作為改善非抗凝血的硫酸多糖的口服制劑的添加劑的吸收促進(jìn)劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的方面包括用于增強(qiáng)受試者的血液凝固的方法。在實(shí)施根據(jù)某些實(shí)施方式的方法中，以足以增強(qiáng)受試者的血液凝固的方式，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑將一定量的非抗凝血的硫酸多糖(NASP)經(jīng)口施用至受試者。還描述了用于實(shí)施本發(fā)明的方法的組合物和試劑盒。
【專利說明】作為改善非抗凝血的硫酸多糖的口服制劑的添加劑的吸收促進(jìn)劑
[0001]相關(guān)申請的交叉參考
[0002]依據(jù)35U.S.C.§ 119(e)，本申請要求于2011年7月19日提交的美國臨時(shí)申請序列號61/509，514的優(yōu)先權(quán)，將其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合于此。
[0003]引言
[0004]出血是疾病的最嚴(yán)重且顯著的現(xiàn)象之一，并且可以從局部部位出現(xiàn)或是全身的。局部出血可能與病變相關(guān)并且可能還通過缺乏止血機(jī)制并發(fā)。血液凝結(jié)在出血障礙中是不足夠的，其可能由先天凝血障礙、后天凝血障礙或由創(chuàng)傷誘發(fā)的出血性病癥引起。任何凝血因子的先天或后天缺乏可能與出血性趨勢相關(guān)。一些先天凝血障礙包括血友病、涉及缺乏凝血因子VIII (血友病A)或因子IX (血友病B)的隱性X-連鎖障礙和馮維勒布蘭德病(馮維勒布蘭德病)、涉及嚴(yán)重缺乏馮維勒布蘭德因子的出血障礙。后天凝血障礙可能作為疾病過程的結(jié)果而出現(xiàn)在沒有先前出血史的個(gè)體。例如，后天凝血障礙可能由針對凝血因子如因子VII1、馮維勒布蘭德因子、因子IX、V、X1、XII和XIII的抑制劑或自身免疫性引起；或由止血障礙引起，如由肝病 引起，其可能與降低的凝血因子合成相關(guān)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的方面包括用于增強(qiáng)受試者的血液凝固的方法。在實(shí)施根據(jù)某些實(shí)施方式的方法中，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，以足以增強(qiáng)受試者的血液凝固的方式向受試者經(jīng)口施用一定量的非抗凝血的硫酸多糖(NASP)。還描述了用于實(shí)施本發(fā)明的方法的組合物和試劑盒。
[0006]在本發(fā)明的實(shí)施方式中，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，以足以增強(qiáng)受試者的血液凝固的方式向受試者經(jīng)口施用一定量的NASP。在某些實(shí)施方式中，胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是緊密連接調(diào)節(jié)劑。例如，由本發(fā)明提供的緊密連接調(diào)節(jié)劑可以包括，但不限于蛋白酶、膽酸、多糖、脂肪酸及其鹽及其任意組。例如，緊密連接調(diào)節(jié)劑可以是膽酸，如例如脫氧膽酸鹽。在其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑可以是蛋白酶，如菠蘿蛋白酶或菠蘿蛋白酶的酶組分。在另外的其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑可以是多糖，如脫乙酰殼多糖。在仍然的其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑可以是脂肪酸或脂肪酸鹽，如癸酸鈉。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是緊密連接調(diào)節(jié)劑的組合。例如，在某些情況下，菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖的組合物與NASP以足以增強(qiáng)受試者的血液凝固的方式經(jīng)口施用至受試者。
[0007]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種用于增強(qiáng)血液凝固的方法，其通過聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑將具有一定量的NASP的組合物施用至受試者，其中NASP天然NASP。在一些情況下，天然NASP是N-乙酰基-肝素(NAH)、N-乙酰基-脫-O-硫酸化-肝素(NA-脫-O-SH)、脫-N-硫酸化-肝素(De-NSH)、脫-N-硫酸化-乙酰化-肝素(De-NSAH)、高碘酸鹽氧化的肝素(Ρ0Η)、化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)、化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)、化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)、硫酸葡聚糖(DXS)、肝素衍生的寡糖(HD0)，或多硫酸戊聚糖酯(PPS).在某些情況下,天然NASP是巖藻依聚糖(fucoidan)。例如,在這些實(shí)施方式中，巖藻依聚糖可以是巖藻依聚糖GFS5508005、裙帶菜(Undaria pinnatifida)、去熱源的；巖藻依聚糖GFS5508004、裙帶菜；巖藻依聚糖GFS5508003、裙帶菜(裙帶菜)；巖藻依聚糖5307002、水皰墨角藻(Fucus vesiculosus)、最大MW峰值126.7kD ;巖藻依聚糖VG49、水皰墨角藻、較低欄的5307002的水解樣品，最大欄峰值22.5kD ;巖藻依聚糖5308004、水皰墨角藻；巖藻依聚糖5308005、水皰墨角藻；巖藻依聚糖L/FVF1091、水皰墨角藻；巖藻依聚糖VG201096A、水皰墨角藻；巖藻依聚糖VG201096B、水皰墨角藻；巖藻依聚糖VG57、裙帶菜(裙帶菜)、高電荷(高硫酸化、去乙酰化的)；巖藻依聚糖VG50、海藻酸(Ascophyllumnodosum)、最大MW峰值149.7kD ;及其組合。[0008]在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種用于增強(qiáng)血液凝固的方法，其通過將具有聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的一定量的NASP的組合物施用至受試者，其中NASP是合成NASP。例如，合成NASP可以是硫酸低聚物，如硫酸寡糖或脂族硫酸酯。在某些情況下，合成NASP是硫酸戊糖、硫酸己糖或硫酸環(huán)糊精。例如，合成NASP可以包括，但不限于硫酸麥芽五糖、硫酸β環(huán)糊精、硫酸6-羧基艾考糊精(sulfated6_Carboxyicodextrin)及其衍生物。
[0009]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法還包括聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，與含有促凝血量的NASP的組合物組合向受試者經(jīng)口施用凝血因子。在這些情況下，凝血因子可以包括但不限于因子Xa、因子IXa、因子XIa、因子Xlla、Villa、前激肽釋放酶(prekallekrein)、和高分子量激肽原、組織因子、因子Vila、因子Va、因子Xa、因子I1、因子V、因子VI1、因子VII1、因子IX、因子X、因子X1、因子XI1、因子XII1、馮維勒布蘭德因子、及其組合。例如，在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包括聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑和因子VIII向受試者經(jīng)口施用的一定量的NASP。在另一個(gè)實(shí)施方式中，方法包括聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑和因子IX向受試者經(jīng)口施用的一定量的NASP。
[0010]在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明提供因子抑制受試者的TFPI活性的方法。例如，方法可以還包括抑制受試者的TFPI活性，其通過聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑以足以抑制受試者的TFPI活性的方式口服施用一定量的NASP。在某些情況下，促凝血量的NASP和胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑與包括TFPI的生物學(xué)樣品(例如，血漿)組合并測量該生物學(xué)樣品的TFPI活性。在其他情況下，方法包括組合促凝血量的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與生物學(xué)樣品，將TFPI添加至該組合物并測量該生物學(xué)樣品的TFPI活性。
[0011]在某些實(shí)施方式中，相比于沒有胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物，關(guān)注的組合物蒸汽增強(qiáng)的滲透，例如，當(dāng)通過在CaC0-2細(xì)胞模型中的吸收研究確定時(shí)。
[0012]本發(fā)明的方面
[0013]1.一種增強(qiáng)受試者的血液凝固的方法，所述方法包括:
[0014]聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，以足以增強(qiáng)受試者的血液凝固的方式向受試者經(jīng)口施用促凝血量的非抗凝血的硫酸多糖(NASP)。
[0015]2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述施用至所述受試者的NASP的量的范圍為0.01mg/kg 至約 100mg/kg。
[0016]3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述NASP是天然或合成的NASP。
[0017]4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述NASP是天然存在的NASP。
[0018]5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述天然存在的NASP選自由以下各項(xiàng)組成的組:N-乙?；?肝素(NAH)、N-乙?；?脫-O-硫酸化-肝素(NA-脫-o_SH)、脫-N-硫酸化-肝素(De-NSH)、脫-N-硫酸化-乙酰化-肝素(De-NSAH)、高碘酸鹽氧化的肝素(POH)、化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)、化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)、化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)At酸葡聚糖(DXS)、肝素衍生的寡糖(HDO)、多硫酸戊聚糖酯(PPS) and巖藻依聚糖、及其組合。
[0019]6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述天然存在的NASP是巖藻依聚糖。
[0020]7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述NASP是合成NASP。
[0021]8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述合成NASP是硫酸低聚物。
[0022]9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是緊密連接調(diào)節(jié)劑。[0023]10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑選自由以下各項(xiàng)組成的組:蛋白酶、膽酸、多糖、脂肪酸及其鹽、及其組合。
[0024]11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑包括蛋白酶。
[0025]12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是菠蘿蛋白酶或其酶組分。
[0026]13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是膽酸。
[0027]14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述膽酸是脫氧膽酸鹽。
[0028]15.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是多糖。
[0029]16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述多糖是脫乙酰殼多糖。
[0030]17.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是脂肪酸或其鹽。
[0031]18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是癸酸鈉。
[0032]19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶.[0033]20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括約0.3%至約3%脫乙酰殼多糖和約0.05mg/mL至約0.5mg/mL菠蘿蛋白酶。
[0034]21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括約3%脫乙酰殼多糖和約0.5mg/mL菠蘿蛋白酶。
[0035]22.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法還包括向受試者施用一種或多種選自由以下各項(xiàng)組成的組中的因子:因子X1、因子XI1、前激肽釋放酶、高分子量激肽原(HMWK)、因子V、因子VI1、因子VII1、因子IX、因子X、因子XII1、因子I1、馮維勒布蘭德因子、組織因子、因子Vila、因子Va、和因子Xa、因子IXa、因子XIa、因子Xlla、和Villa。
[0036]23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述受試者具有選自以下各項(xiàng)組成的組中的出血障礙:慢性或急性出血障礙、由出血因子缺乏引起的先天凝血障礙、和后天凝血障礙。
[0037]24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述出血障礙是一種或多種選自由以下各項(xiàng)組成的組中的因子的血液因子缺乏:因子V、因子VI1、因子VII1、因子IX、因子X、因子X1、因子XI1、因子XII1、和馮維勒布蘭德因子；纖維蛋白原障礙；凝血酶原障礙；或血小板功能障礙。
[0038]25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述受試者由于在使用抗凝劑前而需要增強(qiáng)的血液凝固。
[0039]26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述抗凝劑選自由以下各項(xiàng)組成的組:肝素、香豆素衍生物、組織因子途徑抑制劑(TFPI)、抗凝血酶II1、狼瘡抗凝劑、線蟲抗凝肽(NAPc2)、活性位點(diǎn)阻斷因子VIIa (因子VIIai)、因子IXa抑制劑、因子Xa抑制劑、因子Va抑制劑、因子VIIIa抑制劑、凝血酶抑制劑、和結(jié)合凝結(jié)因子的抗體。
[0040]27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述抗凝劑是結(jié)合選自由以下各項(xiàng)組成的組中的凝結(jié)因子的抗體:因子V、因子VI1、因子VII1、因子IX、因子X、因子XII1、因子I1、因子X1、因子XI1、馮維勒布蘭德因子、前激肽釋放酶、和高分子量激肽原(HMWK)。
[0041]28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述受試者由于手術(shù)或其他侵入性程序而需要增強(qiáng)的血液凝固。
[0042]29.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法是抑制受試者的TFPI的方法。
[0043]30.一種口服組合物，包含:
[0044](a)促凝血量的非抗凝血的硫酸多糖(NASP)；
[0045](b)腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑；和
[0046](C) 口服遞送媒介物；
[0047]其中所述口服組合物為單位劑型。
[0048]31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的口服組合物，其中所述組合物中存在的NASP的量提供范圍為0.01mg/kg至約100mg/kg的劑量。
[0049]32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的口服組合物，其中所述NASP是天然或合成的NASP。
[0050]33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的口服組合物，其中所述NASP是天然存在的NASP。
[0051]34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的口服組合物，其中所述天然存在的NASP選自由以下各項(xiàng)組成的組:N-乙?；?肝素(NAH)、N-乙?；?脫-O-硫酸化-肝素(NA-脫-o_SH)、脫-N-硫酸化-肝素(De-NSH)、脫-N-硫酸化-乙酰化-肝素(De-NSAH)、高碘酸鹽氧化的肝素(Ρ0Η)、化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)、化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)、化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)、硫酸葡聚糖(DXS)、肝素衍生的寡糖(HDO)、多硫酸戊聚糖酯(PPS)和巖藻依聚糖、及其組合。
[0052]35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的口服組合物，其中所述天然存在的NASP是巖藻依聚糖。
[0053]36.根據(jù)權(quán)利要求32所述的口服組合物，其中所述NASP是合成NASP。
[0054]37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的口服組合物，其中所述合成NASP是硫酸低聚物。
[0055]38.根據(jù)權(quán)利要求30所述的口服組合物，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是緊密連接調(diào)節(jié)劑。
[0056]39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑選自由以下各項(xiàng)組成的組:蛋白酶、膽酸、多糖、脂肪酸及其鹽、及其組合。
[0057]40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑包括蛋白酶。
