描述的NCS-1-保護(hù)性組合物)的非微管蛋白靶標(biāo)差異顯著(例如，當(dāng)在從人乳腺癌樣本取出的組織中測(cè)量時(shí)差異近八倍)。這一發(fā)現(xiàn)可用來(lái)指示患者對(duì)化療副作用的易感性，所述化療副作用諸如CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)及由髓磷脂降解引起的不良反應(yīng))。對(duì)使用如本文另外描述的紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿或放射增敏劑的化療的不良反應(yīng)的預(yù)測(cè)或良好預(yù)后可以在體外、體內(nèi)或在電腦中通過(guò)在從候選接受可能誘導(dǎo)CIAE包括CIPN和/或CICAE等如本文所描述不良反應(yīng)的活性成分治療的患者獲取的癌細(xì)胞樣本中測(cè)定NCS-1表達(dá)水平來(lái)確定。
[0017]因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療方法，其包括通過(guò)向接受能引起CIAE的抗癌有效成份治療的患者聯(lián)合施用藥學(xué)上有效劑量的如本文所描述的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)預(yù)防或降低化療引起的不良反應(yīng)(CIAE)，所述化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(CIAE)包括化學(xué)上鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、誘導(dǎo)的神經(jīng)病變/外周神經(jīng)病變(CIN/CIPN)和/或化學(xué)誘導(dǎo)的心血管不良反應(yīng)CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓磷脂降解引起的不良反應(yīng))。
[0018]在某些實(shí)施方案中，向患者聯(lián)合施用多于一種類型的NCS-1-保護(hù)性組合物(包括比可誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分更早施用)，聯(lián)合施用的NCS-1-保護(hù)性組合物的劑量可以相同或不同。在另一些實(shí)施方案中，聯(lián)合施用多于一種類型的可誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分和NCS-1-保護(hù)性組合物。
[0019]在某些實(shí)施方案中，誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿、放射增敏劑(包括這些化合物或藥劑的藥學(xué)上可接受的鹽)或其混合物，并且NCS-1-保護(hù)性組合物為鈣蛋白酶抑制劑(包括藥學(xué)上可接受的鹽)。天然鈣蛋白酶抑制劑為鈣蛋白酶抑素?？墒褂玫钠渌}蛋白酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括AK275、鈣蛋白酶抑制劑1、鈣蛋白酶抑制劑I1、鈣蛋白酶抑制劑II1、鈣蛋白酶抑制劑IV、鈣蛋白酶抑制劑V、鈣蛋白酶抑制劑XI和鈣蛋白酶抑制劑XII。
[0020]在其他實(shí)施方案中，誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉烷(例如紫杉醇/ Taxol?或多西他賽(docetaxeI) / Taxoterel?)、長(zhǎng)春花生物堿(例如長(zhǎng)春堿(vinblastine)、長(zhǎng)春新堿(vincristine)、長(zhǎng)春地辛(vindesine)和長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine),優(yōu)選長(zhǎng)春新堿)、放射增敏劑(例如尼莫拉唑(nimorazole)、甲硝唑(metronidazole)或米索硝唑(misonidazole))及其混合物,并且NCS-1-保護(hù)性組合物選自由以下組成的組:AV411、鋰鹽(例如，碳酸鋰、氯化鋰或任何藥學(xué)上可接受的鋰形式)、丙戊酸、氯丙嗪、諸如鈣蛋白酶抑素的鈣蛋白酶抑制劑及其混合物。
[0021]在優(yōu)選實(shí)施方案中，誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?),多西他賽(Taxoterel?)、長(zhǎng)春新堿、甲硝唑及其混合物，并且NCS-1-保護(hù)性組
合物選自由以下組成的組:鈣蛋白酶抑制劑、丙戊酸、氯丙嗪及其混合物。
[0022]在又一個(gè)實(shí)施方案中，誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉醇
(Taxol?),多西他賽(Taxoterel?)、長(zhǎng)春新堿、甲硝唑及其混合物，并且NCS-1-保護(hù)性組
合物選自由以下組成的組:AV411 (異丁司特)、AV411類似物(例如AVlO 13，或如PCT專利申請(qǐng)W02007146087中另外描述的，該專利申請(qǐng)以引用的方式并入本文)、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪和鈣蛋白酶抑制劑諸如鈣蛋白酶抑素、AK275、鈣蛋白酶抑制劑1、鈣蛋白酶抑制劑I1、鈣蛋白酶抑制劑II1、鈣蛋白酶抑制劑IV、鈣蛋白酶抑制劑V、鈣蛋白酶抑制劑X1、鈣蛋白酶抑制劑XII，及其混合物。
[0023]在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉
醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、長(zhǎng)春新堿及其混合物，并且NCS-1-保護(hù)性組合物選
自由以下組成的組:AV411 (異丁司特)、鋰鹽、丙戊酸、鈣蛋白酶抑制劑(例如鈣蛋白酶抑素、AK275、鈣蛋白酶抑制劑1、鈣蛋白酶抑制劑I1、鈣蛋白酶抑制劑II1、鈣蛋白酶抑制劑IV、鈣蛋白酶抑制劑V、鈣蛋白酶抑制劑X1、鈣蛋白酶抑制劑XII及其混合物)和氯丙嗪。
[0024]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了增強(qiáng)接受誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療的患者的耐受性的方法，所述方法包括向患者聯(lián)合施用有效量的NCS-1-保護(hù)性組合物。
[0025]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療方法，其包括通過(guò)向患者聯(lián)合施用有效量的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)提高接受誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療的患者獲得良好預(yù)后的可能性。
[0026]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過(guò)向接受誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分治療的患者聯(lián)合施用有效量的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)抑制和/或降低患者的外周神經(jīng)病變的可能性的方法。
[0027]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療方法，其包括通過(guò)向接受誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分治療的患者聯(lián)合施用有效量的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)縮小患者的腫瘤體積。
[0028]在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療方法，其包括通過(guò)向接受紫杉醇
(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)或諸如長(zhǎng)春新堿的長(zhǎng)春花生物堿等進(jìn)行治療的乳腺癌、
卵巢癌、肺癌和/或前列腺癌患者聯(lián)合施用藥學(xué)上有效劑量的選自由AV411 (異丁司特)、AV411類似物(例如AV1013等)、鋰鹽、丙戊酸、鈣蛋白酶抑制劑(如本文另外描述的)、氯丙嗪及其混合物組成的組的NCS-1-保護(hù)性組合物以降低或抑制化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)CIAE)，所述化療誘導(dǎo)的不利影響CIAE)包括以下的一種或多種:鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、化學(xué)誘導(dǎo)的神經(jīng)病變/外周神經(jīng)病變(CIPN)和/或化學(xué)誘導(dǎo)的心血管不良反應(yīng)(CICAE)及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓鞘退化引起的不良反應(yīng))。
[0029]在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療罹患與腫瘤表達(dá)相關(guān)的癌癥并且需要接受可能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療的患者的方法，所述方法包括通過(guò)在施用可能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分之前約一小時(shí)至約四小時(shí)給患者攝入NCS-1-保護(hù)性組合物，來(lái)患者腫瘤體積縮減程度大于通過(guò)能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療(包括一種藥劑或藥劑組合)實(shí)現(xiàn)的腫瘤體積縮減程度。
[0030]“使受試者中的腫瘤體積縮減程度達(dá)到大于通過(guò)誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療實(shí)現(xiàn)的腫瘤體積縮減的程度”包括通過(guò)共施用NCS-1-保護(hù)性組合物使得當(dāng)與在相當(dāng)?shù)闹委熎趦?nèi)在誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分治療中觀察到的腫瘤體積相比較時(shí)腫瘤體積縮減至少20%，或 19%,或 18%,或 17%,或 16%,或 15%,或 14%,或 13%,或 12%,或 11%，或 10%,或 9%,或 8%,或7%,或 6%,或 5%,或 4 %,或 3%,或 2%,或 1%，或 0.5%,或 0.1%，或 0.05%,或 0.01%。
[0031]在某些實(shí)施方案中，在施用可能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分之前、同時(shí)或之后向受試者聯(lián)合施用NCS-1-保護(hù)性組合物。優(yōu)選地，在施用誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分之前(例如，在一種(多種)誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分施用之前約四小時(shí)或更長(zhǎng)，或約三小時(shí)，或約二小時(shí)，或約一小時(shí)或更短時(shí)，如本文另外描述的)向患者施用NCS-1-保護(hù)性組合物。
[0032]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及篩選可用于與NCS-1保護(hù)劑組合治療的候選化合物的方法，所述方法包括:(a)測(cè)定候選化合物對(duì)NCS-1的結(jié)合親和力值或候選化合物使InsP3R依賴性Ca2+釋放的NCS-1激活上調(diào)的程度值；以及(b)將所述候選化合物的結(jié)合親和力值或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與基于以下的對(duì)照值進(jìn)行比較:(I)從第二樣本中確知的紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿或放射增敏劑的結(jié)合親和力和/或(2)從第二樣本中確知的紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿或放射增敏劑的InsP3R依賴性Ca2+釋放值，其中如果候選化合物的結(jié)合親和力測(cè)定值約等于或大于相當(dāng)?shù)膶?duì)照值或者如果候選化合物的InsP3R依賴性Ca2+釋放值約等于或大于相當(dāng)?shù)膶?duì)照值，則將該候選化合物鑒定為用于與NCS-1保護(hù)劑共施用的潛在有用的治療化合物。
[0033]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了判定罹患癌癥并且備選接受抗癌活性成分治療的患者將因?yàn)榇朔N治療而顯現(xiàn)CIAE的可能性的方法，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓鞘降解引起的不良反應(yīng))，所述方法包括:在施用抗癌活性成分之前測(cè)定患者癌細(xì)胞中的NCS-1水平，將患者癌細(xì)胞與抗癌活性成分接觸并在此后測(cè)量患者癌細(xì)胞NCS-1水平，其中患者癌細(xì)胞中NCS-1水平的降低指示該患者在用抗癌活性成分治療后顯現(xiàn)CIAE的可能性增加，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓鞘降解引起的不良反應(yīng))。這種方法可在體外、體內(nèi)或在硅片上進(jìn)行。
[0034]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了檢測(cè)罹患癌癥并且為接受抗癌活性成分治療的候選者將因?yàn)榇朔N治療而顯現(xiàn)CIAE的可能性的方法，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓鞘退化引起的不良反應(yīng))，所述方法包括在施用抗癌活性成分之前測(cè)定患者癌細(xì)胞中的NCS-1水平，將測(cè)定的NCS-1水平同與良性InsP3R依賴性Ca2+釋放值相關(guān)的對(duì)照NCS水平進(jìn)行比較，其中測(cè)定的NCS-1水平超過(guò)對(duì)照NCS水平指示該受試者在用抗癌活性成分治療后顯現(xiàn)CIAE的可能性增加，所述CIAE包括CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓鞘降解引起的不良反應(yīng))。這種方法可在體外、體內(nèi)或在硅片上進(jìn)行。
