專利名稱：一種丹參酮ⅱa-聚乳酸/羥基乙酸微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種載藥微球及其制備方法，具體地，涉及一種丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球及其制備方法。
背景技術(shù)：
原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer, PLC)是我國常見惡性腫瘤之一，死亡率高。我國癌癥發(fā)病情況中，肝癌位居第二，占全球肝癌死亡率的53%，位居世界之首。肝癌是高侵襲轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤，早期癥狀隱匿，只有299Γ47.9%的肝癌患者能夠得到早期診斷，大多數(shù)病例確診時(shí)已屬晚期，或伴有嚴(yán)重的肝硬化，能夠接受根治性手術(shù)切除的病例只占109Γ30%。對于手術(shù)不能根治切除的肝癌患者，經(jīng)導(dǎo)管肝動脈介入治療是首選非手術(shù)治療方法。1950年Klopp首創(chuàng)肝動脈插管灌注化療(TAI)，開創(chuàng)了醫(yī)學(xué)史上經(jīng)肝血管介入治療肝癌的新紀(jì)元。1953年Seldinger發(fā)明了經(jīng)皮穿刺血管，用導(dǎo)絲引導(dǎo)導(dǎo)管入血管行血管造影術(shù)，這項(xiàng)以其名字命名的技術(shù)具有革命性、劃時(shí)代的意義，它使血管造影術(shù)操作簡化并迅速得以普及推廣。血管造影術(shù)的開展，使腫瘤血管的確認(rèn)、靶血管的定位更加精確，血管內(nèi)置管灌注治療方法得以普及。正常肝臟的血液供應(yīng)約80%來源于門靜脈，肝動脈只供應(yīng)少量血液(約20%)，肝癌的主要血液供應(yīng)來自肝動脈(909^100%)。故注入化療藥的同時(shí)，選擇性地阻斷肝動脈能使腫瘤組織缺血、壞死。1976年Goldstein報(bào)道在灌注化療的同時(shí)使用栓塞劑，能夠獲得與肝動脈結(jié)扎相似的效果。1979年日本學(xué)者Nakakuma報(bào)道使用含碘油的造影劑栓塞治療肝癌。此后，化療藥、碘油、吸收性明膠海綿三聯(lián)結(jié)合栓塞治療肝癌得到極大的普及，并成為肝癌介入治療的主要手段。Kato進(jìn)一步開展肝動脈栓塞化療(TACE)Jf肝癌的介入治療推上了一個(gè)新的階段。自1984年林貴等在國內(nèi)首次開展肝動脈化療栓塞術(shù)以來，其在短時(shí)間內(nèi)發(fā)展迅猛，臨床應(yīng)用極為廣泛，技術(shù)、方法的改進(jìn)十分活躍，且在TACE的基礎(chǔ)上，肝段、肝亞段化療栓塞術(shù)、肝動脈-門靜脈聯(lián)合化療栓塞術(shù)、經(jīng)皮動脈內(nèi)導(dǎo)管藥盒系統(tǒng)植入術(shù)灌注化療、暫時(shí)性阻斷肝靜脈后肝動脈化療栓塞術(shù)以及肝外供血動脈栓塞等方法先后出現(xiàn)并應(yīng)用于臨床，為提高療效、減`少并發(fā)癥、延長患者生存期和改善患者生存質(zhì)量做出了巨大貢獻(xiàn)。雖然TACE治療不可切除肝癌取得了一定的療效，但化療栓塞很難完全阻斷肝癌的血供，TACE術(shù)后仍有部分癌組織殘存，殘癌組織可通過腫瘤新生血管生成等因素重新形成豐富的血供，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。目前認(rèn)為腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移依賴于血管新生，血管新生受多種生化和基因機(jī)制的調(diào)節(jié)。促血管生成因子中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在血管新生中起主要作用，大多數(shù)腫瘤中均有大量表達(dá)及分泌。實(shí)體腫瘤由于低分化，惡性程度高，生長迅速，常引起血供不足，循環(huán)和淋巴系統(tǒng)紊亂，因此腫瘤細(xì)胞經(jīng)常處于缺血缺氧的環(huán)境中，尤其是移植瘤沒有自身的供血，更容易缺血壞死。缺氧狀態(tài)常進(jìn)一步促進(jìn)VEGF的表達(dá)，栓塞治療將減少肝癌的血供，使部分癌細(xì)胞處于乏氧狀態(tài)，可能是栓塞促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制。