[0058]41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是菠蘿蛋白酶或其酶組分。
[0059]42.根據(jù)權(quán)利要求39所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是膽酸。
[0060]43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的口服組合物，其中所述膽酸是脫氧膽酸鹽。
[0061]44.根據(jù)權(quán)利要求39所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是多糖。
[0062]45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的口服組合物，其中所述多糖是脫乙酰殼多糖.[0063]46.根據(jù)權(quán)利要求39所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是脂肪酸或其鹽。
[0064]47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑是癸酸鈉。
[0065]48.根據(jù)權(quán)利要求30所述的口服組合物，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶。
[0066]49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的口服組合物，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括約0.3%至約3%脫乙酰殼多糖和約0.05mg/mL至約0.5mg/mL菠蘿蛋白酶。
[0067]50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的口服組合物，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括約3%脫乙酰殼多糖和約0.5mg/mL菠蘿蛋白酶。
[0068]51.根據(jù)權(quán)利要求30所述的口服組合物，其包含一種或多種選自由以下各項(xiàng)組成的組中的因子:因子X1、因子XI1、前激肽釋放酶、高分子量激肽原(HMWK)、因子V、因子VI1、因子VII1、因子IX、因子X、因子XII1、因子I1、馮維勒布蘭德因子、組織因子、因子Vila、因子Va、和因子Xa、因子IXa、因子XIa、因子XIIajP Villa。
[0069]52.根據(jù)權(quán)利要求30所述的口服組合物，其中所述組合物是液體。
[0070]53.根據(jù)權(quán)利要求30所述的 口服組合物，其中所述組合物是固體。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0071]圖1顯示用于CaCo2生物利用度篩選以確定巖藻依聚糖的％吸收的實(shí)驗(yàn)裝置。
[0072]圖2顯示在用于巖藻依聚糖水皰墨角藻L/FVF-1091的CaCo2生物利用度篩選中吸收的聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的NASP的量的實(shí)例。
[0073]圖3顯示通過跨上皮細(xì)胞電阻測量，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑菠蘿蛋白酶，在用于巖藻依聚糖水皰墨角藻L/FVF-1091的CaCo-2生物利用度篩選中的細(xì)胞層的狀況。
[0074]圖4a_b顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖BAX513的CaCo_2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0075]圖5a_c顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖F.v.L/FVF-1091的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0076]圖6a_b顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖U.p.5508005的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0077]圖7a_b顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖F.v.FDS1001108B的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0078]圖8a_b顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖FvFSK110144B的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0079]圖9顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于合成NASP硫酸β-環(huán)糊精的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0080]圖10顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于合成NASP硫酸麥芽五糖的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0081]圖lla-b顯示以不同濃度，聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖F.V.L/FVF-1091和F.v.F DS1001108B的CaCo_2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0082]圖12a_b顯示通過跨上皮細(xì)胞電阻測量，在沒有和聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑菠蘿蛋白酶下，在用于合成NASP硫酸β -環(huán)糊精的CaCo-2生物利用度篩選中的細(xì)胞層的狀況。
[0083]圖13a_c顯示通過跨上皮細(xì)胞電阻測量，在沒有和聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑脫氧膽酸鹽和脫乙酰殼多糖下，在用于合成NASP硫酸麥芽五糖的CaCo-2生物利用度篩選中的細(xì)胞層的狀況。
[0084]圖14a_b顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖β-環(huán)糊精的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0085]圖15a_b顯示聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在用于巖藻依聚糖硫酸麥芽五糖的CaCo-2生物利用度篩選中獲得的吸收數(shù)據(jù)的實(shí)例。
[0086]相關(guān)定義
[0087]在描述本發(fā)明中，將采用以下術(shù)語，并且意圖如下所指出的進(jìn)行定義。
[0088]必須注意的是，如本說明書和所附權(quán)利要求中使用的，除非內(nèi)容中另有明確指示，單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“該”包括復(fù)數(shù)指代。因此，例如體積一種“NASP”可以根據(jù)需要包括兩種以上NASP的混合物。
[0089]如本文中使用的，“NASP”是指在本文中所述的各種凝結(jié)測定的任一種中表現(xiàn)出非-抗凝和抗凝血活性的硫酸多糖(SP)。NASP可以是天然硫酸多糖，如從生物來源或合成硫酸多糖提取的那些，其中硫酸多糖是部分或全部通過合成方法(例如，化學(xué)合成)產(chǎn)生的。活性的一個(gè)量度是比較通過NASP證實(shí)的凝結(jié)時(shí)間與通過肝素顯示的抗凝血活性。例如，通過采用本文中提供的方法和組合物，關(guān)注的NASP在稀促凝血酶時(shí)間(dPT)或活化部分凝血活酶時(shí)間(aPTT)凝結(jié)測定中表現(xiàn)出抗凝血活性，其不多于三分之一，如少于十分之一，未分級肝素(MW范圍為8，000至30，000 ;平均18，000道爾頓)的摩爾抗凝血活性。同樣，關(guān)注的NASP顯示相比于肝素的2-倍或更低的抗凝血活性，如相比于肝素的5-倍或更低的抗凝血活性，如相比于肝素的10-倍或更低的抗凝劑激活，如相比于肝素的25-倍或更低的抗凝血活性，如相比于肝素的50-倍或更低的抗凝血活性，包括相比于肝素的100-倍或更低的抗凝血活性，通過采用本文中提供的方法和組合物。
[0090]關(guān)注的NASP的分子量范圍可以為10道爾頓至1，000, 000道爾頓，如例如，100道爾頓至900，000道爾頓，如500道爾頓至500，000道爾頓，如1000道爾頓至250，000道爾頓、包括5000道爾頓至150，000道爾頓。NASP的平均分子量范圍為約10道爾頓至約500，000道爾頓，如約100道爾頓至約300，000道爾頓，如1000道爾頓至250，000道爾頓，包括1000道爾頓至150，000道爾頓。
[0091]在一些情況下，關(guān)注的NASP可以包括，但不限于N-乙?；?肝素(NAH)，N-乙?；?脫_0_硫酸化_肝素(NA-脫-O-SH),脫-N-硫酸化_肝素(De-NSH),脫-N-硫酸化_乙酰化-肝素(De-NSAH)，高碘酸鹽氧化的肝素(POH)，化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)，化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)，化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)，硫酸葡聚糖(DXS)，肝素衍生的寡糖(HDO)，多硫酸戊聚糖酯(PPS)，硫酸麥芽五糖，硫酸β環(huán)糊精，硫酸6-羧基艾考糊精及其衍生物。在某些情況下，NASP是巖藻依聚糖。例如，巖藻依聚糖可以是巖藻依聚糖5307002，水皰墨角藻，最大 峰值126.7kD ;巖藻依聚糖VG49，水皰墨角藻，較低 的5307002的水解樣品，最大麗峰值22.5kD;巖藻依聚糖VG57，裙帶菜，高電荷(高硫酸化，去乙?；?；巖藻依聚糖GFS (5508005)，裙帶菜，去熱原的；巖藻依聚糖GFS (L/FVF-01091)，水皰墨角藻，去熱原的，最大欄峰值125kD ;巖藻依聚糖GFS (L/FVF-01092)，水皰墨角藻，去熱原的，最大MW峰值260kD ;巖藻依聚糖GFS (L/FVF-01093)，水皰墨角藻，水解去熱原的，最大MW峰值36kD ； Maritech? 邊花昆布(Ecklonia radiata)提取物；Maritech? Ecklonia maxima
提取物;Maritech?巨藻(Macrocystis pyrifera)提取物；Maritech?免疫試驗(yàn)巖藻依聚糖混合物；及其組合。
[0092]聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的NASP可以用在本發(fā)明的方法中用于改善止血，治療出血障礙，如與缺乏凝固因子相關(guān)的那些或用于反轉(zhuǎn)抗凝劑的作用，尤其是當(dāng)需要或期望通過胃腸系統(tǒng)的吸收時(shí)。NASP促進(jìn)凝結(jié)和減少出血的能力可以使用各種體外凝結(jié)測定(例如，TFP1-dPT，凝血酶產(chǎn)生和凝血彈性描記術(shù)(TEG)測定)和體內(nèi)出血模型(例如在血友病小鼠或狗中的剪尾，橫切，全血凝結(jié)時(shí)間或外皮出血時(shí)間確定)來確定。參見，例如，F(xiàn)1DR Staff.Physicians' Desk Reference.2004, Anderson 等(1976)Thromb.Res.9:575-580 ；Nordfang 等(1991)Thromb Haemost.66:464-467 ；ffelsch 等(1991)Thrombosis Research64:213-222 ;Broze 等(2001)Thromb Haemost85:747-748 ;Scallan等(2003)Blood.102:2031-2037 ;Pijnappels 等(1986)Thromb.Haemost.55:70-73 ；和Giles et al.(1982)血液60:727-730，以及本文中的實(shí)施例。
[0093]“促凝血劑”一起常規(guī)含義在本文中用來指能夠引發(fā)或加速凝塊形成的任何因子或試劑。本發(fā)明的促凝血劑包括但不限于內(nèi)在或外在凝血途徑的任何活化劑，如選自由以下組成的組中的凝血因子:因子Xa，因子IXa，因子XIa，因子Xlla，和VIIIa，前激肽釋放酶，高分子量激肽原，組織因子，因子Vila，和因子Va，以及促進(jìn)凝血的其他試劑，包括激肽釋放酶，APTT引發(fā)劑(即，含有磷脂和接觸活化劑的試劑)，拉塞爾蝰蛇毒(Russel’s vipervenom) (RVV時(shí)間)， 和促凝血酶原激酶(用于dPT)。在一些實(shí)施方式中，接觸活化劑可以用作促凝血試劑。例如，接觸活化劑可以包括微粉化二氧化硅離子，鞣花酸，硫苷脂，高嶺土等。促凝血劑可以來自粗天然提取物，血液或血漿樣品，分離的或基本上純化的，合成的或重組的。促凝血劑可以包括天然存在的凝結(jié)因子或其保持生物學(xué)活性(即，促進(jìn)凝血)的片段，變體或共價(jià)修飾衍生物。
[0094]如本文使用的，術(shù)語“多糖”是指含有兩種以上共價(jià)連接的糖殘基的聚合物。糖殘基可以例如通過糖苷、酯、酰胺或肟連接部分連接。多糖的平均分子量可以廣泛變化，如例如范圍為100至1，000，000道爾頓以上，如100至500，000道爾頓以上，如1000至250，000道爾頓以上，如1000至100，000道爾頓以上，如10，000至50，000道爾頓以上。多糖可以是直鏈(即線性)的或支鏈的，或者可以含有直鏈和直鏈部分的離散區(qū)域。多糖還可以是通過降解(例如水解)較大多糖產(chǎn)生的多糖的片段。降解可以通過任何方便的方案實(shí)現(xiàn)，包括用酸、堿、熱、氧化劑或酶處理多糖以生成成段的多糖。多糖可以被化學(xué)地改變并且可以被修飾，包括但不限于，硫酸化，多硫酸化(polysulfation),酯化和甲基化。
[0095]如本文所述的，分子量可以表示為數(shù)均分子量或重均分子量。除非另有指明，本文中對分子量的所有提及是指重均分子量。分子量確定(數(shù)均和重均)可以使用例如，凝膠滲透色譜或其他液相色譜技術(shù)測量。
[0096]術(shù)語“來源于”在本文中用來鑒別分子的原始來源但不意味著限制制備該分子的方法，其可以例如通過化學(xué)合成或重組方法制備。
[0097]術(shù)語“變體”、“類似物”和“突變蛋白(mutein) ”是指保持在治療出血障礙中的所需活性如凝結(jié)活性的參比分子的生物學(xué)活性衍生物。在提及多肽(例如凝結(jié)因子)中的術(shù)語“變體”和“類似物”是指具有天然多肽序列和結(jié)構(gòu)的化合物，其中相對于天然分子具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸插入、替代(通常在性質(zhì)上是保守的)和/或缺失，只要所述修飾不破壞生物學(xué)活性，并且其與以下定義的參比分子是“基本上同源的”。這樣的類似物的氨基酸序列與參比序列具有高度的序列同源性，例如當(dāng)兩個(gè)序列進(jìn)行比對時(shí)，氨基酸序列同源性為50%以上，如60%以上，如70%以上，如80%以上，如90%以上，如95%以上，包括99%以上。在一些情況下，類似物將包括相同數(shù)量的氨基酸但將包括替代。術(shù)語“突變蛋白”還包括這樣的多肽，其具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸-樣分子，包括但不限于化合物僅含有氨基和/或亞氨基分子，含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸類似物的多肽(包括，例如，合成的非天然存在的氨基酸等)，具有取代的鍵，以及本領(lǐng)域中已知的其他修飾的多肽，天然存在的和非-天然存在的(例如，合成的)，環(huán)化的，支化分子等。術(shù)語還包括包含一個(gè)或多個(gè)N-取代的甘氨酸殘基的分子(“類肽(P印toid)”)和其他合成氨基酸或肽。(參見，例如，美國專利N0.5，831，005 ;5，877，278 ;和 5，977，301 ；Nguyen 等，Chem Biol.(2000) 7:463-473 ；以及 Simon 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA(1992) 89:9367 - 9371對于類肽的描述)。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，類似物和突變蛋白至少具有與天然分子相同的凝結(jié)活性。
[0098]如上討論的，類似物可以包括保守性的替代，即，在側(cè)鏈中涉及的氨基酸家族中發(fā)生的那些替代 。具體地，氨基酸通常分成四個(gè)家族:(I)酸性的一天冬氨酸和谷氨酸；(2)堿性的一賴氨酸，精氨酸，組氨酸；(3)非極性的一丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，色氨酸；和(4)不帶電荷極性的一甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，半胱氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。苯丙氨酸，色氨酸和酪氨酸在一些情況下歸類為芳族氨基酸。例如，亮氨酸用異亮氨酸或纈氨酸，天冬氨酸用谷氨酸，蘇氨酸用絲氨酸的分離的替代物，或氨基酸用結(jié)構(gòu)相關(guān)的氨基酸的類似保守替代，將對生物學(xué)活性不具有主要影響。例如，關(guān)注的多肽可以包括多至約5-10保守或非-保守氨基酸替代，或甚至多至約15-25保守或非-保守氨基酸替代，或5-25的任何整數(shù)，只要分子的所需的功能保持完整。
[0099]“衍生物”是指關(guān)注的參比分子或其類似物的任何合適的修飾，如硫酸化、乙酰基化、糖基化、磷酸化、聚合物綴合(如利用聚乙二醇)，或添加外來部分，只要保持參比分子的所需生物學(xué)活性(例如，凝結(jié)活性，抑制TFPI活性)。例如，多糖可以用一個(gè)或多個(gè)有機(jī)或無機(jī)基團(tuán)衍生化。實(shí)例包括但不限于至少一個(gè)羥基被另一個(gè)部分(例如硫酸酯、羧基、磷酸酯、氨基、腈、鹵代、甲硅烷基、酰胺基、?；?、脂肪族、芳族或糖基團(tuán))取代的多糖，或其中環(huán)氧已被硫、氮、亞甲基等替代的情況下，多糖可以化學(xué)地改變，例如以改善促凝血功能。這樣的修飾可以包括但不限于硫酸化、多硫酸化、酯化和甲基化。
[0100]“片段”是指含有完整全長序列和結(jié)構(gòu)的一部分的分子。在一些情況下，多糖的片段可以通過降解(例如，水解)較大的多糖產(chǎn)生。本發(fā)明的多肽的活性片段可以包括全長多糖的約2-20糖單元，如全長分子的約5-10糖單元，并且包括2糖單元和全長分子之間的任何整數(shù)，只要該片段保持生物學(xué)活性，如例如，凝結(jié)活性或抑制TFPI活性的能力。多肽的片段可以包括天然多肽的C-末端缺失、N-末端缺失或內(nèi)部確實(shí)。在一些實(shí)施方式中，特定蛋白的活性片段可以包括全長分子的約5-10連續(xù)氨基酸殘基或更多，如全長分子的約15-25連續(xù)氨基酸殘基或更多，如全長分子的約20-50連續(xù)氨基酸殘基或更多，并且包括5個(gè)氨基酸和全長序列之間的任何整數(shù)，只要所討論的片段保持生物學(xué)活性，如例如，凝結(jié)活性。
