可吸入藥物組合物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】可吸入藥物組合物可以包括包含適于連續(xù)霧化的疏水性生物活性劑(例如CoQ10)的顆粒的水性分散體。由于其化學(xué)組成和制備方法，所述藥物組合物顯示出提供有利的氣溶膠傳輸和輸出的特殊物理化學(xué)性質(zhì)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】可吸入藥物組合物
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002]本申請(qǐng)要求2011年6月17日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)朜0.61/498，505的優(yōu)先權(quán)的權(quán)益，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明一般地涉及可吸入藥物組合物，包括其制備方法及其用途。本發(fā)明在各種實(shí)施方案中更特別地涉及具有包含疏水性生物活性劑(例如CoQlO)的顆粒的水性分散體且適于連續(xù)霧化的可吸入藥物組合物。由于其化學(xué)組成和制備方法，所述藥物組合物顯示出提供有利的氣溶膠傳輸和輸出的特殊物理化學(xué)性質(zhì)。
[0004]發(fā)明背景
[0005]癌癥目前是發(fā)達(dá)國(guó)家中死亡的首要原因之一。肺癌是具有高死亡率及低長(zhǎng)期存活率的癌癥的一個(gè)實(shí)例。雖然研究已經(jīng)極大地增加了對(duì)許多腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制的理解，并且已提供了許多用于治療包括肺癌的癌癥的新途徑，但是對(duì)于大多數(shù)惡性腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)療法仍然是全切除術(shù)(gross resection)、化療和放射療法。雖然不斷獲得成功,但是這些療法的每一種都可以引起許多不期望的副作用。例如，外科手術(shù)可導(dǎo)致疼痛、對(duì)健康組織的外傷性損傷和瘢痕。放療和化療可引起惡心、免疫抑制、胃潰瘍和繼發(fā)性腫瘤發(fā)生。而且，出現(xiàn)這些極端副作用并不伴隨相應(yīng) 的高存活率。
[0006]向呼吸道遞送治療劑是治療多種局部和/或全身疾病(包括肺癌)的一個(gè)途徑。然而，將藥劑遞送至肺部的常規(guī)技術(shù)可能無(wú)效、低效和/或效力不足。例如，許多已知的方法產(chǎn)生具有液滴的氣溶膠，所述液滴太大而不能將藥物遞送至肺和/或其太不一致而不能可靠地遞送特定劑量。被開(kāi)發(fā)出來(lái)以解決這些問(wèn)題比如粒徑的的顆粒形成技術(shù)，例如機(jī)械微粉化方法和基于溶液的相分離方法，可具有另外的局限。機(jī)械微粉化方法比如研磨可引起藥物熱降解和/或機(jī)械降解。噴霧干燥，用于微粉化藥物物質(zhì)的另一種方法，可導(dǎo)致收集小顆粒的困難。
[0007]發(fā)明簡(jiǎn)述
[0008]本發(fā)明提供可吸入藥物組合物，其具有包括疏水性生物活性劑的顆粒的水性分散體。由于其化學(xué)組成和制備方法，所述藥物組合物顯示出提供有利的氣溶膠傳輸和輸出(包括連續(xù)霧化)的特殊物理化學(xué)性質(zhì)。因此，本發(fā)明提供治療包括癌癥的疾病的改善的方法，及能夠遞送(包括吸入至肺)生物活性劑以幫助治療疾病及其它病癥的組合物。
[0009]由于肺的大量有效表面積位于深肺部，通過(guò)氣霧劑遞送顆粒至深肺部的周?chē)闻萦兄谒幬镞f送。相反，沉積在上呼吸道中的顆?？梢员徽衬だw毛活動(dòng)梯(mucociliaryescalator)快速去除，接著轉(zhuǎn)運(yùn)至咽喉，并吞咽或通過(guò)咳嗽除去。本發(fā)明在各個(gè)方面和實(shí)施方案中提供遞送通常難以被充分霧化的疏水性生物活性劑(例如包括完全疏水性、親脂性和/或水溶性差的藥物)至深肺部(以及，呼吸道的其它區(qū)域)。特別地，本發(fā)明可以提供疏水性藥物的納米分散體的連續(xù)霧化以用于治療應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的各個(gè)方面和實(shí)施方案的其它優(yōu)點(diǎn)包括，但不限于高的氣溶膠輸出(例如，通過(guò)總氣溶膠輸出TAO測(cè)量的)；高的氣溶膠傳輸(例如，如通過(guò)平均百分傳輸率APT測(cè)定的)；高的總噴射劑量(TED)，連續(xù)和穩(wěn)定的氣溶膠(例如，經(jīng)歷預(yù)定給藥事件，非間斷的)；一致的遞送(例如，不同事件間可再現(xiàn)的)；遞送高劑量的能力(例如，高沉積質(zhì)量分?jǐn)?shù)和/或連續(xù)遞送)；計(jì)量劑量(例如，從小到大)的能力；區(qū)域(topically)、局部(locally)和/或系統(tǒng)遞送藥物的能力；高可呼吸部分；及其組合。顯著地，本發(fā)明可以采用疏水性藥物的水性納米分散體(例如，與涉及單一、均相、藥物溶液的現(xiàn)有技術(shù)方法相比較)實(shí)現(xiàn)這些優(yōu)點(diǎn)。
[0011]在一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于可吸入藥物組合物，其包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體。所述組合物包括具有約30至于至500nm的平均直徑的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)。疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1: 5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w，所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w，并且所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)。并且，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化。
[0012]在另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于可吸入藥物組合物，其包含適用于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體。所述組合物包含具有約30至500nm的平均直徑的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)。疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1: 5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w，所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w，并且所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)。并且，當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，所述組合物能夠獲得至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度。
[0013]在另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于可吸入藥物組合物，其包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體。所述組合物包含具有約30至500nm的平均直徑的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)。疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1: 5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w，所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w，并且所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)。并且，當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，所述組合物經(jīng)15秒能夠獲得至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED)。
[0014]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于可吸入藥物組合物，其包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體。所述組合物包含具有約30至300nm的平均直徑的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含CoQIO、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和水性分散介質(zhì)。CoQ10:DPPC的比率為約5:1至約1:5，CoQlO占組合物的約0.1至6%w/w，且所述脂質(zhì)體顆粒分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)。并且，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化(或可選地，所述組合物特征可在于另一藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如能夠獲得至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED))。
[0015] 在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于可吸入藥物組合物，其包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體。所述組合物包含具有約30至300nm的平均直徑的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含CoQIO、二硬脂酰基磷脂酰膽堿(DSPC)和水性分散介質(zhì)。CoQ10:DSPC的比率為約5:1至約1:5，CoQlO占組合物的約0.1至6%w/w，且所述脂質(zhì)體顆粒分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)。并且，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化(或可選地，所述組合物特征可在于另一藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如能夠獲得至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED))。
[0016]在仍另一方面，本發(fā)明特征在于可吸入藥物組合物，其包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體。所述組合物包含具有約30至300nm的平均直徑的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含CoQ1O、二肉豆蘧?；字Ｄ憠A(DMPC)和水性分散介質(zhì)。CoQ10:DMPC的比率為約5:1至約1:5，CoQlO占組合物的約0.1至6%w/w，且所述脂質(zhì)體顆粒分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)。并且，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化(或可選地，所述組合物特征可在于另一藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如能夠獲得至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED))。
[0017]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于制備可吸入藥物組合物的方法。所述方法包括步驟:(I)水化磷脂，從而形成水化的磷脂；(ii)混合所述水化的磷脂、疏水性生物活性劑和水性分散介質(zhì)，從而得到混合物；和(iii)均質(zhì)化該混合物，從而得到脂質(zhì)體顆粒的分散體，其包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的磷脂和疏水性生物活性劑，且具有約30至500nm的平均直徑。疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w,且所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w。并且，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化(或可選地，所述組合物特征可在于另一藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如能夠獲得至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED))。
[0018]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于施用可吸入藥物組合物的方法。所述方法包括步驟:(i)霧化脂質(zhì)體顆粒的分散體，從而形成包括多個(gè)液滴的可呼吸氣溶膠，所述液滴具有約I至5μπι的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)，和(ii)向需要治療的受試者的肺遞送治療有效量的疏水性生物活性劑。所述脂質(zhì)體顆粒的分散體具有約30至500nm的平均直徑，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的疏水性生物活性劑和磷脂，疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1: 5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w，且所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w。并且，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化(或可選地，所述組合物特征可在于另一藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如能夠獲得至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED))。
[0019]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于通過(guò)包括下述步驟的方法制備的可吸入藥物組合物:(i)水化磷脂，從而形成水化的磷脂；(ii)混合所述水化的磷脂、疏水性生物活性劑和水性分散介質(zhì)，從而得到混合物；和均質(zhì)化該混合物，從而得到脂質(zhì)體顆粒的分散體，其包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的磷脂和疏水性生物活性劑，且具有約30至500nm的平均直徑，其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w,且所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w。并且，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化(或可選地，所述組合物特征可在于另一藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如能夠獲得至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED))。[0020]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于用于調(diào)整激光衍射粒徑系統(tǒng)(laserdiffraction particle size system)以適應(yīng)于連續(xù)測(cè)量連續(xù)氣溶膠的方法。所述方法包括步驟:(i)提供一種激光衍射粒徑系統(tǒng)，其包括:噴霧器儲(chǔ)庫(kù)、膜、激光束、透鏡和吸氣源；(?)將噴霧器儲(chǔ)庫(kù)定位以使得膜位于激光束的上緣上方且位于透鏡和氣溶膠去霧室中心之間的距離處；和(iii)將吸氣源定位于激光束之下。調(diào)整的系統(tǒng)避免了在連續(xù)地測(cè)量連續(xù)霧化期間氣溶膠的傳輸時(shí)由連續(xù)地排空氣溶膠云室引起的透鏡霧化。
[0021]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于用于連續(xù)地測(cè)量連續(xù)氣溶膠的激光衍射粒徑系統(tǒng)。所述系統(tǒng)包括(i)噴霧器儲(chǔ)庫(kù)，其定位使得膜位于激光束的上緣上方且位于透鏡和氣溶膠云室中心之間的距離處；和(ii)定位于激光束之下的吸氣源。該系統(tǒng)避免了在連續(xù)地測(cè)量連續(xù)霧化期間的氣溶膠傳輸時(shí)由連續(xù)地排空氣溶膠云室引起的透鏡霧化。
[0022]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于用于連續(xù)地測(cè)量連續(xù)氣溶膠的方法。所述方法包括步驟:(i)向激光衍射粒徑系統(tǒng)提供連續(xù)氣溶膠，所述系統(tǒng)包括噴霧器儲(chǔ)庫(kù)，其定位以使得膜位于激光束的上緣上方且位于透鏡和氣溶膠云室中心之間的距離處，和位于激光束之下的吸氣源；和(ii)在該系統(tǒng)避免由于連續(xù)地排空氣溶膠云室引起的透鏡霧化的同時(shí)連續(xù)地測(cè)量氣溶膠的傳輸。
[0023]在仍另一個(gè)方面，本發(fā)明特征在于制備可吸入藥物組合物且驗(yàn)證其平均百分傳輸率(APT)的方法。所述方法包括步驟:(i)水化磷脂，從而形成水化的磷脂；(ii)混合該水化的磷脂、疏水性生物活性劑和水性分散介質(zhì)，從而得到混合物；(iii)均質(zhì)化該混合物，從而得到脂質(zhì)體顆粒的分散體，其包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的磷脂和疏水性生物活性劑，且具有約30至500nm的平均直徑，其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w，且所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w ； (iv)霧化脂質(zhì)體顆粒的分散體，從而形成包含多個(gè)液滴的可呼吸氣溶膠，各個(gè)液滴包含脂質(zhì)體顆粒的分散體且具有約I至5 μ m的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD) ； (v)向激光衍射粒徑系統(tǒng)提供可呼吸氣溶膠，所述系統(tǒng)包括噴霧器儲(chǔ)庫(kù)(其定位以使得膜位于激光束的上緣上方且位于透鏡和氣溶膠云室的中心之間的距離處)，和位于激光束之下的吸氣源；和(vi)采用所述激光衍射粒徑系統(tǒng)連續(xù)地測(cè)量氣溶膠的傳輸，從而確定所述組合物是否具有預(yù)定的APT值的特征。
[0024]在不同的實(shí)施方案中，上述方面的任一個(gè)都可以與下述的任一個(gè)或多個(gè)特征、以及在詳細(xì)說(shuō)明和實(shí)施例中描述的任一個(gè)或多個(gè)特征組合。
[0025]在各個(gè)實(shí)施方案中，水性分散介質(zhì)包括水或水性鹽溶液。水性分散介質(zhì)可以是緩沖液比如磷酸鹽緩沖鹽水。
[0026]在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體顆粒的分散體為包括多個(gè)水性液滴的連續(xù)可呼吸氣溶膠的形式，該水性液滴包含脂質(zhì)體顆粒的分散體且具有約I至5 μ m的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)。
[0027]在某些實(shí)施方案中，所述組合物的特征在于經(jīng)至少15分鐘的連續(xù)霧化，APT為約50至100%。所述組合物的特征在于APT可以為約50至100%、約60至100%、約70至100%、約80至100%、約90至100%、約50至95%、約60至95%、約70至95%、約80至95%、約90至95%、約50至90%、約60至90%、約70至90%、約80至90%、小于約50%、小于約55%、小于約65%、小于約70%、小于約75%、小于約80%、小于約85%、小于約90%、小于約95%、小于約100%或其中的任何子范圍或值。連續(xù)霧化的持續(xù)時(shí)間可以為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、20、25、30、35、40、50或60分鐘。經(jīng)至少15分鐘的連續(xù)霧化，所述多個(gè)液滴可以具有約I至5 μ m的MMAD0
[0028]在各個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物特征在于在貯存至少七天之后，APT為約50至100%。在貯存至少七天之后，所述脂質(zhì)體顆粒具有約30至500nm的平均直徑。貯存可以在環(huán)境條件或其它受控條件(例如，冰箱中)進(jìn)行。
[0029]在某些實(shí)施方案中，所述組合物的特征可以在于一種或多種物理化學(xué)性質(zhì)。所述組合物可以具有約0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0,1.1、1.2或1.3的流動(dòng)指數(shù)(flowindex)。所述組合物可以具有約0.1、0.15、0.2、1、100或IlOcP的粘度。所述組合物可以具有約2.5、1.5、-2.5、-10、-50、-55或-60mV的ζ電勢(shì)。所述組合物可以具有約25、30、
35、40、45或50mN/m的表面張力。所述組合物可以具有約11、12、13、14、15、16、17或18mPa的屈服應(yīng)力。脂質(zhì)體顆粒的分散體可以具有約30至100nm、50至150nm、30至300nm、100至400nm或200至300nm的平均直徑。所述組合物可以具有約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6或0.7的多分散性指數(shù)(PDI)。所述組合物可以具有至少約40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100%的ΤΑ0。所述組合物可以具有經(jīng)15秒至少約3，600,3, 900,4, 300或4，600 μ g的TED (例如，如通過(guò)DUSA測(cè)量的，參見(jiàn)實(shí)施例2)。所述組合物特征可以在于非牛頓流體特性。
[0030]在各個(gè)實(shí)施方案中，所述多個(gè)液滴可以具有約1、2、3、4或5μπι的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)。所述多個(gè)液滴可以具有小于約2.5,2.4,2.3,2.2,2.1,2.0,1.9,1.8、
1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0,0.9,0.8,0.7,0.6 或 0.5 的幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD)。
[0031]在某些實(shí)施方案中，疏水性生物活性劑包括下述的一種或多種:鎮(zhèn)痛劑、抗炎劑、驅(qū)腸蟲(chóng)藥、抗心律不齊劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗凝劑、抗抑郁劑、抗糖尿病劑、抗癲癇劑、抗真菌劑、抗痛風(fēng)劑、抗-高血壓劑、抗瘧疾劑、抗偏頭痛藥、抗毒蕈堿劑、抗腫瘤劑、勃起功能障礙改善劑、免疫抑制劑、抗原生動(dòng)物劑、抗甲狀腺劑、抗焦慮劑、鎮(zhèn)靜劑、催眠藥、神經(jīng)安定藥、β -阻滯劑、心肌收縮藥、皮質(zhì)類(lèi)固醇類(lèi)、利尿劑、抗帕金森氏病劑、胃腸劑、組胺受體拮抗劑、角質(zhì)層分離藥、脂質(zhì)調(diào)節(jié)劑、抗心絞痛劑、cox-2抑制劑、白細(xì)胞三烯抑制劑、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、肌肉松弛劑、營(yíng)養(yǎng)劑、阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥、蛋白酶抑制劑、性激素、刺激劑、肌肉松弛劑、抗骨質(zhì)疏松劑、抗肥胖劑、認(rèn)知增強(qiáng)劑、抗尿失禁劑、營(yíng)養(yǎng)油、抗-良性前列腺肥大劑、必需脂肪酸、非必需脂肪酸及其組合。疏水性生物活性劑可以包括一種或多種疏水性抗炎類(lèi)固醇、NSAID劑、抗菌劑、抗真菌劑、化療劑、血管舒張劑(vasoldilator)或其組合。
