口腔疾患的預(yù)防或治療劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種口腔疾患的預(yù)防及/或治療劑，是把從卷曲乳桿菌(Lactobacillus?crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus?fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus?gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcus?mitis)中選出的、并具有以下(1)～(6)所有性質(zhì)的1種或2種以上的乳酸菌作為有效成分，(1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力；(2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力；(3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性；(4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用；(5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性；(6)沒有齲齒性。采用本發(fā)明，可以抑制由口腔細(xì)菌引起的揮發(fā)性硫黃化合物的產(chǎn)生，且沒有齲齒性及感染性心內(nèi)膜炎的致病性，可有效安全地預(yù)防及/或治療口腔疾患。
【專利說明】口腔疾患的預(yù)防或治療劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種預(yù)防、改善及/或治療齲齒癥、牙周病、口臭等口腔疾患或不適癥狀的口腔疾患的預(yù)防或治療劑。
【背景技術(shù)】
[0002]從看不見的審美角度而言，口臭在影響舒適的個人生活及社會生活方面有著重要意義。根據(jù)針對口臭對口腔QOUqualityof life:生活質(zhì)量)的影響進(jìn)行定量測試的報告顯示，這種影響甚至大于形態(tài)審美因素(非專利文獻(xiàn)I)。并且，在快速進(jìn)入老齡化社會的日本，口臭還有可能讓老年人的護(hù)理變得更加困難(非專利文獻(xiàn)2)。
[0003]口臭的主要原因是硫化氫、甲硫醇、二甲基硫醚這3種揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)(非專利文獻(xiàn)3、4)。VSC是由于口腔內(nèi)剝離的上皮細(xì)胞及白血球殘骸、食物等中包含的半胱氨酸、蛋氨酸等被口腔細(xì)菌分解而產(chǎn)生的。據(jù)資料報道(非專利文獻(xiàn)5)，在使用口腔細(xì)菌進(jìn)行的培養(yǎng)試驗(yàn)中，梭桿菌屬、葉啉單胞菌屬、小韋榮球菌屬及螺旋菌等牙周病原菌會產(chǎn)生大量的VSC。另外,從口腔內(nèi)分離出的olis乳酸桿菌(Lactobacillusolis)也具有很強(qiáng)的產(chǎn)生VSC的能力。另據(jù)資料報道(非專利文獻(xiàn)6)，VSC除本身具有強(qiáng)烈的難聞氣味外，即使在低濃度狀態(tài)下也對活體組織有毒性，所以它不僅僅是一種形成口臭的誘因物質(zhì)，還很可能是導(dǎo)致牙周病病情加劇的因素。因此，抑制由口腔細(xì)菌、尤其是牙周病原菌產(chǎn)生的VSC，預(yù)防或改善口臭的產(chǎn)生，不僅能提高Q0L，在保持口腔健康方面也具有非常重要的意義。
[0004]近年來，益活菌 技術(shù)也被嘗試著利用到口腔內(nèi)，例如，有報道稱，唾液乳酸桿菌(Lactobacillus salivarius) TI2711株(專利文獻(xiàn)I)在口臭、頻齒癥、牙周病、口腔內(nèi)感染癥等方面有效。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0006]專利文獻(xiàn)
[0007]專利文獻(xiàn)1:日本發(fā)明專利特許第4203855號公報
[0008]非專利文獻(xiàn)
[0009]非專利文獻(xiàn)1:日公衛(wèi)志49、2002、p298
[0010]非專利文獻(xiàn)2:(財)醫(yī)療經(jīng)濟(jì)研究機(jī)構(gòu)平成7年度調(diào)查研究報告
[0011]非專利文獻(xiàn)3:Arch Oral Bioll6、1971:587-597
[0012]非專利文獻(xiàn)4:1nt.Dent.J28、1978:309-319
[0013]非專利文獻(xiàn)5: 口腔衛(wèi)生會志51、2001、p778_792
[0014]非專利文獻(xiàn)6:新瀉齒學(xué)會志32、2002、p309_310
[0015]非專利文獻(xiàn)7:JMedMicrobiol39、1991:179-182
[0016]非專利文獻(xiàn)8:Eur J Clin Microbiol Infect Dis24、2005:31-40
[0017]非專利文獻(xiàn)9:Journal of Infection53>2006:e5_el0

【發(fā)明內(nèi)容】
[0018]發(fā)明要解決的課題
[0019]但另一方面，口腔內(nèi)的乳酸桿菌屬及鏈球菌屬細(xì)菌被認(rèn)為有可能是導(dǎo)致齲齒及感染性心內(nèi)膜炎的原因之一。表兄鏈球菌(Streptococcussobrinus)是已知的頻齒細(xì)菌,其有害性超過了變形鏈球菌(Streptococcus mutans),是在臨床領(lǐng)域作為導(dǎo)致頻齒的原因而受到關(guān)注的細(xì)菌。此外據(jù)資料報道，最經(jīng)常被檢測出的感染性心內(nèi)膜炎的成因微生物為血鏈球菌(Streptococcus sanguinis)、口腔鏈球菌(Streptococcus oralis)等口腔內(nèi)的鏈球菌屬細(xì)菌(非專利文獻(xiàn)7)，在乳酸桿菌屬細(xì)菌中，也存在誘發(fā)心內(nèi)膜炎的菌株(非專利文獻(xiàn) 8、9)。
[0020]因此，為使口腔內(nèi)菌群健全化而使用的細(xì)菌最好能夠抑制VSC的產(chǎn)生，并且沒有齲齒性及感染性心內(nèi)膜炎致病性，但至今為止還沒有報道過發(fā)現(xiàn)具有這些性質(zhì)的安全菌種。
[0021]因此，本發(fā)明的課題是，提供一種新型乳酸菌株以及利用該菌株預(yù)防、改善及/或治療口腔疾患或不適癥狀的口腔疾患的預(yù)防或治療劑，其能夠抑制由口腔細(xì)菌引起的揮發(fā)性硫黃化合物的產(chǎn)生，并且沒有齲齒性及感染性心內(nèi)膜炎致病性，在口腔內(nèi)是安全的。
[0022]解決課題的方法