[0101]“基本上純化的”是指物質(zhì)(例如，非-抗凝劑硫酸多糖)的分離使得所述物質(zhì)包括其所在的樣品的大部分。例如，基本上上純化的樣品含有50%以上的關(guān)注物質(zhì)，如60%以上的關(guān)注物質(zhì),如75%以上的關(guān)注物質(zhì)，如90%以上的關(guān)注物質(zhì)，如95%以上的關(guān)注物質(zhì)，包括99%以上的關(guān)注物質(zhì)。任何方便的方案可以用于純化關(guān)注的多糖，多核苷酸和多肽并且包括但不限于超濾，選擇性沉積，結(jié)晶，離子交換色譜，親和色譜和根據(jù)密度的沉淀。
[0102]當(dāng)提及多糖或多肽時(shí)，“分離的”是指所指定的分子從在自然中發(fā)現(xiàn)該分子的整個(gè)有機(jī)體分開和分離或以基本上沒有同樣類型的其他生物學(xué)大分子存在。
[0103]“同源性”是指兩個(gè)多肽部分之間的同一性百分比。如本文中提及的，當(dāng)序列展現(xiàn)出約50%以上序列同一'丨生,如60%以上序列同一'丨生,如75%以上序列同一'丨生,如85%以上序列同一性，如90%以上序列同一性，如95%以上序列同一性，包括99%以上序列同一性時(shí)，兩個(gè)多肽序列彼此是“基本上同源的”。在一些實(shí)施方式中，基本同源性的多肽包括具有與規(guī)定序列完全同一性的序列。
[0104]“同一性”是指兩個(gè)高分子序列的精確亞基對亞基對應(yīng)性。例如，同一的多肽是與另一個(gè)多肽具有精確的氨基酸-對-氨基酸對應(yīng)性的多肽或者同一的多核苷酸是具有與另一個(gè)多核苷酸的精確核苷酸-對-核苷酸的核苷酸。同一'I"生百分比可以通過直接比較兩個(gè)分子(參比序列和與該參比序列具有未知的％同一性的序列)之間的序列信息，通過比對序列、計(jì)算兩個(gè)比對序列之間的精確的匹配數(shù)、除以參比序列的長度和用100乘以該結(jié)果而確定。可以采用任何方便的方案來確定兩個(gè)高分子序列之間的同一性百分比，如例如，ALIGN, Dayhoff, Μ.0.1n Atlas of Protein Sequence and Structure M.0.Dayhoff ed.,5Suppl.3:353-358, National biomedical Research Foundation, Washington, DC,其修改了 Smith 和 Waterman Advances in Appl.Math.2:482-489,1981 用于妝分析的局部同源性算法。
[0105]“受試者”是指脊索動物亞門的任何成員，包括但不限于人和其他靈長類，包括非人靈長類，如黑猩猩和其他猴物種；農(nóng)場動物如牛、綿羊、豬、山羊和馬；家養(yǎng)哺乳動物如狗和貓；實(shí)驗(yàn)室動物包括嚙齒動物如小鼠、大鼠和豚鼠；禽類，包括家養(yǎng)、野生和游戲禽類如小雞、火雞和其他鶉雞類禽類、鴨類、鵝類等。該術(shù)語不表示特定年齡。因此成年和新生個(gè)體都是關(guān)注的。
[0106]術(shù)語“患者”一起常規(guī)含義使用以指正遭受或易于感染可以通過施用本發(fā)明的NASP被預(yù)防或治療的病癥的活有機(jī)體，并且包括人和非人動物。
[0107]“生物學(xué)樣品”是指分離自受試者的組織或流體的樣品，包括但不限于，例如，血液，血漿，血清，糞便物，尿液，骨髓，膽汁，脊髓液，淋巴液，皮膚的樣品，皮膚的外部分泌物，呼吸，腸的，和泌尿生殖道，眼淚，唾液，乳汁，血液細(xì)胞，器官，活檢組織和體外細(xì)胞培養(yǎng)物組分的進(jìn)一步樣品包括但不限于由細(xì)胞和組織在培養(yǎng)基中生長產(chǎn)生的調(diào)節(jié)介質(zhì)，例如重組細(xì)胞和細(xì)胞組分。
[0108]“治療有效劑量或量”是指當(dāng)如本文所述施用時(shí),產(chǎn)生大致所需治療響應(yīng),如例如減少的出血或更短凝結(jié)時(shí)間的量。
[0109]“出血障礙”是指與過度出血相關(guān)的任何障礙，如先天凝血障礙，后天凝血障礙，施用抗凝血劑，或創(chuàng)傷誘發(fā)的出血病癥。如以下所述的，出血障礙可以包括，但不限于，血友病A，血友病B，馮維勒布蘭德病，特發(fā)性血小板減少，缺乏一種或多種接觸因子，如因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原(HMWK)，缺乏一種或多種與臨床大量出血相關(guān)的因子，如因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II (低凝血酶原血癥)，和馮維勒布蘭德因子，維生素K缺乏，纖維蛋白原障礙，包括脫纖維蛋白原血，低纖維蛋白原血，和異常纖維蛋白原血癥，Ci2-抗纖維蛋白溶酶缺乏，和過度出血如由肝病，腎病，血小板減少，血小板功能障礙，血腫，內(nèi)出血，關(guān)節(jié)積血，手術(shù)，創(chuàng)傷，體溫過低，行經(jīng)，和懷孕引起的。
【具體實(shí)施方式】
[0110]本發(fā)明的方面包括用于增強(qiáng)受試者的血液凝固的方法。在實(shí)施根據(jù)某些實(shí)施方式的方法中，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，一定量的非抗凝血的硫酸多糖(NASP)以足以增強(qiáng)受試者的血液凝固的方式經(jīng)口施用至受試者。還描述了用于實(shí)施本發(fā)明的方法的組合物和試劑盒。
[0111]在更詳細(xì)地描述本發(fā)明之前，應(yīng)理解，本發(fā)明不限于本文中描述的特定實(shí)施方式，因?yàn)檫@樣的實(shí)施方式可以變化。還應(yīng)理解，本文中使用的術(shù)語僅用于描述特定實(shí)施方式的目的，并且術(shù)語不用于限制。本發(fā)明的范圍將僅由所附權(quán)利要求限定。除非另有定義，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有如由本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的相同的含義。在提供數(shù)值范圍的情況下，應(yīng)理解，除非上下文另有明確指出，至下限單位的十分之一，該范圍上下限之間的插入值和在所述范圍中的任何其他陳述或插入的值被涵蓋在本發(fā)明內(nèi)。這些較小范圍的上下限可以獨(dú)立地包括在該較小范圍內(nèi)并且也涵蓋在本發(fā)明中，經(jīng)過在所述范圍內(nèi)的任何具體地排除限制。在所述范圍包括所述界限之一或兩個(gè)的情況下，排除那些包括界限的任一個(gè)或二者的范圍也包括在本發(fā)明中。某些范圍以前面用術(shù)語“約“的數(shù)值提供在本文中。術(shù)語“約”在本文中用來對在其前面的精確數(shù)值以及接近或近似之前有該術(shù)語的數(shù)值的數(shù)值提供文字支持。在確定數(shù)值是否接近或近似具體陳述的數(shù)值的數(shù)值中，該接近或近似的未陳述數(shù)值可以是這樣的數(shù)值，在提供其的上下文中，其提供該具體陳述數(shù)值的實(shí)質(zhì)性等同。在本說明書中引述的所有出版物、專利和專利申請通過引用在如同各個(gè)單個(gè)出版物、專利或?qū)＠暾埍痪唧w和個(gè)別地指明通過引用結(jié)合的相同程度結(jié)合于本文。此外，每個(gè)所述出版物、專利或?qū)＠暾埻ㄟ^引用結(jié)合于本文以結(jié)合所引述出版物公開和描述主題。任何出版物 的引述用于其申請日之前的公開內(nèi)容并且不應(yīng)解釋為承認(rèn)本文所描述的發(fā)明借助于之前的發(fā)明不先于這樣的出版物。而且，提供的出版物的日期可能不同于實(shí)際
【公開日】，這可能需要獨(dú)立地確認(rèn)。
[0112]注意到，權(quán)利要求可以撰寫為排除任何任選的要素。同樣，這種陳述意圖用作用于使用這樣的排除術(shù)語如“單獨(dú)地”、“唯一地”等結(jié)合權(quán)利要素的引述或使用“負(fù)面”限制的引用基礎(chǔ)。如對本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本公開內(nèi)容后顯而易見的，本文描述和舉例說明的單個(gè)實(shí)施方式各自具有離散的組分和特征，其可以容易地從其他若干實(shí)施方式任一個(gè)的特征分離或組合而沒有背離本發(fā)明的范圍或精神。任何陳述的方法可以以所述事件的順序或以邏輯上可能的任何其他順序進(jìn)行。盡管與本文所述的那些方法和材料類似或等價(jià)的任何方法和材料也可以在本發(fā)明的實(shí)踐或測試中使用，但現(xiàn)在描述代表性示例性方法和材料。[0113]在進(jìn)一步描述主題發(fā)明中，通過聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑經(jīng)口施用NASP的用于增強(qiáng)受試者的血液凝固的首先更詳細(xì)地進(jìn)行描述。接下來，還描述用于實(shí)施主題發(fā)明的方法的組合物和試劑盒。
[0114]用于增強(qiáng)受試者的血液凝固的方法
[0115]如以上所概述的，本發(fā)明的方面包括用于增強(qiáng)血液凝固的方法，通過聯(lián)合胃腸上皮滲透促進(jìn)劑向受試者經(jīng)口施用具有一定量的NASP的組合物。術(shù)語“增強(qiáng)血液凝固”以其常用含義用來指加速受試者的血液凝固的啟動(即，減少永不凝固開始的時(shí)間量)以及血液凝固的總體速率(即，減少用于血液凝固完成的時(shí)間量)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法加速血液凝固的啟動。例如，與合適對照相比，本發(fā)明的方法可以將用于血液開始凝固所需的時(shí)間量減少5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，如95%以上。在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法增大血液凝固的速率。例如，與合適對照相比，本發(fā)明的方法可以將血液凝固的速率增大2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如100%以上，如200%以上，包括500%以上。
[0116]在本公開內(nèi)容的實(shí)施方式中，聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，促凝血量的NASP經(jīng)口施用。根據(jù)受試者的生理學(xué)，如本文中使用的，短語“胃腸上皮”是指消化道如胃和腸道(例如，十二指腸，空腸，回場)的上皮組織，并且可以還包括參與身體的胃腸道功能的其他結(jié)構(gòu)，包括食道、直腸和肛門的下部。胃腸滲透促進(jìn)劑是指當(dāng)經(jīng)口施用時(shí)，增大由胃腸系統(tǒng)吸收的NASP的量的化合物。此外，胃腸滲透促進(jìn)劑還可以加速通過胃腸上皮的NASP吸收的啟動(即，減少用于吸收開始的時(shí)間量)以及加速跨國受試者的胃腸上皮的NASP的總體轉(zhuǎn)運(yùn)速率(即，減少由胃腸系統(tǒng)的NASP吸收完成的時(shí)間量)。
[0117]在一些實(shí)施方式中，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑增大由胃腸系統(tǒng)吸收的NASP的量。例如，與合適對照相比，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將由胃腸系統(tǒng)吸收的NASP的量增加5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，如95%以上。在其他實(shí)施方式中，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑加速通過胃腸上皮的NASP的啟動。例如，與合適對照相比，本發(fā)明的胃腸上 皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將啟動NASP的吸收所需的時(shí)間量減少5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，如95%以上。在另外的其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑增大由胃腸系統(tǒng)的NASP的吸收速率。例如，與合適對照相比，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將NASP吸收的速率增大2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如100%以上，如200%以上，包括500%以上。在一些情況下，本發(fā)明的胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以增大如通過如以下更詳細(xì)描述的Caco-2細(xì)胞模型確定的NASP的吸收速率。例如，與合適對照相比，本發(fā)明的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將如通過Caco-2細(xì)胞模型確定的吸收增大2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如100%以上，如200%以上，包括500%以上。
[0118]在本發(fā)明的實(shí)施方式中，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以變化，這取決于特定的血液凝固障礙、受試者的生理學(xué)和通過胃腸系統(tǒng)的吸收所需的增強(qiáng)。在一些實(shí)施方式中，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是緊密連接調(diào)節(jié)劑。術(shù)語“緊密連接”以其常用含義用來指其中相鄰細(xì)胞結(jié)合在一起的緊密相關(guān)細(xì)胞區(qū)域。同樣，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包括聯(lián)合調(diào)節(jié)NASP通過胃腸上皮的緊密連接的滲透的化合物，經(jīng)口施用具有促凝血量的NASP的組合物。“調(diào)節(jié)”是指改變或增大NASP通過胃腸上皮的緊密連接的滲透。同樣，緊密連接調(diào)節(jié)劑改變或增大NASP通過胃腸系統(tǒng)的吸收。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，緊密連接調(diào)節(jié)劑可以包括，但不限于酶，膽酸，多糖，脂肪酸及其鹽及其任意組合。
[0119]在一些情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是多糖。例如，多糖緊密連接調(diào)節(jié)劑可以是脫乙酰殼多糖。如本文使用的，脫乙酰殼多糖是指通過殼多糖的N-脫乙酰化制備的2-乙酰胺-2-脫氧-β -D-吡喃葡萄糖和2-氨基-β -D-吡喃葡萄糖的線性共聚物。多糖緊密連接調(diào)節(jié)劑還可以包括脫乙酰殼多糖的衍生物如N-烷基脫乙酰殼多糖，乙酰化脫乙酰殼多糖，硫醇化脫乙酰殼多糖，磷酸脫乙酰殼多糖，脫乙酰殼多糖環(huán)糊精，N-(氨基烷基)脫乙酰殼多糖，琥珀酰脫乙酰殼多糖和辛?；撘阴ざ嗵堑?。[0120]在其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是膽酸。術(shù)語“膽酸”以其常用含義用來指在哺乳動物的膽汁中發(fā)現(xiàn)的留體酸及其鹽。合適的膽酸可以包括，但不限于，膽酸(膽酸鹽)，脫氧膽酸(脫氧膽酸鹽)，鵝脫氧膽酸(鵝脫氧膽酸鹽)，熊脫氧膽酸(熊脫氧膽酸鹽)，甘氨膽酸(甘氨膽酸鹽)，?；悄懰??；撬猁})和石膽酸(石膽酸鹽)等。
[0121]在其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是酶。例如，酶緊密連接調(diào)節(jié)劑可以是蛋白酶，如菠蘿蛋白酶或菠蘿蛋白酶的酶片段。如本文使用的，菠蘿蛋白酶是指通常衍生自菠蘿(Ananas comosus)的果實(shí)、莖干和葉子的一組酶并且還可以包括要素如半胱氨酸蛋白酶，淀粉酶，酸性磷酸酶，過氧化物酶和纖維素酶。
[0122]在另外的其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是脂肪酸及其脂肪酸鹽。本發(fā)明的脂肪酸緊密連接調(diào)節(jié)劑可以變化，并且可以包括中鏈脂肪酸中的任一種或組合，如例如C8(辛酸鹽)，C10(癸酸鹽)和C12(月桂酸鹽)脂肪酸及其脂肪酸鹽。在某些情況下，例如，脂肪酸緊密連接調(diào)節(jié)劑是癸酸鈉。
