分子模擬粘膜艾滋病疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于提供一種艾滋病疫苗，其能夠誘導(dǎo)粘膜免疫，能夠防御因HIV感染造成的免疫系統(tǒng)缺陷，能夠防止HIV因易突變性而導(dǎo)致的免疫逃逸，能夠防止HIV的迅速感染。根據(jù)本發(fā)明，能夠提供一種包含Hub抗原、N2,N6-雙[N2,N6-雙(3,4,5-三羥基苯甲?；?-L-賴氨?；鵠-N-(2-氨基乙基)-L-賴氨酰胺（TGDK）與胎球蛋白的復(fù)合體的艾滋病疫苗。
【專利說明】分子模擬粘膜艾滋病疫苗
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用于粘膜免疫的分子模擬粘膜艾滋病疫苗。
【背景技術(shù)】
[0002]疫苗始于1796年詹納的種痘，由巴斯德給出疫苗的概念，疫苗成為對于機(jī)體防御而言的必需品。雖然通過疫苗進(jìn)行機(jī)體防御的一部分分子機(jī)理已經(jīng)解明，但是不明之處仍舊很多。對于疫苗的副反應(yīng)仍存在誤解的方面，過去由于不適當(dāng)?shù)慕o藥方法(例如，注射針的回收利用等)，也存在新的感染癥(例如C型肝炎等)增多的問題。另外，以美國為主導(dǎo)進(jìn)行了 HIV/AIDS疫苗的開發(fā)，但尚未實(shí)現(xiàn)成功開發(fā)。
[0003]另一方面，專利文獻(xiàn)I 記載了包含式 1:TCDK-CH2-CH2-NH-R(式中，TcDK-CH2-CH2-NH表示2- [N- α，N- ε -雙(N- α，N- ε - 二沒食子?；嚢滨；?賴氨?；鵠氨基乙基氨基(2_[N- α , N- ε -bis (N- α，N- ε -digal1ylIysinyI) lysinyl] aminoethylamino), R 表不氫原子；經(jīng)由肽鍵具有活性酯基的基團(tuán)；經(jīng)由肽鍵與SH基結(jié)合的基團(tuán)；經(jīng)由肽鍵結(jié)合的肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或糖；或者經(jīng)由席夫堿結(jié)合的肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或糖。)所示的化合物的腸道免疫賦活劑。專利文獻(xiàn)I記載了上述TCDK識別M細(xì)胞。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0005]專利文獻(xiàn)
[0006]專利文獻(xiàn)1:國際公開W02007/052641號公報(bào)(國際申請?zhí)朠CT/JP2006/321720)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]發(fā)明所要解決的課題
[0008]本發(fā)明所要解決的課題在于提供一種艾滋病疫苗，其能夠誘導(dǎo)粘膜免疫，能夠防御因HIV感染造成的免疫系統(tǒng)缺陷，能夠防止HIV因易突變性而導(dǎo)致的免疫逃逸，能夠防止HIV的迅速感染。
[0009]用于解決課題的方法
[0010]本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述課題而進(jìn)行了深入研究，結(jié)果，首先發(fā)現(xiàn)了與HIVEnv gpl20外膜糖蛋白在結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)上同源的人蛋白質(zhì)(胎球蛋白；Fetuin (Sigma公司制)。這被認(rèn)為是在HIV侵入人體時，用于逃過人體的免疫系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)的對人的分子模擬蛋白質(zhì)(Molecular Mimicry Protein)。本發(fā)明的發(fā)明人等利用該蛋白質(zhì),合成Hub抗原、N2，N6-雙[N2，N6-雙(3，4，5-三羥基苯甲?；?-L-賴氨?；鵠-N-(2-氨基乙基)-L-賴氨酰胺(TCDK)與胎球蛋白(Fetuin)的共價結(jié)合體，由此成功開發(fā)出了 HIV/AIDS的分子模擬粘膜疫苗。
