流感h5疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明基于下述令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：進(jìn)化枝1H5N1的H5蛋白質(zhì)特別通過單次疫苗接種誘導(dǎo)針對具有H5N1HA的流感病毒的交叉進(jìn)化枝保護(hù)性免疫應(yīng)答。在一個方面，本發(fā)明因此涉及用于在治療或預(yù)防由不同進(jìn)化枝(即分別與進(jìn)化枝1或除進(jìn)化枝1外的任何進(jìn)化枝不同的進(jìn)化枝)的H5N1病毒感染的方法中使用的進(jìn)化枝1H5N1病毒的H5蛋白質(zhì)。
【專利說明】流感H5疫苗

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，優(yōu)選涉及傳染病領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及流感蛋白質(zhì)和疫 苗。最特別地，本發(fā)明涉及此類蛋白質(zhì)或疫苗中的任何用于治療和預(yù)防流感感染的用途，此 夕卜用于預(yù)防流感病毒的種內(nèi)和種間傳播的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 流感感染仍是動物和人中的重要感染。流感由經(jīng)歷連續(xù)抗原變化/修飾且具有動 物儲庫的病毒引起。因此，新的流行和大流行可以在未來發(fā)生，并且該疾病的根除將是難以 實(shí)現(xiàn)的。流感病毒是本領(lǐng)域眾所周知的，并且例如由P. Palese，Nature Medicine,第10卷， no. 12,第S82-S86頁，2004年12月與進(jìn)一步的參考文獻(xiàn)更詳細(xì)地描述。簡言之，A型流感 病毒的基因組由八個單鏈區(qū)段組成，并且病毒顆粒在其表面上具有兩種主要糖蛋白：血凝 素（H)和神經(jīng)氨酸酶（N)。具有至少16個不同的血凝素（H1到H16)和9個不同的神經(jīng)氨 酸酶（N1到N9)亞型，在流感病毒中存在相當(dāng)大的抗原變異。
[0003] H5N1型雞瘟病毒的流感病毒已證實(shí)感染家禽、豬和人類。病毒還可以從禽類物種 直接傳播到人（Claas 等人，Lancetl998, 351:472 ;Suarez 等人，J. Virol. 1998, 72:6678; Subbarao 等人，Sciencel998, 279:393 ;Shortridge，Vaccinel999,17 (Suppl. 1) : S26-S29)。 在已知人臨床病例中的死亡率接近約50%。
[0004] 在上個世紀(jì)中，豬已成為流感大流行的重要載體。豬、駱駝和海豹（優(yōu)選豬）可以 充當(dāng)禽流感病毒的"混合室"，并且因此代表克服從流感病毒的天然儲庫家禽到哺乳動物的 物種障礙的潛在危險因素。這通常通過敏感動物（例如豬）由確定的哺乳動物（豬）以及 禽流感病毒兩者的雙重感染而發(fā)生。這個雙重感染可以產(chǎn)生新重組病毒，所述新重組病毒 可以是人或豬大流行的原因。然而，近期證據(jù)指出目前的禽類H5毒株與哺乳動物流感病毒 的重組將不導(dǎo)致高毒力重組體。另一方面，禽流感病毒可以感染豬，并且通過自發(fā)突變可以 變得適應(yīng)豬。一旦病毒可以引起豬（或其他哺乳動物）群體內(nèi)的平行感染，關(guān)鍵障礙就將 被克服。
[0005] 然而，大部分東南亞豬已由源于附近養(yǎng)禽業(yè)的禽（H5)流感病毒毒株感染。因?yàn)檫@ 些感染迄今為止已經(jīng)是亞臨床的，所以它們僅能夠通過實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行診斷，并且因此是通常 被忽略的。存在這些亞臨床感染的豬充當(dāng)病毒適應(yīng)哺乳動物系統(tǒng)、在豬群體內(nèi)傳播以及感 染人類的機(jī)會的高風(fēng)險。
[0006] 目前的流感疫苗包括亞單位疫苗（Babai等人，Vaccinel999,17(9 -10):1223-1238 ;Crawford 等人，Vaccinel999,17(18):2265-2274 Johansson 等人， Vaccinel999,17(15 - 16) :2073-2080)、減毒疫苗（Horimoto 等人，Vaccine2004, 22(17 -18) :2244-2247)、DNA 疫苗（Watabe 等人，Vaccine2001，19(31) :4434-4444)和滅活流感 疫苗（Cao等人，Vaccinel992,10(4) :238-242)，其中后者是在商業(yè)規(guī)模上最廣泛使用的 (Lipatov 等人，J Virol2004, 78 (17) :8951-8959)。