[0032]在某些實(shí)施方案中，疏水性生物活性劑包括下述的一種或多種:acutretin、阿苯達(dá)唑、沙丁胺醇、氨魯米特(aminogluthemide)、胺碘酮、氨氯地平、苯丙胺、兩性霉素B、阿托伐他汀、阿托伐醌、阿奇毒素、巴氯芬、倍氯米松、benezepril、苯佐那酯、倍他米松、bicalutanide、布地奈德、安非他酮、白消安、布替萘芬、骨化二醇、卡泊三烯(calciprotiene)、骨化三醇、喜樹(shù)堿(camptothecan)、坎地沙坦、辣椒素、卡馬西平(carbamezepine)、胡蘿卜素、塞來(lái)昔布、西立伐他汀(cerivistatin)、西替利嗪、氯苯那敏、膽鈣化醇、西洛他唑、西咪替丁、桂利嗪、環(huán)丙沙星、西沙必利、克拉霉素、氯馬斯汀、氯米芬、氯米帕明、氯吡格雷(clopidrogel)、可待因、輔酶Q10、環(huán)苯扎林、環(huán)胞菌素、達(dá)那唑、丹曲洛林、右氯苯那敏、雙氯芬酸、雙香豆素、地高辛、二氫表雄酮(dihydroepiandrosterone)、二氫麥角胺、二氫速留醇、地紅霉素、多奈哌齊、依法韋侖、eposartan、麥角|丐化醇、麥角胺、必需脂肪酸源、依托度酸、依托泊苷、法莫替丁、非諾貝特、芬太尼、非索非那定、非那雄胺、氟康唑、氟比洛芬、氟伐他汀、磷苯妥英(fosphenytion)、夫羅曲普坦、呋喃唑酮、加巴噴丁、吉非羅齊、格列本脲、格列吡嗪、格列苯脲、格列美脲(glymepride)、灰黃霉素、鹵泛群、布洛芬、厄貝沙坦、依立替康、二硝酸異山梨醇酯、異維A酸(isotreinoin)、伊曲康唑、伊維菌素、酮康唑、酮咯酸、拉莫三嗪、蘭索拉唑、來(lái)氟米特、賴(lài)諾普利、洛哌丁胺、氯雷他定、洛伐他汀、L-甲狀腺素(L-thryiOxine)、葉黃素、番茄紅素、甲羥孕酮、米非司酮、甲氟喹、醋酸甲地孕酮、美沙酮、甲氧沙林、甲硝唑、咪康唑、咪達(dá)唑侖、米格列醇、米諾地爾、米托蒽醌、孟魯司特、萘丁美酮、納布啡、那拉曲坦(naratiptan)、奈非那韋、硝苯地平、尼索地平、尼魯?shù)仄?nilutanide)、呋喃妥因、尼扎替丁、奧美拉唑、奧普瑞白介素(oprevelkin)、甾二醇(osteradiol)、奧沙普秦、紫杉醇、帕立骨化醇、帕羅西汀、噴他佐辛、吡格列酮、pizofetin、普伐他汀、潑尼松龍、普羅布考、黃體酮、假麻黃堿、吡斯的明、雷貝拉唑、雷洛昔芬、羅非考昔(refocoxib)、瑞格列奈、利福布汀(rifabutine)、利福噴汀(rifapentine)、利美索龍、利托那韋(ritanovir)、利扎曲普坦、羅格列酮(rosigiltazone)、沙奎那韋、舍曲林、西布曲明、檸檬酸西地那非、辛伐他汀、西羅莫司、螺內(nèi)酯、舒馬普坦、他克林、他克莫司、他莫昔芬、坦洛新、塔革雷汀(targretin)、他佐羅汀、替米沙坦、替尼泊苷、特比萘芬、特拉唑嗪(terzosin)、四氫大麻酹、噻加賓、噻氯匹唳、tirofibran、替扎尼定、托吡酯、托泊替康、托瑞米芬、曲馬多、維A酸、曲格列酮、曲伐沙星、繳沙坦、文拉法辛、vertoporfin、氨己烯酸、維生素A、維生素D、維生素E、維生素K、扎魯司特、齊留通、佐米曲坦、唑吡坦、吡嗪哌酯(zopiclone)及其組合。
[0033]在各個(gè)實(shí)施方案中，疏水性生物活性劑還包括選自下述的添加物:脫氧葡萄糖、脫氧葡萄糖鹽、二羥基丙酮、琥珀酸鹽、丙酮酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、丙二酸鹽、乳酸鹽、戊二酸鹽及其組合。所述添加物可以是2-脫氧葡萄糖、2-脫氧葡萄糖磷酸鹽、6-脫氧葡萄糖、6-脫氧葡萄糖磷酸鹽、二羥基丙酮及其組合。
[0034]在某些實(shí)施方案中，疏水性生物活性劑包括CoQ1O。CoQlO可以在1位、4位或其組合處被添加物(additive)取代。
[0035]在某些實(shí)施方案中，疏水性的生物活性劑占組合物的約4%w/w或以下。疏水性生物活性劑可以占組合物的約6、5、4、3、2或l%w/w或以下。
[0036]在各個(gè)實(shí)施方案中，磷脂包括下述的一種或多種:卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂酰絲氨酸、PEG-磷脂酰乙醇胺、PVP-磷脂酰乙醇胺及其組合。磷脂可以包括DPPC、DSPC、DMPC或其組合。磷脂可以為基本上純的磷脂。磷脂可以占組合物的約3%w/w或以下。
[0037]在某些實(shí)施方案中，疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約1:1、4:3或4:2.5。疏水性生物活性劑:磷脂的比例可以為約5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5或其之間
的任何值。
[0038]在某些實(shí)施方案中，磷脂與下述的一種或多種組合:吸附劑、消泡劑、酸化劑、堿化齊?、緩沖劑、抗微生物劑、抗氧化劑、粘合劑、增溶劑、溶劑、粘度調(diào)節(jié)劑、保濕劑、增稠劑及其組合?？蛇x地，所述組合物可以基本上由疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)組成。[0039]在各個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包括小于組合物的約1.0%w/v的量的氯化鈉。所述組合物可以包括使該組合物與人肺基本上等滲的量的鹽。
[0040]在某些實(shí)施方案中，所述分散體為懸浮液、納米懸浮液、乳液或微乳液。
[0041]在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括霧化脂質(zhì)體顆粒的分散體，從而形成包括多個(gè)液滴的可呼吸氣霧劑，各個(gè)液滴包含脂質(zhì)體顆粒的分散體且具有約I至5 μ m的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)。
[0042]在各個(gè)實(shí)施方案中，混合包括以約10，000至20，OOOrpm且在50至65°C下高剪切混合至多約5分鐘。混合可以持續(xù)至多約1、2、3、4或5分鐘。混合可以在約10，000、11，000、12，000、13，000、14，000、15，000、16，000、17，000、18，000、19，000 或 20，OOOrpm 下進(jìn)行。混合可以在約50、55、60或65°C下進(jìn)行。溫度可以根據(jù)使用的疏水性生物活性劑的熔點(diǎn)變化。
[0043]在某些實(shí)施方案中，均質(zhì)化包括微流化。均質(zhì)化可以包括超聲均質(zhì)化。均質(zhì)化可以包括在約30，OOOpsi和約50至65°C下高壓均質(zhì)化約1_50輪。均質(zhì)化可以進(jìn)行約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45 或 50 輪。壓力可以為約 25，000,26, 000,27, 000,28, 000、29，000,30, 000,31, 000,32, 000,33, 000,34, 000 或 35，OOOpsi0 溫度可以為約 50、55、60 或650C。溫度可以根據(jù)使用的疏水性生物活性劑的熔點(diǎn)變化。
[0044]在某些實(shí)施方案中，霧化包括振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧。用于連續(xù)噴霧的任何合適的方法都可以用于本發(fā)明。
[0045]在各個(gè)實(shí)施方案中，遞送實(shí)現(xiàn)至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20%的沉積質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mass fraction deposited)。
[0046]在某些實(shí)施方案中，遞送實(shí)現(xiàn)向肺的局部遞送而基本上沒(méi)有全身遞送。
[0047]在某些實(shí)施方案中，遞送獲得在施用后至少48小時(shí)肺中疏水性生物活性劑升高的量。
[0048]在各個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，所述組合物能夠?qū)崿F(xiàn)至少約900、800、700、600、500、400、300、200或100 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度。應(yīng)當(dāng)理解所記載的濕肺組織濃度特別地受到受試者、施用方法和制劑等的影響。因此，在各個(gè)實(shí)施方案中，生物活性劑的濃度可以為治療足夠或治療期望量的所使用具體生物活性劑。
[0049]在某些實(shí)施方案中，遞送治療有效量的疏水性生物活性劑包括計(jì)量生物活性劑的劑量。
[0050]在某些實(shí)施方案中，受試者患有癌癥。所述癌癥可以為肺癌。更通常地，所述受試者可以患有任一種或多種影響呼吸道的疾患，包括，但不限于下述的一種或多種:哮喘、變態(tài)反應(yīng)、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、急性支氣管炎、肺氣腫、囊性纖維化、肺炎、結(jié)核病、肺水腫、急性呼吸窘迫綜合征、肺塵埃沉著病、間質(zhì)性肺病、肺水腫、肺栓塞、肺動(dòng)脈高血壓、胸腔積液、氣胸、間皮瘤、肌萎縮性側(cè)索硬化、重癥肌無(wú)力和肺病。
[0051]在 各個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包括調(diào)理作用縮減劑(opsonization reducer)(例如，干擾霧化的調(diào)理作用縮減劑)。例如，所述組合物可以特別地排除聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物，比如泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188 (po1xymer188))、普流尼克、Lutrol和Superonic ο在另一個(gè)實(shí)例中，所述組合物可以特別地排除各種鏈長(zhǎng)的聚乙二醇(PEG)、多糖、其他含PEG的共聚物、泊洛沙姆(poloxamine)等?？蛇x地,根據(jù)本發(fā)明的制劑可以包括基本上不會(huì)影響霧化的量的一種或多種調(diào)理作用增強(qiáng)劑，例如，如果該調(diào)理作用增強(qiáng)劑的量賦予所述制劑另外期望的性質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包括總組合物的0.001-5%重量的聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物。
[0052]通過(guò)下述附圖和實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明，所述附圖和實(shí)施例僅用于闡述的目的而不是限制性的。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0053]圖1A顯示使用振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器霧化藥物分散體的示意圖。圖1B顯示幾種制造方法的示意圖。
[0054]圖2顯示原料粉末CoQlO的X射線衍射圖。
[0055]圖3顯示原料粉末CoQlO的差示掃描量熱溫譜圖。
[0056]圖4顯示原料粉末CoQlO的掃描電子顯微(SEM)圖像。
[0057]圖5顯示使用不同的制備方法制備的CoQlO分散體的粒徑分布。
[0058]圖6顯示在微流化器(microfluidizer)中制備后和在7天之后，通過(guò)激光衍射(LD)獲得的CoQlO水性分散體的粒徑分布(制劑A，表1)。
[0059]圖7顯示在微流化器中制備后和在7天之后，CoQlO水性分散體的Z均值和PdI值(制劑A，表1)。在采用不同的微流化輪次制備且在制備后分析的制劑中，和在第O和7天比較同一制劑時(shí)，都沒(méi)有發(fā)現(xiàn) 了藥物粒徑分布特征(Z-均值和PdI)的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0060]圖8顯示使用卵磷脂(上面)或DPPC (下面)在微流化器中制備之后，CoQlO的水性分散體(制劑B，表1)的流體動(dòng)力學(xué)直徑和多分散性。(*當(dāng)與10輪比較時(shí)P≤0.05 ;§當(dāng)與采用相同微流化輪次制備的卵磷脂分散體比較時(shí)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。
[0061]圖9A顯示與吸入池偶聯(lián)的Malvern Spraytec⑧。圖9B顯示具有水平位置的吸入池的Malvern Spraytec ?的示意圖。圖9c顯示結(jié)合下述實(shí)施例討論的“開(kāi)放臺(tái)(openbench)”方法的示意圖(距離:膜和激光束的上緣之間:25mm;透鏡和氣溶膠云中心之間:25mm ;在激光束下方的空氣抽吸:IOcm)。
[0062]圖10顯示CoQlO的卵磷脂分散體(制劑C,表1)的傳輸圖(transmittogram)。結(jié)果表示為相對(duì)于CoQlO分散體噴霧15分鐘的百分傳輸率的平均值(n=3)。所述曲線的線性回歸分析的斜率值作為氣溶膠產(chǎn)生的穩(wěn)定性的量度評(píng)價(jià)。
[0063]圖11顯示在15分鐘噴霧過(guò)程中CoQlO的卵磷脂分散體(制劑C，表1)噴霧的傳輸圖的斜率(上面)和總氣溶膠輸出(ΤΑ0-下面)。(*與其它制劑相比，P≤0.05)
[0064]圖12顯示在微流化器中制備之后，使用激光衍射(左面)和動(dòng)態(tài)光散射(右面)進(jìn)行的CoQlO水性分散體(制劑C，表1)的粒徑分布分析。C與制備后分析的制劑相比，P ≤ 0.05 ； §與第7天的其它制劑相比，P≤0.05)
[0065]圖13顯示以不同微流化輪次處理的CoQlO制劑(制劑C，表1)有關(guān)的ζ電勢(shì)和表面張力值。柱和誤差條分別表示平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差(對(duì)于?電勢(shì)，η=10，和對(duì)于表面張力，η=5)。表面張力測(cè)量期間的溫度為25°C （與10輪相比時(shí)，P≤0.05，§沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。
[0066]圖14顯示以不同微流化輪次處理的CoQlO水性分散體(制劑C，表1)的Herschel-Bulkley模型的元素。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0067]圖15顯示用于適應(yīng)于噴霧器的用于干粉吸入器(DPI)的劑量均勻取樣裝置(DUSA)的示意圖。
[0068]圖16顯示在微流化器中50輪之后，來(lái)自CoQlO的水性分散體的激光衍射技術(shù)的粒徑分布。結(jié)果表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。一些標(biāo)準(zhǔn)差太小而在圖中不可見(jiàn)。
[0069]圖17顯示在微流化器中50輪之后的CoQlO水性分散體的Z-均值和PdI值。結(jié)果表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。一些標(biāo)準(zhǔn)差太小而在圖中不可見(jiàn)(n=3)。§沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0070]圖18顯示CoQlO分散體的ζ電勢(shì)。結(jié)果表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(η=3)。*與合成磷脂相比，Ρ〈0.05。
[0071]圖19顯不CoQlO分散體的表面張力。結(jié)果表不為平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差(η≥5)。測(cè)量期間的溫度值分別為25°C、25°C、19°C和17°C。§沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0072]圖20顯示用于CoQlO的水性分散體的Herschel-Bulkley模型的元素，表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。DSPC制劑的屈服應(yīng)力不呈現(xiàn)，因?yàn)槠渥裱瓋缍?Power Law)模型。一些標(biāo)準(zhǔn)差太小而在圖中不可見(jiàn)。*P〈0.05.§沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0073]圖21顯示水性分散體的一般流動(dòng)曲線的示例示意圖。
[0074]圖22顯示CoQlO分散體的流變行為。以不同標(biāo)度呈現(xiàn)的圖表表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(η=3) ο
[0075]圖23顯示鹽水(對(duì)照)及CoQlO的卵磷脂、DMPC、DPPC和DSPC分散體的傳輸圖。結(jié)果表示為相對(duì)于CoQlO分散體噴霧15分鐘的百分傳輸率的平均值(n=3)。所述曲線的線性回歸分析的斜率值作為氣溶膠產(chǎn)生的穩(wěn)定性的量度評(píng)價(jià)。
[0076]圖24顯不相對(duì)于CoQlO分散體噴霧15分鐘的傳輸圖的斜率(上面)和總氣霧劑輸出，TAO (下面)，表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)?！鞗](méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0077]圖25顯示了 CoQlO分散體的來(lái)自NGI的TED (上面)和來(lái)自適應(yīng)于噴霧器的DPI的DUSA的TED (下面)。結(jié)果表示為在15分鐘噴霧事件的初始和最終階段的15秒時(shí)間內(nèi)沉積的總藥物的平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。TED:總噴射劑量；DUSA:劑量均勻取樣裝置；DP1:干粉吸入器。*當(dāng)與合成磷脂相比時(shí)P〈0.05。t在噴霧事件內(nèi)P〈0.05。§彼此比較沒(méi)有統(tǒng)
計(jì)學(xué)差異。$與其它合成磷脂相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0078]圖26顯示使用Aeroneb Pro ?噴霧器,在15L/min的流速下，CoQlO的卵磷脂、DMPC、DPPC和DSPC分散體的體外沉積分布。結(jié)果表示為在15分鐘噴霧事件的初始和最終階段的15秒時(shí)間內(nèi)沉積的總藥物百分?jǐn)?shù)的平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。
[0079]圖27顯示使用Aeroneb Pro ?噴霧器,在15L/min的流速下，CoQlO的卵磷脂、DMPC、DPPC和DSPC分散體的體外沉積分布。結(jié)果表示為在15分鐘噴霧事件的初始和最終階段的15秒時(shí)間內(nèi)沉積的藥物量的平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。
[0080]圖28顯示使用Aeroneb Pro ?噴霧器,在15L/min的流速下，CoQlO的卵磷脂、DMPC、DPPC和DSPC分散體的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表示為在15分鐘噴霧事件初始和最終階段的15秒時(shí)間內(nèi)MMAD或GSD的平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。*在噴霧事件內(nèi)P〈0.05。§彼此相比時(shí)P〈0.05。
[0081]圖29A顯示所研究制劑的TED NGI和TED DUSA值。圖29B顯示使用Aeroneb Pro?噴霧器，在15L/min的流速下，來(lái)自CoQlO的卵磷脂DMPC、DPPC和DSPC分散體的霧化細(xì)顆粒的估計(jì)總劑量(FPDet)和分?jǐn)?shù)(FPF)。結(jié)果表示為與在15分鐘噴霧事件初始和最終階段的15秒期間相關(guān)的平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)。*當(dāng)與合成磷脂相比時(shí)P〈0.05。t在噴霧事件內(nèi)P〈0.05?！毂舜吮容^沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。；[:當(dāng)彼此相比時(shí)P〈0.05。
[0082]圖30顯示使用Aeroneb Pro ?噴霧器霧化15分鐘的CoQlO分散體的平均Dv (50)(n=3)。
[0083]圖31顯示用于向老鼠噴霧CoQlO的示例僅鼻(nose-only)給藥裝置。將六只小鼠單獨(dú)地限制在管中，使它們的鼻子暴露于腔室。噴霧器位于腔室和風(fēng)扇之間，所述風(fēng)扇提供足夠的氣流以向腔室填充藥物氣溶膠。該管道系統(tǒng)開(kāi)環(huán)以避免藥物再循環(huán)。
[0084]圖32顯示僅鼻吸入腔室內(nèi)CoQlO的估計(jì)的藥物濃度-時(shí)間曲線。
[0085]圖33顯示在15分鐘期間噴霧至僅鼻吸入腔室內(nèi)的小鼠的來(lái)自合成磷脂制劑的CoQlO的累計(jì)估計(jì)劑量。
[0086]圖34顯示在15分鐘期間噴霧至僅鼻吸入腔室中的小鼠后，相對(duì)于濕肺組織標(biāo)準(zhǔn)化的來(lái)自合成磷脂分散體的CoQlO的平均肺濃度。誤差條指示標(biāo)準(zhǔn)差(n=6)。
[0087]圖35顯示在15分鐘期間噴霧至僅鼻吸入腔室內(nèi)的小鼠后，相對(duì)于動(dòng)物體重標(biāo)準(zhǔn)化的來(lái)自合成磷脂分散體的至CoQlO平均肺濃度。誤差條指示標(biāo)準(zhǔn)差(n=6)。
[0088]圖36顯示在15分鐘噴霧給藥后0.5和I小時(shí)，小鼠鼻腔中CoQlO的沉積。結(jié)果
表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=6)。*與對(duì)照組相比P〈0.05。t同一組內(nèi)比較時(shí)P〈0.05。
[0089]圖37顯示含有不同濃度的CoQlO的DMPC-穩(wěn)定分散體霧化的傳輸圖。
[0090]圖38顯示與包括特定調(diào)理作用縮減劑的靜脈內(nèi)制劑相比，DMPC-和DSPC-穩(wěn)定的分散體霧化的傳輸圖。圖39-41顯示與圖38相關(guān)地研究的制劑的其它特征。根據(jù)下述詳細(xì)說(shuō)明、實(shí)施例和權(quán)利要求書(shū)，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)會(huì)是很明顯的。
[0091]發(fā)明詳述
[0092]如以上討論的，本發(fā)明提供可吸入藥物組合物，其具有包括疏水性生物活性劑的顆粒的水性分散體。由于其化學(xué)組成和制備方法，所述藥物組合物顯示出提供有利的氣溶膠傳輸和輸出——(包括穩(wěn)定的連續(xù)霧化)——的特殊物理化學(xué)性質(zhì)。
[0093]CoQlO用作一種示例性的疏水性生物活性劑。輔酶QlO，也稱(chēng)為CoQIO、泛醌或癸烯醌，天然存在于體內(nèi)。CoQlO參與線粒體呼吸中的電子傳遞和質(zhì)子傳遞。因此，改變?cè)摽寡趸瘎┑乃娇蓪?duì)生物學(xué)活動(dòng)比如衰老、神經(jīng)退行性疾病和心血管疾病及癌癥具有作用。
[0094]CoQlO是一種水溶性差的化合物，以黃色或橙色結(jié)晶粉末形式存在。文獻(xiàn)中報(bào)道的CoQlO的最高血漿濃度為10.7 μ mol/L (約9 μ g/ml)，其是通過(guò)施用溶解的口服劑型(例如，市售可獲得的食品補(bǔ)充劑或“營(yíng)養(yǎng)物”)獲得的。然而，最大耐受劑量(MTD)仍未確定。本發(fā)明提供用于以改善藥效學(xué)反應(yīng)的有利藥代動(dòng)力學(xué)特性肺部遞送的CoQlO劑型，用于治療呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤。通過(guò)將高的藥物量遞送至疾病部位，可以使用較低劑量(與靜脈內(nèi)施用或口服施用相比較)。 [0095]下述說(shuō)明書(shū)提供關(guān)于本發(fā)明組合物(包括疏水性生物活性劑、磷脂、水性分散介質(zhì)及其它組分)、制備方法(包括混合、均質(zhì)化和霧化)和治療方法(包括藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)和適應(yīng)癥)的進(jìn)一步詳細(xì)內(nèi)容。最后，詳細(xì)說(shuō)明提供了本發(fā)明的示例性實(shí)施例，包括實(shí)施例1:適應(yīng)于連續(xù)噴霧的磷脂穩(wěn)定的CoQlO亞微米水性分散體的開(kāi)發(fā)和表征；實(shí)施例2:基于CoQlO水性分散體的流變行為預(yù)測(cè)體外霧化特性；實(shí)施例3: CoQlO可吸入制劑在小鼠中的肺部沉積和系統(tǒng)分布；實(shí)施例4:使用HPLC的疏水性藥物的低濃度范圍測(cè)定；實(shí)施例5:在適于連續(xù)噴霧的磷脂納米分散體中合適的疏水性藥物濃度的確定；和實(shí)施例6:測(cè)定對(duì)于肺施用磷脂包封的疏水性生物活性劑的分散體的炎性反應(yīng)。
[0096]組合物
[0097]在各個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的可吸入藥物組合物包括適于連續(xù)霧化的顆粒的水性分散體。所述顆粒各自包括疏水性生物活性劑和磷脂，且分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，顆粒為脂質(zhì)體顆粒，或包括一小部分脂質(zhì)體顆粒。在某些實(shí)施方案中，所述組合物可以基本上由疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)組成。然而，包括一種或多種另外的組分的其它實(shí)施方案是可能的。以下依次討論包括在本發(fā)明組合物中的各種組分。
[0098]疏水性生物活性劑
[0099]在多個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種疏水性生物活性劑(也稱(chēng)為親脂性生物活性劑)可以在可吸入藥物組合物中制備。疏水性生物活性劑相對(duì)不溶于水。例如，疏水性生物活性劑可以具有約1000份的水中小于約1份生物活性劑的水中溶解度。