[0023]本發(fā)明人通過專心對口腔內(nèi)微生物的研究發(fā)現(xiàn),屬于卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)及緩癥 鏈球菌(Streptococcus mitis)等的特定乳酸菌,與齒面及口腔內(nèi)細(xì)胞的粘合性非常高，具有阻礙口臭成因菌的牙周病原菌增殖的作用，能夠抑制VSC的產(chǎn)生，并且乳酸菌本身不會產(chǎn)生VSC及非水溶性葡聚糖。此外還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，該乳酸菌沒有齲齒性及感染性心內(nèi)膜炎致病性，是可用于口腔內(nèi)菌群健全化的有用細(xì)菌，由此完成了本發(fā)明。
[0024]也就是說，本發(fā)明提供一種口腔疾患的預(yù)防或治療劑，是把從卷曲乳桿菌(Lacto bacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌作為有效成分。
[0025](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0026](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0027](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0028](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0029](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0030](6)沒有齲齒性
[0031]此外，本發(fā)明還提供一種口臭預(yù)防及/或改善劑，是把從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌作為有效成分。
[0032](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0033](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0034](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0035](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用[0036](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0037](6)沒有齲齒性
[0038]此外，本發(fā)明提供的是，被命名為卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)YIT12319、作為FERMBP-11500被提交保藏的乳酸菌，被命名為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum) YIT12320、作為FERM BP-11501被提交保藏的乳酸菌，被命名為加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) YIT12321、作為FERM BP-11502被提交保藏的乳酸菌，或被命名為緩癥鏈球菌(Sti^ptococcus mitis) YIT12322、作為FERMBP-11503被提交保藏的乳酸菌。
[0039]此外，本發(fā)明提供的是，含有上述乳酸菌的飲食品。
[0040]同時本發(fā)明還提供，含有上述乳酸菌的口腔用組成物。
[0041]此外，本發(fā)明提供的是，在口腔疾患的預(yù)防或治療劑的制造中，使用從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌。
[0042](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0043](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0044](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0045](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0046](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0047](6)沒有齲齒性
[0048]此外，本發(fā)明提供的是，在口臭預(yù)防及/或改善劑的制造中，使用從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌。
[0049](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0050](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0051](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0052](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0053](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0054](6)沒有齲齒性
[0055]此外，本發(fā)明還提供一種預(yù)防及/或治療口腔疾患的方法，是把從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并以具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌的有效量配給患者。
[0056](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0057](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0058](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0059](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0060](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0061] (6)沒有齲齒性[0062]此外，本發(fā)明還提供一種口臭的預(yù)防及/或改善方法，是把從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并以具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌的有效量配給患者。
