專利名稱：一種二萜Libertellenone G及其制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于微生物工程技術領域,具體涉及一種二職(Libertellenone G)及其制備方法與用途。
背景技術：
植物內生菌是指是指那些生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官內部的真菌或細菌(包括放線菌)，被感染的植物(至少暫時)不表現(xiàn)出外在病癥，可通過組織學方法或從嚴格表面消毒的植物組織中分離或從植物組織內直接擴增出微生物DNA的方法來證明其內生。內生菌由于其獨特的生境,造就了其獨特的代謝方式,并且其代謝產物常具有新穎的結構和多種生物活性，在農業(yè)和醫(yī)藥領域都具有重要的應用前景，逐漸成為國內外研究的熱點。阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s Disease，AD)又稱早老性癡呆癥，是以進行性認知功能障礙為主要特征的神經退行性病變，現(xiàn)已成為繼心血管疾病和腫瘤之后嚴重威脅老年人生命健康的主要疾病之一。目前，美國FDA批準的5種臨床治療AD的藥物中4種為乙酰膽堿酯酶抑制劑，因此，通過抑制乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase, AChE)降解乙酰膽堿，從而提高乙酰膽堿水平的方法是一種有效的AD治療途徑。因此，從天然產物中尋找有效的乙酰膽堿酯酶抑制藥物已成為國內外重要的研究課題。
發(fā)明內容
本發(fā)明需要解決的問題是:
1.提供一類具有乙酰膽堿酯酶抑制作用的二職(LibertellenoneG)。
2.提供一種發(fā)酵生產及提取分離二職(LibertellenoneG)的方法。
3.提供本發(fā)明的二職(LibertellenoneG)在作為抑制乙酰膽堿酯酶化合物,制備治療阿爾茨海默氏病藥物中的應用。本發(fā)明通過下述技術方案予以實現(xiàn)。
本發(fā)明所述二職(Libertellenone G),從植物內生菌液體發(fā)酵提取物中分離得到,其結構式為:
權利要求
1.一種紅花青藤(llligera rhodantha Hance)種子內生真菌,菌株編號為sp.S12,其特征是在PDA平板上，菌落暗白，平展，菌絲貼基擰結，經鑒定為鏈霉菌屬Phomopsis，現(xiàn)保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:武漢珞珈山武漢大學內，保藏編號為CCTCCM2013026，保藏日期為2013年I月17日，從其麥芽培養(yǎng)基液體發(fā)酵提取物中分離純化獲得具有乙酰膽堿酯酶抑制活性的二職Libertellenone G。
2.—種權利要求1所述紅花青藤內生真菌發(fā)酵液制備的二職Libertellenone G的結構為:
3.根據(jù)權利要求2所述的二職LibertellenoneG的制備方法,其特征是由以下步驟構成: 1)將新鮮的從紅花青藤(11ligera rhodantha Hance )種子中分離純化得到的Phomopsis屬菌菌絲體塊接種到每瓶含有400mL麥芽培養(yǎng)基的IOOOmL錐形瓶中，麥芽培養(yǎng)基成分為生麥芽200g，蔗糖20g，蒸餾水1L，于搖床上在150rpm，28°C條件下培養(yǎng)4天作為種子液，然后將20mL種子液接種于含有400mL的麥芽培養(yǎng)基的IOOOmL錐形瓶中，在150rpm、20-30°C條件下發(fā)酵12天； 2)將步驟I所得發(fā)酵液經紗布過濾，濾液用乙酸乙酯萃取，真空濃縮干燥得棕色粗浸膏Fl ; 3)將粗浸膏Fl用適量的甲醇溶解，然后把溶液置于_4°C的冰箱過夜，過濾除去析出的蠟狀固體，將濾液減壓濃縮，得浸膏F2 ； 4)對浸膏F2進行硅膠柱層析，依次用4倍體積的氯仿、氯仿:甲醇=100:1、氯仿:甲醇=100: 2、氯仿:甲醇=100: 4、氯仿:甲醇=100: 8、氯仿:甲醇=100: 16、甲醇進行洗脫，濃縮氯仿:甲醇=100: 4段得到黃棕色浸膏F3; 5)對浸膏F3，用反相柱ODS進行分離，先用20%甲醇，酒精計測量，進行洗脫除去大極性雜質，然后用45%甲醇洗脫，真空濃縮洗脫液得黃色固體F4 ； 6)對浸膏F4進行SephadexLH-20分離，洗脫液為甲醇，共得17瓶，將7-9瓶合并得浸膏F5 ； 7)對浸膏F5,用高效液相色譜法分離得到二職LibertellenoneG。
4.根據(jù)權利要求2所述的二萜作為抑制乙酰膽堿酯酶化合物在制備治療阿爾茨海默氏病藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生物工程技術領域，具體涉及一種二萜(Libertellenone G)及其制備方法與用途。從紅花青藤(IlligerarhodanthaHance)種子內生真菌的發(fā)酵液中提取到的二萜(Libertellenone G對乙酰膽堿酯酶有很強的抑制作用，因此Libertellenone G可作為抑制乙酰膽堿酯酶的化合物，在制備新治療阿爾茨海默氏病藥物中得到應用。
文檔編號A61P25/28GK103073527SQ20131003964
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月31日 優(yōu)先權日2013年1月31日
發(fā)明者譚仁祥, 衛(wèi)蔚, 姜榮, 趙國琰 申請人:南京大學