[0100]合適的親脂性生物活性劑可以包括，但不限于鎮(zhèn)痛劑、抗炎劑、驅(qū)腸蟲(chóng)藥、抗心律不齊劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗凝劑、抗抑郁劑、抗糖尿病劑、抗癲癇劑、抗真菌劑、抗痛風(fēng)劑、抗高血壓劑、抗瘧疾劑、抗偏頭痛藥、抗毒蕈堿劑、抗腫瘤劑、勃起功能障礙改善劑、免疫抑制劑、抗原生動(dòng)物劑、抗甲狀腺劑、抗焦慮劑、鎮(zhèn)靜劑、鎮(zhèn)靜劑、催眠藥、神經(jīng)安定藥、β -阻滯劑、心肌收縮藥、皮質(zhì)類(lèi)固醇類(lèi)、利尿劑、抗帕金森氏病劑、胃腸劑、組胺受體拮抗劑、角質(zhì)層分離藥、脂質(zhì)調(diào)節(jié)劑、抗心絞痛劑、COX-2抑制劑、白細(xì)胞三烯抑制劑、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、肌肉松弛劑、營(yíng)養(yǎng)劑、阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥、蛋白酶抑制劑、性激素、刺激劑、肌肉松弛劑、抗骨質(zhì)疏松劑、抗肥胖劑、認(rèn)知增強(qiáng)劑、抗尿失禁劑、營(yíng)養(yǎng)油、抗-良性前列腺肥大劑、必需脂肪酸、非必需脂肪酸、其組合等等。
[0101]合適的疏水性活性劑的非限制性實(shí)例包括，但不限于acutretin、阿苯達(dá)唑、沙丁胺醇、氨魯米特、胺碘酮、氨氯地平、苯丙胺、兩性霉素B、阿托伐他汀、阿托伐醌、阿奇毒素、巴氯芬、倍氯米松、benezepril、苯佐那酯、倍他米松、bicalutanide、布地奈德、安非他酮、白消安、布替萘芬、骨化二醇、卡泊三烯、骨化三醇、喜樹(shù)堿(camptothecan)、坎地沙坦、辣椒素、卡馬西平、胡蘿卜素、塞來(lái)昔布、西立伐他汀(、西替利嗪、氯苯那敏、膽鈣化醇、西洛他唑、西咪替丁、桂利嗪、環(huán)丙沙星、西沙必利、克拉霉素、氯馬斯汀、氯米芬、氯米帕明、氯吡格雷、可待因、輔酶Q10、環(huán)苯扎林、環(huán)胞菌素、達(dá)那唑、丹曲洛林、右氯苯那敏、雙氯芬酸、雙香豆素、地高辛、二氫表雄酮、二氫麥角胺、二氫速留醇、地紅霉素、多奈哌齊、依法韋侖、eposartan、麥角|丐化醇、麥角胺、必需脂肪酸源、依托度酸、依托泊苷、法莫替丁、非諾貝特、芬太尼、非索非那定、非那雄胺、氟康唑、氟比洛芬、氟伐他汀、磷苯妥英、夫羅曲普坦、呋喃唑酮、加巴噴丁、吉非羅齊、格列本脲、格列吡嗪、格列苯脲、格列美脲、灰黃霉素、齒泛群、布洛芬、厄貝沙坦、依立替康、二硝酸異山梨醇酯、異維A酸、伊曲康唑、伊維菌素、酮康唑、酮咯酸、拉莫三嗪、蘭索拉唑、來(lái)氟米特、賴(lài)諾普利、洛哌丁胺、氯雷他定、洛伐他汀、L-甲狀腺素、葉黃素、番茄紅素、甲羥孕酮、米非司酮、甲氟喹、醋酸甲地孕酮、美沙酮、甲氧沙林、甲硝唑、咪康唑、咪達(dá)唑侖、米格列醇、米諾地爾、米托蒽醌、孟魯司特、萘丁美酮、納布啡、那拉曲坦、奈非那韋、硝苯地平、尼索地平、尼魯?shù)仄?、呋喃妥因、尼扎替丁、奧美拉唑、奧普瑞白介素、甾二醇、奧沙普秦、紫杉醇、帕立骨化醇、帕羅西汀、噴他佐辛、吡格列酮、pizofetin、普伐他汀、潑尼松龍、普羅布考、黃體酮、假麻黃堿、吡斯的明、雷貝拉唑、雷洛昔芬、羅非考昔、瑞格列奈、利福布汀、利福噴汀、利美索龍、利托那韋、利扎曲普坦、羅格列酮、沙奎那韋、舍曲林、西布曲明、檸檬酸西地那非、辛伐他汀、西羅莫司、螺內(nèi)酯、舒馬普坦、他克林、他克莫司、他莫昔芬、坦洛新、塔革雷汀、他佐羅汀、替米沙坦、替尼泊苷、特比萘芬、特拉唑嗪、四氫大麻酹、噻加賓、噻氯匹唳、tirofibran、替扎尼定、托吡酯、托泊替康、托瑞米芬、曲馬多、維A酸、曲格列酮、曲伐沙星、纈沙坦、文拉法辛、vertoporfin、氨己烯酸、維生素A、維生素D、維生素E、維生素K、扎魯司特、齊留通、佐米曲坦、唑吡坦、吡嗪哌酯、其組合、等。也可以使用上列生物活性劑的鹽、異構(gòu)體和/或其它衍生物以及其組合。
[0102]在各個(gè)實(shí)施方案中，CoQlO可以是疏水性生物活性劑(例如，單獨(dú)或與一種或多種另外的生物活性劑組合)。CoQIO，本文有時(shí)稱(chēng)為CoQlO或癸烯醌，是一種流行的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑，且可以在營(yíng)養(yǎng)品店、健康食品店、藥房等作為維生素樣補(bǔ)充劑以膠囊的形式找到，推測(cè)其有助于通過(guò)泛醇-CoQlO (泛醌)的還原形式-的抗氧化性質(zhì)保護(hù)免疫系統(tǒng)。如本文使用的，CoQlO也可以包括其衍生物，包括例如泛醇。類(lèi)似地，CoQlO也可以包括泛醌和泛醇的類(lèi)似物和前體化合物，及其組合。
[0103]在各個(gè)實(shí)施方案中，親脂性的生物活性劑比如輔酶QlO可以與其它生物活性劑或化合物聯(lián)合用于體內(nèi)施用。同樣地，任何生物活性劑都可以與另外的添加物和/或賦形劑組合。所述其它生物活性劑、添加物和/或賦形劑可以是疏水性的或親水性的。
[0104]可以根據(jù)本發(fā)明使用生物活性劑的組合治療癌癥，包括但不限于肺癌。例如，親脂性生物活性劑比如CoQlO可以作為混合物或共混物與脫氧葡萄糖類(lèi)組合，包括2-脫氧葡萄糖和/或2-脫氧葡萄糖鹽、6-脫氧葡萄糖和/或6-脫氧葡萄糖鹽，并體內(nèi)施用于患者。合適的鹽可以包括磷酸鹽、乳酸鹽、丙酮酸鹽、羥基丁酸鹽、其組合等。在某些實(shí)施方案中，所述鹽可以是磷酸鹽，比如2-脫氧葡萄糖磷酸鹽、6-脫氧葡萄糖磷酸鹽、其組合等。在其它實(shí)施方案中，泛醌或泛醇的苯醌或醌醇環(huán)可以在I位、4位或兩個(gè)位置被脫氧葡萄糖或其鹽取代，比如2-脫氧葡萄糖或6-脫氧葡萄糖或其鹽，包括2-脫氧葡萄糖磷酸鹽或6-脫氧葡萄糖磷酸鹽，使得取代的泛醌或泛醇然后施用于患者。
[0105]類(lèi)似地，二羥基丙酮可以作為混合物或共混物與CoQlO組合，并施用于患者體內(nèi)。在這樣的實(shí)施方案中，泛醌或泛醇的苯醌或醌醇環(huán)可以在I位、4位或兩個(gè)位置被二羥基丙酮取代，使得取代的泛醌或泛醇然后施用于患者。在其它實(shí)施方案中，可以與親脂性生物活性劑比如輔酶QlO —起施用的化合物包括琥珀酸鹽、丙酮酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、丙二酸鹽、乳酸鹽、戊二酸鹽、其組合等，具體實(shí)例包括但不限于琥珀酸鈉、琥珀酸鉀、其組合等。
[0106]磷脂
[0107]在各個(gè)實(shí)施方案中，生物活性劑包含在脂質(zhì)體內(nèi)和/或另外用磷脂一起穩(wěn)定。月旨質(zhì)體可以由一種或多種脂質(zhì)體形成化合物如磷脂形成。類(lèi)似地，生物活性劑和磷脂可以形成其它物理排列，比如混合物和分散體。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以主要包括脂質(zhì)體排列、一小部分脂質(zhì)體與其它排列或者可以基本上不含脂質(zhì)體。雖然各種化合物及其組合都是可能的，但最終組合物必須最后顯示出本發(fā)明的特定物理化學(xué)性質(zhì)，其提供有利的氣溶膠傳播和輸出、藥代動(dòng)力學(xué)和/或藥效學(xué)。[0108]用于形成脂質(zhì)體的合適的磷脂和/或磷脂衍生物/類(lèi)似物包括，但不限于卵磷月旨、溶血卵磷脂、磷脂酰膽堿(例如二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)或二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿(DMPC)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂酰絲氨酸、PEG-磷脂酰乙醇胺、PVP-磷脂酰乙醇胺、其組合等。
[0109]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述磷脂為卵磷脂。卵磷脂可以衍生自蛋或大豆。這樣的卵磷脂包括市售可獲得的那些，如PH0SPH0LIP0N ? 8SG, PH0SPH0LIP0N ? 90G和PH0SPH0LIP0N ? 90H(PH0SPH0LIP0N ? 90G 的全氫化形式)，來(lái)自 American LecithinCompany, Oxford, CT(Lipo Chemicals, Inc.的部分-Lipo磷脂目錄列出了其它可能合適的磷脂，例如適用于非腸道使用的那些)。其它合適的卵磷脂包括可獲得的LECIN0LS-10 ? 卵憐脂，例如來(lái)自 Nikko Chemicals, NOF (Japan)，Lipo Chemicals, Inc.和 GenzymeCorporation,以及其它商業(yè)供應(yīng)商?？蛇x地，在某些實(shí)施方案中，可能有利地是選擇比卵磷脂親水性低的一種或多種磷脂。 [0110]可以選擇賦予得到的脂質(zhì)體囊泡負(fù)表面電荷的磷脂，其可以減少處理時(shí)間和加工能量，并且其可以幫助形成穩(wěn)定的脂質(zhì)體和霧化。例如，可以使用高磷脂酰膽堿含量的卵磷脂(例如，二棕櫚酰磷脂酰膽堿或二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿)來(lái)形成脂質(zhì)體。示例的高磷脂酰膽堿卵磷脂為PHOSPHOLIPON ? 85G，其包含最少85%的基于亞油酸的磷脂酰膽堿。該卵磷脂易于使用且能夠在低加工溫度(約20°C至約55°C )下產(chǎn)生亞微粒米脂質(zhì)體而無(wú)需加入任何其它特殊添加劑。PHOSPHOLIPON? SdG除了磷脂酰膽堿之外，還包含約5_7%的磷脂酸。
[0111]水性分散介質(zhì)
[0112]為了形成根據(jù)本發(fā)明的水性分散體，需要水介質(zhì)例如水。水性分散介質(zhì)的實(shí)例包括水、鹽水(例如，等滲鹽水、使最終制劑與患者的肺等滲的鹽溶液)和水性緩沖液(例如磷酸鹽緩沖鹽水)。其它合適的水性分散介質(zhì)可以包括與期望的化學(xué)組成、制造方法和/或醫(yī)學(xué)用途相容的其它水溶液。
[0113]另外的組分
[0114]根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物除了一種或多種生物活性劑、一種或多種磷脂和一種或多種水性分散介質(zhì)之外，還可以包括一種或多種另外的組分。另外的組分可以用于，例如增強(qiáng)含有親脂性生物活性劑的脂質(zhì)體的制劑、改善脂質(zhì)體的整體流變學(xué)和加工性質(zhì)及確保得到的脂質(zhì)體濃縮物在貯存期間的微生物完整性。這樣的組分包括，但不限于吸附劑、消泡劑、酸化劑、堿化劑、緩沖劑、抗微生物劑、抗氧化劑(例如抗壞血酸、生育酚、丁基化羥基甲苯(BHT)、多酚、植酸)、粘合劑、生物學(xué)添加劑、螯合劑(例如乙二胺四乙酸(EDTA) 二鈉、EDTA四鈉、偏硅酸鈉等)、變性劑、外用鎮(zhèn)痛藥(例如阿司匹林、非甾體抗炎劑等)、甾體抗炎藥物(比如氫化可的松等)、防腐劑(例如咪唑烷基脲、二偶氮烷基脲(diazolidinylurea)、苯氧基乙醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯等)、還原劑、增溶劑、溶劑、粘度調(diào)節(jié)劑、保濕劑、增稠劑、表面活性劑、填充劑、穩(wěn)定劑、聚合物、蛋白酶抑制劑、抗氧化劑、吸收促進(jìn)劑及其組合。這樣的另外的組分的存在量可以為分散體的0.001%重量至約10%重量。
[0115]本發(fā)明中可使用的且同時(shí)其自身潛在地具有一些活性(例如，作為抗氧化劑)的賦形劑和輔劑通常包括增強(qiáng)活性劑的效率和/或功效的化合物。給定的可呼吸聚集物中含有超過(guò)一種賦形劑、輔劑或者甚至活性劑也是可能的。
[0116]可以選擇賦形劑，并在藥物或生物活性劑顆粒形成之前或之后加入，以便使該藥物或生物活性劑顆粒能夠均勻地混合用于合適地施用。賦形劑可以包括上述描述為適用于形成脂質(zhì)體的那些。其它合適的賦形劑包括聚合物、吸收增強(qiáng)劑、溶解增強(qiáng)劑、溶解速率增加劑、穩(wěn)定性增強(qiáng)劑、生物粘性劑、控釋劑、流動(dòng)助劑和加工助劑。在某些實(shí)施方案中，合適的賦形劑包括纖維素醚、丙烯酸聚合物、膽鹽及其組合。其它合適的賦形劑包括在由 American Pharmaceutical Association 和 The Pharmaceutical Society of GreatBritain, the Pharmaceutical Press, 1986 聯(lián)合出版的 Handbook of PharmaceuticalExcipients中詳細(xì)描述的那些，將其相關(guān)部分并入本文作為參考。這樣的賦形劑為市售可獲得的和/或可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)的技術(shù)制備。
[0117]也可以單獨(dú)或組合地選擇賦形劑以通過(guò)改善流動(dòng)性或生物利用度或者控制或延遲活性劑的釋放來(lái)調(diào)整有效成份的預(yù)期功能。賦形劑的特定非限制性實(shí)例包括:SPAN80、TWEEN80、BRIJ35, BRIJ98, PLURONICS、SUCR0ESTER7、SUCR0ESTER I1、SUCR0ESTER15、十二烷基硫酸鈉、油酸、laureth-9、laureth-8、月桂酸、維生素 E、TPGS, GELUCIRE50/13、GELUCIRE53/10、LABRAFIL、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、乙醇酸和鹽、脫氧膽酸和鹽、夫西地酸鈉、環(huán)糊精、聚乙二醇、Iabrasol、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、泰洛沙泊、纖維素衍生物、聚乙氧基化蓖麻油衍生物、其組合等。
[0118]合適的保濕劑的實(shí)例包括，但不限于多元醇和多元醇衍生物，包括甘油、雙甘油、三甘油、乙二醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇(本文中有時(shí)也稱(chēng)為1，2_戊烷二醇)、異戊二醇(I, 4-戊烷二醇)、1，5-戊烷二醇、己二醇、赤蘚醇、1，2，6-己三醇、聚乙二醇(“PEG” )比如 PEG-4、PEG-6、PEG-7、PEG-8、PEG-9、PEG-10, PEG-12, PEG-14、PEG-16、PEG-18、PEG-20及其組合、糖和糖衍生物(特別地包括果糖、葡萄糖、麥芽糖、麥芽糖醇、甘露醇、肌醇、山梨醇、山梨醇硅烷二醇、蔗糖、海藻糖、木糖、木糖醇、葡糖醛酸及其鹽)、乙氧基化山梨醇(Sorbeth-6、Sorbeth-20、Sorbeth-30、Sorbeth-40)、其組合等。在其它實(shí)施方案中，可以使用二醇類(lèi)比如丁二醇、1，2-戊烷二醇、甘油、1，5-戊烷二醇、其組合等作為保濕劑。當(dāng)使用時(shí)，任一種上述保濕劑，包括其組合，可以以第二分散體的約0.1%重量至約20%重量的量存在,在實(shí)施方案中,第二分散體的約1%重量到約5%重量。
[0119]在某些實(shí)施方案中，防腐劑比如苯氧基乙醇和保濕劑比如丙二醇都可以包括在制劑中。當(dāng)與苯氧基乙醇組合時(shí)，丙二醇可以提供保濕活性并有助于濃縮物的防腐。苯氧基乙醇和丙二醇混合物可以為水溶性的和非揮發(fā)性的。該實(shí)施方案與使用脂質(zhì)體分散體的供應(yīng)商通常使用的乙醇防腐相反。當(dāng)存在時(shí)，這類(lèi)防腐劑的存在量可以為制劑的約0.01%重
量至約3%重量。
[0120]某些實(shí)施方案可以包括分散體穩(wěn)定劑。分散體穩(wěn)定劑的實(shí)例包括聚氧乙基化即，PEG化)蓖麻油(Cremophor⑧EL)、聚氧乙基化氫化蓖麻油(Cremophor ? RH40)、生育酹聚乙二醇琥珀酸酯(PEG化維生素E、維生素E TPGS)、聚山梨醇酯(Tweens ? )、脫水山梨醇脂肪酸酯(Spans (R))、膽汁酸和膽酸鹽及DMPC。
[0121]某些實(shí)施方案可以排除調(diào)理作用縮減劑(例如，可能干擾霧化的調(diào)理作用縮減劑)。例如，所述組合物可以特別地排除聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物，比如泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)、普流尼克、Lutrol和Superonic。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述組合物可以特別地排除各種鏈長(zhǎng)的聚乙二醇(PEG)、多糖、其他含PEG的共聚物、泊洛沙姆等?？蛇x地，根據(jù)本發(fā)明的制劑可以包括基本上不干擾霧化的量或種類(lèi)(例如，合適的HLB)的一種或多種調(diào)理作用增強(qiáng)劑，例如，如果調(diào)理作用增強(qiáng)劑的量賦予所述制劑另外期望的性質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包括總組合物的0.001-5%重量的聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑包括相對(duì)少量的一種或多種親水性聚合物，以改善穩(wěn)定性和增加TAO而同時(shí)保持有效連續(xù)的霧化。
[0122]制劑可以包括肺表面活性物質(zhì)和/或粘液溶解劑。合適的肺表面活性物質(zhì)包括，但不限于具有天然肺表面活性劑功能的肺表面活性劑制品。這些可以包括天然和合成的肺表面活性劑。在各個(gè)實(shí)施方案中，可以使用包含磷脂和/或肺表面活性劑蛋白的組合物。
[0123]可以用作肺表面活性劑的示例性的磷脂包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、棕櫚酰油?；字８视?POPG)和/或磷脂酰甘油(PG)。其它合適的磷脂包括各種磷脂的混合物，例如比例為約7至約3:約3至約7的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和棕櫚酰油酰基磷脂酰甘油(POPG)的混合物。
[0124]可以作為肺表面活性劑使用的市售產(chǎn)品包括⑶ROSURF ? (INN: PORACTANTALFA) (Serono, Pharma GmbH, Unterschleipheim), 一種來(lái)自均質(zhì)化豬科動(dòng)物肺的天然表面活性劑 SURVANTA ⑧(INN:BERACTANT) (Abbott GmbH, Wiesbaden),牛肺的提取物；ALVE0FACT ? (INN:B0VACTANT) (Boehringer Ingelheim)，牛肺的提取物；EX0SURF ?(INN:C0LF0SCERIL PALMITATE) (GlaxoSmithKline)，包含合成磷脂的賦形劑；SURFACTEN?(INN: SURFACTANT-TA) (Mitsubishi Pharma Corporation),從牛肺提取的肺表面活性劑；INFASURF? (INN:CALFACTANT) (Forest Pharmaceuticals), 一種從小牛肺提取的表面活性劑；ALEC ? (INN:PUMACTANT) (Britannia Pharmaceuticals)，DPPC 和 PO 的人工表面活性劑;和BLES ? (BLES Biochemical Inc.)，一種牛脂質(zhì)提取物表面活性劑。
[0125]合適的肺表面活性劑蛋白包括從天然來(lái)源獲得的蛋白比如肺灌洗液或來(lái)自羊水的提取物，和通過(guò)遺傳工程或化學(xué)合成制備的蛋白。在某些實(shí)施方案中，可以使用被命名為SP-B(表面活性劑蛋白-B)和SP-C(表面活性劑蛋白-C)及其修飾的衍生物(包括該蛋白質(zhì)的重組形式)的肺表面活性劑蛋白。
[0126]合適的粘液溶解劑包括，但不限于愈創(chuàng)甘油醚、碘化甘油、愈創(chuàng)木酚甘油醚(glyceryl guaiacolate)、水合職二醇、氯化銨、N-乙酰半胱氨酸、溴己新、氨溴素、碘化物、其可藥用鹽及其組合。
[0127] 在某些實(shí)施方案中，在本發(fā)明的包括在脂質(zhì)體中的親脂性生物活性劑的組合物中使用的防腐劑的量也可以由于包含另外的添加物而減少。例如，本發(fā)明的組合物中可以通過(guò)加入多官能二醇和通過(guò)降低水分活度Aw減少防腐劑的量，所述多官能二醇包括，但不限于1，2-戊烷二醇、1，4-戊烷二醇、己二醇、丙二醇、1，3- 丁二醇、甘油或雙甘油、其組合等，所述降低水分活度是經(jīng)由加入上述保濕劑和通過(guò)加入可溶性組分來(lái)實(shí)現(xiàn)。其它實(shí)例包括可溶性組分，比如PH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、潤(rùn)濕劑等，例如乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等?？梢约尤氲钠渌彌_劑包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二異丙醇胺、氨基甲基丙醇、氨基丁三醇、四羥基丙基乙二胺、檸檬酸、乙酸、乳酸，及乳酸的鹽，包括乳酸鈉、乳酸鉀、乳酸鋰、乳酸鈣、乳酸鎂、乳酸鋇、乳酸鋁、乳酸鋅、檸檬酸鈉、乙酸鈉、乳酸銀、乳酸銅、乳酸鐵、乳酸錳、乳酸銨、其組合等。
[0128]在某些實(shí)施方案中，將親脂性生物活性劑比如CoQlO溶解在同時(shí)具有親脂和親水性質(zhì)的物質(zhì)中可通過(guò)形成由高磷脂酰膽堿卵磷脂比如PH0SPH0LIP0N ? 85G包封的水可分散的CoQlO而有助于脂質(zhì)體制劑。
[0129]用于親脂性生物活性劑的合適的增溶劑包括，例如聚氧化烯葡聚糖、蔗糖的脂肪酸酯、寡葡糖苷的脂肪醇醚(例如，烷基多聚葡糖苷比如TRITON?)、甘油的脂肪酸酯(例如，單/二硬脂酸甘油酯或單月桂酸甘油酯)和聚氧乙烯型化合物(例如，聚氧乙烯、聚乙二醇、聚乙烯氧化物、S0LUT0L?CRE0M0PH0R?, MACR0G0L?、CARBOWAX?、P0LY0XYL?)。合適的增溶劑也包括脫水山梨醇的聚乙氧基化脂肪酸酯(例如，聚山梨酯，比如TWEEN?，SPAN?，包括聚山梨酯20和聚山梨酯80)、聚(氧化乙烯)的脂肪酸酯(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、聚(氧化乙烯)的脂肪醇醚(例如。聚氧乙基化月桂基醚、聚氧乙烯20油基醚(BRIJ98))、聚(氧化乙烯)的烷基酚醚(例如，聚氧乙基化辛基苯酚)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(也稱(chēng)為泊洛沙姆，比如“PLURONICS”，包括PLURONIC F-127，泊洛沙姆407穩(wěn)定劑)和乙氧基化脂肪和油(例如，乙氧基化蓖麻油或聚氧乙基化蓖麻油，也稱(chēng)為聚乙二醇-甘油基三蓖麻酸酯)、及其組合。
[0130]在某些實(shí)施方案中，合適的增溶劑包括聚山梨酯，例如以商品名TWEEN?銷(xiāo)售的那些。這樣的聚山梨酯的實(shí)例包括聚山梨酯80 (TWEEN?80)、聚山梨酯20 (TWEEN?20)、聚山梨酯60 (TWEEN?60)、聚山梨酸酯65 (TWEEN?65)、聚山梨酯85 (TWEEN?85)等，及這些物質(zhì)與其它類(lèi)似表面活性劑(包括ARLACEL ?表面活性劑)的組合，只要表面活性劑和表面活性劑混合物的HLB (親水親油平衡)有利于形成0/W型乳液系統(tǒng)。
[0131]在某些實(shí)施方案中，活性劑可以處于一種或多種有機(jī)溶劑或其組合的溶液中。有機(jī)溶劑可以為水可溶混的或水不可混溶的。合適的有機(jī)溶劑包括，但不限于乙醇、甲醇、四氫呋喃、乙腈、丙酮、叔丁醇、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、甲苯、己烷、庚烷、戊烷、1，3-二氧戊環(huán)、異丙醇、正丙醇、丙醛、其組合等。
[0132]制備方法
[0133]用于制備根據(jù)本發(fā)明的可吸入藥物組合物的方法包括:(i)水化磷脂，從而形成水化的磷脂；(?)混合該水化的磷脂、疏水性生物活性劑和水性分散介質(zhì)，從而得到混合物；和(iii)均質(zhì)化該混合物，從而得到脂質(zhì)體顆粒的分散體，其包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的磷脂和疏水性生物活性劑且具有約30至500nm的平均直徑。疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1 : 5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w，且所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w。由于特定制劑和制備方法，所述組合物的特征在于有利的性質(zhì)，例如當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)約50至100%的平均百分傳輸率(APT)?？蛇x地，所述組合物特征可以在于其它藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，所述組合物能夠獲得至少約500μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED)。
[0134]盡管本文討論了具體實(shí)施方案，但是可以使用在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)的各種技術(shù)制備本發(fā)明的分散體和氣霧劑。這類(lèi)方法包括快速冷凍法、沉淀法、乳液法和高壓均質(zhì)法，例如如在PCT/US2008/085669中描述的，將其全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考。根據(jù)本發(fā)明的水性分散體可以使用任何合適的方法(例如，微流化)制備，所述方法比如描述在美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng) U.S.61/313，605、U.S.61/313，632、U.S.61/385，194 和 U.S.61/385，107 中的那些，將其全部?jī)?nèi)容在此并入本文作為參考。
