金屬離子穩(wěn)定的依那西普制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了適用于依那西普的長期儲存的穩(wěn)定的水性藥物依那西普組合物，這些組合物的制備方法，給藥方法，和含有這些組合物的試劑盒。
【專利說明】金屬離子穩(wěn)定的依那西普制劑
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及為了長期儲存依那西普而使用金屬離子穩(wěn)定的依那西普的水性藥物組合物，制備所述組合物的方法，其給藥方法，和含有所述組合物的試劑盒。本發(fā)明包括不需要精氨酸用于穩(wěn)定的依那西普制劑。
[0002]發(fā)明背景
[0003]多肽在使用前必須經(jīng)常被儲存。當(dāng)儲存一段時間，多肽在溶液中經(jīng)常是不穩(wěn)定的(Manning等人，1989，Pharm.Res.6:903-918)。為了延長其保存期限,開發(fā)了其他的工藝步驟，比如干燥，例如凍干法。然而，凍干的藥物組合物比較不便于使用。
[0004]改進多態(tài)穩(wěn)定性的典型實踐可通過改變制劑中組分濃度，或通過加入賦形劑修飾制劑解決(參見，例如，美國專利號5，580，856和6，171，586)。然而，添加劑的使用仍可導(dǎo)致不活躍的多肽。此外，凍干法的情況下，再水合步驟可通過，例如聚集或變形導(dǎo)致多妝的失活(Hora 等人,1992, Pharm.Res., 9:33-36 ；Liu 等人,1991, Biotechnol.Bioeng.,37:177-184)。多肽的聚集是不期望的，因為它可導(dǎo)致免疫原性(Cleland等人，1993，Crit.Rev.Therapeutic Drug Carrier Systems, 10:307-377 ；和 Robbins 等人，1987,Diabetes, 36:838-845)。
[0005]另一種改進多態(tài)穩(wěn)定性的途徑是在特定濃度使用L-精氨酸(美國專利號7，648，702)。
[0006]在使用前可儲存達到兩年的多肽之一是依那西普(Enbrel?, Immunex公司),它是二聚融合多肽，其包括連接到人免疫球蛋白G的Fe部分的人類75千道爾頓(p75)腫瘤壞死因子受體(TNFR)的細胞外配體結(jié)合部分。其含有934個氨基酸并具有大約150千道爾頓的表觀分子量(美國藥典，2002，Medical Economics股份有限公司)。依那西普的Fe部分包括重鏈恒定區(qū)2 (CH2)恒定區(qū)，重鏈恒定區(qū)3 (CH3)和鉸鏈區(qū)，但是不包括人免疫球蛋白G的重鏈恒定區(qū)I (CHl)。Fe區(qū)可包括一個或所有的上述區(qū)。依那西普通常通過重組DNA技術(shù)在中國倉鼠卵巢(CHO)哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中生成。
[0007]本發(fā)明提供可長期儲存的新的穩(wěn)定的依那西普液體制劑。
[0008]發(fā)明簡沭
[0009]本發(fā)明是水性藥物組合物，其包含依那西普和用以抑制依那西普不穩(wěn)定性、聚集、錯折疊和/或碎裂的穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑包含穩(wěn)定金屬離子。
[0010]下面討論中使用的各種技術(shù)術(shù)語在題為“定義”的章節(jié)中規(guī)定如下并貫穿說明書的其余部分。
[0011]本發(fā)明穩(wěn)定的依那西普制劑帶來的長期儲存穩(wěn)定性特征為以下至少之一:(I)在M3或T2或T4的SEC分析:單體含量大于大約90% ;聚集體含量小于大約3wt% ;及碎片3的量小于大約5wt% ;和⑵在％或1'2或1'4的!11(:分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3被％;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80被％;由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt%。
[0012]在一個相關(guān)方面，包括金屬離子的依那西普制劑帶來的長期儲存穩(wěn)定性特征為:(I)在M3或T2或T4的SEC分析單體含量大于大約90wt% ;聚集體含量小于大約3wt% ;及碎片3的量小于大約5wt% ;和⑵在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3wt% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt%。
[0013]穩(wěn)定的制劑的優(yōu)選方面，所述制劑帶來的長期穩(wěn)定性特征為:在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于或等于大約95wt% ;并且其中，如果峰3出現(xiàn)在HIC色譜圖上，則由峰3代表的組分的量小于或等于大約3wt%。
[0014]總結(jié)上面的，穩(wěn)定的依那西普制劑可選地且優(yōu)選地，不含精氨酸，或基本上無精氨
酸。
[0015]經(jīng)過在5°C下儲存一個、兩個或三個月后，通過SEC(體積排阻色譜)和HIC(疏水作用色譜)分析確定本發(fā)明的制劑具有極好的穩(wěn)定性。這些制劑與市售的其中精氨酸是必須組份的依那西普制劑相當(dāng)或更好。因此，本發(fā)明還指向使用金屬離子穩(wěn)定的依那西普制齊?，其不含精氨酸，或基本上無精氨酸，且其中組合物，在M3或T2或T4,帶來滿足下面的一個或兩個標(biāo)準(zhǔn)的長期儲存穩(wěn)定性:(A)與市售的商標(biāo)為Enbrel?的依那西普穩(wěn)定性相當(dāng)或更好，其通過以下測量:(i)組合物中的聚集體、單體和碎片3的量的sec分析(如說明書中規(guī)定)和(ii)HIC色譜圖中相應(yīng)于峰1、2和3的組合物中的材料的量的HIC分析(如說明書中規(guī)定)；和(B)HIC色譜圖，其中(i)峰3沒有，或基本上沒有且(ii)峰2代表大于大約95被％的組合物；SEC色譜圖基本上不含有相應(yīng)于聚集體的峰；且SEC色譜圖其中單體含量代表至少大約95wt%的組合物。本發(fā)明的制劑在不需要精氨酸作為穩(wěn)定劑時能滿足前述標(biāo)準(zhǔn)。
[0016]在本發(fā)明的一個實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鈣，其中氯化鈣為不超過5mM氯化鈣的量，且組合物還包含:可選地大約0.5至6wt.%蔗糖或海藻糖；可選地大約O至IOOmM NaCl ;可選地多至大約IOmM木糖醇；大約I至大約30mM磷酸鈉；其中組合物具有大約6.0至6.6的pH ;并且其中，可選地，組合物不包括精氨酸或基本上無精氨酸。
[0017]再一實施方式中，氯化鈣穩(wěn)定的組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約2mM氯化鈣；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約150mM氯化鈉；和小于大約4wt.%鹿糖；其中制劑具有大約6.3至6.5的pH。
[0018]再一實施方式中，氯化鈣穩(wěn)定的組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約2mM氯化鈣；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約IOwt.%蔗糖；其中制劑具有大約6.3至6.5的pH。
[0019]再一實施方式中，氯化鈣穩(wěn)定的組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約2mM氯化鈣；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約IOOmM氯化鈉；和小于大約5wt.%鹿糖；其中制劑具有大約6.3至6.5的pH。