[0123]聯(lián)合NASP施用的胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的濃度可以根據(jù)所需的效果變化。取決于腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，所述濃度可以為組合物的總質(zhì)量的0.01%以上，如0.1%以上，如1%以上，如2%以上，如5%以上，如10%以上，如15%以上，如20%以上，如25%以上并且包括組合物的總質(zhì)量的50%以上。在其他實(shí)施方式中，聯(lián)合NASP施用的胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的濃度為0.01mg/mL以上，如0.05mg/mL以上，如0.lmg/mL以上，如Img/mL以上并且包括5mg/mL以上。在另外的其他實(shí)施方式中，聯(lián)合NASP施用的胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的濃度0.1mM以上，如0.5mM以上，如ImM以上，如5mM以上，如IOmM以上，如25mM以上并且包括50mM以上。在某些實(shí)施方式中，兩種以上腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑同時(shí)采用。例如，兩種以上緊密連接調(diào)節(jié)劑可以聯(lián)合NASP采用，如三種以上緊密連接調(diào)節(jié)劑，包括四種以上緊密連接調(diào)節(jié)劑?？梢圆捎镁o密連接調(diào)節(jié)劑的任意組合，如例如，多糖和蛋白酶，脂肪酸和多糖，多糖和膽酸，多糖，脂肪酸和膽酸，在其他組合物中，兩種不同的多糖或兩種不同的膽酸。在采用一種以上的胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的情況下，各種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量百分比可以變化，范圍為組合物的總質(zhì)量的1%以上，如2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上并且包括組合物的總質(zhì)量的50%以上。例如，在采用兩種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的情況下，第一種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑和第二種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比可以變化，范圍為1:1至1:2.5 ;1:2.5至1:5 ;1:5至1:10 ;1:10 至 1:25 ;1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200至1:250 ;1:250至1:500 ;1:500至1:1000，或其范圍。例如，t第一種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑和第二種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比可以為1:1至1:10 ;1:5至1:25 ;1:10 至 1:50 ; 1:25 至 1:100 ; 1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000。在一些實(shí)施方式中，第二種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與第一種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比的范圍為1:1至 1:2.5 ;1:2.5 至 1:5 ;1:5 至 1:10 ;1:10 至 1:25 ;1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ;1:250 至 1:500 ;1:500 至 1:1000，或其范圍。例如，第二種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與第一種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比的范圍可以為 1:1 至 1:10 ;1:5 至 1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至1:1000。在某些情況下，胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶。在采用脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的情況下，脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的質(zhì)量比可以變化，范圍為 1:1 至 1:2.5 ;1:2.5 至 1:5 ;1:5 至 1:10 ;1:10 至 1:25 ;1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ;1:250 至 1:500 ;1:500 至 1:1000，或其范圍。例如，脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10 ;1:5至1:25 ；1:10 至 1:50 ; 1:25 至 1:100 ; 1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000.在一些實(shí)施方式中，菠蘿蛋白酶與脫乙酰殼多糖的質(zhì)量比的范圍為1:1至1:2.5 ;1:2.5至1:5 ;1:5至1:10 ;1:10至1:25 ;1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ;1:250至1:500 ; 1:500至1:1000，或其范圍。例如，菠蘿蛋白酶與脫乙酰殼多糖的質(zhì)量比的范圍可以為 1:1 至 1:10 ;1:5 至 1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至1:1000。
[0124]在采用脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合的情況下，在某些實(shí)施方式中，脫乙酰殼多糖的濃度可以變化，范圍為約0.1%至約5%，如約0.15%至約4.5%，如0.2%至約4%，如約0.25%至約3.5%,如0.3%至約3%，如0.5%至約2.5%,包括約0.5%至1.5%。同樣，在采用脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合的情況下，在某些實(shí)施方式中，菠蘿蛋白酶的濃度可以變化，范圍為約 0.01mg/mL 至約 1.0mg/mL,如約 0.2mg/mL 至約 0.9mg/mL,如 0.25mg/mL至約 0.75mg/mL,如約 0.3mg/mL 至約 0.6mg/mL,包括約 0.4mg/mL 至約 0.5mg/mL。同樣，在這些實(shí)施方式中，方法包括聯(lián)合脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶二者施用NASP。例如，NASP可以是天然或合成MSP，如上述的那些，包括N-乙酰基-肝素(NAH)，N-乙?；?脫-O-硫酸化-肝素(NA-脫-o-SH )，脫-N-硫酸化-肝素(De-NSH)，脫-N-硫酸化-乙?；?肝素(De-NSAH)，高碘酸鹽氧化的肝素(POH)，化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)，化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)，化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)，硫酸葡聚糖(DXS)，肝素衍生的寡糖(HDO)，多硫酸戊聚糖酯(PPS)，硫酸麥芽五糖，硫酸β環(huán)糊精，硫酸6-羧基艾考糊精及其衍生物。例如，theNASP可以是巖藻依聚糖，如巖藻依聚糖5307002，水皰墨角藻，最大MW峰值126.7kD ;巖藻依聚糖VG49，水皰墨角藻，較低MW的5307002的水解樣品，最大MW峰值22.5kD ;巖藻依聚糖VG57，裙帶菜，高電荷(高硫酸化，去乙酰化的)；巖藻依聚糖GFS (5508005)，裙帶菜，去熱原的；巖藻依聚糖GFS(L/FVF-01091)，水皰墨角藻，去熱原的，最大麗峰值125kD ;巖藻依聚糖GFS (L/FVF-01092)，水皰墨角藻，去熱原的，最大MW峰值260kD ;巖藻依聚糖GFS (L/FVF-01093)，水皰墨角藻，水解去熱原的，最大MW峰值36kD ； Maritech?邊花昆布提取物；Maritech? Ecklonia maxima 提取物；Maritech? 巨藻提取物；Maritech?兔疫試驗(yàn)巖
藻依聚糖摻混物；及其組合。如上解釋的，在某些情況下，脫乙酰殼多糖的濃度的范圍為約0.1%至約5%,如約3%并且菠蘿蛋白酶的濃度的范圍為0.lmg/mL至約lmg/mL,如約0.5mg/mL0
[0125]在采用兩種或以上胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的情況下，在一些實(shí)施方式中，所述組合是協(xié)同有效的胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合。術(shù)語“系統(tǒng)有效”是指胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合產(chǎn)生比通過單個(gè)胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的和實(shí)現(xiàn)的效果更大的效果(即，增強(qiáng)胃腸上皮屏障滲透)。例如，一種以上的胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合產(chǎn)生為通過單個(gè)胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的和實(shí)現(xiàn)的效果2倍以上的效果，如3-倍以上，如4-倍以上，如5-倍以上，如10-倍以上并且包括為通過單個(gè)胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的和實(shí)現(xiàn)的效果的25-倍以上。同樣，在組合兩種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的情況下，本發(fā)明的協(xié)同有效組合產(chǎn)生為通過兩種單個(gè)胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的和實(shí)現(xiàn)的效果2-倍以上的效果，如5-倍以上，如10-倍以上并且包括為通過兩種單個(gè)胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的和實(shí)現(xiàn)的效果的25-倍以上的效果。同樣，在組合三種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的情況下，本發(fā)明的協(xié)同有效組合產(chǎn)生為通過三種單個(gè)胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的和實(shí)現(xiàn)的效果2-倍以上的效果，如5-倍以上，如10-倍以上并且包括為通過三種單個(gè)胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的和實(shí)現(xiàn)的效果25-倍以上的效果。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的協(xié)同有效組合包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合。在這些實(shí)施方式中，所述脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合對增強(qiáng)通過胃腸上皮屏障的滲透具有比通過脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶單個(gè)的和實(shí)現(xiàn)的效果更大的效果。例如，在一些情況下，所述脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合對通過胃腸上皮屏障的滲透比通過脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶單個(gè)的和實(shí)現(xiàn)的效果增強(qiáng)2-倍以上，如5-倍以上，如10-倍以上并且包括比通過脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶單個(gè)的和實(shí)現(xiàn)的效果增強(qiáng)25-倍以上。在某些情況下，協(xié)同有效組合包括濃度范圍為0.lmg/mL至約0.5mg/mL,如0.15mg/mL至約0.4mg/mL,包括0.25mg/mL的菠蘿蛋白酶和濃度范圍為約1%至約5%w/v,如1.5%至約4.5%w/v,如2%至約4%w/v并且包括約3%w/v的脫乙酰殼多糖的組合。在某些實(shí)施方式 中，菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖的協(xié)同有效組合包括0.5mg/mL菠蘿蛋白酶和3%w/v脫乙酰殼多糖的組合。在其他實(shí)施方式中，菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖的協(xié)同有效組合包括0.25mg/mL菠蘿蛋白酶和1.5%w/v脫乙酰殼多糖。在另外的其他實(shí)施方式中，菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖的協(xié)同有效組合包括0.12mg/mL菠蘿蛋白酶和0.75%w/v脫乙酰殼多糖。
[0126]在本發(fā)明的實(shí)施方式中，提供了通過聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑向受試者經(jīng)口施用NASP的用于增強(qiáng)血液凝固的方法?！笆茉囌摺笔侵附邮苎耗檀龠M(jìn)劑的個(gè)人或有機(jī)體。同樣，本發(fā)明的受試者可以包括但不限于人和其他靈長類，如黑猩猩和其他猿類以及猴物種；農(nóng)場動物如牛、綿羊、豬、山羊和馬；家養(yǎng)哺乳動物如狗和貓；實(shí)驗(yàn)室動物包括嚙齒動物如小鼠、大鼠和豚鼠；禽類，包括家養(yǎng)、野生和游戲禽類如小雞、火雞和其他鶉雞類禽類、鴨類、鵝類等。
[0127]在一些實(shí)施方式中，所述主題方法可以用來治療出血障礙，如慢性或急性出血障礙，由出血因子缺乏引起的先天凝血障礙，后天凝血障礙和使用抗凝血劑。例如，出血障礙可以包括，但不限于血友病A，血友病B，馮維勒布蘭德病，特發(fā)性血小板減少，缺乏一種或多種接觸因子，如因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原(HMWK)，缺乏一種或多種與臨床大量出血相關(guān)的因子，如因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II (低凝血酶原血癥)，和馮維勒布蘭德因子，維生素K缺乏，纖維蛋白原障礙，包括脫纖維蛋白原血，低纖維蛋白原血，和異常纖維蛋白原血癥，α2-抗纖維蛋白溶酶缺乏，過度出血如由肝病，腎病,血小板減少,血小板功能障礙,血腫，內(nèi)出血,關(guān)節(jié)積血,手術(shù)，創(chuàng)傷，體溫過低，行經(jīng)，和懷孕引起的。
[0128]在其他實(shí)施方式中，所述主題方法可以用來增強(qiáng)血液凝固以反轉(zhuǎn)受試者的抗凝劑的作用。例如，所述受試者可以已經(jīng)用抗凝劑處理過，所述抗凝劑包括，但不限于，肝素，香豆素衍生物，如華法林(warfarin)或雙香豆素(dicumarol), TFPI, AT III,狼瘡抗凝劑，線蟲抗凝肽(NAPc2)，活性位點(diǎn)阻斷因子VIIa(因子VIIai)，因子IXa抑制劑，因子Xa抑制劑，包括磺達(dá)肝素(fondaparinux),艾卓肝素(idraparinux), DX_9065a,和雷扎沙班(razaxaban) (DPC906)，因子Va和VIIIa的抑制劑，包括活化蛋白C(APC)和可溶血栓調(diào)節(jié)蛋白，凝血酶抑制劑，包括水蛭素(hirudin),比伐盧定(bivalirudin),阿加曲班(argatroban),和希美加群(ximelagatran)。在某些實(shí)施方式中，受試者的抗凝劑可以是結(jié)合凝結(jié)因子的抗體，包括但不限于，結(jié)合因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II，因子XI，因子XII，馮維勒布蘭德因子，前激肽釋放酶，或高分子量激肽原(HMWK)的抗體。
[0129]本發(fā)明的方面包括聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑向受試者經(jīng)口施用具有促凝血量的NASP的組合物以增強(qiáng)血液凝固。如上所述，本發(fā)明的NASP可以是天然NASP或合成NASP。在一些實(shí)施方式中，NASP是天然NASP。“天然”是指NASP從天然存在的來源發(fā)現(xiàn)或來源于其，如來自動物或植物來源并且涵蓋寬范圍的亞類，包括肝素，糖胺聚糖(glycosaminoglycan),巖藻依聚糖,角叉菜膠,多硫酸戍聚糖(pentosan polysulfate),硫酸皮膚素(dermatan sulfate)和硫酸葡聚糖(dextran sulfate)。在一些實(shí)施方式中，天然NASP可以提取自生物學(xué)來源?！吧飳W(xué)來源”是指天然存在的有機(jī)體或有機(jī)體的部分。例如，關(guān)注的NASP可以提取自植物、動物、真菌或細(xì)菌。尤其是，關(guān)注的NASP可以提取自可食用的海藻、褐藻類，棘皮動物(echinoderm)(例如，海膽，海參)等?？梢圆捎萌魏畏奖愕姆桨赣糜趶纳飳W(xué)來源提取NASP。例如，在其他程序之中，所述NASP可以通過酸堿提取、酶降解、選擇性沉積、過濾提取自生物學(xué)來源。用于從生物學(xué)來源如可食用海藻和褐藻提取和分離MASP的方法詳細(xì)描述在2010年2月25日提交的臨時(shí)未決美國專利申請序列N0.12/449，712，將其公開內(nèi)容通過引用以其整體結(jié)合于此。
[0130]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的天然NASP包括但不限于N-乙酰基-肝素(NAH)，N-乙酸基-脫-O-硫酸化-肝素(NA-脫-O-SH),脫-N-硫酸化-肝素(De-NSH),脫-N-硫酸化-乙酰化-肝素(De-NSAH)，高碘酸鹽氧化的肝素(POH)，化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)，化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)，化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)，硫酸葡聚糖(DXS)，肝素衍生的寡糖(HDO)，多硫酸戊聚糖酯(PPS)及其組合。在一些情況下，NASP可以是天然存在的NASP的低分子量片段。在其他情況下，天然NASP還可以包括天然存在的NASP的生物化學(xué)或化學(xué)衍生物。在某些情況下，天然NASP是巖藻依聚糖。如以下更詳細(xì)描述的，巖藻依聚糖是天然存在的復(fù)合硫酸多糖化合物，其可以提取自某些可食用的海藻、褐藻和棘皮動物(例如，海膽，海參)。如本文使用的，術(shù)語“巖藻依聚糖”是指提取自低硫酸酯聚合物的生物學(xué)來源的不同部分的組而不是單個(gè)化學(xué)實(shí)體。在某些情況下，本發(fā)明的巖藻依聚糖包括但不限于巖藻依聚糖GFS5508005,裙帶菜,去熱原的；巖藻依聚糖GFS5508004,裙帶菜；巖藻依聚糖GFS5508003，裙帶菜；巖藻依聚糖5307002，水皰墨角藻，最大MW峰值126.7kD ;巖藻依聚糖VG49，水皰墨角藻，較低MW的5307002的水解樣品，最大MW峰值22.5kD ;巖藻依聚糖5308004，水皰墨角藻；巖藻依聚糖5308005，水皰墨角藻；巖藻依聚糖L/FVF1091，水皰墨角藻；巖藻依聚糖VG201096A，水皰墨角藻；巖藻依聚糖VG201096B，水皰墨角藻；巖藻依聚糖VG57,裙帶菜,高電荷(高硫酸化,去乙?；?；巖藻依聚糖VG50,泡葉藻(Ascophyllumnodosum)，最大MW峰值149.7kD ;及其組合。
[0131]合適的NASP的實(shí)例更詳細(xì)地描述在于2005年5月27日提交的美國專利申請序列N0.11/140，504，現(xiàn)在的美國專利N0.7，767，654，以及于2011年I月13日提交的美國專利申請序列N0.13/006, 396，將它們的公開內(nèi)容以其整體通過引用結(jié)合于此。
[0132]在其他實(shí)施方式中，NASP是合成NASP。“合成是”是指硫酸多糖是由人工方法(例如，化學(xué)合成)制備的部分或全部。例如，合成NASP可以是硫酸低聚物，如硫酸寡糖或脂族硫酸酯。在某些情況下，合成NASP是硫酸戊糖，硫酸己糖或硫酸環(huán)糊精。例如，合成NASP可以包括，但不限于硫酸麥芽五糖，硫酸β環(huán)糊精，硫酸6-羧基艾考糊精及其衍生物。[0133]其他合適的合成NASP的實(shí)例更詳細(xì)地描述在于2012年I月30日提交的美國臨時(shí)專利申請序列N0.61/592，554和于2012年I月30日提交的美國臨時(shí)專利申請序列N0.61/592，549中，將其公開內(nèi)容以其整體通過引用結(jié)合于此。
[0134]取決于所期望的NASP的效果和潛力，可以一起采用一種或多種NASP。例如，可以一起采用兩種以上的NASP，如三種以上的NASP并且包括四種以上的NASP。在采用一種以上NASP的情況下，所有的NASP可以是天然NASP，所有NASP可以是合成NASP或其任意組合。在采用一種以上NASP的情況下，組合物中各種NASP的質(zhì)量百分比可以變化，范圍為組合物的總質(zhì)量的1%以上，如2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上包括為包括組合物的總質(zhì)量的50%以上。