[0135]在混合和均質(zhì)化之前，使用增溶劑和/或加熱幫助溶解親脂性生物活性劑可能是有利的。加熱溫度和加熱時(shí)間可以取決于具體的親脂性生物活性劑、生物活性劑的固有熱穩(wěn)定性及使用的增溶劑。例如，在某些實(shí)施方案中，親脂性生物活性劑和增溶劑可以加熱至約40°C至約65°C，或約50°C至約60°C，或約50°C至約55°C，加熱時(shí)間為約I分鐘至約60分鐘，或約15分鐘至約45分鐘，或約20分鐘至約30分鐘。親脂性生物活性劑與增溶劑的重量比可以為約1:1，在一些實(shí)施方案中，約1:1至約4:2，在其它實(shí)施方案中，約1:2至約3:2。 [0136]例如，增溶劑如聚山梨酯80可能能夠溶解親脂性生物活性劑，在CoQlO的實(shí)施方案中，當(dāng)加熱至約50°C至約55°C的溫度(高于CoQlO熔點(diǎn)(其為約47°C至約48°C )的溫度)時(shí)，親脂性生物活性劑以高水平完全溶于約1:2至約3:2比率的增溶劑中。
[0137]如上所述，加入到親脂性生物活性劑中的增溶劑的量可以取決于用于形成脂質(zhì)體的增溶劑、親脂性生物活性劑和磷脂。在某些實(shí)施方案中，增溶劑的存在量可以為約0.2%至12%重量，或約1.5%到6.5%重量。
[0138]然后，親脂性生物活性劑和增溶劑的溶液可以與磷脂混合(例如，形成脂質(zhì)體)，其隨之與水性分散介質(zhì)形成分散體。為了制備分散體，磷脂和水性分散介質(zhì)可以混合在一起，并加熱至約50。。至60°C，例如55°C，加熱約1-24小時(shí)或約1-8小時(shí)，例如約I小時(shí)。
[0139]用于形成霧化顆粒的合適的快速冷凍方法包括本文提及的那些，如噴霧冷凍成液體(SFL)，如在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)N0.6，862，890中描述的，將其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考，和超快速冷凍(URF)，如在美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)N0.2004/0137070中描述的，將其全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考。在某些實(shí)施方案中，合適的SFL方法可以包括混合活性劑與溶液劑，并且通過(guò)處于低溫液體水平處或低于該水平的絕緣噴嘴噴霧有效成份-溶液劑混合物，從而使噴霧產(chǎn)生冷凍顆粒。在某些實(shí)施方案中，合適的URF方法可以包括包括活性劑和至少一種可冷凍有機(jī)溶劑的溶液與冷表面接觸以便冷凍該溶液，并除去有機(jī)溶劑。
[0140]用于形成霧化顆粒的合適的沉淀方法包括本文提及的那些，如蒸發(fā)沉淀成水性溶液(EPAS)，如在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)N0.6，756，062中描述的，將其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考，和控制沉淀(CP)，如在美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)N0.2003/0049323中描述的，將其全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考。在某些實(shí)施方案中，合適的EPAS方法可以包括將藥物或其它活性劑溶解在至少一種有機(jī)溶劑中以形成藥物/有機(jī)混合物，將該藥物/有機(jī)混合物噴霧到水性溶液中，與此同時(shí)在所述水性溶液的存在下蒸發(fā)有機(jī)溶劑以形成藥物顆粒的水性分散體。在某些實(shí)施方案中，合適的CP方法可以包括再循環(huán)抗溶劑(ant1-solvent)通過(guò)混合區(qū),將藥物或其它活性劑溶于溶劑中以形成溶液，將該溶液加入到混合區(qū)中以形成在抗溶劑中的顆粒漿液，并再循環(huán)至少一部分顆粒漿液回流過(guò)所述混合區(qū)。
[0141]用于形成霧化顆粒的合適的乳液法包括本文提及的那些，如HIPE (高內(nèi)相乳液)，如在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)N0.5，539，021和5，688，842中描述的，將其全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考。在某些實(shí)施方案中，合適的HIPE方法可以包括在乳化和穩(wěn)定量的表面活性劑、具有流速Rl的連續(xù)相液流和具有流速R2的分散相液流的存在下，連續(xù)地合并到分散器中，并利用足夠恒定的R2:R1以足量剪切力混合合并的液流，以形成高內(nèi)相比乳液而不需要相轉(zhuǎn)化或內(nèi)相分布到外相中逐步分布。
[0142]用于形成霧化顆粒的合適的高壓均質(zhì)化法包括使用均質(zhì)器和微流化器的那些，例如如在美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng) U.S.61/313，605、U.S.61/313，632、U.S.61/385，194 和U.S.61/385，107 中描述的。
[0143]上述方法可以產(chǎn)生顆粒和霧化顆粒，其形態(tài)上為晶體或無(wú)定形的。有利地，這些方法中沒(méi)有一個(gè)需要機(jī)械性研磨或其它類(lèi)似的單元操作，這些操作可引起活性劑熱降解。
[0144]可以利用均質(zhì)器、攪拌器、混合器和本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的類(lèi)似裝置，通過(guò)以高剪切混合以形成脂質(zhì)體濃縮物而均質(zhì)化一種或多種制劑組分(例如，疏水性生物活性劑、磷脂和/或水性分散介質(zhì))。在某些實(shí)施方案中，可以使用市售可獲得的均質(zhì)器制備親脂性生物活性劑的亞微米脂質(zhì)體分散體，所述均質(zhì)器包括由Gifford-Wood, Frain, IKA和其它制造商制造的Ultra-Turrax TP18/10均質(zhì)器或類(lèi)似類(lèi)型的定子/轉(zhuǎn)子均質(zhì)器，以及多階段均質(zhì)器、膠體磨、高壓勻化器(sonolator)或其它類(lèi)型的均質(zhì)器。上述定子/轉(zhuǎn)子類(lèi)型的均質(zhì)器具有約IOO rpm至約15，OOOrpm的操作范圍，并且可以裝有低剪切、標(biāo)準(zhǔn)剪切和高剪切范圍的頭篩(head screen)。
[0145]均質(zhì)化可以通過(guò)以合適的速率混合兩個(gè)相來(lái)進(jìn)行，所述合適的速率為例如約5，OOOrpm至約 15，OOOrpm,在某些實(shí)施方案中約 5，000,7, 500、10，000、12，500 或 15，OOOrpm或其間的值或范圍。均質(zhì)器的剪切速率也可以通過(guò)增加或減小圍繞均質(zhì)器頭的處理篩的尺寸而提高或降低而與均質(zhì)化軸的速率無(wú)關(guān)。
[0146]在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體可以由提供給Silverson L4RT均質(zhì)器的標(biāo)準(zhǔn)乳化篩和高剪切篩產(chǎn)生?；旌峡梢赃M(jìn)行少于約90分鐘的合適時(shí)間段，在一些實(shí)施方案中，約2分鐘至約60分鐘，在一些實(shí)施方案中，約5分鐘到約45分鐘。在一個(gè)實(shí)施方案中，混合可以進(jìn)行至多接近5分鐘。得到的脂質(zhì)體的粒徑可以為約30nm至約500nm、50nm至約200nm、約50nm 至約 150nm、約 50nm 至約 100nm、約 50nm 至約 75nm、約 75nm 至約 100nm、約 IOOnm 至約150nmo
[0147]在一些實(shí)施方案中，可以將混合的組分加熱至約45°C至約65°C的溫度，在一些實(shí)施方案中，約50°C至約55°C，并以上述速率和時(shí)間采用高剪切均質(zhì)化混合以形成CoQlO的亞微米脂質(zhì)體。當(dāng)親脂性生物活性劑為CoQlO時(shí)，CoQlO相、水/磷脂相和混合相的處理溫度都不應(yīng)超過(guò)約65°C以避免CoQlO的氧化退化。然而，在約50°C至約60°C的溫度下處理該混合物可能是希望的以獲得約5，OOOcP至約100，OOOcP的期望濃縮物粘度，在一些實(shí)施方案中在約35°C至約45°C下約15，OOOcP至約40，OOOcP的粘度。在某些實(shí)施方案中，在該溫度范圍之內(nèi)以上述速率處理延長(zhǎng)的時(shí)期例如至多約60分鐘，應(yīng)當(dāng)不會(huì)不利地影響得到的脂質(zhì)體的完整性。
[0148]通過(guò)利用機(jī)械裝置，比如例如研磨、應(yīng)用超聲能、在噴霧系統(tǒng)中形成膠態(tài)尺寸的小滴或在限制通道內(nèi)以高速率剪切在液體流中的顆粒，可以減小親脂性生物活性劑分散體的顆粒尺寸?？赡苄枰罅康哪芰縼?lái)裂解大顆粒。較小顆粒會(huì)增加活性劑的界面面積。在某些實(shí)施方案中，使用表面活性劑減小界面能，從而穩(wěn)定分散體。粒徑?jīng)Q定了總界面面積，并因此界面能必須適應(yīng)于獲得穩(wěn)定的系統(tǒng)。隨著粒徑降低，需要增加的能量以產(chǎn)生顆粒，并且因?yàn)榭偙砻娣e增加，表面活性劑必須適應(yīng)更大的界面能。
[0149]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)使用微流化器減小生物活性劑分散體的顆粒尺寸。在某些實(shí)施方案中，在減小分散體顆粒尺寸時(shí)，可能希望CoQlO混合物在微流化器進(jìn)行幾次循環(huán)以獲得期望粒徑。例如，本發(fā)明的生物活性劑(例如CoQlO)的磷脂分散體可以在微流化器中進(jìn)行至少5、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100次循環(huán)或更多循環(huán)。優(yōu)選地，生物活性劑(例如CoQlO)的磷脂分散體在微流化器中進(jìn)行足夠次數(shù)的循環(huán)以獲得優(yōu)選的粒徑，例如，適用于例如經(jīng)由噴霧器鼻內(nèi)遞送的粒徑。
[0150]用于本發(fā)明的合適的微流化器包括例如M110P,其可從Microfluidics, Inc.(MFI)可獲得。MllOP具有75-μ m的通道和F12Y相互作用腔。在操作M3中，微流化器具有25，OOOpsi的進(jìn)口壓力。許多其它微流化器是本領(lǐng)域通常已知的，且預(yù)期適用于本發(fā)明的方法。本發(fā)明中使用的微流化器的進(jìn)口壓力可以為至少約20，000?81，至少約25，000?81，優(yōu)選至少約30，OOOpsi。
[0151]在本文提供的實(shí)施例中，在具有F12Y相互作用腔與75-μ m通道的MllOP微流化器中最少10次循環(huán)之后，用卵磷脂產(chǎn)生小于160nm平均直徑的顆粒并用DPPC產(chǎn)生約IlOnm的顆粒。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，親脂性生物活性劑(例如CoQIO)、磷脂(例如卵磷月旨、DPPC或DMPC)和水性分散介質(zhì)的相對(duì)量可以基于期望的性質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)，比如期望的治療用途、霧化、藥代動(dòng)力學(xué)和/或藥效學(xué)。在本文提供的實(shí)施例中，微流化器在約30，000PSI的壓力下操作，雖然在其它實(shí)施方案中可以使用其它壓力。
[0152]霧化
[0153]根據(jù)本發(fā)明的方法可以包括霧化脂質(zhì)體顆粒的分散體，從而形成包含多個(gè)液滴的可呼吸氣溶膠，各個(gè)液滴包含脂質(zhì)體顆粒的分散體且具有約I至5 μ m的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)。但是，在某些實(shí)施方案中，顆粒具有小于I μ m和/或大于5 μ m的直徑。
[0154]圖1A顯示肺部遞送根據(jù)本發(fā)明的疏水性生物活性劑的水性脂質(zhì)體分散體的示意圖。將大塊的藥物配制成具有小(藥物)顆粒尺寸的磷脂-穩(wěn)定的水性分散體，其使用振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器霧化成為包含小藥物顆粒的液滴。為了定義的目的，“顆?！敝杆苑稚Ⅲw的內(nèi)相，“液滴”指變成所產(chǎn)生的氣溶膠的結(jié)果。在各個(gè)實(shí)施方案中，各個(gè)液滴包含一定量的藥物顆粒。圖1B顯示獲得具有小藥物顆粒尺寸的水性分散體的三種不同的試驗(yàn)制備方法。為了圖1B的目的，在55°C下，將在水中包含6%w/w卵磷脂的磷脂分散體加入到熔融的CoQlO中(l%w/w)。然后，如下處理所述制劑:(1)高剪切混合(Ultra-Turrax ?TP18/10Homogenizer,具有 8mm 轉(zhuǎn)子葉片，IKA-Werke, Staufen, Germany):將 10OmT,的制劑在300rpm下攪拌，并以10000-12000rpm進(jìn)行高剪切混合45分鐘；(2)微流化(M-110YHigh Pressure Pneumatic Microfluidizer ?, Microfluidics, Newton, MA USA):該過(guò)
程通過(guò)沿相反方向具有兩個(gè)噴射流來(lái)實(shí)現(xiàn)。在該處理過(guò)程中，各輪次表示藥物顆粒必須彼此碰撞的一次機(jī)會(huì)，從而破裂且變得更小。使用探頭聲處理2分鐘使所述制劑預(yù)分散，接著以約13Kpsi進(jìn)行30輪；或(3)超聲處理(Ultrasonication) (Omni SonicRuptor-250 ? Ultrasonic Homogenizer,具有 5/32 " (3.9mm)Micro-Tip Probe, OmniInternational, Kennesaw, GA, USA):在125W下60分鐘。這些不同制備方法的結(jié)果的比較顯示在圖5中，且在下面進(jìn) 一步詳細(xì)討論。
[0155]制備和遞送根據(jù)本發(fā)明的氣溶膠可以通過(guò)用于水性脂質(zhì)體分散體的連續(xù)噴霧的任何合適的遞送方式獲得，包括噴霧器。最合適的遞送方式取決于要遞送至肺的活性劑、制劑的其它組分、期望的活性劑有效量及對(duì)于給定患者特定的特征。對(duì)于本發(fā)明，這類(lèi)裝置的選擇和操作詳細(xì)信息都在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。
[0156]在各個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的氣溶膠可以通過(guò)超聲波噴霧器、噴射噴霧器、軟霧吸入器(soft mist inhaler)、超聲振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器或利用振動(dòng)篩網(wǎng)技術(shù)的其它噴霧器來(lái)遞送。例如，合適的超聲波噴霧器包括從日本的Omron Corporation可獲得的OmronNE-Ul7和從德國(guó)的Beurer GmbH可獲得的Beurer Nebulizer IH30。合適的噴射噴霧器包括，例如從Oklahoma.的A&H Products, Inc.可獲得的AquaTower。合適的軟霧噴霧器包括例如從德國(guó)的Boehringer Ingelheim GmbH可獲得的Respimat Soft Mist。合適的振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器包括，例如從德國(guó)的Pari Pharma GmbH可獲得的Pari eFlow,從Pittsburg, Pennsylvania 的 Respironics Inc.可獲得的 Respironics 1-Neb,從日本的Omron Corporation 可獲得的 Omron MicroAir,從德國(guó)的 Beurer GmbH 可獲得的 BeurerNebulizer IH50,和從愛(ài)爾蘭的Aerogen Ltd.可獲得的Aerogen Aeroneb。對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)，針對(duì)吸入療法，通過(guò)它們經(jīng)由被動(dòng)呼吸遞送高藥物量的能力在加壓計(jì)量吸入器(PMDIs)和干粉吸入器(DPIs)中選擇。因此，在施用藥物期間，患有肺機(jī)能損傷的患者(例如肺癌患者)預(yù)期不會(huì)經(jīng)歷困難。
[0157]雖然本發(fā)明已經(jīng)根據(jù)待治療的具體病癥、親脂性生物活性劑相當(dāng)詳細(xì)地討論了吸入制劑，但是上述制劑也可以配制且以其它全身和/或局部途徑施用。例如，氣溶膠可以選擇性地遞送至呼吸道、口、氣管、肺、鼻、粘膜、鼻竇或其組合中的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域。遞送可以實(shí)現(xiàn)區(qū)域、局部或全身遞送、或其組合的一種或多種。可選地，氣溶膠也可以用于非吸入遞送。本發(fā)明的組合物也可以將所述組合物簡(jiǎn)單地加入到其中包含細(xì)胞的流體中體外施用至細(xì)胞(例如，在體外培養(yǎng)中誘導(dǎo)癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡或用于科學(xué)、臨床、或臨床前實(shí)驗(yàn))。
[0158]治療方法
[0159]本發(fā)明的組合物也可以用于施用親脂性生物活性劑以治療可從應(yīng)用該親脂性生物活性劑受益的任何疾病或病癥，包括在國(guó)際公布N0.WO 2005/069916中公開(kāi)的那些，將其全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考。
[0160]根據(jù)本發(fā)明施用可吸入藥物組合物的方法可以包括步驟:(i)霧化脂質(zhì)體顆粒的分散體，從而形成包含多個(gè)質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)為約I至5 μ m的液滴的可呼吸氣溶膠，和(ii)將治療有效量的疏水性生物活性劑遞送至需要治療的受試者的肺。進(jìn)一步，脂質(zhì)體顆粒的分散體具有約30至500nm的平均直徑，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的疏水性生物活性劑和磷脂。而且，疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w，所述磷脂占組合物的約0.1至 30%w/w ；.[0161]由于特定制劑和制備方法的結(jié)果，所述組合物特征在于有利的性質(zhì)，例如當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，約50至100%的平均百分傳輸率(APT)?？蛇x地，所述組合物特征可以在于其它藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，所述組合物能夠獲得至少約600 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度或經(jīng)15秒至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED)。
[0162]其它藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)可以包括沉積質(zhì)量分?jǐn)?shù)、遞送至靶標(biāo)的藥物和/或制劑的量及靶標(biāo)處的保留時(shí)間。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明可用于沉積至少約1、5、10、15或20%的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。本發(fā)明也可以用于幫助遞送高于0.25 μ g/g的活性劑至深肺部。在某些實(shí)施方案中，遞送至肺可以是在肺組織中至少約1、5、10、15、20、25、30、50、100、200、300、400或500 μ g/g的生物活性劑。而且，所述制劑可以保持在肺中(例如“保留時(shí)間”)至少約2、4、
6、8、10、12、24或48小時(shí)的時(shí)間。
[0163]如本文使用的術(shù)語(yǔ)“藥用有效量”和“治療有效量”包括當(dāng)施用至包括人類(lèi)的動(dòng)物受試者時(shí)產(chǎn)生期望的藥理或治療效果的生物活性劑或藥物的量或濃度。包括藥用有效量或治療有效量的活性劑或藥物的量可以根據(jù)多種因素變化，比如使用的藥物類(lèi)型、具體藥物的效能、制劑的施用途徑、用于施用所述制劑的系統(tǒng)、其組合等。
[0164]本文的術(shù)語(yǔ)“治療(treatment) ”或“處理(treating) ”包括哺乳動(dòng)物中疾病的任何治療，包括:(i)預(yù)防疾病，即，使疾病的臨床癥狀不發(fā)生；(ii)抑制疾病，即，阻止臨床癥狀的發(fā)展；和/或(iii)減輕疾病，即，引起臨床癥狀的消退。
[0165]在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可以用于治療癌癥。如本文使用的“癌癥”指哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)所有類(lèi)型的癌癥或贅生物(neoplasm)或惡性腫瘤，包括，但不限于:白血病、淋巴瘤、黑色素瘤、癌瘤(carcinoma)和肉瘤。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“癌癥”、“贅生物”和“腫瘤”可互換地使用，且以其單數(shù)或復(fù)數(shù)形式使用時(shí)，指出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化使其對(duì)宿主生物體成為病態(tài)的細(xì)胞。
[0166] 原發(fā)性癌細(xì)胞(即，從惡性轉(zhuǎn)化部位的附近獲得的細(xì)胞)可容易地通過(guò)熟知的技術(shù)(包括組織學(xué)檢查)與非癌細(xì)胞區(qū)分。如本文使用的癌細(xì)胞的定義不僅包括原發(fā)性癌細(xì)胞，而且包括來(lái)源于癌細(xì)胞祖先的任何細(xì)胞。這包括轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞，及來(lái)源于癌細(xì)胞的體外培養(yǎng)物和細(xì)胞系。
[0167]當(dāng)提及通常表示為實(shí)體瘤的癌癥類(lèi)型時(shí)，“臨床可檢測(cè)的”腫瘤為基于腫瘤團(tuán)塊可檢測(cè)的腫瘤，例如通過(guò)如CAT掃描、MR成像、X射線、超聲或觸診的方法，和/或因?yàn)樵诳蓮幕颊攉@得的樣品中一種或多種癌癥特異性抗原的表達(dá)使其可檢測(cè)的腫瘤。
[0168]癌癥的實(shí)例包括腦癌、乳腺癌、胰腺癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、黑色素瘤、間皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宮癌和髓母細(xì)胞瘤。
[0169]術(shù)語(yǔ)“肉瘤”一般指由物質(zhì)如胚性結(jié)締組織構(gòu)成且通常由埋入纖維狀物質(zhì)或均質(zhì)物質(zhì)中的密堆積的細(xì)胞組成的腫瘤。可以用本發(fā)明的包括霧化顆粒的組合物和任選的增效劑和/或化療劑治療的肉瘤的實(shí)例包括，但不限于軟骨肉瘤、纖維肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤(melanosarcoma)、粘液肉瘤、骨肉瘤、脂肉瘤、脂肪肉瘤、肺泡樣軟組織肉瘤、成釉細(xì)胞肉瘤(ameloblastic sarcoma)、葡萄樣肉瘤、綠色瘤肉瘤、chorine carcinoma、胚胎肉瘤、腎母細(xì)胞瘤肉瘤(Wilms’ tumor sarcoma)、子宮內(nèi)膜肉瘤、基質(zhì)肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing’ ssarcoma)、筋膜肉瘤、成纖維細(xì)胞肉瘤、巨細(xì)胞肉瘤、粒細(xì)胞肉瘤、何杰金氏肉瘤、特發(fā)性多發(fā)性色素沉著出血性肉瘤(idiopathic multiple pigmented hemorrhagic sarcoma) >B細(xì)胞的免疫母細(xì)胞肉瘤、淋巴瘤、T-細(xì)胞的免疫母細(xì)胞肉瘤、詹恩遜氏肉瘤(Jensen’ ssarcoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi，s sarcoma)、枯氏細(xì)胞肉瘤(Kupffer cell sarcoma)、血管肉瘤、白色肉瘤、惡性間葉瘤肉瘤、骨膜外肉瘤、網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤(reticulocyticsarcoma)、魯斯氏肉瘤(Rous sarcoma)、衆(zhòng)液囊性肉瘤(serocystic sarcoma)、滑膜肉瘤(synovial sarcoma)和毛細(xì)血管擴(kuò)張性肉瘤。
[0170]術(shù)語(yǔ)“黑色素瘤”包括由皮膚及其它器官的黑色素細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生的腫瘤?？梢杂帽景l(fā)明的包括霧化顆粒的組合物治療的黑色素瘤包括，但不限于肢端雀斑性黑色素瘤、無(wú)黑色素性黑色素瘤、良性幼年I型黑色素瘤、Cloudman' s黑色素瘤、891黑色素瘤、哈-帕二氏黑色素瘤(Harding-Passey melanoma)、青年型黑色素瘤、惡性雀斑樣痣黑色素瘤、惡性黑色素瘤、結(jié)節(jié)性黑色素瘤、甲下黑色素瘤和淺表擴(kuò)散性黑色素瘤。