[0035]在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了判定癌癥患者是否適合接受紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿或放射增敏抗癌劑化療并且對(duì)其表現(xiàn)較好反應(yīng)，所述方法包括治療前在患者樣本(尤其包括來(lái)自癌癥組織的癌細(xì)胞的樣本)中測(cè)定治療前的NCS-1水平和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值，將其與從已成功地用紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏劑抗癌劑治療的患者獲取的樣本中的對(duì)照NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平進(jìn)行比較，如果所述患者中的NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平與對(duì)照NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平相比有利(即，一般約等于或高于對(duì)照NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平)或不利(一般明顯低于對(duì)照NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平)，確定該患者是否使用紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏抗癌劑的抗癌治療。
[0036]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含: [0037](a)藥學(xué)有效量的一種 或多種選自由以下組成的組的抗癌活性成分:紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿、放射增敏劑或其混合物；
[0038](b) 一種或多種選自由以下組成的組的NCS-1-保護(hù)性組合物:AV411(異丁司特)、AV411 (異丁司特)類似物(例如AV1013)、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪和鈣蛋白酶抑制劑；以及任選地
[0039](C)藥學(xué)上可接受的載體、添加劑或賦形劑。
[0040]在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了篩選可用于治療癌癥并且導(dǎo)致化療誘導(dǎo)的不利影響的可能性降低的組合物的方法，所述化療誘導(dǎo)不良反應(yīng)包括外周神經(jīng)病變和/或心血管不良反應(yīng)，所述方法包括:
[0041](a)使癌細(xì)胞群體的第一樣本與候選組合物接觸或暴露于候選組合物中；
[0042](b)測(cè)定候選組合物對(duì)NCS-1的結(jié)合親和力值或候選組合物使InsP3R依賴性Ca2+釋放的NCS-1激活上調(diào)的程度值；以及
[0043](c)將結(jié)合親和力值或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與基于以下的對(duì)照值進(jìn)行比較:
(I)在癌細(xì)胞群體的第二樣本中諸如紫杉醇(Taxol?)和多西他賽(Taxoterel?)的紫杉
烷、長(zhǎng)春花生物堿(優(yōu)選，長(zhǎng)春新堿)和/或放射增敏劑的結(jié)合親和力，和/或(2)從未經(jīng)處理的癌細(xì)胞群體的第二樣本中確知的InsP3R依賴性Ca2+釋放值，其中如果候選組合物的結(jié)合親和力測(cè)定值小于相當(dāng)?shù)膶?duì)照值，或者如果候選組合物的InsP3R依賴性Ca2+釋放值約等于或小于相當(dāng)?shù)膶?duì)照值，則將該候選組合物鑒定為潛在有用的抗癌組合物。
[0044]在優(yōu)選實(shí)施方案中，如果測(cè)定的結(jié)合親和力或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與對(duì)照值相差不大于約20%,或19%，或18%，或17%，或16%，或15%，或14%，或13%，或12%，或11%，或10%,或 9%,或 8%,或 7%,或 6%,或 5%,或 4%,或 3%,或 2%,或 1%，或 0.5%,或 0.1%，或 0.05%,或0.01%,則認(rèn)為該測(cè)定值約等于或小于對(duì)照值。
[0045]如后文進(jìn)一步解釋的，我們已鑒定出紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和放射增敏劑的新型結(jié)合蛋白，并且還發(fā)現(xiàn)數(shù)種單獨(dú)地適合于可預(yù)防CIAE、鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)的新型療法的藥物，所述鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)包括CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓鞘退化引起的不良反應(yīng))。新型結(jié)合蛋白NCS-1代表解釋紫杉烷和長(zhǎng)春花生物堿誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病變的新鑒定的分子級(jí)聯(lián)。不結(jié)合至NCS-1或與NCS-1的結(jié)合力降低的這些化療藥物的類似物將會(huì)避免或減少化療患者中CIAE的發(fā)生，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓磷脂降解引起的不良反應(yīng))。保護(hù)劑藥物干擾NCS-1依賴性病理級(jí)聯(lián)，并最終預(yù)防CIAE、鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)，包括CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓磷脂降解引起的不良反應(yīng))。我們已鑒定的保護(hù)劑具有低毒性，并且?guī)资昵耙驯慌鷾?zhǔn)用于長(zhǎng)期施用。這些類似物和保護(hù)藥物在維持紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏劑的有效癌癥治療的同時(shí)能夠預(yù)防CIAE的能力的第一種藥理學(xué)途徑，所述CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓磷脂降解引起的不良反應(yīng))。
[0046]本發(fā)明的這些和其他方面進(jìn)一步描述于本發(fā)明的詳細(xì)描述中。
[0047]附圖簡(jiǎn)述
[0048]圖1:鋰鹽保護(hù)小鼠免 于發(fā)生神經(jīng)病變；10只小鼠/組；每次ip注射紫杉醇4.5mg/kg,注射4次,在紫杉醇前I小時(shí)ip注射鋰鹽12.8mg/kg。
[0049]圖2:鋰鹽保護(hù)小鼠免受紫杉醇誘導(dǎo)的損害；明顯的髓鞘損害增大結(jié)構(gòu)。
[0050]圖3:低劑量紫杉醇增加鈣蛋白酶活性。鋰處理防止鈣蛋白酶的激活。
[0051]圖4 =NCS-1表達(dá)在人乳腺組織樣本中不同。
[0052]圖5:紫杉醇加速微管組裝。鋰和異丁司特都沒(méi)有改變微管組裝。
[0053]圖6:高劑量紫杉醇有毒性。鋰保護(hù)小鼠免受毒性作用。10只小鼠/組；每次ip注射紫杉醇30mg/kg,注射4次,在紫杉醇前I小時(shí)ip注射12.8mg/kg鋰鹽。
[0054]圖7:聯(lián)合治療保護(hù)鈣信號(hào)傳導(dǎo)。
[0055]圖8:天然鈣蛋白酶拮抗劑鈣蛋白酶抑素的表達(dá)保護(hù)細(xì)胞中的鈣信號(hào)傳導(dǎo)。
[0056]圖9:色氨酸熒光證實(shí)紫杉醇結(jié)合至NCS-1。
[0057]圖10:NMR證實(shí)異丁司特結(jié)合至NCS-1。
[0058]圖11:低劑量紫杉醇減少鈣釋放，鋰處理預(yù)防鈣釋放的喪失。
[0059]圖12:低劑量紫杉醇降低外周神經(jīng)中的NCS-1水平，但沒(méi)有降低腦中的NCS-1水平，用鋰鹽維持了 NCS-1表達(dá)。
[0060]圖13:異丁司特保護(hù)小鼠免于發(fā)生神經(jīng)病變；5只小鼠/組；每次ip注射紫杉醇4.5mg/kg,注射4次,在紫杉醇前I小時(shí)ip注射異丁司特10mg/kg。[0061]圖1A:AV411 (異丁司特)對(duì)Taxol所致的NCS-1降解具有保護(hù)作用。蛋白質(zhì)印跡分析揭示Taxol處理(800ng/mL，6小時(shí))降低了 NCS-1水平(條2)。單獨(dú)IuM AV411的加入沒(méi)有顯著降低NCS-1水平(條3)。AV411與Taxol的組合部分地對(duì)抗了 Taxol誘導(dǎo)的NCS-1水平降低(條4)。所示數(shù)據(jù)為三次實(shí)驗(yàn)的平均值。
[0062]圖2A:luM AV411對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的保護(hù)。為誘導(dǎo)Ca2+從細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)庫(kù)瞬時(shí)釋放而用IuM ATP (在第一箭頭處)刺激的SHSY-5Y細(xì)胞的代表性Ca2+響應(yīng)。在200秒后，加入毒胡蘿卜素(TG，細(xì)胞內(nèi)Ca2+泵的抑制劑)以指示細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)庫(kù)已被填充并且細(xì)胞能存活(第二箭頭)。用800ng/mL taxol處理6小時(shí)的細(xì)胞(藍(lán)色跡線)具有幅度比未經(jīng)處理的細(xì)胞(黑色跡線)小的響應(yīng)。在taxol處理期間向細(xì)胞中加入的IuM AV411防止了信號(hào)傳導(dǎo)的降低(紫色跡線)。每條線均代表至少45個(gè)細(xì)胞(在三個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)中測(cè)量的至少15個(gè)細(xì)胞)的平均值。
[0063]圖1B:氯化鋰(LiCl)對(duì)Taxol所致的NCS-1降解具有保護(hù)作用。蛋白質(zhì)印跡分析揭示Taxol處理(800ng/mL，6小時(shí))降低了 NCS-1水平(條2)。單獨(dú)500uM或5.0mM LiCl的加入沒(méi)有降低NCS-1水平(條3和5)。然而，LiCl與Taxol的組合預(yù)防了 Taxol誘導(dǎo)的NCS-1水平的降低(條4和6)。所示數(shù)據(jù)為三次實(shí)驗(yàn)的平均值。
[0064]圖2B:500uM LiCl對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的保護(hù)。為誘導(dǎo)Ca2+從細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)庫(kù)瞬時(shí)釋放而用200nM卡巴膽堿(在第一箭頭處)刺激的SHSY-5Y細(xì)胞的代表性Ca2+響應(yīng)。在200秒后，加入毒胡蘿卜素(TG，細(xì)胞內(nèi)Ca2+泵的抑制劑)以指示細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)庫(kù)已被填充并且細(xì)胞能存活(第二箭頭)。用800ng/mL Taxol處理6小時(shí)的細(xì)胞(藍(lán)色跡線)具有幅度比未經(jīng)處理的細(xì)胞(黑色跡線)小且持續(xù)時(shí)間比它短的響應(yīng)。單獨(dú)加入500uM LiCl (粉色跡線)誘導(dǎo)了 Ca2+瞬變的小幅下降。然而，在Taxol處理期間向細(xì)胞中加入的500uM LiCl預(yù)防了信號(hào)傳導(dǎo)的降低(栗色跡線)。每條線均代表至少45個(gè)細(xì)胞(在三個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)中測(cè)量的至少15個(gè)細(xì)胞的平均值。
[0065]圖3B:5.0mM LiCl對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的保護(hù)。在存在和不存在5.0mM LiCl的情況下用800ng/mL Taxol處理6小 時(shí)的SHSY-5Y細(xì)胞的代表性Ca2+響應(yīng)。該實(shí)驗(yàn)與針對(duì)圖2描述的實(shí)驗(yàn)相同，不同的是使用5mM LiCl。
[0066]圖4B:腫瘤體積影響。
[0067]圖5:所附的圖的底部三個(gè)圖來(lái)自對(duì)注射了 taxol的小鼠進(jìn)行的超聲心動(dòng)圖。這些小鼠與用來(lái)進(jìn)行異種移植研究(在該圖的頂部示出)的小鼠相同。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)taxol注射后I小時(shí)舒張末期直徑和縮短分?jǐn)?shù)發(fā)生改變。它們是對(duì)收縮性的兩種測(cè)量。鋰預(yù)處理使該值回到對(duì)照水平。心率沒(méi)有改變。
[0068]發(fā)明詳述
[0069]使用以下術(shù)語(yǔ)描述本發(fā)明。應(yīng)理解，未具體定義的術(shù)語(yǔ)將被給予與如普通技術(shù)人員所理解的該術(shù)語(yǔ)在本發(fā)明的背景內(nèi)的使用相一致的含義。
[0070]除非另外指出，否則如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“化合物”或“藥劑(agent) ”是指本文所公開(kāi)的任何具體化合物，并且在適用時(shí)包括其互變異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體，以及如果適用的話，還包括其旋光異構(gòu)體(例如對(duì)映異構(gòu)體)，以及其藥學(xué)上可接受的鹽(使得鋰或另一種藥劑是指該藥劑(如果適用的話)及其任何藥學(xué)上可接受的鹽)。在上下文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)化合物一般是指單一化合物，但是如果在上下文中適用的話，也可包括其他化合物諸如立體異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體(包括外消旋混合物)以及所公開(kāi)化合物的特定對(duì)映異構(gòu)體和/或?qū)τ钞悩?gòu)體富集的混合物以及非對(duì)映體和差向異構(gòu)體。該術(shù)語(yǔ)在上下文中還指已被修飾成使化合物容易施用和遞送至活性部位的化合物前藥形式。
