專利名稱：一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脂質(zhì)體，特指一種以乙醇注入法結(jié)合硫酸銨梯度法制備mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的方法，尤其是一種制備工藝簡單，成本低廉，產(chǎn)品具有良好包封率和穩(wěn)定性的納米磁性阿霉素脂質(zhì)體的制備方法。技術(shù)背景
脂質(zhì)體是指采用類脂質(zhì)雙分子層將藥物包封于內(nèi)而形成的類似微型膠囊的超微型球狀制劑，自從上世紀(jì)60年代，有人首先將脂質(zhì)體作為藥物載體以來，脂質(zhì)體由于其具有高度的靶向性、能有效保護(hù)被包裹藥物并可控釋、緩釋藥物等特殊優(yōu)勢(shì)，已成為國際醫(yī)藥界研究的熱點(diǎn)；四氧化三鐵納米微粒是一種具有反尖晶石結(jié)構(gòu)的磁性材料，因其獨(dú)特的磁性可調(diào)性能被人們廣泛研究和應(yīng)用，近年來，四氧化三鐵被廣泛應(yīng)用于磁共振成像、給藥系統(tǒng)、生物醫(yī)藥、生物傳感器等系統(tǒng)中；但是，由于單獨(dú)的磁性粒子生物相容性差，易團(tuán)聚等原因，副作用小的物質(zhì)包覆的磁性粒子正逐漸取代單獨(dú)的磁性粒子應(yīng)用于生物體內(nèi)，因此將四氧化三鐵納米微粒包埋于生物相容性良好的脂質(zhì)體內(nèi)，作為磁靶向給藥系統(tǒng)的磁性材料，具有很好的應(yīng)用前景。
鹽酸表阿霉素(Doc)是一種廣譜的蒽環(huán)類化療藥物，抗癌譜廣，療效顯著，可治療多種腫瘤，但該藥嚴(yán)重的毒副作用，尤其是嚴(yán)重的心臟損害、骨髓抑制等副反應(yīng)限制了它在臨床上的應(yīng)用；將藥物包封于脂質(zhì)體內(nèi)，可以有效保護(hù)被包裹藥物、提高藥物的治療指數(shù)、 減少藥物的治療劑量、降低藥物的毒副作用、減輕變態(tài)反應(yīng)及免疫反應(yīng)并延緩藥物釋放；研究結(jié)果表明，脂質(zhì)體包裹阿霉素的毒性比游離藥物的毒性降低50% 70%，為避免脂質(zhì)體易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別而被吞噬，延長阿霉素脂質(zhì)體的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，可采用親水性高分子鏈對(duì)脂質(zhì)體表面進(jìn)行修飾，磁性脂質(zhì)體是近年來國內(nèi)外大力研究的一種新型靶向制劑，這種制劑可使藥物同時(shí)具有生物功能、主動(dòng)磁靶向功能和治療功能，因此具有更大的應(yīng)用前景；但是目前的磁性脂質(zhì)體大都存在著許多不可避免的缺點(diǎn)，例如體內(nèi)循環(huán)時(shí)間短，物理和化學(xué)穩(wěn)定性不足，囊泡表面缺少靶向位點(diǎn)及磁性脂質(zhì)體水溶液中分散性不好等，因此， 開發(fā)一種具有優(yōu)良性能的鹽酸表阿霉素磁性長循環(huán)磁性脂質(zhì)體勢(shì)在必行。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種以乙醇注入法結(jié)合硫酸銨梯度法制備mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的方法。
本發(fā)明通過以下步驟實(shí)現(xiàn) (I)納米四氧化三鐵的制備在攪拌條件下，將氯化高鐵和氯化亞鐵加入除氧的蒸餾水中得到混合溶液1，其中氯化高鐵與氯化亞鐵的質(zhì)量比為2. 90-2. 95 :1，逐滴滴入氨水直至待混合溶液I變?yōu)楹谏螅捎脷溲趸{溶液調(diào)節(jié)混合溶液I的PH為10，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下80 °C回流2 h，反應(yīng)結(jié)束后，過濾后用蒸餾水洗滌2-3次，得到納米四氧化三鐵。
所述混合溶液I中氯化高鐵濃度為O. 01-0. 02 mol/L。
所述氨水的濃度為2 mol/L。
所述蒸餾水采用加熱煮沸的方法除氧。
所述的納米四氧化三鐵的粒徑范圍為10-30 nm。
所述的氫氧化納溶液濃度為lmol/L。
(2) mPEG化鹽酸表阿霉素納米磁性脂質(zhì)體的制備稱取卵磷脂、膽固醇、mPEG和納米四氧化三鐵，超聲溶于無水乙醇中得到混合溶液2， 卵磷脂、膽固醇、mPEG與納米四氧化三鐵的質(zhì)量比分別為50:1,6. 25:1-12. 5:1,5:1-15:1 ； 將混合溶液2緩慢注入O.1 mol/L硫酸銨水溶液中得到混合溶液3，無水乙醇和硫酸銨溶液的體積比為3:5 ;將混合溶液3于30°C水浴超聲30 min，60 °C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至不能聞到乙醇味，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體裝入透析袋中，用PBS溶液透析24 h，透析后的空白脂質(zhì)體中加入鹽酸表阿霉素，鹽酸表阿霉素與卵磷脂質(zhì)量比為1:165-1:200，置于55 V 水浴孵化30 min，使用兩層O. 2 μ m微孔濾膜過濾脂質(zhì)體，控制脂質(zhì)體大小，并濾去未包封住的顆粒，即得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體，4°C冷藏保存。
所述的微孔濾膜的孔徑為O. 2 μ m。