[0007] 亞單位疫苗、重組血凝素和神經(jīng)氨酸酶（Babai等人，Vaccinel999,17 (9 - 10):1223-1238 ;Crawford 等人，Vaccinel999,17(18):2265-2274 Johansson 等人， Vaccinel999,17(15 - 16) :2073-2080)可以是滅活疫苗的有吸引力的替代物，盡管無一目 前用作商業(yè)疫苗。此類疫苗的制劑明顯比滅活疫苗更安全。此外，亞單位疫苗不生成針 對內(nèi)部流感病毒蛋白質(zhì)的抗體應(yīng)答，并且因此允許已接種疫苗和受感染動物之間的區(qū)分 (Crawford 等人，Vaccinel999,17 (18) : 2265-2274)。
[0008] 血凝素蛋白質(zhì)是流感病毒的受體結(jié)合和膜融合糖蛋白和感染性中和抗體的靶。 來自H5N1的整個血凝素蛋白質(zhì)（HA)包含568個氨基酸，具有56kDa的分子量。HA分 子由HA1和HA2亞基組成，其中HA1亞基介導(dǎo)與細(xì)胞膜的最初接觸，而HA2引起膜融合 (Chizmadzhev, Bioelectrochemistry2004,63(1 - 2):129-136)〇
[0009] 桿狀病毒/昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)已用于表達(dá)從禽流感亞型中分離的血凝素基因 (Babai 等人，Vaccinel999,17(9 - 10):1223-1238 ;Crawford 等人，Vaccinel999， 17 (18) :2265-2274 Johansson 等人，Vaccinel999,17 (15 - 16) :2073-2080) ;Nwe 等人， BMC Mircobiology2006,6(16):doi:10· 1186/1471-2180-6-16)。然而，這些重組蛋白質(zhì)看 起來在任何情況下都不是保護(hù)性的，或至少對于一些物種是僅更不有效的（Treanor等人， Vaccine2001，19:1732-1737)。
[0010] Lin等人的文件（J Vet Med Sci. 200870(11) :1147-52)公開了桿狀病毒/昆蟲細(xì) 胞系統(tǒng)用于生產(chǎn)進(jìn)化枝2H5N1病毒A/duck/China/E319-2/03的H5蛋白質(zhì)的用途，所述H5 蛋白質(zhì)可用于預(yù)防由進(jìn)化枝2病毒A/duck/China/E319-2/03的感染的初免-加強(qiáng)疫苗接 種。
[0011] Bright等人（PLoS One. 200830 ;3(1) :el501)描述了桿狀病毒/昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)用 于生成病毒樣顆粒（VLP)的用途，所述病毒樣顆粒包括來自進(jìn)化枝2H5N1病毒的神經(jīng)氨酸 酶、血凝素和基質(zhì)1蛋白質(zhì)，用于在小鼠中誘導(dǎo)針對由進(jìn)化枝1H5N1病毒A/VN/1203/2004 的攻擊的交叉進(jìn)化枝保護(hù)性免疫應(yīng)答。然而，VLP的生產(chǎn)并非沒有問題，因?yàn)闉榱松捎行?模擬真實(shí)病毒的功能VLP，需要多種病毒結(jié)構(gòu)蛋白，其隨后必須正確裝配成再現(xiàn)感染性病毒 的外殼（衣殼）的構(gòu)象的顆粒。進(jìn)一步地，研究還揭示VLP的體外裝配與聚集競爭（Ding 等人 Biotechnology and Bioengineeringl07 (3) : 550 - 560) 〇
[0012] 因此，存在增加改良疫苗的可用性和新疫苗接種方法的需要，所述新疫苗接種方 法提供控制流感感染且對疾病負(fù)荷具有正面影響的更佳方法。特別地，存在簡單、有效和易 于處理的系統(tǒng)的強(qiáng)烈需要，所述系統(tǒng)優(yōu)選通過單次疫苗接種誘導(dǎo)針對具有H5N1HA的流感 病毒的交叉進(jìn)化枝保護(hù)性免疫應(yīng)答。

【具體實(shí)施方式】
[0013] 在本發(fā)明的實(shí)施方案前，應(yīng)當(dāng)指出如本文和附加權(quán)利要求中使用的，除非上下文 另有明確說明，否則單數(shù)形式"一個"、"一種"和"所述"包括復(fù)數(shù)指代。因此，例如，提及"制 齊！J"包括多個此類制劑；提及"載體"指一種或多種載體及其本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的等價物。 除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人 員通常理解相同的含義。除非另有說明或由本領(lǐng)域技術(shù)人員另外已知的，否則所有給定范 圍和值都可以在1到5%之間變動，因此術(shù)語"約"從說明書中省略。盡管目前描述了優(yōu)選 方法、裝置和材料，但在本發(fā)明的實(shí)踐或測試中可以使用與本文描述的那些相似或等價的 任何方法和材料。本文提及的所有出版物都通過引用并入本文，為了描述和公開如出版物 中報道的可以與本發(fā)明結(jié)合使用的物質(zhì)、賦形劑、載體和方法的目的。本文的任何內(nèi)容都不 應(yīng)解釋為承認(rèn)本發(fā)明未給予先于本發(fā)明的此類公開內(nèi)容的資格。