人低氧誘導(dǎo)因子la (HIF-1a )是目前發(fā)現(xiàn)唯一的一個(gè)特異性缺氧狀態(tài)下發(fā)揮活性的轉(zhuǎn)錄因子。研究發(fā)現(xiàn)HIF-1 a在人類多種惡性腫瘤如食管癌、腸癌中都呈高表達(dá)，其活性對于維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝、調(diào)節(jié)腫瘤血管生成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移等起著重要作用。因此，HIF-1 a對VEGF的調(diào)控作用成為腫瘤血管生成的新途徑。目前常規(guī)的栓塞劑(明膠海綿、無水乙醇、碘油、聚乙烯醇等)，由于腫瘤血供、側(cè)支循環(huán)、復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，化學(xué)藥物介入治療引起的肝功能損害、消化道癥狀、腎毒性作用和骨髓抑制、降低免疫功能等副作用，使得TACE技術(shù)受到很大的限制。為了提高肝癌的介入治療效果，提高患者生活質(zhì)量及延長患者生存期，研制新的介入制劑，降低毒副反應(yīng)，成為諸多學(xué)者研究的方向。20世紀(jì)80年代，馮敢生等在國內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)中藥白及具有良好的血管栓塞作用，并用于肝動脈介入治療肝癌。此后，中藥介入治療肝癌已經(jīng)成為不能切除肝癌非手術(shù)治療或治療后二次手術(shù)機(jī)會的首選方法，尤其成為治療中晚期肝癌頗為有效的姑息治療方法。但傳統(tǒng)的抗癌中藥藥性猛烈，多有毒性，易于傷正，若長期內(nèi)服，不僅患者消化道反應(yīng)強(qiáng)烈，而且癌腫局部難以達(dá)到有效抗癌濃度，存在著釋藥不穩(wěn)定、使用劑量大、生物利用度低等缺點(diǎn)，因此中藥及其有效成分以合適劑型的運(yùn)用是提高中藥介入治療肝癌療效的關(guān)鍵。中藥微球是近年來出現(xiàn)的一種新劑型，中藥微球粒徑可以按人為需要進(jìn)行制備，用于TACE可栓塞至肝竇前小動脈水平，與常規(guī)栓塞劑相比不易形成側(cè)枝循環(huán)，癌組織壞死更徹底，在發(fā)揮栓塞作用的同時(shí)微球中的藥物可集中在腫瘤區(qū)釋藥，因此既可產(chǎn)生栓塞效應(yīng)，又可作為抗癌藥物的攜帶者，使腫瘤區(qū)的藥物長時(shí)間維持在較高濃度水平，起到良好的被動靶向抗癌作用，具有控釋、末梢栓塞和靶向等多重功效。中藥微球的出現(xiàn)既可減輕常規(guī)TACE所用化療藥物對于骨髓的抑制、肝腎功能的損害及抑制免疫等毒副反應(yīng)，又能解決長期以來抗癌中藥難以到達(dá)腫瘤局部形成有效抗癌濃度的難題，有較強(qiáng)的臨床應(yīng)用價(jià)值。聚乳酸(Polylactide，PLA)及其共聚物是具有良好生物相容性和生物降解性的高分子材料，主要用于藥物控制釋放體系，PLA微球作為緩控釋給藥體系，可以控制制劑微粒的大小、延長藥物釋放時(shí)間、降低藥物毒副作用等，主要用于制備小分子藥物微球、多肽及蛋白質(zhì)藥物微球等。然而聚乳酸微球存在如下缺點(diǎn)，限制了它的實(shí)際應(yīng)用:(1)聚乳酸中有大量的酯鍵，為疏水性物質(zhì)，降低了它的生物相容性；(2)制備所得的微球存在較低的載藥量和藥物包封率；(3)在藥物釋放初期出現(xiàn)藥物的突釋。

丹參系唇形科鼠尾草屬植物的根，為常用的活血化瘀中藥。其性微寒，味苦、無毒。有活血通經(jīng)、涼血消腫、除煩清心的功能?！侗静菥V目》上有“丹參治療惡瘡疥癬、癭贅腫毒丹毒及排膿止痛、生長肌肉”等記載。丹參酮II A是從中藥丹參中提取的一種有效活性成分，具有抗菌、抗炎、保護(hù)心腦血管等藥理作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)丹參酮II A對多種腫瘤細(xì)胞具有生長抑制、誘導(dǎo)凋亡作用，其抗腫瘤作用是通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的。由于丹參酮II A在水中溶解度小，含丹參酮II A的普通制劑(如片劑、膠囊等)，其生物利用度均不高，直接影響臨床療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于制備腫瘤介入藥物的可生物降解的緩釋栓塞中藥微球及其制備方法，該微球具有改善肝動脈栓塞化療(TACE)的治療效果，并為臨床應(yīng)用丹參酮II A微球介入治療肝癌提供基礎(chǔ)。