專(zhuān)利名稱(chēng)：一種短葶飛蓬總酚酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬植物藥領(lǐng)域，具體涉及一種短葶飛蓬總酚酸及其制備方法、化學(xué)成分和在制造防治缺血性心腦血管疾病醫(yī)藥保健品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
短葶飛蓬為菊科飛蓬屬草本植物，學(xué)名Erigeron breviscapus (Vant.)Hand.-Mazz,民間又稱(chēng)燈盞花、燈盞細(xì)辛、東菊、地朝陽(yáng)和雙葵花，是中國(guó)特有植物，分布于廣西、云南、貴州、湖南、四川等地。短葶飛蓬具有很高的藥用價(jià)值，是燈盞花素片、燈盞細(xì)辛膠囊等多種成藥的生產(chǎn)原料，因?yàn)閷?duì)中風(fēng)、冠心病、糖尿病腎病、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、老年癡呆等疾病有較好療效，受到醫(yī)藥界廣泛關(guān)注。迄今從該植物已分離出數(shù)十種化學(xué)成分，包括黃酮、咖啡酰奎寧酸、辛酮糖酸、香豆素、萜類(lèi)、木脂素、皂苷、芳香酸、Y-吡喃酮、桂皮酸、甾醇、脂肪酸、脂肪醇、揮發(fā)油、有機(jī)酸等多種類(lèi)別(藥學(xué)實(shí)踐雜志，2002，20 (2):103-107;中草藥，2005，36 (I):141-144)。含量較高的野黃芩苷(scutellarin)是公認(rèn)的主要有效成分，以其為原料生產(chǎn)的燈盞花素系列藥品已大量上市，但藥代研究發(fā)現(xiàn)，該成分存在口服生物利用度低的問(wèn)題(中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2005，10(3):310-313)?？Х弱？鼘幩犷?lèi)具有抗氧化、抗凝血等活性，也被認(rèn)為是短葶飛蓬有效成分(中國(guó)中藥雜志，2006,31(11):869-874),但此類(lèi)成分在植物界廣泛存在,并不是短葶飛蓬特有。焦袂康酸(pyromeconicacid)是一種Y-吡喃酮類(lèi)成分，在短葶飛蓬中含量較高，該成分對(duì)心腦血管是否有益尚無(wú)定論，但有資料顯示，它對(duì)大鼠肝臟存在毒性，并被當(dāng)做肝毒工具藥(Experientia, 1984,40(8):894-6 ；Exp Mol Pathol，1992，57 (2): 153-66) 目前對(duì)短葶飛蓬化學(xué)成分的認(rèn)識(shí)尚未窮盡，新成分仍時(shí)有報(bào)·道?？傊?，現(xiàn)有技術(shù)資料顯示，短葶飛蓬的成分具有多樣性，既含多種有效成分，也含焦袂康酸等有毒或無(wú)效雜質(zhì)；除野黃芩苷外，不排除還存在其他活性更強(qiáng)有效成分的可能性；有效成分之間也很可能存在一些未知的藥理協(xié)同關(guān)系；對(duì)短葶飛蓬藥效物質(zhì)及其作用機(jī)理的全面了解還有待深入研究。圍繞短葶飛蓬有效組分的提取，已有多項(xiàng)專(zhuān)利方法公開(kāi)，其精制手段主要是有機(jī)溶劑萃取(CN1381236A、CN1709351A、ZL93104701.3)、硅膠柱層析(CN1136434A)、大孔樹(shù)脂吸附(CN1462620A、CN1327811A、CN1947736A)、聚酰胺吸附(CN1136434A)等，這些方法得到的提取物在組分上各不相同，不同程度地存在有效成分丟失、雜質(zhì)殘留、溶媒消耗大等問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種有效成分全面、結(jié)構(gòu)明確、質(zhì)量可控的短葶飛蓬提取物，以利發(fā)揮藥材原本存在的天然多靶點(diǎn)藥理協(xié)同作用，取得更好的醫(yī)療保健效果。發(fā)明人對(duì)短葶飛蓬進(jìn)行了系統(tǒng)的基礎(chǔ)研究，基于對(duì)其化學(xué)成分和生物活性的了解，將有效部位鎖定為總酚酸，比較徹底地闡明了該部位的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其中包含黃酮(包括二氫黃酮、黃酮醇)、咖啡酸酯、香豆素、芳香酸、桂皮酸、色原酮、辛酮糖酸等結(jié)構(gòu)類(lèi)型。
