含有魚腥草提取物作為活性成分用于預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。具體而言，本發(fā)明所述的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在β-淀粉樣蛋白誘導的癡呆模型中保護細胞并改善認知功能，在東莨菪堿誘導的癡呆模型中改善認知功能，在6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導的帕金森病模型中保護細胞，并在紅藻氨酸誘導的癲癇模型中保護細胞并改善認知功能，因此可用作對癡呆、帕金森病或癲癇進行預防和治療的藥物組合物或者用作受試者的膳食補充劑。
【專利說明】含有魚腥草提取物作為活性成分用于預防和治療癡呆、巾白金森病或癲癇的藥物組合物
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及含有制備的植物提取物或其混合物作為活性成分的藥物組合物或保健食品組合物，所述藥物組合物或保健食品組合物用于預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇。
【背景技術】
[0002]考慮到韓國國家統(tǒng)計局于2003年10月公布的韓國老年人口的比例，在2000年大于65歲的人口達到總人口的7.2 %。預期在2019年該比例將超過14%，從而進入老齡化社會。就這點而言，隨著老齡化問題成為社會問題，對于老齡化人口特點和老年人福利(如住房、健康、文化和休閑)的公眾利益增加，由此提高了對其統(tǒng)計資料的需求。這一變化的核心在于，慢性退行性疾病成為比所有急性感染性疾病更大的問題，由于老齡化人口的增長，慢性退行性疾病在過去的50年內(nèi)成為主導的致死原因。具體而言，由屬于慢性退行性疾病的腦血管疾病引起的死亡已位居單一疾病致死率中的第二位。
[0003]在正常的日常生活中，癡呆會損害職業(yè)、社交和個人關系，并意味著除記憶力損害外還有如下四種情況中的一種或多種:例如說話障礙、定向力障礙、計算能力欠佳、性格及情緒變化。癡呆是病理癥狀，需要將其與正常的老齡化區(qū)分，并且依賴于病因將癡呆分為:阿爾茨海默癡呆；血管性癡呆；以及酒精成癮、創(chuàng)傷和帕金森病后遺癥引起的其它癡呆。血管性癡呆導致腦梗塞或中風等，已知患病部分周圍的腦細胞受到損害，從而引起早期癥狀如記憶力喪失。另一方面，阿爾茨海默癡呆是腦細胞損壞引起的退行性腦疾病，具有諸如記憶力喪失、性格變化 和思考能力欠佳這些癥狀，并且緩慢地發(fā)展進行，但已知大部分患者在8-10年內(nèi)由于肺炎等原因死亡。根據(jù)最近的流行病學研究，報道了腦血管疾病的危險因素例如高血壓、糖尿病、高脂血癥和心臟病。腦血管疾病不僅增高了血管性癡呆的發(fā)病率，而且還增高了阿爾茨海默癡呆的發(fā)病率，然而病因或治療方法仍然未知。
[0004]作為用于癡呆研究的代表性動物試驗模型，通過東莨菪堿誘導小白鼠癡呆模型，所述東莨菪堿作為毒蕈堿受體的拮抗劑阻礙乙酰膽堿與所述受體的偶聯(lián)，結果由于乙酰膽堿傳遞量減少導致記憶力和認知能力受損。
[0005]阿爾茨海默病(AD)以神經(jīng)元缺失和由β_淀粉樣蛋白(Αβ)作為主要成分的細胞外老年斑為特征，所述β -淀粉樣蛋白是源自淀粉樣前體蛋白的39-43個氨基酸的肽。體內(nèi)研究和體外研究的結果表明，Αβ或Αβ肽片段具有毒性作用，因而證明Αβ在AD發(fā)病中起到重要作用(Butterfield 等，F(xiàn)ree Radical Biology and Medicine, 2002, 32:1050-1060 ;Butterfield 等，F(xiàn)ree Radical Biology and Medicine,2007,43:658-677)。在培養(yǎng)期間，Αβ直接誘導神經(jīng)元死亡，并使神經(jīng)元易受興奮性毒性和氧化損傷的傷害。N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體充當了 Αβ偶聯(lián)的或Αβ誘導的谷氨酸興奮性毒性的選擇性底物的媒介物。NMDA受體尤其是配體門控/電壓敏感陽離子通道，對Ca2+高度通透。[Ca2+]i的廣泛增高直接導致細胞功能障礙、異常興奮或死亡。因此，正如報告中所證實的，(5R, 10S)-(+)-5-甲基-10，11-二氫-5H-二苯并[a，d]環(huán)庚烯_5，10-亞胺馬來酸鹽(MK-801)降低了 Αβ的神經(jīng)毒性作用，該化合物是NMDA受體的非競爭性拮抗劑，通過Aβ暴露(Α β exposure)而通過NMDA受體的Ca2+流在A β誘導的神經(jīng)毒性中起關鍵作用。據(jù)認為，活性氧簇(ROS)的形成也參與到了退行性腦疾病的發(fā)病中。一些證據(jù)證實，氧化應激作為活性因子參與Αβ介導的神經(jīng)病變，通過大量妨礙神經(jīng)元穩(wěn)態(tài)的分子形態(tài)引發(fā)或促進神經(jīng)退化。然而，由于NMDA受體拮抗劑和神經(jīng)元通道的直接阻滯劑欠缺顯著功效或具有嚴重的副作用，所述NMDA受體拮抗劑和直接阻滯劑的臨床優(yōu)勢仍有爭議。
[0006]隨著正常受試者變老，所述正常受試者受到一定程度的記憶力損傷，然而，并未顯示出例如在阿爾茨海默癥患者中特定示出的性格變化的癥狀，這稱為輕度認知障礙(MCI)。MCI被視為阿爾茨海默病的前驅癥狀，并且以短期記憶喪失、空間記憶喪失和情緒失衡為特征，該前驅癥狀分為不同階段。在該前驅癥狀中，將與記憶力喪失相關的MCI稱為遺忘性MCI，并且在一定時期內(nèi)，65歲的正常人轉變?yōu)榘柎暮ＤY患者的可能性為1% -3% ;而在患有遺忘性MCI的組中，10個人中有8個轉變成阿爾茨海默癥患者，并且在遺忘性MCI的情況下，據(jù)認為發(fā)展成阿爾茨海默癡呆的可能性很高。
[0007]帕金森病作為慢性漸進性退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，特征性地出現(xiàn)休息性震顫、僵直、動作緩慢和姿勢不穩(wěn)，并顯示出如下神經(jīng)病理學特征:分布在腦黑質(黑質密部，SNc)中的多巴胺神經(jīng)細胞逐漸損失(Calne等，1983,Heikkila, 1984)。估計帕金森病患者占約60歲以上人口的約1%。帕金森病的病因并未明確確定，然而最普遍接受的是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的“多因素假說”。在發(fā)生帕金森病的帕金森病患者中大部分沒有家族病史，但約10%作為家族性帕金森病出現(xiàn)。
[0008]目前，通常將L-多巴用作癥狀治療劑，以增高帕金森病中降低量的多巴胺。在使用L-多巴后，L-多巴使得帕金森病的進展減緩，并顯示出臨床癥狀的減少，然而當長時間服用L-多巴時，引起如不自主運動或嘔吐等副作用(Clarke和Deane, 2001)。此外,用于治療帕金森病的藥物包括 多巴胺拮抗劑、兒茶酚-O-甲基轉移酶抑制劑(C0MT抑制劑)、單胺氧化酶B抑制劑(ΜΑ0-Β抑制劑)和抗膽堿能藥物等。用于研究帕金森病的動物模型是使用6-羥基多巴胺(6-OHDA)、魚藤酮或1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)的動物模型。
[0009]其中，在1982年首先了解到，MPTP通過藥物成癮引起人帕金森病，并在靈長目動物、小鼠和人類中顯示出臨床上類似的臨床癥狀，由此對MPTP用于合適的實驗動物模型進行了評價，以用來研究帕金森病的生理條件變化。MPTP引起的多巴胺神經(jīng)細胞損傷的機制還未明確知曉，然而近些年來，報道了通過MPTP暴露增加了大腦中的炎性疾病，而對于帕金森病的生理學研究來說，發(fā)炎是重要的過程。由于MPTP引起小鼠和猴子中的黑質紋狀體通路的急性退行，因此將MPTP用作有用的帕金森模型。此外已知的是，將MPTP作為帕金森病急性發(fā)炎步驟的動物實驗模型適用于研究氧化應激引起的線粒體功能損傷和細胞死亡的治療技術、或藥物的神經(jīng)保護作用。
