流感病毒抗體組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及獨(dú)特的CDR3氨基酸序列，和包含所述序列的抗體。還提供的是所述抗體用于治療或預(yù)防流感感染的治療應(yīng)用，所述抗體用于檢測流感病毒的診斷應(yīng)用，流感病毒疫苗的效力測試，所述抗體用于設(shè)計通用流感疫苗的篩選應(yīng)用。
【專利說明】流感病毒抗體組合物
[0001] 本發(fā)明涉及抗體組合物，和其用于預(yù)防或治療流感感染的用途。本發(fā)明還涉及所 述抗體組合物用于評估交叉反應(yīng)性和在疫苗效力測定中流感疫苗的血細(xì)胞凝集素抗原含 量的用途。
[0002] 高致病性流感病毒株的出現(xiàn)對在全球范圍內(nèi)的公眾健康提出嚴(yán)重的威脅。盡管疫 苗是感染的主要依靠，但是控制新毒株出現(xiàn)和臨床批準(zhǔn)的疫苗之間的間隔呈現(xiàn)嚴(yán)重的關(guān) 注，特別是因?yàn)閷ΜF(xiàn)有的抗病毒藥物如奧塞米韋?(seltamavir)和扎那米韋?(zanamivir) 的抗性正在增加。
[0003] -種當(dāng)前的方法是用源自康復(fù)期患者的血清被動免疫治療。然而該方法對大范圍 群體的執(zhí)行具有主要的限制，如高昂的價格，高風(fēng)險的毒性，不確定的劑量，和在給藥中的 困難。
[0004] 另一種方法是積蓄重組單克隆抗體用于在新的流行病威脅出現(xiàn)時立即部署。舉例 來說，近來的報道已描述了從1918流感流行的幸存者中（Kashyap et al.，2008)，從季節(jié)性 預(yù)防接種的個體中（Ekiert et al.，2009)，和從天然的人抗體文庫中（Sui et al.，2009)分 離功能性人抗體。然而，盡管常規(guī)的單克隆抗體通常被認(rèn)為是成功類型的藥物，然而其高 成本和復(fù)雜性是主要的限制。并且，由于流感病毒的快速變化的流行病學(xué)，這種單克隆抗 體方法將迫使提供展現(xiàn)橫跨不同病毒亞型的反應(yīng)性的單克隆抗體。這一問題目前對單克隆 抗體技術(shù)提出較大的挑戰(zhàn)。
[0005] 當(dāng)新的病毒出現(xiàn)時大流行性感冒發(fā)生并感染全球的具有很小或沒有先存在的免 疫力的人群。最近的H1N12009流行，盡管有相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，但未導(dǎo)致與以前的流感如 1918 '西班牙流感'流行一樣的死亡率，1918 '西班牙流感'造成估計全世界5000萬人死 亡。高致病性禽H5N1流感病毒已顯示在感染的人中60%的死亡率并且明顯使大流行性感 冒出現(xiàn)的風(fēng)險關(guān)出。
[0006] 現(xiàn)在的治療選擇分為兩種；抗病毒藥或疫苗二者之一?，F(xiàn)在的抗病毒藥物靶向病 毒的神經(jīng)氨酸酶（例如奧塞米韋?)或M2離子通道（例如金剛銨?)二者之一；由于增加 的抗性，其二者可能遲早變的無效。疫苗是感染控制的基石，但由于在新的毒株出現(xiàn)時， 花費(fèi)顯著的時間以開發(fā)疫苗，其具有局限性，其不能快速行動，其不是在所有人群中都有效 (例如免疫系統(tǒng)損傷的患者），保護(hù)基本上是株特異的，并且存在有限的世界范圍內(nèi)的生產(chǎn) 能力。因此，明顯存在對于另外的治療選擇的需要。
[0007] 在該技術(shù)中的另一個問題是對標(biāo)準(zhǔn)化和控制季節(jié)性和流行性流感疫苗二者的需 求。目前，單向輻射免疫擴(kuò)散測定法（SRD)被認(rèn)為是確定流感疫苗中HA抗原含量的'金標(biāo) 準(zhǔn)'測試。該測定法需要對于每個新的病毒株開發(fā)參考抗血清，其對于疫苗開發(fā)流水線可能 典型的增加2-3個月。當(dāng)然，該延遲的消除在對流行的緊急情況做出快速反應(yīng)方面將是無 價的。所以，存在對于'通用抗體'試劑的需求，所述'通用抗體'試劑包含交叉反應(yīng)抗體， 所述交叉反應(yīng)抗體可以用于SRD測定法或其它基于例如，ELISA，表面等離子共振（SPR)或 質(zhì)譜分析法的相關(guān)測定形式中。
[0008] 因此存在對于備選的流感病毒治療選擇，對于加強(qiáng)的流感病毒的檢測測定，和/ 或?qū)τ诨诹鞲胁《究乖囊呙缧Яy定的緊急需求。
[0009] 本發(fā)明通過提供如在此描述的抗體解決了一個或多個以上的問題。
[0010] 本發(fā)明的抗體的主要特征是，其具有互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)，例如源自羊駝Vhh單結(jié)構(gòu) 域抗體的CDR3氨基酸序列。
[0011] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包含單結(jié)構(gòu)域駱駝科抗體（camelid)(例如羊駝單結(jié) 構(gòu)域抗體）或由單結(jié)構(gòu)域駱駝科抗體（例如羊駝單結(jié)構(gòu)域抗體）組成-所述抗體具有非 常簡單和牢固的蛋白骨架（protein scaffold)，并展示出一些優(yōu)于常規(guī)的單克隆抗體的優(yōu) 點(diǎn)，如：（i)大小-單結(jié)構(gòu)域抗體為單克隆抗體大小的約1/10。因此，所述抗體具有接近 掩埋或隱藏的表位的能力，所述表位通常對于人免疫系統(tǒng)是沉默的（例如接近掩埋于血細(xì) 胞凝集素莖部中更保守的表位）；（ii)以比常規(guī)的單克隆抗體顯著更低的成本生產(chǎn)；（iii) 更簡單的方法以改造為雙特異性或多特異性抗體；（iv)比常規(guī)的抗體更長的CDR3環(huán)，其 促進(jìn)更擅長于接近抗原表面上的裂隙和凹槽；和/或（v)高度的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
[0012] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體結(jié)合H1流感病毒（例如H1N1流感病 毒），例如流行性的H1 (例如H1N1)流感病毒。在一個實(shí)施方案中，抗體結(jié)合毒株A/ California/06/09 和 / 或 A/California/07/2009 和 / 或 A/Brisbane/59/2007。
[0013] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體具有⑶R3,其包含選自由SEQ ID NO :1-19組成 的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO: 1-19 中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。在這點(diǎn)上，SEQ ID N01-19根據(jù)常規(guī)的Kabat命名法定義。
[0014] 在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體具有⑶R3,其包含選自由SEQ ID NO :20-38組 成的組的氨基酸序列；或變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:20-38 中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。在這點(diǎn)上，SEQ IDN020-38根據(jù)常規(guī)的對于免疫球蛋白或抗體的國際免疫遺傳學(xué)信息系統(tǒng)（IMGT)命名法 定義。
[0015] 本發(fā)明的抗體可以進(jìn)一步包含⑶R2,其中所述⑶R2包含選自由SEQ ID N0:39-57 組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:39-57中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。在 這點(diǎn)上，SEQ ID N039-57根據(jù)常規(guī)的Kabat命名法定義。備選的，所述⑶R2包含選自由 SEQ ID N0:58-76組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列 與SEQ ID N0:58-76中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或 插入。在這點(diǎn)上，SEQ ID N058-78根據(jù)常規(guī)的頂GT命名法定義。
[0016] 僅僅舉例說明，本發(fā)明的抗體可以包含如在上文中定義的基于以下SEQ ID N0組 合的⑶R3和⑶R2組合：
[0017] 1 加上 39 或 58 ;20 加上 39 或 58 ;
[0018] 2 加上 40 或 59 ;21 加上 40 或 59 ;
[0019] 3 加上 41 或 60 ;22 加上 41 或 60 ;
[0020] 4 加上 42 或 61 ;23 加上 42 或 61 ;
[0021] 5 加上 43 或 62 ;24 加上 43 或 62 ;
[0022] 6 加上 44 或 63 ;25 加上 44 或 63 ;
[0023] 7 加上 45 或 64 ;26 加上 45 或 64;
[0024] 8 加上 46 或 65 ;27 加上 46 或 65 ;
[0025] 9 加上 47 或 66 ;28 加上 47 或 66 ;
[0026] 10 加上 48 或 67 ;29 加上 48 或 67 ;
[0027] 11 加上 49 或 68 ;30 加上 49 或 68 ;
[0028] 12 加上 50 或 69 ;31 加上 50 或 69 ;
[0029] 13 加上 51 或 70 ;32 加上 51 或 70 ;
[0030] 14 加上 52 或 71 ;33 加上 52 或 71 ;
[0031] 15 加上 53 或 72 ;34 加上 53 或 72 ;
[0032] 16 加上 54 或 73 ;35 加上 54 或 73 ;
[0033] 17 加上 55 或 74 ;36 加上 55 或 74;
[0034] 18 加上 56 或 75 ;37 加上 56 或 75 ;
[0035] 19 加上 57 或 76 ;38 加上 57 或 76。