[0071]術(shù)語(yǔ)“患者”或“個(gè)體”在本說(shuō)明書(shū)上下文中用于描述接受使用根據(jù)本發(fā)明的方法和組合物的治療(包括預(yù)防性治療(預(yù)防))的動(dòng)物，一般指哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人。對(duì)于諸如人患者的特定動(dòng)物所特有的那些病狀或疾病狀態(tài)的治療，術(shù)語(yǔ)患者是指該特定動(dòng)物。
[0072]除非另外指出，否則術(shù)語(yǔ)“有效的”或“藥學(xué)上有效的”在本文用于描述在上下文中用來(lái)產(chǎn)生或?qū)崿F(xiàn)預(yù)期結(jié)果的化合物或組合物的量，不論所述結(jié)果是涉及對(duì)包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE的CIAE影響的抑制，還是涉及加強(qiáng)如本文所描述或待用于如本文所公開(kāi)的診斷等中的癌癥聯(lián)合治療的效果。這個(gè)術(shù)語(yǔ)涵括了本申請(qǐng)中另外描述的所有其他有效量或有效濃度術(shù)語(yǔ)(包括術(shù)語(yǔ)“治療有效的”)。
[0073]如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“治療”、“醫(yī)治”和“處理”等是指為處在癌癥風(fēng)險(xiǎn)中或受癌癥折磨并且遭受包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE或處在出現(xiàn)所述CIAE的風(fēng)險(xiǎn)中的患者提供益處的任何作用，包括減輕或抑制包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE和/或癌癥的至少一種癥狀，延遲包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE的相關(guān)癥狀或癌癥的相關(guān)癥狀的進(jìn)展，或者降低包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE的發(fā)作的可能性。如本文所使用的治療包括預(yù)防性和治療性治療。
[0074]術(shù)語(yǔ)“治療誘導(dǎo)的副作用”包括“化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)”或“CIAE”是指，在按照癌癥治療給患者施用某些類型的治療劑后發(fā)生的不利副作用，所述某些類型的治療劑尤其包括化療(該術(shù)語(yǔ)包括使用放射增敏劑的放射治療)，特別是如本文另外描述的紫杉烷類、長(zhǎng)春花生物堿和放射增敏劑。術(shù)語(yǔ)化療和癌癥治療在本文上下文內(nèi)可作為同義詞使用，并且術(shù)語(yǔ)治療涵括化療和癌癥治療。術(shù)語(yǔ)CIAE包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、化療誘導(dǎo)的神經(jīng)病變(包括外周神經(jīng)病變)(CIN/CIPN)、及化療誘導(dǎo)的心血管不良反應(yīng)(CICAE)，所述不良反應(yīng)包括心律失常和心血管功能障礙，包 括心血管鈣信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)和/或減弱及自發(fā)性鈣振蕩增強(qiáng)。
[0075]化療誘導(dǎo)的神經(jīng)病變(CIN)或外周神經(jīng)病變(CIPN)的癥狀包括但不限于，灼熱感、刺痛感(“如坐針租(pins and needles) ”的感覺(jué))、感覺(jué)喪失(可以是麻木,或者只是感知壓力、觸摸、熱或冷的能力減弱)、用手指拿起或握住東西有困難、拿不住東西、平衡問(wèn)題、走路時(shí)絆倒或摔倒的問(wèn)題、壓力或溫度引起的傷害比平時(shí)多(大多是冷；這稱為冷敏感性)、肌肉萎縮、肌肉無(wú)力、吞咽困難、便秘、排尿困難、血壓變化及反射減少或無(wú)反射的神經(jīng)傳導(dǎo)速度改變。這些癥狀中的許多也與鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)相關(guān)聯(lián)。
[0076]化療誘導(dǎo)的心血管不良反應(yīng)或CICAE的癥狀包括心律失常和心血管功能障礙，尤其包括心血管鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)(鈣信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)或減弱)和/或自發(fā)性鈣振蕩增強(qiáng)。術(shù)語(yǔ)心律失常(也稱為，心律不整和心律不齊)是指心臟中存在異常電活動(dòng)的一大組混雜病狀中的任一種。心跳可能太快或太慢，并且可能是規(guī)則的或不規(guī)則的。一些心律失常，尤其化療誘導(dǎo)的心律失常危及生命，并且它們可導(dǎo)致心臟驟停。還有一些心律失?？赡芘c顯著癥狀根本無(wú)關(guān)聯(lián)，但是可能使患者易患潛在危及生命的中風(fēng)或栓塞。
[0077]“紫杉烷”包括但不限于，紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、諸如IDN5390和GRN1005的紫杉烷衍生物、EP2330100A1中描述的紫杉烷衍生物，及Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry,第 76 卷(2012),第 2 期第 349-352 頁(yè)中描述或提及的紫杉烷衍生物。
[0078]“放射增敏劑”包括但不限于尼莫拉唑、甲硝唑和米索硝唑。在本申請(qǐng)中，這些化合物被定義為化療劑和抗癌劑。
[0079]“長(zhǎng)春花生物堿”包括但不限于，長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛和長(zhǎng)春瑞濱，及Holland-Frei Cancer Medicine.第 6 版，Kufe Dff, Pollock RE, Weichselbaum RR，等人編著.Hamilton(ON):BC Decker; 2003中描述或提到的長(zhǎng)春花生物堿。
[0080]紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏劑等藥劑屬于在治療期間導(dǎo)致NCS-1或NCS-1活性的修飾(包括轉(zhuǎn)譯后修飾)、被稱為誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分的化合物或藥劑群組。其他藥劑，可以是或不是抗癌劑但是在治療(不管出于什么目的)期間造成相同不良反應(yīng)，在本文稱為“治療誘導(dǎo)不良反應(yīng)的治療劑”(誘導(dǎo)TIAE的治療劑)。(對(duì)NCS-1或NCS-1活性的)這種修飾導(dǎo)致患者出現(xiàn)CIAE(TIAE)，其一般包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)，尤其包括神經(jīng)病變/外周神經(jīng)病變(CIN/CIPN)和心血管不良反應(yīng)諸如心律失常/心功能障礙(CICAE)及相關(guān)癥狀(包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，諸如認(rèn)知影響(尤其認(rèn)知功能減退)和由髓鞘降解引起的不良反應(yīng))。
[0081 ] “NCS-1 相關(guān)蛋白”包括但不限于，NCS-1、FRQl、ncs_l、ncs_2、ncs_3、Frequeninl、Frequenin2、神經(jīng)鈣蛋白、海馬鈣結(jié)合蛋白、KChIP、NCS_l人重組體及其同源物。
[0082]貫穿本說(shuō)明書(shū)使用的術(shù)語(yǔ)“癌癥”是指引起癌性或惡性贅生物形成和生長(zhǎng)的病理過(guò)程，所述癌性或惡性贅生物即為由于細(xì)胞增殖而生長(zhǎng)的異常組織，其經(jīng)常比正常生長(zhǎng)更快并且在引發(fā)新生長(zhǎng)的刺激停止之后繼續(xù)生長(zhǎng)。惡性贅生物表現(xiàn)出部分或完全缺乏結(jié)構(gòu)組織及與正常組織的功能協(xié)同，并且大多數(shù)侵害周圍組織，轉(zhuǎn)移到數(shù)個(gè)部位，并可能在嘗試除去之后復(fù)發(fā)及引起患者死亡，除非得到充分治療。
[0083]如本文所使用的術(shù)語(yǔ) 腫瘤形成用于描述所有的癌性疾病狀態(tài)并且包括或涵蓋與惡性血原性瘤、腹水瘤和實(shí)體瘤有關(guān)的病理過(guò)程。代表性癌癥包括，例如，胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、子宮體癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、膀胱癌、腎癌、腦/CNS癌、頭頸癌、喉癌、霍奇金病(Hodgkin’s disease)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、黑素瘤、非黑素瘤皮膚癌、急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性髓性白血病、尤因氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、小細(xì)胞肺癌、絨膜癌、橫紋肌肉瘤、維爾姆斯瘤(Wilms’ tumor)、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、毛細(xì)胞白血病、口 /咽癌、食管癌、喉癌、腎癌和淋巴瘤等，它們可用一種或多種根據(jù)本發(fā)明的化合物進(jìn)行治療。在某些優(yōu)選方面，所治療的癌癥為肺癌、乳腺癌、卵巢癌和/或前列腺癌。
[0084]術(shù)語(yǔ)“腫瘤”用于描述惡性或良性的生長(zhǎng)或腫脹。
[0085]術(shù)語(yǔ)“另外的抗癌化合物”、“另外的抗癌藥物”或“另外的抗癌劑”用于描述可用于治療癌癥的任何化合物(包括其衍生物)?！傲硗獾目拱┗衔铩?、“另外的抗癌藥物”或“另外的抗癌劑”可為可與誘導(dǎo)CIAE的抗癌成分諸如紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏劑相區(qū)分的、在本文其他方面用作化療/癌癥治療劑的抗癌劑。在許多情況下，根據(jù)本發(fā)明的另一種抗癌化合物的共施用導(dǎo)致協(xié)同的抗癌作用。用于與根據(jù)本發(fā)明的制劑共施用的示例性抗癌化合物包括在廣義上被描述為抗代謝物的抗代謝物藥劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II的抑制劑、烷化劑和微管抑制劑(例如，taxol),以及酪氨酸激酶抑制劑(例如，索拉非尼(surafenib) )、EGF激酶抑制劑(例如，特羅凱(tarceva)或埃羅替尼(erlotinib))及酪氨酸激酶抑制劑或ABL激酶抑制劑(例如，伊馬替尼(imatinib))。
[0086]用于共施用的抗癌化合物包括，例如，阿地白介素(Aldesleukin);阿侖單抗(Alemtuzumab);阿利維 A 酸(alitretinoin);別票呤酉享(allopurinol);六甲蜜胺(altretamine);阿米福汀(amifostine);阿那曲唑(anastrozole);三氧化砷；天冬酉先胺酶；活卡介苗(BCG Live);蓓薩羅丁(bexarotene)膠囊；蓓薩羅丁凝膠劑；博來(lái)霉素(bleomycin);白消安靜脈內(nèi)用藥(busulfan intravenous);白消安口服用藥(busulfanoral);卡普辜麗(calusterone);卡培他濱(capecitabine);卡鉬(carboplatin);卡莫司汀(carmustine);卡莫司汀與聚苯丙生(Polifeprosan) 20的植入物；塞來(lái)昔布(celecoxib);苯丁酸氮芥(chlorambucil);順鉬(cisplatin);克拉屈濱(cladribine)；環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);阿糖孢苷(cytarabine);阿糖胞苷脂質(zhì)體；達(dá)卡巴嗪(dacarbazine);更生霉素(dactinomycin);放線菌素 D (actinomycin D);阿法達(dá)貝泊汀(Darbepoetin alfa);柔紅霉素脂質(zhì)體；柔紅霉素(daunorubicin)、道諾霉素(daunomycin);地尼白介素(Denileukin diftitox)、右雷佐生(dexrazoxane);多西他賽；阿霉素(doxorubicin);阿霉素脂質(zhì)體；丙酸屈他雄酮(Dromostanolone propionate)；埃利奧特B溶液(Elliott’s B Solution);表柔比星(epirubicin);阿法依泊汀雌莫司汀(Epoetin alfa estramustine);憐酸依托泊苷(etoposide phosphate);依托泊苷(VP-16);依西美坦(exemestane);非格司亭(Filgrastim);氟尿苷(f1xuridine)(動(dòng)脈內(nèi))；氟達(dá)拉濱(fIudarabine);氟尿啼卩定(fluorouracil) (5-FU);氟維司群(fulvestrant);吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin);格列衛(wèi)(gleevec)(伊馬替尼)；醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate);羥基脲(hydroxyurea);替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan);伊達(dá)比星(idarubicin);異環(huán)憐酉先胺(ifosfamide);甲橫酸伊馬替尼；干擾素a-2a;干擾素a-2b ;伊立替康(irinotecan);來(lái)曲唑(Ietrozole)；甲酉先四氫葉酸(Ieucovorin);左旋咪唑(Ievamisole);洛莫司汀(1mustine) (CCNU)；二氯甲基二乙胺(meclorethamine)(氮芥)；醋酸甲地孕酮(megestrol acetate);美法侖(melphalan) (L-PAM);疏票呤(mercaptopurine) (6-MP);美司鈉(mesna)；甲氨蝶呤(methotrexate)；甲氧 沙林(methoxsalen);絲裂霉素 C (mitomycin C);米托坦(mitotane);米托蔥酉昆(mitoxantrone);苯丙酸i若龍(nandrolone phenpropionate);若莫單抗(Nofetumomab) ；LOddC ;奧普瑞白介素(Oprelvekin);奧沙利鉬(oxaliplatin);紫杉醇；帕米膦酸二鈉(pamidronate);培加酶(pegademase);培門冬酶(Pegaspargase)；培非格司亭(Pegfilgrastim);噴司他丁(pentostatin);哌泊溴焼(pipobroman);普卡霉素(Plicamycin);光神霉素(mithramycin);卟吩姆鈉(porfimer sodium);丙卡巴餅(procarbazine);奎納克林(quinacrine);拉布立酶(Rasburicase);利妥昔單抗(Rituximab);沙格司亭(Sargramostim);鏈佐星(streptozocin);索拉非尼(surafenib)；替比夫定(talbuvidine) (LDT);滑石；它莫西芬(tamoxifen);特羅凱(tarceva)(埃羅替尼(erlotinib));替莫唑胺(temozolomide);替尼泊苷(teniposide) (VM-26);睪內(nèi)酯；硫鳥(niǎo)票呤(6-TG);噻替派(thiotepa);拓?fù)涮婵?topotecan);托瑞米芬(toremifene);托西莫單抗(Tositumomab);曲妥單抗(Trastuzumab);維甲酸(tretinoin) (ATRA);烏拉莫司汀(Uracil Mustard);戊柔比星(valrubicin);泛托西他濱(valtorcitabine)(單價(jià) LDC);長(zhǎng)春堿；長(zhǎng)春瑞濱；唑來(lái)膦酸(zoIedronate);及其混合物等。