[0010]癲癇作為歸因于即使無引起單一癲癇發(fā)作的病因也反復出現(xiàn)癲癇發(fā)作的慢性疾病組，即伴有神經(jīng)生物學變化、精神變化、認知變化和社交變化的身體異常(Robert等，2005)。癲癇的發(fā)作率和患病率顯示出U型，其中，發(fā)作率和患病率在出生后I年內(nèi)最高，之后突然下降，并在60歲以上的老年群體中突然升高，主要誘因包括中風、先天畸形、頭部損傷、腦炎、腦瘤、退行性腦病、遺傳、早產(chǎn)兒和分娩前后的損害等。[0011]將紅藻氨酸誘導的小白鼠癲癇模型作為代表性的動物實驗模型用于癲癇研究，該模型具有神經(jīng)興奮性毒性以及通過紅藻氨酸受體引起的癲癇發(fā)作，并且伴有認知損傷和神經(jīng)細胞損害。
[0012]魚渥草(Houttuyniacordata THUNB.)是三白草科(Saururaceae)植物Houttuynia cordata THUNB.的變種(turning),產(chǎn)于在東北亞地區(qū),特別是日本和韓國等。由于魚腥草具有十種醫(yī)藥用途，魚腥草也稱為十藥。據(jù)認為，魚腥草的莖與甘薯葉相似，并且當觸摸新鮮的葉子時，會發(fā)出魚腥氣味，因此稱為魚腥草。魚腥草可藥用或食用，并被分類為下述動植物；在食品法規(guī)和食物原料分類中，僅有很少部分的動植物可被用作補充材料。眾所周知的是，魚腥草在藥理學上具有強心、利尿、抗菌、解毒和抗癌作用，魚腥草還被用作輔助解毒和個人美容的化妝品和保健功能食品。
[0013]據(jù)報道，魚腥草含有大量癸酰乙醛化合物(具有抗菌、抗病毒和抑制真菌的作用)和類黃酮系列化合物(顯示出利尿、強心和促排泄的作用)。特別是，Botanical List中記載，除了對發(fā)燒的緩解作用，魚腥草還能消除癤子和毒素等Jungyang詞典中記載，魚腥草能清潔血液、消除炎癥、并有助于排尿。同時，魚腥草作為藥用植物用于草藥和個人治療(private remedies),在使用藥用植物的相關現(xiàn)有技術韓國專利登記號521813中公開了含有混合的生藥材(例如大豆、靈芝、魚腥草、食用艾蒿和甘草等)作為有效成分的藥物組合物及其制造方法，所述藥物組合物用于抗癌治療、強化免疫力、動脈硬化治療，其副作用和毒性更小且更安全。
[0014]白藪(Ampelopsis japonica Makino)是 Ampelopsis japonica 的膨大塊根,其形狀為兩端尖的長卵形或錐形。由于味苦性涼，白蘞能降火散毒。白蘞用于口服用藥或外用，因具有清熱作用而控制癤子等，并且使肉芽形成，或者在癰或膿脹未愈合或因水或火而受傷時，使肉芽形成而痊愈。 [0015]據(jù)此，當發(fā)明人致力于開發(fā)對于癡呆、帕金森病或癲癇具有治療和預防作用的天然物質時，發(fā)明人證實了魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在β_淀粉樣蛋白(Αβ)寡聚體毒性誘導的小白鼠模型中具有改善認知功能的作用，在皮層細胞和海馬細胞中對β -淀粉樣蛋白誘導的毒性具有細胞保護作用，在SH-SY5Y細胞和PC12細胞中對6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導的毒性具有細胞保護作用，在紅藻氨酸毒性誘導的小白鼠模型中具有改善認知功能的作用和細胞保護作用，從而發(fā)現(xiàn)可將魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物有效地用于預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇，因此完成了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016]技術問題
[0017]本發(fā)明致力于提供含有魚腥草提取物用于預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，以及用于預防和改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物。
[0018]技術方案
[0019]本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和治療癡呆的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0020]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和治療帕金森病的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0021]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和治療癲癇的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0022]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物。
[0023]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于治療癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括為患有癡呆、帕金森病或癲癇的受試者給予魚腥草提取物。
[0024]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了魚腥草提取物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物中的用途。
[0025]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和治療癡呆的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0026]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和治療帕金森病的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0027]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和治療癲癇的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0028]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物。
[0029]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于治療癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物。
[0030]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物中的用途。