[0036] 除了以上提到的⑶R3特征以外（和任選的除了以上提到的⑶R2特征以外），本發(fā) 明的抗體可以進(jìn)一步包含⑶R1，其中所述⑶R1包含選自由SEQ ID N0:77-95組成的組的氨 基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:77-95中的相應(yīng) 的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。在這點(diǎn)上，SEQ ID N077-95 根據(jù)常規(guī)的Kabat命名法定義。備選的，所述⑶R1包含選自由SEQ ID N0:96-114組成的 組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:96-114 中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。在這點(diǎn)上，SEQ ID N096-114根據(jù)常規(guī)的MGT命名法定義。
[0037] 僅僅舉例說明，本發(fā)明的抗體可以包含如在上文中定義的基于以下SEQ ID N0的 組合的⑶R3和⑶R1組合：
[0038] 1 加上 77 或 96 ;20 加上 77 或 96 ;
[0039] 2 加上 78 或 97 ;21 加上 78 或 97 ;
[0040] 3 加上 79 或 98 ;22 加上 79 或 98 ;
[0041] 4 加上 80 或 99 ;23 加上 80 或 99 ;
[0042] 5 加上 81 或 100 ;24 加上 81 或 100 ;
[0043] 6 加上 82 或 101 ;25 加上 82 或 101 ;
[0044] 7 加上 83 或 102 ;26 加上 83 或 102 ;
[0045] 8 加上 84 或 103 ;27 加上 84 或 103 ;
[0046] 9 加上 85 或 104 ;28 加上 85 或 104 ;
[0047] 10 加上 86 或 105 ;29 加上 86 或 105 ;
[0048] 11 加上 87 或 106 ;30 加上 87 或 106 ;
[0049] 12 加上 88 或 107 ;31 加上 88 或 107 ;
[0050] 13 加上 89 或 108 ;32 加上 89 或 108 ;
[0051] 14 加上 90 或 109 ;33 加上 90 或 109 ;
[0052] 15 加上 91 或 110 ;34 加上 91 或 110 ;
[0053] 16 加上 92 或 111 ;35 加上 92 或 111 ;
[0054] 17 加上 93 或 112 ;36 加上 93 或 112 ;
[0055] 18 加上 94 或 113 ;37 加上 94 或 113 ;
[0056] 19 加上 95 或 114 ;38 加上 95 或 114。
[0057] 此外，僅僅舉例說明，本發(fā)明的抗體可以包含如在上文中定義的基于以下的SEQ ID N0組合的CDR3加上CDR2和CDR1組合：
[0058] 1加上39加上77 ;20加上58加上96 ;
[0059] 2加上40加上78 ;21加上59加上97 ;
[0060] 3加上41加上79 ;22加上60加上98 ;
[0061] 4加上42加上80 ;23加上61加上99 ;
[0062] 5加上43加上81 ;24加上62加上100 ;
[0063] 6加上44加上82 ;25加上63加上101 ;
[0064] 7加上45加上83 ;26加上64加上102 ;
[0065] 8加上46加上84 ;27加上65加上103 ;
[0066] 9加上47加上85 ;28加上66加上104 ;
[0067] 10加上48加上86 ;29加上67加上105 ;
[0068] 11加上49加上87 ;30加上68加上106 ;
[0069] 12加上50加上88 ;31加上69加上107 ;
[0070] 13加上51加上89 ;32加上70加上108 ;
[0071] 14加上52加上90 ;33加上71加上109 ;
[0072] 15加上53加上91 ;34加上72加上110 ;
[0073] 16加上54加上92 ;35加上73加上111 ;
[0074] 17加上55加上93 ;36加上74加上112 ;
[0075] 18加上56加上94 ;37加上75加上113 ;
[0076] 19加上57加上95 ;38加上76加上114。
[0077] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含與選自由SEQ ID N0:115-133組成的組的 氨基酸序列具有至少80%序列同一性的氨基酸序列。在一個相關(guān)的實(shí)施方案中，所述抗體 保留如在此之前定義的精確的CDR3氨基酸序列，和任選的如在上文中定義的精確的CDR1 氨基酸序列和/或精確的CDR2氨基酸序列。
[0078] 在相關(guān)的第二個方面，本發(fā)明的抗體不僅結(jié)合于H1流感病毒（如在此之前描述 的）而且結(jié)合H5流感病毒（例如H5N1或H5N3)，例如流行性的H5流感病毒。在一個實(shí) 施方案中，抗體結(jié)合毒株 A/Vietnam/1203/2004 和 / 或 A/Vietnam/1194/2004 和 / 或 A/ Vietnam/119/2004 和/或A/HongKong/213/2003和/或A/turkey/Turkey/1/2005和/或 A/Indonesia/05/2005 和 / 或A/Duck/Singapore-Q/119-3/97。在這個方面的一個實(shí)施方案 中，本發(fā)明的抗體具有CDR3,其包含選自由SEQ ID N0:3-4, 6-7, 10, 13或15組成的組的氨 基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:3-4, 6-7, 10, 13 或15中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。備選 的，所述CDR3包含選自由SEQ ID N0:22-23, 25-26, 29, 32或34組成的組的氨基酸序列；或 其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:22-23, 25-26, 29, 32或34中 的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0079] 所述第二個方面的抗體可以進(jìn)一步包含⑶R2,其中所述⑶R2包含選自由SEQ ID N0:41-42, 44-45, 48, 51或53的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體 氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:41-42, 44-45, 48, 51或53中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時 具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。備選的，所述⑶R2包含選自由SEQ ID NO:60-61，63-64, 67, 70或72組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變 體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:60-61，63-64, 67, 70或72中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有 最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0080] 僅僅舉例說明，所述第二個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第二個方 面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的⑶R3和⑶R2組合：
[0081] 3 加上 41 或 60 ;22 加上 41 或 60 ;
[0082] 4 加上 42 或 61 ;23 加上 42 或 61 ;
[0083] 6 加上 44 或 63 ;25 加上 44 或 63 ;
[0084] 7 加上 45 或 64 ;26 加上 45 或 64 ;
[0085] 10 加上 48 或 67 ;29 加上 48 或 67 ;
[0086] 13 加上 51 或 70 ;32 加上 51 或 70 ;
[0087] 15 加上 53 或 72 ;34 加上 53 或 72。
[0088] 所述第二個方面的抗體，除了以上提到的CDR3特征之外（和任選的除了以 上提到的⑶R2特征之外），可以進(jìn)一步包含⑶R1，其中所述⑶R1包含選自由SEQ ID N0:79-80, 82-83, 86, 89或91組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述 變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:79-80, 82-83, 86, 89或91中的相應(yīng)的氨基酸序列相比 時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。備選的，所述⑶R1包含選自由SEQ ID N0:98-99, 101-102, 105, 108或110組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所 述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:98-99, 101-102, 105, 108或110中的相應(yīng)的氨基酸序列 相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0089] 僅僅舉例說明，所述第二個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第二個方 面定義的基于以下SEQ ID N0組合的⑶R3和⑶R1組合：
[0090] 3 加上 79 或 98 ;22 加上 79 或 98 ;
[0091] 4 加上 80 或 99 ;23 加上 80 或 99 ;
[0092] 6 加上 82 或 101 ;25 加上 82 或 101 ;
[0093] 7 加上 83 或 102 ;26 加上 83 或 102 ;
[0094] 10 加上 86 或 105 ;29 加上 86 或 105 ;
[0095] 13 加上 89 或 108 ;32 加上 89 或 108 ;
[0096] 15 加上 91 或 110 ;34 加上 91 或 110.