[0087]術(shù)語(yǔ)“聯(lián)合施用”或“聯(lián)合治療”用于描述這樣的治療，其中同時(shí)或在本文進(jìn)一步定義或可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定的給藥或施用時(shí)程內(nèi)使用有效量的至少兩種活性化合物治療癌癥和/或包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE或如本文另外描述的另一種疾病狀態(tài)或病狀。雖然術(shù)語(yǔ)聯(lián)合施用優(yōu)選包括將兩種活性化合物同時(shí)給藥給給患者，但是不是必須將所述化合物同一時(shí)間施用給患者，但有效量的各種化合物將同時(shí)存在于患者體內(nèi)。另外，在某些實(shí)施方案中，聯(lián)合施用還指這種情況:在顯著不同的時(shí)間施用兩種化合物，但這兩種化合物的作用同時(shí)存在。因而，術(shù)語(yǔ)聯(lián)合施用包括這樣的施用，其中一種活性劑(尤其NCS-1保護(hù)性組合物)與如本文另外描述的誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分在大約相同的時(shí)間(同時(shí))施用，或者比本文另外描述的誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分早施用約一分鐘至數(shù)分鐘至約八小時(shí)、約30分鐘至約6小時(shí)、約一小時(shí)至約4小時(shí)，或甚至早很多，包括高達(dá)一天或明顯更長(zhǎng)的時(shí)間。值得注意的是，在某些實(shí)施方案中，NCS-1保護(hù)性組合物可在誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分之后施用并且仍然具有改善或保護(hù)作用。
[0088]聯(lián)合施用的抗癌化合物可包括，例如，阿地白介素；阿侖單抗；阿利維A酸；別嘌呤醇；六甲蜜胺；阿米福汀；阿那曲唑；三氧化砷；天冬酰胺酶；活卡介苗；蓓薩羅丁膠囊；蓓薩羅丁凝膠劑；博來(lái)霉素；白消安靜脈內(nèi)用藥；白消安口服用藥；卡普睪酮；卡培他濱；卡鉬；卡莫司??；卡莫司汀與聚苯丙生20的植入物；塞來(lái)昔布；苯丁酸氮芥；順鉬；克拉屈濱；環(huán)磷酰胺；阿糖孢苷；阿糖胞苷脂質(zhì)體；達(dá)卡巴嗪；更生霉素；放線菌素D ;阿法達(dá)貝泊汀；柔紅霉素脂質(zhì)體；柔紅霉素、道諾霉素；地尼白介素、右雷佐生(多西他賽；阿霉素；阿霉素脂質(zhì)體；丙酸屈他雄酮；埃利奧特B溶液；表柔比星；阿法依泊汀雌莫司?。涣姿嵋劳胁窜?；依托泊苷(VP-16);依西美坦；非格司亭；氟尿苷(動(dòng)脈內(nèi))；氟達(dá)拉濱；氟尿嘧啶(5-FU);氟維司群；吉妥珠單抗奧唑米星；格列衛(wèi)(伊馬替尼)；醋酸戈舍瑞林；羥基脲；替伊莫單抗；伊達(dá)比星；異環(huán)磷酰胺；甲磺酸伊馬替尼；干擾素a -2a ;干擾素a -2b ;伊立替康；來(lái)曲唑；甲酰四氫葉酸；左旋咪唑；洛莫司汀(CCNU) ;二氯甲基二乙胺(氮芥)；醋酸甲地孕酮；美法侖(L-PAM);巰嘌呤(6-MP);美司鈉；甲氨蝶呤；甲氧沙林；絲裂霉素C ;米托坦；米托蒽醌；苯丙酸諾龍；若莫單抗；L0ddC ;奧普瑞白介素；奧沙利鉬；紫杉醇；帕米膦酸二鈉；培加酶；培門冬酶；培非格司亭；噴司他丁 ；哌泊溴烷；普卡霉素；光神霉素；卟吩姆鈉；丙卡巴肼；奎納克林；拉布立酶；利妥昔單抗；沙格司亭；鏈佐星；索拉非尼潛比夫定(LDT);滑石；它莫西芬；特羅凱(埃羅替尼);替莫唑胺；替尼泊苷(VM-26);睪內(nèi)酯；硫鳥(niǎo)嘌呤(6-TG);噻替派；拓?fù)涮婵?；托瑞米芬；托西莫單抗；曲妥單抗；維甲酸(ATRA);烏拉莫司?。晃烊岜刃?；泛托西他濱(單價(jià)LDC);長(zhǎng)春堿；長(zhǎng)春瑞濱；唑來(lái)膦酸；及其混合物等。
[0089]本發(fā)明制劑與另一種抗癌劑的聯(lián)合施用常常導(dǎo)致其他抗癌劑的抗癌活性的協(xié)同增強(qiáng)這一意外結(jié)果。一種或多種本發(fā)明制劑也可與另一種生物活性劑(例如，如本文另外描述的抗病毒劑、抗過(guò)度增生疾病藥劑、治療慢性炎性疾病的藥劑等)聯(lián)合施用。
[0090]“酪氨酸激酶抑制劑”包括但不限于伊馬替尼、阿西替尼(axitinib)、博舒替尼(bosutinib)、西地尼布(cediranib)、達(dá)沙替尼(dasatinib)、埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(Iapatinib)、來(lái)他替尼(Iestaurtinib)、尼羅替尼(nilotinib)、司馬沙尼(semaxanib)、舒尼替尼(sunitinib)、托西尼布(toceranib)、凡德他尼(vandetanib)、瓦他拉尼(vatalanib)、索拉替尼(sorafenib, Nexavar?.)、拉帕替尼(Iapatinib)、莫替沙尼(motesanib)、凡德他尼(vandetanib, Zactima? )、MP_412、來(lái)
他替尼(Iestaurtinib)、XL647、XL999、坦度替尼(tandutinib)、PKC412、AEE788、0SI_930、
0S1-817、蘋果酸舒尼替尼(sunitinib maleate, Sutent? )和 N-(4-(4-氨基噻吩并
[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基)-N’-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)脲，其制備描述于美國(guó)專利申請(qǐng)文件第2007/0155758號(hào)中。
[0091]藥物組合物代表本發(fā)明的另一方面，所述藥物組合物包含有效劑量的至少一種抗癌活性成分(例如，紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏劑)和至少一種根據(jù)本發(fā)明的NCS-1-保護(hù)性組合物，和/或一種或多種本文另外描述的其他另外的抗癌化合物，均以有效劑量與藥學(xué)有效量的載體、添加劑或賦形劑組合。
[0092]本發(fā)明治療方法中使用的組合物和本發(fā)明藥物組合物可以常規(guī)方式使用一種或多種藥學(xué)上可接受的載體配制，并且也可以控釋制劑形式施用。可在這些藥物組合物中使用的藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、諸如人血清白蛋白的血清蛋白、諸如磷酸鹽的緩沖物質(zhì)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或諸如硫酸醇溶谷蛋白(prolamine sulfate)的電解質(zhì)、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素基物質(zhì)、聚乙二醇、羧基甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯/鹽、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。
[0093]本發(fā)明治療方法中使用的組合物和本發(fā)明藥物組合物可口服、腸胃外、通過(guò)吸入噴霧、局部、直腸、鼻、頰、陰道給藥或經(jīng)由植入式貯庫(kù)給藥。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“腸胃外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)(intra-synovial)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、病灶內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)。優(yōu)選地，所述組合物經(jīng)口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥。
[0094]本發(fā)明治療方法中使用的組合物的注射用無(wú)菌形式可以為水性混懸液或油性混懸液?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)使 用合適的分散劑或潤(rùn)濕劑和懸浮劑配制這些混懸液。注射用無(wú)菌制劑也可以是在無(wú)毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的注射用無(wú)菌溶液或混懸液，例如在1，3-丁二醇中的溶液?？刹捎玫目山邮艿娜苊胶腿軇┯兴?、林格氏溶液(Ringer’s solution)和等滲氯化鈉溶液。另外，照慣例使用無(wú)菌的非揮發(fā)油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為了此目的，可以使用任何溫和的非揮發(fā)性油，其包括合成的甘油單酯和甘油二酯。諸如油酸的脂肪酸及其甘油酯衍生物可用于制備注射劑，天然的藥學(xué)上可接受的油也可以，如橄欖油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙烯化的形式。這些油溶液或混懸液也可以含有長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或分散劑，諸如Ph.Helv或類似的醇。
[0095]本發(fā)明的藥物組合物可以以任何口服可接受的劑型口服給藥，所述劑型包括但不限于:膠囊、片劑、水性混懸劑或溶液劑。在用于口服使用的片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤(rùn)滑劑，諸如硬脂酸鎂。對(duì)于膠囊形式的口服施用，有用的稀釋劑包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)需要將水性混懸液用于口服使用時(shí)，將活性成分與乳化劑和懸浮劑組合在一起。如有需要，還可加入某些甜味劑、調(diào)味劑或著色劑。
[0096]替代地，本發(fā)明的藥物組合物可以用于直腸施用的栓劑形式施用。所述栓劑可通過(guò)將藥劑與合適的無(wú)刺激性賦形劑混合在一起來(lái)制備，所述合適的無(wú)刺激性賦形劑在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，并因此將在直腸內(nèi)融化而釋放出藥物。此類材料包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
[0097]本發(fā)明的藥物組合物還可局部施用，尤其是用于治療皮膚癌。對(duì)于這些區(qū)域或器官中的每一個(gè)，容易制備合適的局部制劑。對(duì)于下腸道的局部應(yīng)用可以以直腸栓劑制劑(見(jiàn)上文)或以合適的灌腸制劑實(shí)現(xiàn)。也可使用局部可接受的透皮貼劑。
[0098]對(duì)于局部應(yīng)用，可以將藥物組合物配制成含有懸浮或溶解在一種或多種載體中的活性組分的合適的膏劑。用于本發(fā)明化合物的局部施用的載體包括但不限于:礦物油、液體礦脂、白礦脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水。
[0099]替代地，可以將所述藥物組合物配制成含有懸浮或溶解在一種或多種藥學(xué)上可接受的載體中的活性組分的合適的洗劑或霜?jiǎng)?。合適的載體包括但不限于:礦物油、脫水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鯨蠟酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
[0100]對(duì)于眼部使用，可以將所述藥物組合物配制成在等滲的pH調(diào)節(jié)的無(wú)菌生理鹽水中的微?；鞈覄?，或優(yōu)選地，配制成在等滲的PH調(diào)節(jié)的無(wú)菌生理鹽水中的溶液劑，其可含有或不含防腐劑如苯扎氯銨。替代地，對(duì)于眼部使用，可以將所述藥物組合物配制成膏劑如礦脂。
[0101]本發(fā)明藥物組合物還可以通過(guò)鼻氣霧劑或鼻吸入劑施用。此類組合物根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域熟知的技術(shù)制備，并且可使用苯甲醇或其他合適的防腐劑、提高生物利用度的吸收促進(jìn)劑、碳氟化合物，和/或其他常規(guī)增溶劑或分散劑將其制備成在生理鹽水中的溶液。
[0102]可與載體材料組合而產(chǎn)生單一劑型的本發(fā)明藥物組合物中的化合物的量將隨著所治療的宿主和癌癥類型及具體施用途徑而變化。優(yōu)選地，所述組合物可被配制成含有介于約0.05毫克至約750毫克或更高之間，更優(yōu)選約I毫克至約600毫克，甚至更優(yōu)選約10毫克至約500毫克的至少一種抗癌活性成分和至少一種NCS-1-保護(hù)性組合物，所述的至少一種抗癌活性成分和至少一種 NCS-1-保護(hù)性組合物任選地與至少一種另外的抗癌活性成分和/或NCS-1-保護(hù)性組合物組合。