[0135]在本發(fā)明的實(shí)施方式中，NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比可以變化，范圍為 1:1至1:2.5;1:2.5至1:5;1:5至1:10;1:10至1:25;1:25至1:50;1:50至1:100;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ; 1:200 至 1:250 ;1:250 至 1:500 ; 1:500 至 1:1000，或其范圍。例如，NASP與胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10 ;1:5至1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000。在一些實(shí)施方式中，胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與NASP的質(zhì)量比的范圍為1:1至1:2.5 ;1:2.5至1:5 ；1:5至1:10 ;1:10至1:25 ;1:25至1:50 ;1:50至1:100 ;1:100至1:150 ;1:150至 1:200 ;1:200至1:250 ; 1:250至1:500 ; 1:500至1:1000，或其范圍。例如，胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與NASP的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10 ;1:5至1:25 ;1:10至1:50 ;1:25至1:100 ;1:50至 1:500;或 1:100 至 1:1000。
[0136]NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以以任何順序施用至受試者。在一些情況下，在經(jīng)口施用腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑之前，經(jīng)口施用NASP。在其他情況下，在經(jīng)口施用腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑之后，經(jīng)口施用NASP。在另外的其他情況下，聯(lián)合經(jīng)口施用腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，經(jīng)口施用NASP。如果同時(shí)提供NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑二者，各自可以提供在相同或不同組合物中。在NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑同時(shí)施用的情況下，在將組合物施用至受試者之前，NASP可以與胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑、凝血因子混合?？梢允褂萌魏畏奖愕幕旌衔铮缤ㄟ^干搖動、溶液或混懸液混合、工業(yè)混合物方案等。因此，NASP和腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以通過并行治療的方式提供給個(gè)體?！安⑿兄委煛笔侵甘┯弥潦茉囌呤沟肗ASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合的治療效果在進(jìn)行治療的受試者中引起。類似地，一種或多種NASP和一種或多種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以以至少一個(gè)治療劑量經(jīng)口施用。
[0137]可以施用NASP和胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的任何合適的組合。在某些實(shí)施方式中，方法包括施用天然NASP(如上所述)與一種或多種胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑。在這些實(shí)施方式中，方法可以包括施用天然NASP與癸酸鈉，脫氧膽酸鹽，菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖中的一種或多種的組合。在某些實(shí)施方式中，方法包括施用天然NASP與癸酸鈉。例如，一種或多種裙帶菜U.p.5508005和水皰墨角藻F.v.L/FVF1091可以與癸酸鈉一起施用。在其他實(shí)施方式中，方法包括施用天然NASP與脫氧膽酸鹽。例如，裙帶菜U.p.5508005、水皰墨角藻F.V.L/FVF1091、水皰墨角藻F.v.DS1001108、水皰墨角藻F.v.SK110144B中的一種或多種可以與脫氧膽酸鹽一起施用。在另外的其他實(shí)施方式中，方法包括施用天然NASP與菠蘿蛋白酶。例如，裙帶菜U.p.5508005、水皰墨角藻F.v.L/FVF1091、水皰墨角藻F.V.DS1001108、水皰墨角藻F.v.SK110144B中的一種或多種可以與菠蘿蛋白酶一起施用。在另外的其他實(shí)施方式中，方法包括施用天然NASP與脫乙酰殼多糖。例如，裙帶菜U.p.5508005、水皰墨角藻F.v.L/FVF1091、水皰墨角藻F.v.DS1001108、水皰墨角藻F.V.SK110144B中的一種或多種可以聯(lián)合脫乙酰殼多糖施用。在另外的其他實(shí)施方式中，方法包括施用天然NASP與菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖(如上所述)的組合。例如，裙帶菜U.p.5508005，水皰墨角藻F.v.L/FVF1091，水皰墨角藻F.v.DS1001108,水皰墨角藻F.V.SK110144B中的一種或多種可以與菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖的組合一起施用。
[0138]在某些實(shí)施方式中，方法包括施用合成NASP (如上所述)與一種或多種胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑。在這些實(shí)施方式中，方法可以包括施用合成NASP與癸酸鈉，脫氧膽酸鹽，菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖中的一種或多種的組合。在某些實(shí)施方式中，方法包括施用合成NASP與癸酸鈉。例如，硫酸環(huán)糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種可以與癸酸鈉一起施用。在其他實(shí)施方式中，方法包括施用合成NASP與脫氧膽酸鹽。例如，24kD硫酸6-羧基艾考糊精、14kD6-羧基艾考糊精、硫酸β-環(huán)糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種可以與脫氧膽酸鹽一起施用。在另外的其他實(shí)施方式`中，方法包括施用合成NASP與菠蘿蛋白酶。例如，24kD硫酸6-羧基艾考糊精、14kD6-羧基艾考糊精、硫酸β -環(huán)糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種可以與菠蘿蛋白酶一起施用。在另外的其他實(shí)施方式中，方法包括施用合成NASP與脫乙酰殼多糖。例如，24kD硫酸6-羧基艾考糊精、14kD6_羧基艾考糊精、硫酸β-環(huán)糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種可以聯(lián)合脫乙酰殼多糖施用。在另外的其他實(shí)施方式中，方法包括施用合成NASP與蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖(如上所述)的組合。例如，24kD硫酸6-羧基艾考糊精、14kD6-羧基艾考糊精、硫酸β -環(huán)糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種可以與菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖的組合一起施用。
[0139]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方面包括增強(qiáng)受試者的血液凝固，其通過向受試者經(jīng)口施用含有促凝血量的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑聯(lián)合凝血因子的組合物。例如，聯(lián)合一種或多種凝血因子，受試者可以經(jīng)口施用促凝血量的含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物，所述凝血因子包括但不限于因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，高分子量激肽原(HMWK)，因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II，因子Vila，和馮維勒布蘭德因子，因子Xa，因子IXa，因子XIa，因子Xlla，和Villa，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原，組織因子，因子Vila，因子Va和因子Xa。
[0140]在將含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物與凝血因子一起經(jīng)口施用至受試者的情況下，含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物以凝血因子的質(zhì)量比可以變化，范圍為 1:1 至 1:2.5 ;1:2.5 至 1:5 ;1:5 至 1:10 ;1:10 至 1:25 ;1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ;1:250 至 1:500 ;1:500 至1:1000，或其范圍。例如，含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物與凝血因子的范圍的質(zhì)量比可以為 1:1 至 1:10 ;1:5 至 1:25 ;1:10 至 1:50 ; 1:25至 1:100 ; 1:50 至 1:500;或1:100至1:1000。在一些實(shí)施方式中，凝血因子與含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物的質(zhì)量比的范圍為1:1至1:2.5 ;1:2.5至1:5 ;1:5至1:10 ;1:10至1:25 ;1:25至 1:50 ; 1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ; 1:200 至 1:250 ;1:250 至 1:500 ;1:500至1:1000，或其范圍。例如，凝血因子與含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10 ;1:5至1:25 ;1:10至1:50 ;1:25至1:100 ;1:50至 1:500;或 1:100 至 1:1000。
[0141]凝血因子以及含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物可以以任何順序施用至受試者。在一些情況下，含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物在施用凝血因子之前經(jīng)口施用。在其他情況下，含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物結(jié)合凝血因子經(jīng)口施用。在另外的其他情況下，含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物在施用凝血因子之后經(jīng)口施用。在含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物結(jié)合凝血因子經(jīng)口施用的情況下，含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物可以在將組合物經(jīng)口施用至受試者之前與凝血因子混合。可以使用任何方便的混合方案，如通過干搖動、溶液或混懸液混合、工業(yè)混合方案等。
[0142]本發(fā)明的方面包括用于治療出血障礙的方法和組合物，其通過聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑經(jīng)口施用促凝血量的NASP。如本文中公開的，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，NASP可以單獨(dú)施用(即，作為單個(gè)試劑)，或聯(lián)合其他止血劑。如期望的，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，促凝血量的 NASP可以用于治療已被診斷為具有出血障礙的受試者，包括先天凝血障礙，后天凝固障礙，施用抗凝血劑，和創(chuàng)傷誘發(fā)的出血性障礙。
[0143]在一些情況下，受試者可以被診斷為具有血液凝結(jié)障礙，其包括但不限于血友病A，血友病B，馮維勒布蘭德病，特發(fā)性血小板減少，缺乏一種或多種接觸因子，如因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原(HMWK)，缺乏一種或多種與臨床大量出血相關(guān)的因子，如因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II (低凝血酶原血癥)，和馮維勒布蘭德因子，維生素K缺乏，纖維蛋白原障礙，包括脫纖維蛋白原血，低纖維蛋白原血，和異常纖維蛋白原血癥，Ci2-抗纖維蛋白溶酶缺乏，和過度出血如肝病，腎病，血小板減少，血小板功能障礙，血腫，內(nèi)出血，關(guān)節(jié)積血，手術(shù)，創(chuàng)傷，體溫過低，行經(jīng)和懷孕引起的。
[0144]在其他情況下，受試者可以被診斷為具有血液凝結(jié)障礙，其包括由血液因子缺乏引起的先天凝血障礙或后天凝血障礙。例如，血液因子缺乏可能由缺乏一種或多種因子引起，包括但不限于，因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子XI，因子XII，因子XIII和馮維勒布蘭德因子。
[0145]在另外的其他情況下，受試者可以被診斷為具有由于向受試者施用抗凝劑導(dǎo)致的血液凝結(jié)障礙。例如，抗凝劑可以包括但不限于，肝素，香豆素衍生物，如華法林或雙香豆素，組織因子途徑抑制劑(TFPI)，抗凝血酶III，狼瘡抗凝劑，線蟲抗凝肽(NAPc2)，活性位點(diǎn)阻斷因子VIIa(因子VIIai)，因子IXa抑制劑，因子Xa抑制劑，包括磺達(dá)肝素，艾卓肝素，DX-9065a，和雷扎沙班(DPC906)，因子Va和VIIIa的抑制劑，包括活化蛋白C (APC)和可溶血栓調(diào)節(jié)蛋白，凝血酶抑制劑，包括水蛭素，比伐盧定，阿加曲班和希美加群。在某些實(shí)施方式中，抗凝劑可以是結(jié)合凝結(jié)因子的抗體，包括但不限于，結(jié)合因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II，因子XI，因子XII，馮維勒布蘭德因子，前激肽釋放酶或高分子量激肽原(HMWK)的抗體。
[0146]在另外的其他情況下，本發(fā)明的方法包括一種抑制受試者的TFPI活性的方法。例如，方法可以進(jìn)一步包括聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，向受試者以足以抑制受試者的TFPI活性的方式經(jīng)口施用一定量的NASP。在某些情況下，聯(lián)合胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑，促凝血量的NASP與包括TFPI的生物學(xué)樣品(例如，血液血漿)組合并測量所述生物學(xué)樣品的TFPI活性。在其他情況下，方法包括將促凝血量的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與生物學(xué)樣品組合，將TFPI添加到該組合物中并測量該生物學(xué)樣品的TFPI活性。在某些情況下，生物學(xué)樣品是血漿樣品，如例如，正常血液血漿或因子VII1-抑制的血液血漿。
[0147]在所述本發(fā)明的方法中，用于增強(qiáng)受試者的血液凝固的方案可以變化，如例如由受試者的年齡、體重、血液凝結(jié)障礙的嚴(yán)重度、總體健康，以及施用的NASP和腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的具體組成和濃度。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，在經(jīng)口施用并通過胃腸系統(tǒng)吸收后在受試者中獲得的NASP的濃度可以變化，在一些情況下，范圍為0.01nM至500nM。關(guān)注的NASP促凝血劑處于其最佳濃度?！白罴褲舛取笔侵钙渲蠳ASP表現(xiàn)出最高量的促凝血活性的濃度。因?yàn)樵S多NASP在比最佳濃度顯著更高的濃度下也顯示抗凝血活性，本發(fā)明的NASP在其最佳濃度范圍內(nèi)顯示非-抗凝行為。同樣，取決于NASP的潛力以及所需效果，由本發(fā)明方法提供的NASP的最佳濃度的范圍可以為0.01nM至500nM，如0.1nM至250nM，如0.1nM 至 IOOnM,如 0.1nM 至 75nM,如 0.1nM 至 50nM,如 0.1nM 至 25nM,如 0.1nM 至 IOnM,并且包括0.1nM至InM。如通過關(guān)注的NASP的校準(zhǔn)自動化的血栓掃描法(CAT)測定確定的，最佳濃度和活性水平更詳細(xì)地描述在于2005年5月27日提交的美國專利申請序列N0.11/140，504，現(xiàn)在的美國專利N0.7，767，654，以及于2011年I月13日提交的美國專利申請序列N0.13/006, 396中，將其公開內(nèi)容以其整體通過引用結(jié)合于此。同樣，在經(jīng)口施用和通過胃腸系統(tǒng)吸收后在受試者中實(shí)`現(xiàn)的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的濃度可以變化，在一些情況下，范圍為0.01nM至500nM。例如，取決于NASP的固有吸收性以及所需的效果，通過本發(fā)明方法提供的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的濃度的范圍可以為0.01nM至500nM，如0.1nM 至 250nM,如 0.1nM 至 IOOnM,如 0.1nM 至 75nM,如 0.1nM 至 50nM,如 0.1nM 至 25nM,如0.1nM至IOnM,并且包括0.1nM至InM。
[0148]因此，聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，含有關(guān)注的NASP的組合物的口服劑量可以變化，范圍為約 0.01mg/kg 至 500mg/kg/ 天,如 0.01mg/kg 至 400mg/kg/ 天,如 0.01mg/kg至 200mg/kg/ 天，如 0.lmg/kg 至 100mg/kg/ 天，如 0.01mg/kg 至 10mg/kg/ 天，如 0.01mg/kg至2mg/kg/天,包括0.02mg/kg至2mg/kg/天。在其他實(shí)施方式中，所述口服劑量的范圍可以為 0.01 至 100mg/kg 四次 / 天(QID)，如 0.01 至 50mg/kg QID,如 0.01mg/kg 至 10mg/kgQID，如0.01mg/kg至2mg/kg QID，如0.01至0.2mg/kg QID0在其他實(shí)施方式中，所述口服劑量的范圍可以為 0.01mg/kg 至 50mg/kg 三次 / 天(TID),如 0.01mg/kg 至 10mg/kg TID,如0.01mg/kg至2mg/kg TID,并且包括為0.01mg/kg至0.2mg/kg TID。在另外的其他實(shí)施方式中，所述口服劑量的范圍可以為0.01mg/kg至100mg/kg兩次/天(BID),如0.01mg/kg至 10mg/kg BID,如 0.01mg/kg 至 2mg/kg BID,包括 0.01mg/kg 至 0.2mg/kgBID。施用的化合物的量取決于特定NASP的潛力和濃度、所需的幅度或促凝血效果、NASP的固有吸收性，以及所需的胃腸吸收增強(qiáng)。