[0097] 此外，僅僅舉例說明，所述第二個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第二 個方面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的⑶R3加上⑶R2和⑶R1組合：
[0098] 3加上41加上79 ;22加上60加上98 ;
[0099] 4加上42加上80 ;23加上61加上99 ;
[0100] 6加上44加上82 ;25加上63加上101 ;
[0101] 7加上45加上83 ;26加上64加上102 ;
[0102] 10加上48加上86 ;29加上67加上105 ;
[0103] 13加上51加上89 ;32加上70加上108
[0104] 15加上53加上91 ;34加上72加上110。
[0105] 所述第二個方面的抗體可以包含與選自由SEQ ID N0:117-118, 120-121，124, 127 或129組成的組的氨基酸序列具有至少80%序列同一性的氨基酸序列。在一個相關(guān)的實(shí)施 方案中，所述抗體保留如在此之前定義的精確的CDR3氨基酸序列，和任選的如在上文中 定義的精確的CDR1氨基酸序列和/或精確的CDR2氨基酸序列。
[0106] 在相關(guān)的第三個方面，本發(fā)明的抗體不僅結(jié)合于H1流感病毒和H5流感病毒（如 在此之前描述的），還結(jié)合于1)H2流感病毒（例如H2N2或H2N3)如結(jié)合于流行性的H2 流感病毒（例如H2N2或H2N3)，和結(jié)合于2)H9流感病毒（例如H9N2)如結(jié)合于流行性的 H9流感病毒（例如H9N2)。例如，抗體結(jié)合H2流感病毒株A/Japan/305/1957和/或A/ Mallard/Eng/727/06。例如，抗體結(jié)合H9流感病毒株A/HongKong/1073/99。在這一方面 的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體具有⑶R3,其包含選自由SEQ ID N0:3, 4, 7或10組成的 組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:3, 4, 7或 10中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。備選的， 所述⑶R3包含選自由SEQ ID N0:22, 23, 26或29組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸 序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:22, 23, 26或29中的相應(yīng)的氨基酸序列相 比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0107] 所述第三個方面的抗體可以進(jìn)一步包含⑶R2,其中所述⑶R2包含選自由SEQ ID NO:41，42, 45或48組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序 列當(dāng)與SEQ ID N0:41，42, 45或48中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸 的取代、缺失或插入。備選的，所述⑶R2包含選自由SEQ ID N0:60, 61，64或67組成的組 的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:60, 61，64 或67中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0108] 僅僅舉例說明，所述第三個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第三個方 面定義的基于以下SEQ ID N0組合的⑶R3和⑶R2組合：
[0109] 3 加上 41 或 60 ;22 加上 41 或 60 ;
[0110] 4 加上 42 或 61 ;23 加上 42 或 61 ;
[0111] 7 加上 45 或 64 ;26 加上 45 或 64 ;
[0112] 10 加上 48 或 67 ;29 加上 48 或 67。
[0113] 所述第三個方面的抗體，除了以上提到的CDR3特征之外（和任選的除了以 上提到的⑶R2特征之外），可以進(jìn)一步包含⑶R1，其中所述⑶R1包含選自由SEQ ID NO: 79, 80, 83或86組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序 列當(dāng)與SEQ ID N0:79, 80, 83或86中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的 取代、缺失或插入。備選的，所述⑶R1包含選自由SEQ ID N0:98, 99, 102或105組成的組 的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:98, 99, 102 或105中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0114] 僅僅舉例說明，所述第三個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第三個方 面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的CDR3和CDR1組合：
[0115] 3 加上 79 或 98 ;22 加上 79 或 98 ;
[0116] 4 加上 80 或 99 ;23 加上 80 或 99 ;
[0117] 7 加上 83 或 102 ;26 加上 83 或 102 ;
[0118] 10 加上 86 或 105 ;29 加上 86 或 105。
[0119] 此外，僅僅舉例說明，所述第三個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第三 個方面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的⑶R3加上⑶R2和⑶R1組合：
[0120] 3加上41加上79 ;22加上60加上98 ;
[0121] 4加上42加上80 ;23加上61加上99 ;
[0122] 7加上45加上83 ;26加上64加上102 ;
[0123] 10加上48加上86 ;29加上67加上105 ;
[0124] 15加上53加上91 ;34加上72加上110。
[0125] 所述第三個方面的抗體可以包含與選自由SEQ ID N0:117, 118, 121或124組成的 組的氨基酸序列具有至少80 %序列同一性的氨基酸序列。在一個相關(guān)的實(shí)施方案中，所述 抗體保留如在此之前定義的精確的CDR3氨基酸序列，和任選的如在上文中定義的精確的 CDR1氨基酸序列和/或精確的CDR2氨基酸序列。
[0126] 在相關(guān)的第四個方面，本發(fā)明的抗體不僅結(jié)合于H1流感病毒和結(jié)合于H5流感病 毒（如在此之前描述的），而且結(jié)合于H2流感病毒（例如H2N2或H2N3)例如結(jié)合于流行 件的H2流感病毒（例如H2N2或H2N3)。作為具體的H2流感病毒實(shí)施例，抗體結(jié)合毒株 A/Japan/305/1957和/或A/Mallard/Eng/727/06。在這一方面的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明 的抗體具有CDR3,其包含選自由SEQ ID N0:6或15組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基 酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:6或15中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具 有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。備選的，所述⑶R3包含選自由SEQ ID N0:25 或34組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:25或34中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0127] 所述第四個方面的抗體可以進(jìn)一步包含⑶R2,其中所述⑶R2包含選自由SEQ ID N0:44或53組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與 SEQ ID N0:44或53中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或 插入。備選的，所述⑶R2包含選自由SEQ ID N0:63或72組成的組的氨基酸序列；或其變 體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:63或72中的相應(yīng)的氨基酸序列 相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0128] 僅僅舉例說明，所述第四個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第四個方 面定義的基于以下SEQ ID N0組合的⑶R3和⑶R2組合：
[0129] 6 加上 44 或 63 ;25 加上 44 或 63 ;
[0130] 15 加上 53 或 61 ;34 加上 53 或 61。