[0063](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0064](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0065](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0066](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0067](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0068](6)沒有頻齒性
[0069]此外，本發(fā)明還提供一種乳酸菌，用于預(yù)防及/或治療口腔疾患，該乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactoba cillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下⑴~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上。
[0070](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0071](2)不具有產(chǎn)生 非水溶性葡聚糖的能力
[0072](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0073](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0074](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0075](6)沒有齲齒性
[0076]本發(fā)明還提供一種乳酸菌，用于預(yù)防及/或改善口臭，該乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下
(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上。
[0077](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0078](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0079](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性
[0080](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0081](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0082](6)沒有齲齒性
[0083]此外，本發(fā)明還提供一種引物或探頭，其是針對從序列編號4~8中選出的堿基序列或由在該堿基序列上相輔相成地排列而形成的卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)YIT12319 (FERM BP-11500)具有特異性。
[0084]此外，本發(fā)明還提供一種引物對，其是針對從序列編號4和8、序列編號5和8、序列編號6和8、序列編號7和8中選出的堿基序列或由在該堿基序列上相輔相成地排列而形成的卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)具有特異性。
[0085]且本發(fā)明還提供一種以使用上述引物、引物對或探頭為特征的卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)的檢測方法。
[0086]發(fā)明的效果[0087]本發(fā)明的乳酸菌可穩(wěn)固停留在齒面及口腔內(nèi)，具有阻礙齲齒病原菌及口臭成因菌的牙周病原菌增殖的作用，另一方面又沒有產(chǎn)生VSC的能力，沒有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力，沒有齲齒性及感染性心內(nèi)膜炎的致病性，所以能有效用于增進(jìn)口腔內(nèi)菌群健全化，對齲齒癥、牙周病、口臭等各種口腔疾患或不適癥狀起到預(yù)防、改善或治療效果的藥物、飲食品、寵物食品、口腔內(nèi)組成物。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0088]圖1是表示與?Τ12319~12321接觸的牛牙釉質(zhì)硬度變化的圖。
[0089]圖2是表示從與?Τ12319~12321接觸的牛牙釉質(zhì)中回收的生物膜中非水溶性
葡聚糖量的圖。
[0090]圖3是表示與?Τ12322接觸的牛牙釉質(zhì)硬度變化的圖。
[0091]圖4是表示從與?Τ12322接觸的牛牙釉質(zhì)中回收的生物膜中非水溶性葡聚糖量的圖。
[0092]圖5是表示與?Τ12321接觸的牛牙釉質(zhì)硬度變化的圖。
[0093]圖6是表示?Τ12321蔗糖同化性的圖。
[0094]圖7是表示在?Τ12319上被特異性的引物對放大了的DNA條帶的圖(箭頭標(biāo)識的是特異DNA條帶，其旁邊是使用的引物對)。 【具體實(shí)施方式】
[0095]作為用于本發(fā)明的乳酸菌，有屬于卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)的乳酸菌株,也可以是上述菌株中的I種或2種以上。
[0096]具體包括，被命名為卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)"nT12319、于2011年4月28日(下同)作為FERM BP-11500被保藏在獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評價技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利生物保藏中心(地址:茨城縣筑波市東1-1-1中央第6)的乳酸菌，被命名為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum) YIT12320、作為FERM BP-11501 被保藏的乳酸菌，被命名為加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) YIT12321、作為FERM BP-11502被保藏的乳酸菌，被命名為緩癥鏈球菌(Sti^ptococcus mitis) YIT12322、作為FERM BP-11503被保藏的乳酸菌等。該乳酸菌中還包括，將上述乳酸菌作為母株的子孫株(自然變異株、經(jīng)變異處理的變異株、基因操縱得到的變異株等)。
