結(jié)合胰高血糖素的核酸的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及能夠結(jié)合胰高血糖素的核酸分子，其中所述核酸分子選自A型的核酸分子、B型的核酸分子和C型的核酸分子。
【專利說明】結(jié)合胰高血糖素的核酸
[0001] 本發(fā)明涉及能夠結(jié)合胰高血糖素的核酸分子、其用于分別制造藥劑、診斷劑和檢測(cè)劑的用途、包含這樣的核酸分子的組合物、包含這樣的核酸分子的復(fù)合物、用于使用這樣的核酸分子篩選由胰高血糖素介導(dǎo)的活性的拮抗劑的方法以及用于檢測(cè)這樣的核酸分子的方法。
[0002]糖尿病(縮寫DM)顯示世界范圍內(nèi)(特別是亞洲)流行的令人震驚的增加，其主要由2型糖尿病(縮寫DM2)驅(qū)動(dòng)。美國(guó)的數(shù)據(jù)顯示在2001年，相較于1990年的4.9%，有7.9%的18歲及以上的人被診斷為糖尿病。發(fā)病率與年齡和人體質(zhì)量指數(shù)相關(guān)。數(shù)學(xué)模型預(yù)測(cè)對(duì)于美國(guó)2000年出生的男性，發(fā)生糖尿病的概率為33%，對(duì)于女性甚至更高，為39%。相同模型預(yù)測(cè)對(duì)于這些男性壽命減損9年，對(duì)于女性壽命減損12年。主要風(fēng)險(xiǎn)因子例如肥胖、缺乏體育活動(dòng)是公知的，但已發(fā)現(xiàn)他們極難被影響。令人震驚的趨勢(shì)使得對(duì)適合用于治療DM2的新型治療劑的探索更加緊迫。理想的藥劑不應(yīng)當(dāng)僅降低血糖，而且還應(yīng)當(dāng)對(duì)于體重而言至少是中性的以及還降低甘油三酯。
[0003]盡管目前可獲得數(shù)種抗高血糖藥，但仍然存在對(duì)具有不同作用機(jī)制的新型藥物的緊迫需要?，F(xiàn)有試劑通常是無效的或隨時(shí)間而變得不太有效和/或與相當(dāng)大的副作用相關(guān)。兩種類型的不利事件特別常見，令人不安和潛在地有害:體重增加和低血糖癥。例外是試劑二甲雙胍和阿卡波糖。然而，它們通常僅用于DM2的早期或不太嚴(yán)重的形式，具有有限的功效，并且通常存在胃腸道副作用。此外，疾病的二甲雙胍治療與威脅生命的乳酸酸中毒的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，特別是在具有慢性腎功能和心臟衰竭的老年患者中。
[0004]除了經(jīng)典試劑以外，新型藥物已在過去十年進(jìn)入市場(chǎng)。然而，這些藥物的大部分受到不太高的功效或在目標(biāo)群體中值得特別關(guān)注的副作用的限制。胰高血糖素樣肽(縮寫GLP-1)類似物(也稱為腸促胰島素)或GLP-1-降解酶的抑制劑二肽基-肽酶-4 (縮寫DPPIV)僅被批準(zhǔn)用于其它試劑已證明無效的病例，并且在抗高血糖作用方面僅顯示不太高的功效。然而，腸促胰島素的可注射形式確實(shí)至少具有有利的體重變化譜的有利方面(Amori，Lau等人2007)。利用這些試劑的療法通常需要注射長(zhǎng)效胰島素，來預(yù)防空腹高血糖癥。另一個(gè)相對(duì)新的物質(zhì)種類，用作PPAR激動(dòng)劑的噻唑烷二酮類最近已成為關(guān)注它們的心血管副作用的論述的主題，其已導(dǎo)致歐洲(EMA2010)的上市許可暫停和在美國(guó)(FDA2011)對(duì)于羅格列酮的更加受控制的處方條例。這由羅格列酮與心力衰竭、心肌梗塞和心力衰竭的死亡的關(guān)聯(lián)性觸發(fā)(Nissen和Wolski2007)。該類的另一成員曲格列酮因藥物誘發(fā)的肝損傷而被下市。第三種噻唑烷二酮，吡格列酮的銷售在研究表明藥物(商標(biāo)名ActOS?)增加膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)(Takeda press release, 2011年7月11日)后在法國(guó)被暫停。
[0005]雖然大部分目前使用的藥物著眼于在胰島素本身或胰島素活性的相對(duì)缺乏上，但許多研究支持DM2為至少雙激素障礙(其特征在于與胰島素缺乏或胰島素抵抗組合的不適當(dāng)?shù)馗叩囊雀哐撬厮?的概念(Jiang和Zhang2003)。
[0006]胰高血糖素是與胰島素一樣在胰腺中產(chǎn)生的激素，但其在周緣組織，特別是在肝中具有與胰島素相反的作用。此處其主要誘導(dǎo)糖原異生和糖原分解以穩(wěn)定膳食之間的血糖水平。
[0007]在大多數(shù)糖尿病患者中，已報(bào)導(dǎo)了在混合膳食或碳水化合物攝入后循環(huán)胰高血糖素水平的反常升聞(Ohneda, Watanabe等人1978)。這被視為對(duì)升聞的餐后血糖水平的主要貢獻(xiàn)者，其在DM的微血管和大血管并發(fā)癥的病理生理學(xué)中起著重要作用(Gin和Rigalleau2000)。
[0008]因此，利用不同方法阻斷胰高血糖素的作用已被廣泛研究。已報(bào)導(dǎo)了許多肽基和非肽基小分子胰高血糖素受體拮抗劑(Jiang和Zhang2003)。這些通常具有相當(dāng)?shù)偷膶?duì)于胰高血糖素受體的小分子拮抗劑中的一些已顯示在動(dòng)物模型中降低空腹血糖或阻斷外源胰高血糖素-刺激的血糖升高。已顯示非肽基小分子胰高血糖素受體拮抗劑在人體中以劑量依賴性方式阻斷胰高血糖素-誘發(fā)的肝葡萄糖產(chǎn)生和血糖的升高(Petersen和Sullivan2001)。更近期以來，通過反義寡核苷酸減少db/db-小鼠的胰高血糖素受體表達(dá)導(dǎo)致血糖、游離脂肪酸和甘油三酯的減少而不發(fā)生低血糖癥(Liang, Osborne等人2004)。這些作用對(duì)于DM2患者是理想的。[0009]除那以外，發(fā)現(xiàn)胰高血糖素受體敲除小鼠是存活的并且顯示僅輕度的低血糖癥、改善的葡萄糖耐受性和升高的胰高血糖素水平的體征。它們對(duì)飲食誘發(fā)的肥胖具有抗性(Conarello, Jiang等人2007),并且具有更高的胰島素敏感性,這在β -細(xì)胞缺乏的情況下可以是有益的(Sorensen, Winzell等人2006)。此外,胰高血糖素受體敲除小鼠對(duì)鏈脲霉素-誘發(fā)的“I型糖尿病表型”具有抗性，即，它們?cè)诳崭範(fàn)顟B(tài)以及在口服和腹膜內(nèi)葡萄糖耐受性測(cè)試后顯示血糖量正常(Lee, Wang等人2011)。
[0010]單克隆抗體對(duì)胰高血糖素本身的中和還導(dǎo)致血糖、甘油三酯、HbAlc和肝葡萄糖輸出量的急性和持續(xù)減少(Brand, Rolin等人1994 ；Sorensen, Brand等人2006)。然而，由于它們潛在的免疫原性，這些和其它抗體可能不是用于DM的長(zhǎng)期治療的可行選擇。
[0011]基本上，通過降低胰高血糖素水平/活性進(jìn)行治療干預(yù)的嘗試已產(chǎn)生許多支持胰高血糖素拮抗的概念、但未曾導(dǎo)致具有足夠效力的化合物或具有不可接受的肝毒性的化合物的結(jié)果。
[0012]激素胃抑肽(縮寫GIP)(與胰高血糖素具有序列相似性的42個(gè)氨基酸長(zhǎng)的肽)從主要位于十二指腸和近端空腸中的K細(xì)胞釋放。其在營(yíng)養(yǎng)物、特別是葡萄糖或脂肪攝入后分泌，脂肪是人的GIP分泌的最有力的刺激物。
[0013]GIP受體是具有7個(gè)跨膜螺旋的典型G蛋白偶聯(lián)受體。發(fā)現(xiàn)GIP受體基因在胰腺、胃、小腸、脂肪組織、腎上腺皮質(zhì)、垂體、心臟、睪丸、內(nèi)皮細(xì)胞、骨細(xì)胞、氣管、脾、胸腺、肺、腎、甲狀腺和腦的若干區(qū)域中表達(dá)。
[0014]GIP正如其名稱所示，不僅誘導(dǎo)胰島素釋放，而且還在脂質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡中起作用，并且可能是肥胖發(fā)生所必需的，如通過幾個(gè)動(dòng)物研究(Asmar2011)顯示的:每日施用GIP受體拮抗劑Pro3-GIP，進(jìn)行50天，在年長(zhǎng)的高脂肪飼喂的糖尿病小鼠中產(chǎn)生減輕的體重，減少的脂肪組織的積累，以及葡萄糖、糖化血紅蛋白和胰腺胰島素的水平的顯著提高，以及肌肉和肝中的甘油三酯水平的降低。未觀察到高脂肪飲食攝取的變化(McClean，Irwin等人2007)。指向相同方向，發(fā)現(xiàn)GIP受體敲除小鼠對(duì)肥胖的發(fā)生具有抗性，然而飼以相同高脂肪飲食的野生型小鼠顯示GIP的分泌過多和極度內(nèi)臟和皮下脂肪沉積，具有胰島素抵抗(Miyawaki, Yamada等人2002)。然而，口服葡萄糖載荷后早期胰島素反應(yīng)被削弱，導(dǎo)致更高的血糖水平(Miyawaki, Yamada等人1999)。GIP對(duì)肥胖的貢獻(xiàn)的詳細(xì)描述還可見于Irwin和Flatt的最近的綜述(Irwin和Flatt2009)。
[0015]與胰高血糖素序列相關(guān)并且從相同基因轉(zhuǎn)錄的的其它肽為
[0016]?腸高血糖素
[0017].腸高血糖素-相關(guān)多肽
[0018].胃泌酸調(diào)節(jié)素
[0019].GLP-1 及其活性形式 GLP-1 (7-36)和 GLP-1 (7-37)
[0020].GLP-2
[0021]此外，還存在相關(guān)多肽
[0022].前原血管活性腸肽(81-122)(前原-VIP/腸肽PHV-42)
[0023]這些肽的氨基酸序列的比對(duì)示于圖21中。
[0024]本發(fā)明要解決的問題是提供與胰高血糖素和/或GIP特異性相互作用的裝置，其中所述裝置適合用于 預(yù)防和/或治療糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、糖尿病病況和/或高胰增血糖素血癥。
[0025]本發(fā)明要解決的這些和其它問題通過所附獨(dú)立的權(quán)利要求的主題得以解決。優(yōu)選實(shí)施方案可采自從屬權(quán)利要求。
[0026]本發(fā)明要解決的問題在也是第一方面、也是第一方面的第一實(shí)施方案中通過能夠結(jié)合胰高血糖素的核酸分子得以解決，其中所述核酸分子選自A型的核酸分子、B型的核酸分子和C型的核酸分子。
[0027]在第一方面的第2實(shí)施方案、也是第一方面的第I實(shí)施方案的實(shí)施方案中，核酸分子為A型的核酸分子，其中A型的核酸分子包含中央核苷酸區(qū)段，其中中央核苷酸區(qū)段包含如下核苷酸序列:
[0028]5J Bn1AAATGn2GAn3H4GCTAKGn5GGn6Ii7GGAATCTRRRSJ [SEQ ID NO:173]，其中
[0029]Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 Y 或 rT, n6 為 A 或 rA,n7為A或rA,并且其中
[0030]G、A、T、C、B、K、Y和R的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，和
[0031]rG, rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0032]在第一方面的第3實(shí)施方案、也是第一方面的第2實(shí)施方案的實(shí)施方式中，中央核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列:
[0033]5J Bn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGARSJ [SEQ ID NO:174]，其中
[0034]Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 T 或 rT, n6 為 A 或 rA,n7為A或rA,并且其中
[0035]G、A、T、C、B和R的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，和
[0036]rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0037]在第一方面的第4實(shí)施方案、也是第一方面的第2和第3實(shí)施方案的實(shí)施方式中，中央核苷酸區(qū)段包含選自如下序列的核苷酸序列:
[0038]5J Tn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAGSJ [SEQ ID NO:175]，
[0039]5J Tn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAASJ [SEQ ID NO:176]，
[0040]5J Cn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAGSJ [SEQ ID NO: 177]，和[0041]5J Gn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAGSJ [SEQ ID NO:178]，
[0042]其中
[0043]Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 T 或;rT, n6 為 A 或 rA,n7為A或rA,并且其中
[0044]G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，和
[0045]rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0046]在第一方面的第5實(shí)施方案、也是第一方面的第2、第3、和第4實(shí)施方案的實(shí)施方式中，中央核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列:
[0047]5J Gn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAGSJ [SEQ ID NO:178]，
[0048]其中
[0049]Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 T 或 rT, n6 為 A 或 rA,n7為A或rA,并且其中
[0050]G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，和
[0051]rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0052]在第一方面的第6實(shí)施方案、也是第一方面的第2、3和4實(shí)施方案的實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列:
[0053]5J Cn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAGSJ [SEQ ID NO:177]，
[0054]其中
[0055]Ii1 為 G 或 rG，n2 為 G 或 rG，n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG，n5 為 T 或 rT，n6 為 A 或 rA,n7為A或rA,并且
[0056]G、A、T和C為2’ -脫氧核糖核苷酸，和
[0057]rG、rA和rT為核糖核苷酸。
[0058]在第一方面的第7實(shí)施方案、也是第一方面的第2、3、4、5和6實(shí)施方案的實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段由2’ -脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸組成。
[0059]在第一方面的第8實(shí)施方案、也是第一方面的第2、3、4、5、6和7實(shí)施方案的實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段包含選自如下序列的核苷酸序列
[0060]5，GrGAAATGGGAGGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:179],
[0061]5，GGAAATGrGGAGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:180],
[0062]5，GGAAATGGGArGGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:181],
[0063]5，GGAAATGGGAGrGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:182],
[0064]5，GGAAATGGGAGGGCTAGGTGGrAAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:183],
[0065]5’GGAAATGGGAGGGCTAGGTGGArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:184]；
[0066]5，GGAAATGrGGAGGGCTAGGTGGrAAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:185],
[0067]5’GGAAATGGGAGGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:186],
[0068]5，GGAAATGrGGAGGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:187],
[0069]5，GGAAATGGGArGGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:188],
[0070]5，GrGAAATGrGGArGGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:189],
[0071]5，GrGAAATGrGGArGrGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3，[SEQ ID NO:190]和
[0072]5’GrGAAATGrGGArGrGGCTAGGrTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:191]，[0073]其中
[0074]G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，和
[0075]rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0076]在也是第一方面的第2、3、4、5和6實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第9實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段由2’ -脫氧核糖核苷酸組成。
[0077]在也是第一方面的第2、3、4、5、7、8和9實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第10實(shí)施方案中，核酸分子以5’ ->3’方向包含第一末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第二末端核苷酸區(qū)段，其中
[0078]第一末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸，和
[0079]第二末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸。
[0080]在也是第一方面的第2、3、4、5、7、8和9實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第11實(shí)施方案中，核酸分子以5’ ->3’方向包含第二末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第一末端核苷酸區(qū)段，其中
[0081]第一末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸，和
[0082]第二末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸。
[0083]在也是第一方面的第10和第11實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第12實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸 5’ BZ7Z8Z9Z1QZnZ123’，
[0084]其中
[0085]Z1為G或不存在，Z2為S或不存在，Z3為V或不存在，Z4為B或不存在，Z5為B或不存在，Z6為V或不存在，Z7為B或不存在，Z8為V或不存在，Z9為V或不存在，Zltl為B或不存在，Z11為S或不存在，并且Z12為C或不存在。
[0086]在也是第一方面的第10、11和12實(shí)施方案的第一方面的第13實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5，BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0087]其中
[0088]a) Z1 為 G，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 V, Z7 為 B，Z8 為 V, Z9 為 V, Z10 為 B，Z11為S，并且Z12為C，或
[0089]b) Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B, Z6 為 V，Z7 為 B, Z8 為 V，Z9 為 V，Z10 為B，Z11為S，并且Z12為C，或
[0090]c) Z1 為 G，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 V, Z7 為 B，Z8 為 V, Z9 為 V, Z10 為 B，Z11為S，并且Z12不存在，
[0091]優(yōu)選地
[0092]a) Z1 為 G，Z2 為 C，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 Y，Z6 為 R，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 V, Z10 為 Y，Z11為G，并且Z12為C，或
[0093]b) Z1 不存在，Z2 為 C，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 Y，Z6 為 R，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 V, Z10 為Y，Z11為G，并且Z12為C，或
[0094]c) Z1 為 G，Z2 為 C，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 Y，Z6 為 R，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 V, Z10 為 Y，Z11為G，并且Z12不存在。[0095]在也是第一方面的第13實(shí)施方案的第一方面的第14實(shí)施方案中，
[0096]a)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCACTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCAGTGC3’，或
[0097]b)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCACTGA3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCAGTGC3’，或
[0098]c)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCAGTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ TCACTGC3’，或
[0099]d)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCACTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTACTGC3’，或
[0100]e)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGCTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCAGTGC3’，或
[0101]f)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGCCAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ TCGGCGC3’。
[0102]在也是第一方面的第10、11和12實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第15實(shí)施方案中，第一末端 核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5，BZ7Z8Z9Z10ZnZ123，，
[0103]其中
[0104]a) Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V, Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 V，Z7 為 B，Z8 為 V，Z9 為 V, Z10 為B, Z11為S，并且Z12不存在，或
[0105]b) Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V, Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 V，Z7 為 B，Z8 為 V，Z9 為 C，Z10 為B，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0106]c) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 V，Z4 為 B, Z5 為 B，Z6 為 V，Z7 為 B，Z8 為 V，Z9 為 C，Z10為B，Z11為S，并且Z12不存在，
[0107]優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0108]其中
[0109]a) Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V, Z4 為 G，Z5 為 Y，Z6 為 S，Z7 為 B，Z8 為 R，Z9 為 C，Z10 為B, Z11為S，并且Z12不存在，或
[0110]b) Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V, Z4 為 G，Z5 為 Y，Z6 為 S，Z7 為 B，Z8 為 R，Z9 為 C，Z10 為B，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0111]c) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 V，Z4 為 G，Z5 為 Y，Z6 為 S，Z7 為 B，Z8 為 R，Z9 為 C，Z10為B，Z11為S，并且Z12不存在。
[0112]在也是第一方面的第15實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第16實(shí)施方案中，
[0113]a)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTGCGC3’，或