[0131] 所述第四個方面的抗體，除了以上提到的CDR3特征之外（和任選的除了以上提 到的⑶R2特征之外），可以進(jìn)一步包含⑶R1，其中所述⑶R1包含選自由SEQ IDN0:82或91 組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列與SEQ ID N0:62 或91中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。備選 的，所述⑶R1包含選自由SEQ ID N0:101或110組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸 序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO: 101或110中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時 具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0132] 僅僅舉例說明，所述第四個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第四個方 面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的⑶R3和⑶R1組合：
[0133] 6 加上 82 或 101 ;25 加上 82 或 101 ;
[0134] 15 加上 91 或 110 ;34 加上 91 或 110。
[0135] 此外，僅僅舉例說明，所述第四個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第四 個方面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的⑶R3加上⑶R2和⑶R1組合：
[0136] 6加上44加上82 ;25加上63加上101 ;
[0137] 15加上53加上91 ;34加上72加上110。
[0138] 所述第四個方面的抗體可以包含與選自由SEQ ID N0:120或129組成的組的氨基 酸序列具有至少80%序列同一性的氨基酸序列。在一個相關(guān)的實(shí)施方案中，所述抗體保留 如在此之前定義的精確的CDR3氨基酸序列，和任選的如在上文中定義的精確的CDR1氨基 酸序列和/或精確的CDR2氨基酸序列。
[0139] 在相關(guān)的第五個方面，本發(fā)明的抗體不僅結(jié)合于H1流感病毒和結(jié)合于H5流感病 毒（如在此之前描述的），而且結(jié)合于H9流感病毒(例如H9N2)例如結(jié)合于流行件的H9流 感病毒（例如H9N2)。作為具體的H9流感病毒實(shí)施例,抗體結(jié)合毒株A/HongKong/1073/99。 在這一方面的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體具有⑶R3,其包含選自由SEQ ID NO: 13組成 的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO: 13中 的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。備選的，所述 CDR3包含選自由SEQ ID N0:32組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變 體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0: 32中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的 取代、缺失或插入。
[0140] 所述第五個方面的抗體可以進(jìn)一步包含⑶R2,其中所述⑶R2包含選自由SEQ ID NO:51或70組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與 SEQ ID N0:51或70中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或 插入。
[0141] 僅僅舉例說明，所述第五個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第五個方 面定義的基于以下SEQ ID N0:13加上51或70 ;32加上51或70的組合的CDR3和CDR2組 合。
[0142] 所述第五個方面的抗體，除了以上提到的⑶R3特征之外（和任選的除了以上提 到的⑶R2特征之外），可以進(jìn)一步包含⑶R1，其中所述⑶R1包含選自由SEQ ID N0:89或 108組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:89或108中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時具有最多1或2個氨基酸的取代、缺失或插入。
[0143] 僅僅舉例說明，所述第五個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第五個方 面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的CDR3和CDR1組合：13加上89或108 ;32加上89或 108。
[0144] 此外，僅僅舉例說明，所述第五個方面的抗體可以包含如在上文中對于所述第五 個方面定義的基于以下SEQ ID N0的組合的⑶R3加上⑶R2和⑶R1組合：13加上51加上 89 ;32加上70加上108。
[0145] 所述第五個方面的抗體可以包含與選自由SEQ ID N0:127組成的組的氨基酸序列 具有至少80 %序列同一性的氨基酸序列。在一個相關(guān)的實(shí)施方案中，所述抗體保留如在此 之前定義的精確的CDR3氨基酸序列，和任選的如在上文中定義的精確的CDR1氨基酸序列 和/或精確的CDR2氨基酸序列。
[0146] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體結(jié)合并優(yōu)選中和所有I類血細(xì)胞凝集素 流感病毒（例如HI, H2, H5, H6, Hll，H13, H16, H9, H8和/或H12流感病毒）。在一個 實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體結(jié)合并優(yōu)選中和A/California/07/09 (H1N1)和/或A/ Vietnam/1194/04(H5N1)〇
[0147] 在一個實(shí)施方案中，所述抗體可以是人源化的。常規(guī)的人源化技術(shù)的實(shí)例在 Jones Ρ· T. et al. (1986)用源自鼠的那些替換人抗體中的互補(bǔ)決定區(qū)（Replacing the complementarity-determining regions in a human antibody with those from a mouse)； Nature, 321 (6069) :pp. 522-525中描述，其因此以其整體通過參考結(jié)合于此。在一個實(shí) 施方案中，本發(fā)明的CDR3VHH氨基酸序列可以被插入（例如替換）存在于人抗體上的相應(yīng) 的CDR3Vhh氨基酸序列。備選的，本發(fā)明抗體的整個V HH氨基酸序列可以與相應(yīng)的人抗體 序列比對且對氨基酸差異繪圖。所述繪圖之后，在本發(fā)明抗體序列上鑒定的氨基酸差異 可以隨后被修飾以模擬相應(yīng)的人序列。在這點(diǎn)上，CDR區(qū)域優(yōu)選未修飾的。例如，在本發(fā) 明的抗體的FR區(qū)域鑒定的差異，任選的屬于'標(biāo)志'殘基（Vincke et al，2008, J. Biol. Chem.，284 (5)，pp. 3273-3284)，其因此以其整體通過參考結(jié)合于此，可以被修飾以模擬相 應(yīng)的人序列。僅僅用于說明的目的，一種人源化方案以實(shí)施例10的方式描述。
[0148] 純粹的用于說明的目的，本發(fā)明的人源化抗體可以包含與人VH抗體具有至少 80%序列同一性的氨基酸序列，例如像這樣的人VH3抗體，其由VH3種系基因 DP51或DP53 編碼。
[0149] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體（任選的人源化的）由單結(jié)構(gòu)域抗體組成或包 含單結(jié)構(gòu)域抗體。
[0150] 在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體（任選的人源化的）可以包含兩個或更多如 在上文中定義的單結(jié)構(gòu)域。所述單結(jié)構(gòu)域可以相同或不同。當(dāng)使用第一和第二（或更多） 不同的單結(jié)構(gòu)域時，所述第一單結(jié)構(gòu)域典型的具有不同于所述第二單結(jié)構(gòu)域的結(jié)合親和 力（affinity),親合力（avidity)和 / 或特異性（specificity)。
[0151] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體（任選的人源化的）由雙特異性或多特異性抗 體組成或包含雙特異性或多特異性抗體。
[0152] 根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供一種如在上文中定義的抗體，用于預(yù)防或治療流 感病毒感染。在相關(guān)的方面，本發(fā)明提供一種方法，所述方法包含向患者施用預(yù)防有效量 的或治療有效量的如在上文中定義的抗體。這些方面包含兩種或更多種所述在上文中定義 的抗體的使用。
[0153] 從上述'被動免疫治療'的方面受益的典型的患者包含在新的流感病毒株（例如 新的流行性毒株如新的1類流感株）出現(xiàn)時'在危險中的'個體。此種'在危險中的'患者 的實(shí)例包含：疫苗不應(yīng)答者；免疫損傷的患者；和健康的專業(yè)人員。本發(fā)明的被動免疫治療 方法的特別的優(yōu)勢是其不增加增長的與抗病毒藥物抗性相關(guān)的問題。
[0154] 在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗體組合提供針對流感H1，H1M15 亞型，和/或H1&H2&H5&H9亞型，和/或所有I類血細(xì)胞凝集素亞型（例如 Hl，H2, H5, H6, Hll，H13, H16, H9, H8和/或H12流感病毒）的異亞型的交叉反應(yīng)性和/或中 和作用。
[0155] 本發(fā)明的進(jìn)一步的方面提供用于設(shè)計"通用疫苗"以誘導(dǎo)異亞型免疫反應(yīng)的方法。 僅僅用于說明的目的，合適的方案在實(shí)施例14中描述。
[0156] 本發(fā)明的更進(jìn)一步的方面提供加強(qiáng)的'場地'診斷測定法和試劑。僅僅用于說明 的目的，合適的方案在實(shí)施例13中描述。