[0097]上述卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum) YIT12320 (FERM BP-11501)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) YIT12321 (FERM BP-11502)及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis) YIT12322 (FERMBP-11503)如下述實(shí)施例所示，是本發(fā)明人首次從人口腔內(nèi)分離出的，通過16S-rDNA基因序列進(jìn)行相同性檢索的結(jié)果，判定它們屬于卷曲乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、加氏乳桿菌或緩癥鏈球菌的菌株。由于這些乳酸菌株具有以下(I)~(6)的特征性質(zhì)，所以被判明為新型菌株。
[0098](I)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力
[0099](2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力
[0100](3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性[0101](4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用
[0102](5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性
[0103](6)沒有齲齒性
[0104]此外、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)YIT12321 (FERM BP-11502)還被確認(rèn)具有以下(J)的性質(zhì)。
[0105](7)不與蔗糖同化
[0106]在本說明書中，(I) “不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例2)中，產(chǎn)生VSC的能力為+/-(H2S < 0.70 μ g/10ml/0.D.，CH3SH
<1.17yg/10ml/0.D.)，更好的情況為-值(在檢測下限值以下)。具有該性質(zhì)⑴的乳酸菌，其不產(chǎn)生屬于口臭誘因物質(zhì)，且不產(chǎn)生作為可以使牙周病病情加劇因素的VSC這一特點(diǎn)是令人滿意的。
[0107]此外，在本說明書中，(2) “不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例3)中，產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力為+/_(菌體產(chǎn)生附著)，更好的情況是為_(不產(chǎn)生)。具有該性質(zhì)(2)的乳酸菌，其不產(chǎn)生成為齲齒原因的非水溶性葡聚糖這一特點(diǎn)是令人滿意的。 [0108]此外，在本說明書中，(3)“對齒面具有粘合性”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例5)中，對S-HA的粘合率在1.0%以上，更好的情況是達(dá)到10%以上。此外，在本說明書中，⑶“對口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例6)中，對口腔內(nèi)的細(xì)胞粘合性為Total30cells/0.16mm2以上。在該性質(zhì)(3)中，對齒面或口腔內(nèi)細(xì)胞有粘合性的乳酸菌，其通過口服的形式攝入時即使停留時間較短也容易在口腔中固定這一特點(diǎn)是令人滿意的，從同樣的角度出發(fā)，對齒面或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性的乳酸菌更加理想。
[0109]此外，在本說明書中，(4) “具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例7)中，抑菌環(huán)徑(直徑)的合計(jì)達(dá)到9mm以上。具有該性質(zhì)(4)的乳酸菌，其對口臭及/或牙周病等具有優(yōu)異的預(yù)防.治療效果這一特點(diǎn)是令人滿意的。
[0110]此外，在本說明書中，(5) “沒有感染性心內(nèi)膜炎致病性”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例8)中，老鼠心內(nèi)膜炎致病性為陰性。具有該性質(zhì)(5)的乳酸菌，其安全性極高，非常適合用于飲食品、口腔用組成物等。
[0111]此外，在本說明書中，(6) “沒有齲齒性”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例9)中，利用人工口腔裝置進(jìn)行的試驗(yàn)后，牛牙釉質(zhì)的硬度下降比例不到5%。具有該性質(zhì)
(6)的乳酸菌，其不會產(chǎn)生成為齲齒原因的非水溶性葡聚糖，不會讓琺瑯質(zhì)脫落這一特點(diǎn)是令人滿意的。
[0112]此外，在本說明書中，(7) “不與蔗糖同化”是指，在下述實(shí)施例所示的試驗(yàn)(試驗(yàn)例9)中，蔗糖不能作為菌的增殖基質(zhì)被利用。具有該性質(zhì)(7)的乳酸菌，其不易產(chǎn)生乳酸，且能夠降低齲齒風(fēng)險這一特點(diǎn)是令人滿意的。
[0113]在本發(fā)明中，上述乳酸菌的菌體不僅可以使用從按照常用乳酸菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)而得到的培養(yǎng)物中經(jīng)離心分離等集菌方法分離出來的產(chǎn)品，還可以使用培養(yǎng)結(jié)束后的乳酸菌培養(yǎng)物本身，或使用將培養(yǎng)基濃縮后的濃縮物。此外，除活菌體外，還可以使用菌體的處理物。該處理物只要是通過常用方法處理得到的，就沒有特殊限制，例如可以是:加熱處理、利用抗生物質(zhì)等進(jìn)行的藥物處理、使用福爾馬林等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的處理、紫外線處理、Y線等放射線處理的死菌體、其冷凍干燥物、含有以上這些的培養(yǎng)物等；利用超聲波等產(chǎn)生的細(xì)菌裂解液、酶處理細(xì)菌液、通過過濾或離心分離等固液分離法從這些液體中分離出來的固體殘?jiān)龋焕妹富驒C(jī)械方法去除掉細(xì)胞壁的處理液、該處理液的濃縮物、它們的稀釋物、它們的干燥物等；利用表面活性劑等對細(xì)菌溶解后，利用乙醇等沉淀后得到的核酸含有成分；針對上述利用超聲波等產(chǎn)生的細(xì)菌裂解液或酶處理細(xì)胞液等，利用各種色譜法分離等方法進(jìn)行分離.精制處理得到的產(chǎn)物等。
[0114]對于培養(yǎng)乳酸菌的培養(yǎng)基沒有特別限制，可以使用各種培養(yǎng)基。