[0114]b)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCGC3’，或
[0115]c)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GGGCCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGGCCC3’，或[0116] d)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGCCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGGCGC3’，或
[0117]e)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GAGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCTC3’，或
[0118]f)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCACGC3’，或
[0119]g)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGTCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGACGC3’。
[0120]在也是第一方面的第10、11和12實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第17實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，BZ7Z8Z9Z10ZnZ123，，其中
[0121]a) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 V，Z4 為 B, Z5 為 B，Z6 為 V，Z7 為 B，Z8 為 V，Z9 為 V，Z10為B，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0122]b) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 V，Z4 為 B, Z5 為 B，Z6 為 V，Z7 為 B，Z8 為 V，Z9 為 V，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0123]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B, Z8為V，Z9為V,Z10為B, Z11不存在并且Z12不存在，
[0124]優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CZ7Z8Z9ZltlZ11Z1J’，
[0125]其中
[0126]a) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 V，Z4 為 G，Z5 為 Y，Z6 為 G，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 C，Zltl為B，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0127]b) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 V，Z4 為 G，Z5 為 Y，Z6 為 G，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 C，Zltl不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0128]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10為B, Z11不存在并且Z12不存在。
[0129]在也是第一方面的第17實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第18實(shí)施方案中，
[0130]a)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCC3’，或
[0131]b)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCG3’。
[0132]在也是第一方面的第10、11和12實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第19實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，BZ7Z8Z9Z10ZnZ123，，其中
[0133]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B, Z8為V，Z9為V,Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0134]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0135]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B, Z8為V，Z9為V,Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，
[0136]優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CZ7Z8Z9ZltlZ11Z1J’，
[0137]其中
[0138]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0139]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0140]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。[0141]在也是第一方面的第19實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第20實(shí)施方案中,所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGC3’。
[0142]在也是第一方面的第10、11和12實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第21實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ BZ7Z8Z9Z1QZnZ123’，其中
[0143]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為V，Z7為B，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0144]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為V，Z7為B, Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0145]^Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為V，Z7為B, Z8為V,Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，
[0146]優(yōu)選地所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CZ7Z8Z9ZltlZ11Z1J’，
[0147]其中
[0148]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為S，Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0149]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為S，Z6為S，Z7為S Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0150]c)Z,不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
[0151]在也是第一方面的第21實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第22實(shí)施方案中，所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5’ CGC3’。
[0152]在也是第一方面的第10、11和12實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第23實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，BZ7Z8Z9Z10ZnZ123，，其中
[0153]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為V，Z7為B, Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，[0154]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為V，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，
[0155]^Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7為B，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，
[0156](I)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，
[0157]優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CZ7Z8Z9ZltlZ11Z1J’，
[0158]其中
[0159]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為G，Z7為C，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0160]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
[0161]在也是第一方面的第 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22和23實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第24實(shí)施方案中，核酸分子包含選自SEQ IDNO:6和SEQ ID NO:7的核苷酸序列，或
[0162]其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的核苷酸序列的核酸分子具有至少85 %的同一性，或
[0163]其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的核苷酸序列的核酸分子同源，其中所述同源性為至少85%。
[0164]在也是第一方面的第2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22和23實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第25實(shí)施方案中，核酸分子包含選自SEQ IDNO:23, SEQ ID NO:43，SEQ ID NO:47，SEQ ID NO:48，SEQ ID NO:91，SEQ ID NO:92，SEQ IDNO:158和SEQ ID NO:159的核苷酸序列，或
[0165]所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:43，SEQ ID NO:47，SEQ IDNO:48, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:158 和 SEQ ID NO:159 的核苷酸序列的核酸分子具有至少85%的同一性，或
[0166]所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:43，SEQ ID NO:47，SEQ ID NO:48，SEQ IDNO:91, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:158和SEQ ID NO:159的核苷酸序列的核酸分子同源，其中所述同源性為至少85%。
[0167]在也是第一方面的第I實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第26實(shí)施方案中，核酸分子為B型的核酸分子，其中所述B型的核酸分子包含29至32個(gè)核苷酸的中央?yún)^(qū)段，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含選自如下序列的核苷酸序列:
[0168]5J -AKGARn1KGTTGSYAffAn2RTTCGn3TTGGAn4TCn5- ‘3 [SEQ ID NO:197]，
[0169]5’-AGAAGGTTGGTAAGTTTCGGTTGGATCTG- ‘3[SEQ ID NO:198],
[0170]5’-AGAAGGTCGGTAAGTTTCGGTAGGATCTG- ‘3[SEQ ID NO:199],
[0171]5，-AGGAAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGATTCA- ‘3[SEQ ID NO:200],
[0172]5’ -AGGAAAGGTTGGTAAGGTTCGGTTGGATTCA- ‘3[SEQ ID NO:201]和
[0173]5’-AGGAAGGTTGGTAAGGTTCGGTTGGATTCA- ‘3[SEQ ID NO:202],[0174]其中Ii1為A或rA, n2為G或rG, n3為G或rG, n4為T或rU, n5為A或rA,并且其中
[0175]G、A、T、C、K、Y、S、W和R的任一個(gè)為2，-脫氧核糖核苷酸，和
[0176]rG、rA和rU的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0177]在也是第一方面的第26實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第27實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列:
[0178]5J AGGAAn1GGTTGGTAAAn2GTTCGn3TTGGAn4TCn5SJ [SEQ ID NO:203],
[0179]其中II1為A或rA, n2為G或rG, n3為G或rG, n4為T或rU, n5為A或rA,并且其中
[0180]G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，和
[0181]rG、rA和rU的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0182]在也是第一方面的第26和27實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第28實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段由2’ -脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸組成。
[0183]在也是第一方面的第26、27和28實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第29實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段包含選自如下序列的核苷酸序列:
[0184]5’AGGAArAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGATTCA3’ [SEQ ID NO:204]，
[0185]5’AGGAAAGGTTGGTAAArGGTTCGGTTGGATTCA3’ [SEQ ID NO:205]，
[0186]5’AGGAAAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGArUTCA3’ [SEQ ID NO:206]，
[0187]5’AGGAArAGGTTGGTAAArGGTTCGGTTGGATTCA3’ [SEQ ID NO:207]，
[0188]5’AGGAArAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGArUTCG3’ [SEQ ID NO:208]，
[0189]5’AGGAArAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGArUTCA3’ [SEQ ID NO:209]，
[0190]5，AGGAArAGGTTGGTAAArGGTTCGGTTGGArUTCA3，[SEQ ID NO:210]和
[0191]5’AGGAArAGGTTGGTAAArGGTTCGrGTTGGArUTCrA3’ [SEQ ID NO:211]，
[0192]其中G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且
[0193]rG、rA和rU的任一個(gè)為核糖核苷酸。
[0194]在也是第一方面的第26和27實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第30實(shí)施方案中，中央核苷酸區(qū)段由2’ -脫氧核糖核苷酸組成。
[0195]在也是第一方面的第26、27、28、29和30實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第31實(shí)施方案中，核酸分子以5’ ->3’方向包含第一末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第二末端核苷酸區(qū)段，其中
[0196]第一末端核苷酸區(qū)段包含3至9個(gè)核苷酸，和
[0197]第二末端核苷酸區(qū)段包含3至10個(gè)核苷酸。
[0198]在也是第一方面的第26、27、28、29和30實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第32實(shí)施方案中，核酸分子以5’ ->3’方向包含第二末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第一末端核苷酸區(qū)段，其中
[0199]第一末端核苷酸區(qū)段包含3至9個(gè)核苷酸，和
[0200]第二末端核苷酸區(qū)段包含3至10個(gè)核苷酸。
[0201] 在也是第一方面的第31和32實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第33實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0202]其中
[0203]Z1為C或不存在，Z2為G或不存在，Z3為R或不存在，Z4為B或不存在，Z5為B或不存在，Z6為S或不存在，Z7為S或不存在，Z8為V或不存在，Z9為V或不存在，Zltl為K或不存在，Z11為M或不存在，并且Z12為S或不存在。
[0204]在也是第一方面的第31、32和33實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第34實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAKS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，CKVZ7Z8Z9ZltlZ11Z1J’，其中
[0205]a) Z1 為 C，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V, Z9 為 N，Z10 為 K，Z11為M，并且Z12為S，或
[0206]b) Z1 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V，Z9 為 N，Z10 為K, Z11為M,并且Z12為S,或
[0207]c) Z1 為 C，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V, Z9 為 N，Z10 為 K，Z11為M，并且Z12不存在，
[0208]優(yōu)選地所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0209]其中
[0210]a) Zl 為 C，Z2 為 G, Z3 為 R，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A, Z9 為 G, ZlO為T，Z11為C，并且Ζ12為G，或
[0211]b)Zl 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A，Z9 為 G，ZlO為T，Zll為C，并且Z12為G，或
[0212]c) Z1 為 C，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A，Z9 為 G，Z10 為 T，Z11為C，并且Z12不存在。
[0213]在也是第一方面的第34實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第35實(shí)施方案中，
[0214]a)第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGACTCGAG3’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAGTCG3’，或
[0215]b)第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGGCTCGAG3’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAGTCG3’。
[0216]在也是第一方面的第31、32和33實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第36實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAKS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5，CKVZ7Z8Z9Z10ZnZ123，，
[0217]其中
[0218]a) Z1 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V，Z9 為 N，Z10 為K, Z11為M,并且Z12不存在,或
[0219]b) Z1 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V，Z9 為 N，Z10 為K，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0220]c) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V, Z9 為 N，Z10 為K，Z11為M,并且Z12不存在。
[0221]在也是第一方面的第31、32和33實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第37實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAKS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5’ CKVZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0222]其中
[0223]a) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V, Z9 為 N，Z10為K，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0224]b) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V, Z9 為 N，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0225]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N，Z10為K，Z11不存在并且Z12不存在，
[0226]優(yōu)選第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0227]其中
[0228]a) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 A，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A，Z9 為 G，Zltl為T，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0229]b) Z1 不存在，Z2 不存在，Z3 為 A，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A，Z9 為 G，Zltl不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0230]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為C，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9為G，Z10為T，Z11不存在并且Z12不存在，
[0231]優(yōu)選Z1不存在，Z2不存在，Z3為A，Z4為C，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9為G，
Z10為T，Z11不存在并且Z12不存在。
[0232]在也是第一方面的第31、32和33實(shí)施方案的第一方面的第38實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAKS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5’ CKVZ7Z8Z9Z1QZnZ123’，
[0233]其中
[0234]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0235]b) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0236]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，
[0237]優(yōu)選第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAGS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTSZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0238]其中
[0239]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9為V,Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0240]b) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9為V, Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0241]^Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。[0242]在也是第一方面的第38實(shí)施方案的第一方面的第39實(shí)施方案中，