[0031]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和改善癡呆的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0032]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和改善帕金森病的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0033]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和改善癲癇的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0034]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了魚腥草提取物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物中的用途。
[0035]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和改善癡呆的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0036]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和改善帕金森病的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0037]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了用于預防和改善癲癇的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。 [0038]此外，本發(fā)明的示例性實施方式提供了魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物中的用途。
[0039]有益效果
[0040]根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方式，由于證實了本發(fā)明的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在β_淀粉樣蛋白(Αβ)寡聚體或東莨菪堿毒性誘導的小白鼠模型中具有改善認知功能的作用，在β_淀粉樣蛋白誘導的癡呆模型中具有細胞保護作用和細胞死亡阻抑作用，在6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導的帕金森病模型中具有細胞保護作用，在紅藻氨酸誘導的癲癇模型中具有細胞保護作用，因而可將魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物有效地用于開發(fā)預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，以及預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0041]圖1是表明對于小白鼠中的β_淀粉樣蛋白(Αβ)寡聚體毒性而言，魚腥草提取物在認知功能改善方面的圖。
[0042]HCff:魚腥草的水提取物
[0043]圖2是表明對于小白鼠中的東莨菪堿毒性而言，魚腥草提取物在認知功能改善方面的圖。
[0044]HCff:魚腥草的水提取物
[0045]圖3是表明在皮層細胞中用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行處理后的細胞存活率的圖。
[0046]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物
[0047]HCEiAJE:魚腥草的乙醇提取物與白蘞的乙醇提取物的混合物 [0048]HCff:魚腥草的水提取物；以及
[0049]HCE:魚腥草的乙醇提取物。
[0050]圖4是表明對于在皮層細胞中的β_淀粉樣蛋白(Αβ)毒性處理而言，用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行預處理的細胞存活率的圖。
[0051]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物
[0052]HCEiAJE:魚腥草的乙醇提取物與白蘞的乙醇提取物的混合物
[0053]HCff:魚腥草的水提取物；以及
[0054]HCE:魚腥草的乙醇提取物。
[0055]圖5是表明在海馬細胞中用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行處理后的細胞存活率的圖。
[0056]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物；以及
[0057]HCW:魚腥草的水提取物。
[0058]圖6是表明對于在海馬細胞中的β_淀粉樣蛋白(Αβ)毒性處理而言，用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行預處理的細胞存活率的圖。
[0059]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物；以及
[0060]HCW:魚腥草的水提取物。
[0061]圖7是表明在SH-SY5Y細胞中用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行處理后的細胞存活率的圖。
[0062]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物
[0063]HCEiAJE:魚腥草的乙醇提取物與白蘞的乙醇提取物的混合物
[0064]HCff:魚腥草的水提取物；以及[0065]HCE:魚腥草的乙醇提取物。
[0066]圖8是表明對于在SH-SY5Y細胞中的6_羥基多巴胺(6-OHDA)誘導毒性而言，用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行預處理的細胞存活率的圖。
[0067]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物
[0068]HCEiAJE:魚腥草的乙醇提取物與白蘞的乙醇提取物的混合物
[0069]HCff:魚腥草的水提取物；以及
[0070]HCE:魚腥草的乙醇提取物。
[0071]圖9是表明在PC12細胞中用魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行處理后的細胞存活率的圖。
[0072]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物
[0073]HCEiAJE:魚腥草的乙醇提取物與白蘞的乙醇提取物的混合物
[0074]圖10是表明對于在PC12細胞中的6-OHDA誘導毒性而言，用魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行預處理的細胞存活率的圖。
[0075]HCffiAJff:魚腥草的水提取物與白蘞的水提取物的混合物 [0076]HCEiAJE:魚腥草的乙醇提取物與白蘞的乙醇提取物的混合物
[0077]圖11是表明對于小白鼠中的紅藻氨酸毒性而言，魚腥草提取物的海馬細胞保護作用的圖。
[0078]HCff:魚腥草的水提取物
[0079]圖12是表明對于小白鼠中的紅藻氨酸毒性而言，魚腥草提取物在認知功能改善作用方面的圖。
[0080]HCff:魚腥草的水提取物【具體實施方式】
[0081]下文中，將對本發(fā)明進行詳細描述。
[0082]本發(fā)明提供了用于預防和治療癡呆的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0083]此外，本發(fā)明提供了用于預防和治療帕金森病的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0084]此外，本發(fā)明提供了用于預防和治療癲癇的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0085]此外，本發(fā)明提供了預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物。
