用小分子治療與電壓門控鈉通道的α亞基(SCNxA)相關(guān)的疾病的制作方法
【專利摘要】提出了調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道α亞基(SCNxA)的表達和/或功能的小化合物。還提出了含有此類小分子的藥物組合物和它們在治療與SCNxA的表達相關(guān)的疾病和病癥中的用途。
【專利說明】用小分子治療與電壓門控鈉通道的α亞基(SCNxA)相關(guān)的疾病
發(fā)明領域
[0001]本申請要求2011年9月6日提交的美國臨時專利申請N0.61/531,361的優(yōu)先權(quán)，其通過引用整體并入本文。
[0002]本發(fā)明的實施方案包括調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道的α亞基和相關(guān)分子的表達和/或功能的小分子。
[0003]背景
[0004]提供使用藥劑在生物系統(tǒng)中低表達的蛋白質(zhì)是一種有前景的治療或潛在地治療多種疾病狀態(tài)的方法。醫(yī)療和制藥界已通過多種機理和手段著手這種類型的疾病形態(tài)的治療。在一種方法中，對應于特定靶蛋白的mRNA的天然反義轉(zhuǎn)錄物(NAT)已被選擇作為靶。寡核苷酸和/或修飾的寡核苷酸已被設計用來靶向NAT并且“上調(diào)”祀mRNA和蛋白的表達。因為要求或需要新和/或一線藥物治療的許多疾病狀態(tài)和疾患，所以對調(diào)節(jié)蛋白表達或低表達的新方法和藥物有明顯的需求。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)一般包括基因療法、反義技術(shù)、SiRNA技術(shù)以及使用小分子以調(diào)控蛋白表達。大多數(shù)反義技術(shù)和siRNA技術(shù)及相關(guān)專利或?qū)＠暾埳婕笆褂么祟悺八幬铩币跃徍?下調(diào))蛋白表達。治療靶通常為編碼特定蛋白或編碼翻譯成所關(guān)注蛋白的RNA的mRNA或DNA。下面提供來自專利文獻的各種公開的實例。
[0006]美國專利N0.5739119要求保護對蕈毒堿2型乙酰膽堿受體mRNA有特異性的反義寡核苷酸。施用導致記憶和學習的增加。
[0007]美國專利N0.5985663要`求保護白介素_15表達的反義抑制。
[0008]美國專利N0.6165712要求保護以轉(zhuǎn)錄方式調(diào)芐基因的表達和增加重組蛋白的產(chǎn)生的分子。該參考公開了蛋白的上調(diào)。調(diào)節(jié)分子可包括反義核酸。調(diào)節(jié)分子可結(jié)合到編碼致癌基因或腫瘤抑制基因的編碼序列的上游的啟動子區(qū)。
[0009]美國專利N0.6165990要求保護編碼反義核苷酸的表達載體的用途，所述反義核苷酸靶向與結(jié)腸癌-胃泌素基因相關(guān)的mRNA。
[0010]美國專利N0.6303374要求保護半胱天冬酶3表達的反義調(diào)節(jié)。反義核苷酸靶向編碼半胱天冬酶3的核酸用于治療阿爾茨海默病(Alzheimer’s)、帕金森病(Parkinson’s)、ALS 等。
[0011]美國專利N0.6376541要求保護通過“上調(diào)”前列腺素的產(chǎn)生而治療青光眼的方法，即通過用導致前列腺素上調(diào)的試劑治療患者-所述試劑包括白介素-1、轉(zhuǎn)化生長因子-β 1、轉(zhuǎn)化生長因子-β 2、血小板源性生長因子、左旋咪唑等。該專利公開了藥物上調(diào)小分子而不是蛋白的表達的用途的實例。
[0012]美國專利N0.6444464公開了靶向到編碼轉(zhuǎn)錄因子E2F的核酸的反義核苷酸。
[0013]美國專利N0.6617122要求保護多肽、表達此類多肽的核酸分子和治療具有低HDL的人的方法，所述方法包括向這種人施用ABCl多肽或其膽固醇調(diào)節(jié)片段。ABC-1多肽是野生型ABC-1或具有增加其穩(wěn)定性或其生物活性的突變。該專利也公開了調(diào)節(jié)(增加)所述蛋白的表達水平的候選化合物。公開了 ABC-1蛋白的cDNA的反義核苷酸。該參考公開了使用化合物抑制遏抑ABCl的轉(zhuǎn)錄因子預期將導致ABCl的上調(diào)并且因此升高HDL水平。該轉(zhuǎn)錄因子為蛋白。
[0014]美國專利N0.6710174公開了血管內(nèi)皮生長因子的反義抑制。
[0015]美國專利N0.7144999公開了靶向缺氧誘導因子I a (aHIF)表達的寡核苷酸以及用于治療與此類蛋白的表達相關(guān)的疾病的方法。該專利公開了與HIF-Ια的3’非翻譯區(qū)互補且與人疾病(非乳頭狀透明細胞腎癌)相關(guān)的aHIF的天然反義轉(zhuǎn)錄物的過表達。
[0016]美國專利N0.7148204公開了 BCL-X表達的反義調(diào)節(jié)劑。調(diào)節(jié)誘導細胞凋亡。
[0017]美國專利N0.7199107公開了驅(qū)動蛋白樣I (Kinesin-1ikel)表達的反義調(diào)節(jié)劑。
[0018]美國專利N0.7202357公開了用于調(diào)節(jié)?；鵆oA膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶_2的表達的反義化合物、組合物和方法。該化合物為靶向到編碼?；鵆oA膽固醇?；D(zhuǎn)移酶-2的核酸的反義寡核苷酸。
[0019]美國專利N0.7229976公開了靶向到編碼叉頭框OlA的核酸以調(diào)節(jié)其表達的反義
寡聚物。
[0020]美國專利N0.7235534公開了靶向編碼哺乳動物雌激素受體(ER) α和/或β的基因和mRNA并且調(diào)節(jié)受體響應的反義寡核苷酸。該治療提高斑塊穩(wěn)定性和血管愈合以及血管損傷后的內(nèi)皮細胞恢復。
[0021]美國專利N0.7285288公開了與Bcl-2核酸雜交的寡核苷酸，該基因產(chǎn)物已知與腫瘤發(fā)生蛋白Bcl-2相互作用 。
[0022]美國專利N0.7335764公開了?；鵦oA膽固醇?；D(zhuǎn)移酶_2表達的反義調(diào)節(jié)劑。
[0023]美國專利N0.7402574公開了用于治療癌癥的反義組合物和方法。反義組合物包含實質(zhì)上未荷電的具有核酸酶抗性主鏈的反義化合物，所述反義化合物能夠被受試者中的靶癌癥細胞攝取，含有10-40個核苷酸堿基并且具有有效地與加工的或預加工的具有特異序列IDN0:21的人SNAIL RNA轉(zhuǎn)錄物的區(qū)域雜交的堿基序列。
[0024]美國專利N0.7420050公開了抑制TGF-β的表達的反義分子。腎病。
[0025]美國專利N0.7425545公開了 C-反應蛋白表達的調(diào)節(jié)。
[0026]美國專利N0.7456154公開了針對人乙酰膽堿酯酶的反義寡核苷酸及其用途。
[0027]美國專利N0.7598227公開了載脂蛋白C-1II表達的調(diào)節(jié)。
[0028]美國專利N0.7662948公開了用于治療疼痛的針對VRl (辣椒素受體)的反義寡核苷酸。
[0029]美國專利N0.7674895公開了對VEGF和VEGF受體基因有特異性的siRNA。
[0030]美國專利N0.7687617公開了具有鎖定和非鎖定核苷酸的交替區(qū)段的寡核苷酸。
[0031]美國專利N0.7691995公開了小干擾RNA的體內(nèi)產(chǎn)生。
[0032]美國專利N0.7709546公開了靶向到染色體DNA的寡聚物對基因表達的調(diào)節(jié)。
[0033]美國專利N0.7709630公開了結(jié)締組織生長因子表達的反義調(diào)節(jié)。
[0034]美國專利N0.7723508公開了載脂蛋白(A)表達的調(diào)節(jié)。
[0035]美國專利N0.7732422公開了用于治療癌癥的TRPM-2反義療法。
[0036]美國專利N0.7732590公 開了二?；视王；D(zhuǎn)移酶2表達的調(diào)節(jié)。
[0037]美國專利N0.7737265公開了 HIF-1的RNAi調(diào)節(jié)及其治療用途。[0038]美國專利N0.7741305公開了 apo Al表達的調(diào)節(jié)。
[0039]US2003/0191075公開了使用修飾的寡核苷酸-親脂性寡核苷酸綴合物將基因療法(反義核苷酸)靶向到特定器官的方法。
[0040]US2004/0033480公開了白藜蘆醇(3，5，4’ -三羥基-反式-二苯乙烯)上調(diào)載脂蛋白Al的表達的用途。
[0041]US2004/0137423公開了用于鑒定通過增加ABCAl基因表達而調(diào)節(jié)動物的HDL水平的試劑的組合物和方法。
[0042]US2004/0175803公開了干擾素- α誘導的(上調(diào)的)基因。
[0043]本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)已知小分子引起對SCNA基因家族及其變體表達的調(diào)節(jié)的新用途。
[0044]概述
[0045]提供本概述以簡要地指出本發(fā)明的性質(zhì)和實質(zhì)。提交本概述應理解的是，其不會用來解釋或限制權(quán)利要求書的范圍或含義。
[0046]在一個實施方案中，本發(fā)明包括調(diào)節(jié)編碼電壓門控鈉通道的α亞基(SCNxA)的基因的表達的方法，所述方法包括向需要其的患者施用選自利尿劑、非典型抗精神病藥、鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、抗真菌劑、抗氧化劑、PDE5抑制劑、雌激素激動劑(留族或非甾族)、抗抑郁劑、質(zhì)子泵抑制劑、5HT1D受體激動劑、催眠藥、抗?jié)兯幬铩?ΗΤ4激動劑、GABA激動劑、抗組胺劑或同化類固醇的至少一種活性成分以用于治療SCNxA相關(guān)病癥或疾病。
[0047]在另一個實施方案中，本發(fā)明包括調(diào)節(jié)SCNxA基因的表達的方法，其包括施用選自以下的至少一種小分子:米那普侖(milnacipran)、托拉塞米(torsemide)、利培酮(risperidone)、吡那地爾(pinacidil)、貝尼地平(benidipine)、酮康唑(ketoconazole)、依布硒(ebselen)、他達拉非(tadalafil)、折侖諾(zeranol)、萘發(fā)扎酮(nefazadone)、洛美利嗪(1merizine)、淫羊藿苷(icariin)、奧美拉唑(omeprazole)、L-694, 247、尼群地平(nitrendipine)、尼美西泮(nimetazepam)、氨來咕諾(amlexanox)、莫沙必利(mosapride)、舍曲林(sertraline)或司坦唑醇(stanozolol)或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥。
[0048]在一個實施方案中，該方法包括針對具有SCNxA基因表達系統(tǒng)的生物系統(tǒng)篩選小分子的化合物文庫，其中所述篩選導致上調(diào)SCNxA表達產(chǎn)物和/或基因產(chǎn)物的表達的推定擊中(putative hit)。優(yōu)選的表達產(chǎn)物祀為SCN1A。
[0049]在另一個實施方案中，本發(fā)明包括干擾SCNxA RNA功能的方法，其中所述干擾導致SCNxA基因產(chǎn)物的上調(diào)，所述方法包括施用選自以下的小分子:米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、 貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥，其中待干擾的RNA功能包括至少一種重要功能，諸如，例如所述RNA的轉(zhuǎn)錄、RNA向蛋白翻譯位點的移位、自RNA翻譯蛋白、剪接RNA以產(chǎn)生一種或多種mRNA種類、以及可能由酶促RNA參與或促進的催化活性。