[0115]比如，葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖等碳素源，磷酸單鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、磷酸氨等無機(jī)鹽類，多價蛋白胨、酵母提取物、玉米漿等有機(jī)營養(yǎng)源，以及除了通常根據(jù)需要添加有各種氨基酸、維生素之類的乳酸菌增殖用營養(yǎng)培養(yǎng)基之外，還可以使用含乳的乳培養(yǎng)基。 [0116]至于培養(yǎng)，只要滿足菌體生長良好的條件即可。對培養(yǎng)方法沒有特殊限制，比如通氣培養(yǎng)、厭氧培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)、靜置培養(yǎng)等均可，但考慮到生產(chǎn)率，在好氧條件下靜置培養(yǎng)最為理想。
[0117]此外，培養(yǎng)溫度通常在10~50°C，最好為25~37°C ;培養(yǎng)時間通常在6小時~3天，最好為8小時~3天。
[0118]此外，培養(yǎng)基的pH(25°C )為3~10，最好為5~8。調(diào)整培養(yǎng)基pH的緩沖劑可以使用比如，碳酸、醋酸、檸檬酸、富馬酸、蘋果酸、乳酸、葡糖酸、酒石酸等有機(jī)酸鹽，磷酸、鹽酸、硫酸等無機(jī)鹽，氫氧化鈉等氫氧化物，氨或氨水等，可以單獨(dú)使用也可以2種以上組合使用。
[0119]本發(fā)明的口腔疾患預(yù)防及/或治療劑所針對的“口腔疾患”是指，由齲齒病原菌、牙周病原菌、念珠菌等口腔內(nèi)病原細(xì)菌引起的口腔疾患，比如，齲齒癥、牙齦炎、牙周炎等牙周病、鵝口瘡等。其中效果最好的口腔疾患是牙齦炎、牙周炎等牙周病。
[0120]頻齒病原菌有，變形鏈球菌(Streptococcus mutans)、表兄鏈球菌(Streptococcus sobrinus),牙周病原菌有，牙銀卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)、中間普雷沃菌(Prevotella intermedia)、齒垢密螺旋體(Treponemadenticola)、福賽斯坦納菌(Tannerella forsythia)、伴放線聚生桿菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans)、具核梭桿菌(Fusobacteriumnucleatum)等。鵝口瘡成因菌有，白色念珠菌(Candidaalbicans)等。
[0121]本發(fā)明的口臭預(yù)防及/或改善劑所針對的“口臭成因菌”有，牙齦卟啉單胞菌(Porp hyromonas gingivalis)、具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum)、中間普雷沃菌(Prevotella intermedia)、齒垢密螺旋體(Treponema denticola)、殊異韋榮菌(Veillonella dispar)等。
[0122]如下述實(shí)施例所示，本發(fā)明的乳酸菌對齒面及口腔內(nèi)面具有粘合性，相對于口臭成因菌.牙周病原菌的牙銀卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)、中間普雷沃菌(Prevotella intermedia)及伴放線聚生桿菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)等具有阻礙增殖的作用。此外，本發(fā)明的乳酸菌不產(chǎn)生成為口臭原因的VSC及成為齲齒原因的非水溶性葡聚糖，而且不會導(dǎo)致琺瑯質(zhì)脫落，也不會誘發(fā)感染性心內(nèi)膜炎。[0123]因此，本發(fā)明的乳酸菌能夠增進(jìn)口腔內(nèi)菌群健全化，可作為對口腔內(nèi)的病原細(xì)菌引起的頻齒癥、牙銀炎、牙周炎等牙周病，鶴口瘡，口臭等各種口腔疾患或不適癥狀起到預(yù)防、改善或治療作用的藥物、飲食品、寵物食品、口腔用組成物等來使用。
[0124]作為藥物使用時的口服制劑的劑型有錠劑、膠囊劑、顆粒劑、糖錠劑、丸劑、顆粒劑、散劑、粉劑、緩釋制劑、懸浮液、乳劑、糖漿、凍干劑、液劑、酏劑等。
[0125]上述制劑可以利用常用方法制造，而且本發(fā)明的乳酸菌既可以單獨(dú)使用，又可以與得到允許的藥物載體一起組合使用。該類載體有乳糖、白糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、結(jié)晶纖維素、硅酸等賦形劑；淀粉、麥芽糊精、阿拉伯樹膠粉、食用明膠、甲基纖維素、羥丙基纖維素、結(jié)晶纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等結(jié)合劑；羥丙基淀粉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素等崩解劑；月桂基硫酸鈉、大豆卵磷脂、蔗糖脂肪酸酯、聚山梨醇酯80等表面活性劑；滑石粉、蠟類、氫化植物油、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋁、聚乙二醇等潤滑劑；輕質(zhì)無水硅酸、氫氧化鋁干凝膠、合成硅酸鋁、硅酸鎂等流動性促進(jìn)劑；注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、橄欖油、芝麻油、花生油、豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等稀釋劑等等。此外，如果有必要還可以適當(dāng)添加矯味劑、著色劑、香料、殺菌劑、浸透壓調(diào)節(jié)劑、PH調(diào)節(jié)劑、乳化劑、助吸收劑、抗氧化劑、增粘劑、張度劑等常用的添加劑。
[0126]此外，作為飲食品、寵物食品等使用時，本發(fā)明的乳酸菌還可以根據(jù)需要添加各種營養(yǎng)成分，使其含在上述飲食品等中。這類飲食品等可以被用來作為對齲齒癥、牙周病、口臭有預(yù)防或改善效果的保健食品或食品材料，并可以在這些飲食品或其容器上標(biāo)明其具有上述效果。
[0127]至于飲食品的形態(tài)等方面，可適當(dāng)使用可作為飲食品等使用的添加劑，利用常用方法制成適合食用的形態(tài)，比如顆粒狀、粒狀、錠劑、膠囊、糊狀等，也可添加到各種食品，包括火腿、臘腸等食肉加工品；魚糕、圓筒狀魚糕等水產(chǎn)加工品；面包、糕點(diǎn)、黃油、奶粉、發(fā)酵飲食品中使用，還可添加到水、果汁、牛奶、軟飲料，茶飲料等飲料中使用。在這些產(chǎn)品中，最為理想的是制成含有乳酸菌有效成分的發(fā)酵乳、發(fā)酵飲料(乳酸菌飲料)、發(fā)酵豆乳、發(fā)酵果汁、發(fā)酵植物液等發(fā)酵產(chǎn)品，以及錠劑、膠囊等營養(yǎng)補(bǔ)充食品。