[0086]此外，本發(fā)明提供了治療癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向患有癡呆、帕金森病或癲癇的受試者給予魚腥草提取物。
[0087]此外，本發(fā)明提供了魚腥草提取物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物中的用途。
[0088]對于魚腥草的使用可不受任何限制，例如使用栽培品或商購品。
[0089]癡呆可為選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種，但不限于此。[0090]可通過如下步驟制備魚腥草提取物，但不限于此:
[0091]I)通過加入提取劑，對干的魚腥草進行提??；
[0092]2)對步驟I)的提取物進行過濾；以及
[0093]3)對步驟2)的過濾后的提取物進行減壓濃縮。
[0094]在該方法中，步驟I)的提取劑可以是水、醇或其混合物，優(yōu)選使用選自C1-C2低級醇的溶劑或其混合溶劑。優(yōu)選使用70%乙醇水溶液，但不限于此。提取劑的量優(yōu)選為魚腥草干重的5-15倍、更優(yōu)選7-10倍，但不限于此。提取方法可使用例如如下提取方法:熱水提取、浸潰提取、回流提取或超聲提取，但不限于此。提取時的溫度優(yōu)選為10°C -100°C、更優(yōu)選室溫。提取時間優(yōu)選為30分鐘至3小時、更優(yōu)選1-2小時，但不限于此。提取次數(shù)優(yōu)選1-5次、更優(yōu)選3次，但不限于此。
[0095]在該方法中，步驟3)的減壓濃縮可使用減壓濃縮儀或真空旋轉蒸發(fā)儀，但不限于此。此外，干燥可以是冷凍干燥，但不限于此。
[0096]本發(fā)明人證實了對于魚腥草提取物而言，在小白鼠的β_淀粉樣蛋白(Αβ)寡聚體誘導毒性模型中測得改善認知功能的作用。結果，通過給予魚腥草提取物，認知功能得到顯著提高(參見圖1)。
[0097]此外，本發(fā)明人證實了對于魚腥草提取物而言，在小白鼠的東莨菪堿誘導毒性模型中測得改善認知功 能的作用。結果，通過給予魚腥草提取物，認知功能得到顯著提高(參見圖2)。
[0098]此外，為了證實魚腥草提取物在皮層細胞中的細胞保護作用，基于β -淀粉樣蛋白(Αβ)誘導毒性測定細胞存活率。結果，當用魚腥草提取物處理時，細胞存活率顯著提高，本發(fā)明人由此證實魚腥草提取物具有細胞保護作用(參見圖3和圖4)。
[0099]此外，為了證實魚腥草提取物在海馬細胞中的細胞保護作用，基于β_淀粉樣蛋白(Αβ)誘導毒性測定細胞存活率。結果，當用魚腥草提取物處理時，細胞存活率顯著提高，本發(fā)明人由此證實魚腥草提取物具有細胞保護作用(參見圖5和圖6)。
[0100]此外，為了證實魚腥草提取物在SH-SY5Y細胞中的細胞保護作用，基于6-OHDA(6-羥基多巴胺)誘導毒性測定細胞存活率。結果，當用魚腥草提取物處理時，細胞存活率顯著提高，本發(fā)明人由此證實魚腥草提取物具有細胞保護作用(參見圖7和圖8)。
[0101]此外，本發(fā)明人證實了對于魚腥草提取物而言，在小白鼠的紅藻氨酸誘導毒性模型中測得對海馬細胞的保護作用和改善認知功能的作用。結果，通過給予魚腥草提取物，海馬細胞顯著增加并且認知功能顯著提高(參見圖11和圖12)。
[0102]據(jù)此，本發(fā)明的魚腥草提取物在小白鼠的β_淀粉樣蛋白(Αβ)寡聚體誘導毒性模型中具有改善認知功能的作用，對于β_淀粉樣蛋白和6-OHDA誘導毒性具有保護細胞的作用，并在紅藻氨酸誘導毒性模型中具有保護細胞和改善認知功能的作用。結果，可將所述魚腥草提取物有效地用作對癡呆、帕金森病或癲癇進行預防和治療的藥物組合物的活性成分。
[0103]此外，本發(fā)明提供了用于預防和治療癡呆的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0104]此外，本發(fā)明提供了用于預防和治療帕金森病的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。[0105]此外，本發(fā)明提供了用于預防和治療癲癇的藥物組合物，該藥物組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0106]此外，本發(fā)明提供了預防癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物。
[0107]此外，本發(fā)明提供了魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物中的用途。
[0108]此外，本發(fā)明提供了用于治療癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物。
[0109]對于魚腥草或白蘞 的使用可不受任何限制，例如使用栽培品或商購品。
[0110]癡呆可為選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種，但不限于此。
[0111]可通過如下步驟制備魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物，但不限于此:
[0112]I)通過加入提取劑，對干的魚腥草或白蘞進行提?。?br> [0113]2)對步驟I)的提取物進行過濾；
[0114]3)對步驟2)的過濾后的提取物進行減壓濃縮；以及
[0115]4)將步驟3)中獲得的魚腥草提取物和白蘞提取物進行混合。
[0116]在該方法中，步驟I)的提取劑可使用水、醇或其混合物，優(yōu)選選自C1-C2低級醇的溶劑或其混合溶劑，更優(yōu)選70%乙醇水溶液，但不限于此。提取劑的量優(yōu)選為魚腥草干重的5-15倍、更優(yōu)選7-10倍，但不限于此。提取方法可使用例如如下提取方法:熱水提取、浸潰提取、回流提取或超聲提取，但不限于此。提取時的溫度優(yōu)選為10°C -100°C、更優(yōu)選室溫。提取時間優(yōu)選為30分鐘至3小時、更優(yōu)選1-2小時，但不限于此。提取次數(shù)優(yōu)選1-5次、更優(yōu)選3次，但不限于此。
[0117]在該方法中，步驟4)的混合比例優(yōu)選魚腥草提取物:白蘞提取物為1:1至10: 1、更優(yōu)選1:1至10:1，但不限于此。
[0118]為證實魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在皮層細胞中的細胞保護作用，基于β_淀粉樣蛋白(Αβ)誘導毒性測定細胞存活率。結果，當用魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物處理時，細胞存活率顯著提高，本發(fā)明人由此證實魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物具有細胞保護作用(參見圖3和圖4)。
[0119]此外，為證實魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在海馬細胞中的細胞保護作用，基于β_淀粉樣蛋白誘導毒性測定細胞存活率。結果，當用魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物處理時，細胞存活率顯著提高，本發(fā)明人證實魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物具有細胞保護作用(參見圖5和圖6)。
