專利名稱：黑樹莓提取物在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及黑樹莓提取物(包括黑樹莓成熟果實(shí)，黑樹莓葉片提取物)在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病是由于胰腺的功能失調(diào)導(dǎo)致胰島素相對或絕對不足，或靶細(xì)胞對胰島素的敏感性降低而引起的一系列全身性代謝紊亂疾病。根據(jù)導(dǎo)致疾病的原因和在不同人群中的分布不同，臨床常將糖尿病分為I型糖尿病、II型糖尿病。全世界有3.46億人患有糖尿病。如果不采取有效措施，隨著病程的進(jìn)展，糖尿病會出現(xiàn)多種并發(fā)癥，可能損害心臟、血管、眼睛、腎臟和神經(jīng)。糖尿病及其并發(fā)癥給個(gè)人、家庭、國家?guī)砭薮蟮呢?fù)擔(dān)。世衛(wèi)組織估計(jì)，在2006-2015年期間，僅因糖尿病及其并發(fā)癥，中國就將損失5580億美元。

II型糖尿病，也稱非胰島素依賴型糖尿病，其胰島素分泌正?；蛘咴龈撸闻K、脂肪組織和骨骼肌對胰島素敏感性降低，即胰島素抵抗，患者多為成年。II型糖尿病發(fā)病機(jī)理主要有:(1)大多數(shù)II型糖尿病的發(fā)病原因是因位于胰島素靶細(xì)胞的細(xì)胞膜上受體缺陷導(dǎo)致胰島素與受體結(jié)合敏感性降低，使細(xì)胞外葡萄糖不能被人體充分?jǐn)z取利用導(dǎo)致血糖升高。(2)胰島素受體底物缺陷。胰島素受體底物屬于細(xì)胞質(zhì)中的適配蛋白，主要連接胰島素受體等多種效應(yīng)分子，介導(dǎo)細(xì)胞對胰島素等的反應(yīng)。(3)胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)缺陷。在胰島素分泌和傳遞信號的過程中，胰島素信號傳遞是一系列過程，涉及多種信號蛋白。在我國II型糖尿病患者占糖尿病患者約95%。因此開發(fā)治療糖尿病的藥物是本領(lǐng)域不斷研發(fā)的方向。黑樹莓是薔薇科懸鉤子屬的多年生落葉半灌性果樹，因其成熟果實(shí)為黑色而得名，作為第三代水果，其營養(yǎng)豐富而齊全，含有多種易被人體吸收和人體不可缺少的營養(yǎng)元素。如維生素C的含量是蘋果的5倍，氨基酸及鐵、鋅、磷等含量高于蘋果和葡萄，特別是含有的生物活性的化學(xué)物質(zhì)種類繁多?，F(xiàn)有技術(shù)中，并未有黑樹莓或其提取物在治療糖尿病中的相關(guān)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供黑樹莓提取物在防治以糖代謝紊亂，β胰島細(xì)胞損傷及胰島素抵抗為主要特征的II型糖尿病中的用途。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，以黑樹莓提取物為有效成分，其總有效劑量為 l-100mg/kg/d。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，黑樹莓提取物可與目前市場上的糖尿病治療藥物包括磺酰脲類、雙胍類或噻唑烷二酮類復(fù)配制備成復(fù)方制劑。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，黑樹莓提取物可與任何法定藥用配合劑和賦形劑制成各種藥用劑型的制劑。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，藥用劑型為口服劑型、或局部用藥劑型。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，口服劑型包括片劑、粉劑、懸濁液、乳濁液、膠囊、顆粒劑、糖衣片、藥丸、液體、糖衆(zhòng)和朽1檬水劑等。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，局部用藥劑型包括軟膏、固體、懸濁液、水劑、粉劑、糊劑、栓劑、泥敷劑、和乳劑等。本發(fā)明的有益效果是:所用黑樹莓提取物是從黑樹莓成熟果實(shí)或葉片中提取。本發(fā)明通過對體外大、小鼠胰島細(xì)胞增殖作用，PTPlB活力實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，黑樹莓提取物能夠促進(jìn)胰島細(xì)胞增殖，抑制PTPlB活力，同時(shí)體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)黑樹莓提取物能夠改善四氧嘧啶引發(fā)的小鼠的血糖水平升高，具有明顯的降糖作用。本發(fā)明通過驗(yàn)證，黑樹莓果實(shí)或葉片提取物的降血糖作用均優(yōu)于所選用的陽性藥降糖靈。


圖1是紅樹莓成熟果實(shí)提取物中的成分分離鑒定。圖2是黑樹莓成熟果實(shí)提取物中的成分分離鑒定。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:樹莓成熟果實(shí)提取物(BRBFE)及樹莓葉片提取物(BRBlE)的制備及成分分析
本實(shí)施例提供兩種方法制 備樹莓成熟果實(shí)提取物。(I)樹莓成熟果實(shí)(黑樹莓或紅樹莓)經(jīng)搗碎機(jī)搗碎，然后過0.02英寸孔徑篩網(wǎng)，過濾去籽，制成果泥。過濾殘留果實(shí)進(jìn)一步重復(fù)此操作，共三次，確保充分榨汁。榨汁率為97%。制備好的果泥倒入于表面涂布聚乙烯薄膜的I英寸的冷凍干燥盤中，在通風(fēng)的冷凍室中保存。進(jìn)一步通過升華器進(jìn)行冷凍干燥，得黑樹莓果實(shí)凍干粉(或紅樹莓果實(shí)凍干粉)。將黑樹莓果實(shí)凍干粉(或紅樹莓果實(shí)凍干粉)加入乙醇:水(80:20)溶劑，浸泡提取，溫度25V ;時(shí)間IOh ;乙酸乙酯萃取去除果實(shí)中脂肪類成分，減壓回收溶劑后得到黑樹莓成熟果實(shí)提成取物(BRBFE)或紅樹莓成熟果實(shí)提取物(RRBFE)。(2)樹莓凍果(黑樹莓或紅樹莓)200g，微波解凍后打漿，得果漿。精確稱取果漿