[0014] 上述技術(shù)問題的解決方案通過說明書和權(quán)利要求中表征的實(shí)施方案實(shí)現(xiàn)。
[0015] 流感蛋白質(zhì)及其編碼核酸分子
[0016] 本發(fā)明基于下述令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：進(jìn)化枝1H5N1的H5蛋白質(zhì)特別通過單次疫苗接 種誘導(dǎo)針對具有H5N1HA的流感病毒的交叉進(jìn)化枝保護(hù)性免疫應(yīng)答。作為一個特征，為清楚 起見在本文中也稱為"H5蛋白質(zhì)（1) "的進(jìn)化枝1H5N1病毒的H5蛋白質(zhì)包含多肽序列或由 多肽序列組成，所述多肽序列與SEQ ID NO: 1中所示的多肽序列具有至少98%序列相同性。
[0017] "單次（Single-shot)疫苗接種"指無需加強(qiáng)劑量，在其單次劑量后在減少感染發(fā) 病率或嚴(yán)重性方面有效的免疫原性組合物。
[0018] 在一個方面，本發(fā)明因此涉及用于在治療或預(yù)防由不同進(jìn)化枝（即分別與進(jìn)化枝 1或除進(jìn)化枝1外的任何進(jìn)化枝不同的進(jìn)化枝）的H5N1病毒感染的方法中使用的進(jìn)化枝 1H5N1病毒的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)包含多肽序列或由多肽序列組成，所 述多肽序列與SEQ ID NO: 1的多肽序列具有至少98%序列相同性。
[0019] 如本文使用的術(shù)語"進(jìn)化枝"涉及用于高致病性禽流感病毒（H5N1)的WHO命名系 統(tǒng)的一個或多個進(jìn)化枝，其在通過引用并入本文的WHO網(wǎng)站URL處概括 ：
[0020] who. int/csr/disease/avian_influenza/guidelines/nomenclature/en/ (12. 08. 2011) 〇
[0021] 定義了 10個不同的最初病毒進(jìn)化枝（編號0-9) (WH0/0IE/FA0 H5N1進(jìn)化工作組， 2008)，其稱為第一級進(jìn)化枝。進(jìn)化枝嚴(yán)格地在核苷酸水平上定義為符合由WH0/0IE/FA0 H5N1進(jìn)化工作組開發(fā)的下述三個具體進(jìn)化枝定義標(biāo)準(zhǔn)：
[0022] ?共同（進(jìn)化枝限定）結(jié)點(diǎn)的共享；
[0023] ?在進(jìn)化枝限定結(jié)點(diǎn)處具有彡60的自舉值的單系群（在1000次連續(xù)自舉重復(fù) 后）；和
[0024] ?在進(jìn)化枝之間和之內(nèi)分別為>1. 5%和〈1. 5%的配對核苷酸距離平均百分比。
[0025] 隨著這10個進(jìn)化枝內(nèi)的病毒繼續(xù)進(jìn)化，新的亞系（潛在的H5N1進(jìn)化枝）定期出 現(xiàn)。一旦這些亞系符合與最初10個進(jìn)化枝（編號0-9)相同的三個具體進(jìn)化枝定義標(biāo)準(zhǔn)， 它們就指定為分離的進(jìn)化枝（WH0/0IE/FA0 H5N1進(jìn)化工作組Emerg. Inf. Dis. 14,7(2008)。 這些新進(jìn)化枝定義為第二（或第三，等）級進(jìn)化枝，并且使用分層十進(jìn)制編號系統(tǒng)指定使其 與其原始進(jìn)化枝聯(lián)系的數(shù)字"地址"。例如，在抗原上不同的進(jìn)化枝2. 3內(nèi)，符合進(jìn)化枝定義 的第三級進(jìn)化枝指定為進(jìn)化枝2. 3. 1和2. 3. 2等等。這個邏輯分層編號系統(tǒng)客觀上與HA 系統(tǒng)發(fā)生相關(guān)。
[0026] 根據(jù)用于H5N1的WHO命名系統(tǒng)的用于進(jìn)化枝指定的標(biāo)準(zhǔn)是：
[0027] 1可能時，維持先前指定的進(jìn)化枝編號（即進(jìn)化枝2. 2仍為2. 2,并且進(jìn)化枝1仍 為1)
[0028] 2衍生自所有可用序列的基于系統(tǒng)樹拓?fù)鋵W(xué)的新進(jìn)化枝指名（大型樹）再指定為 進(jìn)化枝〇的H5N1祖先（最接近于Gs/Guangdong/1/96)從進(jìn)化枝3開始編號的后續(xù)進(jìn)化枝 (即進(jìn)化枝3 - 9)
[0029] 通過由至少4個分離物共享的不同共同結(jié)點(diǎn)的存在指定的進(jìn)化枝（在單系群中）
[0030] 指定為單個進(jìn)化枝的另外分支進(jìn)化成超過一個不同譜系（即進(jìn)化枝2. 2或進(jìn)化枝 2. 3. 1 ;基于共同結(jié)點(diǎn)的共享和單系群）