[0128]發(fā)酵產(chǎn)品可以使用常用方法制造。比如發(fā)酵乳，在殺菌后的乳培養(yǎng)基中接種和培養(yǎng)乳酸菌，再對其進(jìn)行均質(zhì)化處理就可以得到發(fā)酵乳基材。接下來再添加另行調(diào)制的糖漿溶液后混合，利用均質(zhì)器等進(jìn)行均質(zhì)化后，再添加進(jìn)香味就可以成為最終產(chǎn)品。利用這種方法得到的發(fā)酵乳可以是純凈型、柔軟型、水果香味型、固體狀、液體狀等任何一種形態(tài)的產(chǎn)品O
[0129]作為口腔用組成物使用時的具體形態(tài)包括漱口劑、漱口水、牙膏、牙粉、液態(tài)牙膏、口腔用軟膏劑、凝膠劑、錠劑、顆粒劑、微小顆粒劑、果凍、含片、片劑、膠囊、糖果、口香糖等，其中最好的形態(tài)為牙膏、漱口劑、果凍、含片、錠劑、片劑等。
[0130]對于上述藥物、飲食品、寵物食品、口腔用組成物等中的本發(fā)明乳酸菌含量沒有特別限制，可以結(jié)合一天的投藥量或攝取量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)，比如劑型為液體時，乳酸菌體濃度達(dá)到 I X 106CFU/mL ~I X 108CFU/mL 比較好，固體時則達(dá)到 I X 107CFU/g ~I X IO10CF U/g 比
較理想。
[0131] 使用本發(fā)明的乳酸菌時，對投藥量或攝取量沒有嚴(yán)格限制。若使用對象或適用疾患等各種使用狀態(tài)不同，得到的效果也不同，應(yīng)適當(dāng)設(shè)定，但乳酸菌的菌數(shù)希望是I日量中含有I X IO3CFU以上，I H量中含有I X IO3~I X IO13CFU的量則更佳，I H量中含有I X IO6~I X IO10CFU的量最佳。
[0132]通過對卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)"nT12319及其它卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)基因組DNA的分析發(fā)現(xiàn),從序列編號4~8中選出的堿基序列相對于卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)YIT12319具有特異性,且如果使用具有這些堿基序列的探頭或引物，便發(fā)現(xiàn)卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)YIT12319的基因能特異性地檢測出或進(jìn)行放大。
[0133]本發(fā)明的探頭或引物由從序列編號4~8中選出的堿基序列或在該堿基序列上相輔相成地排列形成，是針對卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERMBP-11500)菌株有特異性的探頭或引物。
[0134]作為上述引物，從序列編號4和序列編號5、序列編號4和6、序列編號4和7、序列編號4和8中選出的堿基序列或在該堿基序列上相輔相成地排列而形成的引物，其針對卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)的特異性越高越好。
[0135]使用上述探頭或引物，不需要進(jìn)行生理?生化學(xué)性狀確認(rèn)等繁復(fù)的操作，只要使用來自從標(biāo)本中提取的卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)的DNA,通過PCR反應(yīng)，就可以迅速簡便地對該菌株進(jìn)行生物類別確定、分析、檢測等操作。
[0136]實(shí)施例
[0137]以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作更加具體的說明，但本發(fā)明不僅限于這些實(shí)施例。 [0138]試驗(yàn)例I 口腔細(xì)菌的分離
[0139]I)被試驗(yàn)者及樣品的采集
[0140]從56名被試驗(yàn)者(男性34名，女性22名，25~66歲，平均年齡40.6歲)口中分別采集齒垢(包括唾液)和舌苔。采集這些口腔樣品后，在使用前靜置于冰上。進(jìn)行菌分離時，將這些樣品按照等量混合后，將其中300 μ L添加到2.7mL的滅菌厭氧輸送培養(yǎng)基中，制作出KT1稀釋液(好氧.厭氧培養(yǎng)用3.0mLX各I枝)。
[0141]2) 口腔細(xì)菌的培養(yǎng)與分離
[0142]在厭氧手套箱中，將口腔樣品涂抹到布魯氏兔溶血平板培養(yǎng)基(BRU平板培養(yǎng)基，色氨酸10.0g,派普塔明10.0g,酵母提取物2.0g,葡萄糖1.0g,氯化鈉5.0g,酸性亜硫酸鈉
0.1g,血色素5.0mg,維生素Kll.0mg,發(fā)育輔助液10.0mL,兎溶血液60.0mL,瓊脂15.0g,PH7.0)上。向一次性試管(FALC0N2058)中分注1.8mL滅菌厭氧稀釋液，然后添加200 μ L的10—1稀釋液制作出10_2稀釋液。以下按照同樣方法直到制作成KTici稀釋液，再將IOOyL各種稀釋液涂抹到平板培養(yǎng)基上后，按照表1所示的條件進(jìn)行培養(yǎng)。
[0143]另一方面，使用螺旋系統(tǒng)(自動平板涂抹裝置)針對加5.0%羊血液的TSA平板培養(yǎng)基(TSA平板培養(yǎng)基，酪蛋白胨15.(^，豆蛋白胨5.(^，氯化鈉5.0g，脫纖維羊血 50.0mL,瓊脂 15.0g, DfflOOOmL, pH7.3)、M R S 平板培養(yǎng)基(Proteose Peptone N0.310.0g, Beef Extractl0.0g, Yeast Extract5.0g, Dextrose20.0g, Polysorbate801.0g,Ammonium Citrate2.0g, Sodium Acetate5.0g, Magnesium Sulfate0.lg，ManganeseSulfate
0.05g，Dipotassium Phosphate2.0g, Agarl5g, DWlOOOmL)、LBS 平板培養(yǎng)基(PancreaticDigest of Caseinl0.0g, Yeast Extract5.0g, Monopotassium Phosphate6.0g, AmmoniumCitrate2.0g, Dextrose20.0g, Polysorbate801.0g, Sodium Acetate Hydrate25.0g,Magnesium Sulfate0.575g,Manganese Sulfate0.12g, Ferrous Sulfate0.034g, Agarl5.0g,Lab-1emco powder (Oxoid) 8g, Sodium acetate, trihydoratel5g, Dff 10OOmT, Acetate3.7mL)、及 Mitis-Salivarius 平板培養(yǎng)基(MS 平板培養(yǎng)基，Bacto TryptoselOg, Bacto ProteosePeptone N0.35g, Bacto Proteose Peptone5g, Bacto Dextroselg, Bacto Saccharose50g,Dipotassium Phosphate4g, Trypan Blue0.075g, Bacto Crystal Violet0.0008g, BactoAgarl5gDW1000mL, pH7.0±0.2)等涂抹樣品后，按照表1所示的條件進(jìn)行培養(yǎng)。