[0243]a)第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GTCGAG3’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAC3’，或
[0244]b)第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ TGCGAG3’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGCA3’，或
[0245]c)第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GGCCAG3’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTGGCC3’，或
[0246]d)第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCCGAG3’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGGC3’，或
[0247]e)第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAG3’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAG3’。
[0248]在也是第一方面的第31、32和33實(shí)施方案的第一方面的第40實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAKS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5’ CKVZ7Z8Z9 Z1QZnZ123’，
[0249]其中
[0250]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0251]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0252]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7為S，Z8為V,Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，
[0253]其中優(yōu)選第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，CTCZ7Z8Z9ZiciZ11Z1J’，
[0254]其中
[0255]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0256]b) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為T，Z6為C，Z7為G, Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0257]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
[0258]在也是第一方面的第31、32和33實(shí)施方案的第一方面的第41實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAKS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5’ CKVZ7Z8Z9Z1QZnZ123’，
[0259]其中
[0260]a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7為S，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0261]WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7為S，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0262]c) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
[0263]在也是第一方面的第31、32和33實(shí)施方案的第一方面的第42實(shí)施方案中，第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAKS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列 5’ CKVZ7Z8Z9Z1QZnZ123’，
[0264]其中Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或
[0265]其中第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’，
[0266]其中Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
[0267]在也是第一方面的第26、27、28、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41 和 42 實(shí)施方案的第一方面第43實(shí)施方案中，核酸分子包含選自SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:54、SEQID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:88 和 SEQ ID NO:155 的核苷酸序列，或
[0268]核酸分子與包含選自SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59,SEQ ID N0:88和SEQ ID NO:155的核苷酸序列的核酸分子具有至少85%的同一性，或 [0269]核酸分子與包含選自SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:
59、SEQ ID N0:88和SEQ ID NO:155的核苷酸序列的核酸分子同源，其中同源性為至少85%。
[0270]在也是第一方面的第26、27、28、29、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41 和 42 實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第44實(shí)施方案中，核酸分子包含選自SEQ ID NO:7U SEQID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:156 和 SEQ ID NO:157的核苷酸序列，或
[0271]核酸分子與包含選自SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:156和SEQ ID NO:157的核苷酸的核酸分子具有至少85%的同一性，或
[0272]核酸分子與包含選自SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:90,SEQ ID NO:156和SEQ ID NO:157的核苷酸序列的核酸分子同源，其中同源性為至少85%。
[0273]在也是第一方面的第I實(shí)施方案的實(shí)施方案的第45實(shí)施方案中，核酸分子是C型的核酸分子，
[0274]其中C 型的核酸分子包含選自 SEQ ID NO:83 ；SEQ ID NO:84,SEQ ID NO:85、SEQID NO:86, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:97 和 SEQ ID NO:102 的核苷酸序列，或
[0275]其中核酸分子與包含選自SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84，SEQ ID NO:85，SEQ IDNO:86, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:102的核苷酸序列的核酸分子具有至少85%的同一性，或
[0276]其中核酸分子與包含選自SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ IDNO:86,SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:102的核苷酸序列的核酸分子同源，其中同源性為至少85%。
[0277]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44 和 45
實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第46實(shí)施方案中，核酸分子的核苷酸或形成所述核酸分子的核苷酸為L(zhǎng)-核苷酸。
[0278]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44 和 45實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第47實(shí)施方案中，核酸分子為L(zhǎng)-核酸分子。
[0279]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46和47實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第48實(shí)施方案中，核酸分子包含至少一個(gè)結(jié)合部分，其能夠結(jié)合胰高血糖素，其中這樣的結(jié)合部分由L-核苷酸組成。
[0280]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47和48實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第49實(shí)施方案中，核酸分子為通過胰高血糖素介導(dǎo)的活性的拮抗劑。
[0281]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48和49實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第50實(shí)施方案中，核酸分子能夠結(jié)合GIP。
[0282]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49和50實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第51實(shí)施方案中，核酸分子為通過GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑。
[0283]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50和51實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第52實(shí)施方案中，核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中包含修飾基團(tuán)的核酸分子從生物體的排泄率相較于不包含修飾基團(tuán)的核酸分子減小。
[0284]在也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、 48、49、50和51實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面第53實(shí)施方案中，核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中包含修飾基團(tuán)的核酸分子相較于不包含修飾基團(tuán)的核酸分子在生物體中具有增加的停留時(shí)間。
[0285]在也是第一方面的第52和53實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第54實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)選自生物可降解的和非生物可降解的修飾，優(yōu)選修飾基團(tuán)選自聚乙二醇、線性聚乙二醇、分枝聚乙二醇、羥乙基淀粉、肽、蛋白質(zhì)、多糖、固醇、聚氧丙烯、聚氧酰胺和聚(2-輕乙基)-L-谷氨酰胺。
[0286]在也是第一方面的第54實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第55實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)為由線性聚乙二醇或分枝聚乙二醇組成的聚乙二醇，其中聚乙二醇的分子量?jī)?yōu)選為約20，000至約120，OOODa,更優(yōu)選約30，000至約80，OOODa和最優(yōu)選約40，OOODa。[0287]在也是第一方面的第54實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第56實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)為羥乙基淀粉，其中羥乙基淀粉的分子量為約50kDa至約1000kDa,更優(yōu)選約IOOkDa至約700kDa和最優(yōu)選300kDa至500kDa。
[0288] 在也是第一方面的第52、53、54、55和56實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第57實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)通過接頭偶聯(lián)于核酸分子，其中優(yōu)選地接頭是生物可降解接頭。
[0289]在也是第一方面的第52、53、54、55和56實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第58實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)偶聯(lián)于核酸分子的5’-末端核苷酸和/或核酸分子的3’-末端核苷酸和/或所述核酸分子的5’ -末端核苷酸與所述核酸分子的3’ -末端核苷酸之間的核苷酸。
[0290]在也是第一方面的第52、53、54、55、56、57和58實(shí)施方案的實(shí)施方案的第一方面的第59實(shí)施方案中，生物體是動(dòng)物體或人體，優(yōu)選人體。
[0291]本發(fā)明要解決的問題在也是第二方面的第一實(shí)施方案的第二方面中通過用于治療和/或預(yù)防疾病或障礙或高胰增血糖素血癥的方法的核酸分子得以解決，所述核酸分子是根據(jù)第一方面的第 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、
48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)的核酸分子。
[0292]在也是第2方面的第I實(shí)施方案的實(shí)施方案的第2方面的第2實(shí)施方案中，疾病或障礙選自糖尿病、糖尿病并發(fā)癥和糖尿病病況。
[0293]在也是第2方面的第2實(shí)施方案的實(shí)施方案的第2方面的第3實(shí)施方案中，糖尿病選自I型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病。
[0294]在也是第2方面的第3實(shí)施方案的實(shí)施方案的第2方面的第4實(shí)施方案中，糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況是選自下列的糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況:動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病、糖尿病足疾病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病黃斑水腫、糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生型糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變、葡萄糖耐受不良、心臟病、高血壓、高膽固醇、葡萄糖耐量降低、無力、胰島素抵抗、腎功能衰竭、代謝綜合征、非酒精性脂肪肝病、具有或不具有纖維化的非酒精性脂肪性肝炎、外周血管病、減小的葡萄糖敏感性、減小的胰島素敏感性、肥胖、脂肪肝、高血糖、糖尿病相關(guān)性血管炎癥、糖尿病酮癥酸中毒、高滲性非酮癥高血糖昏迷、體重減輕壞死松解性游走性紅斑、貧血、在正常凝血功能存在的情況下的靜脈血栓形成和神經(jīng)精神表現(xiàn)。
[0295]本發(fā)明要解決的問題在也是第3方面的第I實(shí)施方案的第3方面中通過藥物組合物得以解決，所述藥物組合物包含根據(jù)第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59 實(shí)施方案的任一個(gè)的核酸分子和任選地其它組分，其中所述組分選自藥學(xué)上可接受的賦形劑、藥學(xué)上可接受的載體和藥物活性劑。
[0296]在也是第三方面的第一實(shí)施方案的實(shí)施方案的第三方面的第二實(shí)施方案中，藥物組合物包含根據(jù)第一方面的第 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)的核酸分子以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0297]本發(fā)明要解決的問題在也是第4方面的第I實(shí)施方案的第4方面中通過核酸分子用于制造藥劑的用途得以解決，所述核酸分子是根據(jù)第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59
實(shí)施方案的任一個(gè)核酸分子。
[0298]在也是第4方面的第I實(shí)施方案的實(shí)施方案的第4方面的第2實(shí)施方案中，藥劑用于人藥劑或用于獸用藥劑。[0299]本發(fā)明要解決的問題在也是第5方面的第I實(shí)施方案的第5方面中通過核酸分子用于制造診斷裝置的用途得以解決，所述核酸分子是根據(jù)第一方面第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59
實(shí)施方案的任一個(gè)的核酸分子。
[0300]在也是第4方面的第I實(shí)施方案的實(shí)施方案的第4方面的第3實(shí)施方案中，藥劑用于治療和/或預(yù)防疾病或障礙或高胰增血糖素血癥，其中所述疾病或障礙選自糖尿病、糖尿病并發(fā)癥和糖尿病病況。
[0301]在也是第4方面的第3實(shí)施方案的實(shí)施方案的第4方面的第4實(shí)施方案中，糖尿病選自I型型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病。
[0302]在也是第4方面的第3實(shí)施方案的實(shí)施方案的第4方面的第5實(shí)施方案中，糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況是選自下列的糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況:動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病、糖尿病足疾病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病黃斑水腫、糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變、葡萄糖耐受不良、心臟病、高血壓、高膽固醇、葡萄糖耐量降低、無力、胰島素抵抗、腎功能衰竭、代謝綜合征、非酒精性脂肪肝病、具有或不具有纖維化的非酒精性脂肪性肝炎、外周血管病、減小的葡萄糖敏感性、減小的胰島素敏感性、肥胖、脂肪肝、高血糖、糖尿病相關(guān)性血管炎癥、糖尿病酮癥酸中毒、高滲性非酮癥高血糖昏迷、體重減輕壞死松解性游走性紅斑、貧血、在正常凝血功能存在的情況下的靜脈血栓形成和神經(jīng)精神表現(xiàn)。
[0303]本發(fā)明要解決的問題在也是第6方面的第一實(shí)施方案的第6方面中通過包含權(quán)利要求I至59的任一項(xiàng)的核酸分子和胰高血糖素和/或GIP的復(fù)合物得以解決，其中優(yōu)選所述復(fù)合物是晶體復(fù)合物。
[0304]本發(fā)明要解決的問題在也是第7方面的第一實(shí)施方案的第7方面中通過核酸分子用于檢測(cè)胰高血糖素和/或GIP的用途得以解決，所述核酸分子是根據(jù)第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、
56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)核酸分子。
[0305]本發(fā)明要解決的問題在也是第8方面的第一實(shí)施方案的第8方面中通過方法得以解決，所述方法用于篩選由胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑，其包括下列步驟:
[0306]-提供由胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的候選拮抗劑，
[0307]-提供第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的核酸分子，
[0308]-提供在胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑存在的情況下提供信號(hào)的測(cè)試系統(tǒng)，和
[0309]-確定由胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的候選拮抗劑是否是由胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑。
[0310]本發(fā)明要解決的問題在也是第9方面的第一實(shí)施方案的第9方面中通過試劑盒得以解決，所述試劑盒用于檢測(cè)胰高血糖素，其包含根據(jù)第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、
35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和 59
實(shí)施方案的任一個(gè)的核酸分子。
[0311]本發(fā)明要解決的問題在也是第10方面的第一實(shí)施方案的第10方面中通過方法得以解決，所述方法用于檢測(cè)樣品中的第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59 實(shí)施方案的任一個(gè)
中定義的核酸，其中所述方法包括步驟:
[0312]a)提供捕獲探針，其中所述捕獲探針與第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、
36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和 59 實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的核酸分子的第一部分至少部分互補(bǔ)，和檢測(cè)探針，其中檢測(cè)探針與第一方面的第 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的核酸分子的第二部分至少部分互補(bǔ)；或者，捕獲探針與第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59 實(shí)施方案的至少一個(gè)中定義的核酸分子的第二部分至少部分互補(bǔ)，以及檢測(cè)探針與第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51，52，53，54、55、56、57、58 和 59實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的核酸分子的第一部分至少部分互補(bǔ)；
[0313]b)將捕獲探針和檢測(cè)探針分別地或組合地添加至樣品，所述樣品包含第一方面的第 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的核酸分子或假定包含第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的核酸分子；
[0314]c)使捕獲探針和檢測(cè)探針同時(shí)或以任意順序依次與核酸分子或其部分反應(yīng)，所述核酸分子是如第一方面的第 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59 的任一個(gè)中定義的；
[0315]d)任選地檢測(cè)捕獲探針是否與核酸分子雜交，所述核酸分子是如步驟a)中提供的第一方面的第 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、
50、51、52、53、54、55、56、57、58和59實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的；和
[0316]e)檢測(cè)步驟c)中形成的由核酸分子與捕獲探針和檢測(cè)探針組成的復(fù)合物，所述核酸分子是如第一方面的第 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、
46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59 實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的。
[0317]在也是第10方面的第I實(shí)施方案的實(shí)施方案的第10方面的第2實(shí)施方案中，檢測(cè)探針包括檢測(cè)裝置， 和/或其中捕獲探針被固定于載體，優(yōu)選固體載體。
[0318]在也是第10方面的第I和2實(shí)施方案的實(shí)施方案的第10方面的第3實(shí)施方案中，從反應(yīng)物除去不為步驟c)中形成的復(fù)合物的部分的任何檢測(cè)探針以便在步驟e)中僅檢測(cè)是所述復(fù)合物的部分的檢測(cè)探針。
[0319]在也是第10方面的第1、2和3實(shí)施方案的實(shí)施方案的第10方面的第4實(shí)施方案中，步驟e)包括步驟:比較當(dāng)捕獲探針與檢測(cè)探針在第一方面或的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58 和 59
實(shí)施方案的任一個(gè)中定義的核酸分子或其部分存在的情況下，和在所述核酸分子或其部分不存在的情況下雜交時(shí)，通過檢測(cè)裝置產(chǎn)生的信號(hào)。
[0320]然而不希望受任何理論束縛，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的核酸分子以高親和力特異性結(jié)合胰高血糖素，從而抑制胰高血糖素對(duì)其胰高血糖素受體的結(jié)合和/或從而，直接或間接用于糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、糖尿病病況和/或高胰增血糖素血癥和用于其治療。此外，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的核酸分子適合阻斷胰高血糖素與胰高血糖素受體的相互作用。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子還可被視為胰高血糖素受體的拮抗劑和作為胰高血糖素的作用、特別是胰高血糖素對(duì)其受體的作用的拮抗劑。