[0171]術(shù)語(yǔ)“癌瘤”指由上皮細(xì)胞形成的傾向于浸潤(rùn)周?chē)M織和導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的惡性新生物?？梢杂帽景l(fā)明的包括霧化顆粒的組合物治療的癌瘤包括，但不限于腺泡癌、腺泡狀癌、囊性腺癌(adenocystic carcinoma)、腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma)、腺癌、腎上腺皮質(zhì)癌、肺泡上皮癌(alveolar carcinoma)、肺泡細(xì)胞癌(alveolar cell carcinoma)、基底細(xì)胞癌(basal cell carcinoma)、基底細(xì)胞癌(carcinoma basoceIlulare)、基底樣癌、基底鱗狀細(xì)胞癌、細(xì)支氣管肺泡癌、細(xì)支氣管癌、支氣管癌、髓樣癌(caebrifonncarcinoma)、肝小膽管癌(cholangiocellular carcinoma)、域毛膜癌、膠樣癌、粉剌狀癌、子宮體癌(corpus carcinoma)、篩狀癌、錯(cuò)甲狀癌、皮膚癌、圓柱細(xì)胞癌(cylindricalcarcinoma)、柱狀細(xì)胞癌(cylindrical cell carcinoma)、導(dǎo)管癌、硬癌、胚胎癌、髓樣癌(encephaloid carcinoma)、表皮樣癌(epiermoid carcinoma)、腺樣上皮癌(carcinomaepitheliale adenoides)、外植癌、潰痕性癌、纖維癌、膠狀癌(gelatiniform carcinoma)、膠樣癌(gelatinous carcinoma)、巨細(xì)胞性癌(giant cell carcinoma)、巨細(xì)胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌、粒層細(xì)胞癌、發(fā)母質(zhì)癌、多血癌、肝細(xì)胞癌、許特萊氏細(xì)胞腺癌(Hurthle cell carcinoma)、透明癌、hypemephroid carcinoma、嬰兒胚胎癌、原位癌、表皮內(nèi)癌、上皮內(nèi)癌、Krompecher ' s carcinoma、Kulchitzky-細(xì)胞癌、大細(xì)胞癌、豆?fàn)畎?lenticular carcinoma)、豆?fàn)畎?carcinoma lenticulare)、脂瘤樣癌、lyrnphoepithelial carcinoma、髓樣癌(carcinoma medullare)、髓樣癌(medullarycarcinoma)、黑色素癌、軟癌(carcinoma moue)、粘液癌(mucinous carcinoma)、粘液癌(carcinoma muciparum)、粘液細(xì)胞癌、粘液表皮樣癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、粘液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤樣癌(carcinoma myxomatodes)、鼻咽癌、燕麥細(xì)胞癌(oatcell carcinoma)、骨化性癌、類(lèi)骨質(zhì)癌、乳頭狀癌、門(mén)脈周癌、前侵襲癌、棘細(xì)胞癌(pricklecell carcinoma)、軟糊狀癌(pultaceous carcinoma)、腎臟的腎細(xì)胞癌、備細(xì)胞癌、肉瘤樣癌、施奈德氏癌、硬癌(scirrhous carcinoma)、陰囊癌、印戒細(xì)胞癌、單純癌、小細(xì)胞癌、solenoid carcinoma、球形細(xì)胞癌、梭形細(xì)胞癌、髓狀癌(carcinoma spongiosum)、鱗癌、鱗狀細(xì)胞癌、繩捆癌(string carcinoma)、血管擴(kuò)張性癌(carcinoma telangiectaticum)、毛細(xì)管擴(kuò)張癌(carcinoma telangiectodes)、移行細(xì)胞癌、塊狀癌(carcinoma tuberosum)、結(jié)節(jié)性癌(tuberous carcinoma)、撫狀癌等。
[0172]可以用本發(fā)明的包括霧化顆粒的組合物治療的另外的癌癥包括，例如霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、橫紋肌肉瘤、原發(fā)性血小板增多、原發(fā)性巨球蛋白血病、小細(xì)胞肺腫瘤、原發(fā)性腦腫瘤、胃癌、結(jié)腸癌、惡性胰腺insulanoma、惡性類(lèi)癌瘤(malignant carcinoid)、尿道/膀胱癌、惡變前皮膚損傷、睪丸癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、食管癌、泌尿生殖道癌、惡性高鈣血癥、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、腎上腺皮質(zhì)癌和前列腺癌。
[0173]盡管已經(jīng)詳細(xì)討論了多種癌癥，但是本發(fā)明的組合物和方法還應(yīng)用于其它呼吸道、口腔、鼻腔、鼻竇和肺部病理，包括但不限于哮喘、變態(tài)反應(yīng)、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、急性支氣管炎、肺氣腫、囊性纖維化、肺炎、結(jié)核病、肺水腫、急性呼吸窘迫綜合征、肺塵埃沉著病、間質(zhì)性肺病、肺水腫、肺栓塞、肺動(dòng)脈高血壓、胸腔積液、氣胸、間皮瘤、肌萎縮性側(cè)索硬化、重癥肌無(wú)力和肺病。
實(shí)施例
[0174]下述實(shí)施例意欲僅示例說(shuō)明，且不意味著以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0175]實(shí)施例1:適應(yīng)于連續(xù)噴霧的磷脂-穩(wěn)定的CoQlO亞微米水性分散體的開(kāi)發(fā)和表征 [0176]該實(shí)施例提供開(kāi)發(fā)用于肺部遞送疏水性藥物的合適制劑的方法，使用CoQlO作為個(gè)案研究。在初步研究(數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示)之后，選擇賦形劑(例如磷脂)和霧化裝置(例如，Aeroneb Pro⑧振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器)。使用X射線衍射(XRD)、差示掃描量熱法(DSC)、激光衍射法(LD)和掃描電子顯微術(shù)(SEM)進(jìn)行大塊藥物的初始表征。然后，高剪切混合、高壓均質(zhì)化或超聲處理被評(píng)估為獲得CoQlO的小粒徑分散體的可用制備方法。在選擇合適的方法之后，研究影響藥物粒徑的參數(shù)。使用LD和重量定量分析，評(píng)估噴霧以評(píng)價(jià)藥物-賦形劑-裝置組合的性能。研究的CoQlO粉末為晶體，熔點(diǎn)約51°C，粒徑為30μπι。因此，粒徑減小被認(rèn)為是肺部遞送所必需的。據(jù)發(fā)現(xiàn)微流化是一種制備水性分散體中的亞微米藥物顆粒的合適方法。處理的輪數(shù)和使用的磷脂類(lèi)型(卵磷脂或二棕櫚酰磷脂酰膽堿-DPPC)影響分散體的最終藥物粒徑。卵磷脂-穩(wěn)定的CoQlO分散體的噴霧性能根據(jù)微流化器中的輪數(shù)而變化。而且，這些分散體的流變學(xué)似乎在由使用的活性成分振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器產(chǎn)生氣溶膠中起作用。總之，使用具有適于用噴霧器肺部遞送的特征的微流化器適當(dāng)?shù)刂苽銫oQlO的水性分散體。
[0177]材料和方法
[0178]材料:輔酶QlO 由 Asahi Kasei Corp.(Tokyo, Japan)提供。卵磷脂(粒狀，NF)購(gòu)自 Spectrum Chemical Mfg.Corp.(Gardena, CA, USA)。Genzyme Pharmaceuticals(Liestal, Switzerland)提供1，2_ 二棕櫚?；鵢sn_甘油基_3_磷酸膽堿(DPPC)。氯化鈉(晶體，ACS 認(rèn)證)獲自 Fisher Chemical (Fisher Scientific, Fair lawn, NJ, USA),去離子水獲自研究實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的中心反滲透/軟化器系統(tǒng)。分散劑1，3_丙二醇(98%)購(gòu)自 Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA)。無(wú)水乙醇(ethanol200proof) USP 購(gòu)自 DeconLaboratories(King of Prussia,PA,USA)。
[0179]CoQlO的大塊特征
[0180]X 射線衍射(XRD):使用 Philips Modell710X 射線衍射儀(Philips ElectronicInstruments Inc., Mahwah, NJ, USA)進(jìn)行試驗(yàn)，所述X射線衍射儀具有在40kV和30mA的加速電壓下發(fā)射的初級(jí)單色福射(primary monochromated radiation)(CuKa I, λ =1.54056 A ) °將CoQlO粉末放置在臺(tái)上，并掃描樣品以獲得0.05°間隔的從5°至50°的2Θ角的衍射圖譜，停留時(shí)間3秒。
[0181]差不掃描量熱法(DSC):使用2920Modulated DSC (TA Instruments, NewCastle, DE, USA)進(jìn)行 DSC 試驗(yàn)，并使用 TA Universal Analysis2000 軟件進(jìn)行分析。將 CoQlO 粉末稱(chēng)重(10.5mg)到鋁鍋中(kit02190041, Perkin-ElmerInstruments, Norwalk, CT, USA),并壓實(shí)。加熱速率為10°C /min,從10至120°C分析樣品的熱行為。
[0182]激光衍射(LD):將大塊CoQlO粉末分散在去離子水中的20% (v/v) 1，3_丙二醇中以進(jìn)行粒徑分布分析。然后，將該分散樣品加入到裝備有300mm透鏡的MalvernMastersizer S ? instrument (Malvern Instruments, Worcestershire, UK)中的小室裝置中直到獲得5-10%的遮光度。內(nèi)相和分散劑的折射率分別為1.45和1.33。
[0183]掃描電子顯微術(shù)(SEM):使用SEM進(jìn)行大塊CoQlO的物理外觀的分析和粒徑的估算。具有粘合性碳帶的招臺(tái)容納該粉末樣品。在IS氣氛下，使用Cressington SputterCoater208HR(Cressington Scientific Instruments, Watford, England)在具有鉬-銥的旋轉(zhuǎn)-行星式_傾斜臺(tái)上進(jìn)行涂布。在Carl Zeiss Supra ? 40VP Scanning ElectronMicroscope (Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany)中，在 19mm 的工作距離和 5kV 的電子高壓(EHT)下操作，使用SmartSEM ?圖形用戶(hù)界面軟件獲取SEM圖像。
[0184]制備方法的開(kāi)發(fā)
[0185]在本實(shí)施例中測(cè)試三種不同的制備方法，以便獲得具有小藥物粒徑的CoQlO水性分散體。類(lèi)似的方法可以適用于進(jìn)一步優(yōu)化CoQlO制劑和提供用于其它疏水性藥物的制劑。在55°C下，將在水中包含6%w/w的卵磷脂(作為實(shí)例的磷脂)的磷脂分散體加入到熔融的CoQlO (l%w/w)中。磷脂濃度高于臨界膠束濃度(例如，對(duì)于卵磷脂，根據(jù)來(lái)源和加工方法，CMC從1.3至5.5mg/ mL變化)。然后，如下加工所述劑型。
[0186]高剪切混合:將100毫升的制劑在300rpm下攪拌，并使用具有8mm轉(zhuǎn)子葉片的 Ultra-Turrax (K) TP18/10Homogenizer(IKA-fferke, Staufen,Germany)以10，000-12，OOOrpm 高剪切.二、45 分鐘。
[0187]高壓均質(zhì)化:使用微流化方法實(shí)現(xiàn)高壓均質(zhì)化。各輪表示藥物顆粒彼此碰撞的機(jī)會(huì)，從而分裂且變得更小。使用探頭聲處理2分鐘來(lái)預(yù)分散所述制劑，接著使用M-1IOY HighPressure Pneumatic Microfluidizer? (Microfluidics, Newton, MA USA)以約 30，OOOpsi進(jìn)行30輪。
[0188]超聲處理:使用具有微-尖探針的5/32英寸(3.9mm)的Omni SonicRuptor-2o() ? Ultrasonic Homogenizer(Omni International, Kennesaw, GA, USA)在125W下超聲處埋所述制劑60分鐘。
[0189]制劑開(kāi)發(fā)
[0190]在選擇制備方法之后，使用高壓均質(zhì)化制備制劑來(lái)確定所選擇的參數(shù)和磷脂類(lèi)型對(duì)藥物分散體的粒徑分布的影響。在初步研究期間，觀察到包含6%w/w的卵磷脂的高溶質(zhì)濃度制劑不能由Aeixmeb Pro⑧振動(dòng)篩網(wǎng)微泵噴霧器產(chǎn)生氣溶膠。進(jìn)一步的初步研究也表明包含降低濃度的卵磷脂(l%w/w，l:l的藥物:脂質(zhì)比率)的制劑呈現(xiàn)出用于評(píng)價(jià)配制后的噴霧性能的足夠穩(wěn)定性。因此，降低磷脂濃度是必需的，同時(shí)保持CoQlO的濃度恒定在適當(dāng)?shù)乃幬?脂質(zhì)比率。
[0191]在水化之后，在55°C下，將在水中包含l%w/w的磷脂(卵磷脂或DPPC)的磷脂分散體加入到熔融的CoQ10(l%w/w)中。然后，使用高剪切混合(Ultra-Turrax ?TP18/10Homogenizer,具有 8mm 轉(zhuǎn)子葉片，IKA-fferke, Staufen, Germany)以 20, OOOrpm預(yù)分散所述制劑至多5分鐘。接著，使該制劑以約30，OOOpsi下通過(guò)M-110P Bench-topMicrofluidizer? (Microfluidics, Newton, MA USA)至多 100 次，同時(shí)保持溫度在 50 至60°C之間。
[0192]在測(cè)試磷脂類(lèi)型和輪次數(shù)對(duì)制劑粒徑分布的影響時(shí)，在不攪拌的情況下使磷脂分散體水化約I小時(shí)(表1，制劑A和B)。然后，當(dāng)比較不同磷脂時(shí)，使制劑通過(guò)微流化器10、
20、30、40和50次；當(dāng)評(píng)價(jià)輪次數(shù)的影響時(shí)，使其通過(guò)20、50、70和100次。對(duì)于噴霧性能測(cè)試，將磷脂分散體在攪拌下水化過(guò)夜，并將0.9%w/v的氯化鈉加入到最終制劑中(表1，制劑C)。
[0193]然后，使用激光衍射(LD)和/或動(dòng)態(tài)光散射(DLS)分析制劑的粒徑分布。還評(píng)價(jià)表面張力、?電勢(shì)和流變學(xué)。對(duì)于噴霧性能，使用LD和重量定量分析進(jìn)行氣溶膠輸出分析。
[0194]制劑的表征
[0195]粒徑分布:使用與裝備有300_透鏡的Malvern Spraytec ? (MalvernInstruments, Worcestershire, UK)偶聯(lián)的采用以1，OOOrpm攪拌的濕樣品分散單元的LD進(jìn)行分散制劑的粒徑分布測(cè)試。將該分散制劑加入到蒸餾水(分散劑)中直到獲得約5%的遮光度。內(nèi)相和分散劑的折射率分別設(shè)定為1.45和1.33。采用I秒抽樣周期進(jìn)行定時(shí)測(cè)量45秒(總共45個(gè)測(cè)量值)。結(jié)果呈現(xiàn)為Dv(X)和跨度，其中X為在所指尺寸下顆粒的累積百分位數(shù)(例如Dv(50)對(duì)應(yīng)于顆粒的中值體積)?？缍仁怯?jì)算為[Dv(90) -Dv(IO)]/Dv(50)]的粒徑分布的量度。較高的跨度指示多分散性更高的粒徑分布。
[0196]另外，使用 Malvern Zetasizer Nano S ? (MalvernInstruments, Worcestershire, UK),在25°C下采用DLS表征分散制劑的納米顆粒流體動(dòng)力學(xué)直徑，并預(yù)平衡2分鐘。相關(guān)函數(shù)的截距為0.5至1.0。用蒸餾水稀釋分散體。
[0197]表面張力:如前述章節(jié)描述的，使用TA.XT.plus Texture Analyzer (TextureTechnologies, Scarsdale, NY, USA)從盤(pán)上的最大拉力進(jìn)行表面張力測(cè)試。簡(jiǎn)而言之，對(duì)容器和玻璃盤(pán)探頭徹底除油，用乙醇清潔，并使其干燥。將探頭連接至物性分析儀(textureanalyzer)的臂,并降低直到探頭的底面接觸儲(chǔ)庫(kù)中包含的液體制劑的表面。測(cè)量并記錄液體的溫度。在測(cè)試開(kāi)始時(shí)，使探頭以恒速(0.05mm/s)從液體的表面上升10mm，同時(shí)物性分析儀以每秒5點(diǎn)記錄隨時(shí)間或距離變化而施加的力。使用最大(分離)力，利用下述等式I計(jì)算表面張力:
[0198]x/k=0.0408687+6.20312* (x~2/v) - 0.0240752 (x~2/v)~2 (等式 I)
[0199]其中X為探頭半徑，V為體積，k為彎液面系數(shù)。用于計(jì)算表面張力的密度值假定為與在測(cè)量溫度下水的密度相同。
[0200]ζ 電勢(shì):米用 ZetaPlus ζ 電勢(shì)分析儀(Brookhaven InstrumentsCorp.，Holtsville, NY, USA)，使用電泳光散射進(jìn)行ζ電勢(shì)測(cè)試。在25°C的恒溫和恒定(中性)PH下分析樣品。用蒸餾水稀釋樣品到300至550 μ S的電導(dǎo)值。每個(gè)樣品各自進(jìn)行10次，測(cè)量之間的間隔為5秒。
[0201]流變學(xué):使用裝備有錐-板幾何結(jié)構(gòu)(錐形直徑:40mm ;截?cái)?54 μ m)的AR-G2流變儀(TA Instruments, New Castle，DE，USA)測(cè)試分散制劑的流變行為。在測(cè)試之前，分別進(jìn)行零間隙和旋轉(zhuǎn)作圖(zero-gap and rotational mapping)。所有的測(cè)量都采用在25°C的恒溫下無(wú)預(yù)剪切的新樣品分散體進(jìn)行。除去探頭邊緣周?chē)倪^(guò)量樣品，并將水加入到溶劑阱隔室中。在穩(wěn)態(tài)流動(dòng)步驟，在對(duì)數(shù)下降(每10單位10點(diǎn))的剪切速率范圍(300至IOs-1)內(nèi)測(cè)量樣品。通過(guò)流體動(dòng)力學(xué)限制測(cè)量剪切速率的上限(高探頭速率引起液體樣品溢出測(cè)量區(qū))。樣品周期為10秒，且認(rèn)為在在5%容差之內(nèi)的2個(gè)連續(xù)分析之后的平衡，不超過(guò)2分鐘的最大點(diǎn)時(shí)間。使用Rheology Advantage Data Analysis軟件(TAInstruments, New Castle, DE, USA)評(píng)價(jià)結(jié)果。
[0202]噴霧性能:基于前述經(jīng)驗(yàn)，振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器的性能可受到篩孔堵塞的影響，引起可變的氣溶膠噴射(例如，間斷性薄霧)，因?yàn)樵撝苿┦且环N分散系統(tǒng)。為了分析這些制劑的噴霧性能，我們?cè)u(píng)價(jià)了來(lái)自LD技術(shù)測(cè)定結(jié)果的傳輸隨時(shí)間的變化。采用裝備有300mm透鏡的 Malvern Spraytec ?僅器(Malvern Instruments, Worcestershire, UK),使用“開(kāi)放臺(tái)”方法評(píng)價(jià)分散體的噴霧性能。噴霧器儲(chǔ)庫(kù)定位使得膜位于激光束的上緣上25mm處且在透鏡和氣溶膠云室中心之間25mm距離處?？諝獬槲俏挥诩す馐?0cm。在整個(gè)測(cè)量期間，所述裝置和氣抽吸裝置位置保持不變。內(nèi)相和分散劑的折射率分別為1.33(水)和1.00(空氣)。將制劑(IOmL)加入到噴霧器儲(chǔ)庫(kù)中。在噴霧開(kāi)始時(shí)，逐秒連續(xù)地測(cè)量氣溶膠特征，共測(cè)量15分鐘。當(dāng)比較不同的磷脂制劑時(shí)，考慮傳輸-時(shí)間曲線(傳輸圖)的斜率。
[0203]另外，對(duì)于每個(gè)研究的制劑，重量分析測(cè)量總氣溶膠輸出(TAO)。在霧化之前，將各個(gè)制劑分配到儲(chǔ)庫(kù)中之后對(duì)噴霧器稱(chēng)重。在進(jìn)行15分鐘噴霧之后，再稱(chēng)重噴霧器儲(chǔ)庫(kù)中剩余制劑。噴霧前后的重量差異得到計(jì)算的ΤΑ0。在測(cè)量期間，不考慮噴霧器吹口的重量。
[0204] 重要的是，傳輸圖和TAO都不提供關(guān)于噴霧器的藥物輸出的信息。信息僅限于總物質(zhì)輸出(隨時(shí)間噴射的液滴)。在霧化這些分散體時(shí)，可能產(chǎn)生不包含藥物顆粒的液滴(空液滴)。然而，我們測(cè)試的目的是研究噴霧器比如Aeixmeb Pro ?噴霧器隨時(shí)間連續(xù)且穩(wěn)定地霧化輔酶QlO的水性分散體的能力。在傳輸圖中可以鑒定間斷性薄霧，而TAO說(shuō)明噴霧總物質(zhì)的量級(jí)。使用鹽溶液(12mL的0.9%w/v NaCl水溶液)作為對(duì)照。
[0205]統(tǒng)計(jì)分析:數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差，除了表面張力和ζ電勢(shì)結(jié)果以外，其表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差。對(duì)于流變學(xué)研究，由用于分析結(jié)果與流變模型的最佳擬合的軟件提供標(biāo)準(zhǔn)誤差。至少一式三份地分析樣品，使用NCSS/PASS軟件Dawson版本采用單因素方差分析(One-Way AN0VA)評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的當(dāng)p < 0.05時(shí)的顯著性。進(jìn)行后驗(yàn)比較以使用Tukey-Kramer方法鑒定組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)以分析同一制劑內(nèi)藥物粒徑的穩(wěn)定性隨時(shí)間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P < 0.05)和分析在相同微流化條件下加工的不同磷脂的影響。
[0206]結(jié)果和討論
[0207]該實(shí)施例證實(shí)用于肺部遞送的疏水性藥物(例如CoQlO)的合適劑型的開(kāi)發(fā)的可行性。特別地，該實(shí)施例證實(shí)藥物分散體的不同物理化學(xué)性質(zhì)可以如何影響噴霧性能。該實(shí)施例還證實(shí)來(lái)自LD的傳輸數(shù)據(jù)和噴霧器輸出的重量定量分析可如何用于評(píng)價(jià)隨時(shí)間變化的穩(wěn)定霧化。
[0208]大塊CoQlO的XRD圖譜顯示出在約18.65和22.80處的兩個(gè)高強(qiáng)度峰(2 Θ )，指示CoQlO的晶體結(jié)構(gòu)(圖2)。DSC溫譜圖中約51°C處的吸熱峰表明該化合物的熔點(diǎn)低(圖3)。CoQlO藥物顆粒不適合以大塊物質(zhì)肺部遞送，其Dv (50)為29.87 μ m，跨度值為2.051。通過(guò)SEM圖像也確認(rèn)顆粒尺寸的量級(jí)(圖4)。減小粒徑的第一種方法是采用球磨研磨18小時(shí)，其未成功，因?yàn)镃oQlO轉(zhuǎn)變成藥物團(tuán)塊的簇集。粒徑增加(Dv (50) =29.87 μ m，跨度=2.282)證實(shí)了此目測(cè)觀察。由于CoQlO的熔點(diǎn)低，在加工期間產(chǎn)生的熱和機(jī)械沖擊都可對(duì)該結(jié)果有貢獻(xiàn)。當(dāng)?shù)蜏匮心ゴ髩K粉末時(shí)，發(fā)現(xiàn)了類(lèi)似的結(jié)果(數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示)。
[0209]因此，需要一種加工用于肺部遞送的CoQlO顆粒的可選的方法。測(cè)試了高剪切混合、高壓均質(zhì)化和超聲處理。圖5中顯示的結(jié)果表明使用剪切力制備的制劑呈現(xiàn)出具有接近雙模分布的在分散體中的藥物顆粒，這通過(guò)較高的跨度值和約I μ m的Dv (50)(表2)得到證實(shí)。微流化和超聲呈現(xiàn)單分散的單模分布，Dv(50)值在亞微米范圍中，因此每種方法能夠制備具有不同程度的小藥物粒徑和具有不同的粒度分布的制劑。