[0020]再一實施方式中，氯化鈣穩(wěn)定的組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約ImM氯化鈣；大約10-30mM磷酸鈉；大約50mM氯化鈉；和小于大約8wt.%海藻糖；其中制劑具有大約6.3至6.5的pH。
[0021]再一實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鎂，穩(wěn)定的依那西普組合物包含大約ImM至大約20mM氯化鎂；可選地多至大約6wt.%鹿糖；大約25至150mM NaCl ;大約I至大約30mM磷酸鈉；其中組合物具有大約6.0至6.6的pH ;并且其中，可選地，組合物不包括精氨酸或基本上無精氨酸。[0022]再一實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鎂，穩(wěn)定的依那西普組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約IOmM氯化鎂；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約150mM氯化鈉；和小于大約3wt.%鹿糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
[0023]再一實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鎂，穩(wěn)定的依那西普組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約5mM氯化鎂；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約IOOmM氯化鈉；和小于大約4wt.%蔗糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
[0024]再一實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鎂，穩(wěn)定的依那西普組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約4mM氯化鎂；大約10-30mM磷酸鈉；大約IOOmM氯化鈉；和大約2.5wt.%蔗糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
[0025]再一實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鎂，穩(wěn)定的依那西普組合物包含大約50mg/ml的依那西普；大約IOmM氯化鎂；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約IOOmM氯化鈉；和小于大約5wt.%鹿糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
[0026]本發(fā)明的依那西普組合物還能夠提供包括可接受水平的顯微鏡下可見的顆粒的制劑。因此，本發(fā)明還指向金屬離子穩(wěn)定的依那西普制劑，其在M3或T2或T4每mL平均具有不超過大約10，000個尺寸大于5 μ m的顯微鏡下可見的顆粒。
[0027]本發(fā)明的穩(wěn)定的依那西普組合物的特征還為:(a)在M3或T2或T4的SEC分析為單體含量大于大約90Wt% ;并且聚集體含量小于大約3wt% ;和(b)在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3wt% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt%，并且其中制劑不包括精氨酸或基本上無精氨酸。
[0028]制劑的穩(wěn)定性的特征還可為組合物表現(xiàn)為在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約lwt% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約95wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約3wt%。
[0029]再一實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鈣，依那西普制劑包含包含大約50mg/ml的依那西普；l_5mM氯化鈣；大約l-30mM磷酸鈉；大約O至IOOmM NaCl ;大約0.5至5%蔗糖或海藻糖或其組合；并且其中制劑具有大約6.0至6.6的pH且特征為:在M3或T2或T4的SEC分析為單體含量大于大約97wt%并且聚集體含量小于大約Iwt % ;在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約4wt %;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約82wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約15wt%。本發(fā)明的制劑使用氯化鈣用于穩(wěn)定在不需要精氨酸作為穩(wěn)定劑時能滿足前述標(biāo)準(zhǔn)。
[0030]再一實施方式中，其中穩(wěn)定劑為氯化鎂，穩(wěn)定的依那西普組合物包含大約ImM至大約20mM氯化鎂；可選地多至大約6wt.%鹿糖；大約25至150mM NaCl ;大約I至大約30mM磷酸鈉；其中組合物具有大約6.0至6.6的pH ;并且其中組合物的特征為:在M3或T2或T4的SEC分析為單體含量大于大約97wt%并且聚集體含量小于大約Iwt 及在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約4wt %;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約85wt %;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約14wt %。本發(fā)明的制劑使用氯化鎂用于穩(wěn)定在不需要精氨酸作為穩(wěn)定劑時能滿足前述標(biāo)準(zhǔn)。
[0031] 本發(fā)明優(yōu)選的穩(wěn)定的組合物表現(xiàn)為在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約2￥丨％且優(yōu)選小于大約lwt%;* HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約95?1:%且優(yōu)選大于大約97wt%;由及HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約3wt %,且優(yōu)選地O至I %。
[0032]本發(fā)明提供包含依那西普和用以抑制依那西普不穩(wěn)定性、聚集、錯折疊和/或碎裂的穩(wěn)定劑的水性藥物組合物，其中所述穩(wěn)定劑包含穩(wěn)定金屬離子。在優(yōu)選實施方式中，所述金屬離子選自由鈣、鎂、鋅、和其組合組成的組。在更優(yōu)選實施方式中，鈣、鎂、鋅分別以氯化鈣、氯化鎂和氯化鋅的形式提供。氯化鈣和氯化鎂為依那西普特別優(yōu)選的穩(wěn)定劑。
[0033]與市售的含有精氨酸制劑提供的依那西普不同，根據(jù)美國專利7，648，702我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，本文描述和例示的金屬離子穩(wěn)定的依那西普制劑不需要精氨酸用于長期穩(wěn)定，盡管如果需要仍可加入精氨酸。能夠提供沒有精氨酸的穩(wěn)定的依那西普制劑對于保健系統(tǒng)代表著潛在的重大益處，其可向患者和衛(wèi)生保健提供者提供可選擇的依那西普制劑，相對于現(xiàn)有需要精氨酸用于穩(wěn)定的商業(yè)依那西普制劑(也即EnbrelK,)變得可以更低的成本得到。
