富蕓香苷提取物及制造它的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從植物獲得富蕓香苷提取物的方法和由這樣獲得的Uncaria elliptica的富蕓香苷提取物。
【專利說明】富蕓香苷提取物及制造它的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及富蕓香苷提取物和制造富蕓香苷提取物的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蕓香苷（rutin)是用作輕乙蘆?。═roxerutin)的原材料的天然類黃酮，其增 加毛細(xì)管的耐力并降低靜脈血管壁的滲透性。臨床研究顯示，用蕓香苷衍生物羥乙蘆丁 (Venoruton)治療患者導(dǎo)致血栓形成后綜合征（post thrombotic syndrome)的改善。參見 Panminerva Medicine, 53,第13頁，2011。另一個(gè)研究發(fā)現(xiàn)，蕓香苷是最有效的抗血栓形成 劑之一。參見 The Journal of Clinical Investigation(臨床研究期刊），122,第 6 號(hào)， 2012。蕓香苷作為用于藥劑的原材料正在變得更加重要。
[0003] 為了從多種植物源,例如槐樹（Sophora Japonica)(亞洲）、Fava d' anta(巴西） 和Uncaria elliptica(巴西）中提取和純化蕓香苷,典型地使用水和甲醇溶劑。然而,在 實(shí)踐中，得自這樣的植物源的富蕓香苷提取物具有很多缺點(diǎn)，比如是濃棕色的，且與來自其 他源的富蕓香苷提取物相比含有更高的鐵含量。該棕色歸因于在植物中的色素。
[0004] 發(fā)明概述
[0005] 通過常規(guī)的提取和/或純化方法非常難以消除該棕色和降低鐵含量，因?yàn)殍F似乎 緊密地結(jié)合至色素中。已經(jīng)進(jìn)行了克服這些缺點(diǎn)的嘗試。然而，這些嘗試未能在保持良好 的蕓香苷收率的同時(shí)減少結(jié)合在色素中的鐵。
[0006] 對(duì)于適合于大規(guī)模的能夠制備具有高的蕓香苷含量、低的鐵含量和減少的著色的 富蕓香苷提取物的應(yīng)用的經(jīng)濟(jì)方法，存在著需要。
[0007] 本發(fā)明基于以下出人意料的發(fā)現(xiàn)：醇和酸的特別的組合，其能夠用于從植物獲得 鐵含量和著色低的富蕓香苷提取物。
[0008] 因此，本文描述的是從植物獲得富蕓香苷提取物的方法。該方法包括：將含有蕓香 苷的植物提取物溶解在甲醇或乙醇中，以獲得粗制蕓香苷提取物溶液，所述固態(tài)的含有蕓 香苷的植物提取物含有90重量％至95重量％蕓香苷和100至300ppm鐵；減少所述粗制蕓 香苷提取物溶液的體積，以獲得濃縮物；通過向所述濃縮物加入所述含有蕓香苷的植物提 取物的1-15重量％的酸、和任選地加入C1-C4醇、水、或者C1-C4醇和水，從而獲得混合物， 其中，所述含有蕓香苷的植物提取物構(gòu)成所述混合物的8 %至30 % (w/v)，并且所述酸選自 由以下各項(xiàng)組成的組：抗壞血酸、檸檬酸、酒石酸、沒食子酸和蘋果酸；允許所述混合物靜 置，以形成沉淀物；和將所述沉淀物分離，從而獲得含有少于20ppm鐵的富蕓香苷提取物。 [0009] 所述含有蕓香苷的植物提取物可以是由用水、醇或醇的水溶液提取Uncaria elliptica、槐樹或Fava (Γ anta產(chǎn)生的粗制沉淀物形式獲得的。
[0010] 在一些實(shí)施方案中，以含有蕓香苷的植物提取物的1-10重量％，例如，1-5重量％ 或2-4重量％，加入酸。在加入水和C1-C4醇的情況下，水與C1-C4醇的比率可以是I : 1 至5 : 1，例如，I : 1至3 : 1?？梢苑謩e地、同時(shí)地、或者以C1-C4醇水溶液的形式，加入 水和C1-C4醇。
[0011] 本文的特征還在于Uncaria elliptica的富蕓香苷提取物，該提取物含有通過 HPLC測(cè)量得出的97%至99%的蕓香苷，和少于20ppm的鐵，該提取物在550nm的吸收低于 0.2。該提取物還可以含有5重量％至10重量％水。它可以通過上述方法制備。