[0144]【表1】
[0145]平板培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
[0146]
【權(quán)利要求】
1.一種口腔疾患的預(yù)防及/或治療劑，是把從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌作為有效成分， (1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力 (3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
2.如權(quán)利要求1記載的口腔疾患的預(yù)防及/或治療劑，其特征在于，乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320 (FERM BP-11501)> 加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)YIT12321(FERM BP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)YIT12322(FERMBP-11503)中選出的I種或2種以上。
3.如權(quán)利要求1或2記載的口腔疾患的預(yù)防及/或治療劑，其特征在于，口腔疾患為牙周病。
4.一種口臭預(yù)防及/或改善劑,是把從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上乳酸菌作為有效成分， (1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力 (3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
5.如權(quán)利要求4記載的口臭預(yù)防或改善劑，其特征在于，乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)YIT12319 (FERM BP-11500) > 發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320 (FERM BP-11501)> 加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)YIT12321(FERM BP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)YIT12322(FERMBP-11503)中選出的I種或2種以上。
6.一種乳酸菌，其是被命名為卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319>作為FERM BP-11500被提交保藏的乳酸菌；或是被命名為發(fā)酵乳桿菌(Lactobaci I Iusfermentum) YIT12320 JtSFERM BP-11501被提交保藏的乳酸菌；或是被命名為加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)YIT12321、作為FERM BP-11502被提交保藏的乳酸菌；或是被命名為緩癥鏈球菌(Str印tococcusmitis)YIT12322、作為FERM BP-11503被提交保藏的乳酸菌。
7.一種飲食品，其特征在于，含有權(quán)利要求6所述的乳酸菌。
8.如權(quán)利要求7記載的飲食品，該飲食品為發(fā)酵制品。
9.一種口腔用組成物，其特征在于，含有權(quán)利要求6所述的乳酸菌。
10.一種口腔疾患的預(yù)防及/或治療劑制造的使用，是在口腔疾患的預(yù)防或治療劑的制造中，使用從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌， (1)不具有產(chǎn)生揮 發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力 (3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
11.如權(quán)利要求10記載的使用，其特征在于,乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus) YIT12319 (FERM BP-11500) > 發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320(FERM BP-11501)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) YIT12321 (FERMBP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis) YIT12322 (FERM BP-11503)中選出的 I種或2種以上。
12.如權(quán)利要求10或11記載的使用，其特征在于，口腔疾患為牙周病。
13.一種口臭預(yù)防及/或改善劑制造的使用，是在口臭預(yù)防及/或改善劑的制造中，使用從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下⑴~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌， (1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力 (3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
14.如權(quán)利要求13記載的使用，其特征在于,乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)YIT12319 (FERM BP-11500)> 發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320(FERM BP-11501)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)YIT12321(FERMBP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis) YIT12322 (FERM BP-11503)中選出的 I種或2種以上。