[0011]即，根據(jù)本發(fā)明，提供一種包含Hub抗原、N2，N6-雙[N2，N6-雙(3，4，5_三羥基苯甲?；?-L_賴氨?；鵠-N-(2-氨基乙基)-L-賴氨酰胺(TCDK)與胎球蛋白(Fetuin)的共價結(jié)合體的艾滋病疫苗。
[0012]優(yōu)選本發(fā)明的艾滋病疫苗為皮下給藥和/或口服、以及經(jīng)鼻給藥。發(fā)明的效果[0013]本發(fā)明的艾滋病疫苗具有如下技術(shù)效果:能夠誘導(dǎo)粘膜免疫，能夠防御因HIV感染造成的免疫系統(tǒng)缺陷，能夠防止HIV因易突變性而導(dǎo)致的免疫逃逸，能夠防止HIV的迅速感染。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1 (圖1A和圖1B)表示X-Protein (胎球蛋白:Fetuin)的鑒定。
[0015]圖2表示X-protein (胎球蛋白:Fetuin)的序列。
[0016]圖3表示SIVgpl20與X-protein (胎球蛋白:Fetuin)的氨基酸序列的比對。
[0017]圖4表示X-protein (胎球蛋白:Fetuin)與HIV Env三聚體結(jié)構(gòu)的比較,gpl20的立體結(jié)構(gòu)上與X-protein (胎球蛋白:Fetuin)相同的部分(moiety)用黃色表示。
[0018]圖5表示X-protein (胎球蛋白:Fetuin)序列的UPA類似結(jié)構(gòu)。
[0019]圖6表示抗gpl40抗體效價的測定結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面，進(jìn)一步詳細(xì)地說明本發(fā)明。
[0021]本發(fā)明涉及包含Hub抗原、N2，N6-雙[N2，N6-雙(3，4，5_三羥基苯甲?；?_L_賴氨酰基]-N-(2-氨基乙基)-L-賴氨酰胺(TCDK)與胎球蛋白(Fetuin)的共價結(jié)合體的艾滋病疫苗。
[0022]本發(fā)明中使用的Hub抗原是指，以HGE0-200NP (油化產(chǎn)業(yè)株式會社制)的活性酯骨架為核，使HGE0-200PA (油化產(chǎn)業(yè)株式會社制)少量過剩地反應(yīng)，HGE0-200PA分子形成Hub(放射狀，車輪)，在分子的表面具有大量伯胺的甘油聚乙二醇聚合物。
[0023]N2，N6-雙[N2，N6-雙(3，4，5_三羥基苯甲酰基)-L-賴氨?；鵠_N_(2_氨基乙基)-L-賴氨酰胺(TGDK)為公知化合物，其合成方法記載于例如上述專利文獻(xiàn)I (國際公開W02007/052641號公報(bào))等中。
[0024]胎球蛋白(Fetuin)是在肝臟合成并被分泌到血液中的蛋白質(zhì)。胎球蛋白(Fetuin)是血流中廣范圍的輸送蛋白的輸送與利用所中介的一種結(jié)合蛋白。人胎球蛋白(Fetuin)與 a 2_HS_ 糖蛋白(AHSG)、a 2-HS、A2HS、AHS、HSGA 和胎球蛋白(Fetuin) -A 的意思相同。
[0025]Hub抗原、N2，N6-雙[N2，N6-雙(3，4，5_三羥基苯甲酰基)-L-賴氨?；鵠-N- (2_氨基乙基)-L-賴氨酰胺(TGDK)與胎球蛋白(Fetuin)的共價結(jié)合體的合成方法并沒有特別不同的限定。作為一例，能夠按照后述的實(shí)施例中記載的程序合成，但并不特別限定于該方法。根據(jù)后述的實(shí)施例的方法，首先，使T⑶K與活化聚乙二醇(PNP4 (10))反應(yīng)，合成TCDK的活性酯(PNP-TCDK)。接著，使該P(yáng)NP-TCDK與Hub-antigen反應(yīng)，得到Hub-TCDK-PNP。最后，通過使Fetuin與該Hub-T⑶K-PNP反應(yīng),能夠合成Hub-T⑶K-Fetuin的共價結(jié)合體。