[0210]在方法的選擇之后，處理制劑A以確定在微流化器中處理輪次對(duì)藥物粒徑穩(wěn)定性相關(guān)的影響(表1)。LD結(jié)果表明，在制備之后，所有的制劑都呈現(xiàn)在亞微米范圍的粒徑分布(圖6)。在7天之后，不考慮處理輪次，與制備后當(dāng)時(shí)的尺寸相比，所述制劑呈現(xiàn)較大的顆粒。DLS結(jié)果表明增加處理輪次到高于50次并未顯示提供較小流體動(dòng)力學(xué)直徑或更高的單分散系統(tǒng)(圖7)。隨處理輪次變化的粒徑的低點(diǎn)(trough)之前已經(jīng)進(jìn)行了報(bào)道，并被歸因于由于反復(fù)均質(zhì)化期間融合或奧氏熟化(Ostwald ripening)引起的次級(jí)顆粒生長(zhǎng)。然而，對(duì)于采用任何不同處理輪次的任何單個(gè)制劑，在第O天和第7天之間，藥物粒徑?jīng)]有發(fā)現(xiàn)任何統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0211]使用制劑B研究處理輪次的減少和不同磷脂的評(píng)價(jià)(表1)。DLS分析表明對(duì)于CoQlO的卵磷脂和DPPC分散體二者而言，隨著微流化輪次增加(例如，至多50輪)藥物粒徑減小。在相同的微流化條件下(例如，離散的輪次)，DPPC制劑呈現(xiàn)比CoQlO的卵磷脂分散體更小的粒徑，Z-均值分別在50-120nm和120_170nm的范圍內(nèi)。雖然DPPC膠狀分散體呈現(xiàn)比卵磷脂-穩(wěn)定的制劑更小的PdI值，但是兩者都呈現(xiàn)高多分散性(PdI > 0.2)。該結(jié)果表明為了獲得具有小粒徑的制劑，需要不超過(guò)50輪處理，最終的膠狀系統(tǒng)將取決于使用的磷脂。
[0212]在已經(jīng)表明可以制備CoQlO的小藥物顆粒分散體之后，研究了穩(wěn)定地噴霧這些制劑的能力以及影響噴霧性能的物理化學(xué)性質(zhì)。當(dāng)振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器由懸浮的劑型產(chǎn)生氣溶膠時(shí)，可能出現(xiàn)不希望的間斷性薄霧。因此，制劑針對(duì)不存在間斷性薄霧進(jìn)行評(píng)價(jià)，表明在整個(gè)噴霧事件中的霧化連續(xù)性。
[0213]在該實(shí)施例中，使用Malvern Spraytec ?分析隨時(shí)間變化的傳輸，以選擇在Aeroneb Pro ?噴霧器中連續(xù)地噴霧的分散制劑。用于評(píng)價(jià)噴霧的液滴濃度隨時(shí)間變化的可選方法被描述于美國(guó)藥典(USP)中關(guān)于噴霧器產(chǎn)品的表征的總章〈1601〉中。
[0214]在用“開(kāi)放臺(tái)”方法設(shè)置Malvern Spraytec ?之前，進(jìn)行了大量嘗試以使用Malvern-提供的吸入單元配件進(jìn)行測(cè)試(圖9)。在該系統(tǒng)中，從儀器左側(cè)朝著位于右側(cè)的檢測(cè)器投射激光束。激光束穿過(guò)偶聯(lián)至Spraytec⑩的吸入單元。噴霧器位于吸入單元的前面，真空管連接在所述單元的后面。由所述單元中間的管所提供的空氣護(hù)套(airsheath)有助于來(lái)自噴霧器的氣溶膠液滴直接導(dǎo)向真空源。為了評(píng)價(jià)噴霧器輸出，將該裝置與吸入單元一起以水平位置(90°角度)排列以測(cè)量盡可能接近于振動(dòng)篩網(wǎng)的氣溶膠產(chǎn)生。抽吸空氣流速設(shè)置為30L/分鐘，且護(hù)套(sheath)空氣流速設(shè)置為15L/min(30 - 15L/min=15L/min)以獲得最終空氣流速15L/min。為了比較的原因，選擇該空氣流速以匹配在Next Generation(NGI)中分析噴霧器制劑所要求的空氣流速。
[0215]觀察到由于在Malvern Spraytec ?中空氣護(hù)套效率低引起試驗(yàn)性假象(artifact)，導(dǎo)致氣溶膠云侵入檢測(cè)器透鏡室，引起遮光度持續(xù)遞增并因之減少傳輸。在操作吸入單元期間，將0.45 μ m HEPA膜濾器與真空源串聯(lián)定位以防止損害真空源和防止暴露于操作者。然而，制劑逐漸地阻塞過(guò)濾器孔，其產(chǎn)生了超過(guò)空氣護(hù)套且引導(dǎo)液滴朝向檢測(cè)透鏡室的回壓。在吸入單元窗口模糊之后，傳輸值不會(huì)恢復(fù)到100%，且不精確的數(shù)據(jù)提供不間斷噴霧器操作的表象。因此，使用該設(shè)備不可能獲得可用的測(cè)量結(jié)果。不希望受到任何特定理論的束縛，據(jù)信這歸于在每15分鐘噴霧事件期間產(chǎn)生的氣溶膠量與吸入單元主要被設(shè)計(jì)用于的PMDI和DPI裝置相比是巨大的事實(shí)。因此，雖然這類(lèi)已知的配件用于表征來(lái)自那些其它裝置的氣溶膠產(chǎn)生，但是它們不能用于根據(jù)本發(fā)明的連續(xù)噴霧器。
[0216]為了克服該假象，開(kāi)發(fā)了“開(kāi)放臺(tái)”方法。選擇噴霧器儲(chǔ)庫(kù)的位置，以避免暈影(大角度散射光錯(cuò)失了檢測(cè)器視野)，同時(shí)也通過(guò)合適地設(shè)置用于連續(xù)排空所產(chǎn)生液滴的氣抽吸源避免了液滴再循環(huán)。圖10中顯示的傳輸圖顯示制劑C的15分鐘噴霧事件(表1)。在該期間過(guò)程結(jié)束時(shí)，對(duì)于所有制劑傳輸值都返回直到100%，指示測(cè)量適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行而沒(méi)有霧化檢測(cè)器透鏡。對(duì)于初始5分鐘，三種制劑呈現(xiàn)穩(wěn)定的噴霧。在此時(shí)間點(diǎn)之后，與運(yùn)行10輪的制劑相關(guān)的傳輸以與運(yùn)行30和50輪的制劑不同的速率增加。為了評(píng)價(jià)這些制劑的噴霧性能，將傳輸圖擬合至線性回歸以便分析速率曲線的斜率。通過(guò)比較它們的斜率，可以確定噴霧的穩(wěn)定性。
[0217]在微流化器中采用不同處理輪次的制劑C(表1)的斜率值和TAO呈現(xiàn)在圖11中。與30和50輪相比，觀察到運(yùn)行10輪的制劑的斜率值較低。該觀察結(jié)果與相對(duì)TAO值一致。這些數(shù)據(jù)表明與采用增加的處理制備的相同制劑相比，制劑C(在微流化器中采用10輪處理)呈現(xiàn)隨時(shí)間的更穩(wěn)定噴霧。
[0218]接著，研究采用10、30和50輪處理制備的制劑C的物理化學(xué)性質(zhì)以確定處理如何影響噴霧性能。通過(guò)分析分散體中的流體動(dòng)力學(xué)尺寸(圖12)，我們從LD結(jié)果觀察到粒徑表現(xiàn)為隨時(shí)間稍微增加，其中大多數(shù)顆粒保持在納米范圍內(nèi)。當(dāng)在第O天比較所分析制劑的LD和DLS時(shí)，我們基于Fraunhofer理論得出結(jié)論，由于上述相同的原因LD不是一種合適的技術(shù)。DLS結(jié)果表明所有制劑都呈現(xiàn)約260nm的Z-均值。在7天之后，Dv (50)仍然低于LD技術(shù)的測(cè)量范圍，而對(duì)于30和50輪處理，Z-均值沒(méi)有顯著變化。根據(jù)粒徑分布的結(jié)果，我們可以得出結(jié)論，具有較高處理輪次的制劑穩(wěn)定約I周。在配制之后，PdI為0.2至0.3，并且在7天之后顯示出一定多分散性水平。
[0219]結(jié)果表明與采用上述分析的制劑(制劑B: 120_170nm)形成的相比，這些卵磷脂分散體形成的流體動(dòng)力學(xué)直徑更大(約260nm)。這些差異可以至少部分地解釋為由于制劑的電解質(zhì)濃度差異引起。向制劑C中加入0.9%w/v的氯化鈉用于兩個(gè)目的:提供正常生理滲透壓和減小由該主動(dòng)振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器的氣溶膠產(chǎn)生的變異性。具有這樣的低離子含量的溶液具有減少的變異性因素、增加的氣溶膠輸出和較小的液滴尺寸。不希望受到任何特定理論的束縛，低電解質(zhì)含量被認(rèn)為由于改善的電導(dǎo)率(其抑制水的高靜電電荷)而有助于克服振動(dòng)篩網(wǎng)的液滴分離阻力(drop detachment resistance),其因子有利于氣溶膠產(chǎn)生。
[0220]然而,根據(jù)電解質(zhì)在磷脂表面上的相互作用的Derjaguin-Landau-Verwey-Overbeek(DLVO)理論，加入氯化鈉也可以引起膠體的不穩(wěn)定性。在該情況下，僅僅基于靜電力(沒(méi)有化學(xué)相互作用)的非特異性吸附可以由一價(jià)陽(yáng)離子(例如，Na+)引起。由這類(lèi)陽(yáng)離子引起的?電勢(shì)的降低可增加絮凝速率(例如，如通過(guò)比濁法分析的)。觀察到在微流化之后加入前述鹽將分散體的顏色從暗橙色改變?yōu)榱咙S色。盡管關(guān)于該膠體穩(wěn)定性的機(jī)制進(jìn)行了廣泛的討論，但是膠體科學(xué)的當(dāng)前理論不能充分解釋該現(xiàn)象。單獨(dú)的水性分散體的藥物粒徑分布并未表現(xiàn)出控制噴霧性能，因?yàn)檫@些分散體具有類(lèi)似的直徑(制備后)，但是具有不同的霧化行為。
[0221]增加微流化處理輪次提高了表面張力和ζ電勢(shì)(當(dāng)與10或50輪處理的制劑比較時(shí)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，參見(jiàn)圖13)。已經(jīng)推測(cè)較高的處理輪次有助于包封。然而，在來(lái)自主動(dòng)振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器的氣溶膠產(chǎn)生中，表面張力的作用未被透徹地了解。本發(fā)明的實(shí)施例沒(méi)有鑒定制劑C的ζ電勢(shì)和表面張力之間的相關(guān)性，表面張力與不同的微流化器處理輪次和相應(yīng)的噴霧性能相關(guān)。
[0222]通過(guò)繪制剪切應(yīng)力作為剪切速率函數(shù)的圖來(lái)研究分散體的流變學(xué)。HerschelBulkley模型-等式2-最佳地表示這三種制劑的特性:
[0223]σ = σ y+K * Y ~η (等式 2)
[0224]其中σ為剪切應(yīng)力，oy為屈服應(yīng)力，K為稠度指數(shù)或粘度，Y為剪切速率，和η為流動(dòng)指數(shù)(η=1:牛頓流體；η < 1:剪切稀化；η > 1:剪切稠化)。對(duì)于分別采用10、30和50輪微流化處理而制備的CoQlO的分散體，標(biāo)準(zhǔn)誤差分別為32.74±3.58,31.62±2.04、35.92±3.57。Herschel-Bulkley模型的三個(gè)要素列呈現(xiàn)在圖14中。盡管各個(gè)要素的值根據(jù)該度量指標(biāo)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是流變學(xué)結(jié)果和噴霧性能的結(jié)果之間的相似性是明顯的。30和50輪的制劑呈現(xiàn)類(lèi)似的流變行為和噴霧性能，其與10輪的制劑不同。有趣地是，所有制劑都呈現(xiàn)剪切稠化行為(η > 1)。特性比如尺寸、粒徑分布、形狀、電荷以及顆粒和周?chē)后w之間的相互作用在這些系統(tǒng)的流變行為中起重要作用。因此，不令人驚訝的是制劑的流變行為影響噴霧性能，其是所有物理化學(xué)特性的相互作用的函數(shù)。
[0225]本發(fā)明提供第一個(gè)已知的研究來(lái)研究振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器穩(wěn)定地噴霧其中分析流體流變學(xué)的分散體的能力，其與進(jìn)行簡(jiǎn)單的動(dòng)態(tài)粘度測(cè)量結(jié)果相反(例如，分散介質(zhì)本身的粘度，而不考慮分散顆粒與周?chē)黧w之間的相互作用)。
[0226]實(shí)施例2:基于CoQlO水性分散體的流變行為的體外霧化特征的預(yù)測(cè)
[0227]由于劑型的非均質(zhì)性質(zhì)，分散制劑的霧化可以產(chǎn)生包含可變藥物濃度的液滴。因此，可能重要的是表征制劑的體外藥物沉積(其可以采用階式碰撞取樣器進(jìn)行)。激光衍射(LD)也可以用于該目的，但是LD的用途通常限于溶液劑型。分散體的非均質(zhì)性產(chǎn)生具有不均勻的藥物顆粒濃度的液滴，導(dǎo)致LD不適合。美國(guó)藥典(USP)推薦下一代碰撞取樣器(Next Generation Impactor) (NGI)用于該測(cè)試。
[0228]人肺泡表面活性劑包括約90%的磷脂和10%的中性脂質(zhì)。在磷脂中，磷脂酰膽堿(PC)是占優(yōu)勢(shì)的(76%)，DPPC是主要成分(PC的81%)且二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿(DMPC)和二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)各自占PC的3%。DPPC和DSPC也存在于包含賦形劑大豆磷脂的磷脂混合物中，但是它們的濃度根據(jù)卵磷脂的來(lái)源和提取方法在很大程度上變化。
[0229]本實(shí)施例提供用于選擇根據(jù)本發(fā)明的磷脂制劑的方法和數(shù)據(jù)。更特別地，本實(shí)施例還提供使用合成磷脂制備具有改善的噴霧性能的CoQlO制劑的方法和數(shù)據(jù)，其具有遞送期望的CoQlO細(xì)顆粒劑量(Fine Particle Dose) (FPD)的潛能。該實(shí)施例研究了三種合成磷脂:DMPC、DPPC和DSPC，其中它們的飽和脂肪酸鏈中分別具有14、16和18個(gè)碳，分子量分別為 678、734 和 790g/mol。[0230]除了有關(guān)實(shí)施例1所描述的測(cè)試，合成磷脂制劑被進(jìn)一步表征，用于使用NGI和用于適應(yīng)于噴霧器的干粉吸入器(DPI)的劑量均勻取樣裝置(DUSA)進(jìn)一步采用NGI和總噴射劑量(TED)表征體外藥物沉積。其結(jié)果與對(duì)于連續(xù)霧化和對(duì)于鑒定控制由微泵噴霧器產(chǎn)生CoQlO分散系統(tǒng)的氣溶膠的機(jī)制的物理化學(xué)性質(zhì)的噴霧性能測(cè)試結(jié)合進(jìn)行分析。實(shí)施例1的結(jié)果也進(jìn)一步通過(guò)闡明分散體的流變學(xué)在使用主動(dòng)振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器的氣溶膠產(chǎn)生的流體動(dòng)力學(xué)中的作用而得到證實(shí)。
[0231]材料和方法 [0232]材料:CoQlO由 Asahi Kasei Corp.(Tokyo, Japan)提供。卵磷脂(粒狀，NF)購(gòu)自 Spectrum Chemical Mfg.Corp.(Gardena, CA, USA)。Genzyme Pharmaceuticals (Liestal, Switzerland)提供1，2-二肉豆蘧?；鵢sn_甘油基-3-磷酸膽堿(DMPC)、1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)和1，2- 二硬脂酰基-sn_甘油基-3-磷酸膽喊(DSPC) ο DMPC 也購(gòu)自 Lipoid GmbH(Ludswighafen, Germany) ? 氯化鈉(晶體，ACS認(rèn)證的)獲自 Fisher Chemical (Fisher Scientific, Fair lawn, NJ, USA),和去離子水獲自中央反滲透/軟化器系統(tǒng)。己燒和200proof無(wú)水乙醇購(gòu)自Sigma-Aldrich(St.Louis, MO, USA),甲醇購(gòu)自 Fisher Chemical (Fisher Scientific, Fair lawn, NJ, USA),全部材料都是來(lái)自HPLC級(jí)。NGI測(cè)試的外部過(guò)濾器(玻璃纖維，GC50, 75mm)和用于DUSA測(cè)試的過(guò)濾器(玻璃纖維，AP40,47mm)分別購(gòu)自Advantec MFS Inc.(Dublin, CA, USA)和 Millipore (Billerica, MA, USA)。注射器(ImL)和注射器式濾器(hyperclean, 17mm, 0.45 μ m, PTFE)分別獲自 Becton Dickinson (Franklin Lakes, NJ, USA)和 Thermo Scientific(Bellefonte, PA, USA)。
[0233]制劑:使用熱高壓均質(zhì)化制備制劑(IOOmL)以測(cè)定磷脂類(lèi)型對(duì)于霧化特征-噴霧性能和肺部遞送的體外藥物顆粒沉積的影響。選擇2.5%w/w作為最大磷脂濃度。在初步研究期間(參見(jiàn)實(shí)施例5)，發(fā)現(xiàn)對(duì)于CoQlO可以獲得使用Aeroneb Pro⑧噴霧器在15分鐘噴霧事件內(nèi)使制劑不出現(xiàn)間斷性薄霧的最大額定載藥量為4%wM因此，以藥物:脂質(zhì)比率4:2.5制備具有合成磷脂的制劑。
[0234]在攪拌下水化過(guò)夜之后，在55°C下，將在水中包含2.5%w/w的磷脂(DMPC、DPPC或DSPC)的磷脂分散體加入到熔融的CoQlO (4%w/w)中。然后，使用具有8mm轉(zhuǎn)子葉片的Ultra-Turrax? TP18/10 均質(zhì)器(IKA-Werke GmbH, Staufen, Germany)以 20，OOOrpm 高剪切混合5分鐘，從而預(yù)分散所述制劑。接著，使各種制劑在約30，OOOpsi下通過(guò)M-1lOPBench-top Microfluidizer? (Microfluidics, Newton, MA, USA)處理 50輪，同時(shí)保持溫度在55°C至65°C。在微流化之后，出于上述實(shí)施例中概述的原因，將0.9%w/v的氯化鈉加入到最終制劑中。
[0235]然后，使用激光衍射(LD)和/或動(dòng)態(tài)光散射(DLS)分析制劑的粒徑分布。也評(píng)價(jià)表面張力、ζ電勢(shì)和流變學(xué)。對(duì)于噴霧性能，使用LD和重量定量分析分析由Aeixmeb Ρι--噴霧器(Aerogen, Galway, Ireland)產(chǎn)生的氣溶膠輸出。使用NGI評(píng)價(jià)體外藥物沉積，同時(shí)由NGI結(jié)果和使用劑量均勻取樣裝置(DUSA)的測(cè)量分析TED。除了實(shí)施例1中給出的特征和噴霧性能之外，制備并分析通過(guò)Microfluidizer ?處理50輪的CoQlO的卵磷脂分散體(藥物-脂質(zhì)比率為1:1)的體外藥物沉積。這是針對(duì)合成磷脂劑型(CoQlO的DMPC、DPPC或DSPC分散體)評(píng)價(jià)的。卵磷脂分散體的制備、表征和噴霧性能評(píng)價(jià)的詳細(xì)內(nèi)容在實(shí)施例I中給出。在制備之后立即進(jìn)行測(cè)試，除了分散體中藥物粒徑的穩(wěn)定性(其中在制備后7天樣品進(jìn)行測(cè)試)。
[0236]表征
[0237]粒徑分布:使用偶聯(lián)至裝備有300mm透鏡的Malvern Spraytec ? (MalvernInstruments, Worcestershire, UK)的采用以1，OOOrpm攪拌的濕樣品分散單元的LD進(jìn)行分散制劑的粒徑分布測(cè)試。將該分散制劑加入到蒸餾水(分散劑)中直到獲得約5%的遮光度。內(nèi)相和分散劑的折射率分別設(shè)定為1.45和1.33。采用I秒抽樣周期進(jìn)行定時(shí)測(cè)量45秒(總共45個(gè)測(cè)量值)。結(jié)果呈現(xiàn)為Dv(X)和跨度，其中X為在指定尺寸下顆粒的累積百分位數(shù)(例如Dv(50)對(duì)應(yīng)于顆粒的中值體積)?？缍仁怯?jì)算為[Dv(90) -Dv(10)]/Dv(50)]的粒徑分布的量度。較高的跨度指示多分散性更高的粒徑分布。
[0238]也米用DLS,使用 Malvern Zetasizer Nano ZS ? (MalvernInstruments, Worcestershire, UK)在25°C下表征分散制劑的納米顆粒流體動(dòng)力學(xué)直徑，并預(yù)平衡2分鐘。相關(guān)函數(shù)的截距為0.5至1.0。當(dāng)需要時(shí)，用蒸餾水稀釋分散體。
[0239]表面張力:使用TA.XT.plus Texture Analyzer (TextureTechnologies, Scarsdale, NY, USA)進(jìn)行表面張力測(cè)試。對(duì)容器和玻璃盤(pán)探頭徹底除油，用乙醇清潔，并使其干燥。將探頭連接至物性分析儀的臂，并降低直到探頭的底面接觸儲(chǔ)庫(kù)中包含的液體制劑的表面。測(cè)量并記錄液體的溫度。在測(cè)試開(kāi)始時(shí)，使探頭以恒速(0.05mm/s)從液體的表面上升10mm，同時(shí)物性理分析儀以每秒5點(diǎn)記錄隨時(shí)間或距離施加的力。使用最大(分離)力，利用下述等式3計(jì)算表面張力:
[0240]X/k=0.0408687+6.20312* (X~2/V) -0.0240752* (X~2/V) ~2 (等式 3)
[0241]其中X為探頭半徑，V為體積，k為彎液面系數(shù)。用于計(jì)算表面張力的密度值假定為與在測(cè)量溫度下水的密度相同。
[0242]ζ 電勢(shì):米用 Malvern Zetasizer Nano ZS ⑧(MalvernInstruments, Worcestershire, UK),使用電泳光散射進(jìn)行ζ電勢(shì)測(cè)試。在C的恒溫和恒定(中性)ρΗ下分析樣品。用蒸餾水稀釋樣品，得到從400至1400 μ S/cm的電導(dǎo)值。一式三份地分析每種樣品，每次測(cè)量進(jìn)行10至100次，自動(dòng)最佳化衰減和電壓選擇。
[0243]流變學(xué):使用裝備有錐-板幾何結(jié)構(gòu)(錐直徑:40mm ;截?cái)?54 μ m)的AR-G2流變儀(TA Instruments, New Castle, DE, USA)測(cè)試分散制劑的流變行為。在測(cè)試之前，分別進(jìn)行零間隙和旋轉(zhuǎn)作圖。所有的測(cè)量都在25°C的恒溫下采用無(wú)預(yù)剪切的新樣品分散體進(jìn)行。除去探頭邊緣周?chē)倪^(guò)量樣品，并將水加入到溶劑阱隔室中。在穩(wěn)態(tài)流動(dòng)步驟下在對(duì)數(shù)降低(每10單位5點(diǎn))的剪切速率(1000至低至0.01s-1)的范圍內(nèi)測(cè)量樣品。分別通過(guò)儀表靈敏度和流 體動(dòng)力學(xué)限制(高探頭速率速率引起液體樣品溢出測(cè)定區(qū))測(cè)定每種制劑的剪切速率的下限和上限。樣品周期為20秒，并認(rèn)為在5%容差之內(nèi)的2個(gè)連續(xù)分析之后平衡，不超過(guò)2分鐘的最大測(cè)量時(shí)間。使用Rheology Advantage Data Analysis軟件(TA Instruments, New Castle, DE, USA)評(píng)價(jià)結(jié)果。
[0244]噴霧性能:具有分散制劑的振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器的性能可受到篩孔堵塞的影響，引起可變的氣溶膠噴射(例如，間斷性薄霧)。為了分析合成磷脂制劑的噴霧性能，評(píng)價(jià)了來(lái)自LD技術(shù)測(cè)量的傳輸隨時(shí)間的變化。采用裝備有300mm透鏡的Malvern Spraytec ?儀器(Malvern Instruments, Worcestershire, UK),使用“開(kāi)放臺(tái)”方法評(píng)價(jià)分散體的噴霧性能。噴霧器儲(chǔ)庫(kù)定位以使得振動(dòng)篩網(wǎng)位于激光束的上緣上25mm處且在透鏡和氣溶膠云室中心之間25mm距離處。氣抽吸是位于激光束之下10cm。在整個(gè)測(cè)量期間，所述裝置和抽吸裝置位置不受干擾。內(nèi)相和分散劑的折射率分別為1.33 (水)和1.00 (空氣)。將制劑(IOmL)加入到噴霧器儲(chǔ)庫(kù)中。在噴霧開(kāi)始時(shí)，逐秒地連續(xù)測(cè)量氣溶膠特征，共測(cè)量15分鐘。當(dāng)比較不同的磷脂制劑時(shí)，考慮傳輸-時(shí)間曲線(傳輸圖)的斜率。
[0245]另外，對(duì)于每個(gè)研究的制劑，通過(guò)重量分析測(cè)量總氣溶膠輸出(TAO)。在霧化之前，將各個(gè)制劑分配到儲(chǔ)庫(kù)中后對(duì)噴霧器稱(chēng)重。在進(jìn)行15分鐘噴霧之后再稱(chēng)重噴霧器儲(chǔ)庫(kù)中的剩余制劑。噴霧前后的重量差異得到計(jì)算的ΤΑ0。在測(cè)量期間，不考慮噴霧器吹口的重量。
[0246]重要的是，傳輸圖和TAO單獨(dú)都不提供關(guān)于來(lái)自噴霧器的藥物輸出的完整信息。信息僅限于總物質(zhì)輸出(隨時(shí)間噴射的液滴)。在霧化這些分散體時(shí)，可能產(chǎn)生不包含藥物顆粒的液滴(空液滴)?？梢栽趥鬏攬D中鑒定間斷性薄霧，同時(shí)TAO說(shuō)明噴霧總物質(zhì)的量級(jí)。使用鹽溶液(12mL的水中的0.9%w/v NaCl)作為對(duì)照。
[0247]體外空氣動(dòng)力學(xué)沉積:為了評(píng)價(jià)體外氣溶膠沉積，在15分鐘的噴霧事件內(nèi)，使用用于DPI的NGI或DUSA (兩者都來(lái)自Copley Scientific, Nottingham, UK)收集氣溶膠產(chǎn)生的前面和最后15秒(本文稱(chēng)為初始和最終分段或階段)。該設(shè)計(jì)幫助確定之前對(duì)于卵磷脂制劑觀察的和與TAO (第4章，第4.3部分)相關(guān)的傳輸?shù)男甭适欠褶D(zhuǎn)化為類(lèi)似的藥物物質(zhì)輸出。
[0248]為了測(cè)量制劑的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，NGI設(shè)置為具有15L/min的氣流，并使用高效液相色譜法(HPLC)分析由進(jìn)氣口、階式碰撞取樣器的七個(gè)階段、微孔收集器(MOC)和外部過(guò)濾器收集的藥物。在NGI硬件設(shè)備的各個(gè)提及的隔室中物質(zhì)的總量提供從NGI測(cè)量的TED。各個(gè)階段沉積的物質(zhì)也用于測(cè)定沉積模式和用于計(jì)算質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)，如在USP的總章〈601〉中描述的。該參數(shù)是等效液滴尺寸，其中基于NGI的不同階段中沉積的藥物量，一半(50%)液滴小于指定截止直徑，和另一半液滴大于指定截止直徑。可以使用幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD)指示MMAD周?chē)囊旱纬叽绶植?。從在碰撞階段3至7、MOC和外部過(guò)濾器(空氣動(dòng)力學(xué)截止直徑低于5.39 μ m)沉積的藥物物質(zhì)的總和計(jì)算FPD。