[0321]胰高血糖素的拮抗劑是結(jié)合胰高血糖素的分子-例如根據(jù)本發(fā)明的核酸分子-并且抑制胰高血糖素的功能，特別是在實(shí)施例中描述的體外測(cè)定或體內(nèi)模型中。
[0322]對(duì)于可通過使用根據(jù)本發(fā)明的核酸分子或組合物，優(yōu)選包含所述核酸分子的藥物組合物治療或預(yù)防的各種疾病、病況和障礙，必須認(rèn)識(shí)到這樣的疾病、病況和障礙是本文中描述的那些疾病、病況和障礙，包括特別地本申請(qǐng)的引文部分描述和所示的那些疾病、況和障礙。說明書的各個(gè)段落和說明書的引文部分形成了本公開內(nèi)容的完整部分，該部分教導(dǎo)本發(fā)明的核酸分子用于所述疾病、病況和障礙的預(yù)防和治療的適合性。
[0323]此外，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子是優(yōu)選的，如果胰高血糖素-胰高血糖素受體的生理作用與更高水平的血漿胰高血糖素相關(guān)的話。
[0324]如本文中所用，術(shù)語胰高血糖素是指任何胰高血糖素，包括但不限于哺乳動(dòng)物胰高血糖素。優(yōu)選地，哺乳動(dòng)物胰高血糖素選自人、大鼠、小鼠、猴、豬、兔、倉鼠、狗、綿羊、雞和牛胰高血糖素(參見圖22的胰高血糖素種類比對(duì))。更優(yōu)選地，胰高血糖素是人胰高血糖素。各種胰高血糖素的氨基酸序列對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，除其它以外，示于圖22中。
[0325]胰高血糖素的拮抗劑是結(jié)合胰高血糖素的分子-例如根據(jù)本發(fā)明的核酸分子-并且優(yōu)選在實(shí)施例中描述的體外測(cè)定或體內(nèi)模型中抑制胰高血糖素的功能。
[0326]此外，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的B型的核酸分子抑制胰高血糖素對(duì)其胰高血糖素受體的結(jié)合以及GIP對(duì)其受體的結(jié)合。此外，根據(jù)本發(fā)明的B型的核酸分子適合于阻斷胰高血糖素與胰高血糖素受體以及GIP與GIP受體的相互作用。根據(jù)本發(fā)明的B型的核酸分子還可被視為胰高血糖素受體的拮抗劑和GIP受體的拮抗劑。
[0327]GIP的拮抗劑是結(jié)合GIP的分子-例如根據(jù)本發(fā)明的核酸分子_并且優(yōu)選在實(shí)施例中描述的體外測(cè)定或體內(nèi)模型中抑制GIP的功能。
[0328]如本文中所用，術(shù)語GIP是指任何GIP，包括但不限于哺乳動(dòng)物GIP。更優(yōu)選，GIP為人GIP。GIP的氨基酸序列對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，除其它以外，示于本文中公開的 SEQ ID NO:168。
[0329]在本發(fā)明內(nèi)的是根據(jù)本發(fā)明的核酸是核酸分子。在這個(gè)范圍內(nèi)，術(shù)語核酸和核酸分子在本文中以同義的方式使用，如果無相反說明的話。此外，這樣的核酸優(yōu)選在本文中也被稱為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子，根據(jù)本發(fā)明的核酸，本發(fā)明核酸或本發(fā)明核酸分子。
[0330]如本文中描 述的根據(jù)本發(fā)明的核酸的性質(zhì)可在其中單獨(dú)地或以任意組合地使用所述核酸的本發(fā)明的任何方面中實(shí)現(xiàn)。
[0331]如本文中更詳細(xì)概述的，本發(fā)明人已鑒定了許多不同的胰高血糖素結(jié)合性核酸分子，其中可根據(jù)在本文中也稱為如所公開的核苷酸的區(qū)段表征所述核酸分子(參見實(shí)施例1)。如實(shí)施例8中在實(shí)驗(yàn)上顯示的，本發(fā)明人可令人驚訝地在幾個(gè)系統(tǒng)中顯示根據(jù)本發(fā)明的核酸分子適合用于治療糖尿病。
[0332]結(jié)合胰高血糖素和/或GIP的本發(fā)明的胰高血糖素結(jié)合性核酸分子的不同類型的每一個(gè)包括3個(gè)不同的核苷酸的區(qū)段:第一末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第二末端核苷酸區(qū)段。一般而言，本發(fā)明的胰高血糖素結(jié)合性核酸分子在其5’ -末端和3’ -末端各自包含核苷酸的末端區(qū)段之一，即第一末端核苷酸區(qū)段或和第二末端核苷酸區(qū)段(也稱為核苷酸的5’ -末端區(qū)段和核苷酸的3’ -末端區(qū)段)。第一末端核苷酸區(qū)段和第二末端核苷酸區(qū)段可因其堿基互補(bǔ)而在原則上彼此雜交，從而在雜交后，形成雙鏈結(jié)構(gòu)。然而，這樣的雜交在生理和/或非生理?xiàng)l件下在分子中不一定實(shí)現(xiàn)。胰高血糖素結(jié)合性核酸分子的核苷酸的3個(gè)區(qū)段-第一末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第二末端核苷酸區(qū)段-彼此以5’一 3’-方向排列:第一末端核苷酸區(qū)段-中央核苷酸區(qū)段-第二末端核苷酸區(qū)段。或者，第二末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第一末端核苷酸區(qū)段以彼此以5’ 一 3’ -方向排列。
[0333]不同的胰高血糖素結(jié)合性核酸分子之間的確定的區(qū)段的序列的差異可影響對(duì)胰高血糖素和/或GIP的結(jié)合親和力?；诒景l(fā)明的不同胰高血糖素結(jié)合性核酸分子的結(jié)合分析，中央?yún)^(qū)段和形成中央?yún)^(qū)段的核苷酸單個(gè)地、更優(yōu)選在其整體上對(duì)于對(duì)胰高血糖素和/或GIP的結(jié)合是必需的。
[0334]術(shù)語‘區(qū)段’和‘核苷酸的區(qū)段’在本文中以同義的方式使用，如果沒有相反指明的話。[0335]在優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子是單個(gè)核酸分子。在其它實(shí)施方案中，單個(gè)核酸分子以許多單個(gè)核酸分子或以許多單個(gè)核酸分子種類的形式存在。
[0336]本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到根據(jù)本發(fā)明的核酸分子優(yōu)選由彼此共價(jià)連接(優(yōu)選通過磷酸二酯鍵)的核苷酸組成。
[0337]在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子包含兩個(gè)或更多個(gè)區(qū)段或其部分，所述區(qū)段原則上可彼此雜交。在這樣的雜交后，形成雙鏈結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，這樣的雜交可以存在或可以不存在，特別地在體外和/或體內(nèi)條件下。同樣的，在雜交的情況下，這樣的雜交不一定在兩個(gè)區(qū)段的整個(gè)長(zhǎng)度上存在，其中，至少基于堿基配對(duì)法貝U，這樣的雜交和從而雙鏈結(jié)構(gòu)的形成在原則上可以發(fā)生。如本文中優(yōu)選使用的，雙鏈結(jié)構(gòu)是核酸分子的部分或通過兩個(gè)或更多個(gè)單獨(dú)的鏈或核酸分子的單鏈的兩個(gè)空間上分開的區(qū)段形成的結(jié)構(gòu)，其中至少一個(gè)，優(yōu)選2或更多個(gè)優(yōu)選按照沃爾森-克里克堿基配對(duì)法則進(jìn)行堿基配對(duì)的堿基對(duì)存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將認(rèn)識(shí)到，其它堿基配對(duì)例如Hoogsten堿基配對(duì)可存在于這樣的雙鏈結(jié)構(gòu)中或可形成這樣的雙鏈結(jié)構(gòu)。還將認(rèn)識(shí)到，兩個(gè)區(qū)段雜交的特性優(yōu)選地顯示這樣的雜交假定因兩個(gè)區(qū)段的堿基互補(bǔ)性而發(fā)生，無論這樣的雜交在體內(nèi)和/或體外實(shí)際上是否發(fā)生。
[0338]在優(yōu)選實(shí)施方案中，如本文中所用，術(shù)語排列意指與本文中公開的核酸分子相關(guān)的本文中描述的結(jié)構(gòu)或功能特性或元件的順序或序列。
[0339]本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子能夠結(jié)合胰高血糖素和/或GIP0不希望受任何理論束縛，本發(fā)明人假定胰高血糖素結(jié)合和/或GIP結(jié)合因本發(fā)明的核酸分子的三維結(jié)構(gòu)特性或元件的組合而導(dǎo)致，所述三維結(jié)構(gòu)特性或元件是由形成這樣的特性或元件的本發(fā)明的核酸分子的核苷酸的一級(jí)序列的取向和折疊模式導(dǎo)致的，其中優(yōu)選地這樣的特性或元件是本發(fā)明的核酸分子的第一末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和/或第二末端核苷酸區(qū)段。很明顯，單個(gè)特性或元件可通過各種不同的單個(gè)序列形成，其變化的程度可取決于這樣的元件或特性必需形成以介導(dǎo)本發(fā)明的核酸分子對(duì)胰高血糖素和/或GIP的結(jié)合的三維結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的核酸的總體結(jié)合特性分別地由各種元件和特性的相互作用而引起，這最終導(dǎo)致本發(fā)明的核酸分子分別地與其靶即胰高血糖素和GIP的相互作用。再次不希望受任何理論束縛，作為本發(fā)明的核酸的特征的中央核苷酸區(qū)段對(duì)于介導(dǎo)本發(fā)明的核酸分子與胰高血糖素和/或GIP的結(jié)合是非常重要的。因此，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子能夠與胰高血糖素相互作用。同樣地，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子是胰高血糖素和/或GIP的拮抗劑。由此，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子適合用于分別地治療和預(yù)防與胰高血糖素和/或GIP相關(guān)或由其引發(fā)的任何疾病或病況。這樣的疾病和病況可來自于確定胰高血糖素和/或GIP分別地參與所述疾病和病況或與其相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，并將所述技術(shù)通過引用并入本文，從而提供關(guān)于本發(fā)明的核酸分子的治療性用途的科學(xué)原理。
[0340]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子還包括與本文中公開的特定核苷酸序列基本上同源的核酸分子。術(shù)語大體上同源的應(yīng)當(dāng)被理解為例如同源性為至少75%，優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%，最優(yōu)選超過至少95%、96%、97%、98%或99%。
[0341]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子中存在的同源核苷酸的實(shí)際百分比將取決于存在于核酸中的核苷酸的總數(shù)。百分比變化可基于存在于核酸分子中的核苷酸的總數(shù)。
[0342]可如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，測(cè)定兩個(gè)核酸分子之間的同源性。更具體地，序列比較算法可用于基于指定的程序參數(shù)計(jì)算測(cè)試序列相對(duì)于參照序列的百分比序列同源性。測(cè)試序列優(yōu)選是被認(rèn)為針對(duì)不同核酸分子是同源的或待測(cè)試其是否是同源的，并且如果是，達(dá)到什么程度的序列或核酸分子，其中這樣的不同核酸分子也稱為參照序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，參照序列是如本文中描述的核酸分子，優(yōu)選具有根據(jù)SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:43, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO:9USEQ ID NO:92、SEQ ID NO:
71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ IDNO:50, SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:59的任一個(gè)的序列的核酸分子。用于比較的序列的最佳比對(duì)可以例如通過Smith&Waterman的局部同源性算法(Smith&Waterman, 1981),通過Needleman&Wunsch 的同源性比對(duì)算法(Needleman&Wunsch, 1970),通過 Pearson&Lipman的相似性搜索法(Pearson&Lipman, 1988),通過這些算法的計(jì)算機(jī)化執(zhí)行(WisconsinGenetics 軟件包，Genetics Computer Group, 575Science Dr., Madison, ffis.中的 GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或通過目測(cè)觀察來進(jìn)行。
[0343]適合用于測(cè)定百分比序列同一性的算法的一個(gè)實(shí)例是用于基本局部比對(duì)搜索工具(在下文中稱為"BLAST")中的算法，參見，例如，Altschul等人(Altschul等人1990和Altschul等人，1997)。用于進(jìn)行BLAST分析的軟件是可通過國(guó)家生物技術(shù)信息中心(在下文中稱為"NCBI")公共獲得的。用于使用可從NCBI獲得的軟件例如BLASTN(用于核苷酸序列)和BLASTP (用 于氨基酸序列)測(cè)定序列同一性的缺省參數(shù)描述于McGinnis等人(McGinnis 等人，2004)中。
[0344]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子還將包括根據(jù)其核苷酸序列確定的相對(duì)于本文中公開的本發(fā)明的核酸具有一定程度的同一性的核酸分子。更優(yōu)選地，本發(fā)明還包括根據(jù)其核苷酸序列確定的相對(duì)于本發(fā)明的核酸分子具有至少75%,優(yōu)選至少85%,更優(yōu)選至少90%,最優(yōu)選超過至少95 %、96 %、97 %、98 %或99 %的同一性的那些核酸分子或其部分。
[0345]術(shù)語本發(fā)明的核酸或根據(jù)本發(fā)明的核酸分子還可包括這樣的核酸分子或其部分，所述核酸分子或其部分包含本文中公開的核酸序列(例如根據(jù)本發(fā)明的核酸的代謝物或衍生物)，優(yōu)選達(dá)到所述核酸分子或所述部分參與或能夠結(jié)合胰高血糖素的程度。這樣的核酸分子可通過例如截短從本文中公開的核酸分子產(chǎn)生。截短可涉及本文中公開的本發(fā)明的核酸分子的一個(gè)或兩個(gè)末端。同樣地，截短還可涉及核苷酸的內(nèi)部序列，即其可分別地涉及5’末端核苷酸與3’末端核苷酸之間的一個(gè)或數(shù)個(gè)核苷酸。此外，截短可包括小至單個(gè)核苷酸從本文中公開的本發(fā)明的核酸分子的序列的缺失。截短還可涉及本發(fā)明的核酸分子的超過一個(gè)核苷酸的區(qū)段，其中核苷酸的區(qū)段可小至I個(gè)核苷酸長(zhǎng)。可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)或通過使用或采用本文中描述的方法，優(yōu)選在本文中實(shí)施例部分描述的方法來測(cè)定根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的結(jié)合。
[0346]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可以是D-核酸分子或L-核酸分子。優(yōu)選地,根據(jù)本發(fā)明的核酸分子為L(zhǎng)-核酸分子。
[0347]還在本發(fā)明內(nèi)的是,在一個(gè)實(shí)施方案中，本文中描述的核酸分子的每一個(gè)和任一個(gè)根據(jù)其核酸序列在其整體性上限定于特定指定的核苷酸序列。換句話說，術(shù)語“包含”或“含有”在這樣的實(shí)施方案中應(yīng)當(dāng)以包括或由……組成的含義來解釋。
[0348]也在本發(fā)明內(nèi)的是根據(jù)本發(fā)明的核酸分子是更長(zhǎng)的核酸的部分，其中該更長(zhǎng)的核酸包含幾個(gè)部分，其中至少一個(gè)這樣的部分為本發(fā)明的核酸分子或其部分。這樣的更長(zhǎng)的核酸的其它部分可以是一個(gè)或數(shù)個(gè)D-核酸或L-核酸?？蓪⑷我饨M合與本發(fā)明結(jié)合使用。這些更長(zhǎng)核酸的其它部分可顯示與結(jié)合、優(yōu)選與對(duì)胰高血糖素和/或GIP的結(jié)合不同的功能。一個(gè)可能的功能是允許與其它分子相互作用，其中這樣的分子優(yōu)選與胰高血糖素不同，例如用于固定、交聯(lián)、檢測(cè)或擴(kuò)增。在其它實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子包括幾個(gè)本發(fā)明的核酸分子作為單個(gè)部分或組合部分。這樣的包含幾個(gè)本發(fā)明的核酸分子的核酸也包括在術(shù)語更長(zhǎng)的核酸內(nèi)。
[0349]如本文中所用，L-核酸為由L-核苷酸組成，優(yōu)選完全由L-核苷酸組成的核酸或核酸分子。
[0350]如本文中所用，D-核酸為由D-核苷酸組成，優(yōu)選完全由D-核苷酸組成的核酸或核酸分子。
[0351 ] 術(shù)語核酸和核酸分子在本文中以可互換的方式使用，如果未明確地指出相反的話。
[0352]同樣的，如果無相反說明的話，任何核苷酸序列在本文中以5’ 一 3’方向顯示。
[0353]如本文中優(yōu)選使用的，核苷酸的任何位置是相對(duì)于包含這樣的核苷酸的序列、區(qū)段或子區(qū)段的5’末端測(cè)定的或提及的。因此，第二核苷酸為分別從序列、區(qū)段和子區(qū)段的5’末端計(jì)數(shù)的第二核苷酸。同樣地，與其一致地，倒數(shù)第二核苷酸為分別從序列、區(qū)段和子區(qū)段的3’末端計(jì)數(shù)的第二核苷酸。
[0354]不論本發(fā)明的核酸分子由D-核苷酸、L-核苷酸組成還是由兩者的組合組成(所述組合為由至少一個(gè)L-核苷酸和至少一個(gè)D-核酸組成的區(qū)段的隨機(jī)組合或確定的序列)，核酸都可由脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或其組合組成。
[0355]也在本發(fā)明內(nèi)的是核酸分子由核糖核苷酸和2’脫氧核糖核苷酸組成。2’脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸示于圖29和30A-B中。為了區(qū)分根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的序列中的核糖核苷酸與2’脫氧核糖核苷酸，在本文中使用下列參考碼。
[0356]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子主要由2’脫氧核糖核苷酸組成，其中優(yōu)選地
[0357]G為2’脫氧-鳥苷-5’ -單磷酸，
[0358]C為2’脫氧-胞苷-5’ -單磷酸，
[0359]A為2 ’脫氧-腺苷-5 ’ -單磷酸，
[0360]T為2 ’脫氧-胸苷-5 ’ -單磷酸，
[0361]rG為鳥苷-5’ -單磷酸，
[0362]rC為胞苷5’-單磷酸，
[0363]rA為腺苷-5’ -單磷酸，
[0364]rU為尿苷-5’ -單磷酸，
[0365]rT為胸苷-5’ -單磷酸。
[0366]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子主要由核糖核苷酸組成,其中優(yōu)選地
[0367]G為鳥苷-5’-單磷酸，
[0368]C為胞苷5’ -單磷酸，
[0369]A為腺苷-5’-單磷酸，
[0370]U為尿苷-5’單磷酸，
[0371] dG為2’脫氧-鳥苷-5’ -單磷酸，[0372]dC為2 ’脫氧-胞苷-5，單磷酸，
[0373]dA為2 ’脫氧-腺苷-5 ’ -單磷酸，
[0374]dT為2’脫氧-胸苷-5’ -單磷酸。
[0375]將本發(fā)明的核酸分子設(shè)計(jì)為L(zhǎng)-核酸分子因若干原因是優(yōu)選的。L-核酸分子是天然存在的核酸的對(duì)映體。然而，D-核酸分子在水溶液中，特別地在生物系統(tǒng)或生物樣品中因核酸酶的廣泛存在而不是特別穩(wěn)定。天然存在的核酸酶，特別地來自動(dòng)物細(xì)胞的核酸酶不能降解L-核酸。因此，L-核酸分子的生物半衰期在這樣的系統(tǒng)包括動(dòng)物和人身體中顯著增加。由于缺乏L-核酸分子的降解能力，無核酸酶降解產(chǎn)物產(chǎn)生，從而在這樣的系統(tǒng)包括動(dòng)物和人身體中未觀察到從其產(chǎn)生的副作用。這個(gè)方面可使L-核酸分子區(qū)別于實(shí)際上所有其它用于牽涉胰高血糖素的存在的疾病和/或障礙的治療的化合物。通過與沃森-克里克堿基配對(duì)不同的機(jī)制特異性結(jié)合靶分子的L-核酸分子，或部分地或完全地由L-核苷酸組合成的適體，特別地對(duì)于參與適體對(duì)祀分子的結(jié)合的適體的那些部分，也稱為spiegelmer。適體和spiegelmer同樣地對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說也是已知的，并且除其它以外描述于‘The Aptamer Handbook，(eds.Klussmann, 2006)中。
[0376]也在本發(fā)明內(nèi)的是本發(fā)明的核酸分子，不論其以D-核酸、L-核酸還是D，L-核酸存在，或不論其為DNA還是RNA，都可以單鏈或雙鏈核酸分子的形式存在。通常地，核酸分子是單鏈核酸分子，其因其一級(jí)序列而顯示確定的二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而也可形成三級(jí)結(jié)構(gòu)。然而，核酸分子還可以是雙 鏈的，意即彼此互補(bǔ)或部分互補(bǔ)的兩條鏈彼此雜交。
[0377]可修飾本發(fā)明的核酸分子。這樣的修飾可涉及核酸分子的單個(gè)核苷酸，并在本領(lǐng)域是公知的。這樣的修飾的實(shí)例除其它以外由Venkatesan等人(Venkatesan, Kim等人2003)和Kusser (Kusser2000)進(jìn)行了描述。這樣的修飾可以是所有組成核酸分子的單個(gè)核苷酸的一個(gè)、數(shù)個(gè)的2’位置上的H原子、F原子或O-CH3基團(tuán)和或NH2-基團(tuán)。同樣地，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可包含至少一個(gè)LNA核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子由LNA核苷酸組成。
[0378]在實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可以是多部分核酸分子。如本文中所用，多部分核酸分子是由至少兩個(gè)單獨(dú)的核酸鏈組成的核酸分子。這至少兩個(gè)核酸鏈形成功能單位，其中功能單位為靶分子的配體，優(yōu)選地，靶分子的拮抗劑，在本情況下為胰高血糖素和/或GIP的拮抗劑。至少兩個(gè)核酸鏈可通過切割本發(fā)明的核酸分子以產(chǎn)生至少兩條鏈來從本發(fā)明的核酸分子的任一個(gè)產(chǎn)生，或通過合成一個(gè)對(duì)應(yīng)于本發(fā)明的全長(zhǎng)核酸分子的第一部分的核酸分子和對(duì)應(yīng)于本發(fā)明的全長(zhǎng)核酸分子的另一部分的另一個(gè)核酸分子來產(chǎn)生。取決于形成全長(zhǎng)核酸分子的部分的數(shù)目，合成對(duì)應(yīng)數(shù)目的具有需要的核苷酸序列的部分。應(yīng)認(rèn)識(shí)到切割法和合成法都可被用于產(chǎn)生其中存在超過兩個(gè)上文例舉的鏈的多部分核酸分子。換句話說，至少兩條單獨(dú)的核酸鏈通常與彼此互補(bǔ)和雜交的兩條鏈不同，盡管所述至少兩個(gè)單獨(dú)的核酸鏈之間可存在一定程度的互補(bǔ)性以及由這樣的互補(bǔ)性可導(dǎo)致所述單獨(dú)的鏈的雜父。
[0379]最后，也在本發(fā)明內(nèi)的是實(shí)現(xiàn)了根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的完全閉合的，即環(huán)狀結(jié)構(gòu)，即根據(jù)本發(fā)明的核酸分子在實(shí)施方案中是封閉的，優(yōu)選地通過共價(jià)連接，其中更優(yōu)選這樣的共價(jià)連接在本文中公開的本發(fā)明的核酸分子或其任何衍生物的核酸序列的5’末端與3’末端之間產(chǎn)生。[0380]測(cè)定根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的結(jié)合常數(shù)的可能性是使用實(shí)施例3和4中描述的方法，所述方法確認(rèn)根據(jù)本發(fā)明的核酸顯示有利的Kd值范圍的上述發(fā)現(xiàn)。為了表達(dá)單個(gè)核酸分子與靶(在本案例中為胰高血糖素)之間的結(jié)合強(qiáng)度的適當(dāng)量度是所謂的Kd值，該值本身以及用于其測(cè)定的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。
[0381]優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的核酸顯示的Kd值低于I μ M。約I μ M的Kd值被認(rèn)為是核酸對(duì)靶的非特異性結(jié)合的特征。如將由本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到的，一組化合物例如根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的不同實(shí)施方案的Kd值在一定范圍之內(nèi)。約I μ M的上述Kd是Kd值的優(yōu)選上限。靶結(jié)合核酸例如本發(fā)明的核酸分子之間的Kd的下限可小至約10皮摩或可更高。在本發(fā)明內(nèi)的是單個(gè)核酸結(jié)合胰高血糖素的Kd值優(yōu)選在該范圍內(nèi)。Kd值的優(yōu)選范圍可通過選擇該范圍內(nèi)的任意第一數(shù)值和該范圍內(nèi)的任意第二數(shù)值來界定。優(yōu)選上限Kd值為250ηΜ和ΙΟΟηΜ，優(yōu)選下限Kd值為50nM、IOnM, InM、IOOpM和ΙΟρΜ。更優(yōu)選上限Kd值為ΙΟηΜ，更優(yōu)選下限Kd值為ΙΟΟρΜ。