[0026]在本發(fā)明的艾滋病疫苗中，既可以直接使用Hub-T⑶K-Fetuin所示的復(fù)合體，或者也可以與藥學(xué)上可接受的載體一起制成適當(dāng)?shù)闹苿Ｗ鳛檩d體，可以使用賦形劑、結(jié)合劑、崩解劑、潤滑劑等。制劑的形態(tài)沒有特別限定，可以制成液劑、片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、糖衆(zhòng)劑等任意的形態(tài)。
[0027] 作為賦形劑，可以使用例如乳糖、蔗糖或葡萄糖等糖類；馬鈴薯淀粉或小麥淀粉等淀粉類；結(jié)晶纖維素等纖維素類；無水磷酸氫鈣或碳酸鈣等無機(jī)鹽類等、聚乙二醇類等。作為結(jié)合劑，可以使用例如結(jié)晶纖維素、支鏈淀粉、阿拉伯膠、藻酸鈉或聚乙烯吡咯烷酮等多功能性聚乙二醇類等。作為崩解劑，可以使用例如羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羥丙基纖維素、羥丙基淀粉或藻酸鈉等聚乙二醇類等。作為潤滑劑，可以使用例如硬脂酸鎂、滑石粉、硬化油等。作為納米顆?；瘎?，可以使用膽固醇支鏈淀粉、多功能性聚乙二醇類等(日本油脂KK)。
[0028]本發(fā)明的艾滋病疫苗的給藥途徑?jīng)]有特別限定，既可以為口服給藥也可以為非口服給藥(例如皮下給藥、直腸給藥、肌肉內(nèi)給藥、鼻腔給藥和靜脈內(nèi)給藥等)，優(yōu)選為皮下給藥和/或口服以及經(jīng)鼻給藥。
[0029]本發(fā)明的艾滋病疫苗的制劑中所含的有效成分(Hub-TCDK-Fetuin所示的共價結(jié)合體)的量能夠根據(jù)給藥對象或患者的年齡、體重、癥狀等適當(dāng)設(shè)定，可以設(shè)為例如I μ g~1000mg / kg / 次,優(yōu)選設(shè)為 10μ g ~IOOmg / kg / 次。
[0030]本發(fā)明的艾滋病疫苗也可以與佐劑一起給藥。作為佐劑，只要是通過在疫苗(抗原)給藥之前預(yù)先給藥而能夠增強(qiáng)免疫應(yīng)答的物質(zhì)，則可以使用任意物質(zhì)。在殺菌微生物這樣的具有抗原性的物質(zhì)以外，還可以是alum (氫氧化鋁?鉀等)或礦物油這樣的非抗原性的物質(zhì)。Freund在1947年發(fā)現(xiàn)將抗原水溶液與等量的油(礦物油85%，表面活性劑15%)混合，以乳劑的狀態(tài)注射時，抗體的產(chǎn)生量增大。這被稱為弗氏不完全佐劑incomplete Freund’sadjuvant (IFA),在其中加入結(jié)核菌的菌體成分的為完全佐劑complete F’s.a.(CFA)0此外，氫氧化鋁、磷酸鋁等無機(jī)酸鹽顯示佐劑效果。另外，細(xì)菌內(nèi)毒素、特別是革蘭氏陰性菌的脂多糖類能夠顯著促進(jìn)抗體產(chǎn)生，有效成分為lipid A。本發(fā)明中能夠使用上述物質(zhì)作為佐劑。佐劑的給藥途徑?jīng)]有特別限定，既可以為口服給藥，也可以為非口服給藥。
[0031]接著，說明本發(fā)明的艾滋病疫苗的特征。
[0032]( I)粘膜免疫的 誘導(dǎo)