[0103]還應(yīng)理解，對(duì)于任何具體患者的具體劑量和治療方案將取決于多種因素，包括所采用的具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、施用時(shí)間、排泄率、藥物組合，及治療醫(yī)生的判斷和受治療的具體疾病或病狀的嚴(yán)重性。
[0104]在某些非限制性實(shí)施方案中，患者或測(cè)試樣本中測(cè)得的NCS-1水平或InsP3R依賴性Ca2+釋放值相比于相當(dāng)?shù)脑趯?duì)照患者或樣本(其可包括一名或多名患者、一名或多名癌癥患者或一名或多名已成功地用紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏抗癌劑治療的患者)中測(cè)得的NCS-1水平或InsP3R依賴性Ca2+釋放值增大或減小，可為數(shù)量增大或減小約 ±5，000-10，000%,或約 ±2，500-5，000%,或約 ±1，000-2，500%,或約 ±500-1，000%,或約 ±250-500%，或約土 100-250%，或約 ±50-100%，或約 ±25_50%，或約土 10_25%，或約±10-20%，或約 ±10-15%，或約 ±5-10%，或約 ±1_5%，或約 ±0.5_1%，或約 ±0.1-0.5%，或約 ±0.01-0.1%，或約 ±0.001-0.01%，或約 ±0.0001-0.001%。
[0105]從對(duì)照獲得的值是代表已知健康狀態(tài)的參考值，并且從測(cè)試樣本或患者獲得的值是代表已知疾病狀態(tài)的參考值。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“對(duì)照”可意指為了與待分析樣本相比較而從至少一名健康受試者或罹患癌癥的受試者獲取的優(yōu)選相同來(lái)源(例如，癌細(xì)胞、血液、血清、組織等)的樣本。為了獲得相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果，應(yīng)當(dāng)以相同的方式獲取、操作和處理對(duì)照和樣本。在某些實(shí)例中，用于獲取對(duì)照值的個(gè)體數(shù)目可以為至少一個(gè)，優(yōu)選至少兩個(gè)，更優(yōu)選至少五個(gè)，最優(yōu)選至少十個(gè)，特別是至少二十個(gè)。然而，該值也可以獲自至少一百個(gè)、一千個(gè)或一萬(wàn)個(gè)個(gè)體。
[0106]可使用免疫測(cè)定、活性測(cè)定和/或結(jié)合測(cè)定檢測(cè)基因的翻譯產(chǎn)物和/或所述翻譯產(chǎn)物的片段或衍生物或變異體的水平和/或活性和/或表達(dá)，和/或所述翻譯產(chǎn)物和/或它們的片段或衍生物或變異體的水平或活性。這些測(cè)定可通過(guò)使用附著于抗蛋白抗體或結(jié)合抗蛋白抗體的二級(jí)抗體上的酶(例如，抗體連接至激活熒光發(fā)色團(tuán)從而提供用于檢測(cè)的熒光染料的酶)、色動(dòng)力學(xué)、放射性、磁性或發(fā)光(熒光團(tuán)或熒光半族)標(biāo)記(這些分子一般稱為報(bào)告子(reporter)或報(bào)告分子)測(cè)量所述蛋白分子與抗蛋白抗體之間的結(jié)合的量。這些都是標(biāo)準(zhǔn)的并且為本領(lǐng)域所熟知。另外，可使用其他高親和力配體?？墒褂玫拿庖邷y(cè)定包括，例如，ELISA、蛋白質(zhì)印跡和其他本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的技術(shù)(參見(jiàn) Harlow 和 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor, N.Y.，1999 及 Edwards R, Immunodiagnostics:APractical Approach, Oxford University Press, Oxford;England, 1999)0 所有這些檢測(cè)技術(shù)都還可以以微陣列、蛋白質(zhì)陣列、抗體微陣列、組織微陣列、基于電子生物芯片或蛋白質(zhì)芯片的技術(shù)的格式使用(參見(jiàn) Schena M., Microarray Biochip Technology, EatonPublishing, Natick, Mass., 2000)。
[0107]本發(fā)明的某些診斷和篩選方法利用能夠特異性地結(jié)合至如本文所描述的NCS-1相關(guān)蛋白或其活性片段的抗體，優(yōu)選單克隆抗體。利用抗體測(cè)量NCS-1蛋白水平的方法能夠非侵入性地診斷癌細(xì)胞(例如，來(lái)自乳腺、卵巢、宮頸或肺組織的癌細(xì)胞)的病理狀態(tài)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述抗體是人或人源化抗體。優(yōu)選的抗體可用于例如標(biāo)準(zhǔn)放射免疫測(cè)定或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定或其他利用抗體測(cè)量樣本中NCS-1蛋白水平的測(cè)定。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體用于檢測(cè)和測(cè)量癌癥樣本(例如，乳腺、卵巢、宮頸或肺細(xì)胞)中存在的NCS-1蛋白水平。在本發(fā)明中，可優(yōu)選使用自動(dòng)化定量分析系統(tǒng)或AQUA系統(tǒng)或方法(參見(jiàn)，例如，Camp,等 人，Automated subcellular localization and quantification ofprotein expression in tissue microarrays.Nat Med2002;8:1323-7)定量癌癥組織樣本中存在的NCS-1蛋白。
[0108]人源化抗體是與親本抗體(即通常為小鼠來(lái)源)具有相同的結(jié)合特異性，但增加了人特性的抗體或抗體片段。人源化抗體可由例如鏈改組或使用噬菌體展示技術(shù)獲得。例如，將包含對(duì)NCS-1蛋白有特異的非人抗體的重或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多肽與人互補(bǔ)(輕或重)鏈可變結(jié)構(gòu)域庫(kù)組合在一起。選擇對(duì)感興趣抗原有特異性的雜交配對(duì)物。然后將來(lái)自所選擇的配對(duì)物的人鏈與人互補(bǔ)可變結(jié)構(gòu)域(重或輕)庫(kù)組合在一起，然后可針對(duì)對(duì)抗原的結(jié)合特異性選擇人源化抗體多肽二聚體。所描述的制備可用于本發(fā)明方法中的人源化抗體的技術(shù)公開(kāi)于例如美國(guó)專利第5，565，332號(hào)、第5，585，089號(hào)、第5，694，761號(hào)和第5，693，762號(hào)中。此外，所描述的在轉(zhuǎn)基因小鼠中制備人抗體的技術(shù)描述于例如美國(guó)專利第5，545，806號(hào)和第5, 569, 825號(hào)中。
[0109]為了鑒定可用于本發(fā)明方法中的通過(guò)調(diào)整NCS-1的活性和表達(dá)或InsP3R依賴性Ca2+釋放值治療或預(yù)防包括CIPN和/或CICAE的CIAE的小分子和其他藥劑，可將NCS-1及其生物活性片段用于多種篩選技術(shù)中的任一種中篩選治療化合物。此類篩選測(cè)試中采用的片段可能游離在溶液中、固定到固體支持物上、加載到細(xì)胞表面上，或定位在細(xì)胞內(nèi)?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中可用的方法測(cè)量生物活性的阻斷或降低或者NCS-1與待測(cè)試藥劑之間的結(jié)合復(fù)合物的形成。
[0110]提供對(duì)影響NCS-1水平或InsP3R依賴性Ca2+釋放值的化合物的高通量篩選的其他藥物篩選技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的。例如，可使用本領(lǐng)域中可用的方法制備、使用和分析攜載測(cè)試化合物的微陣列。參見(jiàn)，例如，Shalon，D.等人，1995，國(guó)際公布第W095/35505號(hào)；Baldeschweiler等人，1995,國(guó)際公布第W095/251116號(hào)；Brennan等人，1995,美國(guó)專利第5，474，796 號(hào)；Heller 等人，1997，美國(guó)專利第 5，605，662 號(hào)。
[0111]也可以通過(guò)多種其他篩選技術(shù)鑒定調(diào)整NCS-1水平或InsP3R依賴性Ca2+釋放活性的小分子，這些小分子也可以用于鑒定與NCS-1相互作用的抗體和其他化合物并且可用作本發(fā)明方法中的藥物或治療藥物。參見(jiàn)，例如，Enna等人編著,1998, Current Protocolsin Pharmacology, John ffiley&Sons, Inc., New York N.Y。測(cè)定將通常提供同化合物與蛋白或細(xì)胞靶標(biāo)的結(jié)合相關(guān)聯(lián)的可檢測(cè)信號(hào)?？赏ㄟ^(guò)例如熒光團(tuán)、酶綴合物和其他本領(lǐng)域熟知的可檢測(cè)標(biāo)記檢測(cè)結(jié)合。結(jié)果可以是定性或定量的。
[0112]為了針對(duì)特異性結(jié)合篩選化合物，可采用各種免疫測(cè)定檢測(cè)例如結(jié)合至細(xì)胞的人或靈長(zhǎng)類抗體。因而，可以使用標(biāo)記的抗hlg,例如,抗hlgM、抗hlgG或其組合特異性地檢測(cè)結(jié)合的人抗體。可以使用多種標(biāo)記，諸如放射性同位素、酶、突光劑、化學(xué)發(fā)光劑、顆粒等。有許多提供標(biāo)記的抗hlg的可商購(gòu)獲得的試劑盒，其可根據(jù)制造商的方案使用。
[0113]在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒可包括:(a)至少一種選自由以下組成的組的試劑:
(i)檢測(cè)編碼如本文所描述的NCS-1基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的試劑、(ii)檢測(cè)編碼NCS-1的基因的翻譯產(chǎn)物的試劑，和/或檢測(cè)所述轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物的片段或衍生物或變體的試劑；(b)關(guān)于以下方面的說(shuō)明書(shū):診斷或預(yù)測(cè)癌癥和/或包括化學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE，或者確定受試者罹患此種疾病的趨向或傾向，或者監(jiān)控治療效果，所述這些通過(guò)如下方法實(shí)現(xiàn):在從所 述受試者獲取的樣本中測(cè)定所述轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和/或所述翻譯產(chǎn)物和/或前述的片段、衍生物或變異體的水平或活性，或所述水平和所述活性二者，和/或表達(dá)；以及將所述轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和/或所述翻譯產(chǎn)物和/或它們的片段、衍生物或變異體的所述水平和/或所述活性和/或表達(dá)與代表已知疾病狀態(tài)(患者)的參考值和/或與代表已知健康狀態(tài)(對(duì)照)的參考值和/或與參考值進(jìn)行比較；以及分析所述水平和/或所述活性和/或表達(dá)與代表已知健康狀態(tài)的參考值相比較是否發(fā)生變化，和/或是否與代表已知健康狀態(tài)的參考值或參考值類似或相同；以及診斷或預(yù)測(cè)癌癥和/或包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE，或者確定所述受試者罹患此種疾病的趨向或傾向，其中當(dāng)所述轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和/或所述翻譯產(chǎn)物和/或它們的所述片段、衍生物或變異體的水平、表達(dá)或活性，或所述水平和所述活性二者與代表已知健康狀態(tài)(對(duì)照)的參考值相比較發(fā)生變化或改變時(shí)，和/或當(dāng)所述轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和/或所述翻譯產(chǎn)物和/或它們的所述片段、衍生物或變異體的水平或活性或者所述水平和所述活性二者與代表已知疾病狀態(tài)(患者樣本)，優(yōu)選癌癥和/或包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE在內(nèi)的CIAE的疾病狀態(tài)的參考值，和/或與代表已知癌癥和/或包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE階段的CIAE的參考值類似或相同時(shí)，指示診斷出或預(yù)測(cè)罹患癌癥和/或包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE階段在內(nèi)的CIAE，或者罹患此種疾病的趨向或傾向增加、具有出現(xiàn)癌癥和/或包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、CIN/CIPN和/或CICAE階段的CIAE的體征和癥狀的高風(fēng)險(xiǎn)。[0114]選擇性地檢測(cè)編碼NCS-1的基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和/或翻譯產(chǎn)物的試劑可為各種長(zhǎng)度的基因序列、基因序列片段、抗體、核酸適配體、siRNA、microRNA和核糖酶。此類試劑也可用來(lái)檢測(cè)它們的片段、衍生物或變體。
[0115]本發(fā)明的這些和其他方面進(jìn)一步描述于以下非限制性實(shí)施例中。
[0116]實(shí)施例1
[0117]用于預(yù)防化療誘導(dǎo)的多發(fā)性神經(jīng)病變的藥物療法(重新定位AV411 (異丁司特))
[0118]我們報(bào)道了紫杉醇結(jié)合至一種在許多細(xì)胞類型中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)即神經(jīng)元鈣感受器I (NCS-1)，從而增強(qiáng)這些細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)鈣(Ca+2)信號(hào)的能力。B.Ehrlich, Chronicexposure to paclitaxel diminishes phosphoinositide signaling bycaIpain-mediated neuronal calcium sensor—ldegradation，PNAS， June26，2007，vol.104，n0.26，pplll03_11108。先前人們認(rèn)為紫杉醇的唯一影響是穩(wěn)定細(xì)胞的結(jié)構(gòu)部件微管。我們的新發(fā)現(xiàn)提供了解釋紫杉醇誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病變的分子途徑及預(yù)防外周神經(jīng)元受到損害的潛在機(jī)制。