4.0g于150ml錐形瓶中，加入乙醇:水(45:55)溶劑，料液比1:30，進(jìn)行超聲提取，超聲頻率25 kHz，提取溫度為40 °C，提取時(shí)間為25min ;提取完成后，4000rpm/min離心10 min,取上清液，減壓蒸干后得到黑樹莓成熟果實(shí)提成取物(BRBFE)或紅樹莓成熟果實(shí)提取物(RRBFE)0采用高效液相色譜法對獲得的黑樹莓成熟果實(shí)提成取物(BRBFE)和紅樹莓成熟果實(shí)提取物(RRBFE)的成分進(jìn)行分離鑒定，結(jié)果如圖1和圖2所示。其色譜條件如下:
Kromasil C18 (4.6mmX 150mm)色譜柱，流動(dòng)相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脫 0_21min,19%A ；24min,25%A ；32min,30%A ；39 min,40%A ；44 min,50%A ；55 min,60%A ；60 min,80%A ；65-70min,100%A。從圖1和圖2可見，樹莓的品種不同，其化學(xué)成分種類及含量差異較大。通過與混標(biāo)找共有峰，發(fā)現(xiàn)黑樹莓35%乙醇沖下的流分中7種標(biāo)準(zhǔn)品都含有，其中鞣花酸含量是紅樹莓的2-5倍，同時(shí)，紅樹莓中的幾種指標(biāo)性成分與黑樹莓相比較，含量都較低，而且在紅樹莓中未發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇、原花青素B2及表兒茶素幾種活性成分。本實(shí)施例提供I種方法制備樹莓葉片提取物。
(3)采摘生長果實(shí)成熟后的樹莓葉(黑樹莓或紅樹莓)，清洗晾干粉碎40-60目后用80%乙醇(含3%的乙酸)溶液，料液比1:12,40 °C，浸提I h，浸提2次。合并提取液，4000rpm/min離心10 min,取上清液,減壓蒸干后得到黑樹莓葉片提取物(BRBlE)或紅樹莓葉片提取物(RRBLE)。
實(shí)施例2:樹莓提取物在體外促進(jìn)大鼠胰島樣細(xì)胞生長分化作用選用大鼠胰島樣(INS-1)細(xì)胞系，采用MTT法測定了樹莓提取物(BRBFE，BRBLE,RRBFE, RRBLE)體外促進(jìn)細(xì)胞增殖的活性，測定濃度為0-100 Pg/ml，處理時(shí)間為72小時(shí)。BRBFE，BRBLE對于胰島樣具有明顯的促進(jìn)生長、分化作用。T_test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p〈0.05具有顯著性差異，結(jié)果見表I。
權(quán)利要求
1.黑樹莓提取物在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:黑樹莓提取物的總有效劑量為l-100mg/kg/d0
3.一種新型抗糖尿病藥物制劑，其特征在于:以黑樹莓提取物為有效成分。
4.如權(quán)利要求3所述的新型抗糖尿病藥物制劑，其特征在于:黑樹莓提取物與磺酰脲類藥物、雙胍類藥物或噻唑烷二酮類藥物復(fù)配制備成復(fù)方制劑。
5.如權(quán)利要求3或4所述的新型抗糖尿病藥物制劑，其特征在于:所述的制劑是黑樹莓提取物，或黑樹莓提取物與磺酰脲類藥物、雙胍類藥物或噻唑烷二酮類藥物的復(fù)配物和藥學(xué)上可接受的配合劑或賦型劑混合制成藥用劑型。
6.如權(quán)利要求5所述的新型抗糖尿病藥物制劑，其特征在于:所述的藥用劑型為口服劑型或局部用藥劑型。
7.如權(quán)利要求6所述的新型抗糖尿病藥物制劑，其特征在于:所述口服劑型是片劑、粉齊U、懸濁液、乳濁液、膠囊、顆粒劑、糖衣片、藥丸、液體、糖漿或檸檬水劑。
8.如權(quán)利要求6所 述的新型抗糖尿病藥物制劑，其特征在于:所述的局部用藥劑型是軟膏、固體、懸濁液、水劑、粉劑、糊劑、泥敷劑、涂抹劑、和乳劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及黑樹莓提取物在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用。黑樹莓提取物在防治以糖代謝紊亂，β胰島細(xì)胞損傷及胰島素抵抗為主要特征的II型糖尿病中的用途。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，以黑樹莓提取物為有效成分，其總有效劑量為1-100mg/kg/d。本發(fā)明所提供的新型抗糖尿病藥物制劑，黑樹莓提取物可與目前市場上的糖尿病治療藥物包括磺酰脲類、雙胍類或噻唑烷二酮類復(fù)配制備成復(fù)方制劑。黑樹莓提取物能夠促進(jìn)胰島細(xì)胞增殖，抑制PTP1B活力，同時(shí)體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)黑樹莓提取物能夠改善四氧嘧啶引發(fā)的小鼠的血糖水平升高，具有明顯的降糖作用。本發(fā)明通過驗(yàn)證，黑樹莓果實(shí)或葉片提取物的降血糖作用均優(yōu)于所選用的陽性藥降糖靈。
文檔編號A61P3/10GK103142720SQ20131006147
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月27日
發(fā)明者畢秀麗, 趙余慶, 夏希純, 劉威 申請人:遼寧大學(xué)