[0034]此處使用的術(shù)語“不穩(wěn)定性”或類似術(shù)語表示儲存期間依那西普單體經(jīng)受各種不期望的轉(zhuǎn)變的趨勢。此轉(zhuǎn)變包括形成低聚物和高分子量聚集體(下文中術(shù)語“聚集體”)，高分子量聚集體中多個依那西普單體通過各種非共價吸引力(例如靜電相互作用)不可逆地相互結(jié)合。儲存期間不期望的轉(zhuǎn)變還可包括依那西普單體降解成小碎片和/或斷開形式。理想地，依那西普制劑應(yīng)盡可能最大程度地最小化依那西普制劑在儲存期間形成依那西普的聚集體、錯折疊蛋白質(zhì)、低聚物和/或碎片的結(jié)果的趨勢。從減少形成不期望的聚集體或碎片的能力得到的重要的益處是藥物的潛在的毒性和/或免疫原性的減小。
[0035]金屬離子穩(wěn)定的制劑可選地且優(yōu)選地?zé)o，或基本上無精氨酸。術(shù)語“基本上無精氨酸”意思是精氨酸， 即使存在，也不有助于所述制劑中依那西普單體的穩(wěn)定至如此程度以致本領(lǐng)域技術(shù)人員將會判斷其存在從穩(wěn)定的角度而言是有利或必要的。
[0036]這些和其它方面從下面的各種實施方式的描述中將變得顯而易見，盡管其中的改變和變型可受影響，但也不脫離本公開的新的觀念的精神和范圍。
[0037]應(yīng)當(dāng)明白，前述的一般描述和下面的詳細描述僅為本發(fā)明權(quán)利要求的示例和解釋并不是限制。
[0038]發(fā)明詳沭
[0039]現(xiàn)在詳細描述本發(fā)明的各種實施方式。說明書中使用的并貫穿權(quán)利要求的“一個(a)”，“一個(an)”，和“此(the) ”的意思包括復(fù)數(shù)引用除非文中另有明確規(guī)定。還有，說明書中使用的并貫穿權(quán)利要求的“在…中(in)”的意思包括“在…中(in)”和“在…上(on)”除非文中另有明確規(guī)定。此外，說明書中使用的一些術(shù)語更具體地定義如下。
[0040]
[0041]本說明書中使用的術(shù)語一般具有其在本發(fā)明文中領(lǐng)域和每個術(shù)語使用的語境中的通常含義。用于描述本發(fā)明的某些術(shù)語討論如下，或說明書的其他地方，向就本發(fā)明說明書的實踐者提供其他的指導(dǎo)。提供了某些術(shù)語的同義詞。一個或多個同義詞的陳述不排除其他同義詞的使用。本說明書任何地方使用的例子包括此處討論的任何術(shù)語的例子僅是說明的，不以任何方式限制本發(fā)明的范圍和含義或任何例示術(shù)語。本發(fā)明不限于本說明書中給出的各種實施方式。
[0042]除非另有規(guī)定，此處使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的相同含義。在有沖突的情況，本文件，包括定義將約束。
[0043]“左右(Around) ” “大約(about)”或“近似(approximately) ”意味著在給定值或范圍的20%之內(nèi)、10%之內(nèi)、5、4、3、2或1%之內(nèi)。給出的數(shù)值的量是近似的,意味著術(shù)語“左右(Around) ” “大約(about) ”或“近似地(approximately) ”可推測如果沒有明確規(guī)定。
[0044]術(shù)語“依那西普”或“依那西普單體”或“單體”是[nbrd、H的同義詞。指的是多肽，其是二聚融合多肽的多肽，包括連接到人免疫球蛋白G的Fe部分的人類75千道爾頓(p75)腫瘤壞死因子受體(TNFR)的細胞外配體結(jié)合部分。其含有934個氨基酸并具有大約150千道爾頓的表觀分子量。為了本發(fā)明申請的目的，術(shù)語“依那西普”還包括在氨基酸結(jié)構(gòu)上具有不影響依那西普的功能、效果，或親和力的較小變型(包括氨基酸的刪除、增加，和/或替代)的依那西普。術(shù)語“依那西普”包括Enbre隨}的所有形式和制劑，包括但不限于濃縮的制劑、隨時可用于可注射的制劑；用水、乙醇，和/或其他材料再造的制劑及其他。
[0045]此處使用的術(shù)語“單體”意思是上述提及的二聚的依那西普融合蛋白。
[0046]術(shù)語“糖”指的是單糖、二糖，和多糖。糖的例子包括但不限于蔗糖、海藻糖、右旋糖及其他。
[0047]術(shù)語“金屬離子”指的是具有正電荷或負電荷的金屬原子。為了本發(fā)明申請的目的，術(shù)語“金屬離子”還包括金屬離子的來源，包括但不限于金屬鹽。
[0048]術(shù)語“長期 儲存”理解為藥物組合物可儲存三個月或更長，六個月或更長，并且優(yōu)選地一年或更長。長期儲存還可理解為藥物組合物作為液體在2-8°C，或冷凍，例如在-20°C或更冷下儲存。其還涉及組合物被冷凍并解凍一次或更多。
[0049]關(guān)于長期儲存的術(shù)語“穩(wěn)定的”或“穩(wěn)定化的”理解為包含在藥物組合物中的依那西普的活性相對于組合物儲存之初的活性的損失不多于20%，或更優(yōu)選15%，或進一步優(yōu)選10%，和最優(yōu)選5%。
[0050]術(shù)語“哺乳動物”包括但不限于人類。
[0051]術(shù)語“藥學(xué)上可接受載體”指的是無毒固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、封裝材料、制劑輔料，或常規(guī)劑型的賦形劑。藥學(xué)上可接受載體在使用劑量和濃度下對受體是無毒的并且與制劑中的其他材料相容。
[0052]術(shù)語“組合物”指的是通常包括載體，如藥學(xué)上可接受載體或本領(lǐng)域常規(guī)賦形劑的混合物，并且為了治療、診斷、或預(yù)防適合向客體給藥。它可包括細胞培養(yǎng)，其中多肽或多肽苷酸出現(xiàn)在細胞或培養(yǎng)基中。例如，用于口服給藥的組合物可形成溶液、懸浮液、片、丸、膠囊、緩釋制劑、口服灌洗劑或粉末。
[0053]術(shù)語“藥物組合物”和“制劑”可交換使用。
[0054]術(shù)語“治療”指的是任何用于哺乳動物的疾病的給藥或治療且包括抑制疾病、阻止其發(fā)展、減輕疾病，例如，復(fù)原、恢復(fù)或修復(fù)損失、缺失，或有缺陷的功能；或刺激低效率的過程。此術(shù)語包括獲得預(yù)期的藥理學(xué)商和/或生理學(xué)上的效果，覆蓋哺乳動物中任何病理狀態(tài)或不適的治療。所述效果可為預(yù)防性的完全或部分阻止其不適或癥狀和/或治療性的部分或完全治愈不適和/或由不適帶來的不利影響。它包括(I)阻止有患不適傾向但還沒癥狀的客體出現(xiàn)或復(fù)發(fā)的不適，(2)抑制不適，如阻止其發(fā)展，(3)停止或終止不適或至少是其相關(guān)癥狀，以便宿主不再遭受不適或其癥狀之苦，例如使不適或其癥狀復(fù)原，例如通過恢復(fù)或修復(fù)損失、缺失，或有缺陷的功能刺激低效率的過程，或(4)減輕、緩解或改善不適，或與其相關(guān)的癥狀，其中改善廣義上講是指在至少參數(shù)量級上減少，例如炎癥、痛苦和/或腫瘤大小。
[0055]術(shù)語“疾病”指的是需要醫(yī)療干預(yù)或醫(yī)療干預(yù)是令人滿意的情況、感染、不適或綜合征。此醫(yī)療干預(yù)可包括治療、診斷和/或預(yù)防。
[0056]術(shù)語“治療有效量”指的是當(dāng)向活體給藥，在活體上達到預(yù)期效果這樣的量。例如，本發(fā)明多肽向活體給藥的有效量為阻止和/或治療整合蛋白ανβ3_疾病的量。精確的量取決于治療的目的，可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用已知技術(shù)確定。如本領(lǐng)域所示，根據(jù)局部遞送、年齡、體重、總體健康、性別、飲食、給藥時間、藥物相互作用和狀況的嚴重程度調(diào)節(jié)系統(tǒng)的是必要的，并且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)實驗確定。