[0120]此外，為證實魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在SH-SY5Y細胞中的細胞保護作用，基于6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導毒性測定細胞存活率。結果，當用魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物處理時，細胞存活率顯著提高，本發(fā)明人證實魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物具有細胞保護作用(參見圖7和圖8)。
[0121]據(jù)此，本發(fā)明所述的魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物具有對β_淀粉樣蛋白和6-OHDA誘導毒性而言的細胞保護作用，從而可將所述魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物有效地用作預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物的活性成分。[0122]相對于組合物的總重量，本發(fā)明的組合物可包含0.1wt % -90wt%的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物，但不限于此。
[0123]本發(fā)明的組合物可進一步包含常用于制備藥物組合物的載體、賦形劑和稀釋劑。
[0124]本發(fā)明的藥物組合物可口服或胃腸外給予，在胃腸外給予中，可選擇皮膚外用方法、腹膜內(nèi)注射方法、直腸注射方法、皮下注射方法、靜脈內(nèi)注射方法、肌內(nèi)注射方法、或胸內(nèi)注射方法，但不限于此。
[0125]可將本發(fā)明的組合物用于口腔制劑如粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、懸浮劑、乳劑、糖漿劑和噴霧劑，以及制劑例如根據(jù)相應的常規(guī)方法的外用制劑、栓劑和無菌注射液。組合物中可包含的載體、賦形劑和稀釋劑可以是乳糖、葡聚糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、金合歡膠(acacia rubber)、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。使用稀釋劑制備制劑，所述稀釋劑例如通常使用的填充劑、增量劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑和表面活性劑或賦形劑。用于口腔給予的固體制劑包括片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑等。通過將魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物與至少一種賦形劑混合制備所述固體制劑，所述賦形劑例如淀粉、碳酸鈣、蔗糖或乳糖、明膠等。此外，除簡單的賦形劑外，還可使用潤滑劑，例如硬脂酸鎂和滑石等。用于口腔注射的液體制劑可包括懸浮劑、溶液劑、乳劑或糖漿劑等；并且除常用的簡單稀釋劑如水和液體石蠟外，上述制劑還可含有多種賦形劑，例如濕潤劑、甜味劑、芳香劑或防腐劑等。用于胃腸外給予的制劑包括無菌水溶液劑、非水溶劑、懸浮劑、乳劑、凍干制劑和栓劑。作為非水溶劑和懸浮劑，可使用丙二醇、聚乙 二醇、植物油(如橄欖油)、可注射的酯(如油酸乙酯)等。作為栓劑的基體化合物，可使用witepsol、聚乙二醇(macrogol)、吐溫61、可可油脂、Iaurinum或甘油明膠等。
[0126]本發(fā)明組合物的優(yōu)選給予量可根據(jù)患者的情況和體重、疾病嚴重程度、藥物形式、給予途徑和周期而變化，但是可由本領域技術人員適當選擇。然而，為了優(yōu)選的效果，可將所述組合物以每天0.0001g/kg到lg/kg、優(yōu)選0.0Olmg/kg到200mg/kg給予,但不限于此。給予可以是每天一次和每天多次。給予量不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0127]此外，本發(fā)明提供了用于預防和改善癡呆的保健食品組合物，該保健康食品組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0128]此外，本發(fā)明提供了用于預防和改善帕金森病的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0129]此外，本發(fā)明提供了用于預防和改善癲癇的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
[0130]此外，本發(fā)明提供了魚腥草提取物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物中的用途。
[0131]癡呆可為選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種，但不限于此。
[0132]本發(fā)明的魚腥草提取物對于β -淀粉樣蛋白和6-OHDA誘導毒性而言具有細胞改善作用和細胞保護作用，在東莨菪堿、β_淀粉樣蛋白和紅藻氨酸誘導的模型中具有改善認知功能的作用。結果，可將本發(fā)明的魚腥草提取物有效地用作對癡呆、帕金森病或癲癇進行預防和改善的保健食品的活性成分。
[0133]此外，本發(fā)明提供了用于預防和改善癡呆的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0134]此外，本發(fā)明提供了用于預防和改善帕金森病的?？凳称方M合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0135]此外，本發(fā)明提供了用于預防和改善癲癇的保健食品組合物，該保健食品組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
[0136]此外，本發(fā)明提供了魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物中的用途。
[0137]癡呆可為選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種，但不限于此。
[0138]本發(fā)明的魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物對于β -淀粉樣蛋白和6-OHDA誘導毒性而言，具有細胞保護作用，從而有效地用作對癡呆、帕金森病或癲癇進行預防和改善的保健食品組合物的活性成分。
[0139]食品種類沒有特別限制。食品的實例包括飲品、肉、香腸、面包、點心(biscuits)、米糕、巧克力、糖果、小吃、餅干(cookies)、比薩、面條和其他條狀物、口香糖、乳制品(包括冰淇淋)、各種湯、飲料、酒精飲料、維生素復合物等，并包括一般意義上的所有健康食品。
[0140]可將本發(fā)明 的魚腥草提取物或魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物添加到食品中、或者與其它食品或其它食品成分共同使用，并可根據(jù)常規(guī)方法恰當使用。可根據(jù)其使用目的(預防或改善)恰當?shù)卮_定活性成分的混合量。通常，在保健食品中，相對于食品的總重量，可將提取物以0.01wt% _15被％的量加入；對于保健飲料組合物，可將提取物以