[0050]一個實施方案提供調(diào)節(jié)生物系統(tǒng)中SCNxA多核苷酸的功能和/或表達的方法，所述方法包括將所述系統(tǒng)與選自以下的小分子接觸:米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥，從而調(diào)節(jié)生物系統(tǒng)中SCNxA多核苷酸的功能和/或表達。
[0051]—個實施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細胞或組織中SCNxA多核苷酸的功能和/或表達的方法，所述方法包括將所述細胞或組織與選自以下的小分子接觸:米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥，從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細胞或組織中SCNxA多核苷酸的功能和/或表達。
[0052]在另一個實施方案中，選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥的小分子修飾SCNxA多核苷酸例如SEQ ID NO:1中列出的核苷酸，及其任何變體、等位基因、同系物、突變體、衍生物、片段及互補序列的表達。
[0053]另一個實施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細胞或組織中SCNlA多核苷酸的功能和/或表達的方法，所述方法包括將所述細胞或組織與選自以下的小分子接觸:米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥，從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細胞或組織中SCNlA多核苷酸的功能和/或表達。
[0054]在一個實施方案中，本發(fā)明包含藥物組合物，其包含選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥的小分子和藥學上可接受的賦形劑，其中所述組合物調(diào)節(jié)SCNxA多核苷酸的表達。
[0055]在另一個實施方案中，將小分子口服、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)施用給患者。
[0056]治療方案包括向患者施用小分子至少一次；然而，可修改該治療以包括經(jīng)一段時間的多個劑量。該治療可與一種或多種其它類型的療法聯(lián)合。
[0057]在另一個實施方案中，將小分子封裝在脂質(zhì)體中或連接于載體分子(例如膽固醇、TAT肽)或靶向的納米粒子和/或涂敷抗體的囊泡中，這取決于具體選擇的小分子的物理和/或化學性質(zhì)。
[0058]在一個實施方案中，本發(fā)明包括調(diào)節(jié)SCNxA家族成員及其變體的任何一個同種型的表達，其包括向需要其治療的患者施用藥學有效量的本文所述的至少一種化合物，其中所述調(diào)節(jié)導致與SCNxA基因或由其產(chǎn)生的表達產(chǎn)物中的至少一種相關(guān)的疾病的治療。
`[0059]其它方面在以下描述。
[0060]附圖簡述
[0061]序列表描述[0062]圖1顯示在用IuM濃度的小化合物治療后攜帶有Dravet相關(guān)突變的原代皮膚成纖維細胞(陰影條柱)和成年原代角化細胞(中空條柱)中的SCNlA mRNA水平的增加。
[0063]SEQ ID NO:1:智人電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)，轉(zhuǎn)錄物變體I，mRNA(NCBI登記號:ΝΜ_001165963)。
[0064]SEQ ID NO:2:智人電壓門控鈉通道II型α亞基(SCN2A)，轉(zhuǎn)錄物變體1，mRNA (NCBI 登記號:NM_021007.2)。
[0065]SEQ ID N0:3:智人電壓門控鈉通道III型α亞基(SCN3A)，轉(zhuǎn)錄物變體1，mRNA (NCBI 登記號:NM_006922.3)。
[0066]SEQ ID NO:4:智人電壓門控鈉通道IV型α亞基(SCN4A)，mRNA(NCBI登記號:NM_000334.4)。
[0067]SEQ ID NO:5:智人電壓門控鈉通道V型α亞基(SCN5A)，轉(zhuǎn)錄物變體l，mRNA(NCBI登記號:NM_198056.2)。
[0068]SEQ ID NO: 6:智人電壓門控鈉通道VII型a (SCN7A)，mRNA (NCBI登記號:NM_002976.3)
[0069]SEQ ID NO: 7:智人電壓門控鈉通道VIII型α亞基(SCN8A)，轉(zhuǎn)錄物變體1，mRNA (NCBI 登記號:NM_014191.2)
[0070]SEQ ID NO:8:智人電壓門控鈉通道IX型α亞基(SCN9A)，mRNA(NCBI登記號:NM_002977.3)
[0071]SEQ ID NO:9:智人電壓門控鈉通道X型α亞基(SCNlOA)，mRNA(NCBI登記號:NM_006514.2)
[0072]SEQ ID NO: 10:智人電壓門控鈉通道XI型α亞基(SCNllA)，mRNA(NCBI登記號:NM_014139.2)
[0073]SEQ ID NO: 11:智人電壓門控鈉通道α亞基SCN12A(SCN12A)mRNA (NCBI登記號:AF109737.1)。所有情況中提供的序列表實際上是RNS轉(zhuǎn)錄物的cDNA形式。
[0074]詳述
[0075]下面參考用于示例的實例應用來描述本發(fā)明的多個方面。應理解的是，列出許多具體細節(jié)、關(guān)聯(lián)和方法以提供對本發(fā)明的完全理解。然而，相關(guān)領域普通技術(shù)人員將容易認識到，可沒有一種或多種具體細節(jié)地實踐本發(fā)明或以其它方法實踐本發(fā)明。本發(fā)明不限于行為或事件的順序，因為一些行為可以不同順序進行和/或與其它行為或事件同時進行。而且，并非所有列舉的行為或事件都是實施根據(jù)本發(fā)明的方法所需的。
[0076]本文公開的所有基因、基因名稱和基因產(chǎn)物預期對應來自本文公開的組合物和方法可適用的任何物種的同系物。因此，這些術(shù)語包括但不限于來自人和小鼠的基因和基因產(chǎn)物。應理解的是，當公開來自具體物種的基因或基因產(chǎn)物時，`這一公開僅旨在示例，不應解釋為限制，除非在其存在的上下文清楚地指明。因此，例如，對于本文公開的基因，其在一些實施方案中涉及哺乳動物核酸和氨基酸序列，預期涵蓋來自其它動物的同源和/或直系同源基因和基因產(chǎn)物，所述其它動物包括但不限于其它哺乳動物、魚、兩棲類、爬行動物和鳥類。在實施方案中，基因或核酸序列是人的。
[0077]定義
[0078]本文所用的術(shù)語僅是為了描述具體實施方案的目的，并不旨在限制本發(fā)明。除非上下文另外清楚地指明，否則本文所用的單數(shù)形式〃一個/ 一種(a)〃、〃一個/ 一種(an)〃和〃該(the)"預期包括復數(shù)形式。而且，就詳述和/或權(quán)利要求書中使用術(shù)語〃包括(including) 〃、〃 包括(includes) 〃、〃 具有(having) 〃、〃 具有(has) 〃、〃 帶有(with) 〃 或其變化形式來說，這些術(shù)語預期以類似于術(shù)語〃包含(comprising) 〃的方式被包括。
[0079]術(shù)語〃約〃或〃大約〃是指在由本領域普通技術(shù)人員確定的特定數(shù)值的可接受誤差范圍內(nèi)，其將部分地取決于如何測量或確定該數(shù)值，即，測量系統(tǒng)的限度。例如，按照本領域中的實踐，〃約〃可表示在I個或多于I個標準差內(nèi)。可選地，〃約〃可表示給定數(shù)值的達20%、優(yōu)選地達10%、更優(yōu)選地達5%、仍更優(yōu)選地達1%的范圍?？蛇x地，尤其是有關(guān)生物系統(tǒng)或方法，術(shù)語可表示在數(shù)值的數(shù)量級內(nèi)，優(yōu)選地在5倍內(nèi)，更優(yōu)選地在2倍內(nèi)。當在本申請和權(quán)利要求書中描述特定數(shù)值時，除非另外指明，否則應假設術(shù)語"約"表示在特定數(shù)值可接受的誤差范圍內(nèi)。
[0080]本文所用的術(shù)語"mRNA"是指靶基因的目前已知的mRNA轉(zhuǎn)錄物和可能說明的任何進一步的轉(zhuǎn)錄物。
[0081]本文所用的〃 SCNxA〃和〃電壓門控鈉通道α亞基〃包括所有家族成員、突變體、等位基因、同種型、片段、種類(species)、編碼和非編碼序列、有義和反義多核苷酸鏈等。SCNxA 基因家族由 11 個已知成員(SCN1A、SCN2A、SCN3A、SCN4A、SCN5A、SCN7A(也稱為SCN6A)、SCN8A、SCN9A、SCN10A、SCNllA 和 SCN12A)組成。
[0082]本文所用的詞語‘電壓門控鈉通道I型α亞基’、SCN1A、FEB3、FEB3A、GEFSP2、HBSC1、NACl、Navl.1、SCNl、SME1、鈉通道蛋白腦I亞基α、鈉通道蛋白型I亞基α和電壓門控鈉通道亞基aNavl.1被認為在文獻中是相同的，且在本申請中可交換地使用。
[0083]術(shù)語“核苷酸”涵蓋 天然存在的核苷酸以及非天然存在的核苷酸。本領域技術(shù)人員應清楚的是，此前被認為是"非天然存在的"各種核苷酸后來已在自然界中發(fā)現(xiàn)。因此，"核苷酸"不僅包括已知的含嘌呤和嘧啶雜環(huán)的分子，還包括其雜環(huán)類似物和互變異構(gòu)體。其它類型的核苷酸的示例性實例是含腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶、嘌呤、黃嘌呤、二氨基嘌呤、8-氧代-N6-甲基腺嘌呤、7-脫氮雜黃嘌呤、7-脫氮雜鳥嘌呤、N4，N4-橋亞乙基胞嘧啶、郵，郵-橋亞乙基-2，6-二氨基嘌呤、5-甲基胞嘧啶、5-(C3-C6)_炔基胞嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、假異胞嘧啶、2-羥基-5-甲基-4-三唑并吡啶、異胞嘧啶、異鳥嘌呤、肌苷的分子以及Benner等，美國專利N0.5，432，272中描述的〃非天然存在的〃核苷酸。術(shù)語"核苷酸"預期涵蓋這些實例的每一種和所有以及其類似物和互變異構(gòu)體。尤其關(guān)注的核苷酸是包含腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶的那些，它們被認為是與在人的治療和診斷應用有關(guān)的天然存在的核苷酸。核苷酸包括天然2’ -脫氧糖和2’ -羥基糖，例如在 Kornberg 和 Baker, DNA Replication,第 2版.(Freeman, San Francisco, 1992)中描述的，以及它們的類似物。
[0084]本文所用的〃調(diào)節(jié)〃是指基因表達的增加(刺激)或減少(抑制)。術(shù)語“調(diào)節(jié)表達”進一步意指通過干擾RNA的表達或翻譯來增強或降低給定蛋白的表達。在增強的蛋白表達的情況下，藥物可阻滯導致蛋白產(chǎn)物的下調(diào)或低表達的抑制基因例如，抑癌基因或任何其它基因產(chǎn)物或突變基因的表達。在降低的蛋白表達的情況下，藥物可直接阻滯給定基因的表達或促成由該基因轉(zhuǎn)錄的RNA的加速分解。
[0085]術(shù)語〃變體〃當在多核苷酸序列的上下文中使用時，可涵蓋與野生型基因相關(guān)的多核苷酸序列。這一定義還可包括，例如，〃等位〃、〃剪接〃、〃物種〃或〃多態(tài)〃變體。剪接變體可與參考分子具有顯著的同一性，但由于在mRNA加工期間外顯子的可選剪接通常將具有更大數(shù)目或更小數(shù)目的多核苷酸。相應的多肽可具有另外的功能結(jié)構(gòu)域或缺少結(jié)構(gòu)域。物種變體是在物種之間不同的多核苷酸序列。本發(fā)明中特別有用的是野生型基因產(chǎn)物的變體。變體可來源于核酸序列中至少一種突變，并可產(chǎn)生改變的mRNA或產(chǎn)生結(jié)構(gòu)或功能可能改變或可能不改變的多肽。任何給定的天然或重組基因可具有O種、一種或多種等位基因形式。產(chǎn)生變體的常見突變改變通常歸因于核苷酸的天然缺失、添加或取代。在給定序列中，這些類型改變的每一種可單獨發(fā)生，或組合其它類型改變發(fā)生一次或多次。