[0057]術(shù)語“1\”指的是依那西普制劑在40°C下已經(jīng)儲存一周的時間點。
[0058]術(shù)語“T2”指的是依那西普制劑在40°C下已經(jīng)儲存兩周的時間點。
[0059]術(shù)語“T4”指的是依那西普制劑在40°C下已經(jīng)儲存四周的時間點。
[0060]術(shù)語“M3”共指三個時間點，和特別是依那西普制劑在5°C溫度下儲存大約一個、大約兩個或大約三個月時間后觀察到的分析結(jié)果。例如，此處提及在M3進行的分析，應(yīng)理解為該分析在依那西普制劑已經(jīng)儲存選自大約一個、大約兩個或大約三個月時間的時間點進行的。因此，如果觀察到至少相應(yīng)于下面儲存時間的一個時間點即滿足了此處要求的在M3依那西普制劑帶來的某一分析值或測量:5°C下儲存大約一個月，大約兩個月或大約三個月。
[0061]此處使用的術(shù)語“峰1”、“峰2”和“峰3”與討論的HIC色譜圖結(jié)果有關(guān)，指的是與美國專利7，294，481中討論的相同的峰1、2和3。
【具體實施方式】
[0062]當(dāng)包含依那西普(Enbre I ?)的藥物組合物，包括依那西普的水性的和凍干的制 劑，長期儲存時，依那西普的活性可能由于依那西普單體的不穩(wěn)定性，通過聚集和/或化學(xué)降解包括形成碎片，導(dǎo)致?lián)p失或減小。因此，本發(fā)明提供允許依那西普的水性制劑穩(wěn)定地長期儲存的數(shù)個實施方式，允許依那西普穩(wěn)定的長期儲存，以便依那西普，不管是液體狀態(tài)還是凍結(jié)狀態(tài)，在儲存過程中均是穩(wěn)定的。所提供的制劑包括但不限于不含精氨酸和不需要如再水合的其他步驟的制劑。
[0063]這些實施方式更加詳細地解釋如下。
[0064]依那西普
[0065]本發(fā)明所有的組合物均包含(Enbrel?)。如本申請的背景部分所述，依那西普是二聚融合多肽，其包括連接到人免疫球蛋白G的Fe部分的人類75千道爾頓(p75)腫瘤壞死因子受體(TNFR)的細胞外配體結(jié)合部分。依那西普含有934個氨基酸。依那西普的Fe組份包括人免疫球蛋白G的重鏈恒定區(qū)2(CH2)，重鏈恒定區(qū)3(CH3)和鉸鏈區(qū)。Fe區(qū)可包括一個或所有的上述區(qū)。
[0066]本藥物組合物中適于儲存的依那西普由表達依那西普的活宿細胞主生成，如抗體中的雜交瘤，或在融合多肽或抗體的情況下已由基因工程生成多肽的宿主細胞?；蚬こ碳毎啥嚯牡姆椒ㄔ诒绢I(lǐng)域已是眾所周知的。參見，例如，Ausubel等人，eds.(1990), Current Protocols in Molecular Biology (Wiley, New York)。此方法包括引入核酸以編碼并向活宿主表達多肽。這些活宿主可為細菌細胞、真菌細胞，或優(yōu)選地，培養(yǎng)中生長的動物細胞。細菌宿主細胞包括但不限于大腸桿菌細胞。合適的大腸桿菌菌株的例子包括:HB101、DH5.a、GM2929、JM109、KW251、NM538、NM539，和任何未能分開外來 DNA 的大腸桿菌菌株?？墒褂玫恼婢拗靼ǖ幌抻?，釀酒酵母、畢赤酵母和曲霉屬真菌細胞。可使用的動物細胞株的幾個例子為CHO、VERO, BHK、HeLa, Cos、MDCK、293、3T3，和W138。新的動物細胞株可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)已知方法確定(例如轉(zhuǎn)變、病毒性感染，和/或挑選)?？蛇x地，依那西普可由宿主隱藏到媒介中。
[0067]表達的依那西普的純化可通過任何標(biāo)準(zhǔn)方法進行。當(dāng)依那西普在細胞內(nèi)生成時，顆粒碎片通過例如離心分離或超濾去除。當(dāng)依那西普隱藏到媒介中時，來自表達系統(tǒng)的多肽可首先使用標(biāo)準(zhǔn)多肽濃縮過濾器濃縮。也可加入抑制蛋白質(zhì)水解的蛋白酶抑制劑和包括阻止微生物生長的抗生素。
[0068]依那西普可使用，例如，羥磷灰石色譜法、凝膠電泳、透析和親和色譜法，和已知的或待發(fā)現(xiàn)的純化技術(shù)包括但不限于蛋白A色譜法、分餾上的離子交換柱、乙醇沉淀、反相HPLC、硅膠色譜法、肝素SFPi丨AROSrrn':上的色譜法、陰離子或陽離子交換樹脂層析法(如聚天冬氨酸柱)、層析聚焦、SDS-PAGE、和硫酸銨沉淀的任意組合純化。
[0069]金屬離子穩(wěn)定的依那西普
[0070]本發(fā)明提供了包含依那西普和用以抑制依那西普不穩(wěn)定性、聚集、錯折疊和/或碎裂的穩(wěn)定劑的水性藥物組合物，其中所述穩(wěn)定劑包含穩(wěn)定金屬離子。
[0071]不囿于本發(fā)明的任何特別的理論，我們認為金屬離子如鈣、鎂、和鋅作為構(gòu)象穩(wěn)定劑以降低依那西普聚集的趨勢。聚集上的減少被認為持續(xù)了很長時間，如兩年或更多。不囿于特別的理論，我們認 為金屬離子能夠穩(wěn)定含有依那西普的水性藥物組合物，因為金屬可結(jié)合到自然態(tài)，此時配體發(fā)生右旋幾何結(jié)構(gòu)。這樣做時，有自然態(tài)的純粹的穩(wěn)定。一旦蛋白質(zhì)展開，結(jié)合部位失去，變性狀態(tài)在自由能方面比較不受影響。結(jié)果是構(gòu)象的純粹的穩(wěn)定，導(dǎo)致改進的長期儲存。此外，金屬結(jié)核還可提高蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性，導(dǎo)致聚集減少并且溶解度增加。金屬離子的穩(wěn)定影響可不限于聚集的減少但也可表現(xiàn)為制劑中依那西普單體不穩(wěn)定的其他方面。
[0072]在優(yōu)選實施方式中，金屬離子選自由鈣、鎂、鋅、和其組合組成的組。在更優(yōu)選實施方式中，鈣、鎂、鋅分別以氯化鈣、氯化鎂和氯化鋅的形式提供。
[0073]本發(fā)明的藥物組合物可通過結(jié)合純化的依那西普和金屬離子制備。而且，如果需要可加入緩沖劑、張度改性劑和其他的賦形劑和其他常用的非活性成分。為簡單起見，這些在說明書的后面更充分地討論。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)明白各種組合物中包括的組分的結(jié)合可以任何適當(dāng)?shù)捻樞蜻M行。如緩沖劑可以在先、中間或在后加入，張度改性劑也可以在先、中間或在后加入。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員還可理解這些化學(xué)品中的一些在某些組合中是不相容的，并因此，容易地用具有相同性質(zhì)但在相關(guān)混合物中相容的不同的化學(xué)品替代。
[0074]在優(yōu)選實施方式中，提供的制劑中金屬離子的濃度優(yōu)選為大約ImM至0.5M，更優(yōu)選為大約ImM至大約IOOmM,更優(yōu)選為大約2mM至大約20mM，還更優(yōu)選為大約2mM至10mM。
[0075]金屬離子的來源可從商業(yè)提供者得到。
[0076]在一個實施方式中使用氯化鈣用于穩(wěn)定，本發(fā)明的依那西普制劑包含大約25至大約50mg/ml的依那西普；達到大約5mM氯化?丐；可選地大約0.5至6wt.%鹿糖或海藻糖；可選地大約O至IOOmMNaCl ;可選地達到大約IOmM木糖醇；大約I至大約30mM磷酸鈉；其中組合物具有大約6.0至大約7.0,更優(yōu)選大約6.0至大約6.6和最優(yōu)選大約6.3至大約
6.5 的 pH。
[0077]在一個實施方式中使用氯化鎂用于穩(wěn)定，本發(fā)明的依那西普制劑包含大約25至大約50mg/ml的依那西普；大約ImM至大約20mM氯化鎂；可選地達到大約6wt.%鹿糖；大約25至150mM NaCl ;大約I至大約30mM磷酸鈉；其中組合物具有大約6.0至大約7.0，更優(yōu)選大約6.0至大約6.6和最優(yōu)選大約6.3至大約6.5的pH。