[0119]許多化療藥物，都能增強(qiáng)Ca+2信號(hào)，其導(dǎo)致神經(jīng)元的過(guò)度激活以及酶的激活致使神經(jīng)元發(fā)生病理變化。我們的假設(shè)是干擾這些病理級(jí)聯(lián)將會(huì)避免與化療治療相關(guān)的負(fù)面副作用，如外周神經(jīng)病變。本工作表征并優(yōu)化了在藥物暴露期間保護(hù)分離的細(xì)胞的能力，從而創(chuàng)建用于評(píng)價(jià)潛在神經(jīng)毒性較小并且展現(xiàn)出在化療治療后保護(hù)完整動(dòng)物中的外周神經(jīng)的能力的藥物類似物的測(cè)試。
[0120]我們先前的研究(同前)顯示了紫杉醇、NCS-1和1，4，5-三磷酸肌醇受體(InsP3R)之間的功能性相互作用。我們還發(fā)現(xiàn)，紫杉醇的加入激活了導(dǎo)致NCS-1降解的酶，即鈣蛋白酶。我們能夠通過(guò)抑制鈣蛋白酶預(yù)防NCS-1降解。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果鑒定出一個(gè)(多個(gè))用于保護(hù)細(xì)胞中的NCS-1水平的最 佳途徑。我們測(cè)試了許多種具有保護(hù)NCS-1水平的潛力的化合物。
[0121]首先，我們使用紫杉醇類似物確定是否這個(gè)類別中的所有化合物都將會(huì)使NCS-1降解。其次，測(cè)試并優(yōu)化了已知抑制我們已發(fā)表工作中所鑒定的途徑的化合物，諸如鈣蛋白酶抑制劑。第三，測(cè)試了其他潛在的治療化合物，諸如模擬NCS-1的敏感部分使得鈣蛋白酶的活性可轉(zhuǎn)向至不同靶標(biāo)的化合物。來(lái)自這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果指導(dǎo)體內(nèi)測(cè)試。
[0122]更具體地，AV411 (異丁司特)是在數(shù)個(gè)亞洲國(guó)家中用于治療支氣管哮喘、腦血管病癥、中風(fēng)后眩暈和眼部過(guò)敏的藥物。根據(jù)PNAS，2007年6月26日，第104卷，第26期，第11103-11108頁(yè)(同上)的材料和方法部分，給大鼠共施用紫杉醇和AV411，并進(jìn)行以下觀察。
[0123]如圖1A中所示，AV411 (異丁司特)對(duì)紫杉醇所致的NCS-1降解具有保護(hù)作用。蛋白質(zhì)印跡分析揭示紫杉醇處理(800ng/mL, 6小時(shí))降低了 NCS-1水平(條2 )。單獨(dú)IuM AV411的加入沒(méi)有顯著降低NCS-1水平(條3)。AV411與紫杉醇的組合顯示部分地對(duì)抗了紫杉醇誘導(dǎo)的NCS-1水平降低(條4)。所示數(shù)據(jù)為三次實(shí)驗(yàn)的平均值。
[0124]此外，如圖2A所示，我們觀察到IuM AV411保護(hù)了細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)。為了誘導(dǎo)Ca2+從細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)庫(kù)瞬時(shí)釋放而用IuM ATP(在第一箭頭處)刺激的SHSY-5Y細(xì)胞的代表性Ca2+響應(yīng)。在200秒后，加入毒胡蘿卜素(TG，細(xì)胞內(nèi)Ca2+泵的抑制劑)以指示細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)庫(kù)已被填充并且細(xì)胞能存活(第二箭頭)。用800ng/mL Taxol處理6小時(shí)的細(xì)胞(藍(lán)色跡線)具有幅度比未經(jīng)處理的細(xì)胞(黑色跡線)小的響應(yīng)。在taxol處理期間向細(xì)胞中加入的IuM AV411預(yù)防了信號(hào)傳導(dǎo)的降低(紫色跡線)。每條線均代表至少45個(gè)細(xì)胞(在三個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)中測(cè)量的至少15個(gè)細(xì)胞)的平均值。
[0125]實(shí)施例2
[0126]用于預(yù)防化療誘導(dǎo)的多發(fā)性神經(jīng)病變的藥物療法(重新定位Li鹽和其他藥劑)
[0127]在本實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)所有三種類別的治療雙相型障礙疾病的藥物(碳酸鋰、丙戊酸和氯丙嗪)都預(yù)防神經(jīng)元鈣感受器I (NCS-1)結(jié)合至1，4，5-三磷酸肌醇受體(InsP3R)。根據(jù)我們獲得的有關(guān)碳酸鋰、丙戊酸和氯丙嗪的觀察結(jié)果，我們相信這些類別中還有其他藥物具有預(yù)防諸如但不限于硼替佐米(bortezomib)和來(lái)那度胺(carfilzomib)的化療誘導(dǎo)的多發(fā)性神經(jīng)病變的期望效果。
[0128]還確定了紫杉醇-LiCl和紫杉醇-AV411聯(lián)合施用對(duì)微管組裝的相對(duì)影響。另外，我們通過(guò)色氨酸熒光證實(shí)紫杉醇結(jié)合至NCS-1 (圖9)。NMR證實(shí)AV411 (異丁司特)結(jié)合至NCS-1 (圖 10)。
[0129]這些雙相型障礙藥物僅預(yù)防InsP3R的NCS-1依賴性活性。這種NCS-1依賴性活性是外周神經(jīng)病變的產(chǎn)生的早期步驟。通過(guò)在癌癥治療中增加雙相型障礙藥物，可以預(yù)防某些化療(輔助治療和/或聯(lián)合施用和/或制劑等)的神經(jīng)副作用。
[0130]根據(jù)PNAS，2007年6月26日，第104卷，第26期，第11103-11108頁(yè)(同上)的材料和方法部分，給小鼠聯(lián)合施用紫杉醇和碳酸鋰、丙戊酸、氯丙嗪以及在一些情況下AV411，并得到了以下觀察結(jié)果。
[0131]如圖1B中所示，在用Taxol處理6小時(shí)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SHSY-5Y)中存在NCS-1降解(將第一條和第二條相比較)。發(fā)現(xiàn)在存在5001^和5.0禮氯化鋰(LiCl)的情況下NCS-1水平受到保護(hù)而免受Taxol誘導(dǎo)的NCS-1降解的影響(將單獨(dú)Taxol情況下的條2與顯示經(jīng)Taxol和LiCl處理 的條4和6進(jìn)行比較)。單獨(dú)LiCl處理沒(méi)有降低NCS-1水平(將不存在LiCl情況下的條I與單獨(dú)LiCl情況下的條3和5進(jìn)行比較)。這些數(shù)據(jù)表明在存在Taxol處理的情況下LiCl的加入使得細(xì)胞能夠維持NCS-1水平。
[0132]還發(fā)現(xiàn)，在完整細(xì)胞中監(jiān)控的細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)因用Taxol處理6小時(shí)而降低(圖2B和3B ;將這兩個(gè)圖中的對(duì)照處理(黑色跡線)與Taxol處理(藍(lán)色跡線)進(jìn)行比較)。在存在Taxol的情況下用500uM (圖2B，栗色跡線)或5.0mM LiCl (圖3，棕色跡線)處理的細(xì)胞對(duì)Ca2+信號(hào)刺激的響應(yīng)與未經(jīng)處理的細(xì)胞的類似。單獨(dú)LiCl處理降低細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，但是沒(méi)有達(dá)到在Taxol處理情況下觀察到的程度(圖2B粉色跡線和圖3B紅色跡線)。這些數(shù)據(jù)表明在存在Taxol處理的情況下LiCl的加入保護(hù)了細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)及NCS-1水平(圖2B和3B)。
[0133]我們發(fā)現(xiàn)，在不存在LiCl的情況下，NCS-1與InsP3R的結(jié)合增強(qiáng)了細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)。僅僅加入這種雙相型障礙藥物便預(yù)防了 InsP3R的NCS-1依賴性成分。我們相信，這種NCS-1依賴性活性是導(dǎo)致產(chǎn)生外周神經(jīng)病變的級(jí)聯(lián)中的早期步驟。列入此文的結(jié)果表明在長(zhǎng)時(shí)間暴露于Taxol的情況下LiCl的加入保護(hù)了細(xì)胞中的NCS-1水平和細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)。這種維持NCS-1水平和NCS-1依賴性信號(hào)傳導(dǎo)的能力將預(yù)防Taxol誘導(dǎo)的對(duì)神經(jīng)的損害。通過(guò)在現(xiàn)有癌癥治療中增加這種已用于治療雙相型障礙的藥物，我們相信外周神經(jīng)病變可被抑制或者甚至可被預(yù)防。
[0134]圖4B還證實(shí)，在存在Taxol處理的情況下LiCl的加入不僅使得細(xì)胞能夠維持NCS-1水平，它還使得啟動(dòng)聯(lián)合治療后腫瘤體積在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)統(tǒng)計(jì)顯著性地減小。
[0135]進(jìn)一步地，圖1的數(shù)據(jù)提供了鋰保護(hù)小鼠免于發(fā)生神經(jīng)病變(如小鼠在轉(zhuǎn)棒上的時(shí)間增加所指示的)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證據(jù)。(10小鼠/組；每次ip注射紫杉醇4.5mg/kg，注射4次，在紫杉醇前I小時(shí)ip注射鋰鹽12.8mg/kg)。圖2證明了鋰鹽保護(hù)小鼠免受紫杉醇誘導(dǎo)的損害(從未接受L1-聯(lián)合治療的紫杉醇處理小鼠獲取的樣本中存在明顯的髓鞘損害增大結(jié)構(gòu))。還注意到，如圖4中所示，低劑量紫杉醇增加了鈣蛋白酶活性。發(fā)現(xiàn)鋰鹽處理預(yù)防了鈣蛋白酶的激活。
[0136]圖5中所示的結(jié)果表明紫杉醇加速了微管組裝，而鋰和異丁司特都沒(méi)有改變微管組裝。
[0137]高劑量紫杉醇被證明是有毒的，如圖6中所示。然而，鋰鹽保護(hù)了小鼠免受毒性影響。(10小鼠/組；每次ip注射紫杉醇30mg/kg或60mg/kg,注射4次,在紫杉醇前I小時(shí)ip注射鋰鹽12.8mg/kg)。與Li和天然鈣蛋白酶拮抗劑鈣蛋白酶抑素的組合處理也保護(hù)了鈣信號(hào)傳導(dǎo)，如圖7和8中所不出的。
[0138]有趣地，發(fā)現(xiàn)低劑量紫杉醇減少了鈣釋放，而鋰鹽處理預(yù)防了鈣釋放的喪失(圖11)。進(jìn)一步地，低劑量紫杉醇降低了外周神經(jīng)中的NCS-1水平，但沒(méi)有降低腦中的NCS-1水平(因?yàn)閠axol沒(méi)有穿過(guò)血腦屏障)。相比之下，用鋰鹽維持了 NCS-1表達(dá)(圖12)。圖13中所示數(shù)據(jù)證實(shí)異丁司特保護(hù)小鼠免于發(fā)生神經(jīng)病變(5只小鼠/組；每次ip注射紫杉醇
4.5mg/kg,注射4次,在紫杉醇前I小時(shí)ip注射異丁司特10mg/kg)。
[0139]實(shí)施例3
[0140]人乳腺組織中NCS-1的表達(dá)
[0141]我們使用用于評(píng) 估組織切片中的生物標(biāo)記表達(dá)的自動(dòng)化評(píng)分系統(tǒng)(稱為自動(dòng)化定量分析(AQUA)系統(tǒng))(JNCI J Natl Cancer Inst(2005 ^ !2 月 21 0)97(24):1808-1815,也參見(jiàn)Camp，等人，Nat Med2002; 8:1323-7)評(píng)價(jià)人乳房組織中的NCS-1表達(dá)。AQUA系統(tǒng)連接至熒光顯微鏡系統(tǒng)，該熒光顯微鏡系統(tǒng)通過(guò)測(cè)量每個(gè)組織微陣列樣點(diǎn)的腫瘤區(qū)域內(nèi)的指定亞細(xì)胞區(qū)室(通常包括細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜)內(nèi)的抗體綴合的熒光團(tuán)強(qiáng)度來(lái)檢測(cè)生物標(biāo)記蛋白的表達(dá)。結(jié)果是腫瘤的免疫熒光強(qiáng)度的定量評(píng)分。AQUA分析方法的使用消除了傳統(tǒng)評(píng)分系統(tǒng)的主觀性，并且為組織樣本中的蛋白表達(dá)評(píng)分提供了更連續(xù)的可再現(xiàn)評(píng)分。同
N /.刖。
[0142]如圖4中所示，發(fā)現(xiàn)NCS-1表達(dá)根據(jù)乳腺組織樣本而不同。該數(shù)據(jù)是使用以下實(shí)驗(yàn)方案獲得的。為了檢測(cè)在人乳房組織中的表達(dá)，發(fā)明人使用可商購(gòu)獲得的含大約120個(gè)乳腺癌腫瘤樣本的玻片(Yale Breast Cancer Cohort YTMA-184)。
[0143]實(shí)施例4
[0144]乳腺癌異種移植實(shí)驗(yàn)
[0145]綜述
[0146]系列I:
[0147]用于i正明保護(hù)劑藥物沒(méi)有改變化療藥物的功效的獨(dú)立研究
[0148]組:紫杉醇的溶媒
[0149]紫杉醇
[0150]紫杉醇加鋰[0151]鋰
[0152]每組10只小鼠(4組)，為了監(jiān)控腫瘤生長(zhǎng)，收獲神經(jīng)組織用于病理學(xué)和生物化學(xué)分析。
[0153]制備一種或多種如Richmond,等人,Mousexenograft models vs GEM models forhuman cancer therapeutics, Dis Model Mech.2008Sep_0ct; I (2-3): 78-82 中所描述的鼠類模型。如Richmond，等人所解釋的，“[這]些模型用于調(diào)查惡性轉(zhuǎn)化、侵襲和轉(zhuǎn)移中所涉及到的因子以及用于檢查對(duì)治療的反應(yīng)”。最廣泛使用的模型之一是人腫瘤異種移植。在這種模型中，人腫瘤細(xì)胞在腫瘤起源的皮膚下或腫瘤起源的器官類型內(nèi)移植到不排斥人細(xì)胞的免疫受損小鼠中。例如，異種移植將容易被無(wú)胸腺裸小鼠、嚴(yán)重受損的免疫缺陷(SCID)小鼠，或其他免疫受損小鼠所接受(Morton和Houghton，2007)。根據(jù)注射的細(xì)胞數(shù)量或移植的腫瘤尺寸，腫瘤將經(jīng)1-8周(或者在一些情況下，1-4個(gè)月或更長(zhǎng))形成，并且可在體內(nèi)研究對(duì)適當(dāng)?shù)闹委煼桨傅姆磻?yīng)。