[0086]所得的多肽通常將具有相對于彼此顯著的氨基酸同一性。多態(tài)變體是給定物種的個體之間特定基因的多核苷酸序列的變化。多態(tài)變體還可涵蓋"單核苷酸多態(tài)性"(SNP)或其中多核苷酸序列差異為一個堿基的單堿基突變。SNP的存在可指示，例如，具有疾病狀態(tài)的傾向的某一群體，所述傾向相比于耐受性為易感性。
[0087]〃衍生物〃多肽或肽是例如通過糖基化、聚乙二醇化、磷酸化、硫酸化、還原/烷基化、?；⒒瘜W偶合或適度福爾馬林處理修飾的多肽或肽。還可修飾衍生物以直接或間接包含可檢測的標記，包括但不限于，放射性同位素、熒光和酶標記。
[0088]本文所用的術(shù)語〃動物〃或〃患者〃意為包括，例如人、綿羊、麋鹿、鹿、長耳鹿、貂、哺乳動物、猴、馬、牛、豬、山羊、犬、貓、大鼠、小鼠、鳥類、雞、爬行動物、魚、昆蟲和蛛形綱動物。
[0089]〃哺乳動物〃涵蓋通常處于醫(yī)療護理下的溫血哺乳動物(例如，人和馴養(yǎng)的動物)。實例包括貓科動物、犬科動物、馬科動物、?？苿游锖腿耍约皟H僅人。
[0090]〃治療〃或〃處理〃涵蓋治療哺乳動物的疾病狀態(tài)，并包括:(a)防止疾病狀態(tài)在哺乳動物中發(fā)生，尤其是當所述哺乳動物傾向于疾病狀態(tài)但還未被診斷為患有其的時候；(b)抑制疾病狀態(tài)，例如`阻止其發(fā)展；和/或(C)緩解疾病狀態(tài)，例如導致疾病狀態(tài)消退，直到達到期望端點。治療還包括疾病癥狀的改善(例如，減輕疼痛或不適)，其中所述改善可或不可直接影響疾病(例如起因、傳染、表達等)。
[0091]〃神經(jīng)系統(tǒng)疾病或病癥〃是指神經(jīng)系統(tǒng)和/或視覺系統(tǒng)的任何疾病或病癥?！ㄉ窠?jīng)系統(tǒng)疾病或病癥"包括牽涉中樞神經(jīng)系統(tǒng)(腦、腦干和小腦)、外周神經(jīng)系統(tǒng)(包括顱神經(jīng))和自主神經(jīng)系統(tǒng)(其部分位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)兩者中)的疾病或病癥。神經(jīng)系統(tǒng)病癥的實例包括但不限于頭痛、木僵和昏迷、癡呆、癲癇發(fā)作、睡眠障礙、創(chuàng)傷、感染、腫瘤、神經(jīng)眼科學疾病、運動障礙、脫髓鞘病、脊髓病癥及外周神經(jīng)、肌肉和神經(jīng)肌肉接點的病癥。成癮和精神病包括但不限于雙相性精神障礙和精神分裂癥，而且還包括在神經(jīng)系統(tǒng)病癥的定義中。下面是可使用根據(jù)本發(fā)明的小分子、藥學組合物和方法治療的若干神經(jīng)系統(tǒng)病癥、癥狀、體征和綜合征的列表:獲得性癲癇樣失語癥；急性播散性腦脊髓炎；腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥；年齡相關(guān)的黃斑變性；胼胝體發(fā)育不全；失認癥；艾卡迪綜合征；亞力山大病；阿爾佩斯病；交替性偏癱；血管性癡呆；肌萎縮性側(cè)索硬化；無腦；Angelman綜合征；血管瘤??；缺氧癥；失語癥；失用癥；蛛網(wǎng)膜囊腫；蛛網(wǎng)膜炎；阿-基氏腦畸形；動靜脈畸形；阿斯佩各綜合征；共濟失調(diào)毛細血管擴張；注意力缺乏過動癥；孤獨癥；自主神經(jīng)失調(diào)；背痛；巴藤??；白塞??；貝耳麻痹；良性自發(fā)性瞼痙攣；良性局灶性肌萎縮；良性顱內(nèi)高壓；賓斯旺格氏??；瞼疫攣；Bloch Sulzberger綜合征；臂叢損傷；腦膿腫；腦損傷；腦腫瘤(包括多形性膠質(zhì)母細胞瘤)；脊髓腫瘤；布朗-塞卡爾綜合征；卡納萬??；腕管綜合癥；灼痛；中樞性疼痛綜合癥；腦橋中部髓鞘溶解；頭部障礙；腦動脈瘤；腦動脈硬化；腦萎縮?’大腦性巨人癥；大腦性麻痹；夏-馬-圖三氏??；化療引起的神經(jīng)病和神經(jīng)性疼痛；基氏腦畸形；舞蹈癥；慢性炎癥性脫髓鞘多神經(jīng)??；慢性痛；慢性局部疼痛綜合征；科-勒二氏綜合征；昏迷，包括持續(xù)性植物人狀態(tài)；先天性面癱；皮質(zhì)基底節(jié)變性；顱動脈炎；顱縫早閉；克雅氏??；積累性損傷錯亂；柯興綜合征；巨細胞包涵體?。痪藜毎《靖腥?；眼舞蹈-足舞蹈綜合征；丹_沃二氏綜合征；DaWSon??；德摩西埃氏綜合征；下臂叢麻痹；癡呆；皮肌炎；糖尿病性神經(jīng)??；彌漫性硬化癥；DraVettS、家族性自主神經(jīng)異常；書寫困難；閱讀困難；張力障礙；早期幼兒癲癇性腦?。豢盏熬C合征；腦炎；腦膨出；腦三叉神經(jīng)血管瘤病；癲癇；歐勃氏麻痹；特發(fā)性震顫；法布里氏??；法爾氏綜合征；昏厥；家族性痙攣麻痹癥；熱性癲癇發(fā)作；菲希爾綜合征；弗里德賴希氏共濟失調(diào)；額顳癡呆和其它"tau病變〃；高歇病；格斯特曼氏綜合征；巨細胞性動脈炎；巨細胞性包涵體??；球樣細胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良；格-巴二氏綜合征；HTLV-1相關(guān)的骨髓病；哈-斯二氏?。活^部損傷；頭痛；半面痙攣；遺傳性痙攣性截癱；多神經(jīng)炎型遺傳性共濟失調(diào)；耳部帶狀皰疹；帶狀皰疹；Hirayama綜合征；HIV相關(guān)的癡呆和神經(jīng)病(也是AIDS的神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn))；前腦無裂畸形；亨延頓氏舞蹈病和其它多谷氨酰胺重復序列病；積水性無腦畸形；腦積水；皮質(zhì)醇過多癥；低氧；免疫介導的腦脊髓炎；包涵體肌炎；色素失調(diào)癥；嬰兒植烷酸貯積病；嬰兒雷夫敘姆?。粙雰函d攣；炎性肌病；盧頁內(nèi)囊腫；盧頁內(nèi)高壓Joubert綜合征；卡恩斯-塞爾綜合征；Kennedy?。唤鹚共剂旨{綜合征；克-費二氏綜合征；克拉貝?。粠?韋二氏?。粠祠敳?；拉福拉??；Lambert-Eaton肌無力綜合征；LandaU-Kleffner綜合征；側(cè)髓(瓦倫伯格氏)綜合征；學習障礙；利氏??；Lennox-Gustaut綜合征；萊-萘二氏綜合征；腦白質(zhì)病變；路易體癡呆；無腦回癥；閉鎖綜合征；Lou Gehrig病(B卩，運動神經(jīng)元病或肌萎縮性側(cè)索硬化)；椎間盤退變；萊姆病-神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥；Machad0-J0S印h病；巨頭； 巨腦；梅_羅二氏綜合征；美尼爾癥；腦膜炎；門克斯??；異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良；頭小畸形；偏頭痛；Miller Fisher綜合征；小中風；線粒體肌病；默比厄斯氏綜合征；單肢肌萎縮；運動神經(jīng)元病；M0yam0ya??；粘多糖貯積癥；多發(fā)梗塞性癡呆；多灶性運動神經(jīng)?。欢喟l(fā)性硬化和其它脫髓鞘病癥；伴有體位性低血壓的多系統(tǒng)萎縮癥；肌肉萎縮癥；重癥肌無力；腦脫髓鞘彌散性硬化；嬰兒肌陣攣性腦??；肌陣攣；肌病；先天性肌強直；嗜睡病；神經(jīng)纖維瘤病；抗精神病藥的惡性綜合征；AIDS的神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)；狼瘡的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥；神經(jīng)性肌強直；神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥；神經(jīng)元移行異常；尼-皮二氏病；0’ Sullivan-McLeod綜合征；枕神經(jīng)痛；隱性脊柱神經(jīng)管閉合不全序列征；大田原綜合征；橄欖體腦橋小腦萎縮；眼陣攣-肌陣攣；視神經(jīng)炎；直立性低血壓；過度使用綜合征；感覺異常；神經(jīng)變性疾病或病癥(帕金森病、亨廷頓氏舞蹈病、阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、癡呆、多發(fā)性硬化和與神經(jīng)元細胞死亡相關(guān)的其它疾病和病癥)；先天性肌強直??；副腫瘤性疾??；突發(fā)性癲癇；帕_羅二氏綜合征；佩_梅氏病；周期性麻痹；外周神經(jīng)??；痛性神經(jīng)病和神經(jīng)性疼痛；持續(xù)性植物人狀態(tài)；全身性發(fā)育遲緩；光噴嚏反射；植烷酸貯積??；皮克氏?。簧窠?jīng)挾捏；垂體腫瘤；多肌炎；孔洞腦；小兒麻痹癥后期綜合癥；帶狀皰疹后神經(jīng)痛；感染后腦脊髓炎；體位性低血壓；帕-魏二氏綜合征；原發(fā)性脊髓側(cè)索硬化；朊病毒?。贿M行性面偏側(cè)萎縮癥；進行性多灶性白質(zhì)腦??；進行性硬化性灰質(zhì)萎縮；進行性核上性麻痹；假性腦瘤；Ramsay-Hunt綜合征(I型和II型);Rasmussen腦炎；反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良綜合征；雷夫敘姆病；重復性運動損傷；重復性壓力損傷；多動腿綜合征；逆轉(zhuǎn)錄病毒相關(guān)的脊髓?。籖ett綜合征；雷依氏綜合征；圣維特斯舞蹈??；桑德霍夫病；謝耳德氏??；腦裂；視隔發(fā)育不全；嬰兒嚴重肌陣攣性癲癇；搖晃嬰兒綜合癥；帶狀皰疹；希-德二氏綜合征；斯耶格倫氏綜合征；睡眠窒息；Soto綜合征；僵直；脊柱裂；脊髓損傷；脊髓腫瘤；脊髓性肌萎縮；僵人綜合征；中風；斯特奇-韋伯綜合征；亞急性硬化全腦炎；動脈硬化性皮層下腦病；西德納姆舞蹈；暈厥；脊髓空洞癥；遲發(fā)性運動障礙；泰-薩二氏??；顳動脈炎；脊髓拴系綜合征；肌強直性白內(nèi)障；胸部出口綜合征；三叉神經(jīng)痛；托德氏麻痹；圖雷特綜合癥；暫時性缺血性發(fā)作；傳染性海綿狀腦??；橫貫性脊髓炎；外傷性腦損傷；震顫；三叉神經(jīng)痛；熱帶痙攣性輕截癱；結(jié)節(jié)性腦硬化；血管性癡呆(多發(fā)梗塞性癡呆)；血管炎(包括顳動脈炎)；希-林二氏病；瓦倫伯格氏綜合征；韋-霍二氏?。豁f斯特綜合征；鞭抽式損傷(whiplash);威廉斯綜合征；Wildon病和澤韋格綜合征。
[0092]心血管疾病或病癥包括可導致缺血或由心臟再灌注引起的那些病癥。實例包括但不限于動脈硬化、冠狀動脈病、肉芽腫性心肌炎、慢性心肌炎(非肉芽腫性)、原發(fā)性肥大型心肌病、外周動脈病(PAD)、周圍血管疾病、靜脈血栓栓塞、肺栓塞、中風、心絞痛、心肌梗塞、心搏停止造成的心血管組織損傷、心臟旁路造成的心血管組織損傷、心源性休克和本領域技術(shù)人員已知的相關(guān)疾患或包括心臟或脈管系統(tǒng)的功能障礙或組織損傷的相關(guān)疾患，尤其是但不限于，SCNlA活化相關(guān)的組織損傷。CVS疾病包括但不限于，動脈硬化、肉芽腫性心肌炎、心肌梗塞、瓣膜性心臟病繼發(fā)性心肌纖維化、無梗塞的心肌纖維化、原發(fā)性肥大性心肌病和慢性心肌炎(非肉芽腫性)。
[0093]與鈉通道功能障礙相關(guān)的疾病或病癥的實例包括但不限于惡性高熱、肌無力、周期性共濟失調(diào)Episodic ataxia)、神經(jīng)病性和炎癥性疼痛、阿爾茨海默氏病、帕金森病、精神分裂癥、過度驚駭、SME1、FEB3、家族性偏癱型偏頭痛3型、肌強直例如低血糖和血糖過低的周期性癱瘓、先天性副肌強直和鉀加重性肌強直以及心律失常例如長QT綜合征。 [0094]靶:在一個實施方案中，用于調(diào)節(jié)的靶包括電壓門控鈉通道α亞基家族成員(SCNxA)的核酸序列，包括但不限于與SCNxA轉(zhuǎn)錄和/或翻譯和/或調(diào)節(jié)相關(guān)的有義和/或反義的非編碼和/或編碼序列以及蛋白序列。優(yōu)選的靶為SCNlA通道。