[0078]金屬離子穩(wěn)定的組合物優(yōu)選特征為:在T2的SEC分析為大約80wt%至大約95wt.%單體含量；在T2的SEC分析為小于大約4wt%聚集體含量；及在T2的SEC分析為小于大約8wt%的碎片3的量。
[0079]在一個方面，根據(jù)本發(fā)明所述的含有穩(wěn)定的金屬離子的依那西普制劑，帶來穩(wěn)定性特征為:
[0080](a)在T4的SEC分析為大于大約90，91，92，93，94，95，96，或97wt.%單體含量；和小于大約3，2或Iwt.%聚集體含量 '及
[0081](b)在TJ^HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3，2或Iwt.% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80，81，82，83，84或85wt.% ;和由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20，19，18，17，16，15，14，或13wt.% ;及 [0082](c)在T4的HIC分析，其中HIC色譜圖中由峰I代表的組分的量小于大約3，2或lwt.% ；HIC色譜圖中由峰2代表的組分的量大于80，81，82，83，84或85wt.% ;和HIC色譜圖中由峰3代表的組分的量小于20，19，18，17，16，15，14，或13wt.%0
[0083]本發(fā)明的含有金屬離子用于穩(wěn)定的依那西普制劑更優(yōu)選的特征為:在T4或T2的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約Iwt.% ；由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約95wt.和由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約3wt.%。
[0084]術(shù)語“SEC”，“T2” “T4” “HIC” “單體含量” “聚集體”和“碎片3” “峰I, ” “峰2，”和“峰3，”，定義如上和下面的實施例中。
[0085]優(yōu)選的氯化鈣穩(wěn)定的依那西普制劑包含:大約50mg/ml的依那西普；1至5mM氯化鈣；大約I至大約30mM磷酸鈉；大約O至IOOmM NaCl ;大約0.5至5wt.%鹿糖或海藻糖或其組合；其中組合物具有大約6.0至大約6.6的pH并且特征為:在T4的SEC分析為大于大約97wt.%單體含量和小于大約Iwt.%聚集體含量；在T2的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約4wt.% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約82wt.% ;和由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約15wt.% ;和在T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約2wt.% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約85wt.% ;和由HIC色譜圖中峰3代表的組合物的量小于大約13wt.%。
[0086]優(yōu)選的氯化鎂穩(wěn)定的依那西普制劑包含:大約ImM至大約20mM氯化鎂；可選地多至大約6wt.%鹿糖；大約25至150mM NaCl ;大約I至大約30mM磷酸鈉；其中組合物具有大約6.0至大約6.6的pH并且其中組合物的特征為:在T4的SEC分析大于大約97wt.%單體含量和小于大約Iwt.%聚集體含量；在1~2的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組合物的量小于大約4wt.% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組合物的量大于大約85wt.% ;和HIC由色譜圖中峰3代表的組合物的量小于大約14wt.% ;和在T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約2wt.% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于大約85wt.% ;和由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約14wt.%。
[0087]本發(fā)明特別優(yōu)選的氯化鈣穩(wěn)定的實施方式中，具有上述分析的性質(zhì)的穩(wěn)定的依那西普制劑包含:大約50mg/ml的依那西普；大約2mM氯化鈣；大約15mM磷酸鈉；大約75mMNaCl ;和大約3wt.%蔗糖;其中制劑具有大約6.3至大約6.5的pH。
[0088]金屬離子穩(wěn)定的依那西普組合物的再一實施例中，穩(wěn)定劑為氯化鈣或氯化鎂，制劑無或基本上無精氨酸，制劑帶來的長期儲存穩(wěn)定性特征為:
[0089]在M3的SEC分析:單體含量大于大約90wt.% ;聚集體含量小于大約3wt.% ;和碎片3的量小 于大約5wt% ;及
[0090]在％的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3wt.% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80wt.和由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt.%。
[0091]再一實施方式中穩(wěn)定劑為氯化鈣和/或氯化鎂，穩(wěn)定的組合物帶來的長期儲存穩(wěn)定性特征為:
[0092]在M3或T4的SEC分析:單體含量大于大約90wt.%;聚集體含量小于大約3wt.% ；和碎片3的量小于大約5wt% ;及
[0093]在M3*TJ^HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3wt.%；由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80wt.% ;由和HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt.%。
[0094]本發(fā)明使用氯化鎂用于穩(wěn)定的再一優(yōu)選實施方式中，具有上述分析的性質(zhì)的穩(wěn)定的依那西普制劑包含:大約50mg/ml的依那西普；大約IOmM氯化鎂；大約15mM磷酸鈉；大約75mM氯化鈉；和大約3wt.%蔗糖；并且具有大約6.3至大約6.5的pH。
[0095]在另一優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的氯化鈣或氯化鎂穩(wěn)定的依那西普組合物帶來的長期儲存穩(wěn)定性的特征為:在M3的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于或等于95wt.% ;和由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于或等于大約Iwt.%。
[0096]金屬離子穩(wěn)定的依那西普制劑，不含精氨酸，發(fā)現(xiàn)在5°C下儲存經(jīng)過3個月后的穩(wěn)定性與目前市場上可得到的含有精氨酸的Enbrel制劑相當(dāng)或更好。因此本發(fā)明還涉及金屬離子穩(wěn)定的依那西普制劑，其不含精氨酸或基本上無精氨酸，并且其中組合物在5°C下儲存一、二或三個月后，當(dāng)在選自下面的時間點:自儲存起大約一個月、大約兩個月、大約三個月，評估帶來的長期儲存穩(wěn)定性符合下面的一個或兩個標(biāo)準(zhǔn):(A)穩(wěn)定性與市售的商標(biāo)為Fnb「cl_K:的依那西普相當(dāng)或更好，其通過以下測量:(i)組合物中聚集體，單體和碎片3的量的SEC分析(如說明書中規(guī)定)和(ii)HIC色譜圖中相應(yīng)于峰1、2和3的組合物中材料的量的HIC分析(如說明書中規(guī)定)；及