所述混合溶液2中納米四氧化三鐵濃度控制在O. 0005-0. 001 mol/L。
采用透射電鏡觀察所制得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體的形貌和粒徑；通過外加磁場的作用，考察所制得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體的體外磁響應(yīng)性。


圖1按照實(shí)施例1制備的納米四氧化三鐵的TEM照片，所制備的納米四氧化三鐵粒徑范圍為10-30 nm，分散性較好； 圖2按照實(shí)施例1制備的納米磁性阿霉素脂質(zhì)體的透射電鏡照片，鹽酸表阿霉素長循環(huán)磁性脂質(zhì)體顆粒圓整、平均粒徑約為50 nm ；圖3按照實(shí)施例1制備的mPEG化鹽酸表阿霉素納米磁性脂質(zhì)體被外磁場吸引照片； 磁性脂質(zhì)體(a)在3min內(nèi)迅速聚集在磁鐵一側(cè)(b),表明所制備的mPEG化鹽酸表阿霉素納米磁性脂質(zhì)體具有良好的磁響應(yīng)性。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1在攪拌條件下，在攪拌條件下，將0.5 g氯化高鐵和0.17 g氯化亞鐵加入150 mL除氧的蒸餾水中，緩慢滴入2 mol/L的氨水，待反應(yīng)物變?yōu)楹谏?，利用Imol/LNaOH溶液調(diào)節(jié) PH為10，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下80 V回流2 h，反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾水洗滌2-3次，過濾后用蒸餾水洗滌2-3次，得到納米四氧化三鐵。
稱取O.1 g卵磷脂，0.025 g膽固醇，0.02 g mPEG、2mg Fe3O4納米顆粒，超聲溶于15mL無水乙醇得到混合溶液2，將混合溶液2緩慢注入25mL 0.1 mol/L硫酸銨水溶液中得到混合溶液3，將混合溶液3于30°C水浴超聲30 min, 60 °C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至不能聞到乙醇味，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體裝入透析袋中，用PBS溶液透析24 h，透析后的空白脂質(zhì)體中加入0.55 mg鹽酸表阿霉素，置于55 1水浴孵化30 min，使用兩層0. 2 μ m微孔濾膜過濾脂質(zhì)體，控制脂質(zhì)體大小，并濾去未包封住的顆粒，即得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體，4°C冷藏保存。
采用透射電鏡觀察所制得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體的形貌和粒徑；通過外加磁場的作用，考察所制得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體的體外磁響應(yīng)性。
實(shí)施例2在攪拌條件下，在攪拌條件下，將1. 08g氯化高鐵和O. 37 g氯化亞鐵加入200 mL除氧的蒸餾水中，緩慢滴入2 mol/L的氨水，待反應(yīng)物變?yōu)楹谏?，利用Imol/LNaOH溶液調(diào)節(jié) PH為10，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下80 V回流2 h，反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾水洗滌2-3次，過濾后用蒸餾水洗滌2-3次，得到納米四氧化三鐵。
稱取O.1 g卵磷脂，O. 0125 g膽固醇，O. 01 g mPEG、2mg Fe3O4納米顆粒，超聲溶于15mL無水乙醇得到混合溶液2，將混合溶液2緩慢注入25mL O.1 mol/L硫酸銨水溶液中得到混合溶液3，將混合溶液3于30°C水浴超聲30 min, 60 °C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至不能聞到乙醇味，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體裝入透析袋中，用PBS溶液透析24 h，透析后的空白脂質(zhì)體中加入O. 60 mg鹽酸表阿霉素，置于55 1水浴孵化30 min，使用兩層O. 2 μ m微孔濾膜過濾脂質(zhì)體，控制脂質(zhì)體大小，并濾去未包封住的顆粒，即得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體，4°C冷藏保存。
實(shí)施例3在攪拌條件下，在攪拌條件下，將O. 5 g氯化高鐵和O. 17 g氯化亞鐵加入150 mL除氧的蒸餾水中，緩慢滴入2 mol/L的氨水，待反應(yīng)物變?yōu)楹谏?，利用Imol/LNaOH溶液調(diào)節(jié) PH為10，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下80 V回流2 h，反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾水洗滌2-3次，過濾后用蒸餾水洗滌2-3次，得到納米四氧化三鐵。