[0149]如上討論的，依賴于醫(yī)師的判斷和受試者的需要，根據(jù)給藥安排，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，如由本發(fā)明方法提供的含有NASP的組合物可以聯(lián)合其他NASP、腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑或其他治療劑，如止血劑、血液因子或其他藥物經(jīng)口施用。同樣，給藥安排可以包括，但不限于施用五次/天，四次/天，三次/天，兩次/天，一次/天，三次/周，兩
次/周，一次/周，兩次/月，一次/月，及其任意組合。
[0150]在一些實(shí)施方式中，出血障礙可以是在延長時(shí)期內(nèi)需要多個(gè)劑量的所述主題方法和組合物的慢性病癥(例如，先天或后天凝固因子缺乏)。替代地，在相對較短時(shí)期內(nèi)，例如一至兩周，以單個(gè)或多個(gè)劑量，本發(fā)明的方法和組合物可以施用以治療急性病癥(例如，由接受凝血替代療法的受試者的手術(shù)或創(chuàng)傷，或因子抑制劑/自身免疫發(fā)作引起的出血)。
[0151]在所述本發(fā)明的實(shí)施方式中，將向受試者施用一個(gè)或多個(gè)治療有效的治療周期?！爸委熡行У闹委熤芷凇笔侵府?dāng)施用時(shí)，關(guān)于治療導(dǎo)致大致所需治療響應(yīng)的治療周期。例如，一個(gè)或多個(gè)治療有效的治療周期將如通過血液凝結(jié)測定(例如，CAT, aPTT，以下詳細(xì)描述的)確定的血液凝結(jié)速率增大1%以上，如5%以上，如10%以上，如15%以上，如20%以上，如30%以上，如40%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，如95%以上，包括將血液凝塊形成速率增大99%以上。在其他情況下，一個(gè)或多個(gè)治療有效的治療周期可以將血液凝塊形成速率增大1.5-倍以上，如2-倍以上，如5-倍以上，如10-倍以上，如50-倍以上，包括將血液凝塊形成速率增大100-倍以上。在一些實(shí)施方式中，通過本發(fā)明方法治療的受試者表現(xiàn)出積極的治療響應(yīng)。“積極的治療響應(yīng)”是指受試者表現(xiàn)出在出血障礙的一個(gè)或多個(gè)癥狀方面的改善。例如，對由本發(fā)明提供的方法表現(xiàn)出積極的治療響應(yīng)的受試者可以包括但不限于這樣的響應(yīng)如縮短的血液凝結(jié)時(shí)間、減少的出血、減少的對于因子替代療法的需要或其組合。在某些實(shí)施方式中，施用多于一個(gè)的治療有效的治療周期。
[0152]如上綜述的，在實(shí)施根據(jù)某些實(shí)施方式的方法中，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，將具有促凝血量的NASP的組合物施用至受試者以增強(qiáng)受試者的血液凝固?？梢圆捎萌魏畏奖愕氖┯媚Ｊ?，只要所述組合通過胃腸上皮吸收。同樣，施用模式可以包括經(jīng)口施用或通過經(jīng)鼻胃管(例如，飼管或NG-管)。如以下更詳細(xì)地討論的，本發(fā)明的藥物組合物可以為液體溶液或混懸液、糖漿、片劑、膠囊、粉劑、凝膠或其任意組合的形式。聯(lián)合凝血因子，在具有促凝血量的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物經(jīng)口施用的情況下，如以上詳細(xì)討論的，用于NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑組分的施用模式可以與用于凝血因子的相同或不同。例如，在一些情況下，具有促凝血量的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物可以經(jīng)口施用，而凝血因子可以局部地施加(例如，作為霜劑)。在其他情況下，具有促凝血量的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物以及凝血因子二者經(jīng)口施用。
[0153]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法提供用于預(yù)防地經(jīng)口施用具有促凝血量的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物，如例如在計(jì)劃的手術(shù)之前。所述組合可以根據(jù)需要預(yù)防地施用，如在計(jì)劃程序之前一小時(shí)以上，如計(jì)劃程序之前的10小時(shí)，如在計(jì)劃程序之前24小時(shí)，并且包括在計(jì)劃程序之前一周。在一些情況下，在計(jì)劃程序之前或期間施用的組合物可以是持續(xù)釋放的制劑(例如，持續(xù)錠劑或片劑)，如以下更詳細(xì)描述的。
[0154]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物在用于治療相關(guān)或不相關(guān)病癥的其他藥劑之前、同時(shí)或之后經(jīng)口施用。如果與其他藥劑同時(shí)提供，本發(fā)明的組合物可以提供在相同或不同組合物中。因此關(guān)注的NASP和腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑藥劑其他藥劑可以通過并行治療的方式以口服劑型提供給個(gè)體。例如，格局特定口服給藥方案，并行治療可以通過施用本發(fā)明的組合物和具有至少一種其他藥劑，如止血劑或凝固因子(例如FVIII或FIX)的藥物組合物實(shí)現(xiàn)，其組合地包含治療有效劑量。類似地，聯(lián)合一種或多種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，一種或多種NASP以及治療劑可以在至少一個(gè)治療劑量中施用。單獨(dú)的藥物組合物的施用可以同時(shí)在不同時(shí)間(即，相繼地，以任一順序，在同一天或在不同天)進(jìn)行，只要在進(jìn)行治療的受試者中引起這些物質(zhì)的組合的治療效果。
[0155]組合物
[0156]本發(fā)明的方面還包括用于增強(qiáng)受試者的血液凝固的口服組合物。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，組合物包括促凝血量的NASP。組合物還包括促凝血量的NASP與胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合和凝血因子。如以上詳細(xì)描述的，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括當(dāng)經(jīng)口施用時(shí)增加由胃腸系統(tǒng)吸收的NASP的量的化合物。此外，胃腸滲透促進(jìn)劑也可以加速通過胃腸上皮的NASP吸收的啟動(即，減少用于吸收開始的時(shí)間量)以及加速越過受試者的胃腸上皮的NASP的總體運(yùn)輸速率(B卩，減少用于通過胃腸系統(tǒng)的NASP吸收完成的時(shí)間量)。
[0157]如上解釋的，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以增加由胃腸系統(tǒng)吸收的NASP的量。例如，與合適對照相比，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將由胃腸系統(tǒng)吸收的NASP的量增加5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，如95%以上。在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的口服組合物中的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑加速通過胃腸上皮的NASP吸收的啟動。例如，與合適對照相比，本發(fā)明的胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將啟動NASP吸收所需的時(shí)間量減少5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，如95%以上。在另外的其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的口服組合物中的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑增大NASP的吸收速率。例如，與合適對照相比，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將NASP的吸收速率增大2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如100%以上，如200%以上，包括500%以上。
[0158]在某些情況下，本發(fā)明的口服組合物中的胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以增大如通過Caco-2細(xì)胞模型確定的NASP的吸收。例如，與合適對照相比，本發(fā)明的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以將如通過Caco-2細(xì)胞模型確定的吸收增大2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如100%以上，如200%以上，包括500%以上。
[0159]如以上詳細(xì)討論的，聯(lián)合一種或多種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，本發(fā)明的口服組合物包括一種 或多種NASP。關(guān)注的組合物中的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以變化。在一些實(shí)施方式中，腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是緊密連接調(diào)節(jié)劑。例如，本發(fā)明的口服組合物中的緊密連接調(diào)節(jié)劑可以包括，但不限于酶，膽酸，多糖，脂肪酸及其鹽及其任意組合。
[0160]在一些情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是多糖。例如，多糖緊密連接調(diào)節(jié)劑，在某些情況下可以是脫乙酰殼多糖。脫乙酰殼多糖，如上討論的，是指通過殼多糖的N-脫乙?；苽涞?-乙酰胺-2-脫氧-β -D-吡喃葡萄糖和2-氨基-β -D-吡喃葡萄糖的線性共聚物。多糖緊密連接調(diào)節(jié)劑還可以包括脫乙酰殼多糖的衍生物如N-烷基脫乙酰殼多糖，乙?；撘阴ざ嗵?，硫醇化脫乙酰殼多糖，磷酸脫乙酰殼多糖，脫乙酰殼多糖環(huán)糊精，Ν-(氨基烷基)脫乙酰殼多糖，琥珀酰脫乙酰殼多糖和辛?；撘阴ざ嗵堑取?br> [0161]在其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是膽酸。合適的膽酸緊密連接調(diào)節(jié)劑可以包括但不限于膽酸(膽酸鹽)，脫氧膽酸(脫氧膽酸鹽)，鵝脫氧膽酸(鵝脫氧膽酸鹽)，熊脫氧膽酸(熊脫氧膽酸鹽)，甘氨膽酸(甘氨膽酸鹽)，?；悄懰??；悄懰猁})和石膽酸(石膽酸鹽)等。
[0162]在其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是酶。例如，在本發(fā)明的某些組合物中，酶緊密連接調(diào)節(jié)劑是蛋白酶，如菠蘿蛋白酶。
[0163]在另外的其他情況下，緊密連接調(diào)節(jié)劑是脂肪酸及其脂肪酸鹽。本發(fā)明的組合物中的脂肪酸緊密連接調(diào)節(jié)劑可以變化，并且可以包括中鏈脂肪酸，如例如CS (辛酸鹽)，ClO(癸酸鹽)和C12(月桂酸鹽)脂肪酸及其脂肪酸鹽中的任一種和組合。在某些情況下，例如，脂肪酸緊密連接調(diào)節(jié)劑是癸酸鈉。[0164]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的口服組合物包括兩種以上腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑。例如，組合物可以包括兩種以上緊密連接調(diào)節(jié)劑，如三種以上緊密連接調(diào)節(jié)劑，包括四種以上緊密連接調(diào)節(jié)劑。組合物可以包括緊密連接調(diào)節(jié)劑的任意組合，如例如，在其他組合中，多糖和蛋白酶，脂肪酸和多糖，多糖和膽酸，多糖、脂肪酸和膽酸，兩種不同的多糖或兩種不同的膽酸。在其中組合物包括一種以上的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的情況下，各種胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量百分比可以變化，范圍為組合物的總質(zhì)量的1%以上，如2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上并且包括組合物的總質(zhì)量的50%以上。
[0165]在某些情況下，本發(fā)明的組合物包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶。在所述組合物包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合的情況下，脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的質(zhì)量比可以變化，范圍為 1:1 至 1:2.5 ;1:2.5 至 1:5 ;1:5 至 1:10 ;1:10 至 1:25 ; 1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ;1:250 至 1:500 ;1:500 至1:1000,或其范圍。例如，脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10;1:5 至 1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000。在一些實(shí)施方式中，菠蘿蛋白酶與脫乙酰殼多糖的質(zhì)量比的范圍為1:1至1:2.5 ;1:2.5至1:5 ;1:5至1:10 ;1:10 至 1:25 ; 1:25 至 1:50 ; 1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ; 1:200 至1:250 ;1:250至1:500 ;1:500至1:1000，或其范圍。例如，菠蘿蛋白酶與脫乙酰殼多糖的質(zhì)量比的范圍可以為 1:1 至 1:10 ;1:5 至 1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000。
[0166]在本發(fā)明的組合物包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合的情況下，脫乙酰殼多糖的濃度也可以變化，范圍為約0.1%至約5%，如約0.15%至約4.5%，如0.2%至約4%，如約0.25%至約3.5%，如0.3%至約3%，如0.5%至約2.5%，包括約0.5%至1.5%。同樣，在采用脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的組合的情況下，在某些實(shí)施方式中，菠蘿蛋白酶的濃度也可以變化，范圍為約 0.01mg/mL 至約 1.0mg/mL,如約 0.2mg/mL 至約 0.9mg/mL,如 0.25mg/mL 至約0.75mg/mL,如約0.3mg/mL至約0.6mg/mL,包括約0.4mg/mL至約0.5mg/mL。在某些情況下，脫乙酰殼多糖的濃度為約3%并且菠蘿蛋白酶的濃度為約0.5mg/mL。[0167]如上所述，本發(fā)明的口服組合物的NASP是顯示促凝血活性的硫酸多糖。NASP的非-抗凝性可以使用凝結(jié)測定，包括在因子VIII和/或因子IX缺乏血漿中的校準(zhǔn)自動化的血栓記錄法(CAT)，稀促凝血酶時(shí)間(dPT)或活化部分凝血活酶時(shí)間(aPTT)凝結(jié)測定確定。非抗凝血活性的一種測定是比較所討論的NASP與已知的抗凝劑肝素。例如，NASP可以表現(xiàn)出三分之一或更低的，如十分之一或更低的未分級肝素(MW的范圍為8，000至30，000 ；平均18，000道爾頓)的抗凝血活性(通過凝結(jié)時(shí)間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性增加測量的)。因此，使用本文中詳述的各種凝結(jié)測定中的任一種，NASP可以顯示相比于肝素至少低兩倍的抗凝血活性，如相比于肝素低二至五倍或更低的抗凝血活性，并且包括相比于肝素低2至10倍或更低的抗凝血活性。
[0168]在一些實(shí)施方式中，聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，本發(fā)明的口服組合物包括天然NASP。如上討論的，天然NASP可以是從天然存在的來源發(fā)現(xiàn)或來源于其的NASP，如來自動物或植物來源并且可以涵蓋寬范圍的亞類，包括肝素的衍生物、糖胺聚糖、巖藻依聚糖、角叉菜膠、多硫酸戊聚糖、硫酸皮膚素和硫酸葡聚糖。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的天然NASP提取自生物學(xué)來源?！吧飳W(xué)來源”是指天然存在的有機(jī)體或有機(jī)體的部分。例如，關(guān)注的NASP可以提取自植物、動物、真菌或細(xì)菌。尤其是，關(guān)注的NASP可以提取自可食用海藻、褐藻、棘皮動物(例如，海膽，海參)等。例如，NASP可以通過酸堿提取、酶降解、選擇性沉積、過濾程序等而提取自生物學(xué)來源。天然NASP如提取自生物學(xué)來源的那些，包括但不限于可食用海藻和褐藻，詳細(xì)描述在于2010年2月25日提交的共同未決美國專利申請序列N0.12/449，712中，將其公開內(nèi)容以其整體通過引用結(jié)合于此。
[0169]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的天然NASP包括但不限于N-乙?；?肝素(NAH)，N-乙酸基-脫-O-硫酸 化-肝素(NA-脫-O-SH),脫-N-硫酸化-肝素(De-NSH),脫-N-硫酸化-乙酰化-肝素(De-NSAH)，高碘酸鹽氧化的肝素(POH)，化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)，化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)，化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)，硫酸葡聚糖(DXS)，肝素衍生的寡糖(HDO)，多硫酸戊聚糖酯(PPS)及其組合。在一些情況下，NASP可以是天然存在的NASP的低分子量片段。在其他情況下，天然NASP也可以包括天然存在的NASP的生物化學(xué)或化學(xué)衍生物。在某些情況下，天然NASP是巖藻依聚糖。如上所述，巖藻依聚糖是天然存在的復(fù)合硫酸多糖化合物，其可以提取自某些可食用海藻、褐藻和棘皮動物(例如，海膽，海參)。合適的NASP的實(shí)例還更詳細(xì)地描述在于2005年5月27日提交的美國專利申請序列N0.11/140，504，現(xiàn)在的美國專利N0.7，767，654以及于2011年I月13日提交的美國專利申請序列N0.13/006, 396中，將其公開內(nèi)容以其整體通過引用結(jié)合于此。