[0249]在NGI分析期間，可能由于階式碰撞取樣器階段之間噴霧器吹口和/或內(nèi)隔室中的沉積出現(xiàn)藥物收集的損失。可以進(jìn)行質(zhì)量平衡以確定這種損失的程度。在初步研究期間，觀察到用合成磷脂制備的分散體的15-分鐘氣溶膠產(chǎn)生引起大量的制劑累積在噴霧器吹口中。由適應(yīng)的DUSA評(píng)價(jià)TED以證實(shí)在分析期間獲得可接受的質(zhì)量回收(圖15)。在DUSA測(cè)試期間，氣溶膠直接沉積在連接于真空泵的定位于DUSA —端的玻璃纖維過(guò)濾器上。噴霧器吹口位于相反端，并使用硅樹(shù)脂適配器直接連接到DUSA。由在玻璃纖維過(guò)濾器中和DUSA的內(nèi)壁收集的藥物量測(cè)定TED，其在定時(shí)噴霧之后使用HPLC產(chǎn)生的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
[0250]為了進(jìn)一步分析劑量，根據(jù)等式4，將FPD結(jié)果從15-秒測(cè)量外推以計(jì)算在15分鐘內(nèi)的估計(jì)總遞送藥物(估計(jì)的總FPD或FPDet):
[0251]FPD打=Σι, FPP1-, +(等式 4)
[0252]其中i為表示15秒間隔的整數(shù)(NGI和TED分析的持續(xù)時(shí)間)。j值為小于i的后續(xù)整數(shù)，且η為在15分鐘噴霧期間內(nèi)的15秒片段的數(shù)目(η=60)。也基于FPDet計(jì)算細(xì)顆粒劑量(FPDr)。
[0253]CoQlO的HPLC分析:該方法改編自實(shí)施例4中給出的之前研究的方法。與UV檢測(cè)器連接的 Waters HPLC 和柱系統(tǒng)(Waters C0.,Milford, MA, USA)使用 1525 二元泵、717自動(dòng)采樣器、設(shè)定在275nm的2487雙重λ吸光度檢測(cè)器以及連接Symmetry? C8保護(hù)柱(3.9 X 20mm, 5 μ m)的 Symmetry ? RP-C8 柱(3.9 X 150mm, 5 μ m)。甲醇:己燒流動(dòng)相為97:3 (v/v)，并以1.0mL/min的流速洗脫。將CoQlO的儲(chǔ)備溶液最初溶于比率為2:1 (v/v)的己烷:乙醇中，然后用流動(dòng)相稀釋以獲得期望濃度。通過(guò)在40°C的受控溫度下注入50 μ I的樣品測(cè)定線性度范圍。在9分鐘的運(yùn)行時(shí)間內(nèi)獲得色譜峰，并使用峰面積測(cè)定曲線線性度。
[0254]所有樣品用乙醇由NGI和DUSA測(cè)試收集，除了從NGI板(階段I至7和M0C)的藥物收集進(jìn)行卵磷脂分散體的分析之外。由于所述制劑在乙醇中的低溶解度，使用己烷:乙醇2: lv/v的混合物。在用0.45 μ m注射器過(guò)濾器過(guò)濾之前，將在玻璃纖維過(guò)濾器(NGI中的外部過(guò)濾器和來(lái)自DUSA的過(guò)濾器)中收集的樣品渦旋30秒。使用流動(dòng)相進(jìn)行樣品稀釋。
[0255]統(tǒng)計(jì)分析:數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差，除了表面張力，其表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差。對(duì)于流變學(xué)研究，由用于分析結(jié)果與流變模型的最佳擬合的軟件提供標(biāo)準(zhǔn)誤差。至少一式三份地分析樣品，并使用NCSS/PASS軟件Dawson版本采用單因素方差分析(One-WayAN0VA)評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P < 0.05時(shí)的顯著性。進(jìn)行后驗(yàn)比較以使用Tukey-Kramer方法鑒定組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)以分析不同制劑的相同噴霧事件內(nèi)的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P < 0.05)，并比較TED方法。
[0256]結(jié)果和討論
[0257]使用合成磷脂(DMPC、DPPC和DSPC)制備CoQlO制劑，并比較在實(shí)施例1中分析的卵磷脂制劑的結(jié)果。因?yàn)镃oQlO遞送是經(jīng)由分散體獲得的，霧化可以產(chǎn)生包含不同量藥物的液滴。因此，基于在NGI裝置的各個(gè)階段沉積的藥物量，使用階式碰撞取樣器分析制劑的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。而且，基于在直接從噴霧器吹口遞送的過(guò)濾器中收集的藥物分析TED。分散體的噴霧性能與空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)結(jié)合可以提供比較制劑的可吸入潛能的基礎(chǔ)。這些特征也用于鑒定有利于來(lái)自噴霧器的藥物分散體的有效藥物噴射的物理化學(xué)性質(zhì)。
[0258]分散體的流體動(dòng)力學(xué)尺寸(圖16和表3)表明卵磷脂制劑藥物顆粒尺寸主要地處于亞微米范圍內(nèi)。合成磷脂制劑存在一些較大顆粒，盡管制劑之間的Dv(X)和跨度的分析并不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(除了 DMPC和DSPC分散體的Dv (10))。使用DLS對(duì)藥物粒徑分布的進(jìn)一步分析表明卵磷脂分散體存在具有比合成磷脂制劑更高的多分散性的較大納米顆粒(圖17)。在合成磷脂中，DSPC分散體呈現(xiàn)最大的藥物納米顆粒，而DMPC制劑呈現(xiàn)最高單分散性和特性。在加工之后，合成磷脂呈現(xiàn)一些微粒，盡管納米級(jí)尺度的顆粒群體主要小于由CoQlO的卵磷脂分散體產(chǎn)生的藥物顆粒。
[0259]卵磷脂分散體的ζ電勢(shì)顯著地高于合成磷脂分散體(圖18)的ζ電勢(shì)。不希望受到任何特定理論的束縛，根據(jù)卵磷脂的來(lái)源和提取方法，各種濃度不同磷脂的混合物可以導(dǎo)致可變的?電勢(shì)值。合成磷脂的?電勢(shì)值可歸因于制劑中氯化鈉的存在，因?yàn)樵谥行訮H下離子強(qiáng)度的增加可提高帶負(fù)電荷的磷脂如DMPC、DPPC和DSPC的ζ電勢(shì)。
[0260]增加微流化器處理輪次可引起表面張力的下降(例如，可能是由于更有效地包封)。對(duì)于合成磷脂組合物`，觀察到表面張力隨著磷脂的酰基鏈中碳數(shù)目的增加而增加。制劑被設(shè)計(jì)為具有相同量的2.5%w/w的DMPC、DPPC和DSPC。然而，由于各相應(yīng)?；溨刑嫉臄?shù)量不同，分子量稍有變化。因此，分散體中磷脂的摩爾濃度分別為36.9,34.1和31.6mM。磷脂在水分散體中的結(jié)構(gòu)直接依賴(lài)于磷脂分子的數(shù)量。因此，不希望受到任何特定理論的束縛，據(jù)信在恒溫下引起表面張力下降的"溶液"中可用的磷脂分子的數(shù)量可以解釋表面張力的差異。值得注意的是，用卵磷脂——其是磷脂的混合物一一制備的CoQlO分散體的表面張力落入DMPC和DSPC的值之間(圖19)。
[0261]顆粒特征比如尺寸、粒徑分布、形狀、電荷、可變形性以及顆粒與周?chē)后w之間的相互作用可在分散系統(tǒng)的流變行為中起作用。為了評(píng)價(jià)分散體的流變學(xué)，將剪切應(yīng)力作為剪切速率的函數(shù)繪圖，并且結(jié)果與最佳流變模型擬合。Herschel-Bulkley模型(參見(jiàn)等式2和上述相應(yīng)文字部分)最佳地代表大部分制劑。
[0262]冪定律(Power Law)模型與Herschel-Bulkley類(lèi)似,不同在于其不提供屈服應(yīng)力值。對(duì)于卵磷脂、DMPC, DPPC和DSPC分散體，標(biāo)準(zhǔn)誤差分別為35.92±3.57,9.83±0.17、
10.27±0.35、21.15±8.17。Herschel-Bulkley 模型的三個(gè)要素都呈現(xiàn)在圖 20 中。CoQlO的DSPC分散體服從冪定律，因此不存在屈服應(yīng)力。有趣地是，制劑的屈服應(yīng)力顯示為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的，但是沒(méi)有確定趨勢(shì)。DSPC制劑具有比其它分析的樣品顯著更高的非牛頓粘度，可能是由于其明顯的剪切稀化行為(η < I)。有趣地是，流動(dòng)指數(shù)結(jié)果表明DPPC、DMPC和卵磷脂分散體分別呈現(xiàn)增加的剪切稠化行為(η > I)。
[0263]通過(guò)保持剪切速率和粘度分別作為自變量和因變量進(jìn)一步分析流變學(xué)，以便將結(jié)果與水性分 散體的一般流動(dòng)曲線擬合(圖21)。圖形表示呈現(xiàn)在圖22中，其清楚地顯示出所增強(qiáng)的DSPC制劑剪切稀化事件。涉及這些模型的相關(guān)等式顯示在表4中。通過(guò)將這些曲線與流變模型擬合，據(jù)發(fā)現(xiàn)制劑呈現(xiàn)不同的行為(表5)。對(duì)于卵磷脂、DMPC、DPPC和DSPC分散體，標(biāo)準(zhǔn)誤差分別為 93.49±8.60,43.27±10.55,41.34±8.57、16.00±4.74。
[0264]CoQlO的卵磷脂制劑與Sisko模型擬合，表明該研究的剪切速率范圍落入與分散體的一般流動(dòng)曲線相關(guān)的中-至-高剪切速率范圍內(nèi)。這通過(guò)表5中可見(jiàn)的小的特征時(shí)間和顯示在圖22中的較高剪切速率下的曲線形狀得到證實(shí)。該結(jié)果也證實(shí)由Herschel-Bulkley模型的評(píng)價(jià)給出的剪切稠化行為(圖20)。在研究的制劑中，僅僅卵磷脂分散體出現(xiàn)觸變行為。這表明在所研究剪切速率范圍中該分散體呈現(xiàn)的剪切稠化行為的結(jié)構(gòu)恢復(fù)期間，剪切應(yīng)力(例如剪切稀化事件)中止后的時(shí)間依賴(lài)性變化。因此，在剪切應(yīng)力停止時(shí)，合成磷脂制劑快速恢復(fù)至其初始狀態(tài)。
[0265]DMPC和DPPC分散體遵循Cross模型，因此都給出零_速率和無(wú)限速率粘度。然而，制劑的特征時(shí)間極大地不同，DMPC制劑顯示最低值。這表明，與卵磷脂分散體類(lèi)似，DMPC制劑落向與分散體的一般流動(dòng)曲線相關(guān)的剪切速率上部范圍(表5)，從而解釋了第二牛頓平臺(tái)期(3.66cP)大于第一牛頓區(qū)(1.13cP)。因此，DMPC分散體的流變行為與Cross模型相比更接近Sisko。為此,卵磷脂和DMPC分散體都呈現(xiàn)高于一(unity)的速率指數(shù)(或Cross速率常數(shù))值，反映出在所研究的剪切速率范圍中不存在冪定律區(qū)域。當(dāng)在該特定范圍內(nèi)的粘度適當(dāng)?shù)貜牡谝慌ｎD區(qū)延伸至第二牛頓區(qū)時(shí)，則Ι-m接近速率指數(shù)(rate index)η。在較高的剪切速率下，剪切稠化行為明顯地從曲線形狀證明(圖22) APPC制劑的較大特征時(shí)間表明曲線更加朝向低剪切速率范圍，并因此支持無(wú)限速率粘度小于零速率粘度。Cross速率常數(shù)接近于一，其表明在冪定律區(qū)域中一定程度的剪切稀化行為。圖22中DPPC分散體的曲線形狀的觀察支持這些發(fā)現(xiàn)，并且相對(duì)低水平的剪切稠化行為存在于Herschel-Bulkley模型中(圖20)。當(dāng)與卵磷脂DMPC制劑相比時(shí)，該相對(duì)低水平的剪切稠化行為可歸因于在較高剪切速率下流變學(xué)的差異。
[0266]DSPC的流變行為遵循Williamson模型。該分散體的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著更高的特征時(shí)間結(jié)合流動(dòng)曲線形狀表明所研究的剪切速率范圍落入分散體的一般流動(dòng)曲線的低-中等剪切速率范圍內(nèi)(圖22)。速率指數(shù)值反映在冪定律區(qū)域的剪切稀化行為(表5)。
[0267]如結(jié)合實(shí)施例1討論的，研究振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器連續(xù)和穩(wěn)定地霧化分散體的能力并同時(shí)分析流體流變學(xué)而不是更簡(jiǎn)單的動(dòng)態(tài)粘度測(cè)量可能是重要的。前述工作集中于分散介質(zhì)本身的粘度而與周?chē)后w內(nèi)分散顆粒之間的相互作用無(wú)關(guān)。因?yàn)閲婌F器的高頻機(jī)械應(yīng)力直接地轉(zhuǎn)移到制劑，在較高剪切速率下流變學(xué)參數(shù)的分析可較好地轉(zhuǎn)化為在振動(dòng)膜附近實(shí)際發(fā)生什么。
[0268]將結(jié)果與流變模型擬合獲得的一些標(biāo)準(zhǔn)誤差值可能被認(rèn)為比較高。不希望受到任何特定理論的束縛，據(jù)信這些值可以歸因于使用目前的實(shí)施例的試驗(yàn)設(shè)計(jì)研究的有限剪切速率范圍。雖然可以進(jìn)行進(jìn)一步和/或另外的實(shí)驗(yàn)來(lái)降低標(biāo)準(zhǔn)誤差，但是，關(guān)于制劑對(duì)所施加應(yīng)力的反應(yīng)的了解提供了關(guān)于可從所述分散體的主動(dòng)膜噴霧預(yù)見(jiàn)到什么的有價(jià)值信息。
[0269]為了比較制劑的噴霧性能，用實(shí)施例1中描述的開(kāi)放臺(tái)方法設(shè)置MalvernSpraytec⑧。圖23中呈現(xiàn)的傳輸圖顯示15分鐘持續(xù)時(shí)間的噴霧事件。在該持續(xù)時(shí)間結(jié)束時(shí)，傳輸值恢復(fù)至100%，表明測(cè)量合適地進(jìn)行且沒(méi)有檢測(cè)器透鏡霧化。為了評(píng)價(jià)這些制劑的噴霧性能，將傳輸圖擬合線性回歸以分析曲線的斜率。由所述斜率可以推斷給定噴霧事件的穩(wěn)定性。斜率和TAO結(jié)果呈現(xiàn)在圖24中。如通過(guò)基本上零的斜率和最高的TAO表明的，對(duì)照(即，鹽水)的霧化是隨時(shí)間最穩(wěn)定的。初始5分鐘(300秒)，卵磷脂制劑顯示出穩(wěn)定的噴霧，接著傳輸增加。DMPC分散體顯示出具有與卵磷脂相反的模式的傳輸分布。在噴霧開(kāi)始時(shí)，觀察到微小斜率至多約8分鐘(480秒)，接著出現(xiàn)穩(wěn)定的噴霧。DPPC和DSPC分散體在整個(gè)噴霧期間都呈現(xiàn)非常淺的斜率。
[0270]卵磷脂分散體顯示出最高的斜率和低TAO(其與DMPC制劑相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。盡管DPPC和DSPC制劑呈現(xiàn)類(lèi)似的斜率(例如，非統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的)，但是來(lái)自DSPC的TAO顯示比來(lái)自DPPC的TAO更高的物質(zhì)輸出，盡管兩種制劑都是穩(wěn)定噴霧的。這些結(jié)果顯示與物質(zhì)輸出(或ΤΑ0)結(jié)合分析傳輸圖的斜率的重要性。在CoQlO的水性分散體之間，DSPC制劑呈現(xiàn)最佳結(jié)果，顯示低斜率值和磷脂分散體之間最高的ΤΑ0。簡(jiǎn)而言之，所研究制劑中噴霧性能提高的順序?yàn)?卵磷脂<DMPC<DPPC<DSPC。
[0271]這些發(fā)現(xiàn)可以與較高剪切速率下制劑的相應(yīng)流變行為同時(shí)評(píng)價(jià)。在檢查曲線(圖22)時(shí)，在高剪切速率下，卵磷脂和DMPC分散體呈現(xiàn)第二牛頓平臺(tái)后的特征剪切稠化行為，這得到其相應(yīng)的低特征時(shí)間的證實(shí)。在剪切稀化事件之后，剪切稠化的發(fā)生可以歸因于流體的二維分層后的排列不穩(wěn)定性。高于臨界剪切應(yīng)力可引起分散顆粒的隨機(jī)排列，導(dǎo)致粘度增加。隨機(jī)排列可限制穩(wěn)定的噴霧性能，如這兩種制劑所示的。另一方面，DSPC呈現(xiàn)的冪定律區(qū)域的高特征時(shí)間和剪切稀化行為，以及在較小程度上的DPPC，在高剪切速率下的分散體可以解釋它們的相對(duì)優(yōu)良的噴霧性能。這些結(jié)果表明對(duì)應(yīng)于在高剪切速率下的剪切稀化行為的高特征時(shí)間可以有利于噴霧性能，而剪切稠化(低特征時(shí)間)可以具有相反的影響。因此，這些結(jié)果表明在高剪切速率下的流變行為可以直接地與分散體的噴霧性能相關(guān)。
[0272]然而，這些數(shù)據(jù)表明在本文描述分散體的噴霧的情形中，物質(zhì)輸出可能與藥物噴射不相關(guān)(例如，不直接相關(guān))。因此，為了測(cè)量藥物霧化和為了獲得對(duì)制劑的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的了解，使用NGI和適應(yīng)的DUSA分析CoQlO的磷脂制劑的體外沉積。對(duì)15分鐘噴霧周期的初始和最終時(shí)間部分的藥物沉積的分析允許與噴霧性能結(jié)合用于評(píng)價(jià)這些數(shù)據(jù)。
[0273]卵磷脂、DMPC、DPPC和DSPC制劑的TED呈現(xiàn)在圖25中。經(jīng)NGI和DUSA分析比較噴霧周期的初始階段和最終階段，CoQlO的卵磷脂分散體在藥物霧化方面呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的降低。在噴霧開(kāi)始和結(jié)束時(shí)噴射的藥物量的這一差異證實(shí)使用LD從噴霧性能的結(jié)果觀察到的斜率(25.99x10_3±2.80x10_3%/s)不僅與降低的物質(zhì)輸出有關(guān)，而且與霧化的藥物量有關(guān)?？偟膩?lái)說(shuō)，當(dāng)與合成磷脂制劑相比時(shí)，卵磷脂分散體在初始和最終階段也呈現(xiàn)顯著更小的TED。
[0274]在NGI分析下，對(duì)于用合成磷脂制備的分散體，相同的噴霧事件內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。然而，使用DUSA方法，在相同噴霧事件內(nèi)，DMPC分散體顯示出較小的TED。然而，TED/DUSA結(jié)果可以與本分析更相關(guān)，因?yàn)榘幬锏囊旱沃苯映练e在過(guò)濾器中，而TED/NGI結(jié)果具有與NGI裝置相關(guān)的潛在損失。與潛在損失無(wú)關(guān)，獲得令人滿(mǎn)意地質(zhì)量平衡，因?yàn)樵诒容^兩種TED測(cè)定方法時(shí)沒(méi)有確認(rèn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在15分鐘的噴霧周期內(nèi)，來(lái)自DMPC分散體的噴霧性能測(cè)試的斜率(16.06x10_3±2.88x10_3%/s)與霧化藥物量的差異一致。CoQlO的DPPC和DSPC分散體以近似相等地霧化。這些結(jié)果表明這些制劑都顯示出穩(wěn)定的噴霧(例如，如以相對(duì)小的線性回歸斜率值定量的)。
[0275]可以影響肺部藥物遞送的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)顯示在圖26和27中。與最終階段相t匕，在噴霧的初始階段卵磷脂制劑顯示出如與沉積的藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)相關(guān)的較高的液滴尺寸(圖26)。DMPC制劑在較小的程度上顯示出與卵磷脂制劑類(lèi)似的模式。在整個(gè)15分鐘噴霧事件中，DPPC和DSPC制劑具`有更平衡的液滴尺寸。關(guān)于沉積的藥物量(與藥物分?jǐn)?shù)相反)，圖27顯示卵磷脂制劑的總體沉積在初始和最終階段都低(例如，當(dāng)與其它制劑相比時(shí))。該結(jié)果與TED結(jié)果一致。在所研究的三種合成磷脂中，DMPC制劑呈現(xiàn)最低的沉積，其與TAO和TED結(jié)果一致。DPPC和DSPC制劑具有高藥物沉積量，并在整個(gè)15分鐘的噴霧事件中保持一致的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。
[0276]為了進(jìn)一步比較霧化的分散體的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，將MMAD和GSD呈現(xiàn)在圖28中。對(duì)于所有四種制劑，MMAD和GSD值最初相似。然而，到噴霧事件完成，所述值不同。這一行為表明包含藥物納米顆粒的噴射液滴的尺寸是磷脂依賴(lài)性的。明顯地，對(duì)于卵磷脂和DMPC分散體，在相同的噴霧事件內(nèi)觀察到的傳輸圖斜率的變化(圖24)不僅反映在霧化的藥物量上(TED結(jié)果，25)，而且反映在它們的體外NGI沉積曲線中顯示的空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)上(圖26和27)。隨著噴霧的進(jìn)展，霧化的液滴變得更小且更少。
[0277]可以通過(guò)分析細(xì)顆粒(例如，空氣動(dòng)力學(xué)尺寸低于5.39 μ m)獲得對(duì)于肺沉積的噴霧輸出潛能的進(jìn)一步了解。圖29A顯示所研究制劑的TED NGI和TED DUSA值。TED NGI數(shù)據(jù)表明當(dāng)比較15-分鐘噴霧內(nèi)的初始階段和最終階段時(shí)，僅僅卵磷脂制劑顯示出霧化藥物量的顯著差異。TED DUSA值表明當(dāng)比較15-分鐘噴霧內(nèi)的初始階段和最終階段時(shí)，卵磷脂和DMPC制劑都顯示出霧化藥物量的差異。TED DUSA結(jié)果可被認(rèn)為更有意義，因?yàn)榘幬锏囊旱沃苯映练e在用于測(cè)量的過(guò)濾器中，而TED NGI結(jié)果可以具有在整個(gè)NGI設(shè)備氣溶膠通道中的損失。圖29B顯示所研究制劑的FPDet和FPF值。對(duì)于在本實(shí)驗(yàn)條件下用AeronebPro?噴霧器霧化的所有分散體，F(xiàn)PF隨時(shí)間提高，證實(shí)液滴尺寸在噴霧過(guò)程中減小。卵磷脂制劑的FPD在噴霧期間顯著變化。霧化的DMPC分散體的MMAD值在噴霧期間降低，而FPD并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)變化。DPPC制劑顯示出穩(wěn)定的噴霧性能，且因此在整個(gè)噴霧中顯示出一致的TED值。雖然MMAD值不是統(tǒng)計(jì)學(xué)不同的，但是FPD結(jié)果表明到噴霧結(jié)束時(shí)DPPC制劑顯示出較高的霧化藥物量。對(duì)于DSPC制劑觀察到類(lèi)似的特性，但是僅基于該實(shí)施例，結(jié)果不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(P=0.08)。
[0278]圖30顯示含CoQlO顆粒的液滴的幾何尺寸也隨時(shí)間減小，特別是在卵磷脂和DMPC制劑中。在15分鐘噴霧期間，DPPC和DSPC制劑的氣溶膠顯示出相對(duì)一致的(例如，類(lèi)似于鹽水對(duì)照的)液滴尺寸。空氣動(dòng)力學(xué)和幾何學(xué)尺寸的相異性可歸因于不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)置(參見(jiàn)實(shí)施例1中討論的 )。
[0279]表6表明本發(fā)明所顯示出的具有到達(dá)肺的潛能(基于FPD)的空前高劑量，DPPC和DSPC劑型呈現(xiàn)最高的值。這些劑量大于之前使用相同類(lèi)型的噴霧器(振動(dòng)篩網(wǎng)裝置，數(shù)據(jù)沒(méi)有顯亍)霧化的伊曲康唑納米分散體的約10倍至40倍，并且大于之前使用Sidestream ? PortaNeb ?噴射噴霧器(Medic-Aid Ltd., UK)的布地奈德懸浮液(Pulmicort Respule ?, AstraZeneca, UK)霧化高達(dá)280倍?；蛟S同等重要的，本發(fā)明允許驗(yàn)證噴霧的數(shù)量和質(zhì)量(例如，濃注(bolus) vs.噴霧事件期間穩(wěn)定的氣溶膠)。
[0280]在某些情況下，精制可能是有效地藥物負(fù)載所必需的。例如，在熱高壓均質(zhì)化期間可發(fā)生水蒸發(fā)。類(lèi)似地，所制備的小體積制劑(例如，IOOmL)可導(dǎo)致通過(guò)制造設(shè)備上沉積的藥物損失。
[0281]最后，在噴霧事件期間觀察到的噴霧性能的變化已經(jīng)顯示為對(duì)應(yīng)于不同制劑之間空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的差異。然而，這些制劑的流變行為顯示為與用于連續(xù)地噴霧磷脂穩(wěn)定的疏水性生物活性劑的納米分散體的主動(dòng)振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器相容。分散體的各種成分(例如疏水性生物活性劑)的濃度在決定第二牛頓平臺(tái)期后剪切稠化事件開(kāi)始的臨界剪切速率方面具有重要作用。因此，分散體的流變學(xué)的認(rèn)識(shí)可用于鑒定在仍保持期望噴霧性能的同時(shí)最大的藥物負(fù)載。噴霧器氣溶膠產(chǎn)生通過(guò)將應(yīng)力(例如，空氣噴射流、超聲力、振動(dòng)篩網(wǎng))應(yīng)用到大塊(bulk)液體制劑中或其上發(fā)生的。因此，本文提供的方法，包括使用LD技術(shù)分析噴霧性能和分散體的流變學(xué)研究的組合，提供了基于疏水性藥物連續(xù)噴霧器的吸入療法的制劑開(kāi)發(fā)。