[0095]電壓敏感性離子通道是為細胞興奮性和通過離子生成性膜電位傳輸信息的能力提供基礎的一類跨膜蛋白。電壓門控鈉通道在大多數(shù)電可興奮性細胞(包括神經(jīng)元、心細胞和肌肉)中負責動作電位的產(chǎn)生和傳導。電活性通過膜的去極化觸發(fā)，其打開對鈉離子具有高選擇性的跨膜通道。然后通過電化學梯度細胞內(nèi)驅(qū)使離子穿過開放通道。盡管不同組織中基于鈉的動作電位是類似的，但是電生理學研究已證明，存在多個結(jié)構(gòu)上且功能上不同的鈉通道，并且編碼鈉通道的很多基因已被克隆。SCNlA基因?qū)儆陔妷洪T控鈉通道的基因家族(SCNxA家族)。
[0096]電壓門控鈉通道在神經(jīng)細胞和肌肉中動作電位的產(chǎn)生中起重要的作用。α亞基(SCNxA)是通道的主要組分，并且當在細胞中體外表達時將足以產(chǎn)生離子流。然而，實質(zhì)上電壓門控鈉通道包括兩個額外的調(diào)控β亞基。這些亞基的作用將用于修改鈉通道定位和密度以及動力學性質(zhì)，主要通過影響鈉電流的失活來進行。SCNlB基因中的突變與GEFS+、Brugada綜合征和非特異性心臟傳導缺陷相關(guān)。SCN3B中的突變也與Brugada綜合征相關(guān)，而SCN4B中的突變導致長QT綜合征-10。[0097]在一個實施方案中，選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥的小分子用于預防或治療與SCNxA家族成員相關(guān)的疾病或病癥。示例性的可用藥物和/或用由使用化合物獲得的干細胞再生的細胞/組織治療的電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)介導的疾病和病癥包括:神經(jīng)系統(tǒng)疾病或病癥、抽搐、疼痛(包括慢性疼痛)、涉及鈉通道功能障礙的受損電興奮性、與鈉通道功能障礙相關(guān)的疾病或病癥、與電壓門控鈉通道α亞基活性失調(diào)相關(guān)的疾病或病癥(例如，麻痹、高鉀性周期性麻痹、先天性副肌強直、鉀加重性肌強直、長Q-T綜合征3、運動終板疾病、共濟失調(diào)等)、由于腸神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙引起的胃腸道疾病(例如，大腸炎、回腸炎、炎癥性腸綜合征等)、心血管疾病或病癥(例如,高血壓、充血性心力衰竭等)；涉及交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)支配的泌尿生殖道的疾病或病癥(例如，良性前列腺增生、陽痿)；與神經(jīng)肌肉系統(tǒng)相關(guān)的疾病或病癥(例如，肌營養(yǎng)不良癥、多發(fā)性硬化、癲癇、自閉癥、偏頭痛(例如，散發(fā)性和家族性偏癱型偏頭痛等)、小兒重度肌陣攣型癲癇(SMEI)或Dravet綜合征、全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥(GEFS+)等)和SCNlA相關(guān)性癲癇病癥。
[0098]在一個實施方案中，所述小分子上調(diào)SCNlA的多核苷酸。SCNlA靶包含SCNlA的變體；SCN1A的突變體，包括SNP ；SCNlA的非編碼序列；等位基因、同種型、片段和類似物。優(yōu)選所述小分子選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥。
[0099]根據(jù)本發(fā)明的實施方案，靶核酸分子不限于僅SCNlA多核苷酸，還延伸到SCNlA (例如SCNxA家族)的任何同種型、受體、同系物、非編碼區(qū)和類似物。
[0100]在另一個實施方案中，小分子調(diào)節(jié)SCNlA靶，SCNlA靶包括但不限于其變體、等位基因、同系物、突變體、衍生物、片段和互補序列。
[0101]在一個實施方案中，所述小`分子調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)的表達并且調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA) (SEQ ID NO:1)的表達和/或功能。
[0102]可從DNA的相同基因組區(qū)域產(chǎn)生可選RNA轉(zhuǎn)錄物。這些可選轉(zhuǎn)錄物通常稱為〃剪接變體〃。更具體地，〃前體mRNA變體〃是從基因組DNA產(chǎn)生的包含內(nèi)含子序列和外顯子序列兩者的轉(zhuǎn)錄物。
[0103]在剪接期間切除一個或多個外顯子或內(nèi)含子區(qū)域或其部分后，前體mRNA變體產(chǎn)生更小的"mRNA變體〃。這些mRNA變體還稱為〃可選剪接變體〃。如果不進行前體mRNA變體的剪接，則前體mRNA變體與mRNA變體相同。
[0104]變體可經(jīng)由使用可選信號產(chǎn)生以起始或終止轉(zhuǎn)錄。前體mRNA和mRNA可具有多于一個起始密碼子或終止密碼子。來源于使用可選起始密碼子的前體mRNA或mRNA的變體稱為該前體mRNA或mRNA的"可選起始變體"。使用可選終止密碼子的那些轉(zhuǎn)錄物稱為該前體mRNA或mRNA的〃可選終止變體"。一種特定類型的可選終止變體是〃聚腺苷酸變體"，其中產(chǎn)生的多個轉(zhuǎn)錄物由"聚腺苷酸終止信號"之一被轉(zhuǎn)錄機制可選選擇所致，從而產(chǎn)生在獨特聚腺苷酸位點終止的轉(zhuǎn)錄物。在本發(fā)明范疇中，本文所述的變體類型也是靶核酸的實施方案。
[0105]盡管本文列出了某些示例性靶區(qū)段的具體序列，但是本領域技術(shù)人員將理解這些用于闡釋和描述于本發(fā)明范圍中的具體實施方案。本領域普通技術(shù)人員考慮到本公開內(nèi)容可容易地鑒定另外的靶區(qū)段。
[0106]在進一步的實施方案中，本文鑒定的"優(yōu)選的靶區(qū)段"可用于篩選調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)多核苷酸表達的另外的化合物?！ㄕ{(diào)節(jié)劑〃是減少或增加編碼電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)或其相應蛋白的核酸分子表達的那些化合物。篩選方法包括以下步驟:將編碼電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)或其相應蛋白的有義或天然反義多核苷酸的核酸分子的優(yōu)選的靶區(qū)段與一種或多種候選調(diào)節(jié)劑接觸，并選擇減少或增加編碼電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)多核苷酸或其相應蛋白的核酸分子的表達的一種或多種候選調(diào)節(jié)劑。顯示一種或多種候選調(diào)節(jié)劑能夠調(diào)節(jié)(例如，減少或增加)編碼電壓門控鈉通道α亞基(SCNxA)多核苷酸的核酸分子的表達后，隨后調(diào)節(jié)劑可用于電壓門控鈉通道α亞基(SCNxA)多核苷酸功能的進一步研究性研究，或用作根據(jù)本發(fā)明的研究劑、診斷劑或治療劑。
[0107]根據(jù)本發(fā)明使用的小分子可方便和常規(guī)地通過公知的合成方法制備。也可采用用于此類合成的任何其它手段；小分子的實際合成完全在本領域普通技術(shù)人員的才能范圍內(nèi)或此類分子可獲自商業(yè)供應商或供貨商。優(yōu)選的在本發(fā)明方法中使用的分子的每一種均為已知的藥物產(chǎn)品并且可購自或獲自活性藥學成分制造商。此外，此類藥物已公布合成方法并且合成化學領域普通技術(shù)人員可經(jīng)由已知路徑合成此類藥物或者本領域普通技術(shù)人員可設計新的合成方法。這些藥物及其物理和鹽形式可通過標準化學手段制備前藥來修飾。此類前藥包括酯和/或其它化學衍生物和/或修飾，其中在施用時，劑型(藥物產(chǎn)品)中的前藥分裂成已知的活性藥學成分。轉(zhuǎn)而，這些藥物可被代謝成已知的活性代謝產(chǎn)物并且此類代謝產(chǎn)物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明還包括藥物產(chǎn)品的對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體、包括鈉鹽和鉀鹽的各種鹽形式以及此類產(chǎn)品的水合物和溶劑化物。本發(fā)明還包括呈任何適合劑型的非晶形式的每種藥物產(chǎn)品或其鹽的用途。如果特定藥物產(chǎn)品含有胺部分，則本發(fā)明還包括此類產(chǎn)品的酸式鹽，其中抗衡離子選自鹵鹽諸如氯化物或溴化物等。重結(jié)晶方法及其它已知純化方法可用來制備此類活性藥學成分的晶體形式。
[0108]小分子至宿主細胞或生物體的轉(zhuǎn)移和對其對RNA或蛋白上調(diào)或下調(diào)的作用的確定可通過本領域公知的數(shù)種方法來評估。例如，選擇SCNlA成纖維細胞和/或角化細胞或所需的其它細胞類型并使它們生長，用于本文的特異性測定。實驗前一天，將細胞以約4Χ IO4個/孔的密度鋪板到24孔板中的生長培養(yǎng)基中并且在37°C和5%C02下孵育過夜。第二天，將24孔板中的培養(yǎng)基更換為新鮮生長培養(yǎng)基(lml/孔)并且將小化合物給予細胞。在DMSO中制備ImM濃度的化合物儲液。實驗時將ImM儲液在生長培養(yǎng)基中稀釋至IuM的濃度。將DMSO的1:1000稀釋液用于對照孔。在37°C和5%C02孵育24_48h后，去除培養(yǎng)基且利用來自Promega的SV總RNA分離系統(tǒng)(目錄號Z3105)按照制造商的說明書從細胞提取RNA。將600ng經(jīng)純化的總RNA加入到利用來自Invitrogen的SuperScript VILO cDNA合成試劑盒(目錄號11754-250)如制造商 的方案所述進行的逆轉(zhuǎn)錄反應中。利用ABI Taqman基因表達混合物(目錄號4369510)和由ABI (對于人SCNlA的測定Hs00374696_ml、Hs00897350_ml或Hs00897341_ml)設計的引物/探針，通過實時PCR用得自這一逆轉(zhuǎn)錄反應的cDNA來監(jiān)測基因表達。使用StepOne Plus Real Time PCR系統(tǒng)(Applied Biosystems)使用以下PCR循環(huán):50°C持續(xù)2min、95°C持續(xù)10min、40個循環(huán)的(95°C持續(xù)15秒、60°C持續(xù)Imin)。對于18S的測定由ABI (目錄號4319413E)制備。用化合物治療后的基因表達倍數(shù)變化基于經(jīng)化合物治療的和媒介物治療的樣品之間18S-標準化的dCt值的差異來計算。
[0109]添加小分子后RNA的表達還可通過測量酶促活性或報告蛋白活性來檢測。例如，來自基因的編碼區(qū)域可用于通過將基因和其聚(腺苷酸)信號之間的報告基因編碼區(qū)域插入到自我復制質(zhì)粒中來構(gòu)建模型對照基因，從而總是以相同水平表達該基因和報道基因。單獨小分子的效果將通過觀察報告基因的調(diào)節(jié)來測定?？捎糜诒景l(fā)明方法的報告基因包括乙酰羥酸合酶(AHAS)、堿性磷酸酶(AP)、β半乳糖苷酶(LacZ)、β葡糖醛酸酶(GUS)、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、綠色熒光蛋白(GFP)、紅色熒光蛋白(RFP)、黃色熒光蛋白(YFP)、青色熒光蛋白(CFP)、辣根過氧化物酶(HRP)、熒光素酶(Luc)、胭脂堿合酶(NOS)、章魚堿合酶(OCS)及其衍生物。賦予對氨芐西林、博來霉素、氯霉素、慶大霉素、潮霉素、卡那霉素、林可霉素、甲氨蝶呤、草丁膦、嘌呤霉素和四環(huán)素抗性的多種選擇標記是可得的。確定報告基因的調(diào)節(jié)的方法是本領域公知的，包括但不限于，熒光方法(例如，熒光光譜學、熒光激活細胞分選術(shù)(FACS)、熒光顯微鏡檢術(shù))、抗生素抗性確定。