[0170]關(guān)注的NASP的平均分子量的范圍可以為約10道爾頓至約500，000道爾頓，如約100道爾頓至約300，000道爾頓，如1000道爾頓至250，000道爾頓，包括1000道爾頓至150，000道爾頓。NASP的分子量可以通過任何方便的方案確定，如例如，尤其是凝膠滲透色譜或高效尺寸排阻色譜法(HPSEC)、毛細(xì)管電泳法、PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)、瓊脂凝膠電泳。
[0171]在一些實(shí)施方式中，關(guān)注的NASP可以是具有不同分子量的硫酸多糖的異質(zhì)混合物。例如，在一些情況下，5%以上的NASP組成的分子量的范圍為10至30，000道爾頓，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，包括95%以上的NASP組成的分子量的范圍為10至30，000道爾頓。在其他實(shí)施方式中，5%以上的NASP組成的分子量的范圍為30，000道爾頓至75，000道爾頓，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，包括95%以上的NASP組成的分子量的范圍為30，000至75，000道爾頓。在另外的其他實(shí)施方式中，5%以上的NASP組成的分子量大于75，000道爾頓，如10%以上，如25%以上，如50%以上，如75%以上，如90%以上，包括95%以上的NASP組成的分子量大于75，000道爾頓。
[0172]在某些實(shí)施方式中，低分子量NASP可以用于增強(qiáng)血液凝固，如通過本發(fā)明的方法和組合物提供的。“低分子量NASP”是指NASP的重均分子量的范圍為約10至30，000道爾頓，如例如100至30，000道爾頓，如500至25，000道爾頓，如1000至15，000道爾頓并且包括5000至10，000道爾頓。低分子量NASP的實(shí)例可以包括，但不限于天然存在的或合成NASP,其分子量范圍為10至30，000道爾頓，如5000至10，000道爾頓，通過酸或酶水解更大分子量NASP產(chǎn)生的較大分子量NASP的片段，或可以是來自分級NASP樣品的分子量范圍為10至30，000道爾頓，如5000至10，000道爾頓的分離級分。
[0173]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物包括胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑(例如，癸酸鈉，脫氧膽酸鹽，菠蘿蛋白酶或脫乙酰殼多糖)和低分子量天然NASP。例如，聯(lián)合胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑，關(guān)注的組合物可以包括分子量為20，000道爾頓以下的水皰墨角藻巖藻依聚糖。例如，聯(lián)合脫氧膽酸鹽、菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖中的一種或多種，關(guān)注的組合物可以包括水皰墨角藻F.V.DS1001108、水皰墨角藻F.v.SK110144B中的一種或多種。在另一個(gè)實(shí)例中，聯(lián)合脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的混合物，關(guān)注的組合物可以包括水皰墨角藻F.^051001108、水皰墨角藻？1.51(1101448中的一種或多種。在某些其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物包括胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑(例如，癸酸鈉，脫氧膽酸鹽，菠蘿蛋白酶或脫乙酰殼多糖)和低分子量合成NASP。例如，聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，某些組合物可以包括分子量為25，000道爾頓以下的硫酸6-羧基艾考糊精、硫酸β -環(huán)糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種。例如，聯(lián)合脫氧膽酸鹽、菠蘿蛋白酶和脫乙酰殼多糖中的一種或多種，關(guān)注的組合物可以包括24，000道爾頓硫酸6-羧基艾考糊精、14，000道爾頓硫酸6-羧基艾考糊精、硫酸環(huán) 糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種。在另一個(gè)實(shí)例中，聯(lián)合脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶的混合物，關(guān)注的組合物可以包括24，000道爾頓硫酸6-羧基艾考糊精、14，000道爾頓硫酸6-羧基艾考糊精、硫酸β -環(huán)糊精和硫酸麥芽五糖中的一種或多種。
[0174]在一些實(shí)施方式中，NASP提取自生物學(xué)來源并且可以被分級以分離低分子量NASP(即，分子量范圍為10-30，000道爾頓的NASP的級分)?？梢允褂萌魏畏奖愕姆桨竵韺﹃P(guān)注的NASP分級，包括但不限于尺寸排阻色譜法，凝膠滲透色譜法、毛細(xì)管電泳等。
[0175]在某些情況下，通過分級NASP樣品獲得的低分子量NASP可以用于增強(qiáng)血液凝固，如通過本發(fā)明的方法和組合物提供的。例如，提取自生物學(xué)來源的NASP可以被分級以分離分子量范圍為10至30，000道爾頓，如10至5000道爾頓，如5000至10，000道爾頓，如10，000至15，000道爾頓，并且包括15，000至30，000道爾頓的NASP。在某些實(shí)施方式中，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，這些級分中的一種或多種可以經(jīng)口施用用于增強(qiáng)受試者的血液凝固，如通過上述的方法。
[0176]在某些實(shí)施方式中，不同分子量級分可以通過酸水解或自由基解聚高分子量NASP制備。所得產(chǎn)物的分子量范圍可以基于所采用的水解或解聚條件的嚴(yán)格性進(jìn)行調(diào)整。然后級分可以使用離子交換色譜法進(jìn)一步純化。例如，為了獲得中等或低分子量的NASP級分，高分子量NASP可以使用濃度范圍為0.02至1.5M的酸如如HCl (或任何其他合適的酸)并且在溫度范圍為25°C至80°C下進(jìn)行水解。水解反應(yīng)時(shí)間典型的范圍為15分鐘至若干小時(shí)。所得水解反應(yīng)混合物然后通過添加堿(例如，氫氧化鈉)中和。隨后除去鹽，例如，通過電滲析，并且使用用于碳水化合物分析的常規(guī)分析技術(shù)，分析水解產(chǎn)物以確定重均分子量、糖含量和硫含量。替代地，可以采用酶方法來降解NASP，使用例如糖苷酶。用于本發(fā)明的NASP可以是異質(zhì)的或同質(zhì)的，這取決于采用的分離程度。
[0177]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的口服組合物包括凝血因子，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑和巖藻依聚糖，如例如，巖藻依聚糖5307002，水皰墨角藻，最大MW峰值126.7kD ；巖藻依聚糖VG49，水皰墨角藻，較低MW的5307002的水解樣品，最大MW峰值22.5kD ;巖藻依聚糖VG57，裙帶菜，高電荷(高硫酸化，去乙酰化的)；巖藻依聚糖GFS (5508005)，裙帶菜，去熱原的；巖藻依聚糖GFS(L/FVF-01091)，水皰墨角藻，去熱原的，最大MW峰值125kD ；巖藻依聚糖GFS (L/FVF-01092)，水皰墨角藻，去熱原的，最大欄峰值260kD ;巖藻依聚糖GFS (L/FVF-01093)，水皰墨角藻，水解去熱原的，最大MW峰值36kD ； Maritech?邊花昆布提取物；Maritedi⑩ Ecklonia maxima 提取物；Maritech? 巨藻提取物；Maritech?.免疫試驗(yàn)巖藻依聚糖混合物；及其任意組合。
[0178]在其他實(shí)施方式中，聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，本發(fā)明的口服組合物可以包括合成NASP。合成NASP是硫酸多糖，其通過人工方法(例如，化學(xué)合成)產(chǎn)生的部分或全部。例如，合成NASP可以是硫酸低聚物，如硫酸寡糖或脂族硫酸酯。在某些情況下，合成NASP是硫酸戊糖，硫酸己糖或硫酸環(huán)糊精。例如，合成NASP可以包括，但不限于硫酸麥芽五糖，硫酸β環(huán)糊精，硫酸6-羧基艾考糊精及其衍生物。
[0179]本發(fā)明的口服組合物可以根據(jù)需要包括一種或多種NASP。例如，可以組合兩種以上的NASP，如三種以上的NASP并且包括四種以上的NASP。在將一種以上的NASP組合在一起的情況下，所有的NASP可以是天然NASP，所有的NASP可以是合成NASP或其任意組合。在口服組合物包括一種以上的NASP的情況下，組合物中的各種NASP的質(zhì)量百分比可以變化，范圍為組合物的總質(zhì)量的1%以上，如2%以上，如5%以上，如10%以上，如25%以上并且包括組合物的總質(zhì)量的50%以上。`
[0180]在本發(fā)明的實(shí)施方式中，口服組合物中一種或多種NASP和一種或多種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比可以變化，范圍為1:1至1:2.5 ；1:2.5至1:5 ;1:5至1:10 ；1:10至 1:25 ;1:25 至 1:50 ; 1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ;1:250至1:500 ; 1:500至1:1000，或其范圍。例如，NASP與胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比的范圍可以為 1:1 至 1:10 ;1:5 至 1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或1:100至1:1000。在一些實(shí)施方式中，胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與NASP的質(zhì)量比的范圍為 1:1 至 1:2.5 ;1:2.5 至 1:5 ;1:5 至 1:10 ;1:10 至 1:25 ;1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ; 1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ; 1:250 至 1:500 ; 1:500 至 1:1000，或其范圍。例如，胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與NASP的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10 ;1:5至1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000。
[0181]另外，本發(fā)明的口服組合物也可以包括一種或多種凝血因子。例如，組合物可以包括一定量的一種或多種NASP和一種或多種腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，聯(lián)合一種或多種凝血因子。關(guān)注的凝血因子包括但不限于因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，高分子量激肽原(HMWK)，因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II，因子Vila，和馮維勒布蘭德因子，因子Xa，因子IXa，因子XIa，因子Xlla，和Villa，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原，組織因子，因子Vila，因子Va，和因子Xa。
[0182]關(guān)注的口服組合物中的NASP、胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑和凝血因子中每一種的量(即，質(zhì)量)可以變化，范圍為0.0Olmg至1000mg,如0.01mg至500mg,如0.1mg至250mg,如0.5mg至IOOmg,如Img至50mg,包括Img至10mg。同樣，在主題組合物中，NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與凝血因子的質(zhì)量比可以變化，并且在一些情況下，范圍可以為1:1至 1:2.5 ;1:2.5 至 1:5 ; 1:5 至 1:10 ;1:10 至 1:25 ; 1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至1:150 ;1:150 至 1:200 ;1:200 至 1:250 ;1:250 至 1:500 ;1:500 至 1:1000，或其范圍。例如，NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑與凝血因子的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10;1:5至1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000。在一些實(shí)施方式中，凝血因子與NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的質(zhì)量比的范圍為1:1至1:2.5 ;1:2.5至 1:5 ;1:5 至 1:10 ;1:10 至 1:25 ;1:25 至 1:50 ;1:50 至 1:100 ;1:100 至 1:150 ;1:150 至1:200 ；1:200至1:250 ；1:250至1:500 ；1:500至1:1000，或其范圍。例如，凝血因子與含有NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的組合物的質(zhì)量比的范圍可以為1:1至1:10 ; 1:5至1:25 ;1:10 至 1:50 ;1:25 至 1:100 ;1:50 至 1:500;或 1:100 至 1:1000。
[0183]口服組合物可以是均質(zhì)的，僅含有單一類型的NASP和單一類型的胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑。在其他實(shí)施方式中，關(guān)注的組合物是兩種以上NASPs或兩種以上胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑的異質(zhì)混合物。例如，異質(zhì)混合物可以含有兩種以上NASP和兩種以上胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑。 在其他情況下，異質(zhì)混合物可以含有一種NASP和兩種以上胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑。在另外的其他情況下，異質(zhì)混合物可以含有兩種以上NASP和一種胃腸上皮屏障滲透促進(jìn)劑。
[0184]在某些實(shí)施方 式中，本發(fā)明的口服組合物可以進(jìn)一步包括一種或多種藥用賦形劑或口服遞送媒介物作為藥物組合物的一部分。賦形劑可以包括可以包括，但不限于，碳水化合物，無機(jī)鹽，抗菌劑，抗氧化劑，表面活性劑，水，醇，多元醇，甘油，植物油，磷脂，緩沖劑，酸，堿，及其任意組合。也可以采用碳水化合物如糖，衍生化糖如糖醇，糖醛酸，酯化糖和/或糖聚合物。關(guān)注的一些碳水化合物賦形劑包括例如單糖，如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；二糖，如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多糖，如棉子糖、松三糖、麥芽糊精、糊精、淀粉等；和糖醇，如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、拉克替醇(Iactitol)、木糖醇、山梨糖醇(普糖醇)、吡喃糖基山梨糖醇，肌醇等。無機(jī)鹽可以包括，但不限于檸檬酸、氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、硝酸鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉，及其任意組合。
[0185]在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的口服組合物也可以包括用于防止或抑制微生物生長的抗菌劑，如例如苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲醇、西吡氯銨、三氯叔丁醇、苯酚、苯乙基醇、硝酸苯萊、硫柳萊(thimersol),及其任意組合。
[0186]還可以采用一種或多種抗氧化劑。抗氧化劑，其可以減少或防止組合物的氧化及由此的劣化，可以包括，例如，抗壞血酸棕櫚酸酯(ascorbyl palmitate)、丁輕茴醚、丁輕甲苯，次磷酸，硫代甘油(monothioglycerol)、沒食子酸丙酯,亞硫酸氫鈉，甲醒次硫酸鈉，偏亞硫酸氫鈉及其任意組合。[0187]一種或多種表面活性劑也可以包含在本發(fā)明的組合物中。例如，合適的表面活性劑可以包括，但不限于聚山梨醇酯，如〃Tween20〃和"TweenSO，〃以及普流羅尼類(pluronics)如 F68 和 F88 (BASF,Mount Olive,New Jersey);脫水山梨糖醇酯;脂質(zhì)，如磷脂如卵磷脂和其他磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺(盡管優(yōu)選不是脂質(zhì)體形式)，脂肪酸和脂肪酯；甾醇，如膽固醇；螯合劑；如EDTA ;和鋅及其他陽離子。
[0188]酸或堿也可以存在于本發(fā)明的口服組合物中。例如，酸可以包括但不限于鹽酸、乙酸、磷酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、甲酸、三氯乙酸、硝酸、高氯酸、磷酸、硫酸、富馬酸及其任意組合。堿的實(shí)例包括但不限于氫氧化鈉、乙酸鈉、氫氧化銨、氫氧化鉀、乙酸銨、乙酸鉀、磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉、甲酸鈉、硫酸鈉、硫酸鉀、富馬酸鎵，及其任意組合。