[0154]根據(jù)上面的方案，將肺癌細(xì)胞系(H1975)注射到裸小鼠中；在兩周后，腫瘤已大到可以測(cè)量的程度。用于上面鼠類模型的示例性劑量包括每周注射I次25mg/kg taxol (2X)，在紫杉醇注射前I小時(shí)注射鋰鹽(12.8mg/kg)。使用如實(shí)施例1-3中所描述的技術(shù)評(píng)價(jià)對(duì)細(xì)胞中NCS-1水平和細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)的保護(hù)。
實(shí)施例
[0155]心血管影響
[0156]Taxol 導(dǎo)致心律失常。Zhang,等人，Journal of molecular and cellularcardiology49，829-835 (2010)指出NCS-1在心肌細(xì)胞中增加，并且這導(dǎo)致鈣信號(hào)傳導(dǎo)增加。圖5B的底部三個(gè)圖中所示的最新數(shù)據(jù)是由對(duì)注射了 taxol的小鼠進(jìn)行的超聲心動(dòng)圖匯編的信息。這些小鼠與用來(lái)進(jìn)行異種移植研究(在該圖的頂部示出)的小鼠相同。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在taxol注射后I小時(shí)舒 張末期直徑和縮短分?jǐn)?shù)發(fā)生改變。這些都是對(duì)收縮性的測(cè)量，鋰鹽預(yù)處理逆轉(zhuǎn)了收縮性。具體地且意外地，鋰鹽預(yù)處理使得該值回到對(duì)照水平。心率沒(méi)有改變。應(yīng)發(fā)明人的請(qǐng)求執(zhí)行實(shí)驗(yàn)的心臟病學(xué)家感到印象非常深刻并且考慮在人患者中進(jìn)行研究。文獻(xiàn)中有研究表明化療誘導(dǎo)的收縮性的劇烈變化可發(fā)展成為長(zhǎng)期心臟節(jié)律問(wèn)題。
【權(quán)利要求】
1.一種治療方法，其包括通過(guò)向所述受試者聯(lián)合施用藥學(xué)有效量的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)抑制或預(yù)防用可能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療的患者中的化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(CIAE)的發(fā)作，或者改善用可能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分治療的患者中的化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(CIAE)的一個(gè)或多個(gè)癥狀，其中所述化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、神經(jīng)病變、外周神經(jīng)病變、心律失常、心臟功能障礙、心血管鈣信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)和/或減弱及自發(fā)性鈣振蕩增強(qiáng)、認(rèn)知功能減退/認(rèn)知功能衰退的中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響以及由髓鞘退化引起的不良反應(yīng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿、放射增敏劑或其混合物，并且所述NCS-1-保護(hù)性組合物選自由以下組成的組:AV411 (異丁司特)、AV411 (異丁司特)類似物、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪、鈣蛋白酶抑制劑及其混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中: (a)所述紫杉烷選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、IDN5390.GRN1005 及其混合物； (b)所述長(zhǎng)春花生物堿選自由以下組成的組:長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱及其混合物； (c)所述放射增敏劑選自由以下組成的組:尼莫拉唑、甲硝唑、米索硝唑及其混合物；并且 (d)所述鈣蛋白酶抑制劑選自由以下組成的組:鈣蛋白酶抑素、AK275、鈣蛋白酶抑制劑1、鈣蛋白酶抑制劑I1、鈣蛋白酶抑制劑II1、鈣蛋白酶抑制劑IV、鈣蛋白酶抑制劑V、鈣蛋白酶抑制劑XI和鈣蛋白酶抑制劑XII。`
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中向所述患者聯(lián)合施用多于一種類型的NCS-1-保護(hù)性組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中向所述患者聯(lián)合施用多于一種類型的誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分和NCS-1-保護(hù)性組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4，或5所述的方法，其中在所述誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分施用之前約一個(gè)半小時(shí)至約八小時(shí)向所述患者施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、長(zhǎng)春新堿、甲硝唑及其混合物，并且所述NCS-1-保護(hù)性組合物選自由以下組成的組:鈣蛋白酶抑制劑、AV411 (異丁司特)、鋰鹽、丙戊酸、鈣蛋白酶抑素和氯丙嗪。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中在所述誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述患者施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中在所述誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)向所述受試者施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
10.一種治療罹患癌癥并且需要施用誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分進(jìn)行治療的患者的方法，所述方法包括通過(guò)在施用所述誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述患者施用NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)提高所述患者對(duì)所述誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分的耐受性。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿、放射增敏劑及其混合物，并且所述NCS-1-保護(hù)性組合物選自由以下組成的組:AV411 (異丁司特)、AV411 (異丁司特)類似物、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪、鈣蛋白酶抑制劑及其混合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中: (a)所述紫杉烷選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、IDN5390.GRN1005 及其混合物； (b)所述長(zhǎng)春花生物堿選自由以下組成的組:長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱及其混合物； (c)所述放射增敏劑選自由以下組成的組:尼莫拉唑、甲硝唑、米索硝唑及其混合物；并且 (d)所述鈣蛋白酶抑制劑選自由以下組成的組:鈣蛋白酶抑素、AK275、鈣蛋白酶抑制劑1、鈣蛋白酶抑制劑I1、鈣蛋白酶抑制劑II1、鈣蛋白酶抑制劑IV、鈣蛋白酶抑制劑V、鈣蛋白酶抑制劑XI和鈣蛋白酶抑制劑XII。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中向所述受試者共施用多于一種類型的NCS-1-保護(hù)性組合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中共施用多于一種類型的CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分和NCS-1-保護(hù)性組合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求10、11、12、13，或14所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、長(zhǎng)春新堿、甲硝唑及其混合物，并且所述NCS-1-保護(hù)性組合物選自由以下組成的組:鈣蛋白酶抑制劑、AV411 (異丁司特)、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪及其混合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)向所述受試者施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
18.一種治療罹患與腫瘤表達(dá)相關(guān)的癌癥并且需要施用至少一種誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分進(jìn)行治療的患者的方法，所述方法包括通過(guò)在所述的一種(多種)能誘導(dǎo)CIAE的抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述患者聯(lián)合施用NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)使所述受試者中的 腫瘤體積縮減達(dá)到大于通過(guò)誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分治療實(shí)現(xiàn)的腫瘤體積縮減的程度。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中通過(guò)共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物使得當(dāng)與在相當(dāng)?shù)闹委熎趦?nèi)在CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分單藥治療中觀察到的腫瘤體積相比較時(shí)腫瘤體積縮減至少約20%,或19%,或18%,或17%,或16%,或15%,或14%,或13%,或12%,或11%，或10%,或 9%,或 8%,或 7%,或 6%,或 5%,或 4%,或 3%,或 2%,或 1%，或 0.5%,或 0.1%，或 0.05%,或 0.01%。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分選自由以下組成的組:紫杉烷、鉬化合物、長(zhǎng)春花生物堿、沙利度胺、硼替佐米(Velcade?)和來(lái)那度胺，并且所述NCS-1-保護(hù)性組合物選自由以下組成的組:AV411 (異丁司特)、AV411 (異丁司特)類似物、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪、鈣蛋白酶抑制劑及其混合物。
21.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中: (a)所述紫杉烷選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、IDN5390.GRN1005 及其混合物； (b)所述長(zhǎng)春花生物堿選自由以下組成的組:長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱及其混合物； (c)所述放射增敏劑選自由以下組成的組:尼莫拉唑、甲硝唑、米索硝唑及其混合物；并且 (d)所述鈣蛋白酶抑制劑選自由以下組成的組:鈣蛋白酶抑素、AK275、鈣蛋白酶抑制劑1、鈣蛋白酶抑制劑I1、鈣蛋白酶抑制劑II1、鈣蛋白酶抑制劑IV、鈣蛋白酶抑制劑V、鈣蛋白酶抑制劑XI和鈣蛋白酶抑制劑XII。
22.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中向所述受試者共施用多于一種類型的NCS-1-保護(hù)性組合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中共施用多于一種類型的CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分和NCS-1-保護(hù)性組合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求18或 19所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
26.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
27.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
29.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中在所述CIAE誘導(dǎo)抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
30.一種治療方法，其包括通過(guò)向所述患者聯(lián)合施用藥學(xué)有效量的選自由AV411 (異丁司特)、鋰鹽、丙戊酸、鈣蛋白酶抑制劑、氯丙嗪或其混合物組成的組的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)降低罹患乳腺癌、卵巢癌、肺癌或前列腺癌并且正在用選自由紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿、放射增敏劑或其混合物組成的組的誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分進(jìn)行治療的患者中的化療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(CIAE),包括外周神經(jīng)病變和/或心血管不良反應(yīng)。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中在所述誘導(dǎo)CIAE抗癌活性成分施用之前約一小時(shí)至約四小時(shí)向所述受試者共施用所述NCS-1-保護(hù)性組合物。