[0110]SCNxA蛋白和mRNA表達可使用本領域技術(shù)人員已知的和本文他處描述的方法來測定。例如，可使用諸如免疫組織化學的測定來評價蛋白水平。為了達到這個目的，將使用適合的生長條件使細胞在24孔板中生長。在添加小化合物后48小時，除去培養(yǎng)基并且將細胞用不含鈣和鎂的杜爾貝科氏磷酸鹽緩沖的鹽水(Dulbecco’ s phosphate-bufferedsaline) (PBS) (Mediatech目錄號21-031-CV)洗滌3次。然后棄去PBS，并且在_20°C使用300 μ 1100%甲醇將細胞固定于24孔板中15min。除去甲醇并用PBS洗滌后，在21°C將細胞與3%過氧化氫(Fisher Chemical目錄號H325-100)孵育5min。將細胞用PBS洗滌3次(每次洗滌5min)，然后在21 °C與300 μ I在PBS中0.1%濃度的牛血清白蛋白(BSA) (Sigma目錄號A-9647)孵育30min。將細胞用PBS洗滌三次(每次洗滌5min)，然后在21°C與300 μ I抗生物素蛋白溶液(Vector La`boratories目錄號SP-2001)孵育30min。將細胞用PBS短暫地漂洗三次，然后在21 °C與生物素溶液(Vector Laboratories目錄號SP-2001)孵育30min。將細胞用PBS洗滌三次，然后在4°C與300 μ I/孔以1:250稀釋于PBS/BSA0.1%中的對應于大鼠Scnla(Abeam目錄號ab24820 ;已知識別大鼠Scnla、人SCNlA和小鼠Scnla)的C端氨基酸1491-1508的抗合成肽(EEQKKYYNAMKKLGSKKP)的兔抗體孵育過夜。在21°C平衡板5min后，將細胞用PBS洗滌三次(每次洗滌5min)，然后在21°C與以1:200以稀釋于PBS/BSA0.1%中的山羊抗兔抗體孵育30min。將細胞用PBS洗滌三次(每次洗滌5min)，然后與300 μ I Vectastain Elite ABC 試劑 A+B 溶液(Vector Laboratories 目錄號 PK-6101)孵育30min ;在21 °C制備Vectastain Elite ABC試劑A+B溶液，30min后通過將2滴試劑A和2滴試劑B相繼添加并混合至5ml PBS與細胞一起孵育。在21°C將細胞用PBS洗滌3次(每次洗漆5min),然后與二氨基聯(lián)苯胺(DAB)過氧化物酶底物溶液(Vector Laboratories目錄號SK-4105)孵育直至細胞被染色^fDAB過氧化物酶底物溶液復原，之后其通過將ImlImmPACT?DAB Diluent 與 30 μ I ImmPACT?DAB Chromogen 濃縮液混合而加入至細胞中。此時，將細胞用PBS短暫地洗滌三次并且將300 μ I PBS留在每個孔中。使用配置有與DellLatitude D630膝上型電腦的屏幕上的Nikon Digital-Sight裝置稱接的Nikon DS-RiI照相機的倒置Nikon Eclipse TSlOO顯微鏡，在24孔板的各孔內(nèi)直接分析細胞的染色。使用由Nikon照相機提供的軟件NIS-Elements D3.0制得各孔的照片。
[0111]此外，SCNlA蛋白可通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)來定量。為了達到這個目的，將使用適合的生長條件使細胞在24孔板中生長。在添加小化合物后48小時，除去培養(yǎng)基并且將細胞用不含鈣和鎂的杜爾貝科氏磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS) (Mediatech目錄號21-031-CV)洗滌3次。然后棄去PBS，并且在-20°C使用100 μ 1100%甲醇將細胞固定于24孔板中15min。除去甲醇并用PBS洗滌后，在21°C將細胞與3%過氧化氫(Fisher Chemical目錄號H325-100)孵育5min。將細胞用PBS洗滌3次(每次洗滌5min)，然后在21°C與100 μ I PBS中的0.1%濃度的牛血清白蛋白(BSA) (Sigma目錄號A-9647)孵育30min。將細胞用PBS洗滌三次(每次洗滌5min)，然后在21 °C用300 μ I抗生物素蛋白溶液(VectorLaboratories目錄號SP-2001)孵育30min。將細胞用PBS短暫地漂洗三次，然后在21°C與生物素溶液(Vector Laboratories目錄號SP-2001)孵育30min。將細胞用PBS洗滌三次，然后在4°C與100μ I/孔以1:250稀釋于？85作540.1%中的對應于大鼠Scnla (Abeam目錄號ab24820 ;已知至少識別大鼠Scnla、人SCNlA和小鼠Scnla)的C端氨基酸1491-1508的抗合成肽(EEQKKYYNAMKKLGSKKP)的兔抗體孵育過夜。在21°C平衡板5min后，將細胞用PBS洗滌三次(每次洗滌5min)，然后在21°C與以1:200以稀釋于PBS/BSA0.1%中的山羊抗兔抗體孵育30min。將細胞用PBS洗滌三次(每次洗滌5min)，然后與300 μ I VectastainElite ABC試劑 A+B 溶液(Vector Laboratories 目錄號 PK-6101)孵育 30min制備Vectastain Elite ABC試劑A+B溶液，30min后通過將2滴試劑A和2滴試劑B相繼添加并混合至5ml PBS與細胞一起孵育。在21°C將細胞用PBS洗滌3次(每次洗滌5min)，然后與四甲基聯(lián)苯胺(TMB)過氧化物酶底物溶液(Thermo Scientific目錄號N301)孵育直至細胞被染色。在上清液變成藍色后，將其轉(zhuǎn)移至新96孔ELISA板(Greiner bio one目錄號 65121)并加入 IM 硫酸。使用 Multiskan Spectrum 分光光度計(Thermo Scientific)在450nm對吸光度讀數(shù)。 背景信號，即用作為一抗的兔抗-小鼠IgG (Abeam目錄號ab6709)染色的孔的讀數(shù)，從所有SCNlA和肌動蛋白讀數(shù)扣除。使用來自Abcam的兔抗肌動蛋白抗體(目錄號ablSOl)。然后對于每種條件將SCNlA信號對肌動蛋白信號標準化并且將比較每個實驗變型的標準化值。
[0112]在實施方案中，利用本發(fā)明小分子治療的樣品(例如，體內(nèi)或體外的細胞或組織)中的SCNlA表達(例如，mRNA或蛋白)通過與對照樣品中的SCNlA表達比較來評價。例如，蛋白或核酸的表達可利用本領域技術(shù)人員已知的方法與模擬處理或未處理樣品中的蛋白或核酸的表達比較?？蛇x地，取決于期望的信息，可與以對照非活性分子處理的樣品進行比較。在另一實施方案中，處理樣品與未處理樣品中SCNlA蛋白或核酸的表達差異可與處理樣品與未處理樣品中不同核酸(包括研究者認為適當?shù)娜魏螛藴?，例如，看家基?的表達差異比較。
[0113]觀察到的差異可如期望地表示，例如，以比率或分數(shù)的形式，用于與對照比較。在實施方案中，以本發(fā)明反義寡核苷酸處理的樣品中SCNlA mRNA或蛋白的水平相對于未處理樣品或以對照核酸處理的樣品增加或減少約1.25倍至約10倍或更多。在實施方案中，SCNlAmRNA或蛋白的水平增加或減少至少約1.25倍、至少約1.3倍、至少約1.4倍、至少約1.5倍、至少約1.6倍、至少約1.7倍、至少約1.8倍、至少約2倍、至少約2.5倍、至少約3倍、至少約3.5倍、至少約4倍、至少約4.5倍、至少約5倍、至少約5.5倍、至少約6倍、至少約6.5倍、至少約7倍、至少約7.5倍、至少約8倍、至少約8.5倍、至少約9倍、至少約9.5倍、或至少約10倍或更多。
[0114]除SCNlA蛋白或mRNA表達的變化之外，可定量Navl.1通道的功能的變化。例如，可在解離的海馬中間神經(jīng)元中測量通過用小化合物上調(diào)SCNlA而誘導的鈉流幅值的變化。為了達到這個目的，將通過在持續(xù)用95%02和5%C02充氧的緩沖液中用鏈霉蛋白酶和接著用嗜熱菌蛋白酶消化，從11至16天齡大鼠中解離海馬GAD陽性雙極細胞(GABAergic中間神經(jīng)元)。將經(jīng)解離的細胞鋪板于組織培養(yǎng)皿中并且用選擇的小化合物處理24h，之后將進行電生理記錄。使用全細胞膜片鉗技術(shù)用EPC-9膜片鉗放大器(HEKA)記錄電流。使用P-97型Flaming-Brown微量吸管拉長器(Sutter Instrument)制備膜片吸量管。使用PULSE程序(7.5版；HEKA Elektronik)進行刺激和數(shù)據(jù)獲取。對于電壓鉗實驗，使用蠕動泵將含有以 mm 計的 19.1NaCl,19.1 四乙基氯化銨、0.95BaCl2、1.90MgCl2、52.4CsCl、0.1CdCl2'
0.95CaCl2、9.52HEPES、117葡萄糖(pH7.35)的灌注緩沖液恒定地灌注到細胞上。膜片吸量管將含有以 mm 計的 157N-甲基-d_ 葡糖胺、126HC1、0.90NaCl、3.60MgCl2、9.0IEGTA,
1.80ATP-Na2、9.01HEPES、4.50 肌酸-磷酸鹽(pH7.2)。將細胞保持在-1OOmV 并且從 _60mV至-15mV的去極化步驟以5mV增量施加。確定最大電流密度并在經(jīng)處理的和未經(jīng)處理的神經(jīng)元之間進行比較。 [0115]此外，可評估通過海馬中間神經(jīng)元中的SCNlA上調(diào)而誘導的鈉流特征的變化。將通過在持續(xù)用95%02和5%C02充氧的緩沖液中用鏈霉蛋白酶和接著用嗜熱菌蛋白酶消化，從11至16天齡大鼠中解離海馬GAD陽性雙極細胞(GABAergic中間神經(jīng)元)。將經(jīng)解離的細胞鋪板于組織培養(yǎng)皿中并且用選擇的小化合物處理24h，之后將進行電生理記錄。使用全細胞膜片鉗技術(shù)用EPC-9膜片鉗放大器(HEKA)記錄電流。使用P-97型Flaming-Brown微量吸管拉長器(Sutter Instrument)制備膜片吸量管。使用F1ULSE程序(7.5版；HEKA Elektronik)進行刺激和數(shù)據(jù)獲取。對于電壓鉗實驗，使用蠕動泵將含有以mm計的19.1NaCl,19.1四乙基氯化銨、0.95BaCl2、l.90MgCl2、52.4CsCl、0.1CdCl2,0.95CaCl2、9.52HEPESU17 葡萄糖(pH7.35)的灌注緩沖液恒定地灌注到細胞上。膜片吸量管將含有以mm計的157N-甲基-d-葡糖胺、126HC1、0.90NaCl、3.60MgCl2、9.01EGTAU.80ATP_Na2、9.01HEPES、4.50 肌酸-磷酸鹽(pH7.2)。將細胞保持在-1OOmV并且從_60mV至-15mV的去極化步驟以5mV增量施加。根據(jù)g=INa/(V_ENa)由電流/電壓關(guān)系計算激活曲線(電導/電壓關(guān)系)，其中INa表示在電勢V測量的峰鈉流，且ENa表示平衡電勢。將波茲曼函數(shù)擬合成標準化的激活曲線和失活曲線并且將確定曲線特征。失活時間常數(shù)將通過用單指數(shù)函數(shù)擬合電流衰減來評價。將激活和失活特性在經(jīng)處理的和未經(jīng)處理的神經(jīng)元之間比較以確定治療是否改變電流特征。對于電流鉗實驗，將細胞保持在_80mV，并且在以IOpA的增量施加的800毫秒脈沖后記錄它們的放電模式。電極緩沖液將含有以mm計的135葡萄糖酸鉀、20KCl、2MgCl2、2ATPNa2、0.3GTP_Na 和 10HEPES、0.2EGTA (pH7.3)。灌注緩沖液將含有以 mm 計的 140NaCl、5KCl、2CaC12、lMgC12、10HEPES和10葡萄糖，pH用NaOH調(diào)節(jié)至7.4。將測量輸入-輸出關(guān)系(動作電勢數(shù)量/所注入PA)、動作電勢半寬度、峰值幅值和峰值衰減并且在經(jīng)處理的和未經(jīng)處理的海馬抑制性中間神經(jīng)元之間比較。使用與如上文對于全細胞膜片記錄所述相同的溶液和方案在內(nèi)面向外式膜片構(gòu)型(outside/out patch configuration)中進行單通道電流記錄。