[0033]TCDK (四沒食子酰基D-賴氨酸，Tetragalloyl D-Lysine)衍生物作為UAE-1 (C型凝集素，C-type lectin)的競爭性抑制劑被發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的發(fā)明人等成功進(jìn)行了 TGDK的固相合成、液相合成，作為粘膜疫苗必需的M細(xì)胞靶向分子創(chuàng)制出了 TCDK(Misumi et al.，J.1mmunol.182,6061-6070 (2009))。即，TGDK以M細(xì)胞為靶向，在粘膜固有層被胞吞轉(zhuǎn)運(yùn)，與表達(dá)⑶161的NK細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞，natural killercell)以及介導(dǎo)固有免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的NKT (自然殺傷性T細(xì)胞，natural kiIIer-T cell)結(jié)合，使免疫系統(tǒng)活化。另外，與TGDK共價結(jié)合的疫苗不論抗原的種類，以皮下注射也能夠誘導(dǎo)全身免疫并且稍后能夠誘導(dǎo)粘膜免疫。
[0034](2)對于由HIV感染造成的免疫系統(tǒng)缺陷的防御
[0035]在HIV感染免疫中樞細(xì)胞時，利用免疫中樞細(xì)胞的受體(趨化因子受體)CCR5和CXCR4作為第二受體。本發(fā)明著眼于該第二受體的特異立體結(jié)構(gòu)部位。通過形成第二受體的第二胞外環(huán)ECL-2與ECL-1的S-S鍵，由11個氨基酸殘基構(gòu)建的拱狀結(jié)構(gòu)顯示特異的立體結(jié)構(gòu)，被稱為UPA結(jié)構(gòu)。如果形成該UPA結(jié)構(gòu)的S-S鍵發(fā)生還原、開裂，拱狀結(jié)構(gòu)崩解，則HIV就不再能夠感染。HIV利用的第二受體的分子中，該UPA結(jié)構(gòu)是最重要的部分(Moiety)。為了誘導(dǎo)針對UPA結(jié)構(gòu)的特異性抗體，合成模擬UPA結(jié)構(gòu)的環(huán)狀肽，創(chuàng)制出環(huán)狀抗原疫苗。由該疫苗免疫的猴子的粘膜免疫組織 防止由SHIV感染所致的免疫組織破壞而造成的免疫系統(tǒng)缺陷，顯著抑制了病毒的感染(Misumi et al., J.Virol.75, 11614-11620 (2001), J.Biol.Chem.278，32335-32343 (2003))。在本發(fā)明中，通過誘導(dǎo)針對HIV的第二受體的特殊立體結(jié)構(gòu)的特異性抗體，能夠防御免疫系統(tǒng)缺陷。
[0036](3)防止HIV因易突變性而導(dǎo)致的免疫逃逸
[0037]HIV形成自己的外膜糖蛋白(Spike蛋白質(zhì))的三聚體，吸附并侵入細(xì)胞。就HIV因易突變性而導(dǎo)致的免疫逃逸而言，據(jù)認(rèn)為是病毒基因的I個堿基突變關(guān)系到I個氨基酸殘基突變，基于氨基酸突變，反映到由于病毒外膜糖蛋白的氫鍵減少而造成的立體結(jié)構(gòu)的“搖擺”，以特異性適應(yīng)的方式在機(jī)體內(nèi)進(jìn)化誘導(dǎo)的高親和性中和抗體變得無法識別該“搖擺”結(jié)構(gòu)，因此，抗體不與突變抗原發(fā)生反應(yīng)，而無法去除病毒。為了防止該病毒的免疫逃逸，以基因化學(xué)的方式想出了如下的使三聚體形成變得容易的方法。在HIV Env蛋白質(zhì)的Ecto-domain的基因中導(dǎo)入2個氨基酸殘基突變(K514E、K524E)，使其不受到酶的處理(processing),使三聚體形成變得容易。此外,經(jīng)由鎳插入天然(native)蛋白質(zhì)能夠結(jié)合的位點(diǎn)。此外，糖鏈修飾位點(diǎn)保持原狀。反映因病毒的突變造成的結(jié)構(gòu)分子的“搖擺”的結(jié)構(gòu)分子的構(gòu)建如下進(jìn)行。將由病毒的突變造成的結(jié)構(gòu)分子的“搖擺”作為因極性溶劑二甲基甲酰胺水溶液中的氫鍵減少造成的分子結(jié)構(gòu)的“搖擺”而掌握，將病毒的外膜糖蛋白在極性溶劑二甲基甲酰胺水溶液中以濃度(水濃度0%~50%)依賴性的方式進(jìn)行處理的同時產(chǎn)生的“搖擺”結(jié)構(gòu)，與活化Hub (放射狀甘油-聚乙二醇(glycerol-polyethylene glycol ))_TCDK抗原共價結(jié)合而制備。由該抗原誘導(dǎo)的抗體與病毒的株沒有關(guān)系，中和了各種各樣的病毒。