[0157] 本發(fā)明的進(jìn)一步的方面提供用于疫苗效力測定的交叉反應(yīng)性抗體。僅僅用于說明 的目的，合適的方案在實(shí)施例13中描述。
[0158] 抗體給藥
[0159] 在使用時，本發(fā)明使用藥物組合物，所述藥物組合物包含以適于腸胃外的通常靜 脈給藥的形式的本發(fā)明的抗體組合物。配制純化的完整抗體，或其片段用于此種遞送。例 如，抗體，或其片段，在介于5-50或15-50或25-50g/升之間的濃度，可以在緩沖液中配 制。合適的緩沖液組分的實(shí)例包含生理的鹽分如檸檬酸鈉和/或檸檬酸。優(yōu)選的緩沖液含 有100-200或125-175或約150 (例如153) mM生理的鹽分如氯化鈉。優(yōu)選的緩沖液維持藥 物組合物在接近患者的生理pH的pH -例如，在pH為5. 5-6. 4,或在pH為5. 6-6. 3,或在 pH為5. 7-6. 2,或在pH在5. 8-6. 2。本發(fā)明含有抗體的組合物優(yōu)選不包括佐劑，因?yàn)槠浯?激患者中針對所述抗體的免疫反應(yīng)是不合需要的。
[0160] 本發(fā)明的抗體可以配制用于，但不限于肌肉的，皮下的，鼻內(nèi)的或靜脈內(nèi)的遞送。 適于肌肉的，皮下的或靜脈內(nèi)的注射的組合物包含無菌水溶液。如果需要，此種水溶液應(yīng) 該是合適緩沖的并且液體稀釋劑首先以足夠的鹽或葡萄糖變?yōu)榈葷B。本發(fā)明的抗體組合物 可以分開地配制為口服制劑。
[0161] 適于注射的組合物可以以溶液，懸液或干粉的形式，其在使用前溶于或懸于合適 的賦形劑中。
[0162] 在準(zhǔn)備可以溶解于賦形劑的抗體或其片段的溶液過程中，如果需要，所述溶液通 過加入氯化鈉制備為等滲的并通過無菌的過濾器使用無菌技術(shù)以過濾方式除菌，之后裝入 合適的無菌小瓶或安瓿瓶中并密封。有利地，如緩沖，溶解，穩(wěn)定，防腐或殺菌的或懸浮的和 /或局部麻醉的試劑，可以溶解于賦形劑。
[0163] 在使用前溶解或重懸于合適的賦形劑的干粉，可以在無菌區(qū)域使用無菌技術(shù)通 過將預(yù)殺菌的成分裝入無菌的容器制備。備選的，所述成分可以在無菌區(qū)域中使用無菌技 術(shù)溶解于合適的容器中。產(chǎn)品隨后凍干并且所述容器無菌密封。
[0164] 本發(fā)明的抗體給藥的劑量范圍為以產(chǎn)生需要的治療效果的那些。將理解需要的劑 量范圍依賴于抗體或組合物的精確的性質(zhì)，給藥途徑，制劑的性質(zhì)，患者的年齡，患者的 疾病的性質(zhì)、程度或嚴(yán)重性，禁忌（如果有的話）和主治醫(yī)生的判斷。這些劑量水平中的 改變可以使用用于優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)的經(jīng)驗(yàn)例程調(diào)整。
[0165] 合適的每日劑量在5_20mg每公斤體重范圍。單位劑量可以從小于100mg變化， 但是典型的將在250-2000mg每劑量范圍內(nèi)，其可以每日或更低頻率給藥（例如交替日給 藥達(dá)1周）。
[0166] 使用本發(fā)明的抗體與一個別的其它已確立的通常用于預(yù)防或治療流感病毒感染 的療法聯(lián)合，或用作其它已確立的通常用于預(yù)防或治療流感病毒感染的療法的輔助，或與 其它已確立的通常用于預(yù)防或治療流感病毒感染的療法一起用于預(yù)防或治療流感病毒感 染的治療方法中的用途也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，本發(fā)明的抗體可以與合適的抗病毒藥 (例如奧塞米韋?，金剛乙胺?，扎那米韋?，和/或金剛胺?)共同給藥。
[0167] 聯(lián)合治療可以以本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員認(rèn)為需要或便利的任何方式進(jìn)行，并且為了 本說明書的目的，對于將用于聯(lián)合的化合物的順序，量，重復(fù)或相對量沒有限制是預(yù)期的。
[0168] 定義部分
[0169] 結(jié)合所關(guān)注的流感病毒的抗體是一種這樣的抗體，其能夠以充足的親和力結(jié)合所 述病毒以致于抗體作為治療劑和/或疫苗效力試劑是有用的。作為實(shí)例，結(jié)合所關(guān)注的流 感病毒的抗體是可以以親和力（K a)為至少104M結(jié)合流感病毒的抗體。
[0170] 治療有效量指抗體的量，其當(dāng)單獨(dú)或聯(lián)合施用給患者以治療或預(yù)防流感感染或 流感感染的至少一種臨床癥狀時，足夠影響疾病或癥狀的此種治療或預(yù)防。治療有效量可 以依賴于，例如，抗體，感染，和/或感染的癥狀，感染的嚴(yán)重性，和/或感染的癥狀，被 治療患者的年齡，體重，和/或健康狀況，和開處方醫(yī)生的判斷而改變。在任何給定的例 子中，適當(dāng)?shù)闹委熡行Я靠梢杂赡切┍绢I(lǐng)域熟練技術(shù)人員確定或能夠通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。 治療有效量還是某種量，其中抗體的有益效果超過抗體的任何毒性或有害的效果。
[0171] 預(yù)防有效量是抗體的任何量，其當(dāng)單獨(dú)或聯(lián)合施用于患者時，抑制或推遲流感病 毒感染，或流感病毒感染的至少一種臨床癥狀的發(fā)生或復(fù)發(fā)。在一些實(shí)施方案中，預(yù)防有 效量完全阻止流感病毒感染的發(fā)生或復(fù)發(fā)。抑制發(fā)生意味著或者減少感染發(fā)生的可能性， 或者完全阻止發(fā)生。
[0172] 對于序列比較，典型的一條序列作為參考序列，相對于其，可以比較測試序列。當(dāng) 使用序列比較算法時，測試和參考序列輸入計算機(jī)，如果需要，指定后續(xù)的坐標(biāo)，并指定序 列算法程序參數(shù)。序列比較算法隨后基于指定的程序參數(shù)計算測試序列相對于參考序列的 序列同一性百分?jǐn)?shù)。
[0173] 貫穿本說明書，涉及至少80%序列同一性與以下中的一個或多個互換使用：至少 81，至少82,至少83,至少84,至少85,至少86,至少87,至少88,至少89,至少90,至少 91，至少92,至少93,至少94,至少95,至少96,至少97,至少98,至少99和/或100% 序列同一性。
[0174] 可以進(jìn)行用于比較的優(yōu)化的序列比對，例如，通過Smith和Waterman的局部同 源性比對算法[Adv.Appl. Math. 2:484(1981)]，通過 Needleman&Wunsch 的算法[J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]通過 Pearson&Lipman 的尋找相似性方法[Proc. Nat' 1. Acad. Sci. USA85:2444(1988)]，通過這些算法的計算機(jī)執(zhí)行（GAP，BESTFIT，F(xiàn)ASTA，和 TFASTA-遺 傳計算機(jī)基團(tuán)的序列分析軟件包（Sequence Analysis Software Package of the genetics Computer Group),威斯康星大學(xué)生物技術(shù)中心（University of Wisconsin Biotechnology Center)，1710University Avenue, Madison, Wis. 53705)，或通過肉眼檢查[參見 Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausbel et al, eds, , Current Protocols, Greene Publishing Associates, In.和 John Wiley&Sons, Inc.合資（1995 增刊）Ausbubel]。
[0175] 適于確定序列相似性百分?jǐn)?shù)的算法的實(shí)例是BLAST和BLAST2. 0算法[參見 Altschul (1990) J. Mol. Biol. 215:ρρ· 403-410 ;和生物技術(shù)信息國家中心（NationalCenter for Biotechnology Information)的 "http://www. ncbi. nlm. nih. gov/，' ] 〇
[0176] 在優(yōu)選的同源性比較中，同一性存在超過長度為至少5個連續(xù)的氨基酸殘基，或 至少10個連續(xù)的氨基酸殘基，或至少15個連續(xù)的氨基酸殘基，或至少20個連續(xù)的氨基 酸殘基，或至少25個連續(xù)的氨基酸殘基，或至少30個連續(xù)的氨基酸殘基的序列區(qū)域。
[0177] "抗體"以最廣泛的意義使用，且特別的覆蓋抗體和抗體片段，只要其展示出需要 的生物活性。例如，抗體是包括至少一個或兩個，重（H)鏈可變區(qū)（在此縮寫為VHC)，和至 少一個或兩個輕（L)鏈可變區(qū)域（在此縮寫為VLC)的蛋白質(zhì)。VHC和VLC區(qū)可以進(jìn)一步再 分為高變的區(qū)域，稱為"互補(bǔ)決定區(qū)域"("CDR")，其間散布有更保守的區(qū)域，稱為"構(gòu)架區(qū) "(FR)。構(gòu)架區(qū)和 CDR 的范圍已精確定義（參見，Kabat, E. A.，et al. Suquences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991，和 Chothia, C. et al, J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987，其 通過參考結(jié)合于此）。優(yōu)選的，每個VHC和VLC由三個CDR和四個FR組成，從氨基端到羧 基端以以下順序排列：FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4。