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球，其中該微球具有腫瘤血管栓塞、靶向、控釋作用，能夠用于腫瘤的介入治療；所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球采用水包油型(0/W型)乳化-液中干燥法制備，其油相為聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)的二氯甲烷溶液，水相為聚乙烯醇(PVA)的水溶液；所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球中丹參酮II A的載藥量為1°/Γ10%，包封率為60°/Γ90%，所述的微球粒徑范圍為30 200mm。上述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球，其中，所述的聚乳酸-羥基乙酸共聚物為酯基封端，其乳酸和羥基乙酸的單體數(shù)量比為2:1 8:1。優(yōu)選為乳酸和羥基乙酸的單體數(shù)量比為75/25，即所述的聚乳酸-羥基乙酸共聚物為PLGA75/25，平均分子量為15kD。
上述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球，其中，所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球在體外釋藥時(shí)，其釋藥曲線符合零級釋藥模式。上述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球，其中，所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球在體外釋藥時(shí)能夠緩釋7 65天。上述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球，其中，所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球經(jīng)肝動脈介入給藥后，能夠栓塞至肝腫瘤供血動脈末梢血管，有效栓塞時(shí)間為7 60天。本發(fā)明還提供了一種制備上述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球的方法，其中，所述的方法為水包油型乳化-液中干燥法，該方法包含:所述的油相為按重量體積比計(jì)含有10 50%的聚乳酸-羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液，優(yōu)選為30% g/ml卿IOOml 二氯甲烷溶液中含有30g聚乳酸-羥基乙酸共聚物);所述的水相為按重量體積比計(jì)含有0.59Tl%的聚乙烯醇的水溶液，優(yōu)選為0.5% g/ml (BP, IOOml水中含有0.5% g的聚乙烯醇);所述的油相與所述的水相體積比為1:10 ;所述的油相載藥丹參酮II A后離心勻化，形成初乳，再傾入到所述的水相中，攪拌使二氯甲烷揮發(fā)，從而使微球固化，篩分，純水洗去微球表面附著的聚乙烯醇，減壓干燥，得到丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球。其優(yōu)選條件為:所述的油相載藥丹參酮II A后在2900rpmX 3min條件下勻化，形成初乳，再傾入到所述的水相中，在攪拌速度為200rpm、35°C條件下?lián)]發(fā)二氯甲烷`。本發(fā)明制備的微球主要應(yīng)用于肝癌的栓塞治療，對于栓塞微球來說，有兩個(gè)指標(biāo)是非常重要的:一是微球粒徑。因?yàn)槠潢P(guān)系到栓塞劑能否栓塞至肝固有動脈部位，有效切斷腫瘤的血供；二是微球的藥物包封率。微球除了栓塞功能外，化療需要有足夠的抗細(xì)胞毒濃度。所以為了為防止突釋或降低突釋程度的，可直接通過物理方法除去微球表面的藥物，如萃取、洗滌；改變微球骨架性質(zhì)；改變主藥的理化性質(zhì)；采用適當(dāng)?shù)奈⑶蛑苽浞椒ɑ蚣尤敫郊觿┑取Ｎ覀儾捎镁廴樗?羥基乙酸共聚物兩種聚合物的混合溶液作為油相制備。制備藥物緩釋微球的方法很多，包括乳化溶劑揮發(fā)法、相分離法、乳化溶劑萃取法、噴霧干燥法、熔融法等，其中乳化溶劑揮發(fā)法最為常用。乳化溶劑揮發(fā)法主要包括0/W乳化法、0/0乳化法、復(fù)乳-液中干燥法。0/W乳化法適合脂溶性藥物微球的制備，后兩種方法常用于水溶性藥物微球的制備。采用乳化溶劑揮發(fā)法、溶劑擴(kuò)散法、二元溶劑分散法、乳化擴(kuò)散法、界面聚合法不同制備方法，所得微球的粒徑、包封率、載藥量和藥物利用率見表I。表I不同制備方法的粒徑、包封率、載藥量和藥物利用率。