[0031] 3在進(jìn)化枝之間和之內(nèi)的配對距離平均百分比（使用Kimura2-參數(shù)）不同 進(jìn)化枝應(yīng)具有在其他進(jìn)化枝之間的>1.5%平均距離不同進(jìn)化枝應(yīng)具有在進(jìn)化枝內(nèi)的 〈1. 5%平均距離（在具有高度進(jìn)化離群值的進(jìn)化枝中可能略微更高；即進(jìn)化枝7中的Ck/ Shanxi/2/2006)
[0032] 4自舉（基于1，000次連續(xù)自舉重復(fù)）在進(jìn)化枝限定結(jié)點(diǎn)處的>60%自舉值（得自 WH0/0IE/FA0 H5N1 進(jìn)化工作組 Emerg. Inf. Dis. 14,7(2008)的表 1)。
[0033] 關(guān)于每個進(jìn)化枝的原型株在下表中列出：
[0034]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于在治療或預(yù)防不同進(jìn)化枝的H5N1病毒感染的方法中使用的進(jìn)化枝1H5N1 病毒的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)包含與SEQ ID NO: 1的多肽序列具有至少 98%序列相同性的多肽序列，或由與SEQ ID NO: 1的多肽序列具有至少98%序列相同性的多 肽序列組成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)⑴包含與SEQ ID N0:1的 多肽序列具有至少98. 1%、優(yōu)選至少98. 2%、更優(yōu)選至少98. 3%、且最優(yōu)選至少98. 4%序列相 同性的多肽序列，或由與SEQ ID NO: 1的多肽序列具有至少98. 1%、優(yōu)選至少98. 2%、更優(yōu)選 至少98. 3%、且最優(yōu)選至少98. 4%序列相同性的多肽序列組成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)⑴具有氨基酸223N和 修飾328K+，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)的氨基酸位置編號指如SEQ ID NO:2中示例性給出的 氨基酸位置，并且其中所述修飾328K+意指在H5蛋白質(zhì)（1)的氨基酸位置328處插入第二 個賴氨酸（K+)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)具有氨基酸 94N。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)具有氨基酸 120N。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)具有氨基酸 155N。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)具有一個或 多個選自以下的氨基酸簇： a. aa93~95 ：GNF b. aal23-125 ：SDH c. aal28-130 ：SSG d. aal38-140 ：GSS e. aa226_228 :MDF f. aa270-272 ：EVE g. aa309-311 ：NKL〇
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)包括包含下 述的肽： i·SEQIDN0:5;SEQIDN0:6或SEQIDN0:7的氨基酸序列，或 ii. 任何肽，其與i)的多肽具有至少85%序列同源性，并且在標(biāo)準(zhǔn)血凝素抑制測定法中 包含血凝素抑制；或 iii. i)或ii)的多肽的任何部分,其包含i)或ii)的此類肽中的任一的至少8個連續(xù) 氨基酸，并且其中此類肽中的任一在標(biāo)準(zhǔn)血凝素抑制測定法中包含血凝素抑制；或 iv. i)、ii)或 iii)的任何肽，其具有氨基酸 36T、36K、83A、83T、83D、86A、86V、120S、 155S、156A、156T、189R、189K、212K、212R、212E、263A* 263Ti-;* v. i)、ii)、iii)或iv)的任何肽，其具有一個或多個選自以下的氨基酸簇： a. aa93~95 ：GNF b. aal23-125 ：SDH c. aal28-130 ：SSG d. aal38-140 ：GSS e. aa226_228 :MDF f. aa270-272 ：EVE g. aa309-311 ：NKL〇