[0382]除了根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的結(jié)合性質(zhì)以外，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子還抑制各自靶分子(在本情況下為胰高血糖素和/或GIP)的功能。胰高血糖素和/或GIP的功能-例如先前描述的各自受體的刺激-通過根據(jù)本發(fā)明的核酸分子對(duì)胰高血糖素和/或GIP的結(jié)合并形成根據(jù)本發(fā)明的核酸分子和胰高血糖素和/或GIP的復(fù)合物來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的核酸分子與胰高血糖素和/或GIP的這樣的復(fù)合物不能刺激通常被胰高血糖素和/或GIP刺激(即不以與本發(fā)明的核酸分子的復(fù)合物形式存在的胰高血糖素和/或GIP)的受體。因此，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子對(duì)受體功能的抑制不依賴可被胰高血糖素和/或GIP刺激的各自受體，相反這樣的抑制因根據(jù)本發(fā)明的核酸分子阻止胰高血糖素和/或GIP對(duì)受體的刺激而引起。
[0383]測(cè)定根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的抑制常數(shù)的可能性是實(shí)施例5中描述的方法的使用，所述方法確認(rèn)了上述發(fā)現(xiàn):根據(jù)本發(fā)明的核酸顯示允許在治療性治療方案中使用所述核酸分子的有利的抑制常數(shù)。表達(dá)單個(gè)核酸分子對(duì)靶(其在本案例中為胰高血糖素)與各自受體的相互作用的抑制作用的強(qiáng)度的適當(dāng)量度為所謂的半最大抑制濃度(縮寫IC5tl),所述半最大抑制濃度以及用于其測(cè)定的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。
[0384]優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子顯示的IC5tl值低于ΙμΜ。約ΙμΜ的IC5tl值被認(rèn)為是靶功能的非特異性抑制，優(yōu)選地通過核酸分子產(chǎn)生的對(duì)靶對(duì)靶受體的激活的抑制的特征。如將由本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到的，一組化合物例如根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的不同實(shí)施方案的IC5tl值在一定范圍之內(nèi)。約I μ M的上述IC5tl是IC5tl值的優(yōu)選上限。本發(fā)明的靶結(jié)合核酸分子之間的IC5tl的下限可小至約10皮摩或可更高。在本發(fā)明內(nèi)的是本發(fā)明的單個(gè)核酸結(jié)合胰高血糖素的IC5tl值優(yōu)選在該范圍內(nèi)。優(yōu)選范圍可通過選擇該范圍內(nèi)的任意第一數(shù)值和該范圍內(nèi)的任意第二數(shù)值來界定。優(yōu)選上限IC5tl值為250ηΜ和ΙΟΟηΜ，優(yōu)選下限IC5tl值為50nM、IOnM, InM、IOOpM和ΙΟρΜ。更優(yōu)選上限IC5tl值為5nM，更優(yōu)選下限IC5tl值為InM。
[0385]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可具有任意長(zhǎng)度，只要其仍然能夠結(jié)合靶分子(其在本案例中為胰高血糖素和/或GIP)。在本領(lǐng)域應(yīng)認(rèn)識(shí)到，存在根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的優(yōu)選長(zhǎng)度。通常地，長(zhǎng)度為15至120個(gè)核苷酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，15與120之間的任意整數(shù)為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的可能長(zhǎng)度。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的長(zhǎng)度的更優(yōu)選范圍為約20至100個(gè)核 苷酸，約20至80個(gè)核苷酸，約20至60個(gè)核苷酸，約20至54個(gè)核苷酸以及約39至44個(gè)核苷酸。
[0386]在本發(fā)明內(nèi)的是本發(fā)明的核酸分子包含部分，所述部分優(yōu)選為高分子量部分和/或優(yōu)選允許除其它以外，在動(dòng)物身體優(yōu)選人身體中的停留時(shí)間方面修飾核酸分子的特征。這樣的修飾的特別優(yōu)選實(shí)施方案為根據(jù)本發(fā)明的核酸的PEG化和HES化。如本文中所用，PEG代表聚(乙二醇)，HES代表羥乙基淀粉。如本文中優(yōu)選地使用的，PEG化為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的修飾，其中這樣的修飾由連接于根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的PEG部分組成。如本文中優(yōu)選地使用的，HES化為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的修飾，其中這樣的修飾由連接于根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的HES部分組成。這些修飾以及使用這樣的修飾來修飾核酸分子的方法描述于歐洲專利申請(qǐng)EP1306382中，將其公開內(nèi)容通過引用整體并入本文。
[0387]在PEG為這樣的高分子量部分的情況下，分子量?jī)?yōu)選為約20，000至約120，OOODa,更優(yōu)選約30，000至約80，OOODa,最優(yōu)選約40，OOODa0在HES為這樣的高分子量部分的情況下，分子量?jī)?yōu)選為約50kDa至約1000kDa,更優(yōu)選約IOOkDa至約700kDa和最優(yōu)選200kDa至500kDa。HES顯示0.1對(duì)1.5，更優(yōu)選地I對(duì)1.5的摩爾置換，并且顯示表達(dá)為約0.1至15，優(yōu)選約3至10的C2/C6比率的置換等級(jí)。HES修飾的方法例如描述于德國(guó)專利申請(qǐng)DE12004006249.8中，將其公開內(nèi)容通過引用整體并入本文。
[0388]原則上可在其任意位置上對(duì)本發(fā)明的核酸分子進(jìn)行修飾。優(yōu)選地對(duì)核酸分子的5’ -末端核苷酸、3’ -末端核苷酸和/5’核苷酸與3’核苷酸之間的任意核苷酸進(jìn)行這樣的修飾。
[0389]可直接或間接地，優(yōu)選通過接頭間接地將修飾、優(yōu)選PEG和/或HES部分連接于本發(fā)明的核酸分子。也在本發(fā)明內(nèi)的是根據(jù)本發(fā)明的核酸分子包含一個(gè)或多個(gè)修飾，優(yōu)選一個(gè)或多個(gè)PEG和/或HES部分。在實(shí)施方案中，單個(gè)接頭分子將超過一個(gè)PEG部分或HES部分連接于根據(jù)本發(fā)明的核酸分子。與本發(fā)明組合使用的接頭可本身為線性的或分枝的。該類型的接頭對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，并進(jìn)一步描述于國(guó)際專利申請(qǐng)W02005/074993 和 TO2003/035665。
[0390]在優(yōu)選實(shí)施方案中，接頭為生物可降解接頭。生物可降解接頭允許除其它以外在動(dòng)物身體，優(yōu)選人身體中的停留時(shí)間方面(因修飾從根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的釋放)修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的特征。生物可降解接頭的使用可允許更好地控制根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的停留時(shí)間。這樣的生物可降解接頭的優(yōu)選實(shí)施方案為但不限于在國(guó)際專利公布W02006/052790、W02008/034122、W02004/092191 和 W02005/099768 中所描述的生物可降解接頭。
[0391] 在本發(fā)明內(nèi)的是修飾或修飾基團(tuán)為生物可降解修飾，其中可直接或間接地，優(yōu)選通過接頭間接地將生物可降解修飾連接于本發(fā)明的核酸分子。生物可降解修飾允許除其它以外在動(dòng)物身體，優(yōu)選人身體中的停留時(shí)間方面(因修飾從根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的釋放或降解)修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的特征。生物可降解接頭的使用可允許更好地控制根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的停留時(shí)間。這樣的生物可降解接頭的優(yōu)選實(shí)施方案為但不限于在國(guó)際專利公布 W02002/065963、W02003/070823、W02004/113394 和 W02000/41647 中，優(yōu)選地在W02000/41647,第18頁，第4至24行中所描述的生物可降解接頭。
[0392]除了上述修飾外，可將其它修飾用于修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的特征，其中這樣的其它修飾可選自蛋白質(zhì)、脂質(zhì)例如膽固醇和糖鏈例如淀粉酶、葡聚糖等。[0393] 不希望受任何理論束縛，通過用高分子量部分例如聚合物，更具體地一個(gè)或數(shù)個(gè)本文中公開的聚合物修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸分子(優(yōu)選所述聚合物是生理上可接受的)，改變本發(fā)明的所修飾的核酸分子的排泄動(dòng)力學(xué)。更具體地，由于本發(fā)明的修飾的核酸分子的增加的分子量以及由于本發(fā)明的核酸分子未經(jīng)歷代謝(特別地當(dāng)以L型存在時(shí)，即為L(zhǎng)-核酸分子時(shí))，從動(dòng)物身體，優(yōu)選從哺乳動(dòng)物身體，更優(yōu)選從人體的排泄減少。由于排泄通常通過腎發(fā)生，因此本發(fā)明人假定所修飾的核酸分子的腎小球?yàn)V過率相較于不具有該類型的高分子量修飾的核酸分子顯著減小，這導(dǎo)致修飾的核酸分子在動(dòng)物體內(nèi)的停留時(shí)間增加。與其相關(guān)，特別值得注意的是，盡管存在這樣的高分子量修飾，但根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的特異性不以有害方式受到影響。在這個(gè)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子除其它以外具有令人驚訝的特征-所述特征通常不能從藥學(xué)活性化合物預(yù)期-提供持續(xù)釋放的藥物制劑不是提供根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的持續(xù)釋放所必需的。相反地，包含高分子量部分的以其修飾形式存在的根據(jù)本發(fā)明的核酸分子因其修飾而本身已被用作正如其充當(dāng)?shù)某掷m(xù)釋放制劑，已如同其從持續(xù)釋放制劑釋放一樣。在這個(gè)范圍內(nèi)，本文中公開的根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的修飾和所修飾的根據(jù)本發(fā)明的核酸分子以及包含所述修飾核酸分子的任何組合物提供了其獨(dú)特的，優(yōu)選受控的藥代動(dòng)力學(xué)及生物分布。這還包括在動(dòng)物和人體的循環(huán)中的停留時(shí)間，以及至這樣的動(dòng)物和人的組織的分布。這樣的修飾進(jìn)一步描述于專利申請(qǐng)W02003/035665 中。
[0394]然而，也在本發(fā)明內(nèi)的是根據(jù)本發(fā)明的核酸分子不包含任何修飾，特別地?zé)o高分子量修飾例如PEG或HES。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的核酸分子顯示至身體的任何靶器官或組織的優(yōu)先分配時(shí)或當(dāng)期望在施用后從身體快速清除根據(jù)本發(fā)明的核酸分子時(shí)，這樣的實(shí)施方案是特別優(yōu)選地。具有至身體的任何靶器官或組織的優(yōu)先分布的本文中公開的根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可允許在靶組織中建立有效的局部濃度，同時(shí)使核酸分子的全身性濃度保持低水平。這可允許低劑量，這不僅從經(jīng)濟(jì)的觀點(diǎn)來看是有有益的，而且還減少其它組織對(duì)核酸分子的不必要暴露，從而減小副作用的潛在風(fēng)險(xiǎn)。除其它以外在體內(nèi)成像或使用根據(jù)本發(fā)明的核酸分子或包含所述核酸分子的藥劑的特異療法給藥需要的情況下可能期望施用后根據(jù)本發(fā)明的核酸分子從身體的快速清除。
[0395]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子和/或根據(jù)本發(fā)明的拮抗劑可用于產(chǎn)生或制造藥劑。這樣的藥劑或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包含至少一個(gè)種類的能夠結(jié)合胰高血糖素和/或GIP的本發(fā)明的核酸分子(任選地與其它藥物活性化合物一起)，其中本發(fā)明的核酸分子優(yōu)選本身用作藥物活性化合物。這樣的藥劑在優(yōu)選實(shí)施方案中包含至少藥學(xué)上可接受的載體。這樣的載體可以是例如水、緩沖液、PBS、葡萄糖溶液，優(yōu)選地5%的葡萄糖，鹽平衡溶液、檸檬酸鹽、淀粉、糖、明膠或任何其它可接受的載體物質(zhì)。這樣的載體對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說通常是已知的。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的藥劑的或與其相關(guān)的任何實(shí)施方案、用途和方面也適用于本發(fā)明的藥物組合物并且反之亦然。
[0396]利用根據(jù)本發(fā)明的或根據(jù)本發(fā)明制備的核酸分子、藥物組合物和藥劑治療和/或預(yù)防的適應(yīng)癥、疾病和障礙因胰高血糖素直接或間接牽涉于各自的發(fā)病機(jī)制而引起。
[0397]基于胰高血糖素牽涉于與糖尿病相關(guān)或牽涉糖尿病的途徑，很明顯本發(fā)明的核酸分子、包含本發(fā)明的核酸分子的一個(gè)或數(shù)個(gè)種類的藥物組合物以及包含其的一個(gè)或數(shù)個(gè)種類的藥劑可用于治療和/或預(yù)防所述疾病、障礙和患病狀態(tài)。因此，這樣的疾病和/或障礙和/或患病狀態(tài)包括但不限于I型糖尿病、2型糖尿病(包括妊娠糖尿病)、糖尿病并發(fā)癥、糖尿病病況和/或糖尿病和高胰增血糖素血癥以及因其它原因引起的Alstrdm -綜合征的后遺癥，其中所產(chǎn)生的并發(fā)病選自動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病、糖尿病足疾病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病黃斑水腫、糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生型糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變、妊娠糖尿病、葡萄糖耐受不良、心臟病、高血壓、高膽固醇、葡萄糖耐量降低、無力、胰島素抵抗、腎功能衰竭、代謝綜合征、非酒精性脂肪肝病、具有或不具有纖維化的非酒精性脂肪性肝炎、外周血管病、減小的葡萄糖敏感性、減小的胰島素敏感性、肥胖、脂肪肝、高血糖癥、糖尿病酮癥酸中毒、以及高滲性非酮癥高血糖昏迷、體重減輕壞死松解性游走性紅斑(NME)、貧血、在正常凝血功能存在的情況下的靜脈血栓形成和神經(jīng)精神表現(xiàn)(抑郁癥、癡呆、失眠癥、共濟(jì)失調(diào))。
[0398]當(dāng)然，因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明的胰高血糖素結(jié)合性核酸分子與胰高血糖素和/或GIP相互作用或與其結(jié)合，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解，根據(jù)本發(fā)明的胰高血糖素結(jié)合性核酸分子可容易地用于治療、預(yù)防和/或診斷本文中描述的人和動(dòng)物的任何疾病。與此有關(guān)地，應(yīng)認(rèn)識(shí)到根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可用于治療和預(yù)防本文中描述的任何疾病、障礙或病況，不論這樣的疾病、障礙和病況深層的作用模式如何。[0399]在下文中，提供了將根據(jù)本發(fā)明的核酸分子與各種疾病、障礙和病況結(jié)合使用的合理性，從而使得要求保護(hù)的根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的治療、預(yù)防和診斷適用性是合理的。為了避免任何不必要的重復(fù)，應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到由于胰高血糖素-胰高血糖素受體軸和/或GIP-GIP受體軸的參與(如與其相關(guān)地概述的)，所述軸可通過根據(jù)本發(fā)明的核酸分子來尋址，以便實(shí)現(xiàn)所要求保護(hù)的治療、預(yù)防和診斷作用。還應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，可將患者的疾病、障礙和病況的特性和結(jié)合其描述的治療方案的任何細(xì)節(jié)經(jīng)歷本申請(qǐng)的優(yōu)選實(shí)施方案。
[0400]在大部分糖尿病患者中，已報(bào)導(dǎo)了在混合膳食或碳水化合物攝入后循環(huán)胰高血糖素水平的反常升聞(Ohneda, Watanabe等人1978)。這被視為對(duì)升聞的餐后血糖水平的主要貢獻(xiàn)者，其在DM的微血管和大血管并發(fā)癥的病理生理學(xué)中起著重要作用(Gin和Rigalleau2000)。
[0401]已報(bào)導(dǎo)了大量肽基和非肽基小分子胰高血糖素受體拮抗劑(Jiang和Zhang2003)。這些小分子拮抗劑中的一些(通常具有相當(dāng)?shù)偷膶?duì)于胰高血糖素受體的親和力)已顯示會(huì)降低空腹血糖或在動(dòng)物模型中阻斷外源胰高血糖素-刺激的血糖的升高。非肽基小分子胰高血糖素受體拮抗劑顯示以劑量依賴性方式阻斷胰高血糖素-誘發(fā)的人的肝葡萄糖產(chǎn)量和血糖的升高(Petersen和Sullivan2001)。更近期以來,通過反義寡核苷酸減少db/db-小鼠的胰高血糖素受體表達(dá)導(dǎo)致血糖、游離脂肪酸和甘油三酯的減少而不發(fā)生低血糖癥(Liang, Osborne等人2004)。這些作用對(duì)于DM2患者是理想的。
[0402]除那以外，發(fā)現(xiàn)胰高血糖素受體敲除小鼠存活并且顯示僅輕度的低血糖癥、改善的葡萄糖耐受性和升高的胰高血糖素水平的體征。它們對(duì)飲食誘發(fā)的肥胖具有抗性(Conarello, Jiang等人2007),并且具有更高的胰島素敏感性,這在β -細(xì)胞缺乏的情況下可以是有益的(Sorensen, Winzell等人2006)。此外,胰高血糖素受體敲除小鼠對(duì)鏈脲霉素-誘發(fā)的“I型糖尿病表型”具有抗性，即，它們?cè)诳崭範(fàn)顟B(tài)以及在口服和腹膜內(nèi)葡萄糖耐受性測(cè)試中顯示血糖量正常(Lee, Wang等人2011)。
[0403]單克隆抗體對(duì)胰高血糖素本身的中和還導(dǎo)致血糖、甘油三酯、HbAlc和肝葡萄糖輸出量的急性和持續(xù)減少(Brand, Rolin等人1994 ；Sorensen, Brand等人2006)。然而，由于它們潛在的免疫原性，這些和其它抗體可能不是用于DM的長(zhǎng)期治療的可行選擇。
[0404]基本上，通過降低胰高血糖素水平/活性進(jìn)行治療干預(yù)的嘗試已產(chǎn)生許多支持胰高血糖素拮抗的概念的結(jié)果。然而，這樣的嘗試已產(chǎn)生不具有足夠效力的化合物或具有不可接受的肝毒性的化合物。
[0405]I型糖尿病(DMl)的特征在于胰島素缺乏，所述胰缺乏與DM2相反，不是因胰島素抵抗而引起的功能缺乏而是因胰腺細(xì)胞丟失而引起的絕對(duì)缺乏。DMl通常被稱為青少年糖尿病，因?yàn)槠渲饕趦和颓嗌倌曛邪l(fā)生。在最近公布的研究中，胰高血糖素受體敲除小鼠對(duì)鏈脲霉素-誘導(dǎo)的“I型糖尿病表型”具有抗性，即它們?cè)诳崭範(fàn)顟B(tài)以及在口服和腹膜內(nèi)葡萄糖耐受性測(cè)試后顯示血糖量正常(Lee, Wang等人2011)。
[0406]在DMl患者中缺乏胰高血糖素的胰島素依賴性餐后抑制削弱了葡萄糖耐受性。DM的急性威脅生命的并發(fā)癥和胰高血糖素-胰島素-不平衡的直接后果是在過量酮體產(chǎn)生后的糖尿病酮癥酸中毒(縮寫DKA)和糖尿病并發(fā)癥如高滲性非酮癥高血糖昏迷(縮寫HHNK)。在HHNK中，糖尿的滲透作用導(dǎo)致受損的腎臟NaCl，和從而導(dǎo)致水重吸收，從而導(dǎo)致高鈉血癥(Wahid, Naveed等人2007)。還可在DM2的胰島素依賴性病例中觀察到DKA和HHNK。
[0407]神經(jīng)內(nèi)分泌瘤是罕見腫瘤，其可導(dǎo)致通常由它們所源自的細(xì)胞產(chǎn)生的各自激素的過表達(dá)。因此,高胰增血糖素血癥由胰高血糖素-生成細(xì)胞的增生或腫瘤形成(胰高血糖素瘤)，例如α-細(xì)胞來源的腫瘤引起。同樣地，其中腸高血糖素、胃泌酸調(diào)節(jié)素和GLP-1從胰高血糖素基因轉(zhuǎn)錄物產(chǎn)生的腸郎格爾漢斯細(xì)胞的腫瘤形成可導(dǎo)致這些肽的過表達(dá)或胰高血糖素的過表達(dá)(如果處理偏移的話)。
[0408]高胰增血糖素血癥可導(dǎo)致并發(fā)癥例如糖尿病、酮酸癥和體重減輕壞死松解性游走性紅斑(縮寫NME)、貧血、在正常凝血功能存在的情況下的靜脈血栓形成、神經(jīng)精神表現(xiàn)(抑郁癥、癡呆、失眠癥、共濟(jì)失調(diào))和其它癥狀(Griffing，Odeke等人2011)，
[0409]GIP正如其名稱所示，不僅誘導(dǎo)胰島素釋放，而且還在脂質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡中起作用，并且可能是肥胖發(fā)生所必需的，如通過幾個(gè)動(dòng)物研究(Asmar2011)顯示的:在年長(zhǎng)的高脂肪飼喂的糖尿病小鼠中每日施用GIP受體拮抗劑Pro3-GIP，進(jìn)行50天，產(chǎn)生減輕的體重，減少的脂肪組織的積累，以及葡萄糖、糖化血紅蛋白和胰腺胰島素的水平的顯著提高，連同肌肉和肝中的甘油三酯水平的降低。未觀察到高脂肪飲食攝取的變化(McClean，Irwin等人2007)。指向相同方向，發(fā)現(xiàn)GIP受體敲除小鼠對(duì)肥胖的發(fā)生具有抗性，然而飼以相同高脂肪飲食的野生型小鼠顯示GIP的分泌過多以及極度內(nèi)臟和皮下脂肪沉著，具有胰島素抵抗(Miyawaki, Yamada等人2002)。然而，口服葡萄糖載荷后早期胰島素反應(yīng)被削弱，導(dǎo)致更高的血糖水平(Miyawaki, Yamada 等人 1999)。
[0410]在其它實(shí)施方案中，藥劑包含其它藥物活性劑。這樣的其它藥物活性化合物，除其它以外，是(但不限于)用于治療和/或預(yù)防糖尿病優(yōu)選DM2和糖尿病并發(fā)癥的化合物，其中化合物選自磺酰脲藥物、雙胍類，α -葡萄糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮、DPP4抑制劑、氯茴苯酸類、胰高血糖素-樣肽類似物、胃抑肽類似物、淀粉素類似物、腸降血糖素類似物、胰島素和用于治療胰島 素抵抗和/或DM2或用于預(yù)防胰島素抵抗和/或DM2的其它治療劑等。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，鑒于可利用根據(jù)本發(fā)明的核酸分子按照本發(fā)明解決的各種適應(yīng)征，所述其它藥物活性劑可以是原則上適合用于治療和/或預(yù)防這樣的疾病的任何藥物活性劑。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子，特別地當(dāng)存在或用作藥劑時(shí)，優(yōu)選與磺酰脲藥物、雙胍類，α-葡萄糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮，氯茴苯酸類，胰高血糖素-樣肽類似物，胃抑肽類似物，淀粉素類似物、腸降血糖素模擬物、DPP4抑制劑，胰島素和用于治療DM1、胰島素抵抗和/或DM2或用于預(yù)防胰島素抵抗和/或DM2的其它治療劑等組合。
[0411]在本發(fā)明內(nèi)的是藥劑原則上可選擇地或另外地結(jié)合用于治療所述疾病的藥劑的使用來用于預(yù)防公開的疾病中的任何疾病。因而，各自的標(biāo)志物即針對(duì)各自的疾病，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。優(yōu)選地，各自的標(biāo)志物為高胰增血糖素血癥。或者和/或另外地，各自的標(biāo)志物選自胃泌酸調(diào)節(jié)素、腸高血糖素和GIP (對(duì)于GIP結(jié)合性核酸分子)。其它組的標(biāo)志物選自強(qiáng)烈的口渴、高飲水體積、尿頻、極度饑餓感、HbAlc值、血漿胰島素水平、OGT后血漿葡萄糖水平、餐后空腹血漿葡萄糖水平、空腹血漿葡萄糖水平、尿液葡萄糖水平、體重、血壓、無力、疲勞、在飲食不存在的情況下體重減輕、體重增加、頻繁的細(xì)菌或真菌感染、傷口愈合不良、手足麻痹和視覺損傷。
[0412]在本發(fā)明的藥劑的一個(gè)實(shí)施方案中，將這樣的藥劑與用于本文中公開的疾病中的任何疾病的其它治療，特別地可對(duì)其使用本發(fā)明的藥劑的那些治療組合使用。
[0413]〃聯(lián)合治療〃(或〃協(xié)同治療(co-therapy)")包括本發(fā)明的藥劑和至少第二或其它試劑的施用(作為意在從這些治療劑(即本發(fā)明的藥劑和所述第二或其它試劑)的協(xié)同作用提供至少有益作用的特異治療方案的部分)。組合的有益作用包括但不限于由治療有效試劑的組合產(chǎn)生的藥代動(dòng)力學(xué)或藥效共同作用。通過在一段確定的時(shí)間(通常數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)、數(shù)天或數(shù)周，取決于選擇的組合)內(nèi)進(jìn)行這些治療有效試劑的組合施用。
[0414]〃聯(lián)合治療〃可能，但通常不期望包括這些治療有效試劑的兩種或更多種(作為分開的單一療法方案的部分)的施用。"聯(lián)合治療"意欲包括以連續(xù)方式施用這些治療有效試劑，即，其中在不同的時(shí)間施用每種治療有效試劑，以及以大體上同時(shí)的方式施用這些治療有效試劑，或所述治療有效試劑的至少兩種。大體上同時(shí)的施用可以例如通過給受試者施用具有固定比率的每一種治療有效試劑的單個(gè)膠囊或多個(gè)每個(gè)具有一種治療有效試劑的單個(gè)膠囊。