0.02g-5g/100ml、優(yōu)選0.3g-lg/100ml的比例加入。然而,在為了健康和保健或健康控制的目的而長期攝取的情況下，攝取量可為上述范圍或更窄；在安全方面沒有問題時，可以上述范圍或更寬范圍的量使用活性成分。
[0141]除了以上述比例含有魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為必要成分外，本發(fā)明的健康功能飲料組合物對其它成分沒有特別限制，可如同常規(guī)飲料一樣含有多種矯味劑或天然碳水化合物作為添加成分。上述天然碳水化合物的實例包括常規(guī)的糖，例如單糖(即葡萄糖和果糖等)、二糖(例如麥芽糖和蔗糖等)、多糖(例如葡聚糖、環(huán)糊精)和糖醇(例如木糖醇、山梨糖醇和赤蘚糖醇)。除上述矯味劑外，作為矯味劑可優(yōu)選使用天然矯味劑(奇異果甜蛋白、甜葉菊提取物(例如甜葉菊苷A和甘草皂苷(glycyrrhizin)等)和合成矯味劑(糖精和阿斯巴甜等)。
[0142]除所述成分外，本發(fā)明的食品還可包含多種營養(yǎng)物質、維生素、礦物質(電解質)、矯味劑(如合成矯味劑和天然矯味劑)、著色劑、增強劑(奶酪和巧克力等)、果膠酸及其鹽、海藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠體增稠劑、PH調節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇、用于碳酸飲料的碳酸化劑等。此外，本發(fā)明的提取物還可包含用于制備天然果汁、果汁飲料或蔬菜汁飲料的果肉。上述成分可單獨使用或同時使用。添加物的比例并不重要，但是相對于每100重量份的本發(fā)明提取物，通常選擇O至約20重量份的范圍。
[0143]以下，將通過實施例、實驗實施例和制造實施例對本發(fā)明進行詳細描述。
[0144]然而，下述實施例、實驗實施例和制造實施例僅為本發(fā)明的示例，本發(fā)明的內(nèi)容并不限于下述實施例、實驗實施例和制造實施例。
[0145]實施例
[0146]<實施例1>制備魚腥草提取物和白蘞提取物
[0147]〈1-1>制備魚腥草的水提取物
[0148]將100g購自JungDo醫(yī)藥公司(Seoul)的魚腥草細細地碾碎，通過加入10倍于魚腥草量的蒸餾水在100°c下回流提取2小時，隨后使用Whatman濾紙#2進行真空過濾。將濾出物干燥成粉，儲存在_20°C，用于實驗期間的制備，產(chǎn)率為16.1%。
[0149]〈1-2>制備魚腥草的乙醇提取物
[0150]向1，OOOmL的70 %乙醇中加入100g購自JungDo醫(yī)藥公司(Seoul)的魚腥草，并攪拌提取24小時，隨后使用Whatman濾紙#2進行過濾。在50°C下將濾出物真空濃縮(Rotavapor R-200, heating bath B-490, BUCHI ;Flawil,瑞士)獲得樣品，將該樣品凍干并在_20°C儲存，用于實驗期間的制備，產(chǎn) 率為8.20%。
[0151]〈1-3>制備白蘞的水提取物
[0152]通過與實施例〈1-1>相同的方法制備白蘞的水提取物。
[0153]〈1-4>制備白蘞的乙醇提取物
[0154]通過與實施例〈1-2>相同的方法制備白蘞的乙醇提取物。
[0155]<1-5>制備魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物
[0156]通過將上述實施例〈1-1>至〈1-4>中制備的魚腥草提取物和白蘞提取物以1:1或10:1的比例進行混合，制備魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物。
[0157]<實驗實施例1>對魚腥草提取物體內(nèi)抗癡呆作用的證實
[0158]〈1-1>準備實驗動物
[0159]將雄性ICR小鼠(8周齡，30_32g，Korea bio)用作實驗動物。通過控制溫度為23±1°C、濕度為60±10%、白晝和黑夜各12小時并充分供應水和常規(guī)食物，將小鼠在動物籠中適應飼養(yǎng)7天,隨后在實驗中使用。將魚腥草提取物以50mg/kg、100mg/kg或200mg/kg的量每天口服給予一次，共給予10天，在第四天給予藥物后，將10 μ M的β -淀粉樣蛋白寡聚體直接注入大腦海馬區(qū)。結果，誘導出癡呆模擬模型。
[0160]〈1-2>行為試驗
[0161]為評價魚腥草提取物對于β_淀粉樣蛋白寡聚體誘導的認知功能障礙的作用，在給予β_淀粉樣蛋白寡聚體后的第五天和第六天進行新物體認知試驗。具體而言，在試驗的第I天，將兩個相同的物體放入寬45cm、長45cm和高50cm的盒子中，將小鼠放入所述盒子中識別這兩個物體。在第2天，將同一盒子中的兩個物體之一換成具有不同形狀的物體，然后測量小鼠對新物體的搜尋時間。
[0162]結果如圖1中所示，證實了與β_淀粉樣蛋白寡聚體誘導的認知功能障礙相比，魚腥草提取物處理組改善了認知功能(參見圖1)。
[0163]〈1-3>準備實驗動物
[0164]將雄性ICR小鼠(6周齡，30g，Korea bio)用作實驗動物。通過控制溫度為23±1°C、濕度為60±10%、白晝和黑夜各12小時并充分供應水和常規(guī)食物，將小鼠在動物籠中適應飼養(yǎng)7天，隨后在實驗中使用。將魚腥草提取物以100mg/kg的量每天口服給予一次，將東莨菪堿以lmg/kg直接注入腹腔。結果，誘導出癡呆模擬模型。[0165]〈1-4>行為試驗
[0166]為評價魚腥草提取物對于東莨菪堿誘導的認知功能障礙的作用，在注射東莨菪堿后進行30分鐘的Y-迷宮試驗。具體而言，在將實驗動物放入Y路徑后，記錄實驗動物的活動路徑，由此計算各不同路徑與總活動路徑之間的活動比例。
[0167]結果如圖2所示，證實了與東莨菪堿誘導的認知障礙相比，魚腥草提取物處理組具有改善的認知功能(參見圖2)。
[0168]<實驗實施例2>對魚腥草提取物體內(nèi)抗癡呆作用的證實
[0169]<2-1>對皮層中的細胞保護作用的證實
[0170]由β -淀粉樣蛋白(Αβ )積累形成的淀粉樣斑塊在腦中積累，已知β -淀粉樣蛋白為殺死腦細胞的物質，并且是用于癡呆研究的物質。通過使用人工聚集的A β (25-35)物質引起對皮層細胞的毒性，結果，使用MTT分析測量魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物的細胞保護作用。具體而言，首先，從18天的Sprague-Dawley大鼠胚胎(Korea bio, Seoul)中僅分離皮層部分，將其用機械解離以獲得細胞，并以1.5X104/孔將細胞接種入用聚L-賴氨酸預包被的96孔板中，隨后孵育7天。然后,將細胞在不含B27的神經(jīng)細胞基本培養(yǎng)基(neurobasal media)中孵育24小時，在用實施例1中的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物以各濃度處理30分鐘后，采用8 μ g的β -淀粉樣蛋白(Αβ)進行處理或者不用β_淀粉樣蛋白進行處理，3小時后用lmg/mL的MTT進行處理，將甲臜(formazan)溶解于DMS0，隨后在570nm下測量吸光度。
[0171]結果如圖3和圖4中所示，當僅用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物對皮層細胞進行處理時，證實了細胞存活率未受影響。此外，在Αβ毒性處理的情況下，與對照組相比，細胞存活率降低；并且在魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物的預處理組中，證實了顯示出顯著的細胞保護作用(參見圖3和圖4)。
[0172]〈2-2>海馬中的細胞保護作用