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)包含SEQ ID NO :5的氨基酸序列。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述H5蛋白質(zhì)（1)通過桿狀病 毒表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)選在培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞中重組表達(dá)和/或產(chǎn)生。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒 選自進(jìn)化枝0H5N1病毒、進(jìn)化枝2H5N1病毒、進(jìn)化枝3H5N1病毒、進(jìn)化枝4H5N1病毒、進(jìn)化枝 5H5N1病毒、進(jìn)化枝6H5N1病毒、進(jìn)化枝7H5N1病毒、進(jìn)化枝8H5N1病毒和進(jìn)化枝9H5N1病 毒。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒 是進(jìn)化枝2. 2H5N1病毒或進(jìn)化枝2. 3H5N1病毒。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒 是進(jìn)化枝2. 2. 1H5N1病毒或進(jìn)化枝2. 3. 2H5N1病毒。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒 是北非或越南起源的H5N1病毒。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述北非起源的H5N1病毒是包含流感病 毒的H5蛋白質(zhì)⑵的H5N1病毒， 其中所述H5蛋白質(zhì)⑵具有 (&)氨基酸1130、126!1、145(-)、1561?、16(^、1671'和18謂，其中修飾145(-)意指冊的 氨基酸位置145是缺失的，或 (b) 氨基酸 87P、145L、172T、201E、206I、208K、254T、341G 和 421K，或 (c) 氨基酸 145L、172T 和 254V， 并且其中所述H5蛋白質(zhì)（2)的氨基酸位置編號指如SEQ ID N0:8中示例性給出的氨 基酸位置；或 其中所述H5蛋白質(zhì)（2)由這樣的氨基酸序列組成或包含這樣的氨基酸序列，所述氨 基酸序列與如SEQ ID NO:9-46中所示的任何一個序列至少95%、優(yōu)選至少96%、更優(yōu)選至少 97%、再更優(yōu)選至少98%、再更優(yōu)選至少99%、或特別優(yōu)選100%同源。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中包含H5蛋白質(zhì)（2)的所述不 同進(jìn)化枝的H5N1病毒具有： (&)氨基酸871^、1130、126!1、145(-)、1561?、16(^、1671'和18謂，或 (b)氨基酸87?、113隊1261?、1451^、160￥、1721\181!1、20巧、2061、2081(、2541\3416和 421K，或 (。）氨基酸871^、113隊1261?、1451^、1566、160￥、1721\181!1和 254￥， 和/或 其中所述H5蛋白質(zhì)（b)包括包含下述的肽： i. SEQ ID NO:9-46的氨基酸序列中的任何一個； ii. 任何肽，其與i)的多肽具有至少85%、優(yōu)選至少95%、甚至更優(yōu)選至少96%、甚至更 優(yōu)選至少97%、甚至更優(yōu)選至少98%、甚至更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%序列同源性，并且在 標(biāo)準(zhǔn)血凝素抑制測定法中包含血凝素抑制；或 iii. i)或ii)的多肽的任何部分，其包含i)或ii)的此類肽中的任一的至少34個連 續(xù)氨基酸，并且其中此類肽中的任一在標(biāo)準(zhǔn)血凝素抑制測定法中包含血凝素抑制， 和/或 其中所述H5蛋白質(zhì)（2)由連續(xù)氨基酸序列組成或包含連續(xù)氨基酸序列，所述連續(xù)氨基 酸序列與SEQ ID NO:9-46中所示的任何一個序列具有至少95%、甚至更優(yōu)選至少96%、甚至 更優(yōu)選至少97%、甚至更優(yōu)選至少98%、甚至更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%序列相同性。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，其中所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒 包括由這樣的氨基酸序列組成的H5蛋白質(zhì)（2)或包括包含這樣的氨基酸序列的H5蛋白質(zhì) (2)，所述氨基酸序列與如SEQ ID NO: 15或20中所示的任何一個序列至少95%、優(yōu)選至少 96%、更優(yōu)選至少97%、再更優(yōu)選至少98%、再更優(yōu)選至少99%、或特別優(yōu)選100%同源，并且其 中包含SEQ ID NO: 20中所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO: 20中所示的氨基酸序列組成的 此類H5蛋白質(zhì)（2)是特別更優(yōu)選的。