32.一種判定罹患癌癥并且為用抗癌活性成分治療的候選者的受試者將因?yàn)榇朔N治療而顯現(xiàn)CIAE癥狀的可能性的方法，所述方法包括在施用所述抗癌活性成分之前測(cè)定患者癌細(xì)胞中的NCS-1水平,將所述患者癌細(xì)胞與所述抗癌活性成分接觸并在此后測(cè)量患者癌細(xì)胞NCS-1水平，其中患者癌細(xì)胞中NCS-1水平的降低指示所述受試者在用所述抗癌活性成分治療后顯現(xiàn)CIAE癥狀的可能性增加。
33. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述方法可在體外、體內(nèi)或在硅片上進(jìn)行。
34.一種判定罹患癌癥并且為用抗癌活性成分治療的候選者的受試者將因?yàn)榇朔N治療而顯現(xiàn)變化的CIAE癥狀的可能性的方法，所述方法包括在施用所述抗癌活性成分之前測(cè)定患者癌細(xì)胞中的NCS-1水平，將測(cè)定的NCS-1水平同與良性InsP3R依賴性Ca2+釋放值相關(guān)的對(duì)照NCS-1水平進(jìn)行比較，其中測(cè)定的NCS-1水平超過(guò)或低于對(duì)照NCS-1水平指示所述受試者在用所述抗癌活性成分治療后將顯現(xiàn)變化的CIAE癥狀。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述方法可在體外、體內(nèi)或在硅片上進(jìn)行。
36.一種藥物組合物，其包含: (a)藥學(xué)有效量的一種或多種選自由以下組成的組的抗癌活性成分:至少一種紫杉烷、至少一種長(zhǎng)春花生物堿、至少一種放射增敏劑或其混合物； (b)一種或多種選自由以下組成的組的NCS-1-保護(hù)性組合物:AV411 (異丁司特)、AV411 (異丁司特)類似物、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪、鈣蛋白酶抑制劑及其混合物；以及任選地 (c)藥學(xué)上可接受的載體、添加劑或賦形劑。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的藥物組合物，其中: (a)所述紫杉烷選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、IDN5390.GRN1005 及其混合物； (b)所述長(zhǎng)春花生物堿選自由以下組成的組:長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱及其混合物； (c)所述放射增敏劑選自由以下組成的組:尼莫拉唑、甲硝唑、米索硝唑及其混合物；并且 (d)所述鈣蛋白酶抑制劑選自由以下組成的組:鈣蛋白酶抑素、AK275、鈣蛋白酶抑制劑1、鈣蛋白酶抑制劑I1、鈣蛋白酶抑制劑II1、鈣蛋白酶抑制劑IV、鈣蛋白酶抑制劑V、鈣蛋白酶抑制劑X1、鈣蛋白酶抑制劑XII及其混合物。
38.一種篩選可用于癌癥治療的組合物的方法，所述方法包括: (a)使癌細(xì)胞群體的第一樣本與所述候選組合物接觸； (b)測(cè)定所述候選組合物對(duì)NCS-1的結(jié)合親和力值或所述候選組合物使InsP3R依賴性Ca2+釋放的NCS-1激活上調(diào)的程度值；以及 (c)將結(jié)合親和力值或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與基于以下的對(duì)照值進(jìn)行比較:(I)在癌細(xì)胞群體的第二樣本中紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、長(zhǎng)春新堿或甲硝唑的結(jié)合親和力，和/或(2)從未經(jīng)處理的癌細(xì)胞群體的第二樣本中確知的InsP3R依賴性Ca2+釋放值，其中如果所述候選組合物的結(jié)合親和力測(cè)定值小于所述相當(dāng)?shù)膶?duì)照值，或者如果所述候選組合物的InsP3R依賴性Ca2+釋放值約等于或小于所述相當(dāng)?shù)膶?duì)照值，則將所述候選組合物鑒定為潛在有用的抗癌組合物。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中如果測(cè)定的結(jié)合親和力或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與對(duì)照值相差不大于約20%，或19%，或18%，或17%,或16%，或15%，或14%，或13%，或.12%，或 11%，或 10%，或 9%，或 8%，或 7%，或 6%，或 5%，或 4%，或 3%，或 2%，或 1%，或 0.5%，或.0.1%，或0.05%,或0.01%,則認(rèn)為所述測(cè)定值約等于或小于所述對(duì)照值。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中如果測(cè)定的結(jié)合親和力或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與對(duì)照值相差不大于約20%，或19%，或18%，或17%,或16%，或15%，或14%，或13%，或12%，或 11%，或 10%，或 9%，或 8%，或 7%，或 6%，或 5%，或 4%，或 3%，或 2%，或 1%，或 0.5%，或.0.1%，或0.05%,或0.01%,則認(rèn)為所述測(cè)定值約等于或小于所述對(duì)照值。
41.一種判定罹患癌癥的患者是否為使得所述患者有可能對(duì)其作出有利或不利反應(yīng)的紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏抗癌劑治療的候選者的方法，所述方法包括在抗癌治療前從患者獲取的一個(gè)(多個(gè))樣本(尤其包括來(lái)自癌癥組織的癌細(xì)胞的樣本)中測(cè)定治療前的NCS-1水平和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值，將從所述患者獲取的所述一個(gè)(多個(gè))樣本中的NCS-1水平或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與從已成功地用紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏劑抗癌劑治療的患者獲取的一個(gè)(多個(gè))樣本中的對(duì)照NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平進(jìn)行比較，以及如果所述患者中的NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平與所述對(duì)照NCS-1和/或InsP3R依賴性Ca2+釋放值水平相比有利或不利，則判定所述患者是使用紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿和/或放射增敏抗癌劑的抗癌治療的候選者。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述紫杉烷選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、IDN5390、GRN1005及其混合物；所述長(zhǎng)春花生物堿選自由以下組成的組: 長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱及其混合物；并且所述放射增敏劑選自由以下組成的組:尼莫拉唑、甲硝唑、米索硝唑及其混合物。
43.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述紫杉烷為紫杉醇、多西他賽及其混合物。
44.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述長(zhǎng)春花生物堿為長(zhǎng)春新堿。
45.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述放射增敏劑為甲硝唑。
46.根據(jù)權(quán)利要求所述的方法，其中所述紫杉烷為紫杉醇、多西他賽或其混合物，所述長(zhǎng)春花生物堿為長(zhǎng)春新堿，并且所述放射增敏劑為甲硝唑。
47.一種試劑盒，其包括: (a)至少一種選自由以下組成的組的試劑:(i)檢測(cè)編碼如本文所描述的NCS-1蛋白標(biāo)記的基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的試劑、(ii)檢測(cè)編碼NCS-1蛋白的基因的翻譯產(chǎn)物的試劑，和/或檢測(cè)所述轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物的片段或衍生物或變體的試劑； (b)關(guān)于以下方面的說(shuō)明書(shū):診斷或預(yù)測(cè)CIAE，或者確定受試者出現(xiàn)CIAE的趨向或傾向，或者監(jiān)控CIAE治療效果。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的試劑盒，其中所述試劑包括NCS-1特異性抗體，所述抗體任選地綴合至報(bào)告子。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中所述報(bào)告子為熒光團(tuán)。
50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括結(jié)合至所述NCS-1特異性抗體的報(bào)告子連接的抗體。
51.根據(jù)權(quán)利要求49所述的試劑盒，其中所述報(bào)告子連接的抗體為熒光團(tuán)綴合的抗體。
52.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括NCS-1結(jié)合抗體，所述抗體連接至將熒光發(fā)色團(tuán)激活成用于檢測(cè)的熒光染料的酶。
53.根據(jù)權(quán)利要求47所述的試劑盒，其中所述CIAE為CIPN。
54.根據(jù)權(quán)利要求47所述的試劑盒，其中所述CIAE為CICAE。
55.一種治療方法，其包括通過(guò)向所述患者聯(lián)合施用藥學(xué)有效量的NCS-1-保護(hù)性組合物來(lái)抑制或預(yù)防患者中的由向所述患者施用至少一種導(dǎo)致NCS-1或NCS-1活性的改變(包括翻譯后修飾)的治療劑引起的治療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(TIAE)的發(fā)作,或者改善患者中的由向所述患者施用至少一種導(dǎo)致NCS-1或NCS-1活性的變化(包括翻譯后修飾)的治療劑引起的治療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)(TIAE)的一個(gè)或多個(gè)癥狀，其中所述治療誘導(dǎo)的不良反應(yīng)包括鈣信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)、神經(jīng)病變、外周神經(jīng)病變、心律失常、心臟功能障礙、心血管鈣信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)和/或減弱及自發(fā)性鈣振蕩增強(qiáng)、認(rèn)知功能減退/認(rèn)知功能衰退的中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響以及由髓鞘降解引起的不良反應(yīng)。
56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述藥劑是至少一種選自由以下組成的組的抗癌劑:紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿、放射增敏劑或其混合物。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其中所述藥劑不同于抗癌劑。
58.一種篩選可用于與NCS-1保護(hù)劑組合治療的候選化合物的方法，所述方法包括: (a)測(cè)定候選化合物對(duì)NCS-1的結(jié)合親和力值或所述候選化合物使InsP3R依賴性Ca2+釋放的NCS-1激活上調(diào)的程度值；以及 (b)將所述候選化合物的結(jié)合親和力值或InsP3R依賴性Ca2+釋放值與基于以下的對(duì)照值進(jìn)行比較:(I)從第二樣本中確知的紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿或放射增敏劑的結(jié)合親和力和/或(2)從第二樣本中確 知的紫杉烷、長(zhǎng)春花生物堿或放射增敏劑的InsP3R依賴性Ca2+釋放值，其中如果所述候選化合物的結(jié)合親和力測(cè)定值約等于或大于所述相當(dāng)?shù)膶?duì)照值或者如果所述候選化合物的InsP3R依賴性Ca2+釋放值約等于或大于所述相當(dāng)?shù)膶?duì)照值，則將所述候選化合物鑒定為用于與NCS-1保護(hù)劑共施用的潛在有用的治療化合物。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中所述紫杉烷選自由以下組成的組:紫杉醇(Taxol?)、多西他賽(Taxoterel?)、IDN5390或GRN1005 ;所述長(zhǎng)春花生物堿選自由以下組成的組:長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛或長(zhǎng)春瑞濱；并且所述放射增敏劑選自由以下組成的組:尼莫拉唑、甲硝唑或米索硝唑。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中所述紫杉烷為紫杉醇或多西他賽，所述長(zhǎng)春花生物堿為長(zhǎng)春新堿，并且所述放射增敏劑為甲硝唑。
61.根據(jù)權(quán)利要求58-60中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述NCS-1保護(hù)劑選自由以下組成的組:AV411 (異丁司特)、AV411 (異丁司特)類似物、鋰鹽、丙戊酸、氯丙嗪、鈣蛋白酶抑制劑及其混合物。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103635187SQ201280031543
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2012年4月27日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月27日
【發(fā)明者】芭芭拉·艾利希, 薩拉·羅克威爾, 詹尼弗·本博 申請(qǐng)人:耶魯大學(xué)