專利名稱：小春花提取物的用途及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療支氣管哮喘的藥物，尤其涉及小春花提取物的用途及其制備方法。
背景技術(shù)：
小春花為陰地蕨科植物陰地蕨sceptridium ternatum(Tlamb.)Luon。為浙江省常用中藥材，具有清熱解毒，平肝熄風(fēng)，止咳，止血，明目祛翳等功效。民間用于治療小兒高熱驚搐、肺熱咳嗽、咳血、百日咳、癲狂、癇疾、瘡瘍腫毒、瘰疬、毒蛇咬傷、目赤火眼、目生翳障等病。目前，對小春花治療支氣 管哮喘的機理研究未見報道。支氣管哮喘(哮喘Asthma)是呼吸系統(tǒng)常見病和多發(fā)病。且發(fā)病率逐年增高，據(jù)統(tǒng)計，全世界約有I億5千5百萬人患有哮喘。我國成人發(fā)病率為0.7% 1.5%，兒童為0.7% 2.03%，也就是說全國約有1000萬 2000萬患者，且以青壯年和兒童居多，是對國民的身體素質(zhì)危害最大的疾病之一。因此積極開發(fā)安全有效的支氣管哮喘治療藥物一直是我國乃至世界科學(xué)家研究的重點。近十多年來，對哮喘的病理病機研究有了很大的進(jìn)展，認(rèn)為該病是多種細(xì)胞參與的，以嗜酸性細(xì)胞(Eos)、肥大細(xì)胞反應(yīng)為主的氣道高反應(yīng)性(AHR)為特征的非特異性氣道慢性炎癥。近年來，學(xué)者們大量的研究工作表明:許多細(xì)胞因子參與了 Eos的調(diào)控作用，盡管哮喘發(fā)病機理復(fù)雜，越來越多研究表明Th2細(xì)胞在哮喘的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用。它們通過釋放Th2型細(xì)胞因子如IL-4、IL-5等觸發(fā)炎性反應(yīng)，導(dǎo)致Eos在氣道募集并活化而引起組胺、白三烯等多種炎性介質(zhì)的釋放。而Thl細(xì)胞則具有Th2細(xì)胞相反的作用，他們通過釋放Thl型細(xì)胞因子如IFN-Y、IL-12等拮抗Th2型細(xì)胞因子的功能而抑制哮喘反應(yīng)。目前普遍認(rèn)為哮喘患者存在Th2占優(yōu)勢的Thl/Th2失平衡。如何通過調(diào)節(jié)Thl/Th2型細(xì)胞之間的平衡已成為哮喘免疫治療的一個熱點。已有研究表明如哮喘動物降低肺泡灌洗液(BALF)中Eos數(shù)，增加BALF及外周血中IFN- Y與IL-12水平，降低IL_4、IL-5水平，并可降低氣道反應(yīng)性。另外，白三烯(LTs)是支氣管哮喘發(fā)生發(fā)展過程中的主要炎性反應(yīng)介質(zhì)。它不僅能促進(jìn)炎性反應(yīng)細(xì)胞在呼吸道內(nèi)聚集，增加血管通透性和粘液分泌，還可以引起呼吸包平滑肌收縮，促進(jìn)呼吸道結(jié)構(gòu)細(xì)胞增殖。當(dāng)前哮喘治療仍以激素與β2受體激動劑為主，缺乏更安全、有效的治療藥物，我國學(xué)者一直呼吁進(jìn)行中醫(yī)中藥對哮喘的防治研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種小春花提取物在制備治療支氣管哮喘藥物中的用途。本發(fā)明的另一目的在于提供小春花提取物的制備方法。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:小春花提取物在制備治療支氣管哮喘藥物中的用途。小春花提取物的制備方法，包括如下步驟:(I)、取小春花全草，晾干、粉碎，備用；回流提取時加入8倍量50% 70%醇溶液，加熱回流提取2次，每次1.5小時，合并提取液；(2)提取物用吸附樹脂富集:提取液加入到吸附樹脂柱上用水西至淡黃色，用10% 90%的醇類洗下總黃酮，回收醇，干燥得棕色粉末。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的小春花提取物制備方法，其特征在于:提取溶劑可以是甲醇、丙酮和乙醇；洗脫溶媒可以使10 90%的乙醇；吸附劑可以使聚酰胺、硅膠及氧化招。4、小春花提取物制備成藥劑學(xué)上能接受的劑型。5、小春花提取物制備成片劑、顆粒劑或膠囊劑。本發(fā)明進(jìn)一步擴大了小春花提取物在藥物中的用途，明確了小春花提取物對支氣管哮喘的治療作用，為廣大病人提供了新的用藥途徑；豐富了浙產(chǎn)藥材的研究基礎(chǔ)，為繁榮我國藥材經(jīng)濟(jì)作出一定貢獻(xiàn)。



圖1:ACt對 1g-1 濃度圖；圖2:cysltl(左)、GAPDH(右)表達(dá)溶解曲線；圖3 =Cysltl凝膠電泳圖(O為標(biāo)準(zhǔn)品，I 8為內(nèi)參，10 12為cysltl)；圖4:cyslt2表達(dá)溶解曲線；圖5:Cyslt2凝膠電泳圖(紅色部分為標(biāo)準(zhǔn)品；綠色部分為內(nèi)參；黃色部分為cyslt2)；圖6:小鼠肺組織中白三烯受體ImRNA表達(dá)比較；圖7:空白組(100X，清晰、正常)；圖8:模型組(100 X，支氣管擴張明顯)；圖9:孟魯司特組(100X，支氣管擴張不明顯)；圖10:高劑量組(100 X，支氣管擴張不明顯)；圖11:中劑量組(100X，支氣管擴張明顯)；圖12:低劑量組(100 X，支氣管擴張明顯)。