18. 用于在治療或預(yù)防下述的感染的方法中使用的根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的H5 蛋白質(zhì)（1): (A) 北非起源的亞進(jìn)化枝A H5N1病毒感染，即包含具有根據(jù)權(quán)利要求13或14的（a) 的氨基酸的H5蛋白質(zhì)（2)的H5N1病毒感染，或包含涉及SEQ ID N0:9-19、或42或43所示 序列中的任何一個的根據(jù)權(quán)利要求16或17的H5蛋白質(zhì)的H5N1病毒感染， 或 (B) 北非起源的亞進(jìn)化枝B H5N1病毒感染，即包含具有根據(jù)權(quán)利要求13或14的（b) 或（c)的氨基酸的H5蛋白質(zhì)的H5N1病毒感染，或包含涉及SEQ ID N0:20-41或44-46所 示序列中任何一個的根據(jù)權(quán)利要求16或17的H5蛋白質(zhì)的H5N1病毒感染。
19. 一種用于在根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法中使用的下述的組合： 權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)，和 滅活的新城疫病毒。
20. 權(quán)利要求19的組合，其中所述滅活的新城疫病毒是滅活的完整新城疫病毒粒子。
21. 權(quán)利要求19或20的組合，其中所述滅活的新城疫病毒是通過滅活新城疫病毒獲得 的滅活的新城疫病毒，所述新城疫病毒包含與SEQ ID NO: 51中所示的多核苷酸的RNA拷貝 具有至少70%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、再更優(yōu)選至少95%或特別是100%序列相同性 的RNA多核苷酸，其已被滅活。
22. 權(quán)利要求19-21中任一項(xiàng)的組合，其中所述新城疫病毒是新城疫LaSota毒株病毒。
23. 權(quán)利要求19-22中任一項(xiàng)的組合，其中所述新城疫病毒用選自下述的試劑滅活：甲 醛、ΒΕΙ、β-丙內(nèi)酯（BPL)及其組合。
24. -種用于在根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法中使用的疫苗，其包含： a. 權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的Η5蛋白質(zhì)（1)或權(quán)利要求19-23中任一項(xiàng)的組合，和 b. 藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑。
25. 根據(jù)權(quán)利要求24的疫苗，其中所述賦形劑是一種或多種佐劑。
26. 根據(jù)權(quán)利要求25的疫苗，其中所述佐劑是基于Emulsigen的佐劑。
27. 根據(jù)權(quán)利要求24-26中任一項(xiàng)的疫苗，其中所述疫苗包含一種或多種其它抗原。
28. 根據(jù)權(quán)利要求27的疫苗，其中所述一種或多種其它抗原是家禽病原體的抗原。
29. 根據(jù)權(quán)利要求28的疫苗，其中所述一種或多種其它抗原是流感病毒的H5、H7或 H9。
30. 根據(jù)權(quán)利要求29的疫苗，其中所述流感病毒的H5是與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的 H5N1病毒的H5蛋白質(zhì)。
31. 權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)或權(quán)利要求19-23中任一項(xiàng)的組合在制 備用于預(yù)防或治療由與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒引起的感染的藥物組合物中的 用途，所述藥物組合物優(yōu)選單次疫苗或單劑量疫苗，其中所述與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的 H5N1病毒優(yōu)選是根據(jù)權(quán)利要求11-18中任一項(xiàng)的所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒。
32. -種用于治療或預(yù)防由與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒引起的流感病毒感染 的方法，其中所述與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒優(yōu)選是根據(jù)權(quán)利要求11-18中任一 項(xiàng)的所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒，其中所述方法包括給需要此類治療的對象施用治療有 效量的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)或權(quán)利要求19-23中任一項(xiàng)的組合。