[0415]每一種治療有效試劑的連續(xù)或大體上同時(shí)施用可通過任何適當(dāng)?shù)耐緩絹韺?shí)現(xiàn)，所述途徑包括但不限于局部途徑、口服途徑、靜脈內(nèi)途徑、肌內(nèi)途徑和通過粘膜組織的直接吸收。治療劑可通過相同途徑或通過不同途徑施用。例如，選擇的組合的第一治療有效試劑可通過注射施用，而組合的其它治療有效試劑可局部施用。
[0416]或者，例如，可局部施用所有治療有效試劑，或可通過注射施用所有治療有效試劑。除非另外指出，否則施用治療有效試劑所按的順序不是至關(guān)重要的。"聯(lián)合治療"還可包括與其它生物活性成分進(jìn)一步組合的上述治療有效試劑的施用。當(dāng)聯(lián)合治療還包括非藥物治療時(shí)，可在任何適當(dāng)?shù)臅r(shí)間進(jìn)行非藥物治療，只要可從治療有效試劑與非藥物治療的組合的共同作用獲得有益作用。例如，在適當(dāng)?shù)那闆r下，當(dāng)從治療有效試劑的施用暫時(shí)移除非藥物治療(可能數(shù)天或甚至數(shù)周)時(shí)，仍可獲得有益作用。
[0417]如 上述一般術(shù)語中概述的，根據(jù)本發(fā)明的藥劑原則上可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何形式施用。優(yōu)選施用途徑為全身性施用，更優(yōu)選通過胃腸外施用，優(yōu)選通過注射。或者，可局部施用藥劑。其它施用途徑包括肌內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下、口服、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)或經(jīng)肺，優(yōu)先考慮侵入性最小然而確保功效的施用途徑。
[0418]胃腸外施用通常用于皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射和輸注。此外，用于胃腸外施用的一個(gè)方法使用緩釋或持續(xù)釋放系統(tǒng)的植入，這確保了劑量的恒定水平得到維持，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的。
[0419]此外，本發(fā)明的優(yōu)選藥劑可通過適當(dāng)?shù)谋莾?nèi)媒介物、吸入劑的局部使用以鼻內(nèi)形式施用，或使用對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的經(jīng)皮貼劑的那些形式通過經(jīng)皮膚途徑來施用。為了以透皮遞送系統(tǒng)的形式施用，劑量施用當(dāng)然在給藥方案中從始至終是連續(xù)的而非間歇性的。其它優(yōu)選局部用制劑包括乳膏劑、軟膏、洗劑、氣溶膠噴霧劑和凝膠。
[0420]有利地響應(yīng)本發(fā)明的方法、核酸分子、藥物組合物和藥劑的受試者包括醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)受試者，通常包括人類和人患者。除其它以外，這樣的受試者優(yōu)選選自貓、狗、大型動(dòng)物、禽類例如雞等。
[0421]本發(fā)明的藥劑通常包含有效量的用于治療的活性組分，包括但不限于本發(fā)明的核酸分子，其溶解于或分散在藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中。藥學(xué)上可接受的介質(zhì)或載體包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這樣的介質(zhì)和試劑用于藥物活性物質(zhì)的用途在本領(lǐng)域是公知的。還可將補(bǔ)充活性成分摻入本發(fā)明的藥劑。
[0422]在其它方面，本發(fā)明涉及藥物組合物。這樣的藥物組合物包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的核酸分子和優(yōu)選藥 學(xué)上可接受的賦形劑。這樣的粘合劑可以是本領(lǐng)域使用和/或已知的任何賦形劑。更具體地，這樣的賦形劑是與本文中公開的藥劑的制備結(jié)合起來論述的任何賦形劑。在其它實(shí)施方案中，藥物組合物包含其它藥物活性劑。
[0423]根據(jù)本公開內(nèi)容，本發(fā)明的藥劑和藥物組合物的制備對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。通常地，可將這樣的組合物制備為可注射液體溶液或懸浮液；適合在注射之前在液體中以溶液或懸浮液的形式使用的固定形式；片劑或用于口服施用的其它固體；定時(shí)釋放膠囊；或目前使用的任何其它形式，包括滴眼劑、乳膏、洗劑、軟膏、吸入劑等。由外科醫(yī)生、內(nèi)科醫(yī)生或醫(yī)護(hù)人員使用無菌制劑處理手術(shù)區(qū)的特定區(qū)域，例如基于鹽水的洗滌也可以是特別有用的。還可通過微裝置、微粒或海綿遞送組合物。
[0424]配制后，以與劑量配方相容的方式，以這樣的藥理學(xué)上有效的量施用藥劑。以多種劑型例如上述可注射溶液的類型容易地施用制劑，但也可使用藥物釋放膠囊等。
[0425]本發(fā)明的藥劑還可以以口服劑型如緩釋和持續(xù)釋放片劑或膠囊、丸劑、粉劑、粒齊?、酏劑、酊劑、懸浮液、糖漿劑和乳劑進(jìn)行施用。有利地從脂肪乳劑或懸浮劑配制栓劑。
[0426]藥物組合物或藥劑可被滅菌和/或包含佐劑例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑或乳化劑、溶液促進(jìn)劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，它們還可包含其它治療上有價(jià)值的物質(zhì)。組合物可按照常規(guī)技術(shù)(包括混合、粒化或涂膜法)來制備，通常包含約0.1%至75%，優(yōu)選地約1%至50%的活性成分。
[0427]液體，特別地可注射組合物可以例如通過溶解、分散等來制備。將活性化合物溶解在藥用純?nèi)軇?例如水、鹽水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等)中或與其混合，從而形成可注射溶液或懸浮液。此外，可配制適合在注射之前溶解于液體中的固體形式。
[0428]還可將本發(fā)明的藥劑和核酸分子分別地以脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)的形式例如小的單層囊泡、大的單層囊泡以及多層囊泡施用。脂質(zhì)體可從多種磷脂形成，包括膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿。在一些實(shí)施方案中，利用藥物的水溶液水化脂質(zhì)組分的薄膜以形成封裝藥物的脂質(zhì)層，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的。例如，可以以使用本領(lǐng)域已知的方法構(gòu)建的親脂化合物或非免疫原性高分子量化合物的復(fù)合物的形式提供本文中公開的本發(fā)明的核酸分子。此外，脂質(zhì)體在其表面上具有本發(fā)明的核酸分子，以將細(xì)胞毒素劑靶向和運(yùn)載至內(nèi)部，從而介導(dǎo)細(xì)胞殺傷。核酸締合的復(fù)合物的實(shí)例提供于美國(guó)專利號(hào)6，011，020。
[0429]本發(fā)明的藥劑和核酸分子分別地還可用可溶性聚合物如可靶向藥物載體偶聯(lián)。這樣的聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥基乙基天冬酰胺苯酚或被棕櫚酰基殘基取代的聚乙烯基氧基聚賴氨酸。此外，本發(fā)明的藥劑和核酸分子分別地可偶聯(lián)至一類用于實(shí)現(xiàn)藥物的受控釋放的生物可降解聚合物，例如聚乳酸、聚ε -己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、多正酯類、縮醛樹脂、聚二氫吡喃、聚腈基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)的或兩親性嵌段共聚物。
[0430]必要時(shí)，待施用的本發(fā)明的藥物組合物和藥劑分別地還可包含少量無毒輔助物質(zhì)例如濕潤(rùn)劑或乳化劑、pH緩沖劑以及其它物質(zhì)例如醋酸鈉和三乙醇胺油酸酯。
[0431]分別地使用本發(fā)明的核酸分子和藥劑的給藥方案按照多個(gè)因素來選擇，所述因素包括患者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀況；待治療的病況的嚴(yán)重度；施用途徑；患者的腎和肝功能；以及使用的本發(fā)明的特定核酸或其鹽。普通熟練醫(yī)生或獸醫(yī)可容易地確定和開出防止、抵御或停止病況的進(jìn)展所需的藥物的有效量。
[0432]在本文中公開的疾病的任何疾病的治療中，根據(jù)本發(fā)明的核酸的有效血漿水平范圍優(yōu)選在500fM 與200 μ Μ,優(yōu)選地InM與20 μ Μ，更優(yōu)選地5ηΜ與20 μ Μ，最優(yōu)選50ηΜ與20 μ M之間。
[0433]本發(fā)明的核酸分子和藥劑分別地可優(yōu)選地以單個(gè)日劑量、每?jī)商旎蛎咳煲淮?、每周一次、每?jī)芍芤淮?、以單個(gè)月劑量或每三個(gè)月一次來進(jìn)行施用。
[0434]在本發(fā)明內(nèi)的是本文中描述的藥劑組成本文中公開的藥物組合物。
[0435]在其它方面，本發(fā)明涉及用于治療需要這樣的治療的受試者的方法，其中所述方法包括施用藥物活性量的至少一個(gè)種類的本發(fā)明的核酸分子。在實(shí)施方案中，受試者患有疾病或處于發(fā)生這樣的疾病的風(fēng)險(xiǎn)中，其中所述疾病為本文中公開的那些疾病的任何疾病，特別地結(jié)合根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的任一種用于制造藥劑的用途公開的那些疾病的任何疾病。
[0436]應(yīng)理解，根據(jù)本發(fā)明的核酸以及拮抗劑不僅可用作藥劑或用于制造藥劑，而且還可用于化妝品目的，特別地在胰高血糖素參與局部發(fā)炎皮膚病變方面。
[0437]如本文中優(yōu)選地使用的，診斷劑或診斷試劑或診斷裝置-如果無相反指明則以可互換的方式使用所有三個(gè)術(shù)語-適合用于直接或間接地檢測(cè)胰高血糖素，優(yōu)選如本文中與本文中描述的各種障礙和疾病結(jié)合描述的各種胰高血糖素。診斷劑適合用于分別地檢測(cè)和/或跟蹤本文中描述的障礙和疾病的任何一種。這樣的檢測(cè)可通過根據(jù)本發(fā)明的核酸分子對(duì)胰高血糖素的結(jié)合來進(jìn)行。這樣的結(jié)合可被直接或間接地檢測(cè)。各自的方法和裝置對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。除其它以外，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可包含允許檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的核酸分子，優(yōu)選結(jié)合于胰高血糖素的核酸的標(biāo)記。這樣的標(biāo)記優(yōu)選選自放射性標(biāo)記、酶促標(biāo)記和熒光標(biāo)記。原則上，針對(duì)抗體開發(fā)的所有已知測(cè)定可被采用于根據(jù)本發(fā)明的核酸分子，然而靶結(jié)合抗體被替代成靶結(jié)合核酸，在使用未標(biāo)記靶結(jié)合抗體的抗體-測(cè)定中，檢測(cè)優(yōu)選通過利用第二抗體來進(jìn)行，所述第二抗體已用放射性標(biāo)記、酶促標(biāo)記和熒光標(biāo)記修飾，并且在其Fe-片段上結(jié)合靶結(jié)合抗體。在核酸分子、優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的情況下，利用這樣的標(biāo)記修飾核酸分子，其中優(yōu)選地這樣的標(biāo)記選自生物素、Cy-3和Cy-5，并且這樣的標(biāo)記通過針對(duì)這樣的標(biāo)記的抗體例如抗-生物素抗體、抗_Cy3抗體或抗_Cy5抗體來檢測(cè)，或在標(biāo)記是生物素的情況下-標(biāo)記通過天然地結(jié)合生物素的鏈霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白來檢測(cè)。這樣的抗體、鏈霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白繼而優(yōu)選地利用各自的標(biāo)記例如放射性標(biāo)記、酶促標(biāo)記或熒光標(biāo)記(如第二抗體)來修飾。
[0438]在其它實(shí)施方案中，通過第二檢測(cè)裝置檢測(cè)或分析根據(jù)本發(fā)明的核酸分子，其中所述檢測(cè)裝置為分子信標(biāo)。分 子信標(biāo)的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的并且Mairal等人進(jìn)行了綜述(Mairal等人，2008)。
[0439]應(yīng)認(rèn)識(shí)到使用根據(jù)本發(fā)明的核酸分子進(jìn)行的胰高血糖素的檢測(cè)特別允許檢測(cè)本文中定義的胰高血糖素。
[0440]與胰高血糖素的檢測(cè)相結(jié)合，優(yōu)選方法包括下列步驟:
[0441](a)提供將測(cè)試其膜聞血糖素的存在的樣品，
[0442](b)提供根據(jù)本發(fā)明的核酸分子，
[0443](C)將樣品優(yōu)選地在反應(yīng)容器中與核酸分子反應(yīng)
[0444]其中可在步驟(b)之前進(jìn)行步驟(a)，或可在步驟(a)之前進(jìn)行步驟(b)。
[0445]在優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了另外的步驟d)，所述步驟在于檢測(cè)樣品與核酸分子的反應(yīng)。優(yōu)選地，將步驟b)的核酸分子固定于表面。表面可以是反應(yīng)容器例如反應(yīng)管、板的孔的表面，或這樣的反應(yīng)容器例如珠粒中包含的裝置的表面。核酸分子至表面的固定可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方式包括但不限于非共價(jià)或共價(jià)連接來進(jìn)行。優(yōu)選地，連接通過表面與核酸分子之間的共價(jià)化學(xué)鍵來建立。然而，也在本發(fā)明中的是將核酸分子間接固定于表面，其中這樣的間接固定包括其它組分或一對(duì)相互作用伴侶的使用。這樣的其它組分優(yōu)選為與待固定的核酸分子特異性相互作用，所述組分也被稱為相互作用伴侶，從而介導(dǎo)核酸分子至表面的連接。相互作用伴侶優(yōu)選選自核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體。優(yōu)選地，相互作用伴侶為抗體，更優(yōu)選單克隆抗體?；蛘撸嗷プ饔冒閭H為核酸分子，優(yōu)選功能性核酸分子。更優(yōu)選，這樣的功能性核酸分子選自適體、spiegelmer和與所述核酸至少部分互補(bǔ)的核酸分子。在其它可選擇的實(shí)施方案中，核酸分子對(duì)表面的結(jié)合由多部分相互作用伴侶介導(dǎo)。這樣的多部分相互作用伴侶優(yōu)選為一對(duì)相互作用伴侶或由第一成員和第二成員組成的相互作用伴侶，其中第一成員由核酸分子包含或連接于所述核酸分子，并且第二成員連接于表面或被表面包含。多部分相互作用伴侶優(yōu)選選自成對(duì)的相互作用伴侶，包括生物素與抗生物素蛋白、生物素與鏈霉抗生物素蛋白以及生物素與neutravidin。優(yōu)選地，相互作用伴侶對(duì)的第一成員為生物素。
[0446]這樣的方法的優(yōu)選結(jié)果為胰高血糖素與核酸分子的固定復(fù)合物的形成，其中更優(yōu)選檢測(cè)到所述復(fù)合物。在實(shí)施方案內(nèi)的是從復(fù)合物檢測(cè)到胰高血糖素。
[0447]順從該要求的各自檢測(cè)裝置是例如特異于胰高血糖素的那部分/那些部分的任何檢測(cè)裝置。特別優(yōu)選的檢測(cè)裝置為選自核酸分子、多肽、蛋白質(zhì)和抗體的檢測(cè)裝置，所述檢測(cè)裝置的產(chǎn)生對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。
[0448]用于檢測(cè)胰高血糖素的方法還包括從已優(yōu)選地用于進(jìn)行步驟c)的反應(yīng)容器除去樣品。[0449]方法還在其它實(shí)施方案中包括將胰高血糖素的相互作用伴侶固定在表面，優(yōu)選上文中定義的表面上的步驟，其中相互作用伴侶是如本文中定義的，優(yōu)選如上文中結(jié)合各自方法定義的，更優(yōu)選在它們的各種實(shí)施方案中包括核酸分子、多肽、蛋白質(zhì)和抗體。在本實(shí)施方案中，特別優(yōu)選的檢測(cè)裝置為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子，其中這樣的核酸分子可優(yōu)選地是標(biāo)記的或非標(biāo)記的。如果這樣的核酸分子被標(biāo)記，則其可被直接或間接檢測(cè)。這樣的檢測(cè)還可包括使用第二檢測(cè)裝置，其優(yōu)選地也選自本文中描述的核酸分子、多肽和蛋白質(zhì)。這樣的檢測(cè)裝置優(yōu)選特異于根據(jù)本發(fā)明的核酸分子。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，第二檢測(cè)裝置為分子信標(biāo)。核酸分子或第二檢測(cè)裝置或兩者可在優(yōu)選實(shí)施方案中包含檢測(cè)標(biāo)記。檢測(cè)標(biāo)記優(yōu)選選自生物素、溴代脫氧尿苷標(biāo)記、地高辛標(biāo)記、熒光標(biāo)記、UV-標(biāo)記、放射性-標(biāo)記和螯合劑分子?；蛘?，第二檢測(cè)意指與優(yōu)選由核酸包含的，由核酸包括的或連接于核酸的檢測(cè)標(biāo)記的相互作用。特別優(yōu)選的組合如下:
[0450]檢測(cè)標(biāo)記是生物素并且第二檢測(cè)裝置為針對(duì)生物素的抗體，或其中
[0451]檢測(cè)標(biāo)記是生物素并且第二檢測(cè)裝置為抗生物素蛋白或具有抗生物素蛋白的分子，或其中
[0452]檢測(cè)標(biāo)記是生物素并且第二檢測(cè)裝置為鏈霉抗生物素蛋白或具有鏈霉抗生物素蛋白的分子，或其中
[0453]檢測(cè)標(biāo)記是生物素并且第二檢測(cè)裝置為neutravidin或具有neutravidin的分子，或
[0454]其中檢測(cè)標(biāo)記 為溴代脫氧尿苷并且第二檢測(cè)裝置為針對(duì)溴代脫氧尿苷的抗體，或其中
[0455]檢測(cè)標(biāo)記為地高辛并且第二檢測(cè)裝置針對(duì)地高辛的抗體，或其中
[0456]檢測(cè)標(biāo)記是螯合劑，并且第二檢測(cè)裝置為放射性核素，其中優(yōu)選地所述檢測(cè)標(biāo)記連接于核酸分子。應(yīng)認(rèn)識(shí)到該類型的組合也適用于其中核酸分子連接于表面的實(shí)施方案。在這樣的實(shí)施方案中，優(yōu)選檢測(cè)標(biāo)記連接于相互作用伴侶。
[0457]最后，也在本發(fā)明內(nèi)的是使用第三檢測(cè)裝置檢測(cè)第二檢測(cè)裝置，優(yōu)選第三檢測(cè)裝置為酶，更優(yōu)選在第二檢測(cè)裝置的檢測(cè)后顯示酶促反應(yīng)，或第三檢測(cè)裝置為用于檢測(cè)放射線的裝置，更優(yōu)選由放射性核素發(fā)射的放射線。優(yōu)選地，第三檢測(cè)裝置特異性地檢測(cè)第二檢測(cè)裝置和/或與其相互作用。
[0458]同樣地在實(shí)施方案中，通過將胰高血糖素的相互作用伴侶固定在表面上和將根據(jù)本發(fā)明的核酸分子添加至在相互作用伴侶與胰高血糖素之間形成的復(fù)合物，可從反應(yīng)物，更優(yōu)選從其中進(jìn)行步驟c)和/或d)的反應(yīng)容器除去樣品。
[0459]在實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子包括突光部分，并且其中突光部分的突光在核酸分子與胰高血糖素和與游離胰高血糖素之間的復(fù)合物形成后不同。
[0460]在其它實(shí)施方案中，核酸分子是根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的衍生物，其中核酸分子的衍生物包含至少一個(gè)替代腺苷的腺苷的熒光衍生物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，腺苷的熒光衍生物為亞乙烯基腺苷。
[0461]在其它實(shí)施方案中，使用熒光檢測(cè)由根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的衍生物和胰高血糖素組成的復(fù)合物。
[0462]在方法的實(shí)施方案中，信號(hào)在步驟(C)或步驟(d)中產(chǎn)生，優(yōu)選信號(hào)與樣品中的胰聞血糖素濃度相關(guān)。
[0463]在優(yōu)選實(shí)施方案中，可在96孔板中進(jìn)行測(cè)定，其中如上所述將組分固定在反應(yīng)容器中，孔用作反應(yīng)容器。
[0464]本發(fā)明的核酸分子還可用作用于藥物發(fā)現(xiàn)的起始材料。大體上存在兩個(gè)可能的方法。一個(gè)方法是篩選化合物文庫，其中這樣的化合物文庫優(yōu)選是低分子量化合物文庫。在其實(shí)施方案中，篩選是高通量篩選。優(yōu)選地，高通量篩選是在基于靶的測(cè)定中進(jìn)行的化合物的快速、高效的試錯(cuò)評(píng)價(jià)。在最佳情況下通過比色計(jì)測(cè)量進(jìn)行分析。與其結(jié)合使用的文庫對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。
[0465]在篩選化合物文庫的情況下，例如通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定，可發(fā)現(xiàn)適當(dāng)?shù)囊雀哐撬仡愃莆?、胰高血糖素激?dòng)劑或胰高血糖素拮抗劑。這樣的競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定可如下建立。本發(fā)明的核酸分子，優(yōu)選地spiegelmer，即本發(fā)明的L-核酸，偶聯(lián)于固相。為了鑒定胰高血糖素類似物，可將標(biāo)記的胰高血糖素添加至測(cè)定。潛在類似物可與胰高血糖素分子競(jìng)爭(zhēng)對(duì)本發(fā)明的核酸分子的結(jié)合，這可伴隨通過各自標(biāo)記獲得的信號(hào)的減弱。激動(dòng)劑或拮抗劑的篩選可包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定的使用。
[0466]根據(jù)本發(fā)明的試劑盒可包括至少一個(gè)或數(shù)個(gè)種類的本發(fā)明的核酸分子，優(yōu)選用于檢測(cè)胰高血糖素，更優(yōu)選用于檢測(cè)胰高血糖素。此外，試劑盒可包括至少一個(gè)或數(shù)個(gè)陽性或陰性對(duì)照。陽性對(duì)照可以例如是胰高血糖素，特別地本發(fā)明的核酸分子是針對(duì)其選擇的或其所結(jié)合的胰高血糖素，優(yōu)選地其以液體形式存在。陰性對(duì)照可以例如是按照與胰高血糖素相似的生物物理性質(zhì)定義的但不被本發(fā)明的核酸分子識(shí)別的肽。此外，所述試劑盒還可包括一種或數(shù)中緩沖液。干燥或凍干的形式存在的或溶解于液體中的各種成分可包含在試劑盒中。在其它實(shí)施方案中，試劑盒包括給用戶提供關(guān)于如何使用試劑盒及其各種成分的信息的說明或說明書。
[0467]根據(jù)本發(fā)明的核酸的藥物和生物分析測(cè)定對(duì)于其在人或非人身體的幾種腫瘤、組織和器官中的藥代動(dòng)力學(xué)和生物動(dòng)力學(xué)特征譜的估量是非常重要的。為此目的，可使用本文中公開的或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的檢測(cè)法的任何檢測(cè)法。在本發(fā)明的其它方面，提供了用于檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的夾心雜交。在檢測(cè)測(cè)定內(nèi)，使用捕獲探針和檢測(cè)探針。捕獲探針與根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的第一部分互補(bǔ)，并且檢測(cè)探針與其第二部分互補(bǔ)。捕獲探針被固定在表面或基質(zhì)上。檢測(cè)探針優(yōu)選具有可如本文中先前所述檢測(cè)的標(biāo)志分子或標(biāo)記。
[0468]可如下進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的檢測(cè):
[0469]根據(jù)本發(fā)明的核酸分子以其末端之一與捕獲探針雜交并以另一末端與檢測(cè)探針雜交。隨后，通過例如一次或數(shù)次洗滌步驟除去未結(jié)合的檢測(cè)探針?？呻S后測(cè)量?jī)?yōu)選具有標(biāo)記或標(biāo)志物分子的結(jié)合檢測(cè)探針的量，如例如在W0/2008/052774 (將其通過引用并入本文)中更詳細(xì)概述的。
[0470]如本文中優(yōu)選使用的，術(shù)語治療，在優(yōu)選實(shí)施方案中，包括額外地或可選擇地預(yù)防和/或隨防。
[0471]如本文中優(yōu)選地使用的，術(shù)語疾病和障礙應(yīng)當(dāng)以可互換的方式使用，如果沒有相反指明的話。
[0472]如本文中所用，術(shù)語包括優(yōu)選地不限于由這樣的術(shù)語跟隨或描述的主題。然而，在可選擇的實(shí)施方案中，術(shù)語包括應(yīng)當(dāng)理解為意指包含，從而理解為限定由這樣的術(shù)語跟隨或描述的主題。
[0473] 不同的SEQ ID NOs:,根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的化學(xué)性質(zhì)，其實(shí)際序列和內(nèi)部指稱編號(hào)概述于下表中。
【權(quán)利要求】
1.能夠結(jié)合胰高血糖素的核酸分子，其中所述核酸分子選自A型的核酸分子、B型的核酸分子和C型的核酸分子。
2.權(quán)利要求1的核酸分子，其中所述核酸分子為A型的核酸分子，其中所述A型的核酸分子包含中央核苷酸區(qū)段，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列:
5J Bn1AAATGn2GAn3H4GCTAKGn5GGn6Ii7GGAATCTRRRSJ [SEQ ID NO: 173]，其中Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 Y 或 rT, n6 為 A 或 rA, n7為A或rA,并且其中 G、A、T、C、B、K、Y和R的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
3.權(quán)利要求2的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列
5J Bn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGARSJ [SEQ ID NO: 174]，其中Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 T 或 rT, n6 為 A 或 rA, n7為A或rA,并且其中 G、A、T、C、B和R的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