具體實施例方式為了證明小春花提取物對支氣管哮喘的治療作用，申請人設(shè)計了科學(xué)的動物實驗，以驗證小春花提取物對支氣管哮喘有治療作用。實施例1:制備小春花提取物采集小春花全草，晾干，取Ikg小春花，粉碎，加8倍量70%乙醇加熱回流提取2次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味即得。上述實施例制備得到的小春花提取物可以進(jìn)一步制備得到，小春花提取物的藥物制劑，如片劑、膠囊劑、顆粒劑等藥劑學(xué)上可以接受的各種藥物劑型。試驗例:(一 )材料與儀器1、動物:清潔級，雌性，BALB/c小鼠60只，6 8周齡，體重20 22g。由浙江省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供及代養(yǎng)。隨機分為6組，每組10只。分別為正常對照組、模型對照組，陽性藥物對照組，高劑量組，中劑量組，低劑量組。2、儀器:流式細(xì)胞儀(Coulter, Beckman 公司)RT_PCR 儀(Stepone Plus,美國ABI公司)Medlabl2.0生物信號處理系統(tǒng)(南京美易科技有限公司)顯微鏡(EclipSe80i，Nikon公司)3、試劑:小春花(浙江省中醫(yī)藥研究院提供，系野外采集)，孟魯司特(默沙東公司)卵蛋白(OVA, sigma公司)，免疫佐劑液態(tài)招(pierce公司)、莫能霉素、佛波酯及離子霉素(Monensin, PMA, 1nomycin, MultiSciences 公司)、CD3_Pc5 抗體、CD8-FITC 抗體、IL-4-PE 抗體、IFN- Y -PE 抗體(Ebioscience 公司)。(二)小春花提取物的制備取實施例所得小春花提取物，用去離子水稀釋至一定濃度，待用。(三)哮喘小鼠模型建立致敏:于第I天和第14天每只小鼠分別腹腔內(nèi)注射0.2mL(0.08%的0VA0.1mL與等體積佐劑液態(tài)鋁混合)。激發(fā): 于第24、25、26d將小鼠置于密閉容器(20cmX40cmX50cm)中，以I % OVAlOmL霧化吸入20min，I次/d。激發(fā)后研究:在最后I次激發(fā)后第2天(第28天)處死小鼠，收集標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)研究。(四)分組及干預(yù)方法①正常對照組以生理鹽水代替OVA致敏激發(fā)，正?？诜澄铩＂谀Ｐ徒M:于致死前10天胃內(nèi)灌服生理鹽水。③用藥組于致死前10天開始胃內(nèi)灌服，高、中、低劑量組給于小春花提取物，以小春花生藥計高劑量為387mg/20g鼠/d，中劑量為193.5mg/20g鼠/d，低劑量為38.7mg/20g鼠/d。陽性組給于孟魯司特水溶液，為0.2mg/20g鼠/d。(五)小春花提取物對哮喘小鼠肺功能的影響1、方法將末次激發(fā)的老鼠置于密閉容器(體積描記箱)中，如圖1。每個體描箱內(nèi)放置I只小鼠，每輪測量10只小鼠。與壓力感受器連接，傳感器(TRD5700)記錄小鼠呼吸時引起的體描箱內(nèi)壓力變化，由放大器(MAX1420，MAX2270，MAX4371)處理后，信號傳輸給系統(tǒng)，進(jìn)行Penh %的計算。計算方法:
權(quán)利要求
1.小春花提取物在制備治療支氣管哮喘藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小春花提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟:(I)、取小春花全草，晾干、粉碎，備用；回流提取時加入8倍量50% 70%醇溶液，加熱回流提取2次，每次1.5小時，合并提取液； (2)提取物用吸附樹脂富集:提取液加入到吸附樹脂柱上用水西至淡黃色，用10% 90 %的醇類洗下總黃酮，回收醇，干燥得棕色粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的小春花提取物制備方法，其特征在于:提取溶劑可以是甲醇、丙酮和乙醇；洗脫溶媒可以使10 90%的乙醇；吸附劑可以使聚酰胺、硅膠及氧化鋁。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小春花提取物制備成藥劑學(xué)上能接受的劑型。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的小春花提取物制備成片劑`、顆粒劑或膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療支氣管哮喘的藥物，尤其涉及小春花提取物的用途及其制備方法。本發(fā)明公開了小春花提取物在制備治療支氣管哮喘藥物中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步擴大了小春花提取物在藥物中的用途，明確了小春花提取物對支氣管哮喘的治療作用，為廣大病人提供了新的用藥途徑；豐富了浙產(chǎn)藥材的研究基礎(chǔ)，為繁榮我國藥材經(jīng)濟(jì)作出一定貢獻(xiàn)。
文檔編號A61P11/06GK103169739SQ20131004105
公開日2013年6月26日 申請日期2013年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月29日
發(fā)明者黃萍, 葉佐武, 楊秀麗, 戴純輝, 應(yīng)茵, 羊波, 袁雍 申請人:浙江省立同德醫(yī)院