[0173]為證實魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物的細胞保護作用，從18天的Sprague-Dawley大鼠胚胎(Korea bio, Seoul)中僅分離海馬部分,將其用機械解離以獲得細胞，并以1.5 X IO4/孔將細胞接種入用聚L-賴氨酸預包被的96孔板中，隨后孵育7天。然后，將細胞在不含B27的神經(jīng)細胞基本培養(yǎng)基中孵育24小時，在用實施例1中的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物以各濃度處理30分鐘后，采用8yg的β-淀粉樣蛋白(Αβ)進行處理或者不用β_淀粉樣蛋白進行處理，3小時后用lmg/mL的MTT進行處理，將甲臜溶解于DMS0，隨后在570nm下測量吸光度。
[0174]結果如圖5和圖6所示，當僅用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物對海馬細胞進行處理時，證實了細胞存活率未受影響。此外，在Αβ毒性處理的情況下，與對照組相比，細胞存活率降低；并且在魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物的預處理組中，證實了顯示出顯著的細胞保護作用(參見圖5和圖6)。
[0175]<實驗實施例3>對魚腥草提取物體內(nèi)抗帕金森病作用的證實
[0176]<3-1>魚腥草提取物在SH-SY5Y細胞中的細胞保護作用 [0177]為證實對于6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導毒性在注射部位處引起的多巴胺神經(jīng)病變而言，魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物對細胞存活率的影響，以
2X IO4/孔將纖維母細胞瘤SH-SY5Y細胞(分泌多巴胺的細胞)接種入用聚L-賴氨酸預包被的96孔板中，隨后孵育2天，在用溶于無FBS的DMEM培養(yǎng)基中的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物以各濃度進行預處理后，通過采用6-OHDA進行處理或者不用6-OHDA進行處理而加以孵育。以濃度為lmg/mL的MTT對反應的細胞處理3小時，將甲臜溶解于DMSO，隨后在570nm下測量吸光度。
[0178]結果如圖7和圖8中所示，當僅用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物對SH-SY5Y細胞進行處理時，證實了細胞存活率未受影響；并且對于對6-OHDA毒性而言，用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行的預處理具有顯著的細胞保護作用(參見圖7和圖8)。
[0179]<3-2>魚腥草提取物在PC12細胞中的的細胞保護作用
[0180]為證實對于6-OHDA誘導毒性在注射部位處引起的多巴胺神經(jīng)病變而言，魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物對細胞存活率的影響，以1.5X IO4/孔將與神經(jīng)細胞具有類似分化作用的P12細胞接種入96孔板中，隨后孵育2天，在用稀釋于無FBS的RPMI培養(yǎng)基中的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物以各濃度處理I小時后,通過采用50 μ M的6-OHDA進行處理或不用6-OHDA進行處理而加以孵育4小時。以濃度為lmg/mL的MTT對反應的細胞處理3小時，將甲臜溶解于DMS0，隨后在570nm下測量吸光度。
[0181 ] 結果如圖9和圖10中所示，當僅用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物對PC12細胞進行處理時，證實了細胞存活率未受影響；并且對于6-OHDA毒性而言，用魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物進行的預處理具有顯著的細胞保護作用(參見圖9和圖10)。
[0182]<實驗實施例4>對魚腥草提取物體內(nèi)抗癲癇作用的證實
[0183]〈4-1>準備實驗動物
[0184]將雄性ICR小鼠(10周齡，34_36g，Korea bio)用作實驗動物。通過控制溫度為23±1°C、濕度為60±10%、白晝和黑夜各12小時并充分供應水和常規(guī)食物，將小鼠在動物籠中適應飼養(yǎng)7天，隨后在實驗中使用。將魚腥草提取物以200mg/kg的量每天口服給予一次，共給予3天。在給予藥物后的第三天，將0.4yg紅藻氨酸直接注入大腦的側腦室。結果，誘導出癲癇模擬模型。
[0185]〈4-2>行為試驗
[0186]為評估魚腥草提取物對于紅藻氨酸誘導的認知功能障礙的作用，在注射紅藻氨酸后的第四天進行新物體認知試驗。具體而言，在試驗的第I天，將兩個相同的物體放入寬45cm、長45cm和高50cm的盒子,將小鼠放入所述盒子中識別這兩個物體。在第2天,將同一盒子中的兩個物體之一換成具有不同形狀的物體，然后測量小鼠對新物體的搜尋時間。
[0187]結果如圖12中所示，證實了與紅藻氨酸誘導的認知功能障礙相比，魚腥草提取物處理組具有改善的認知功能(參見圖12)。
[0188]<4-3>對魚腥草提取物的海馬細胞保護作用的證實
[0189] 為證實魚腥草提取物對紅藻氨酸誘導的海馬細胞損傷的保護作用，進行Nissl染色。具體而言，在實驗實施例〈4-2>的行為試驗之后，取出組織，隨后將各組的小鼠麻醉并灌流，再將腦組織用4% PFA固定。使用冷凍切片機，將固定處理后的腦組織切成30μπι的厚度，對海馬部分的組織進行Nissl染色，隨后對魚腥草提取物的保護作用進行分析。[0190]結果如圖11中所示，證實了與紅藻氨酸誘導的海馬細胞損傷相比，魚腥草提取物以200mg/kg進行的預處理阻抑了海馬細胞的損耗，從而具有細胞保護作用(參見圖11)。
[0191]〈制造實施例1>制造藥物制劑
[0192]〈1-1>制備粉劑
[0193]實施例〈1-1>的魚腥草提取物2g
[0194]乳糖Ig
[0195]將成分混合，填充入氣密包中，從而制備粉劑。
[0196]〈1-2>制備片劑
[0197]
實施例< 1-1 >的.紙_ 1V1:提取物丨OOmg
玉米淀粉IOOmg
乳糖IOOmg
硬脂酸鎂2mg
[0198]將上述組 分混合，然后按照制備片劑的常規(guī)方法進行壓制，從而制備片劑。
[0199]〈1-3>制備膠囊劑
[0200]
實施例<1-5>_:&腿草提_:_丨OOmg
玉米淀SIIOOmg
乳糖IOOmg
硬脂酸鎂2mg
[0201]將上述組分混合，然后按照制備膠囊劑的常規(guī)方法填充入明膠膠囊，從而制備膠囊劑。
[0202]〈1-4〉制備丸劑
[0203]
實施例<1 -5>的位腥草提取物Ig
乳糖LSg
甘油Ig
木糖Iff0.5g
[0204]將上述組分混合，然后按照常規(guī)方法進行制備，從而使各丸劑含有4g混合物。
[0205]<1-5>制備顆粒劑
[0206]
實施例< 1-1 >的?[? B:草提取物I SOmg
大:?提取物50mg
葡萄糖200mg
淀粉600mg[0207]將上述組分混合，然后向其中加入100mg30%乙醇。在60°C下進行干燥以形成顆粒，并將所述顆粒填充入包裝中。
[0208]<制造實施例2>制備食品
[0209]按照如下所述制備含有本發(fā)明魚腥草提取物的食品。
[0210]〈2-1>制備面制食品
[0211]向面粉中加入0.5-5.0重量份的實施例〈1-2>的魚腥草提取物，用該混合物制備面包、蛋糕、餅干、薄餅干(crackers)和面條。
[0212]〈2-2>制備湯和肉汁
[0213]向湯和肉汁中加入0.1-5.0重量份的實施例〈1-2>的魚腥草提取物，制備促進健康的肉制品的湯和肉汁、以及面條。
[0214]〈2-3>制備牛肉餡