[0097](B)HIC色譜圖其中(i)峰3沒有或基本上和沒有(ii)峰2代表大于大約95wt%的組合物；SEC色譜圖基本不含相應(yīng)于聚集體的峰JPSEC色譜圖其中組合中代表單體的量至少為大約95wt%。
[0098]術(shù)語“SEC”，“T2” “T4” “HIC” “單體含量” “聚集體”和“碎片3” “峰I, ” “峰2，”和“峰3，”，如上并在下面的實施例中定義。
[0099]盡管根據(jù)本發(fā)明使用金屬離子穩(wěn)定，但是不排除使用精氨酸，根據(jù)本發(fā)明包含金屬離子用于穩(wěn)定的依那西普制劑優(yōu)選無或基本上無精氨酸。
[0100]提供的藥物組合物的其他的組分
[0101]本發(fā)明的制劑還可包括緩沖劑、張度改性劑、賦形劑、藥學(xué)上可接受載體和藥物組合物其他常用的非活性成分。為簡單起見，這些在本申請的后面更充分地討論。
[0102]緩沖劑保持pH在期望的范圍。合適的緩沖劑包括組氨酸、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、醋酸銨、三_(羥甲基)_氨基甲烷(tris)、各種形式的醋酸鹽和二乙醇胺。制劑中緩沖劑的濃度優(yōu)選為大約ImM至大約1M，更優(yōu)選為大約IOmM至大約200mM。緩沖劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，可由已知方法制得和從商業(yè)提供者購買。
[0103]合適的緩沖劑的例子為磷酸鹽、組氨酸、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、醋酸鹽、三(羥甲基)氨基甲烷(tris)、碳酸氫鹽。
[0104]一個優(yōu)選實施方式中，緩沖劑為；磷酸鈉。
[0105]優(yōu)選實施方式中，藥物組合物的pH在或接近生理水平。因此，優(yōu)選地，所提供組合物的PH為大約5.8至大約8.4 ;和更優(yōu)選地，大約6.2至大約7.4。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)明白在特別制劑中必要時可調(diào)節(jié)以最大化依那西普的穩(wěn)定性和溶解度。因此，pH在生理范圍之外但患者仍可忍受的依那西普制劑，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0106]張度改性劑為有助于溶液滲透壓的分子。藥物組合物的滲透壓優(yōu)選調(diào)節(jié)至最大化活性組分的穩(wěn)定性和/或最小化給藥時患者的不適感。通常優(yōu)選藥物組合物與血清等壓，也即，具有相同或相似的滲透壓，這通過加入張度改性劑達到。
[0107]在一個優(yōu)選實施方式中，所提供的制劑的滲透壓為大約180至大約420m0sM。然而應(yīng)當(dāng)明白，為特殊情況需要滲透壓可更高或更低。
[0108]適用于調(diào)節(jié)滲透壓的張度改性劑的例子包括但不限于氨基酸(不包括精氨酸)(例如，半胱氨酸、組氨酸和甘氨酸)、鹽(例如，氯化鈉、氯化鉀和檸檬酸鈉)和/或糖類(例如，蔗糖、葡萄糖和甘露糖醇)。
[0109]優(yōu)選的張度改性劑為甘氨酸、丙氨酸、氯化鈉、氯化鉀和硫酸鈉。
[0110]在一個優(yōu)選實施方式中，制劑中張度改性劑的濃度優(yōu)選為大約ImM至大約1M，更優(yōu)選為大約IOmM至大約200mM。張度改性劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，可由已知方法制得和從商業(yè)提供者購買。
[0111]賦形劑，還稱為化學(xué)添加劑、共溶質(zhì)、或共溶劑，在溶液中(還可在干燥或凍結(jié)狀態(tài)中)穩(wěn)定多肽還可加入到藥物組合物中。賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，可由已知方法制得和從商業(yè)提供者購買。
[0112] 合適的賦形劑的例子包括但不限于糖/多羥基化合物，如:蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖；聚合物，如:血清白蛋白(牛血清白蛋白(BSA)、人SA或重組HA)、葡聚糖、聚(乙烯醇)(PVA)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC);非水溶劑，例如:多元醇(例如，PEG和甘油)和二甲基甲酰胺(DMF);氨基酸，如:脯氨酸、L-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸鹽酸鹽、肌氨酸和Y-氨基丁酸；表面活性劑如:吐溫-80? (聚山梨醇酯80)、吐溫-20? (聚山梨醇酯20)、SDS、聚山梨醇酯、泊洛沙姆；和混合的賦形劑，如磷酸
鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、金屬離子(如鋅、鈣、和鎂)、CHAPS、單月桂酸酯、2-0-β -甘露甘油酸酯(2-0-beta-mannoglycerate)或上述的任意組人
口 O
[0113]優(yōu)選的賦形劑為蔗糖、乳糖、丙三醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、重組白蛋白、葡聚糖、PVA、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、甘油、丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸鹽酸鹽、肌氨酸、SDS、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊咯沙姆188、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、鋅離子、鈣離子、鎂離子、CHAPS、蔗糖單月桂酸酷和 2_0_β -甘露甘油酸酷(2-0-beta-mannoglycerate)。
[0114]本發(fā)明制劑中一種或多種賦形劑的濃度優(yōu)選為大約0.001至5wt%，更優(yōu)選為大約 0.1 至 2wt%。
[0115]治療方法
[0116]在另一實施方式中，本發(fā)明提供治療哺乳動物的方法包含向哺乳動物給藥治療有效劑量的本發(fā)明的藥物組合物，其中所述哺乳動物患有疾病或不適，其可以從使用依那西普的治療中獲益。
[0117]在一個優(yōu)選實施方式中，依那西普從用組合物治療的相同種類的哺乳動物中得到。
[0118]在一個優(yōu)選實施方式中，所述哺乳動物為人類。
[0119]可使用所提供的組合物治療的疾病或不適包括但不限于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、韋格納氏病(肉芽腫病)、克羅恩病(或炎癥性腸病)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、丙型肝炎、子宮內(nèi)膜異位癥、哮喘、惡病質(zhì)、牛皮癬和特應(yīng)性皮炎。其他的可使用本發(fā)明組合物治療的疾病或不適包括WO 00/62790、WO 01/62272、美國專利申請?zhí)?001/0021380和美國專利7，648，702B2中的描述，其相關(guān)部分通過引用的方式并入本文。
[0120]所提供的藥物組合物如果需要可通過全身注射，如靜脈注射向客體給藥；或通過向相關(guān)部位注射或 施用，如手術(shù)中部位暴露時，向部位直接注射或直接施用；或通過局部施用。
[0121]在一個實施方式中，本發(fā)明提供了治療和/或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，包括將所提供的依那西普組合物之一，向哺乳動物給藥其需要的治療有效劑量。