[0116]通過用小化合物處理而誘導的SCNlA上調(diào)也可影響細胞內(nèi)鈉水平?？稍谙铝袑嶒炛性u估此類變化。使細胞在96孔板中生長并且將不同濃度的小化合物給予細胞。48h后，將細胞用 Locke 緩沖液(8.6mM HEPES、5.6mM KCl、154mM NaCl、5.6mM葡萄糖、1.0mM MgCl2,
2.3mM CaCl2、0.0OOlmM甘氨酸(pH7.4))洗滌。在將染料加載到細胞內(nèi)之前測量熒光本底。通過在37°C利用10 μ M SBF1-AM(與Na+結(jié)合的染料)，0.04%Pluronic F-127分子探針，OR, USA)和2.5mM在Locke緩沖液中的丙磺舒(50 μ I/孔)孵育細胞與染料lh，從而將染料加載到細胞內(nèi)。此時，將細胞用2.5mM在Locke緩沖液中的丙磺舒(150 μ I/孔)洗滌2次。將含有加載細胞的板放置在諸如 FLEXstation? II (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)的讀數(shù)儀內(nèi)。加載有染料的細胞在340nm和380nm激發(fā)；在505nm記錄發(fā)射信號。此時測量信號基線。在測量信號基線后，將莫能菌素(EMD，Gibbstown，NJ，USA，目錄號475895)或短桿菌肽(EMD，Gibbstown, NJ, USA,目錄號368020-25MG)添加至含有作為陽性對照的細胞的單獨孔。TTX(IuM)處理用作陰性對照。然后將建立在用活性化合物預處理的細胞中的質(zhì)膜處的活性SCNlA相比于媒介物對照的相對表達。使用Excel軟件將信號計算成在505nm與340nm/380nm處的發(fā)射比率。
[0117]也可評估單細胞中SCNlA上調(diào)對鈉水平的影響。使細胞在蓋玻片上或在96孔板中生長并且給予不同濃度的小化合物。48h后，將細胞用Locke緩沖液(8.6mM HEPES、5.6mMKCl、154mM NaCl、5.6mM 葡萄糖、1.0mM MgCl2,2.3mM CaCl2、0.0OOlmM 甘氨酸(ρΗ7.4))洗滌。在將染料加載到細胞內(nèi)之前測量熒光本底。通過在37°C利用10 μ M SBF1-AM(與Na+結(jié)合的染料)，0.04%普朗尼克酸F-127和2.5mM在Locke緩沖液中的丙磺舒(50μ I/孔)孵育細胞與染料lh，從而加載染料。此時，將細胞用2.5mM在Locke緩沖液中的丙磺舒(150 μ I/孔)洗滌2次。將在96孔板中或在蓋玻片上的細胞放置在裝備有Hg燈和適于激發(fā)和發(fā)射的濾光器的落射突光顯微鏡(得自Omega Optical Inc, Brattleboro, VT, USA目錄號組X-F04-2 或得自 Chroma Technology Corp, Bellows Falls, VT, USA,目錄號 79001)下。用染料加載的細胞在340nm和38`0nm激發(fā)；在505nm處記錄發(fā)射信號。在測量信號基線后，將莫能菌素(EMD, Gibbstown, NJ, USA,目錄號 475895)或短桿菌肽(EMD, Gibbstown, NJ, USA,目錄號368020-25MG)添加至含有作為陽性對照的細胞的單獨孔。為了建立質(zhì)膜處的活性SCNlA的相對上調(diào)，將用活性化合物預處理的細胞與賦形劑媒介物相比較。數(shù)據(jù)用與落射熒光顯微鏡連接的照相機收集并且使用適合的軟件定量。通過使用Excel軟件計算505nm發(fā)射與340nm/380nm的比率來處理原始信號。
[0118]除細胞測定之外，可利用特定疾病狀態(tài)的動物模型。在每種情況下，根據(jù)特定靶疾病或疾患來選擇動物。已知動物表達或能夠表達SCNlA多肽或其變體。本發(fā)明的化合物可用于診斷、治療和預防，及作為研究試劑和試劑盒的成分。而且，能夠調(diào)芐基因表達的化合物通常被本領域技術(shù)人員用來闡明特定基因的功能或區(qū)分生物途徑的不同成員的功能。該化合物在制造用于治療本文所述的任何疾病的藥物中的用途是所要求保護的發(fā)明的特征。
[0119]對于在試劑盒和診斷和不同生物系統(tǒng)中使用，本發(fā)明的化合物，單獨地或與其它化合物或治療組合地用作差異和/或組合分析中的工具來闡明細胞和組織中表達的基因的一部分或完全互補序列的互助表達模式。
[0120]本文所用的術(shù)語〃生物系統(tǒng)〃或〃系統(tǒng)〃定義為表達或使成為感受態(tài)以表達基因的電壓門控鈉通道α亞基(SCNxA)家族的產(chǎn)物的任何生物體、細胞、細胞培養(yǎng)物或組織。這些包括但不限于，人、轉(zhuǎn)基因動物、細胞、細胞培養(yǎng)物、組織、異種移植物、移植物及其組合。
[0121]作為一個非限制性實例，將以一種或多種化合物處理的細胞或組織中的表達模式與未被此類化合物處理的對照細胞或組織比較，并按照其屬于所檢查的基因的例如疾病關(guān)聯(lián)、信號傳導途徑、細胞定位、表達水平、大小、結(jié)構(gòu)或功能分析所產(chǎn)生的模式的基因表達差異水平。這些分析可對刺激或未刺激的細胞進行，并在影響表達模式的其它化合物存在或不存在下。
[0122]本領域已知的基因表達分析方法的實例包括DNA陣列或微陣列、SAGE(基因表達系列分析)、READS(消化的cDNA的限制性酶擴增)、T0GA(總基因表達分析)、蛋白陣列和蛋白質(zhì)組學、表達的序列標簽(EST)測序、消減RNA指紋技術(shù)(SuRF)、消減克隆、差異展示(DD)、比較基因組雜交、FISH (熒光原位雜交)技術(shù)和質(zhì)譜方法。
[0123]對于治療，通過施用根據(jù)本發(fā)明的化合物來治療懷疑患有可通過調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)多核苷酸或蛋白的表達來治療的疾病或病癥的動物，優(yōu)選地人。例如，在一個非限制性實施方案中，方法包括向需要治療的動物施用治療有效量的電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)調(diào)節(jié)劑的步驟。本發(fā)明的電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)調(diào)節(jié)劑有效地調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)的活性或調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)蛋白的表達。在一個實施方案中，與對照相比，動物中電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)的活性或表達被抑制約10%。優(yōu)選地，動物中SCNlA的活性或表達被抑制約30%。更優(yōu)選地，動物中電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)的活性或表達被抑制50%或更多。因此，與對照相比，小化合物調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)mRNA或蛋白的表達至少10%、至少50%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
[0124]在一個實施方案中，與對照相比，動物中電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)和/或的活性或表達增加約10%。優(yōu)選地，動物中電壓門控`鈉通道I型α亞基(SCNlA)的活性或表達增加約30%。更優(yōu)選地，動物中電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)的活性或表達增加50%或更多。因此，與對照相比，該化合物調(diào)節(jié)電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)mRNA的表達至少10%、至少50%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%或更多。
[0125]例如，可測量動物的血液、脂肪組織、肝臟或任何其它體液、組織或器官中電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)表達的減少或增加。優(yōu)選地，待分析的所述體液、組織或器官中包含的細胞包含編碼電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)肽和/或電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)蛋白本身的核酸分子。
[0126]本發(fā)明的化合物可用于藥物組合物，通過向適當?shù)乃帉W上可接受的稀釋劑或載體加入有效量的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的化合物和方法的用途還可以是預防上有用的。
[0127]為了輔助攝取、分布和/或吸收，本發(fā)明的化合物還可與其它分子、分子結(jié)構(gòu)或化合物的混合物混合、包封、綴合或以其它方式關(guān)聯(lián)，例如脂質(zhì)體、受體靶向分子、口服、直腸、局部或其它制劑。教導這種攝取、分布和/或吸收輔助制劑的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利 N0.5，108，921,5, 354，844,5, 416，016,5, 459，127,5, 521，291、5，543，165、5，547，932、5，583，020、5，591，721、4，426，330、4，534，899、5，013，556、5，108，921、5，213，804、5，227，170、5，264，221,5, 356，633、5，395，619、5，416，016、5，417，978,5,462，854,5,469，854,5,512，295,5, 527，528,5, 534，259,5, 543，152、5，556，948,5, 580，575和5，595，756，其每一個通過引用并入本文。
[0128]在一個實施方案中，發(fā)明實踐包括向需要其治療的患者至少一種下述化合物:米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、埃索美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥。
[0129]本發(fā)明的化合物涵蓋任何藥學上可接受的鹽、酯或這種酯的鹽、或當施用于動物(包括人)時能夠提供(直接或間接)生物活性代謝物的任何其它化合物或其殘留物。
[0130]術(shù)語〃藥學上可接受的鹽〃是指本發(fā)明化合物的生理上和藥學上可接受的鹽:gp，保留親本化合物的期望生物活性且不對其賦予不期望的毒物學作用的鹽。
[0131]本發(fā)明還包括包含本發(fā)明化合物的藥物組合物和制劑。取決于期望局部還是系統(tǒng)治療和待治療的區(qū)域，本發(fā)明的藥物組合物可以多種方式施用。施用可以是局部的(包括眼睛和向粘膜，包括陰道和直腸遞送)、肺部，例如通過吸入或噴入粉末或氣霧劑，包括通過噴霧器；氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、表皮和經(jīng)皮)、口服或腸胃外。腸胃外施用包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)注射或輸注；或顱內(nèi)，例如鞘內(nèi)或心室內(nèi)的施用。