[0038](4 )防止HIV的迅速感染
[0039]一般而言，如果用疫苗(偽病原性抗原)對人進(jìn)行免疫,則人在2~3周內(nèi)獲得免疫(I次免疫反應(yīng))。免疫反應(yīng)靜止，形成記憶免疫，當(dāng)真正的病原性抗原侵入時，立即發(fā)生反應(yīng)，免疫以12~24小時的極快速度再度活化(2次免疫反應(yīng))，免疫系統(tǒng)與病原性抗原作斗爭并將其排除，而恢復(fù)健康。但是，在HIV的情況下，在該2次免疫反應(yīng)的時間即12~24小時期間，HIV潛入免疫中樞細(xì)胞的基因中，并整合在基因中，完成感染。整合在基因中的HIV的基因無法取出并排除。由于HIV感染了免疫中樞細(xì)胞，所以HIV—面破壞免疫中樞細(xì)胞一面不斷增殖，最終打敗免疫系統(tǒng)，人就會艾滋病發(fā)病。因此，絕對不能允許HIV的侵入。為了防止該HIV的迅速感染，如果在初次感染的部位即粘膜中引起交叉免疫誘導(dǎo)現(xiàn)象，隨時準(zhǔn)備著中和活性抗體或者與抗原結(jié)合的抗體，并借助于固有免疫系統(tǒng)、補(bǔ)體系統(tǒng)，就能夠?qū)⑵渑懦送膺€需要想辦法維持殺傷性T細(xì)胞。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，需要引起交叉免疫現(xiàn)象的方法。在本發(fā)明中，使本來的HIV Env糖蛋白抗原與Hub-TGDK抗原結(jié)合,進(jìn)而,使其與引起交叉免疫誘導(dǎo)的伴隨(escort)抗原共價結(jié)合，制備了多價共價結(jié)合抗原。以該多價共價結(jié)合抗原進(jìn)行基礎(chǔ)免疫，然后，在記憶免疫下，以與疫苗的本來的HIV Env糖蛋白抗原以外的多價抗原具有在結(jié)構(gòu)生物學(xué)上相同的部分(Moiety)的抗原，在粘膜構(gòu)建了能夠誘導(dǎo)與HIV Env糖蛋白反應(yīng)的抗體的交叉免疫體制。本發(fā)明中，能夠在猴子中構(gòu)建引起交叉免疫誘導(dǎo)現(xiàn)象的免疫體制，作為交叉免疫誘導(dǎo)抗原，發(fā)現(xiàn)了機(jī)體成分胎球蛋白(Fetuin)。成功開發(fā)出了以病毒蛋白質(zhì)抗原進(jìn)行基礎(chǔ)免疫，代替病毒糖蛋白抗原而能夠以胎球蛋白(Fetuin)使抗HIV Env抗體產(chǎn)生的交叉免疫誘導(dǎo)疫苗。確立了完全擊退HIV在粘膜局部的侵入的突破性的疫苗方法。
[0040] 通過以下的實(shí)施例更具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受實(shí)施例限定。[0041]實(shí)施例
[0042]實(shí)施例1:對于用于機(jī)體防御的分子模擬粘膜疫苗-HIV的外膜糖蛋白(HIVEnvgp120)的結(jié)構(gòu)生物學(xué)的分子模擬機(jī)體成分(Molecular Mimicry Moiety)的鑒定
[0043]實(shí)施例1-1:分子模擬機(jī)體成分(Molecular Mimicry Moiety)的鑒定