4.權(quán)利要求2至3的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含選自下列序列的核苷酸序列
5’ TniAAATGr^GAr^r^GCTAGGnsGGrv^GGAATCTGAGS’ [SEQ ID NO:175]，
5’ TniAAATGr^GAr^r^GCTAGGnsGGrv^GGAATCTGAAS，[SEQ ID NO:176]，
5’ CniAAATGr^GAr^r^GCTAGGnsGGrwGGAATCTGAGS’ [SEQ ID NO: 177]，和
5J Gn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAGSJ [SEQ ID NO:178]， 其中
Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 T 或 rT, n6 為 A 或 rA, n7為A或rA,并且其中 G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
5.權(quán)利要求2至4的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含如下核苷酸序列:
5J Gn1AAATGn2GAn3H4GCTAGGn5GGn6Ii7GGAATCTGAGSJ [SEQ ID NO:178]， 其中
Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 T 或 rT, n6 為 A 或 rA, n7為A或rA,并且其中 G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
6.權(quán)利要求2至4的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含如下核苷酸序列:
5’ CniAAATGr^GAr^r^GCTAGGnsGGrv^GGAATCTGAGS’ [SEQ ID NO:177]， 其中
Ii1 為 G 或 rG, n2 為 G 或 rG, n3 為 G 或 rG, n4 為 G 或 rG, n5 為 T 或 rT, n6 為 A 或 rA, n7為A或rA,并且 G、A、T和C為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rT為核糖核苷酸。
7.權(quán)利要求2至6的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段由2’-脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸組成。
8.權(quán)利要求2至7的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含選自如下序列的核苷酸序列:
5’GrGAAATGGGAGGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:179],
5’GGAAATGrGGAGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:180]，
5’GGAAATGGGArGGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:181],
5’GGAAATGGGAGrGGCTAGGTGGAAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:182],
5’GGAAATGGGAGGGCTAGGTGGrAAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:183],
5，GGAAATGGGAGGGCTAGGTGGArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:184]；
5’GGAAATGrGGAGGGCTAGGTGGrAAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO: 185]，
5’GGAAATGGGAGGGCTA GGTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:186],
5’GGAAATGrGGAGGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:187],
5’GGAAATGGGArGGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO: 188]，
5’GrGAAATGrGGArGGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:189]，
5’ GrGAAATGrGGArGrGGCTAGGTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:190]和
5’GrGAAATGrGGArGrGGCTAGGrTGGrArAGGAATCTGAG3’ [SEQ ID NO:191]， 其中 G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rT的任一個(gè)為核糖核苷酸。
9.權(quán)利要求2至6的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段由2’-脫氧核糖核苷酸組成。
10.權(quán)利要求2至9的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子以5’->3’的方向包含第一末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第二末端核苷酸區(qū)段，其中 第一末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸，和 第二末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸。
11.權(quán)利要求2至9的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子以5’->3’的方向包含第二末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第一末端核苷酸區(qū)段，其中 第一末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸，和 第二末端核苷酸區(qū)段包含I至7個(gè)核苷酸。
12.權(quán)利要求10至11的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS ’并且第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中 Z1為G或不存在，Z2為S或不存在，Z3為V或不存在，Z4為B或不存在，Z5為B或不存在，Z6為V或不存在，Z7為B或不存在，Z8為V或不存在，Z9為V或不存在，Z10為B或不存在，Z11為S或不存在，并且Z12為C或不存在。
13.權(quán)利要求10至12的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中
a)Z1 為 G，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 V, Z7 為 B，Z8 為 V, Z9 為 V, Z10 為 B，Z11為S，并且Z12為C，或
b)Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B, Z6 為 V，Z7 為 B, Z8 為 V，Z9 為 V，Z10 為 B，Z11為S，并且Z12為C，或
c)Z1 為 G，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 V, Z7 為 B，Z8 為 V, Z9 為 V, Z10 為 B，Z11為S，并且Z12不存在， 優(yōu)選地
a)Z1 為 G，Z2 為 C，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 Y，Z6 為 R，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 V，Z10 為 Y，Z11為G，并且Z12為C，或
b)Z1 不存在，Z2 為 C，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 Y，Z6 為 R，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 V，Z10 為 Y，Z11為G，并且Z12為C，或
c)Z1 為 G，Z2 為 C，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 Y，Z6 為 R，Z7 為 Y，Z8 為 R，Z9 為 V, Z10 為 Y，Z11為G，并且Z12不存在。
14.權(quán)利要求13的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCACTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCAGTGC3’，或 b)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCACTGA3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCAGTGC3’，或 c)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCAGTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ TCACTGC3’，或 d)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCACTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTACTGC3’，或 e)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCGCTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCAGTGC3’，或 f)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCGCCAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ TCGGCGC3’。
15.權(quán)利要求10至12的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中
a)Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B, Z6 為 V，Z7 為 B, Z8 為 V，Z9 為 V，Z10 為 B，Z11為S，并且Z12不存在，或
b)Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 B，Z5 為 B, Z6 為 V，Z7 為 B, Z8 為 V，Z9 為 C，Z10 為 B，Z11不存在并且Z12不存在，或 c）Z1不存在，Z2不存在，Z3為V，Z4為B, Z5為B，Z6為V，Z7為B，Z8為V，Z9為C，Z10為B，Z11為S，并且Z12不存在， 優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中
a)Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 G，Z5 為 Y，Z6 為 S，Z7 為 B, Z8 為 R，Z9 為 C，Z10 為 B，Z11為S，并且Z12不存在，或
b)Z1 不存在，Z2 為 S，Z3 為 V，Z4 為 G，Z5 為 Y，Z6 為 S，Z7 為 B, Z8 為 R，Z9 為 C，Z10 為 B，Z11不存在并且Z12不存在，或 ^Z1不存在，Z2不存在，Z3為V，Z4為G，Z5為Y，Z6為S，Z7為B，Z8為R，Z9為C，Z10為B，Z11為S，并且Z12不存在。
16.權(quán)利要求15的核酸分子,其中 a)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTGCGC3’，或 b)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCGC3’，或 c)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GGGCCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGGCCC3’，或 d)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCGCCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGGCGC3’，或 e)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GAGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCTC3’，或 f)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCGTGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCACGC3’，或 g)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCGTCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGACGC3’。
17.權(quán)利要求10至12的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3為V，Z4為B, Z5為B，Z6為V，Z7為B，Z8為V，Z9為V，Z10為B，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3為V，Z4為B, Z5為B，Z6為V，Z7為B，Z8為V，Z9為V，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 c)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B, Z8為V，Z9為V，Z10為B，Z11不存在并且Z12不存在， 優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，CZ7Z8Z9Z10ZnZ123，， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3為V，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10為B，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3為V，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或c)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10為B, Z11不存在并且Z12不存在。
18.權(quán)利要求17的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCC3’，或 b)所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’CGCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGCG3’。
19.權(quán)利要求10至12的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B, Z8為V，Z9為V，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 b)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B, Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 C) Z1不存在，Z2不 存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為V，Z7為B, Z8為V，Z9為V，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在， 優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，CZ7Z8Z9Z10ZnZ123，， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 b)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為G，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 C)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為Y，Z6為G，Z7為Y，Z8為R，Z9為C，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
20.權(quán)利要求19的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ GCGG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CCGC3’。
21.權(quán)利要求10至12的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為V，Z7為B，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為V，Z7為B, Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 ^Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為V，Z7為B，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在， 優(yōu)選地所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，CZ7Z8Z9ZltlZ11Z1J’，其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為S，Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為S，Z6為S，Z7為S，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 ^Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
22.權(quán)利要求21的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CGC3’。
23.權(quán)利要求10至12的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6VS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ BZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為V，Z7為B,Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在， b)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為V，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在， Z11不存在并且Z12不存在， c)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7為B，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在， CDZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在， 優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5，CZ7Z8Z9Z10ZnZ123，， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為G，Z7為C，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
24.權(quán)利要求2至6和9至23的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子包含選自SEQID NO:6和SEQ ID NO:7的核苷酸序列，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的核苷酸序列的核酸分子具有至少85%的同一性，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的核苷酸序列的核酸分子同源，其中所述同源性為至少85%。
25.權(quán)利要求2至8和10至23的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子包含選自SEQID NO:23、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:158和SEQ ID NO:159的核苷酸序列，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:91，SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:158 和 SEQ ID NO:159 的核苷酸序列的核酸分子具有至少85%的同一性，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ IDNO:91、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:158和SEQ ID NO:159的核苷酸序列的核酸分子同源，其中所述同源性為至少85%。
26.權(quán)利要求1的核酸分子，其中所述核酸分子為B型的核酸分子，其中所述B型的核酸分子包含29至32個(gè)核苷酸的中央?yún)^(qū)段，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含選自如下序列的核苷酸序列:
5’-AKGARn1KGTTGSYAWAn2RTTCGn3TTGGAn4TCn5- ‘3 [SEQ ID NO:197],
5’ -AGAAGGTTGGTAAGTTTCGGTTGGATCTG- ‘3[SEQ ID NO:198],
5’ -AGAAGGTCGGTAAGTTTCGGTAGGATCTG- ‘3[SEQ ID NO:199],
5’ -AGGAAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGATTCA- ‘3[SEQ ID NO:200],
5’ -AGGAAAGGTTGGTAAGGTTCGGTTGGATTCA- ‘3[SEQ ID NO:201]和
5’ -AGGAAGGTTGGTAAGGTTCGGTTGGATTCA- ‘3[SEQ ID NO:202], 其中Ii1為A或rA, n2為G或rG, n3為G或rG, n4為T或rU, n5為A或rA,并且其中 G、A、T、C、K、Y、S、W和R的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rU的任一 個(gè)為核糖核苷酸。
27.權(quán)利要求26的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含如下核苷酸序列:
5J AGGAAn1GGTTGGTAAAn2GTTCGn3TTGGAn4TCn5SJ [SEQ ID NO:203]， 其中Ii1為A或rA, n2為G或rG, n3為G或rG, n4為T或rU, n5為A或rA,并且其中 G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rU的任一個(gè)為核糖核苷酸。
28.權(quán)利要求26至27的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段由2’-脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸組成。
29.權(quán)利要求26至28的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段包含選自如下序列的核苷酸序列:
5’AGGAArAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGATTCA3’ [SEQ ID NO:204]，
5’AGGAAAGGTTGGTAAArGGTTCGGTTGGATTCA3’ [SEQ ID NO:205],
5’AGGAAAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGArUTCA3’ [SEQ ID NO:206],
5’AGGAArAGGTTGGTAAArGGTTCGGTTGGATTCA3’ [SEQ ID NO:207],
5’AGGAArAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGArUTCG3’ [SEQ ID NO:208],
5’AGGAArAGGTTGGTAAAGGTTCGGTTGGArUTCA3’ [SEQ ID NO:209]，
5’ AGGAArAGGTTGGTAAArGGTTCGGTTGGArUTCA3’ [SEQ ID NO:210]和
5’AGGAArAGGTTGGTAAArGGTTCGrGTTGGArUTCrA3’ [SEQ ID NO:211]， 其中G、A、T和C的任一個(gè)為2’ -脫氧核糖核苷酸，并且 rG、rA和rU的任一個(gè)為核糖核苷酸。
30.權(quán)利要求26至27的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述中央核苷酸區(qū)段由2’-脫氧核糖核苷酸組成。
31.權(quán)利要求26至30的任一項(xiàng)的核酸分子,其中所述核酸分子以5’->3’的方向包含第一末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第二末端核苷酸區(qū)段，其中第一末端核苷酸區(qū)段包含3至9個(gè)核苷酸,和 第二末端核苷酸區(qū)段包含3至10個(gè)核苷酸。
32.權(quán)利要求26至30的任一項(xiàng)的核酸分子,其中所述核酸分子以5’->3’的方向包含第二末端核苷酸區(qū)段、中央核苷酸區(qū)段和第一末端核苷酸區(qū)段，其中 第一末端核苷酸區(qū)段包含3至9個(gè)核苷酸,和 第二末端核苷酸區(qū)段包含3至10個(gè)核苷酸。
33.權(quán)利要求31至32的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZAZgZioZnZ』’， 其中 Z1為C或不存在，Z2為G或不存在，Z3為R或不存在，Z4為B或不存在，Z5為B或不存在，Z6為S或不存在，Z7為S或不存在，Z8為V或不存在，Z9為V或不存在，Z10為K或不存在，Z11為M或不存在，并且Z12為S或不存在。