[0132]對于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的組織，施用可通過例如注射或輸注到腦脊液中來進行。
[0133]當預期本發(fā)明的化合物將被施用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的細胞時，可以與能夠促進本發(fā)明的化合物跨越血腦屏障的滲透的一種或多種試劑施用。施用可以是快速的，如通過注射，或經(jīng)一段時間進行，如通過緩慢輸注或施用緩釋制劑。
[0134]本發(fā)明的化合物可還與提供期望的藥物或藥效學特性的試劑連接或綴合或組合。例如，該化合物可偶聯(lián)于本領域已知的促進跨血腦屏障滲透或運輸?shù)娜魏挝镔|(zhì)，例如轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的抗體，并通過靜脈內(nèi)注射施用。滲透血腦屏障破壞還可通過例如輸注以下物質(zhì)來實現(xiàn):糖包括但不限于，赤蘚糖醇、木糖醇、D(+)半乳糖、D(+)乳糖、D(+)木糖、衛(wèi)矛醇、肌醇、L(-)果糖、D(-)甘露醇、D⑴葡萄糖、D⑴阿拉伯糖、D(-)阿拉伯糖、纖維二糖、D(+)麥芽糖、D(+)棉子糖、L(+)鼠李糖、D(+)蜜二糖、D(-)核糖、側(cè)金盞花醇、D(+)阿拉伯糖醇、L(-)阿拉伯糖醇、D(+)巖藻糖、L(-)巖藻糖、D(-)來蘇糖、L(+)來蘇糖和L(-)來蘇糖，或氨基酸包括但不限于，谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、纈氨酸和?；撬?。用于增強血腦屏障滲透的方法和材料描述于，例如，美國專利N0.4，866，042“Methodfor the delivery of genetic material across the blood brain barrier，，,美國專利N0.6, 294, 520 “Material for passage through the blood-brain barrier，，和美國專利N0.6，936，589 “Parenteral delivery systems”,都通過引用整體并入本文。
[0135]為了幫助攝取、分布和/或吸收，本發(fā)明化合物可與其它分子、分子結(jié)構(gòu)或化合物混合物，例如，脂質(zhì)體、受體靶 向分子、口服、直腸、局部或其它制劑混合、包封、綴合或以其它方式關(guān)聯(lián)。例如，陽離子脂質(zhì)可被包括在制劑中以促進化合物攝取。顯示促進攝取的一種這樣的組合物是LIP0FECTIN(可從GIBC0-BRL，Bethesda, MD獲得)。[0136]用于局部施用的藥物組合物和制劑可包括經(jīng)皮貼片、軟膏、洗劑、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體和粉末。常規(guī)藥物載體、水性、粉狀或油性基質(zhì)、增稠劑和類似物可以是必需或期望的。涂覆的避孕套、手套和類似物也是可用的。
[0137]可方便地以單位劑型呈現(xiàn)的本發(fā)明的藥物制劑可按照制藥工業(yè)中公知的常規(guī)技術(shù)制備。這種技術(shù)包括將活性成分與藥物載體或賦形劑關(guān)聯(lián)的步驟。通常，制劑通過以下制備:均勻且密切地將活性成分與液態(tài)載體或磨碎的固態(tài)載體或兩者關(guān)聯(lián)，然后，如果需要，將產(chǎn)品成型。
[0138]本發(fā)明的組合物可配制為任何的許多可能劑型，例如但不限于，片劑、膠囊、凝膠膠囊、液體糖漿劑、軟凝膠、栓劑和灌腸劑。本發(fā)明的組合物還可配制為在含水、不含水或混合介質(zhì)中的懸浮劑。含水懸浮劑可進一步包含增加懸浮劑粘度的物質(zhì)，包括例如，羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。懸浮劑還可包含穩(wěn)定劑。
[0139]本發(fā)明的藥物組合物包括但不限于，溶液、乳液、泡沫劑和含脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明的藥物組合物和制劑可包括一種或多種滲透促進劑、載體、賦形劑或其它活性或無活性配料。
[0140]乳劑通常是一種液體以直徑通常超過0.1 μ m的液滴形式分散在另一液體中的異質(zhì)系統(tǒng)。除了分散相和可作為以水相、油相或本身作為單獨相的溶液存在的活性藥物以外，乳劑可包含另外的成分。包括微乳劑作為本發(fā)明的實施方案。乳劑及其用途是本領域公知的，進一步描述于美國專利N0.6，287，860。
[0141]本發(fā)明的制劑包括脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明所用的術(shù)語〃脂質(zhì)體〃是指包括以一個或多個球形雙層排列的兩親性脂質(zhì)的囊泡。脂質(zhì)體是單層或多層囊泡，具有從親脂性材料形成的膜和包含待遞送的組合物的含水內(nèi)部。
[0142]脂質(zhì)體還包括〃空間上穩(wěn)定的〃脂質(zhì)體，本文所用的該術(shù)語是指包括一種或多種特化的脂質(zhì)的脂質(zhì)體。當被并入脂質(zhì)體時，這些特化的脂質(zhì)產(chǎn)生相對于松散這種特化脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有增強的循環(huán)生命周期的脂質(zhì)體?？臻g上穩(wěn)定的脂質(zhì)體的實例是其中脂質(zhì)體的形成囊泡的脂質(zhì)部分的部分包括一種或多種糖脂或以一種或多種親水性聚合物例如聚乙二醇(PEG)部分衍生化的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體及其用途進一步描述于美國專利N0.6，287，860中。
[0143]本發(fā)明的藥物制劑和組合物還可包括表面活性劑。表面活性劑在藥物產(chǎn)品、制劑和乳劑中的使用是本領域公知的。表面活性劑及其用途進一步描述于美國專利N0.6，287，860中，其通過引用并入本文。 [0144]在一個實施方案中，本發(fā)明采用多種滲透促進劑來實現(xiàn)小分子的有效遞送。除了幫助非親脂性藥物跨細胞膜的擴散，滲透促進劑還增強親脂性藥物的滲透性。滲透促進劑可分為屬于五個大類之一，即，表面活性劑、脂肪酸、膽酸、螯合劑和非螯合非表面活性劑。滲透促進劑及其用途進一步描述于美國專利N0.6，287，860中，其通過引用并入本文。
[0145]本領域技術(shù)人員將認識到，制劑常規(guī)地根據(jù)其預期用途即施用途徑來設計。
[0146]用于局部施用的優(yōu)選的制劑包括其中用于本文所述的用途的本發(fā)明的化合物與局部遞送劑例如脂質(zhì)、脂質(zhì)體、脂肪酸、脂肪酸酯、類固醇、螯合劑和表面活性劑混合的制劑。優(yōu)選的脂質(zhì)和脂質(zhì)體包括中性(例如，二油?；?磷脂酰DOPE乙醇胺、二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿DMPC、二硬脂酰磷脂酰膽堿)、陰性(例如，二肉豆蘧酰磷脂酰甘油DMPG)和陽離子(例如，二油酰基四甲基氨基丙基DOTAP和二油?；?磷脂酰乙醇胺D0TMA)。
[0147]對于局部或其它施用，可將本發(fā)明的化合物封裝于脂質(zhì)體中或可與其形成復合體，尤其是陽離子脂質(zhì)體?？蛇x地，化合物可與脂質(zhì)，尤其是陽離子脂質(zhì)復合。優(yōu)選的脂肪酸和酯、其藥學上可接受的鹽及其用途進一步描述于美國專利N0.6，287，860中。
[0148]用于口服施用的組合物和制劑包括粉末劑或顆粒劑、微顆粒、納米顆粒、水或非水介質(zhì)中的懸浮劑或溶液、膠囊、凝膠膠囊、囊劑、片劑或小片劑。增稠劑、芳香劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或粘合劑可以是期望的。優(yōu)選的口服制劑是其中本發(fā)明的化合物連同一種或多種滲透促進劑、表面活性劑和螯合劑一起施用的那些。優(yōu)選的表面活性劑包括脂肪酸和/或其酯或鹽、膽酸和/或其鹽。優(yōu)選的膽酸/鹽和脂肪酸及其用途進一步描述于美國專利N0.6，287, 860中，其通過引用并入本文。還優(yōu)選的是滲透促進劑的組合，例如，脂肪酸/鹽與膽酸/鹽的組合。尤其優(yōu)選的組合是月桂酸、癸酸和UDCA的鈉鹽。進一步的滲透促進劑包括聚氧乙烯-9-月桂基醚、聚氧乙烯-20-十六烷基醚。本發(fā)明的化合物可口服遞送，以包括噴霧干燥顆粒的粒狀形式或復合以形成微顆?；蚣{米顆粒。
[0149]用于腸胃外、鞘內(nèi)或心室內(nèi)施用的組合物和制劑可包括還可包含緩沖劑、稀釋劑和其它適當?shù)奶砑觿?例如但不限于滲透促進劑、載體化合物和其它藥學上可接受的載體或賦形劑)的無菌水溶液。[0150]本發(fā)明的某些實施方案提供包含一種或多種化合物和一種或多種其它活性藥學成分的藥物組合物。這種活性藥學成分的實例包括但不限于對于治療需要用本發(fā)明的化合物進行治療的患者的疾患有用的任何活性成分。兩種或更多種組合的化合物可一起或順序地使用。
[0151]在另一相關(guān)實施方案中，本發(fā)明的組合物可包含靶向第一核酸靶的一種或多種化合物，和靶向第二核酸靶的一種或多種另外的化合物。例如，第一靶可以是電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)的特定反義序列，第二靶可以是來自另一核苷酸序列的區(qū)域?？蛇x地，本發(fā)明的組合物可包含調(diào)節(jié)同一電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)核酸或蛋白靶的不同區(qū)域的兩種或更多種化合物。兩種或更多種組合的化合物可一起或順序地使用。
[0152]認為治療性組合物的配制及其隨后的施用(給藥)在本領域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。給藥依賴于待治療的疾病狀態(tài)的嚴重度和響應性，治療的時期持續(xù)數(shù)天到數(shù)月，或直到實現(xiàn)治愈或?qū)崿F(xiàn)疾病狀態(tài)的減輕。最佳給藥計劃可從患者體內(nèi)藥物積累的測量來計算。本領域普通技術(shù)人員可容易地確定最佳劑量、給藥方法和重復率。最佳劑量可根據(jù)單獨活性藥學成分的相對效力而變化，并且通常可基于在有效的體外和體內(nèi)動物模型中有效的EC50來估算并且也可由每一種經(jīng)批準且上市的藥物的處方信息來確定。通常，劑量是每kg體重從0.01 yg至lOOmg，可每天、每周或每月一次或多次提供。本領域普通技術(shù)人員可基于測量的藥物在體液或組織中的停留時間和濃度容易地估算重復率。在成功治療之后，可能期望對患者進行維持療法以阻止疾病狀態(tài)復發(fā)，其中該化合物以維持劑量施用，范圍從每kg體重0.01 μ g至IOOmg,每天一次或多次。
[0153]在實施方案中，患者以至少約1、至少約2、至少約3、至少約4、至少約5、至少約6、至少約7、至少約8、至少約9、至少約10、至少約15、至少約20、至少約25、至少約30、至少約35、至少約40、至少約45、至少約50、至少約60、至少約70、至少約80、至少約90或至少約100mg/kg體重的藥物劑量治療。[0154]盡管以上已經(jīng)描述了本發(fā)明多種實施方案，應理解的是，它們僅以示例而非限制的方式呈現(xiàn)?？筛鶕?jù)本公開內(nèi)容對公開的實施方案進行多種改變而不偏離本發(fā)明的主旨或范圍。因此，本發(fā)明的寬度和范圍不應限于任何上述的實施方案。
[0155]本文提及的所有文件通過引用并入本文。本申請中提及的所有出版物和專利文件為了所有目的通過引用并入本文，其程度如同每個單獨出版物或?qū)＠募粏为毜靥峒啊Ｍㄟ^在本文件中提及多個參考文獻， 申請人:不承認任何特定參考文獻是本發(fā)明的"現(xiàn)有技術(shù)"。本發(fā)明組合物和方法的實施方案在以下實施例中闡述。