[0044]本發(fā)明的發(fā)明人以前制作出了以粘膜M細(xì)胞為靶向的TCDK (Misumi et al.，J.1mmunol.182，6061-6070(2009))，而且創(chuàng)制出了誘導(dǎo)針對 HIV co-rec印tor、CCR5 和 CXCR4的特殊立體結(jié)構(gòu)(UPA)的抗體的環(huán)狀肽抗原(Misumi et al.，J.Virol.75，11614-11620(2001), J.Biol.Chem.278，32335-32343 (2003))。通過該誘導(dǎo)出的抗體，能夠防止 HIV 對免疫系統(tǒng)造成的缺陷。此外，本發(fā)明的發(fā)明人為了應(yīng)對HIV的易變性，為了得到即使HIV發(fā)生突變，即，即使抗原略微變化，反應(yīng)結(jié)合特異性也很寬的抗體，制作出使用的抗原的單體和三聚體，通過氫鍵減少預(yù)測由HIV突變造成的結(jié)構(gòu)的“搖擺”，對應(yīng)由HIV突變造成的免疫逃逸。作為用于容易形成SIVmac239Env蛋白質(zhì)的三聚體的方案，改變gpl30蛋白質(zhì)的C末端側(cè)的Ecto-domain的2個氨基酸殘基,使之不易受到機(jī)體的蛋白質(zhì)分解酶的作用。另外，在C末端插入產(chǎn)生Ni結(jié)合肽的基因,其他部分維持與天然(native)的Env蛋白質(zhì)同樣的受到糖鏈修飾的結(jié)構(gòu)。
[0045]將該SIVmac239的Env改變基因?qū)牒镒覸ero細(xì)胞，構(gòu)建了生成SIVmac239Envgpl40的單體-三聚體的體系。在HIV/AIDS的粘膜免疫疫苗創(chuàng)制的研究(Misumi et al.，J.1mmunol.182,6061-6070 (2009))時，在使用猴子的免疫實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了如下交叉免疫誘導(dǎo)現(xiàn)象。對猴子制作出與Hub抗原(甘油-聚乙二醇,glycerol-polyethylene glycol)共價結(jié)合了 TCDK(粘膜M細(xì)胞靶向劑)、UPA(Undecap印tidyl arch of CCR5，免疫破壞防止抗體誘導(dǎo)抗原)、CpG0DN (B細(xì)胞活化齊Li)以及SIVmac239Env (gpl40蛋白質(zhì))抗原以及X-Protein(胎球蛋白=Fetuin)而得到的疫苗并使用，發(fā)生基礎(chǔ)免疫后的免疫應(yīng)答，之后免疫應(yīng)答靜止，在抗gpl40抗體效價降低的時候(約1.5年后)，用沒有g(shù)pl40抗原的疫苗進(jìn)行免疫，則盡管沒有g(shù)pl40抗原，抗gpl40抗體仍舊被誘導(dǎo)，該抗血清中和了 SIV-HIV以及其亞種群。發(fā)現(xiàn)了引起該交叉免疫誘導(dǎo)現(xiàn)象的抗原分子，對該抗原進(jìn)行電泳分析和MALD1-T0F/MS/MS分析，結(jié)果鑒定其為Fetuin (圖1A和圖1B)。
[0046]另外，將Fetuin單 獨(dú)進(jìn)行皮下注射，在同一猴子中確認(rèn)了抗gpl40抗體的產(chǎn)生。該蛋白質(zhì)為遍在蛋白質(zhì)(ubiquitous protein),具有與SIVmac239Env gpl40的單體-三聚體在結(jié)構(gòu)生物學(xué)上相同的部分(identical part)、同源的部分(homologous part)、相同的部分(moiety),是極為獨(dú)特的糖蛋白分子,是不僅限于與SIVEnv,而且與HIV Env也具有同樣特征的抗原。將該分子命名為HIV分子模擬蛋白質(zhì)(HIVMolecular Mimicry Protein)。
[0047]實(shí)施例1-2:HIV 分子模擬蛋白質(zhì)(HIV Molecular Mimicry Protein)的特征
[0048]( I)氨基酸的序列和化學(xué)修飾部位
[0049]HIV分子模擬蛋白質(zhì)的氨基酸序列如圖2所示。HIV分子模擬蛋白質(zhì)是存在N-, O-糖基化位點(diǎn)(N-, 0-glycosylation site)、磷酸化位點(diǎn)(phosphorylation site)并具有6個S-S橋、2個自由(free)的SH基的蛋白質(zhì)。
[0050](2) HIV分子模擬蛋白質(zhì)和HIV Env的氨基酸序列的比較