[0282]實(shí)施例3: CoQlO的可吸入制劑在小鼠中的肺部沉積和系統(tǒng)分布
[0283]實(shí)施例3呈現(xiàn)在肺部遞送用合成磷脂制備的CoQlO制劑之后，在小鼠中體內(nèi)全身分布、肺和鼻腔沉積的評(píng)價(jià)?；谏厦娼o出的試驗(yàn)結(jié)果并且由于在肺中的磷脂生理出現(xiàn)，選擇三種合成磷脂以穩(wěn)定這些分散體:DMPC、DPPC和DSPC。不選擇卵磷脂是因?yàn)槠涞腕w外沉積。給藥裝置包括接收來(lái)自Aeroneb Pro ?振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器產(chǎn)生的氣溶膠的僅鼻吸入室。結(jié)果顯示小鼠肺部獲得高以及持續(xù)劑量的CoQIO，其在理論暴露值的1.8至3.0%間變化。
[0284]材料和方法
[0285]材料:CoQlO由 Asahi Kasei Corp.(Tokyo, Japan)提供。Genzyme Pharmaceuticals (Liestal, Switzerland)提供1，2_ 二肉豆蘧?；?sn-甘油基_3_磷酸膽堿(DMPC)U, 2- 二棕櫚酰基-sn-甘油基_3_磷酸膽堿(DPPC)和1，2- 二硬脂?；?sn-甘油基-3-憐酸膽喊(DSPC)。DMPC 也得自 Lipoid GmbH (Ludswighafen, Germany)。氯化鈉(晶體，ACS 認(rèn)證的)獲自 Fisher Chemical (Fisher Scientific, Fair lawn, NJ, USA),和去離子水獲自中央反滲透/軟化器系統(tǒng)。小鼠約束管(restraint tubes)(項(xiàng)目E2QY-PC)、前鼻插入物(項(xiàng)目E2TE-)和后部夾持器(項(xiàng)目E2TA-N)均購(gòu)自BattelleToxicology Northwest(Richland, WA, USA)? 風(fēng)扇(12V, 0.10A,型號(hào) 0D4020-12HB)購(gòu)自 Knight Electronics (Dallas, TX, USA)。HPLC 級(jí)己燒和 200proof 無(wú)水乙醇購(gòu)自Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA)。注射器(ImL)和針(規(guī)格 21G1 和 23G1)獲自 BectonDickinson (Franklin Lakes, NJ, USA)。肝素化管(1.3mL 微管肝素鋰(LH)，具有螺帽密封，產(chǎn)品編號(hào):41.1393.105)購(gòu)自 Sarstedt AG&C0.(Numbrecht, Germany)。微量離心管(1.5mL，透明，不含 RNase/DNase，BL3152)獲自 Bio-Link Scientific, LLC(ffimberley, TX,USA)。
[0286]制劑:如實(shí)施例2描述的，使用高壓均質(zhì)化制備制劑。簡(jiǎn)而言之，在攪拌下水化過(guò)夜后，在55°C下，將在水中包含2.5%w/w的磷脂(DMPC、DPPC或DSPC)的磷脂分散體加入到熔融的CoQlO (4%w/w)中。使用具有8mm轉(zhuǎn)子葉片的Ultra-Turrax ? TP18/10均質(zhì)器，通過(guò)以20，OOOrpm高剪切混合(IKA-Werke GmbH, Staufen, Germany) 5分鐘預(yù)分散所述制劑。接著，使制劑在約30，OOOpsi下通過(guò)M-1lOP Bench-top Microfluidizer ?(Microfluidics, Newton, MA, USA)處理50輪，同時(shí)保持溫度在55°C至65°C。在微流化之后，將0.9%w/v的氯化鈉加入到最終制劑中。在不存在藥物(未加入CoQlO)的情況下，使用DPPC類(lèi)似地制備用于對(duì)照組的制劑。
[0287] 向小鼠的肺部遞送:將動(dòng)物4只一組籠養(yǎng)，并保持正常嚙齒類(lèi)動(dòng)物食物飲食與自由飲水。如圖31所示，組裝每次能夠給藥六只小鼠的僅鼻室裝置。在給藥之前，使⑶-1?IGS ICR 小鼠(Charles River Laboratories International, Inc., Wilmington, MA, USA)持續(xù)3天每天單獨(dú)地適應(yīng)約束管約10分鐘，受前鼻插入物和后部夾持器限制。將給藥裝置放置在通風(fēng)櫥內(nèi)以收集脫逸的包含藥物的氣溶膠。為了避免通風(fēng)櫥提供的氣流的影響，在管系統(tǒng)的末端放置錐形(erlenmeyer)容器作為緩沖?？諝饬髀试O(shè)置為lL/min以確保使用Aeroneb Pro?振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧器(Aerogen, Galway, Ireland)適當(dāng)?shù)貙⑺幬镬F化到僅鼻室(內(nèi)體積:230mL ;直徑:3.8cm ;長(zhǎng)度:20.3cm)中。在制備之后，所有制劑(鹽水對(duì)照、DMPC、DPPC和DSPC)在給藥時(shí)都向每只重量在23至33g的小鼠給藥15分鐘。各單劑量研究組由36只雄性動(dòng)物組成。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(霧化事件結(jié)束后0.5、1、3、8、24和48小時(shí))，將隨機(jī)地選自相同制劑的不同給藥事件的六只動(dòng)物通過(guò)用二氧化碳麻醉處死。作為收集方法的部分，通過(guò)心臟穿刺抽血，獲取肺，并進(jìn)行鼻腔洗滌。提取樣品用于與串聯(lián)質(zhì)譜偶聯(lián)的液相色譜(LC/MS/MS)分析。
[0288]估計(jì)劑量:為了估計(jì)在該研究期間小鼠暴露的劑量，假定僅鼻室逐漸地填充含CoQlO的氣溶膠。因此，藥物濃度穩(wěn)定地增加直至其達(dá)到平臺(tái)期。在穩(wěn)態(tài)時(shí)，也假定藥物進(jìn)入小室的速率等于藥物離開(kāi)小室的速率(dC/dt=0)。因此，可使用等式5測(cè)量在任何給定時(shí)間下小室內(nèi)部的藥物濃度:
[0289]C=FPDr/F* (1- e'- λ t)(等式 5)
[0290]其中C為藥物濃度，F(xiàn)PDr為如在上述章節(jié)確定的細(xì)顆粒劑量(空氣動(dòng)力學(xué)截止直徑低于5.39 μ m/分鐘的顆粒的量)遞送的速率，F(xiàn)為氣流速率，λ為室空氣-變化率，t為在噴霧期間內(nèi)的任何給定時(shí)間。室空氣-變化率λ可以根據(jù)等式6，基于氣流速率和室內(nèi)體積V確定:
[0291]X=F/V (等式 6)
[0292]基于這些假定，下述等式7描述遞送至小鼠的估計(jì)劑量:
【權(quán)利要求】
1.包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體的可吸入藥物組合物，所述組合物包含: 平均直徑為約30至500nm的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)， 其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占所述組合物的約0.1至30%w/w，所述磷脂占所述組合物的約0.1至30%w/w，并且所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)，和 其中，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化。
2.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述水性分散介質(zhì)包括水或水性鹽溶液。
3.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述脂質(zhì)體顆粒的分散體為連續(xù)可呼吸氣溶膠的形式，其包含含有脂質(zhì)體顆粒的分散體且具有約I至5 μ m的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)的多個(gè)水性液滴。
4.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物特征在于經(jīng)至少15分鐘的連續(xù)霧化，平均百分傳輸率(APT)為約50至100%。
5.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中經(jīng)至少15分鐘的連續(xù)霧化，所述多個(gè)液滴具有約I至5 μ m的MMAD。
6.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物特征在于在貯存至少七天之后，APT 為約 50 至 100%。
7.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物特征在于APT為約50至100%、約60 至 100%、約 70 至 100%、約 80 至 100%、約 90 至 100%、約 50 至 95%、約 60 至 95%、約 70 至95%、約80至95%、約90至95%、約50至90%、約60至90%、約70至90%、約80至90%、小于約50%、小于約55%、小于約65%、小于約70%、小于約75%、小于約80%、小于約85%、小于約90%、小于約95%、小于約100%或其中的任何子范圍或值。
8.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中在貯存至少七天之后，所述脂質(zhì)體顆粒具有約30至500nm的平均直徑。
9.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物特征在于非牛頓流體特性。
10.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物具有約0.4,0.5,0.6,0.7,0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 或 1.3 的流動(dòng)指數(shù)(η)。
11.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物具有約0.1,0.15,0.2、1、100或IlOcP的粘度U)。
12.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物具有約2.5、1.5、-2.5、-10、-50、-55 或-60mV 的 ζ 電勢(shì)。
13.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物具有約25、30、35、40、45或50mN/m的表面張力。
14.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物具有約11、12、13、14、15、16、17或18mPa的屈服應(yīng)力(σ )。
15.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述脂質(zhì)體顆粒的分散體具有約30至100nm、50 至 150nm、30 至 300nm、100 至 400nm 或 200 至 300nm 的平均直徑。
16.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物具有約0.1,0.2,0.3,0.4,0.5、.0.6 或 0.7 的 PDI。
17.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物不包括調(diào)理作用縮減劑。
18.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述組合物具有至少約40、45、50、55、60、.65、70、75、80、85、90、95 或 100% 的總氣溶膠輸出(TAO)。
19.權(quán)利要求3的可吸入藥物組合物，其中所述MMAD為約1、2、3、4或5μπι。
20.權(quán)利要求3的可吸入藥物組合物，其中所述多個(gè)液滴具有小于約2.5,2.4,2.3、.2.2、2.1、2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、.0.3、0.2或0.1的幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD)。
21.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述疏水性生物活性劑包括CoQIO。
22.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述疏水性生物活性劑占組合物的約4%w/w或以下。
23.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物,其中所述疏水性生物活性劑占組合物的約l%w/Wo
24.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述磷脂包括DPPC、DSPC、DMPC或其組合。
25.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述磷脂占組合物的約3%w/w或以下。
26.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約1:1、.4:3 或 4:2.5。
27.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，進(jìn)一步包含低于組合物的約1.0%w/v的量的氯化鈉。
28.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，進(jìn)一步包含使得組合物與人的肺基本上等滲的量的鹽。
29.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述分散體為懸浮液、納米懸浮液、乳液或微乳液。
30.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述疏水性生物活性劑包括一種或多種疏水性抗炎類(lèi)固醇、NSAID劑、抗菌劑、抗真菌劑、化療劑、血管舒張劑或其組合。
31.包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體的可吸入藥物組合物，所述組合物包含: 平均直徑為約30至300nm的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含CoQIO、DPPC和水性分散介質(zhì)， 其中CoQIO:DPPC的比率為約5:1至約1:5,CoQlO占組合物的約0.1至6%w/w，所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)，和 其中，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的該疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化。
32.包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體的可吸入藥物組合物，所述組合物包含: 平均直徑為約30至300nm的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含CoQIO、DSPC和水性分散介質(zhì)， 其中CoQIO:DSPC的比率為約5:1至約1:5,CoQlO占組合物的約0.1至6%w/w，所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)，和 其中，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的該疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化。
33.包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體的可吸入藥物組合物，所述組合物包含: 平均直徑為約30至300nm的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含CoQIO、DMPC和水性分散介質(zhì)， 其中CoQIO:DMPC的比率為約5:1至約1:5，CoQlO占組合物的約0.1至6%w/w，所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)，和 其中，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的該疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化。
34.包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體的可吸入藥物組合物，所述組合物包含: 平均直徑為約30至500nm的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)， 其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w,所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w,并且所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)，和 其中，當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，所述組合物能夠?qū)崿F(xiàn)至少約500 μ g/g濕肺組織的生物活性劑濃度。
35.制備可吸入藥物組合物的方法，其包括步驟: 水化磷脂，從而形成水化的磷脂； 混合該水化的磷脂、疏水性生物活性劑和水性分散介質(zhì)，從而得到混合物；和均質(zhì)化該混合物，從而得到脂質(zhì)體顆粒的分散體，其包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的磷脂和疏水性生物活性劑，且具有約30至500的平均直徑， 其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w,且所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w,和 其中，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的該疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化。
36.權(quán)利要求35的方法，其進(jìn)一步包括: 霧化所述脂質(zhì)體顆粒分散體，從而形成包括多個(gè)液滴的可呼吸氣溶膠，各個(gè)液滴包含脂質(zhì)體顆粒的分散體且具有約I至5 μ m的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)。
37.權(quán)利要求35的方法，其中混合包括以約10，000至20，OOOrpm且在約50至65°C下高至約5分鐘的高剪切混合。
38.權(quán)利要求35的方法，其中均質(zhì)化包括微流化。
39.權(quán)利要求35的方法，其中均質(zhì)化包括在約30，OOOpsi且在約50至65°C下約1_50輪的高壓均質(zhì)化。
40.權(quán)利要求35的方法，其中均質(zhì)化包括超聲均質(zhì)化。
41.權(quán)利要求35的方法，其中霧化包括振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧。
42.施用可吸入藥物組合物的方法，其包含步驟: 霧化脂質(zhì)體顆粒的分散體，從而形成包含多個(gè)具有約I至5 μ m的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)的液滴的可呼吸氣溶膠， 其中所述脂質(zhì)體顆粒的分散體具有約30至500nm的平均直徑，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的疏水性生物活性劑和磷脂，其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w,所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w,和 其中，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的該疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化；和 將治療有效量的所述疏水性生物活性劑遞送至需要治療的受試者的肺。
43.權(quán)利要求42的方法，其中霧化包括振動(dòng)篩網(wǎng)噴霧。
44.權(quán)利要求42的方法，其中所述氣溶膠特征在于經(jīng)至少15分鐘的連續(xù)霧化，其APT為約50至100%ο
45.權(quán)利要求42的方法，其中所述氣溶膠特征在于APT為約50至100%、約60至100%、約70至100%、約80至100%、約90至100%、小于約50%、小于約60%、小于約70%、小于約80%、小于約90%或小于約100%。
46.權(quán)利要求42的方法，其中經(jīng)至少15分鐘的連續(xù)霧化，所述多個(gè)液滴具有約I至5 μ m 的 MMAD。
47.權(quán)利要求42的方法，其中所述MMAD為約1、2、3、4或5μπι。
48.權(quán)利要求42的方法，其中所述液滴具有至少約2.0的幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD)。
49.權(quán)利要求42的方法，其中遞送實(shí)現(xiàn)至少約1、5、10、15或20%的沉積質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
50.權(quán)利要求42的方法，其中遞送實(shí)現(xiàn)向肺的局部遞送而基本沒(méi)有全身性遞送。`
51.權(quán)利要求42的方法，其中在施用后至少48小時(shí)，遞送在肺中實(shí)現(xiàn)升高的疏水性生物活性劑的量。
52.權(quán)利要求42的方法,其中當(dāng)連續(xù)霧化時(shí),所述組合物能夠?qū)崿F(xiàn)至少約500μg/g濕肺組織的生物活性劑濃度。
53.權(quán)利要求42的方法，其中遞送治療有效量的疏水性生物活性劑包括計(jì)量生物活性劑的劑量。
54.權(quán)利要求42的方法，其中所述受試者患有肺癌。
55.權(quán)利要求42的方法，其中所述受試者患有下述疾病的一種或多種:哮喘、變態(tài)反應(yīng)、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、急性支氣管炎、肺氣腫、囊性纖維化、肺炎、結(jié)核病、肺水腫、急性呼吸窘迫綜合征、肺塵埃沉著病、間質(zhì)性肺病、肺水腫、肺栓塞、肺動(dòng)脈高血壓、胸腔積液、氣胸、間皮瘤、肌萎縮性側(cè)索硬化、重癥肌無(wú)力和肺病。
56.通過(guò)包括下述步驟的方法制備的可吸入藥物組合物: 水化磷脂，從而形成水化的磷脂； 混合該水化的磷脂、疏水性生物活性劑和水性分散介質(zhì)，從而得到混合物；和均質(zhì)化該混合物，從而得到脂質(zhì)體顆粒的分散體，其包含分散在水性分散介質(zhì)內(nèi)的磷脂和疏水性生物活性劑，且具有約30至500的平均直徑， 其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w,且所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w,和 其中，當(dāng)向受試者施用時(shí)，所述組合物特征在于足以向受試者提供治療劑量的該疏水性生物活性劑的連續(xù)霧化。
57.包含適于連續(xù)霧化的脂質(zhì)體顆粒分散體的可吸入藥物組合物，所述組合物包含: 平均直徑為約30至500nm的脂質(zhì)體顆粒的分散體，各個(gè)脂質(zhì)體顆粒包含疏水性生物活性劑、磷脂和水性分散介質(zhì)， 其中疏水性生物活性劑:磷脂的比率為約5:1至約1:5，所述疏水性生物活性劑占組合物的約0.1至30%w/w,所述磷脂占組合物的約0.1至30%w/w,并且所述脂質(zhì)體顆粒分散在所述水性分散介質(zhì)內(nèi)，和 其中，當(dāng)連續(xù)霧化時(shí)，經(jīng)15秒的時(shí)間所述組合物能夠?qū)崿F(xiàn)至少約2，900 μ g的總噴射劑量(TED)。
58.權(quán)利要求57的可吸入藥物組合物，其中所述TED為經(jīng)15秒的時(shí)間至少約3，600、3，900、4，300 或 4，600 μ g。
59.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其中所述連續(xù)霧化的持續(xù)時(shí)間為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、50 或 60 分鐘。
60.權(quán)利要求1的可吸入藥物組合物，其進(jìn)一步包含占總組合物0.001-5%重量的聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物。`
【文檔編號(hào)】A61K9/00GK103732214SQ201280040008
【公開(kāi)日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2012年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月17日
【發(fā)明者】N·R·納萊恩, J·P·麥庫(kù)克 申請(qǐng)人:博格有限責(zé)任公司