實施例
[0156]以下非限制性實施例用于闡述本發(fā)明的選定實施方案。應理解的是，所示組分的成分的比例和其它選擇方面的改變對于本領域技術(shù)人員是明顯的，并且在本發(fā)明實施方案范圍中。使用下列化合物來評估SCNlA mRNA水平的調(diào)節(jié):
[0157]a)鹽酸米那普侖(11?(幻，25(10[-2-(氨基甲基)-隊^二乙基-1-苯基環(huán)丙烷甲酰胺鹽酸鹽)；
[0158]b)托拉塞米(1_異丙基-3-[ (4_間甲苯氨基_3_吡唳基-橫酸基]服)；
[0159]c)利培酮(3-[2-[4-(6-氟_1，2_苯并異噁唑_3_基)_1_哌啶基]-乙基]-6，7，8，9-四氫-2-甲基-4H-吡啶并[1，2_a]嘧啶_4_酮)；
[0160]d)吡那地爾(N-氰基-N’吡啶-4-基-N’ ’ -(I, 2，2_三甲基丙基)胍)；
[0161]e)鹽酸貝尼地平(5-0甲基-30-[(3R)-1-(苯基甲基)_哌啶-3-基]2，6-二甲基-4- (3-硝基苯基)-1, 4- 二氫吡唳-3, 5- 二羧酸鹽);
[0162]f)酮康唑(1-[4- (4- {[ (2R, 4S) _2_ (2，4_ 二氯苯基)_2_ (1H-咪唑-1-基甲基)-1,3-二氧戊環(huán)-4-基]甲氧基}苯基)哌嗪-1-基]乙-1-酮)；
[0163]g)依布硒(2-苯基-1，2-苯并硒唑-3-酮)；
[0164]h)他達拉非((6R-反式)-6-(1，3_苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-2，3，6，7，12，12a-六氫 _2_ 甲基-吡嗪并[1，2’: I, 6]吡啶并[3，4_b]叼I哚-1, 4- 二酮)；
[0165]i)折侖諾((3S, 7R) -7，14，16-三羥基-3-甲基 _3，4，5，6，7，8，9，10，11，12-十氫-1H-2-苯并氧雜環(huán)十四因-1-酮)；
[0166]j)鹽酸萘發(fā)扎酮(2-[3-[4-(3-氯苯基)-1-哌嗪基]丙基]-5-乙基-2，4_二氫-4- (2-苯氧基乙基)-3H-1, 2，4-三唑-3-酮單鹽酸鹽；
[0167]k) 二鹽酸洛美利嗪(1-[雙(4-氟苯基)甲基]_4-[2，3，4-三甲氧基苯基甲基]二鹽酸鹽)；
[0168]I)淫羊藿苷(5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-8-(3-甲基丁 _2_烯基)-7-[(2S，3R，4S，5S，6R)-3，4，5-三羥基 _6_(羥基甲基)噁烷 _2_ 基]氧基-3-[(2S, 3R, 4R, 5R, 6S) -3，4，5-三羥基-6-甲基噁烷_2_基]氧基色烯_4_酮)；
[0169]m)奧美拉唑鎂(6-甲氧基-2-((4-甲氧基_3，5_ 二甲基吡啶_2_基)甲基亞磺?；?-1H-苯并[d]咪唑Mg)；
[0170]η)埃索美拉唑鎂((S)-6-甲氧基-2-[(4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲基亞磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑Mg)；
【權(quán)利要求】
1.一種調(diào)節(jié)生物系統(tǒng)中一種或多種電壓門控鈉通道α亞基(SCNxA)多核苷酸或蛋白的功能和/或表達的方法，所述方法包括:將所述系統(tǒng)與選自以下的至少一種化合物接觸:利尿劑、非典型抗精神病藥、鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、抗真菌劑、抗氧化劑、PDE5抑制劑、雌激素激動劑(留族或非留族)、抗抑郁劑、質(zhì)子泵抑制劑、5HT1D受體激動劑、催眠藥、抗?jié)兯幬铩?ΗΤ4激動劑、GABA激動劑、抗組胺劑或同化類固醇，從而調(diào)節(jié)所述生物系統(tǒng)中電壓門控鈉通道X型α亞基(SCNxA)多核苷酸的功能和/或表達。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少一種化合物選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、埃索美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥。
3.一種體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細胞或組織中一種或多種電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)多核苷酸或蛋白的功能和/或表達的方法，所述方法包括: 將所述細胞或組織與選自以下的至少一種化合物接觸:利尿劑、非典型抗精神病藥、鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、抗真菌劑、抗氧化劑、PDE5抑制劑、雌激素激動劑(留族或非甾族)、抗抑郁劑、質(zhì)子泵抑制劑、5HT1D受體激動劑、催眠藥、抗?jié)兯幬铩?ΗΤ4激動劑、GABA激動劑、抗組胺劑或同化類固醇，從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細胞或組織中電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)多核苷酸的功能和/或表達。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述至少一種化合物選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥，從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細胞或組織中電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)多核苷酸的功能和/或表達。`
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)的功能和/或表達相對于對照在體內(nèi)或體外增加。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述表達在體內(nèi)增加。
7.一種藥物組合物，其包含調(diào)節(jié)一種或多種電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNxA)多核苷酸的表達的一種或多種化合物，所述多核苷酸包含反義序列、互補序列、等位基因、同系物、同種型、變體、衍生物、突變體、片段或其組合及藥學上可接受的賦形劑。
8.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述化合物選自利尿劑、非典型抗精神病藥、鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、抗真菌劑、抗氧化劑、PDE5抑制劑、雌激素激動劑(留族或非甾族)、抗抑郁劑、質(zhì)子泵抑制劑、5HT1D受體激動劑、催眠藥、抗?jié)兯幬铩?ΗΤ4激動劑、GABA激動劑、抗組胺劑或同化類固醇。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述化合物選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、批那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、埃索美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥。
10.一種預防或治療與至少一種電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNxA)多核苷酸和/或其至少一種編碼的產(chǎn)物相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括: 向患者施用治療有效劑量的調(diào)節(jié)至少一種電壓門控鈉通道α亞基(SCNxA)多核苷酸的表達的至少一種化合物，從而治療與至少一種電壓門控鈉通道α亞基(SCNxA)多核苷酸和/或其至少一種編碼的產(chǎn)物相關(guān)的疾病。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述疾病是神經(jīng)系統(tǒng)疾病或病癥。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述疾病是心血管疾病或病癥。
13.如權(quán)利要求10所述的方法，其中與所述至少一種電壓門控鈉通道I型α亞基(SCNlA)多核苷酸相關(guān)的所述疾病選自:抽搐、疼痛(包括慢性疼痛)、涉及鈉通道功能障礙的受損電興奮性、與鈉通道功能障礙相關(guān)的疾病或病癥、與電壓門控鈉通道α亞基活性失調(diào)相關(guān)的疾病或病癥(例如，麻痹、高鉀性周期性麻痹、先天性副肌強直、鉀加重性肌強直、長Q-T綜合征3、運動終板疾病、共濟失調(diào)等)、由于腸神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙引起的胃腸道疾病(例如，大腸炎、回腸炎、炎癥性腸綜合征等)；高血壓或充血性心力衰竭；涉及交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)支配的泌尿生殖道的疾病或病癥(例如，良性前列腺增生、陽痿)；與神經(jīng)肌肉系統(tǒng)相關(guān)的疾病或病癥(例如，肌營養(yǎng)不良癥、多發(fā)性硬化、癲癇、自閉癥、偏頭痛(例如，散發(fā)性和家族性偏癱型偏頭痛等)、小兒重度肌陣攣型癲癇(SMEI或Dravet綜合征)、全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥(GEFS+)等)和SCNlA相關(guān)性驚厥病癥。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述疾病或病癥選自小兒重度肌陣攣型癲癇(SMEI或Dravet綜合征)、家族性偏癱型偏頭痛、全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥(GEFS+)。
15.—種鑒定和選擇至少一種化合物作為用于體內(nèi)施用的推定擊中的方法，所述方法包括:選擇與疾 病狀態(tài)相關(guān)的靶SCNxA多核苷酸；運行包括所述靶多核苷酸針對選自以下的至少一種化合物的表達系統(tǒng)的細胞篩選:利尿劑、非典型抗精神病藥、鉀通道開放劑、鈣通道阻滯劑、抗真菌劑、抗氧化劑、PDE5抑制劑、雌激素激動劑(留族或非留族)、抗抑郁劑、質(zhì)子泵抑制劑、5HT1D受體激動劑、催眠藥、抗?jié)兯幬铩?ΗΤ4激動劑、GABA激動劑、抗組胺劑或同化類固醇；以及鑒定調(diào)節(jié)所述靶多核苷酸的mRNA和/或蛋白相對于對照的表達的所述化合物(“推定擊中”)。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述推定擊中選自米那普侖、托拉塞米、利培酮、吡那地爾、貝尼地平、酮康唑、依布硒、他達拉非、折侖諾、萘發(fā)扎酮、洛美利嗪、淫羊藿苷、奧美拉唑、埃索美拉唑、L-694, 247、尼群地平、尼美西泮、氨來咕諾、莫沙必利、舍曲林或司坦唑醇或其藥學上可接受的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同種型、多晶型物、水合物、溶劑化物或前藥。
【文檔編號】A61K31/00GK103874486SQ201280049885
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月6日
【發(fā)明者】J·克拉德, O·霍克瓦舍曼, J·H·蕭 申請人:庫爾納公司