[0178] 抗體的VHC或VLC鏈可以進(jìn)一步包含所有或部分重或輕鏈恒定區(qū)。在一個實(shí)施方 案中，抗體是兩條免疫球蛋白重鏈和兩條免疫球蛋白輕鏈的四聚體，其中免疫球蛋白重和 輕鏈通過例如，二硫鍵相互連接。重鏈恒定區(qū)包含三個結(jié)構(gòu)域，CH2和CH3,和任選的CH1。 輕鏈恒定區(qū)包含一個結(jié)構(gòu)域，CL。重和輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。 抗體的恒定區(qū)典型的介導(dǎo)抗體對宿主組織或因子的結(jié)合，所述宿主組織或因子包括免疫 系統(tǒng)的各種細(xì)胞（例如，效應(yīng)細(xì)胞）和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分（Clq)。術(shù)語〃抗體〃包 含類型IgA，IgG，IgE，IgD，IgM(和其亞型）的完整的免疫球蛋白，其中免疫球蛋白輕鏈可 以是κ或λ類型。
[0179] 如在此使用的術(shù)語抗體，還指結(jié)合流感病毒的抗體的部分，例如一種分子，其中 一個或多個免疫球蛋白鏈不是全長的，但其結(jié)合流感病毒。包含在術(shù)語抗體內(nèi)的結(jié)合部分 的實(shí)例包括（i)Fab片段，由VLC，VHC，CL和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；（ii)F(ab'） 2片段， 包含在鉸鏈區(qū)由二硫橋鍵連接的兩個Fab片段的雙價片段；（iii)由VHC和CH1結(jié)構(gòu)域組 成的Fc片段；（iv)由抗體單臂的VLC和VHC結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；（v) dAb片段（Ward et al，Nature341:544-546, 1989)，其由VHC結(jié)構(gòu)域組成；和（vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)，其 具有足夠的框架以結(jié)合例如可變區(qū)的抗原結(jié)合部分。輕鏈可變區(qū)的抗原結(jié)合部分和重鏈可 變區(qū)的抗原結(jié)合部分，例如，F(xiàn)v片段的兩個結(jié)構(gòu)域，VLC和VHC可以是使用重組方法通過 合成接頭連接的，所述接頭使它們能夠制成單蛋白鏈，所述單蛋白鏈中VLC和VHC區(qū)成對 形成單價分子（稱為單鏈 Fv(scFv);參見例如，Birdetal. (1988)SciencelAl-ATi_Ali3 ; 和 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. ScL USA85:5879-5883)。此種單鏈抗體也包含在 術(shù)語抗體中。這些通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得，并且所述部分以用于完 整抗體相同的方法篩選以應(yīng)用。
[0180] 類似的，術(shù)語抗體包括蛋白骨架。
[0181] 蛋白骨架提供通用的結(jié)合框架以補(bǔ)充治療單克隆抗體和衍生物如scFvs，F(xiàn)ab分 子，dAbs(單結(jié)構(gòu)域抗體），雙抗體和小抗體的擴(kuò)大的清單。骨架系統(tǒng)或者通過創(chuàng)造新的骨 架，或者修飾已知的蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域，創(chuàng)造或修飾已知蛋白識別結(jié)構(gòu)域。此種骨架包含但不 限于：
[0182] (i)基于蛋白 A 的骨架-affibodies (Nord, K. et al 1997 "Binding proteins selected from combinatorial libraries of an alpha-helical bacterial receptor domain" · Nat Biotechnoll5, 772 - 777)；
[0183] (ii)基于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白的骨架-anticalins (Skerra2008"Alte;rnative binding proteins:anticalins-harnessing the structural plasticity of the lipocalin ligand pocket to engineer novel binding activities" · FEBS J. 275:2677-83)；
[0184] (iii)基于纖連蛋白的骨架-adnectin (Dineen et al2008 "The Adnectin CT-322is a novel VEGF receptor2inhibitor that decreases tumor burden in an 或 thotopic mouse model of pancreatic cancerBMC Cancer8:352)；
[0185] (iv)avimers(Silverman et al2005 "Multivalent avimer proteins evolved by exon shuffling of a family of human receptor domains^ . Nat Biotechnol23:1556-61)；
[0186] (v)基于鋪蛋白的骨架-darpins (Zahnd et al2006 "Selection and characterization of Her2binding_designed ankyrin repeat proteins". J Biol Chem. 281:35167-75);和
[0187] (vi)centyrin骨架-基于蛋白折疊，所述折疊蛋白與具有類似于⑶R的環(huán)的Ig 結(jié)構(gòu)域具有顯著的結(jié)構(gòu)同源性。Ig結(jié)構(gòu)域是人蛋白中普通的構(gòu)件并且作為備選的骨架蛋白 廣泛應(yīng)用。因此，每個上述'骨架'出版物（以其整體）通過參考結(jié)合于此。
[0188] 涉及術(shù)語預(yù)防或治療可以與術(shù)語抑制同義使用。
[0189] 本文描述的氨基酸序列可以包含一個或多個氨基酸取代，缺失或添加。這些改變 優(yōu)選為次要的性質(zhì)，例如保守的氨基酸取代（見下文）和其它不顯著影響抗體的折疊或活 性的取代。
[0190] 保守的氨基酸取代
[0191] 堿性的：精氨酸
[0192] 賴氨酸
[0193] 組氨酸
[0194] 酸性的：谷氨酸
[0195] 天冬氨酸
[0196] 極性的：谷氨酰胺
[0197] 天冬酰胺
[0198] 疏水的：亮氨酸
[0199] 異亮氨酸
[0200] 纈氨酸
[0201] 芳香族的：苯丙氨酸
[0202] 色氨酸
[0203] 酪氨酸
[0204] 小的：甘氨酸
[0205] 丙氨酸
[0206] 絲氨酸
[0207] 蘇氨酸
[0208] 甲硫氨酸
[0209] 除了所述20個標(biāo)準(zhǔn)氨基酸之外，非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸（如4-羥基脯氨酸，6-N-甲基賴 氨酸，2-氨基異丁酸，異纈氨酸和α-甲基絲氨酸）可以替代本發(fā)明多肽的氨基酸殘基。 少數(shù)非保守氨基酸，不由遺傳密碼編碼的氨基酸，和人造氨基酸可以替代天然的多肽氨基 酸殘基。本發(fā)明的多肽還可以包含非天然存在的氨基酸殘基。
[0210] 非天然存在的氨基酸包含但不限于反式-3-甲基脯氨酸，2, 4-亞甲基-脯氨酸， 順式-4-羥基脯氨酸，反式-4-羥基-脯氨酸，Ν-甲基甘氨酸，別蘇氨酸，甲基-蘇氨酸， 羥基-乙基半胱氨酸，羥乙基高胱氨酸，硝基-谷氨酸，高谷氨酸，六氫吡啶羧酸，叔亮 氨酸，正纈氨酸，2-氮雜苯基丙氨酸，3-氮雜苯基丙氨酸，4-氮雜苯基丙氨酸，β -萘基 丙氨酸，β -吡啶基丙氨酸，Ν-胍基-(丁基）-高精氨酸，Ν，Ν'_胍基-(二甲基）-高精 氨酸，Ν, Ν' -胍基-二- (2, 2, 2,-二氟乙基）-商精氨酸，Ν, Ν' -胍基-(甲基，己基）-商 精氨酸，甲基賴氨酸，異丙基賴氨酸，氨甲基苯丙氨酸，氨環(huán)乙基苯丙氨酸，α-氨 基丁酸，4-硫代脯氨酸，Ν-甲基亮氨酸，鳥氨酸，正亮氨酸，5-溴-色氨酸，5-氟-色氨 酸，5-硝基-色氨酸，γ -氨基丁酸，J-巰丙酰，乙酰，青霉胺，和4-氟苯丙氨酸。
[0211] 本領(lǐng)域中已知一些方法用于將非天然存在的氨基酸殘基摻入蛋白。例如，可 以使用體外系統(tǒng)，其中使用化學(xué)氨酰化抑制性tRNA抑制無義突變。合成氨基酸和氨酰 化tRNA的方法在本領(lǐng)域已知。含有無義突變的質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄和翻譯在包含E. coli S30 提取物和市場上可以買到的酶和其它試劑的無細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行。通過層析純化蛋白。參 見，例如，Robertson etal.，J. Am. Chem.Soc. 113:2722, 1991 ;Ellmanetal·，Methods Enzymol. 202:301，1991 ;Chung et al.，Science259:806-9, 1993 ;和 Chung et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:10145-9, 1993)。在第二種方法中，翻譯通過顯微注射突變的 mRNA和化學(xué)氨?；囊种菩蛅RNAs在爪蟾卵母細(xì)胞中進(jìn)行（Turcatti et al.，J.Biol. Chem. 271:19991-8, 1996)。在第三種方法中，E. coli細(xì)胞在不存在將被替換的天然氨基酸 (例如，苯丙氨酸）而存在需要的非天然存在氨基酸（例如，2-氮雜苯基丙氨酸，3-氮雜 苯基丙氨酸，4-氮雜苯基丙氨酸，或4-氟苯丙氨酸）的情況下培養(yǎng)。非天然存在的氨基 酸插入多肽替換其天然的對應(yīng)氨基酸。參見，Koideetal.，Biochem. 33:7470-6,1994。天 然存在的氨基酸殘基可以通過體外化學(xué)修飾轉(zhuǎn)變?yōu)榉翘烊淮嬖诘奈镔|(zhì)?；瘜W(xué)修飾可以與定 點(diǎn)突變組合以進(jìn)一步擴(kuò)大取代的范圍（Wynn和Richards, Protein Sci. 2:395-403, 1993)。
[0212] 許多非保守氨基酸，不由遺傳密碼編碼的氨基酸，非天然存在的氨基酸，和人造 氨基酸可以代替本發(fā)明的多肽的氨基酸殘基。