稱取O. 15 g卵磷脂，0.03 g膽固醇，0.045 g mPEG、3 mg Fe3O4納米顆粒，超聲溶于15mL無水乙醇得到混合溶液2，將混合溶液2緩慢注入25mL 0.1 mol/L硫酸銨水溶液中得到混合溶液3，將混合溶液3于30°C水浴超聲30 min, 60 °C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至不能聞到乙醇味，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體裝入透析袋中，用PBS溶液透析24 h，透析后的空白脂質(zhì)體中加入0.75 mg鹽酸表阿霉素，置于55 1水浴孵化30 min，使用兩層0. 2 μ m微孔濾膜過濾脂質(zhì)體，控制脂質(zhì)體大小，并濾去未包封`住的顆粒，即得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體，4°C冷藏保存。
權(quán)利要求
1.一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，以四氧化三鐵為磁性材料，鹽酸表阿霉素為內(nèi)包藥物，聚乙二醇單甲醚(mPEG)為修飾劑，脂質(zhì)體為載體，其特征在于包括如下步驟 (1)納米四氧化三鐵的制備； (2)mPEG化鹽酸表阿霉素納米磁性脂質(zhì)體的制備 稱取卵磷脂、膽固醇、mPEG和納米四氧化三鐵，超聲溶于無水乙醇中得到混合溶液2，卵磷脂、膽固醇、mPEG與納米四氧化三鐵的質(zhì)量比分別為50:1,6. 25:1-12. 5:1,5:1-15:1 ；將混合溶液2緩慢注入O.1 mol/L硫酸銨水溶液中得到混合溶液3，無水乙醇和硫酸銨溶液的體積比為3:5 ;將混合溶液3于30°C水浴超聲30 min,60 °C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至不能聞到乙醇味，制得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體裝入透析袋中，用PBS溶液透析24 h，透析后的空白脂質(zhì)體中加入鹽酸表阿霉素，鹽酸表阿霉素與卵磷脂質(zhì)量比為1:165-1:200，置于55 V水浴孵化30 min,使用兩層O. 2 μ m微孔濾膜過濾脂質(zhì)體，控制脂質(zhì)體大小，并濾去未包封住的顆粒，即得磁性鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體，4°C冷藏保存。
2.如權(quán)利要求1所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的微孔濾膜的孔徑為O. 2 μ m。
3.如權(quán)利要求1所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述混合溶液2中納米四氧化三鐵濃度控制在O. 0005-0. 001 mol/L。
4.如權(quán)利要求1所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述納米四氧化三鐵的制備方法為在攪拌條件下，將氯化高鐵和氯化亞鐵加入除氧的蒸餾水中得到混合溶液1，其中氯化高鐵與氯化亞鐵的質(zhì)量比為2. 90-2. 95 :1，逐滴滴入氨水直至待混合溶液I變?yōu)楹谏螅捎脷溲趸{溶液調(diào)節(jié)混合溶液I的PH為10，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下80 °C回流2 h，反應(yīng)結(jié)束后，過濾后用蒸餾水洗滌2-3次，得到納米四氧化三鐵。
5.如權(quán)利要求4所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述混合溶液I中氯化高鐵濃度為O. 01-0. 02 mol/L。
6.如權(quán)利要求4所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述氨水的濃度為2 mol/L。
7.如權(quán)利要求4所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述蒸餾水采用加熱煮沸的方法除氧。
8.如權(quán)利要求4所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的納米四氧化三鐵的粒徑范圍為10-30 nm。
9.如權(quán)利要求4所述的一種mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的氫氧化納溶液濃度為lmol/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及脂質(zhì)體，具體公開了一種制備mPEG化鹽酸表阿霉素磁性脂質(zhì)體的方法。通過簡單沉淀法制備納米四氧化三鐵，乙醇注入法制備空白mPEG化磁性脂質(zhì)體，硫酸銨梯度法包載鹽酸表阿霉素。通過透射電鏡表征，制備的mPEG化鹽酸表阿霉素納米磁性脂質(zhì)體體顆粒為近球形，平均粒徑約為50nm，所制備的脂質(zhì)體具有較好的包封率、體外穩(wěn)定性和緩釋效果。本發(fā)明制備工藝簡便，成本低廉，易于進(jìn)行規(guī)模制備。
文檔編號(hào)A61K47/02GK103040756SQ20131000393
公開日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2013年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月7日
發(fā)明者陳進(jìn), 陳敏, 姜德立, 聶麗云, 方瑜, 謝吉民 申請(qǐng)人:江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司