[0215]向牛肉餡中加入10重量份的實施例〈1-1>的魚腥草提取物，制備促進健康的牛肉餡。
[0216]〈2-4>制備奶制品 [0217]向牛奶中加入5-10重量份的實施例〈1-1>的魚腥草提取物，使用牛奶制備各種乳制品，如黃油和冰淇淋。
[0218]<2~5> 制備 sunsik
[0219]將糙米、大麥、糯米和薏苡通過已知方法進行預糊化、干燥并粉碎，然后使用研磨機制備顆粒尺寸為60目的粉末。
[0220]將黑豆、黑芝麻和紫蘇通過已知方法預糊化、干燥并粉碎，然后使用研磨機制備顆粒尺寸為60目的粉末。
[0221]將實施例〈1-1>的魚腥草提取物進行真空濃縮、并經(jīng)噴霧和熱風干燥機獲得干物質，使用研磨機進行研磨，從而得到顆粒尺寸為60目的干燥粉末。
[0222]將谷物、種子和上述制備的實施例〈1-1>的魚腥草提取物按照下述比例進行混合以進行制備。
[0223]谷物(糙米:30重量份,薏該:15重量份,大麥:20重量份);
[0224]種子(紫蘇:7重量份，黑豆:8重量份，黑芝麻:7重量份)；
[0225]實施例〈1-1>的魚腥草提取物(3重量份)；
[0226]靈芝(0.5重量份)；
[0227]地黃(0.5重量份)。
[0228]<制造實施例3>制備飲料
[0229]<3-1>制備保健飲料
[0230]將5g實施例〈1-2>的魚腥草提取物與輔料(如液態(tài)果糖(0.5% )、寡糖(2% )、糖(2% )、鹽(0.5% )和水(75% ))均勻混合，并進行短時滅菌，隨后裝入小包裝容器(如玻璃瓶和塑料瓶)中，從而制備保健飲料。
[0231]〈3-2>制備蔬菜汁
[0232]向1，OOOmL番茄汁或胡蘿卜汁中加入5g實施例〈1_1>的魚腥草提取物，制備蔬菜汁。
[0233]〈3-3>制備果汁[0234]向1，OOOmL蘋果汁或葡萄汁中加入Ig實施例〈1_1>的魚腥草提取物，制備果汁。
[0235]工業(yè)實用性
[0236]由于證實了本發(fā)明的魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在β-淀粉樣蛋白(Αβ)寡聚體或東莨菪堿毒性誘導的小白鼠模型中具有認知功能的改善作用，在β-淀粉樣蛋白(Αβ)誘導的癡呆模型中具有細胞保護作用和細胞死亡阻抑作用，在6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導的帕金森病模型中具有細胞保護作用，在紅藻氨酸誘導的癲癇模型中具有細胞保護作用，因此可將魚腥草提取物或者魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物有效地用于開發(fā)對癡呆、帕金森病或癲癇進行預防和治療的藥物組合物，或者用于開發(fā)對癲癇、帕金森病 或癲癇進行預防和治療的保健食品組合物。
【權利要求】
1.一種預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，所述藥物組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
2.如權利要求1所述的預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，其中，所述提取物通過水、C1-C2低級醇或其混合物提取。
3.如權利要求2所述的預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，其中，所述低級醇是乙醇或甲醇。
4.如權利要求1所述的預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，其中，所述癡呆是選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種。
5.一種預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，所述藥物組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
6.如權利要求5所述的預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，其中，所述魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物的混合比例為1:1至10:1。
7.如權利要求5所述的預防和治療癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物，其中，所述癡呆是選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種。
8.一種預防和改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物，所述保健食品組合物含有魚腥草提取物作為活性成分。
9.如權利要求8所述的預防和改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物，其中，所述提取物通過水、乙醇 或其混合物提取。
10.如權利要求8所述的預防和改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物，其中，所述癡呆是選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種。
11.一種預防和改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物，所述保健食品組合物含有魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物作為活性成分。
12.如權利要求11所述的預防和改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物，其中，所述魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物的混合比例為1:1至10:1。
13.如權利要求11所述的預防和改善癡呆、帕金森病或癲癇的保健食品組合物，其中，所述癡呆是選自于由阿爾茨海默病、血管性癡呆或輕度認知障礙(MCI)所組成的組中的任一種。
14.一種預防癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物。
15.一種治療癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向患有癡呆、帕金森病或癲癇的受試者給予魚腥草提取物。
16.一種預防癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向受試者給予魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物。
17.一種治療癡呆、帕金森病或癲癇的方法，所述方法包括向患有癡呆、帕金森病或癲癇的受試者給予魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物。
18.魚腥草提取物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物中的用途。
19.魚腥草提取物與白蘞提取物的混合物在制備預防或改善癡呆、帕金森病或癲癇的藥物組合物中的用途。
【文檔編號】A61K36/78GK103987395SQ201280060912
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2012年10月11日 優(yōu)先權日:2011年10月12日
【發(fā)明者】吳明淑, 金孝根, 樸寒星 申請人:慶熙大學校產(chǎn)學協(xié)力團