[0051]HIV分子模擬蛋白質(zhì)和HIV Env的氨基酸序列如圖3所示。存在受到糖鏈加成可能性的部分(moiety)用方框表示。[0052](3) HIV分子樽擬蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)與HIV Env三聚體結(jié)構(gòu)的比較
[0053]HIV分子模擬蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)與HIV Env三聚體結(jié)構(gòu)的比較結(jié)果如圖4所示。立體結(jié)構(gòu)上相同的部分(moiety)用黃色表示。如圖4所示，判斷出HIV分子模擬蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)與HIV Env三聚體結(jié)構(gòu)之間存在相同的部分(moiety)。
[0054](4) HIV分子模擬蛋白質(zhì)由S-S橋形成的立體結(jié)構(gòu)的特征
[0055]HIV分子模擬蛋白質(zhì)的S-S橋的部位如圖5所示。6處S-S橋中，2處形成了夾著10~11個氨基酸殘基的拱形(arch)，可知這2處拱形(arch)結(jié)構(gòu)與HIV-1的第二受體(co-receptor) CCR5 和 CXCR4 的第二胞外環(huán)(ECL-2)的 Undecapeptidyl arch (UPA 結(jié)構(gòu)，Misumi et al.，J.Virol.75，11614-11620(2001)，J.Biol.Chem.278，32335-32343(2003))相同。
[0056](5) HIV分子模擬蛋白質(zhì)的特征總結(jié)
[0057]HIV分子模擬蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)是與HIV Env三聚體結(jié)構(gòu)極為相同的結(jié)構(gòu)，且兼具有HIV-1的co-receptor CCR5和CXCR4的UPA結(jié)構(gòu)，可知是具有極為獨(dú)特的結(jié)構(gòu)的機(jī)體成分。
[0058]實(shí)施例2:HIV/AIDS 的分子模擬粘膜疫苗(Molecular Mimicry MucosalVaccine1MMMV)的制備法
[0059]實(shí)施例2-1:TCDK的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
[0060]TCDK的化學(xué)名:N2，N6-雙[N2，N6-雙(3，4，5_三羥基苯甲?；?-L-賴氨?；鵠-N- (2-氨基乙基)-L-賴氨酰胺
[0061](N2，N6-bis [N2，N6_bis(3, 4, 5-trihydroxybenzoyl )-L-lysyl] -N- (2-aminoethyl)-L-1ysine amide, TGDK)
[0062]Gal:沒食子酸基(Galloyl group)(三羥基苯甲酸基，Trihydroxybenzoyl group)
[0063]
【權(quán)利要求】
1.一種艾滋病疫苗，其特征在于: 其包含Hub抗原、N2，N6-雙[N2，N6-雙(3，4，5-三羥基苯甲?；?-L-賴氨?；鵠-N- (2-氨基乙基)-L-賴氨酰胺(TGDK)與胎球蛋白的共價結(jié)合體。
2.如權(quán)利要求1所述的艾滋病疫苗，其特征在于: 所述艾滋病疫苗是 皮下給藥和/或口服以及經(jīng)鼻給藥的疫苗。
【文檔編號】A61P31/18GK103889449SQ201280039764
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月15日
【發(fā)明者】三隅將吾, 莊司省三, 高宗暢曉 申請人:國立大學(xué)法人熊本大學(xué), Lsip基金運(yùn)營聯(lián)合公司