[0012] 實(shí)施方案描述
[0013] 在以下說明書中，描述本發(fā)明的一個(gè)以上實(shí)施方案的細(xì)節(jié)。通過說明書和通過權(quán) 利要求，本發(fā)明的其他特征，目的和優(yōu)點(diǎn)將是明顯的。
[0014] 本文描述的是一種使用醇和酸的新組合從植物源獲得富蕓香苷提取物的方法。通 過本方法獲得的富蕓香苷提取物與通過常規(guī)方法制備的提取物相比具有明顯降低的著色 和鐵含量。
[0015] 使用本領(lǐng)域中已知的常規(guī)方法，可以由不同植物源，例如槐樹（Sophora Japonica)(亞洲）、Fava d' anta (巴西）和Uncaria elIiptica (巴西）制備含有蕓香苷 的固態(tài)提取物。這樣的方法包括但不限于：在不同溶劑中浸漬、加熱、搖動(dòng)、攪拌或泡制植物 材料，例如莖和葉。所用的植物材料可以為整體干燥的植物、粉碎的植物、或者粉末的形式。 溶劑包括水、醇（例如甲醇）或醇的水溶液。在提取之后，可以通過過篩、過濾、加壓或其 他合適的技術(shù)，將提取物溶液從固體分離?？梢詫V液濃縮并冷卻，以允許沉淀物形成，從 而獲得含有蕓香苷的固態(tài)提取物。對(duì)于各種提取方法的描述，參見例如中國(guó)專利1013579; US2006/0099690;和 Dighe 等，International Journal of Pharma and Bio Sciences (制 藥和生物科學(xué)國(guó)際期刊），2(1) :750-757(2011)。
[0016] 典型地，通過這些方法制得的含有蕓香苷的固態(tài)提取物具有高的鐵含量，例如， 100-300ppm，和嚴(yán)重的著色，例如，黃色或棕色，特別是在源自Uncaria elliptica.的提取 物中。蕓香苷可以構(gòu)成這些含有蕓香苷的固態(tài)提取物的85重量％至90重量％。
[0017] 可以將這樣制得的含有蕓香苷的固態(tài)提取物溶解在醇溶劑，優(yōu)選甲醇或乙醇中， 以獲得粗制蕓香苷提取物溶液。例如每Iml的溶劑可以溶解0. 05-0. 13g的固態(tài)提取物?？?以將粗制提取物溶液進(jìn)一步濃縮，例如，在大氣壓下，以減少它的體積，例如，減少到四分之 一至十分之一。可以基于想要的下述混合物的體積和含量，預(yù)定粗制提取物溶液的最終體 積。
[0018] 向上述粗制蕓香苷提取物溶液中，加入酸和任選地C1-C4醇，例如，甲醇、乙醇、丙 醇或正丁醇，以獲得混合物。在混合物中也可以包含水。
[0019] 所用的酸選自抗壞血酸、檸檬酸、酒石酸、沒食子酸和蘋果酸。以上述用于制備粗 制蕓香苷提取物溶液的含有蕓香苷的固態(tài)提取物的約1-15重量％，例如，1-10重量％或 1-5重量％，向粗制蕓香苷提取物溶液中加入酸。
[0020] 混合物必須含有至少一種C1-C4醇。例如，如上所述，可以使用甲醇或乙醇（即， C1-C4醇）并由含有蕓香苷的固態(tài)提取物制造粗制蕓香苷提取物溶液?？梢詿o需向粗制蕓 香苷提取物溶液中加入附加的C1-C4醇。在一些情況下，為了獲得含有8%至30% (w/v) 含有蕓香苷的固態(tài)提取物的混合物，可以例如以含有蕓香苷的固態(tài)提取物的2-12倍（v/w) 添加 C1-C4醇、C1-C4醇水溶液，或C1-C4醇和水。添加的附加的C1-C4醇可以與用于制造 粗制蕓香苷提取物溶液的醇相同或不同。
[0021] 蕓香苷以各種水合物如一水合物、二水合物和三水合物的形式存在。已知的是，無 水合物（anhydrate)和一水合物是不穩(wěn)定的。因此，優(yōu)選的是在純化過程中通過與水水合 而制備出相對(duì)穩(wěn)定的二水合物或三水合物。因此，可以向粗制蕓香苷提取物溶液中加入水。 可以獨(dú)立地加入水。也可以以C1-4醇的水溶液的形式加入水。水與C1-C4醇的比率可以 是I : 1至5 : 1，例如，I : 1至3 : 1。如上所述，最終混合物優(yōu)選含有8%至30% (w/ v)含有蕓香苷的固態(tài)提取物。