權(quán)利要求
1.一種丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球，其特征在于，該微球具有腫瘤血管栓塞、靶向、控釋作用，能夠用于腫瘤的介入治療； 所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球采用水包油型乳化-液中干燥法制備，其油相為聚乳酸-羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液，水相為聚乙烯醇的水溶液；所述的油相與所述的水相體積比為1:10 ; 所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球中丹參酮II A的載藥量為19Γ10%，包封率為60% 90%，所述的微球粒徑范圍為30 200mm。
2.按權(quán)利要求1所述的丹參酮IIA-聚乳酸/羥基乙酸微球，其特征在于，所述的聚乳酸-羥基乙酸共聚物為酯基封端，其乳酸和羥基乙酸的單體數(shù)量比為2:1 8:1。
3.按權(quán)利要求1所述的丹參酮IIA-聚乳酸/羥基乙酸微球，其特征在于，所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球在體外釋藥時(shí)，其釋藥曲線符合零級釋藥模式。
4.按權(quán)利要求3所述的丹參酮IIA-聚乳酸/羥基乙酸微球，其特征在于，所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球在體外釋藥時(shí)能夠緩釋7飛5天。
5.按權(quán)利要求4所述的丹參酮IIA-聚乳酸/羥基乙酸微球，其特征在于，所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球經(jīng)肝動脈介入給藥后，能夠栓塞至肝腫瘤供血動脈末梢血管，有效栓塞時(shí)間為疒60天。
6.一種制備如權(quán)利要求f 5中任意一項(xiàng)所述的丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球的方法，其特征在于，所述的方法為水包油型乳化-液中干燥法，該方法包含: 所述的油相為按重量體積比計(jì)含有1(Γ50%的聚乳酸-羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液； 所述的水相為按重量體積比計(jì)含有0.5°/Γ %的聚乙烯醇的水溶液； 所述的油相載藥丹參酮II A后離心勻化，形成初乳，再傾入到所述的水相中，攪拌使二氯甲烷揮發(fā)，從而使微球固化，篩分，純水洗去微球表面附著的聚乙烯醇，減壓干燥，得到丹參酮II A-聚乳酸/羥基乙酸微球。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參酮ⅡA-聚乳酸/羥基乙酸微球及其制備方法，該微球采用水包油型乳化-液中干燥法制備，其油相為聚乳酸-羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液，水相為聚乙烯醇的水溶液；微球中丹參酮ⅡA的載藥量為1%~10%，包封率為60%~90%，微球粒徑范圍為30～200mm。本發(fā)明提供的丹參酮ⅡA-聚乳酸/羥基乙酸微球，適用于肝癌的介入治療，具有良好的肝腫瘤末梢血管栓塞作用，有效栓塞時(shí)間為7～60天。能夠靶向分布在腫瘤組織，緩釋藥物，提高藥物局部濃度，延長藥物代謝時(shí)間，明顯抑制動物肝腫瘤生長，延長動物的生存期。微球栓塞后可抑制人低氧誘導(dǎo)因子1α和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，減少腫瘤組織微血管密度。
文檔編號A61K31/58GK103083250SQ20131002275
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月22日
發(fā)明者李琦, 王炎, 朱惠蓉, 殷佩浩, 陳紅宇, 周利紅, 秦建民, 孫玨, 范忠澤 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院, 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院