34.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZ7Z8Z9Z1QZnZ123’，其中
a)Z1 為 C，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V, Z9 為 N，Z10 為 K，Z11為M，并且Z12為S，或
b)Z1 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B, Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V，Z9 為 N，Z10 為 K，Z11為M，并且Z12為S，或
c)Z1 為 C，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B，Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V, Z9 為 N，Z10 為 K，Z11為M，并且Z12不存在， 優(yōu)選地所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中
a)Z1 為 C，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A，Z9 為 G，Z10 為 T，Z11為C，并且Z12為G，或
b)Z1 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A，Z9 為 G，Z10 為 T，Z11為C，并且Z12為G，或
c)Z1 為 C，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 C，Z5 為 T，Z6 為 C，Z7 為 G，Z8 為 A，Z9 為 G，Z10 為 T，Z11為C，并且Z12不存在。
35.權(quán)利要求34的核酸分子， a)其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’CGACTCGAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAGTCG3’，或 b)其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’CGGCTCGAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAGTCG3’。
36.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZAZgZioZnZ』’，其中
a)Z1 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B, Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V，Z9 為 N，Z10 為 K，Z11為M，并且Z12不存在，或
b)Z1 不存在，Z2 為 G，Z3 為 R，Z4 為 B，Z5 為 B, Z6 為 S，Z7 為 S，Z8 為 V，Z9 為 N，Z10 為 K，Z11不存在并且Z12不存在，或 ^Z1不存在，Z2不存在，Z3為R，Z4為B, Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N，Z10為K，Z11為M，并且Z12不存在。
37.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZAZgZioZnZ』’， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3為R，Z4為B, Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N, Z10為K，Z11不存在并且Z12不存在，或 b)Z1不存在，Z2不存在，Z3為R，Z4為B, Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N, Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 c)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N，Z10為K，Z11不存在并且Z12不存在， 優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCZ7Z8Z9Z1QZnZ123’， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3為A，Z4為C，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9為G，Z10為T，Z11不存在并且Z12不存在，或 b)Z1不存在，Z2不存在，Z3為A，Z4為C，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9為G，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 c)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為C，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9為G，Z10為T，Zn不存在并且Z12不存在， 優(yōu)選Z1不存在，Z2不存在，Z3為A，Z4為C，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9為G，Z10為Τ，Ζη不存在并且Z12不存在。
38.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZ7Z8Z9Z10Z11Z123,, 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9為N，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 C) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在， 優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAGS ’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTSZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中 a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9為V，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9為V,Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 C) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4為B，Z5為B, Z6為S，Z7為S，Z8為S，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
39.權(quán)利要求38的核酸分子， a)其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GTCGAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAC3’，或 b)其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’TGCGAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGCA3’，或 c)其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GGCCAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTGGCC3’，或 d)其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’GCCGAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGGC3’，或 e)其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’CTCGAG3’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCGAG3’。
40.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZ7Z8Z9Z10ZnZ123，， 其中 a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為B，Z6為S，Z7為S，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 ^Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7為S，Z8為V，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在， 其中優(yōu)選所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CTCZ7Z8Z9Z1(lZnZ123’， 其中 a) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 WZ1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5為T，Z6為C，Z7為G，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 ^Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為C，Z7為G，Z8為A，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
41.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZAZgZioZnZ』’， 其中 a)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7為S，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 b)Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7為S，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 C) Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6為S，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在。
42.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6SAD’并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含核苷酸序列5’ CKVZAZgZioZnZ』’， 其中Z1不存在，Z2不存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不存在，Z11不存在并且Z12不存在，或 其中所述第一末端核苷酸區(qū)段包含5’ Z1Z2Z3Z4Z5Z6GAGS’的核苷酸序列并且所述第二末端核苷酸區(qū)段包含5’ CTCZ7Z8Z9ZiciZ11Z1J’的核苷酸序列， 其中Z1不存在，Z2不 存在，Z3不存在，Z4不存在，Z5不存在，Z6不存在，Z7不存在，Z8不存在，Z9不存在，Z10不 存在，Z11不存在并且Z12不存在。
43.權(quán)利要求26至28和30至42的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子包含選自SEQ ID NO:50, SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID N0:88 和 SEQ ID NO:.155的核苷酸序列，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:59,SEQ ID N0:88和SEQ ID NO:155的核苷酸序列的核酸分子具有至少85%的同一性，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:59,SEQ ID N0:88和SEQ ID NO:155的核苷酸序列的核酸分子同源，其中同源性為至少85%。
44.權(quán)利要求26至29和31至42的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子包含選自SEQ ID NO:7U SEQ ID NO:8USEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO:.156和SEQ ID NO:157的核苷酸序列，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ IDNO:89, SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:156和SEQ ID NO:157的核苷酸的核酸分子具有至少.85%的同一性，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:156和SEQ ID NO:157的核苷酸序列的核酸分子同源，其中同源性為至少85%。
45.權(quán)利要求的核酸分子1，其中所述核酸分子是C型的核酸分子，其中所述C型的核酸分子包含選自 SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:84,SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:.87、SEQ ID NO:97 和 SEQ ID NO:102 的核苷酸序列，或其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ IDNO:86, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:102的核苷酸序列的核酸分子具有至少85%的同一性，或 其中所述核酸分子與包含選自SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ IDNO:86,SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:102的核苷酸序列的核酸分子同源，其中同源性為至少85%。
46.權(quán)利要求1至45的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子的核苷酸或形成所述核酸分子的核 苷酸為L(zhǎng)-核苷酸。
47.權(quán)利要求1至45的任一項(xiàng)的核酸分子,其中所述核酸分子為L(zhǎng)-核酸分子。
48.權(quán)利要求1至47的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子包含至少一個(gè)結(jié)合部分，其能夠結(jié)合胰高血糖素，其中這樣的結(jié)合部分由L-核苷酸組成。
49.權(quán)利要求1至48的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子為通過胰高血糖素介導(dǎo)的活性的拮抗劑。
50.權(quán)利要求1至49的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子能夠結(jié)合GIP。
51.權(quán)利要求1至50的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸是通過GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑。
52.權(quán)利要求1至51的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中包含所述修飾基團(tuán)的核酸分子從生物體的排泄率相較于不包含所述修飾基團(tuán)的核酸分子減小。
53.權(quán)利要求1至51的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中包含所述修飾基團(tuán)的核酸分子相較于不包含所述修飾基團(tuán)的核酸分子在生物體中具有增加的停留時(shí)間。
54.權(quán)利要求52和53的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)選自生物可降解的和非生物可降解的修飾，優(yōu)選所述修飾基團(tuán)選自聚乙二醇、線性聚乙二醇、分枝聚乙二醇、羥乙基淀粉、肽、蛋白質(zhì)、多糖、固醇、聚氧丙烯、聚氧酰胺和聚(2-羥乙基)-L-谷氨酰胺。
55.權(quán)利要求54的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)為由線性聚乙二醇或分枝聚乙二醇組成的聚乙二醇，其中所述聚乙二醇的分子量?jī)?yōu)選為約20，000至約120，OOODa，更優(yōu)選約30，000 至約 80，OOODa 和最優(yōu)選約 40，OOODa0
56.權(quán)利要求54的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)為羥乙基淀粉，其中所述羥乙基淀粉的分子量為約50kDa至約1000kDa，更優(yōu)選約IOOkDa至約700kDa和最優(yōu)選300kDa至500kDao
57.權(quán)利要求52至56的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)通過接頭偶聯(lián)于所述核酸分子，其中優(yōu)選地所述接頭是生物可降解接頭。
58.權(quán)利要求52至56的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)偶聯(lián)于所述核酸分子的5’ -末端核苷酸和/或所述核酸分子的3’ -末端核苷酸和/或所述核酸分子的5’ -末端核苷酸與所述核酸分子的3’ -末端核苷酸之間的核苷酸。
59.權(quán)利要求52至58的任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述生物體是動(dòng)物體或人體，優(yōu)選人體。
60.權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)的核酸分子，其用于治療和/或預(yù)防疾病或障礙或高胰增血糖素血癥的方法。
61.權(quán)利要求60的核酸分子，其中所述疾病或障礙選自糖尿病、糖尿病并發(fā)癥和糖尿病病況。
62.權(quán)利要求61的核酸分子，其中所述糖尿病選自I型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病。
63.權(quán)利要求62的核酸分子，其中所述糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況為選自下列的糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況:動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病、糖尿病足疾病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病黃斑水腫、糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變、葡萄糖耐受不良、心臟病、高血壓、高膽固醇、葡萄糖耐量降低、無力、胰島素抵抗、腎功能衰竭、代謝綜合征、非酒精性脂肪肝病、具有或不具有纖維化的非酒精性脂肪性肝炎、外周血管病、減小的葡萄糖敏感性、減小的胰島素敏感性、肥胖、脂肪肝、高血糖、糖尿病相關(guān)性血管炎癥、糖尿病酮癥酸中毒、高滲性非酮癥高血糖昏迷、體重減輕壞死松解性游走性紅斑、貧血、在正常凝血功能存在的情況下的靜脈血栓形成和神經(jīng)精神表現(xiàn)。
64.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子和任選地其它組分，其中所述其它組分選自藥學(xué)上可接受的賦形劑、藥學(xué)上可接受的載體和藥物活性劑。
65.權(quán)利要求64的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子和藥學(xué)上可接受的載體。
66.權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)的核酸分子用于制造藥劑的用途。
67.權(quán)利要求66的用途，其中所述藥劑用于人藥劑或用于獸用藥劑。
68.權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)的核酸分子用于制造診斷裝置的用途。
69.權(quán)利要求66的用途，其中所述藥劑用于治療和/或預(yù)防疾病或障礙或高胰增血糖素血癥,其中所述疾病或障礙選自糖尿病、糖尿病并發(fā)癥和糖尿病病況。
70.權(quán)利要求69的核酸分子，其中所述糖尿病選自I型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病。
71.權(quán)利要求69的核酸分子，其中所述糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況是選自下列的糖尿病并發(fā)癥或糖尿病病況:動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病、糖尿病足疾病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病黃斑水腫、糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病性玻璃體視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變、葡萄糖耐受不良、心臟病、高血壓、高膽固醇、葡萄糖耐量降低、無力、胰島素抵抗、腎功能衰竭、代謝綜合征、非酒精性脂肪肝病、具有或不具有纖維化的非酒精性脂肪性肝炎、外周血管病、減小的葡萄糖敏感性、減小的胰島素敏感性、肥胖、脂肪肝、高血糖、糖尿病相關(guān)性血管炎癥、糖尿病酮癥酸中毒、高滲性非酮癥高血糖昏迷、體重減輕壞死松解性游走性紅斑、貧血、在正常凝血功能存在的情況下的靜脈血栓形成和神經(jīng)精神表現(xiàn)。
72.包含權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)的核酸分子和胰高血糖素和/或GIP的復(fù)合物，其中優(yōu)選地所述復(fù)合物為結(jié)晶復(fù)合物。
73.權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)的核酸分子用于檢測(cè)胰高血糖素和/或GIP的用途。
74.用于篩選通過胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑的方法，所述方法包括下列步驟:-提供通過胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的候選拮抗劑， -提供權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子， -提供測(cè)試系統(tǒng)，所述系統(tǒng)在通過胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑存在的情況下提供信號(hào)，和 -確定通過胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的候選拮抗劑是否是通過胰高血糖素和/或GIP介導(dǎo)的活性的拮抗劑。
75.用于檢測(cè)胰高血糖素的試劑盒，其包含權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)的核酸分子。
76.用于檢測(cè)樣品中的權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸的方法，其中所述方法包括步驟: a)提供捕獲探針和檢測(cè)探針，其中所述捕獲探針與權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子的第一部分至少部分互補(bǔ)，其中所述檢測(cè)探針與權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子的第二部分至少部分互補(bǔ)；或者，所述捕獲探針與權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子的第二部分至少部分互補(bǔ)并且所述檢測(cè)探針與權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子的第一部分至少部分互補(bǔ)； b)將所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針分別地或組合地添加至包含權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子或假定包含權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子的樣品； c)使所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針同時(shí)或以任意順序依次與權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子或其部分反應(yīng)； d)任選地檢測(cè)所述捕獲探針是否與步驟a)中提供的權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子雜交；和 e)檢測(cè)步驟c)中形成的由權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子與捕獲探針和檢測(cè)探針組成的復(fù)合物。
77.權(quán)利要求76的方法，其中所述檢測(cè)探針包含檢測(cè)裝置，和/或其中所述捕獲探針被固定于支持物，優(yōu)選固體支持物。
78.權(quán)利要求76或77的方法，其中從反應(yīng)中除去不是步驟c)中形成的復(fù)合物的部分的任何檢測(cè)探針，以便在步驟e)中僅檢測(cè)是所述復(fù)合物的部分的檢測(cè)探針。
79.權(quán)利要求76至78的任一項(xiàng)的方法，其中步驟e)包括如下步驟:比較當(dāng)所述捕獲探針與所述檢測(cè)探針在權(quán)利要求1至59的任一項(xiàng)中定義的核酸分子或其部分存在的情況下和在所述核酸分子或其部分不存在的情況下雜交時(shí)，通過所述檢測(cè)裝置產(chǎn)生的信號(hào)。
【文檔編號(hào)】A61K31/7088GK103958682SQ201280058153
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2012年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月21日
【發(fā)明者】W·普爾施克, S·塞爾, A·沃特, K·布赫納, C·馬什, S·克呂斯曼 申請(qǐng)人:諾松制藥股份公司