[0122]所提供組合物中依那西普的治療有效劑量取決于待治療的狀況，狀況的嚴重程度，先前的治療，和患者的臨床史和對藥物的反應(yīng)。適當(dāng)?shù)膭┝靠筛鶕?jù)主治醫(yī)生的判斷調(diào)整，例如可將其一次或經(jīng)一系列的給藥向患者給藥。
[0123]在一個實施方式中，每個成年人有效的依那西普量的劑量為大約l-500mg/m2，或為大約l-200mg/m2,或為大約l-40mg/m2,或為大約5_25mg/m2。
[0124]或者，以固定劑量給藥，其量為2-500mg/劑量，2-100mg/劑量或為大約10_80mg/劑量。
[0125]如果每周給藥劑量多于一次，示例的劑量范圍與前述的劑量范圍相同或更低和優(yōu)選地給藥為每周兩次，每次25-100mg/劑量的劑量范圍。
[0126]在另一個實施方式中，通過注射可接受的給藥劑量含有80_100mg/劑量，或可選擇地含有80mg每劑量。
[0127]劑量可每周、兩周或隔開數(shù)周(例如2-8周)給藥。
[0128]在一個實施方式中，依那西普以25至75mg/ml通過單次皮下(SC)注射。[0129]在某些情況下，通過每周一到三次，持續(xù)至少三周，達到大約IOOmg的藥物組合物的給藥劑量得到患者狀況的好轉(zhuǎn)。若想有期望程度的好轉(zhuǎn)，長期的治療是必要的。對于不可治療的慢性疾病，該療法可無限期地持續(xù)。對于兒科患者(年齡4-17)，適當(dāng)?shù)寞煼缮婕敖o藥0.4mg/kg至5mg/kg劑量的依那西普,每周一次或多次。
[0130]在另一個實施方式中，本發(fā)明的藥物制劑以濃縮制劑制備，如此，藥物組合物的組
分調(diào)整至高于需要的給藥量并在給藥前適當(dāng)稀釋。
[0131]藥物組合物可作為唯一治療劑給藥或需要時與其他治療結(jié)合。因此，在一個實施方式中，所提供的治療和/或預(yù)防方法與給藥治療有效量的其他活性劑結(jié)合使用。其他活性劑可在給藥本發(fā)明的藥物組合物之前、期間或之后給藥。可給藥的另一種活性劑既可作為所提供的組合物的一 部分，也可作為單獨制劑給藥。
[0132]所提供的藥物組合物的給藥可通過各種方式完成，包括腸胃外、口服、口腔、舌下、鼻、直腸、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、心臟內(nèi)、心室內(nèi)、顱內(nèi)、氣管內(nèi)、鞘內(nèi)給藥、肌內(nèi)注射、玻璃體內(nèi)注射和局部施用。
[0133]本發(fā)明的藥物組合物特別有益于腸胃外給藥，也即，皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、玻璃體內(nèi)、和/或鞘內(nèi)。腸胃外給藥可通過大劑量注射或連續(xù)輸注。注射用藥物組合物可以單位劑型出現(xiàn)，例如在安瓿中或在多劑量容器中，并加入防腐劑。此外，最近的一些藥物遞送方法已被開發(fā)，并且本發(fā)明的藥物組合物適用于這些新的方
法，例如注入，Inject-ease⑩，Genjeet?,注射筆如GenPen?和針裝置如MedOectoi^
和BioJectorK給藥。本發(fā)明的藥物組合物也可以適合于尚未被發(fā)現(xiàn)的給藥方法。另見Langer, 1990，Science, 249:1527-1533。
[0134]所提供的藥物組合物還可配制成長效制劑。這種長效制劑可通過植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過肌內(nèi)注射給藥。因此，例如，所述制劑可以用合適的聚合或疏水材料(例如作為在可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂，或作為微溶性衍生物，例如，作為微溶鹽修飾。
[0135]所述的藥物組合物可以，如果需要的話，出現(xiàn)在可包含含有活性成分的一個或多個單位劑型的小瓶，包裝或分配裝置中。在一個實施例中的分配裝置可包含具有用于注射的單劑量液體制劑的注射器。注射器可附有給藥說明書。
[0136]在另一個實施例中，本發(fā)明指向含有本發(fā)明的水性藥物組合物的試劑盒或容器。水性藥物組合物中多肽的濃度可在寬范圍內(nèi)變化，但是通常在大約0.05至大約20，000微克每毫升(μg/ml)水性制劑的范圍內(nèi)。試劑盒也可附有使用說明書。
[0137]本發(fā)明在下面實施例中進行更具體地描述，其僅用于說明，因為其中的許多變型和改變對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。
[0138]實施例1
[0139]用氯化鈣穩(wěn)定的依那西普
[0140]依那西普制劑可使用下面步驟制備:
[0141]以給定體積的制劑緩沖劑所需的量稱重各固體制劑組分。這些組分結(jié)合放到燒杯或能夠承載和測量給定體積的制劑緩沖劑的容器中。等于目的給定制劑緩沖劑的近似3/4體積的去離子水加入到燒杯中，然后溶解組分。緩沖液的pH使用IM的氫氧化鈉和/或IM的氯化氫的調(diào)節(jié)到目標(biāo)制劑的pH。然后通過加入去離子水使最終制劑緩沖劑體積提高到目的體積。依那西普蛋白溶液置于透析材料袋內(nèi)(例如Thermo Scientific Slide-A-LyzerMINI Dialysis UnitlO, OOOMWCO)，然后4°C下，將其與期望的制劑緩沖劑接觸下放置12小時。制劑緩沖劑的體積與蛋白質(zhì)溶液的體積比應(yīng)不小于1000:1。在4°C下透析袋和其包含的蛋白質(zhì)溶液然后被放置于第二個，等體積的制劑緩沖劑中持續(xù)另外的12小時。所得的蛋白質(zhì)溶液從透析材料袋去除，并用紫外光譜法測定蛋白質(zhì)濃度。使用離心(如Amicon超10，OOOMWCO離心式濃縮器)和/或使用制劑緩沖劑稀釋，將蛋白質(zhì)濃度調(diào)節(jié)到所期望的水平。
[0142]組合物可通過體積排阻色譜法(SEC)、變性SEC(DSEC)、疏水作用色譜法(HIC)、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)測試長期穩(wěn)定，和各時間點下的結(jié)合和生物活性。生物活性可以通過許多已知實驗進行測量。
[0143]例如，在Hawe 等人，Pharm.Res.2011, 28:2302 和 / 或 van Marrschalkerweerd 等人，Eur.J.Pharm.Biopharm.2011, 78:213中描述了體積排阻色譜法的技術(shù)。同樣地，變性體積排阻色譜法、疏水作用色譜法，和十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員也是熟知的。
[0144]我們認為所述組合物經(jīng)過兩年或更長的時間是穩(wěn)定的。
[0145](制劑Pl:1)
[0146]
【權(quán)利要求】
1.一種水性藥物組合物，其包含依那西普和用以抑制依那西普不穩(wěn)定性、聚集、錯折疊和/或碎裂的穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑包含穩(wěn)定金屬離子。
2.權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述穩(wěn)定金屬離子的來源選自由鈣、鎂和鋅組成的組。
3.權(quán)利要求2所述的組合物，還包含選自:緩沖劑、張度改性劑、和賦形劑的一種或多種其他組分。
4.權(quán)利要求3所述的金屬離子穩(wěn)定的依那西普組合物，其中所述穩(wěn)定劑為氯化鈣，所述制劑無或基本上無精氨酸，并且所述制劑帶來的長期儲存穩(wěn)定性特征為以下至少之一: (1)在M3或T2或T4的SEC分析:單體含量大于大約90%;聚集體含量小于大約3wt%;及碎片3的量小于大約5wt% ;和 (2)在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3wt% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt%。