15.—種乳酸菌,用于預(yù)防及/或治療口腔疾患，其是從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌， (1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力(3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
16.如權(quán)利要求13記載的乳酸菌，其特征在于，乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)YIT12319 (FERM BP-11500)> 發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320 (FERM BP-11501)> 加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)YIT12321(FERMBP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)YIT12322(FERMBP-11503)中選出的I種或2種以上。
17.如權(quán)利要求15或16記載的乳酸菌，其特征在于，口腔疾患為牙周病。
18.—種乳酸菌，用于口臭預(yù)防及/或改善，其是從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)及緩 癥鏈球菌(Streptococcus mitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌， (1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力 (3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
19.如權(quán)利要求18記載的乳酸菌，其特征在于，乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)YIT12319 (FERM BP-11500)> 發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320 (FERM BP-11501)> 加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)YIT12321 (FERMBP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis) YIT12322(FERMBP-11503)中選出的I種或2種以上。
20.一種預(yù)防及/或治療口腔疾患的方法，其特征在于，把從卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、力卩氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌的有效量配給患者， (1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力 (3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
21.如權(quán)利要求20記載的方法,其特征在于,乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)YIT12319 (FERM BP-11500)> 發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320(FERM BP-11501)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)YIT12321 (FERMBP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis) YIT12322 (FERM BP-11503)中選出的 I種或2種以上。
22.如權(quán)利要求20或21記載的乳酸菌，其特征在于，口腔疾患為牙周病。
23.—種口臭預(yù)防及/或改善的方法,其特征在于,把從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)中選出的、并具有以下(I)~(6)所有性質(zhì)的I種或2種以上的乳酸菌的有效量配給患者， (1)不具有產(chǎn)生揮發(fā)性硫黃化合物(VSC)的能力 (2)不具有產(chǎn)生非水溶性葡聚糖的能力 (3)對齒面及/或口腔內(nèi)細(xì)胞具有粘合性 (4)具有阻礙口臭成因菌及/或牙周病原菌增殖的作用 (5)沒有感染性心內(nèi)膜炎的致病性 (6)沒有齲齒性。
24.如權(quán)利要求23記載的方法,其特征在于,乳酸菌是從卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus) YIT12319 (FERM BP-11500) > 發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)YIT12320(FERM BP-11501)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) YIT12321 (FERMBP-11502)以及緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis) YIT12322 (FERM BP-11503)中選出的 I種或2種以上。
25.一種引物或探頭，其針對從序列編號4~8中選出的堿基序列或由在該堿基序列上相輔相成地排列而形成的卷曲乳桿菌(LactobaciIIus crispatus) YIT12319 (FERMBP-11500)具有特異性。
26.一種引物對，其針對從序列編號4和8、序列編號5和8、序列編號6和8、序列編號7和8中選出的堿基序列或由在該堿基序列上相輔相成地排列而形成的卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)具有特異性。
27.一種以使用權(quán)利要求25或26記載的引物、引物對或探頭為特征的卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus) YIT12319 (FERM BP-11500)的檢測方法。
【文檔編號】A61K35/74GK104023732SQ201280038479
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2012年8月3日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月5日
【發(fā)明者】奧村剛一, 寺井智彥, 中尾真澄, 金子公幸, 伊藤雅彥, 宮崎幸司, 山地和明, 栃谷薰, 花田信弘, 今井獎, 野村義明, 馬場俊輔 申請人:株式會社養(yǎng)樂多本社