[0213] 本發(fā)明的多肽中的關(guān)鍵氨基酸可以根據(jù)本領(lǐng)域中已知的工藝鑒別，如定點(diǎn)突 變或丙氨酸掃描突變（Cunningham和Wells, Science244:1081-5, 1989)。生物相互 作用的位點(diǎn)也可以通過結(jié)構(gòu)的物理分析確定，如用像核磁共振，晶體學(xué)，電子衍射或 光親和標(biāo)記的技術(shù)與推定的接觸點(diǎn)氨基酸的突變共同確定。參見，例如，de Vos et al.，Science255:306-12, 1992 ;Smith et al.，J. Mol. Biol. 224:899-904, 1992 ;Wlodaver et al.，F(xiàn)EBS Lett. 309:59-64, 1992。關(guān)鍵氨基酸的身份也可以從與相關(guān)抗體序列的同源性 分析中推定。
[0214] 可以進(jìn)行多重氨基酸取代，且使用已知的突變和篩選方法測試，所述方法 如 Reidhaar-Olson 和 Sauer(Science241:53-7, 1988)或 Bowie 和 Sauer(Proc. Natl. Acad. Sci.USA86:2152-6, 1989)公開的那些。簡要地，這些作者公開的方法如下：同時 隨機(jī)化多肽中的兩個或更多位點(diǎn)，選擇功能性多肽，并然后測序突變多肽以確定在每 個位點(diǎn)的允許的取代的范圍。其它可以使用的方法包含噬菌體展示（例如，Lowman et al.，Biochem. 30:10832-7, 1991 ;Ladner et al.，U. S.專利 No. 5, 223, 409 ;Huse，WIPO 公開 W092/06204)和區(qū)域定向的突變（Derbyshire et al.，Gene46:145, 1986 ;Ner et al.，DNA7:127, 1988)。
[0215] 可以進(jìn)行多重氨基酸取代，且使用已知的突變和篩選方法測試，所述方法 如 Reidhaar-Olson 和 Sauer(Science241:53-7,1988)或 Bowie 和 Sauer(Proc. Natl. Acad. Sci.USA86:2152-6, 1989)公開的那些。簡要地，這些作者公開的方法如下：同時 隨機(jī)化多肽中的兩個或更多位點(diǎn)，選擇功能性多肽，并然后測序突變多肽以確定在每 個位點(diǎn)的允許的取代的范圍。其它可以使用的方法包含噬菌體展示（例如，Lowman et al.，Biochem. 30:10832-7, 1991 ;Ladner et al.，U. S.專利 No. 5, 223, 409 ;Huse，WIP0 公開 W092/06204)和區(qū)域定向的突變（Derbyshire et al.，Gene46:145, 1986 ;Ner et al. ,DNA7:127, 1988) 〇
[0216] SEQ ID NO
[0217] CDR3 (Kabat)
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[0219] SEQ ID NO:2 = RRDWRDY
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[0231] SEQ ID NO: 14 = KSPLVDNEY
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[0236] SEQ ID NO: 19 = SGPGGVIL
[0237] CDR3 (MGT)
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[0252] SEQ ID NO:34 = AVKGFAPFLIGCPWGKAEYDYSEQ ID NO:35 = AATKAFGIATITADYEL
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[0326] SEQ ID NO: 105 = GSFFSRYR
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[0332] SEQ ID NO: 111 = GSAFSINA
[0333] SEQ ID NO: 112 = GSISSIVT
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[0336] 全長 VHH
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[0365] SEQ ID NO: 129 =
[0366] QLQLAESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSTLNNNAIGWFRQAPGKEREGV SCMNSRDGTTNYADSVKGRFT ISRDVAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYFC AVKGFAPFLIGCPWGKAEYDYWGQGTQVTVSS
[0367] SEQ ID NO: 130 =
[0368] QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSAFSINAMGWYRQAPGEEREFV AAITAGGNTYYADSAKARFTI SRDNAKNMLYLQMNSLKPEDTAMYYCA ATKAFGIATITADYELWGQGTQVTVSS
[0369] SEQ ID NO: 131 =
[0370] QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGSISSIVTMGWYRQAPGKERELVA VIGNYGNTNYADSVKGRFTV SRDNAKNTVYLQMNSLNVEDTAMYVCK FSSTVAPHEYWGQGTQVTVSS
[0371] SEQ ID NO: 132 =
[0372] QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASDNIFSFYTMGWYRQSPGKERELVA VIGNGGNTNYADSVKGRFTI SRDNGKNKAHLQMNSLKPEDTAVYYCKA SGPGGVEVWGQGTQVTVSS
[0373] SEQ ID NO: 133 =
[0374] QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASTNIASFYTMGWYRQTPGQQRDVV AVIGNGGNTNYADSVKGRFTI SRDGAKNTAHLQMNSLKPEDTDVYYCK ASGPGGVILWGQGTQVTVSS 實(shí)施例
[0375] 實(shí)施例1:免疫稈序和對流感的免疫反應(yīng)的分析
[0376] 幼年雄性羊能供養(yǎng)在 Royal Veterinary College, Hertfordshire, UK。所有動物 實(shí)驗(yàn)按照Home Office licence80/2117執(zhí)行。免疫前血樣從頸靜脈獲得，這之后以0天，21 天，43天和71天間隔在4條腿之間分配進(jìn)行4次肌肉注射。首次免疫由在400 μ 1無菌 PBS 中的 50 μ g 重組 Hl(A/California/07/09(HlNlpdm) (Protein Sciences?)組成并且正 好在免疫前用800J完全弗氏佐劑（Sigma)乳化。類似的，分別給予三次于不完全弗氏佐 劑（Sigma)中的 50yg 重組 Hl(A/California/07/09(HlNlpdm) (Protein Sciences?)的加 強(qiáng)注射。每次注射后的約3天收集10ml血樣，讓血液在4°C凝集過夜后從所述血樣中制備 血清。在免疫日程的每個階段對A/California/07/09的血清學(xué)反應(yīng)通過ELISA，對一系列 滅活病毒株的血凝抑制試驗(yàn)（HI試驗(yàn)）和使用流行的H1N1病毒株A/California/07/09的 微量中和試驗(yàn)（MN試驗(yàn)）進(jìn)行評估（表1)?？吹綄γ庖咴℉INlpdm)的明顯的反應(yīng)，其隨 著每次后續(xù)的免疫而增加。
【權(quán)利要求】
1. 一種抗體，所述抗體包含氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在N-到C-方向包含以下 結(jié)構(gòu)域： N - FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4 - C 其中FR表示構(gòu)架區(qū)氨基酸序列和CDR表示互補(bǔ)決定區(qū)氨基酸序列； 其中所述CDR3包含羊駝CDR3Vhh結(jié)構(gòu)域氨基酸序列；和 其中所述抗體結(jié)合H1N1流感病毒。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的抗體，其中所述抗體展示對H1和H5流感病毒亞型的抗原交叉反 應(yīng)性。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的抗體，其中所述抗體展示對H2和H9流感病毒亞型 的抗原交叉反應(yīng)性。
4. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體展示對 H2, H5, H6, H9, Hll，H13, H16, H8,和H12流感病毒亞型中的一種或全部的抗原交叉反應(yīng)性。
5. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述⑶R3包含：選自由SEQ ID NO: 1-19組成 的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO: 1-19 中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時，具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。
6. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述⑶R3包含：選自由SEQ ID NO:20-38 組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:20-38中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時，具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。
7. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述⑶R2包含：選自由SEQ ID NO:39-57 組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:39-57中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時，具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。
8. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述⑶R2包含：選自由SEQ ID NO:58-76 組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO:58-76中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時，具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。
9. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述⑶R1包含：選自由SEQIDN0:77-95 組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID NO: 77-95中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時，具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。
10. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述⑶R1包含：選自由SEQ ID N0:96-114 組成的組的氨基酸序列；或其變體氨基酸序列，其中所述變體氨基酸序列當(dāng)與SEQ ID N0:96-114中的相應(yīng)的氨基酸序列相比時，具有最多1或2個氨基酸取代、缺失或插入。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1-10的任一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體包含與選自由SEQ ID NO: 115-133組成的組的氨基酸序列具有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11的抗體，其中所述氨基酸序列包含如在權(quán)利要求5或權(quán)利要求6 中定義的CDR3氨基酸序列。
13. 根據(jù)權(quán)利要求11或權(quán)利要求12的抗體，其中所述氨基酸序列包含如在權(quán)利要求 7或權(quán)利要求8中定義的CDR2氨基酸序列和/或如在權(quán)利要求9或權(quán)利要求10中定義的 ⑶R1氨基酸序列。
14. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體由單結(jié)構(gòu)域抗體或蛋白骨架抗體 組成或包含單結(jié)構(gòu)域抗體或蛋白骨架抗體。
15. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體包含兩個或三個或四個或更多個 如權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所定義的VHH結(jié)構(gòu)域或由兩個或三個或四個或更多個如權(quán)利要求 1-13任一項(xiàng)所定義的VHH結(jié)構(gòu)域組成，其中所述兩個或三個或四個或更多個VHH結(jié)構(gòu)域是相 同的或不同的； 優(yōu)選其中所述兩個或三個或四個或更多個VHH結(jié)構(gòu)域是不同的，并且其中所述不同的 結(jié)構(gòu)域結(jié)合和/或中和不同的流感病毒類型或亞型。
16. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體由人源化抗體組成或包含人源化 抗體。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16的抗體，其中所述抗體包含如在權(quán)利要求5或權(quán)利要求6中所定 義的⑶R3氨基酸序列。
18. 根據(jù)權(quán)利要求16或權(quán)利要求17的抗體，其中所述抗體包含如在權(quán)利要求7或權(quán) 利要求8中所定義的CDR2氨基酸序列和/或如在權(quán)利要求9或權(quán)利要求10中所定義的 ⑶R1氨基酸序列。
19. 根據(jù)權(quán)利要求16-18任一項(xiàng)的抗體，其中一個或多個選自FR1，F(xiàn)R2, FR3和FR4的 FR氨基酸序列是非人氨基酸序列并且包括一個或多個氨基酸修飾（例如取代、缺失或插 入）； 其中所述氨基酸修飾通過將所述非人氨基酸序列與相應(yīng)的人抗體氨基酸序列進(jìn)行比 對來選擇，并且其中所述修飾構(gòu)成存在于（或不存在于）位于所述人抗體氨基酸序列的特 定氨基酸位置上的氨基酸殘基，所述特定氨基酸位置不同于位于所述抗體的非人氨基酸序 列的同一氨基酸位置。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19的抗體，其包含至多20或至多15或至多10或至多5個氨基酸 修飾。
21. 根據(jù)權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體是人抗體，所述人抗體缺少一個 或多個人CDR3VHH氨基酸序列，并且在其適當(dāng)?shù)奈恢糜梢粋€或多個如在權(quán)利要求5或權(quán)利 要求6中定義的CDR3Vhh氨基酸序列組成或包含一個或多個如在權(quán)利要求5或權(quán)利要求6 中定義的⑶R3V HH氨基酸序列。
22. 根據(jù)權(quán)利要求21的抗體，其中所述抗體缺少一個或多個人VHH氨基酸序列，并且 在其適當(dāng)?shù)奈恢糜梢粋€或多個如權(quán)利要求1-13的任一項(xiàng)所定義的Vhh氨基酸序列組成或包 含一個或多個如權(quán)利要求1-13的任一項(xiàng)所定義的Vhh氨基酸序列。
23. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體展示針對H1 (例如H1N1)流感病 毒的中和活性，例如針對毒株A/California/06/09和/或A/California/7/2009和/或 A/Brisbane/59/2007 的中和活性。
24. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體展示針對H5 (例如H5N1或H5N3) 流感病毒的中和活性，例如針對毒株A/Vietnam/1203/2004和/或A/Vietnam/1194/04和 /或A/Vietnam/119/2004和 /或HongKong/213/2003和 /或A/turkey/Turkey/1/2005和 / 或 A/Indonesia/05/2005 和 / 或 A/Duck/Singapore-Q/119-3/97 的中和活性。
25. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體展示針對H2流感病毒（例如H2N2 或H2N3)的中和活性，例如針對毒株A/Japan/305/1957和/或A/Mallard/Eng/727/06的 中和活性。
26. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體展示針對H9流感病毒（例如 H9N2)的中和活性，例如針對毒株A/HongKong/1073/99的中和活性。
27. 根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其中所述抗體展示針對一種、或多種或所有選 自由Hl，H2, H5, H6, Hll，H13, H16, H9, H8和/或H12流感病毒組成的組的I類血細(xì)胞凝集素 流感病毒的中和活性。
28. -個或多個根據(jù)任一項(xiàng)在前權(quán)利要求的抗體，其用于預(yù)防或治療流感病毒感染。
29. -個或多個根據(jù)權(quán)利要求1-27的任一項(xiàng)的抗體，其用作試劑以檢測選自以下的流 感病毒亞型的存在： a. H1和H5亞型；或 b. H1和H5和H2和H9亞型；或 c. H1和H5和H6和H11和H13和H16和H8和H12亞型；或 d. I類血細(xì)胞凝集素流感病毒亞型；或 用于證實(shí)不存在選自以下的流感病毒亞型： a. H3和H7亞型； b. II類血細(xì)胞凝集素流感病毒亞型。
30. -個或多個根據(jù)權(quán)利要求1-27的任一項(xiàng)的抗體，其用作用于評估流感病毒疫苗效 力的測定中的試劑。
31. -個或多個根據(jù)權(quán)利要求1-27的任一項(xiàng)的抗體，其用作用于評估流感病毒疫苗針 對不同的類型和/或亞型的流感病毒的交叉反應(yīng)性的測定中的試劑。
32. -個或多個根據(jù)權(quán)利要求1-27的任一項(xiàng)的抗體，其用作試劑以濃縮存在于樣品中 的血細(xì)胞凝集素和/或?qū)Υ嬖谟跇悠分械难?xì)胞凝集素的量進(jìn)行定量。
33. -個或多個根據(jù)權(quán)利要求1-27的任一項(xiàng)的抗體，其用作試劑以分離抗獨(dú)特型血細(xì) 胞凝集素抗體。
34. -個或多個根據(jù)權(quán)利要求1-27的任一項(xiàng)的抗體，其用作試劑以設(shè)計通用流感疫 苗。
【文檔編號】A61P31/16GK104053453SQ201280053282
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2012年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月2日
【發(fā)明者】西蒙·赫夫湯 申請人:英國衛(wèi)生部