[0022] 隨后，使含有粗制蕓香苷提取物溶液、C1-C4醇、酸和任選的水的混合物靜置，用于 形成沉淀物例如晶體。例如，可以進(jìn)一步將混合物濃縮，并且將濃縮的混合物攪拌并使其冷 卻，以形成沉淀物。可以通過任何合適的技術(shù)，例如過濾收集沉淀物、用醇和/或水清洗、并 干燥。
[0023] 沉淀物，即富蕓香苷提取物，可以含有當(dāng)通過HPLC測(cè)量時(shí)97%至99%蕓香苷，和 少于20ppm的鐵，也是，少于lOppm。它還具有低的著色，例如，提取物在550nm的吸收低于 0.2。它還可以含有5重量％至10重量％水。富蕓香苷提取物可以具有任何粒度，例如， 5 μ m(微米）以下。例如，它可以具有納米大小的粒子。
[0024] 通過上述方法制備的富蕓香苷提取物可用于多種應(yīng)用。它可以是作為藥物組合物 例如藥品的制劑。它也可以用作營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑或食品添加劑。 實(shí)施例
[0025] 以下的具體實(shí)例被解釋為僅僅是說明性的，并且無論如何不以任何形式限制公開 的其余部分。在沒有進(jìn)一步詳細(xì)細(xì)節(jié)的情況下，據(jù)信本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠基于本文的描述 以本發(fā)明的最完整的范圍利用本發(fā)明。本文引述的全部公開物通過引用將它們的全部結(jié)合 在此。
[0026] 通過以下過程，獲得在以下實(shí)施例1-4中所述的鐵含量、純度和吸光度的值：
[0027] (1)鐵含量
[0028] 精確獲得I. Og的樣品，并硫酸化。向殘余物中加入2ml的鹽酸。隨后將樣品干燥， 并在加入IOml水和一滴鹽酸之后，在沸水中加熱。在冷卻之后，將體積精確調(diào)整至10. 0ml， 并隨后通過0. 45微米過濾器過濾。通過ICP分析，測(cè)定樣品溶液中鐵的濃度。
[0029] (2)可見光吸收
[0030] 將I. Og的樣品溶解在15ml的二甲基甲酰胺（DMF)中。在用DMF將體積調(diào)節(jié)至 20. Oml之后，將溶液過濾通過0. 45微米過濾器。在550nm，在I. Ocm的路徑長(zhǎng)度，測(cè)量過濾 后的樣品的吸收。
[0031] ⑶ HPLC 分析
[0032] 按照歐洲藥典專論三水合蘆丁，相關(guān)物質(zhì)（EP monograph Rutoside trihydrate， related substances),通過液相色譜進(jìn)行HPLC分析。所用的試劑和條件簡(jiǎn)單陳述如下：
[0033] [化學(xué) 1]
[0034] 試驗(yàn)溶液：將0. IOg的待檢測(cè)物質(zhì)溶解在20ml的甲醇中，并用流動(dòng)相B稀釋至 100.Omlo
[0035] 參比溶液（a):將10. Omg的三水合蘆丁 CRS溶解在10. Oml的甲醇中。
[0036] 參比溶液（b):用流動(dòng)相B將I. Oml的參比溶液（a)稀釋至50. 0ml。
[0037] 柱子（LiChrospher 100RP-8, C8,4. Ox 250mm，Agilent):
[0038] -尺寸：1 = 0· 25m，i. d. = 4. 0mm，
[0039] -固定相：用于色譜的辛基甲硅烷基硅膠（5 μ m)
[0040] -溫度：30°C
[0041] 流動(dòng)相：
[0042] -流動(dòng)相A :將5體積的四氫呋喃與95體積的15. 6g/l磷酸二氫鈉的溶液混合，該 磷酸二氫鈉的溶液用磷酸調(diào)節(jié)至pH 3. 0。
[0043] -流動(dòng)相B :將40體積的四氫呋喃與60體積的15. 6g/l磷酸二氫鈉的溶液混合， 該磷酸二氫鈉的溶液被用磷酸調(diào)節(jié)至PH 3.0。
[0044] [化學(xué) 2]
[0045] 梯度時(shí)間表
[0046]

【權(quán)利要求】