[0189]口服組合物中任何個(gè)體賦形劑的量將根據(jù)賦形劑的性質(zhì)和功能、口服遞送媒介物和組合物的特定需要而變化。典型地，任何個(gè)體賦形劑的最佳量通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)，即通過制備含有變化量的賦形劑(范圍為低至高)的組合物、檢查穩(wěn)定性和其他參數(shù)，然后確定在沒有顯著有害作用下獲得最佳性能的范圍來確定。然而，一般地，賦形劑在口服組合物中存在的量為約1%至約99%重量，如約5%至約98%重量，如約15至約95%重量的賦形劑，包括少于30%重量。藥物賦形劑連同在關(guān)注的組合物中可以采用的其他賦形劑描述在"Remington:The Science&Practice of Pharmacy",19th ed., ffilliams&ffilliams,(1995), the//Physician> s Desk Reference", 52nd ed., Medical Economics, Montvale,NJ(1998), 和 Kibbe, A.H., Handbook of Pharmaceutical Excipients,3rd Edition,American Pharmaceutical Association, Washington, D.C., 2000 中，將其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合于此。
[0190]如上所述，本發(fā)明的組合物可以通過任何方便的施用模式施用，只要所述組合物通過胃腸上皮吸收(例如，經(jīng)口或通過鼻胃管)。同樣，制劑可以變化。例如，本發(fā)明的組合物可以為可以在使用前用溶劑重建的粉劑或凍干物、用于在使用前與媒介物組合的干不溶組合物，以及用于施用前稀釋的乳液和液體濃縮物。用于重建固體組合物的稀釋劑可以包括，但不限于注射用抑菌水、在水中的葡萄糖5%、磷酸緩沖鹽水、林格溶液(Ringer’ssolution)、鹽水、無菌水、去離子水，及其任意組合物。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物可以為用于通過鼻胃管攝取`或施加的液體溶液或混懸液、糖漿、片劑、膠囊、粉末、凝膠或其任意組合的形式。例如，本發(fā)明的口服組合物可以預(yù)先加載到片劑、膠囊、囊劑裝置等中，這取決于所需的用途。在某些實(shí)施方式中，所述組合物在單位劑型中，使得所述組合物的量準(zhǔn)備在單個(gè)口服劑量中，為預(yù)測量或預(yù)包裝形式。
[0191]應(yīng)用
[0192]所述主題方法和組合物可用于這樣的任何情形，其中期望增強(qiáng)受試者的血液凝固、期望增強(qiáng)NASP通過胃腸系統(tǒng)的吸收并且受試者對用NASP和腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的治療是響應(yīng)性的。在某些實(shí)施方式中，所述主題方法和組合物可以用來治療出血障礙，如慢性或急性出血障礙，由出血因子缺乏引起的先天凝血障礙，后天凝血障礙以及使用抗凝血劑。例如，出血障礙可以包括，但不限于血友病A，血友病B，馮維勒布蘭德病，特發(fā)性血小板減少，缺乏一種或多種接觸因子，如因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原(HMWK)，缺乏一種或多種與臨床大量出血相關(guān)的因子，如因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II (低凝血酶原血癥)，和馮維勒布蘭德因子，維生素K缺乏，纖維蛋白原障礙，包括脫纖維蛋白原血，低纖維蛋白原血，和異常纖維蛋白原血癥，α2-抗纖維蛋白溶酶缺乏，以及過度出血如由肝病，腎病，血小板減少，血小板功能障礙，血腫，內(nèi)出血，關(guān)節(jié)積血，手術(shù)，創(chuàng)傷，體溫過低，行經(jīng)和懷孕引起的。
[0193]所述主題方法和組合物還可用于增強(qiáng)血液凝固以治療由血液因子缺乏引起的先天凝血障礙或后天凝血障礙。血液因子缺乏可以由缺乏一種或多種因子，包括但不限于，因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子XI，因子XII，因子XIII和馮維勒布蘭德因子所引起。
[0194]所述主題方法和組合物還可用于增強(qiáng)血液凝固以在治療出血障礙中改善止血，如與取法凝固因子相關(guān)的那些，或用于反轉(zhuǎn)受試者的抗凝血劑的影響。例如，通過本發(fā)明的方法和組合物增強(qiáng)血液凝固可以用來治療出血障礙如先天凝血障礙，后天凝固障礙，和由創(chuàng)傷誘發(fā)的出血性障礙?？梢杂肗ASP和腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑治療的出血障礙的實(shí)例包括，但不限于，血友病Α，血友病B，馮維勒布蘭德病，特發(fā)性血小板減少，缺乏一種或多種接觸因子，如因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原(HMWK)，缺乏一種或多種與臨床大量出血相關(guān)的因子，如因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II (低凝血酶原血癥)，和馮維勒布蘭德因子，維生素K缺乏，纖維蛋白原障礙，包括脫纖維蛋白原血，低纖維蛋白原血，和異常纖維蛋白原血癥，Ci2-抗纖維蛋白溶酶缺乏，和過度出血如由肝病，腎病，血小板減少，血小板功能障礙，血腫，內(nèi)出血,關(guān)節(jié)積血,手術(shù),創(chuàng)傷,體溫過低，行經(jīng)，和懷孕引起的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物用來治療先天凝血障礙，包括血友病Α，血友病B，和馮維勒布蘭德病。在其他實(shí)施方式中，NASP用來治療后天凝固障礙，包括缺乏因子VIII，馮維勒布蘭德因子，因子IX，因子V，因子XI，因子XII和因子XIII，尤其是由針對凝血因子的抑制劑或自身免疫性引起的障礙，或由導(dǎo)致減少凝固因子合成的疾病或病癥引起的止血障礙。
[0195]在一些實(shí)施方式中，出血障礙可以是在延長時(shí)期內(nèi)需要多個(gè)劑量的所述主題方法和組合物的慢性病癥(例如，先天或后天凝固因子缺乏)。替代地，本發(fā)明的方法的組合物可以在相對較短時(shí)期，例如一至二周內(nèi)以單個(gè)或多個(gè)劑量經(jīng)口施用以治療急性病癥(例如，接受凝固替代療法的受試者的由手術(shù)或創(chuàng)傷、或因子抑制劑/自身免疫發(fā)作引起的出血)O
[0196]所述主題方法和組合物還可用于增強(qiáng)經(jīng)過手術(shù)或侵入性程序的受試者的血液凝固。
[0197]所述主題方法和組合物還可用于增強(qiáng)血液凝固以反轉(zhuǎn)抗凝劑在受試者中的作用，所述方法包括聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，向受試者施用治療有效量的包含促凝血量的NASP的組合物。在某些實(shí)施方式中，受試者可以已用抗凝劑治療，包括，但不限于，肝素，香豆素衍生物，如華法林或雙香豆素，TFPI，AT III，狼瘡抗凝劑，線蟲抗凝肽(NAPc2)，活性位點(diǎn)阻斷因子VIIa(因子VIIai)，因子IXa抑制劑，因子Xa抑制劑，包括磺達(dá)肝素，艾卓肝素，DX-9065a，和雷扎沙班(DPC906)，因子Va和VIIIa的抑制劑，包括活化蛋白C(APC)和可溶血栓調(diào)節(jié)蛋白，凝血酶抑制劑，包括水蛭素，比伐盧定，阿加曲班，和希美加群。在某些實(shí)施方式中，受試者中的抗凝劑可以是結(jié)合凝結(jié)因子的抗體，包括但不限于，結(jié)合因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II，因子XI，因子XII，馮維勒布蘭德因子，前激肽釋放酶，或高分子量激肽原(HMWK)的抗體。[0198]在另一方面，本發(fā)明提供一種用于治療經(jīng)過其中期望改善血液凝結(jié)的手術(shù)或侵入性程序的受試者的方法，所述方法包括聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，向受試者經(jīng)口施用治療有效量的如本文詳細(xì)描述的包含促凝血量的NASP的組合物。在某些實(shí)施方式中，NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑可以與一種或多種不同的NASP和一種或多種不同的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，和/或聯(lián)合一種或多種其他治療劑共同施用至經(jīng)過手術(shù)或侵入性程序的受試者。例如，受試者可以施用治療有效量的一種或多種選自由以下各項(xiàng)組成的組中的因子:因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，高分子量激肽原(HMWK)，因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II，因子Vila，和馮維勒布蘭德因子。治療可以進(jìn)一步包括施用促凝血劑，如內(nèi)在凝固途徑的激活劑，包括因子Xa，因子IXa，因子XIa，因子Xlla，和Villa，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原；或外在凝固途徑的激活劑，包括組織因子，因子Vila，因子Va，和因子Xa。用來治療經(jīng)過手術(shù)或侵入性程序的受試者的治療劑可以在相同或不同組合物中并且在施用NASP和腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑的同時(shí)、之前或之后施用。
[0199]如上所公開的，還可以采用止血劑、血液因子和藥物。例如，受試者可以施用一種或多種凝血因子，如因子XI，因子XII，前激肽釋放酶，高分子量激肽原(HMWK)，因子V，因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，因子XIII，因子II，因子Vila，馮維勒布蘭德因子，因子Xa，因子IXa，因子XIa，因子Xlla，和Villa，前激肽釋放酶，和高分子量激肽原，組織因子，因子Vila，因子Va，和因子Xa。
[0200]試劑盒
[0201]還提供了用于實(shí)施主題方法的試劑盒，其中所述試劑盒可以包括一種或多種上述組合物，例如，NASP組合物，胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑組合物和/或凝血因子，如上所述。所述試劑盒可以進(jìn)一步包括其他組分，例如，施用裝置、流體源等，其可以用于實(shí)施主題方法。各種組分可以如所需地包裝，例如一起或單獨(dú)地包裝。
[0202]除了上述組分外，主題試劑盒可以進(jìn)一步包括用于將所述試劑盒的組分用來實(shí)施主題方法的說明書。用于實(shí)施 主題方法的說明書通常記錄在合適的記錄介質(zhì)上。例如，說明書可以打印如在紙或塑料等上。同樣，說明書可以作為包裝插入物存在于試劑盒中，在試劑盒及其組分的容器的標(biāo)簽中(即，與包裝或子包裝相關(guān))等。在其他實(shí)施方式中，說明書作為存在于合適計(jì)算機(jī)可讀存儲介質(zhì)例如CD-ROM，軟磁盤等上的電子存儲數(shù)據(jù)文件存在。在另外的其他實(shí)施方式中，實(shí)際的說明書不存在于試劑盒中，而是提供用于從遠(yuǎn)程資源獲得說明書的手段，例如經(jīng)由互聯(lián)網(wǎng)。這種實(shí)施方式的實(shí)例是包括網(wǎng)址的試劑盒，在哪里說明書可以閱讀和/或可以從其下載說明書。如同說明書一樣，這種用于獲得說明書的手段記錄在合適基底上。
[0203]實(shí)驗(yàn)
[0204]提供以下實(shí)施例僅用于舉例說明的目的，而不用來以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0205]已經(jīng)努力確保關(guān)于所使用的數(shù)值(例如，量，溫度等)的準(zhǔn)確性，但是一些實(shí)驗(yàn)誤差和變差當(dāng)然應(yīng)該被允許。
[0206]聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，NASP的生物利用度和吸收研究
[0207]聯(lián)合關(guān)注的腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，NASP的生物利用度使用CaCo-2細(xì)胞模型篩選進(jìn)行研究。這種方法利用表達(dá)在其細(xì)胞膜上寬范圍的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的人結(jié)腸癌細(xì)胞系。細(xì)胞層在分成兩個(gè)隔室的膜表面上生長(24-孔板)。用于這些實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)裝置的實(shí)例如圖1所示。所選的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑樣品以lmg/mL的濃度溶解在RPMI細(xì)胞培養(yǎng)基中，并施加到在頂端隔室中的細(xì)胞上。細(xì)胞在37°C在5%C02中溫育。在不同時(shí)間點(diǎn)從底外側(cè)和頂端隔室移出培養(yǎng)基樣品。通過測量跨上皮細(xì)胞電阻(TEER)監(jiān)控細(xì)胞層的狀況。通過凝血酶傳代測定(CAT)分析樣品?；趤碜訡AT測定的活性計(jì)算NASP濃度。凝血酶傳代測定和其他學(xué)院凝固測定的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)描述在與2005年5月27日提交的美國專利申請序列N0.11/140，504，現(xiàn)在的美國專利N0.7，767，654以及于2011年I月13日提交的美國專利申請序列N0.13/006, 396中，將其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合于此。
[0208]所有的NASP和胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑樣品以樣品濃度在增大促凝血活性的范圍內(nèi)的方式進(jìn)行稀釋?；诔跏技虞d濃度值，頂端和底外側(cè)濃度以2小時(shí)增量(例如，2小時(shí)，4小時(shí)，6小時(shí)，8小時(shí)，包括24小時(shí))確定?；谒_定的底外側(cè)濃度，對化合物(即，NASP和腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑)的每種組合確定吸收百分比。
[0209]本文中描述的吸收研究的一個(gè)實(shí)例顯示在表1-3中，這些表概括了聯(lián)合腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，在Caco-2細(xì)胞模型中NASP，巖藻依聚糖F.V.1091，菠蘿蛋白酶(0.5mg/mL)的頂端(apical)和底外側(cè)(basolateral)濃度。表1顯示聯(lián)合菠蘿蛋白酶，F(xiàn).v.L/FVF1091的開始頂端濃度為約840 μ g/mL。在約8小時(shí)之后，F(xiàn).v.L/FVF1091的頂端濃度降低約25%至平均為約627 μ g/mL。
[0210]表1:
[0211]
【權(quán)利要求】
1.一種增強(qiáng)受試者的血液凝固的方法，所述方法包括: 以足以增強(qiáng)所述受試者的血液凝固的方式，聯(lián)合胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑，向所述受試者經(jīng)口施用促凝血量的非抗凝血的硫酸多糖(NASP)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中向所述受試者施用的所述NASP的量的范圍為0.01mg/kg 至約 100mg/kg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述NASP是天然或合成的NASP。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述NASP是選自由以下各項(xiàng)組成的組中的天然NASP:N-乙酰基-肝素(NAH)、N_乙酰基-脫-O-硫酸化-肝素(NA-脫-o_SH)、脫-N-硫酸化-肝素(De-NSH)、脫-N-硫酸化-乙?；?肝素(De-NSAH)、高碘酸鹽氧化的肝素(ΡΟΗ)、化學(xué)硫酸化的昆布多糖(CSL)、化學(xué)硫酸化的海藻酸(CSAA)、化學(xué)硫酸化的果膠(CSP)、硫酸葡聚糖(DXS)、肝素衍生的寡糖(HDO)、多硫酸戊聚糖酯(PPS)和巖藻依聚糖、及其組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述NASP選自由以下各項(xiàng)組成的組中的合成NASP:硫酸 低聚物、硫酸戊糖、硫酸己糖或硫酸環(huán)糊精。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是選自由以下各項(xiàng)組成的組中的緊密連接調(diào)節(jié)劑:蛋白酶、膽酸、多糖、脂肪酸及其鹽、及其組口 ο
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑選自由以下各項(xiàng)組成的組:菠蘿蛋白酶或其酶組分、脫氧膽酸鹽、脫乙酰殼多糖、癸酸鈉或其組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括脫乙酰殼多糖和菠蘿蛋白酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法還包括向所述受試者施用一種或多種選自由以下各項(xiàng)組成的組中的因子:因子X1、因子XI1、前激肽釋放酶、高分子量激肽原(HMWK)、因子V、因子VI1、因子VII1、因子IX、因子X、因子XII1、因子I1、馮維勒布蘭德因子、組織因子、因子Vila、因子Va、和因子Xa、因子IXa、因子XIa、因子Xlla、和Villa。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者: (a)具有選自以下各項(xiàng)組成的組中的出血障礙:慢性或急性出血障礙、由出血因子缺乏引起的先天凝血障礙、和后天凝血障礙；或 (b)由于抗凝劑施用前而需要增強(qiáng)的血液凝固；或 (C)由于手術(shù)或其他侵入性程序而需要增強(qiáng)的血液凝固。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法是抑制所述受試者的TFPI活性的方法。
12.—種口服組合物，包含: (a)促凝血量的非抗凝血的硫酸多糖(NASP)； (b)腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑；和 (c)口服遞送媒介物； 其中所述口服組合物為單位劑型。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的口服組合物，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑是選自由以下各項(xiàng)組成的組中的緊密連接調(diào)節(jié)劑:蛋白酶、膽酸、多糖、脂肪酸及其鹽、及其組合。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的口服組合物，其中所述緊密連接調(diào)節(jié)劑選自由以下各項(xiàng)組成的組:菠蘿蛋白酶或其酶組分、脫氧膽酸鹽、脫乙酰殼多糖、癸酸鈉或其組合。
15.根據(jù)權(quán)利要求15所述的口服組合物，其中所述胃腸道上皮屏障滲透促進(jìn)劑包括脫乙酰殼多糖和菠 蘿蛋白酶。
【文檔編號】A61K38/17GK103841979SQ201280035040
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2012年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月19日
【發(fā)明者】彼得·圖雷切克, 蘇珊娜·韋德 申請人:百特國際有限公司, 百特醫(yī)療產(chǎn)品股份有限公司