5.權(quán)利要求3所述的金屬離子穩(wěn)定的依那西普組合物，其中所述穩(wěn)定劑為氯化鈣，其量為不超過5mM氯化鈣，可 選地大約0.5至6wt.%蔗糖或海藻糖；可選地大約O至IOOmMNaCl ;可選地多至大約IOmM木糖醇；大約I至大約30mM磷酸鈉；其中組合物具有大約6.0至6.6的pH ;并且其中，可選地，組合物不包括精氨酸或基本上無精氨酸。
6.權(quán)利要求5所述的氯化鈣穩(wěn)定的組合物，其帶來的長期儲存穩(wěn)定性的特征為: 在M3或T2或T4的SEC分析單體含量大于大約90wt% ;聚集體含量小于大約3wt% ;及碎片3的量小于大約5wt% ;和 在‘或^或！^的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組合物的量小于大約3wt% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組合物的量大于80wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組合物的量小于大約20wt%。
7.權(quán)利要求6所述的氯化鈣穩(wěn)定的組合物，其帶來的長期儲存穩(wěn)定性的特征為:在％的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰2代表的組合物的量大于或等于大約95wt% ;且其中，如果峰3出現(xiàn)在HIC色譜圖上，則由峰3代表的組合物的量小于或等于大約3wt%。
8.權(quán)利要求6所述的氯化鈣穩(wěn)定的組合物，其在M3或T2或T4每mL平均具有不超過大約10，000個尺寸大于5 μ m的顯微鏡下可見到的顆粒。
9.權(quán)利要求6所述的氯化?丐穩(wěn)定的組合物,其包含大約50mg/ml的依那西普；大約2mM氯化鈣；小于大約30mM磷酸鈉；小于大約150mM氯化鈉；和小于大約4wt.%蔗糖；其中所述制劑具有大約6.3至6.5的pH。
10.權(quán)利要求6所述的氯化鈣穩(wěn)定的組合物，其包含大約50mg/ml的依那西普；大約2mM氯化鈣；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約IOwt.%鹿糖；其中所述制劑具有大約6.3至6.5 的 pH ο
11.權(quán)利要求6所述的氯化鈣穩(wěn)定的組合物，其包含大約50mg/ml的依那西普；大約2mM氯化|丐；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約IOOmM氯化鈉；小于大約5wt.%鹿糖；其中所述制劑具有大約6.3至6.5的pH。
12.權(quán)利要求6所述的氯化鈣穩(wěn)定的組合物，其包含大約50mg/ml的依那西普；大約ImM氯化；大約10-30mM磷酸鈉；大約25mM至大約75mM氯化鈉；和小于大約8wt.%海藻糖；其中所述制劑具有大約6.3至6.5的pH。
13.權(quán)利要求3所述的穩(wěn)定的依那西普組合物，其中所述穩(wěn)定劑為氯化鎂，制劑無或基本上無精氨酸，并且制劑帶來的長期儲存穩(wěn)定性的特征為以下至少之一: 在M3或T2或T4的SEC分析:單體含量大于大約90wt%;聚集體含量小于大約3wt%&碎片3的量小于大約5wt% ;和 在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3wt%;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt%。
14.權(quán)利要求3所述的穩(wěn)定的依那西普組合物，其中所述穩(wěn)定劑為氯化鎂，并且所述制劑包含大約ImM至大約20mM氯化鎂；可選地多至大約6wt.%鹿糖；大約25至150mMNaCl ；大約I至大約30mM磷酸鈉；其中所述組合物具有大約6.0至6.6的pH ;并且其中，可選地，所述組合物不包括精氨酸或基本上無精氨酸。
15.權(quán)利要求14所述的氯化鎂穩(wěn)定的組合物，其帶來的長期儲存穩(wěn)定性特征為: 在M3或T2或T4的SEC分析單體含量大于大約90wt% ;聚集體含量小于大約3wt% ;及碎片3的量小于大約5wt% ;和 (b)在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰I代表的組分的量小于大約3wt% ;由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于80wt% ;及由HIC色譜圖中峰3代表的組分的量小于大約20wt%。
16.權(quán)利要求15所述的氯化鎂穩(wěn)定的組合物，其帶來的長期儲存穩(wěn)定性特征為:在^或!^或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖中峰2代表的組分的量大于或等于大約95wt% ；且其中，如果峰3出現(xiàn)在HIC色譜圖上，則由峰3代表的組分的量小于或等于大約3wt%。
17.權(quán)利要求15所述的氯化鎂穩(wěn)定的組合物，其每mL平均具有不超過大約10，000個尺寸大于5 μ m的顯微鏡下可見的顆粒。
18.權(quán)利要求15所述的氯化鎂穩(wěn)定的組合物，其包含大約50mg/ml的依那西普；大約IOmM氯化鎂；大約10-30mM磷酸鈉；小于大約150mM氯化鈉；和小于大約3wt.%鹿糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
19.權(quán)利要求15所述的氯化鎂穩(wěn)定的組合物，其包含大約50mg/ml的依那西普；大約5mM氯化鎂；小于大約30mM磷酸鈉；小于大約100mM氯化鈉；和小于大約4wt.%鹿糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
20.權(quán)利要求15所述的氯化鎂穩(wěn)定的組合物，其包含大約50mg/ml的依那西普；大約4mM氯化鎂；小于大約30mM磷酸鈉；大約100mM氯化鈉；和大約2.5wt.%蔗糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
21.權(quán)利要求15所述的氯化鎂穩(wěn)定的組合物，其包含大約50mg/ml的依那西普；大約10mM氯化鎂；小于大約30mM磷酸鈉；小于大約100mM氯化鈉；和小于大約5wt.%鹿糖；并且具有大約6.3至6.5的pH。
22.權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的依那西普組合物，其不含精氨酸，或基本上無精氨酸，其中組合物在M3或T2或T4帶來滿足下面的一個或兩個標(biāo)準(zhǔn)的長期儲存穩(wěn)定性: (A)與市售的商標(biāo)為Enbrel?的依那西普穩(wěn)定性相當(dāng)或更好，其通過以下測量:(i)組合物中的聚集體、單體和碎片3的量的SEC分析(如說明書中規(guī)定)和(ii)HIC色譜圖中相應(yīng)于峰1、2和3的組合物中材料的量的HIC分析(如說明書中規(guī)定)；和 (B)HIC色譜圖，其中⑴峰3沒有，或基本上沒有且(ii)峰2代表大于大約95被％的組合物；SEC色譜圖基本上不含有相應(yīng)于聚集體的峰；且SEC色譜圖其中單體含量代表至少大約95wt %的組合 物。
【文檔編號】A61K39/00GK104010654SQ201280062747
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2012年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月18日
【發(fā)明者】馬克·曼寧, 布萊恩·墨菲 申請人:科榮生生物科學(xué)公司