1. 一種從植物獲得富蕓香苷提取物的方法，所述方法包括： 將含有蕓香苷的植物提取物溶解在甲醇或乙醇中，以獲得粗制蕓香苷提取物溶液，所 述含有蕓香苷的植物提取物含有90重量％至95重量％蕓香苷和100至300ppm鐵； 減少所述粗制蕓香苷提取物溶液的體積，以獲得濃縮物； 通過向所述濃縮物加入所述含有蕓香苷的植物提取物的1-15重量％的酸、以及任選 地加入C1-C4醇、水、或者C1-C4醇和水，從而獲得混合物，其中，所述含有蕓香苷的植物提 取物占所述混合物的8%至30% (w/v)，并且所述酸選自由以下各項(xiàng)組成的組：抗壞血酸、 檸檬酸、酒石酸、沒食子酸和蘋果酸； 使所述混合物靜置，以形成沉淀物；以及 將所述沉淀物分離，從而獲得含有少于20ppm鐵的富蕓香苷提取物。
2. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述含有蕓香苷的植物提取物是以用水、醇或醇的水 溶液提取Uncaria elliptica、槐樹或Fava (T anta產(chǎn)生的粗制沉淀物形式獲得的。
3. 權(quán)利要求1所述的方法，其中加入所述C1-C4醇和水。
4. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述酸以所述含有蕓香苷的植物提取物的1-10重量％ 加入。
5. 權(quán)利要求4所述的方法，其中所述酸以所述含有蕓香苷的植物提取物的1-5重量％ 加入。
6. 權(quán)利要求5所述的方法，其中所述酸以所述含有蕓香苷的植物提取物的2-4%加入。
7. 權(quán)利要求3所述的方法，其中所述C1-C4醇和水以含有5-80體積％水的C1-C4醇水 溶液的形式加入。
8. 權(quán)利要求3所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計(jì)的1 : 1至5 : 1。
9. 權(quán)利要求8所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計(jì)的1 : 1至3 : 1。
10. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述C1-C4醇是甲醇且所述酸是抗壞血酸。
11. 權(quán)利要求1所述的方法，其中所述C1-C4醇是正丁醇或丙醇。
12. 權(quán)利要求11所述的方法，其中所述酸是抗壞血酸。
13. 權(quán)利要求12所述的方法，其中所述C1-C4醇是正丁醇。
14. 權(quán)利要求13所述的方法，其中所述酸以所述含有蕓香苷的植物提取物的1-10重 量％加入。
15. 權(quán)利要求14所述的方法，其中所述酸以所述含有蕓香苷的植物提取物的1-5重 量％加入。
16. 權(quán)利要求15所述的方法，其中所述酸以所述含有蕓香苷的植物提取物的2-4重 量％加入。
17. 權(quán)利要求13所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計(jì)的1 : 1至 5 : 1〇
18. 權(quán)利要求13所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計(jì)的1 : 1至 3 : 1〇
19. 一種Uncaria elliptica的富蕓香苷提取物，所述提取物包含通過HPLC測(cè)量得出 的97%至99%的蕓香苷，和少于20ppm的鐵，所述提取物在550nm的吸收小于0. 2。
20. 權(quán)利要求19所述的富蕓香苷提取物，其中所述提取物含有通過HPLC測(cè)量得出的至 少98%的蕓香苷，和少于lOppm的鐵，所述在550nm的吸收小于0? 1。
21.權(quán)利要求19所述的富蕓香苷提取物，其中所述提取物含有5重量％至10重量％的 水。
【文檔編號(hào)】A61K36/18GK104334569SQ201280073518
【公開日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2012年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月22日
【發(fā)明者】南和伸, 谷脅慎治, 勝又亞希子 申請(qǐng)人:阿爾卑斯藥品實(shí)業(yè)株式會(huì)社