33. -種用于治療或預(yù)防由與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒引起的流感病毒感染 的方法，其中所述與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒優(yōu)選是根據(jù)權(quán)利要求11-18中任一 項(xiàng)的所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒，其中所述方法由給需要此類治療的對象施用治療有效 量的根據(jù)權(quán)利要求24-30中任一項(xiàng)的疫苗組成，或包括給需要此類治療的對象施用治療有 效量的根據(jù)權(quán)利要求24-30中任一項(xiàng)的疫苗。
34. 權(quán)利要求32或33的方法，其中所述施用是單次施用或單劑量施用。
35. -種試劑盒，其包含 a. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)、根據(jù)權(quán)利要求19-23中任一項(xiàng)的組 合、或根據(jù)權(quán)利要求24-30中任一項(xiàng)的疫苗；和 b. 指示a)的所述H5蛋白質(zhì)（1)、組合或疫苗用于治療或預(yù)防由與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化 枝的H5N1病毒引起的感染的用途的包裝說明書，其中所述與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1 病毒優(yōu)選是根據(jù)權(quán)利要求11-18中任一項(xiàng)的所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒。
36. 根據(jù)權(quán)利要求35的試劑盒，其中所述試劑盒包含家禽或哺乳動物病原體的至少一 種或多種其它抗原，其中所述其它抗原優(yōu)選是根據(jù)權(quán)利要求27-29中任一項(xiàng)的其它抗原。
37. 權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)、權(quán)利要求19-23中任一項(xiàng)的組合、根據(jù) 權(quán)利要求24-30中任一項(xiàng)的疫苗、或根據(jù)權(quán)利要求35或36的試劑盒，其用作單次疫苗或用 于單劑量疫苗接種中。
38. -種減少流感感染的發(fā)病率或嚴(yán)重性的方法，其包括施用組合物的步驟，所述組合 物選自權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)和權(quán)利要求19的組合。
39. 用于在減少對象中的病毒脫落的方法中使用的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白 質(zhì)（1)或權(quán)利要求19-23中任一項(xiàng)的組合，其中將所述H5蛋白質(zhì)（1)或所述組合施用于對 象，所述對象被與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒感染，或處于與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化 枝的H5N1病毒的病毒感染的危險中，并且其中所述與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒 優(yōu)選是根據(jù)權(quán)利要求11-18中任一項(xiàng)的所述不同進(jìn)化枝的H5N1病毒。
40.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的H5蛋白質(zhì)（1)或權(quán)利要求19-23中任一項(xiàng)的組合在制備 用于減少對象中的病毒脫落的藥物中的用途，所述對象被與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1 病毒感染，或處于與進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒的病毒感染的危險中，其中所述與 進(jìn)化枝1不同的進(jìn)化枝的H5N1病毒優(yōu)選是根據(jù)權(quán)利要求11-18中任一項(xiàng)的所述不同進(jìn)化 枝的H5N1病毒。
【文檔編號】A61K39/145GK104144699SQ201280045059
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月15日
【發(fā)明者】M·雷亞爾普-金特羅, P·C·岡薩雷斯-埃爾南德斯, E·沃恩 申請人:勃林格殷格翰動物保健有限公司, 勃林格殷格翰動物保健股份公司