本發(fā)明的目的之二是提供一種上述短葶飛蓬總酚酸及其鈉鹽的制備方法，該方法既能提取藥材中多樣性的酚酸類(lèi)有效成分，高效率地綜合利用藥材資源，又能充分去除焦袂康酸、飛蓬苷、糖類(lèi)、油脂、揮發(fā)油、皂苷、無(wú)機(jī)鹽等雜質(zhì)，以減少服用量，提高用藥安全性，還能提高得率，降低生產(chǎn)成本。發(fā)明人根據(jù)短葶飛蓬總酚酸與植物中同時(shí)伴存的各類(lèi)雜質(zhì)在理化性質(zhì)上的差異，摸索總結(jié)出一條獨(dú)創(chuàng)的制備工藝路線(xiàn)，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)和優(yōu)化，達(dá)到了本發(fā)明預(yù)期的提取純化目的。本發(fā)明的目的之三是提供上述短葶飛蓬總酚酸或其鈉鹽在制備防治缺血性心腦血管疾病的藥品或保健品中的用途。本發(fā)明短葶飛蓬總酚酸及其鈉鹽的制備方法，包含如下順序操作步驟:A.藥材用含水酒精、甲醇或水之一，優(yōu)選濃度為60 % 95 %的酒精，回流提取2 5次，合并提取液，減壓濃縮，得浸膏；B.浸膏用2 15倍量水混懸，攪拌下緩慢加入稀氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值7.0 8.5，離心，濾過(guò)；C.濾液用稀鹽酸或稀硫酸調(diào)pH值I 3，靜置，分取沉淀，水洗至pH近中性，干燥，粉碎；D.沉淀用親脂性有機(jī)溶劑脫脂，揮干，得總酚酸；E.總酚酸進(jìn)一步用稀氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉溶液溶解，調(diào)pH近中性，濾過(guò)，濃縮，干燥，得總酚酸鈉鹽。本發(fā)明制備方法的特征在于，其工藝路線(xiàn)中具有堿溶酸沉的環(huán)節(jié)，即浸膏先用稀氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉溶液助溶，過(guò)濾后的清液再用稀鹽酸或稀硫酸酸化，使有效組分沉淀析出。本發(fā)明制備方法的特征還在于，其工藝路線(xiàn)中具有脫脂環(huán)節(jié)，即用正己烷、環(huán)己烷、石油醚或汽油之一，優(yōu)選沸程為60 90°C的石油醚，在常溫或加熱下對(duì)總酚酸粗品進(jìn)行浸潰或回流提取2 10次，每次不少于I小時(shí)。脫除的油脂呈褐色油狀，有強(qiáng)烈刺激性氣味；小鼠急性毒性試驗(yàn)顯示，該油脂灌胃給藥，觀(guān)察7天，測(cè)得其LD5tl為2.8g/kg ;受試動(dòng)物均出現(xiàn)了躁動(dòng)、四肢抽搐和驚厥等中毒癥狀；油脂的毒性顯著高于脫脂后的總酚酸。該脫脂環(huán)節(jié)能除去粗品中約占4%的油狀雜質(zhì)，對(duì)降低總酚酸毒性、消除不良?xì)馕?、改善粉末流?dòng)性發(fā)揮了關(guān)鍵作用。本發(fā)明的總酚酸，其特征之一在于含野黃芩苷4% 20% (重量)。本發(fā)明的總酚酸，其特征還在于含3，5_ 二-O-咖啡?？鼘幩?1，見(jiàn)附圖1)0.1 % 5% (重量)和4，5-二-O-咖啡酰奎寧酸(2)0.5% 8% (重量)。本發(fā)明的總酚酸，其特征還在于含3-0-咖啡酰-Y-奎尼內(nèi)酯(3)0.01% 1%(重量)。該成分在自然界非常罕見(jiàn)，迄今僅從烘烤咖啡豆中發(fā)現(xiàn)過(guò)，已知該化合物相對(duì)于常見(jiàn)的二咖啡酰奎寧酸類(lèi)，具有分子量小、親脂性強(qiáng)、易于穿透血腦屏障等優(yōu)勢(shì)，對(duì)腦血管的活性要高得多(Z Lebensm Unters Forsch, 1994,199 (I): 17 21)。由此推定，該成分對(duì)短葶飛蓬總酚酸的藥效有重要貢 獻(xiàn)，將其列為關(guān)鍵指標(biāo)成分。附圖3顯示了該化合物在總酚酸中的存在。發(fā)明人應(yīng)用色譜方法從短葶飛蓬分離得到了該化合物單體，并測(cè)定了分子結(jié)構(gòu)，其波譜數(shù)據(jù)如下:UV λ max(nm):221，240，305 (sh)，330。
ES1-MS m/z:335[Μ_ΗΓ。1H-NMR(DMS0-d6，400MHz) δ ppm:1.93 (1H, t, J = 12Hz, H_2a)，2.04 (1H, m, H_2b)，
2.21 (1H, m, H-6a)，2.37 (1H, d, J = 12Hz, H_6b)，4.14 (1H，q, J = 4.8Hz, H_4)，4.69 (1H,m, H-5), 4.72 (1H, m, H_3)，5.67 (1H, d, J = 4.8Hz，4_0H)，6.14 (1H，s’ 1-OH) ,6.24 (1H, d,J = 16Hz, H-8’ ) ,6.76 (1H, d, J = 8.0Hz, H_5’)，7.00 (1H, dd, J = 8.0，1.6Hz, H_6’ )，
7.03(lH，d，J = 1.6Hz，H-2’)，7.52(lH，d，J = 16Hz，H_7’ ) ,9.16 (1H，s，Ar-OH)，9.60 (1H,s, Ar-OH)。13C-NMR(DMS0-d6，100MHz) δ ppm:36.1 (C_6)，36.9 (C_2)，63.2 (C_4)，69.0 (C_3)，71.9(C-1)，76.1(C-5),114.2 (C_8，)，115.2(C_2’)，116.2 (C_5，)，121.9 (C_6，)，125.9(C-1，)，146.0(C-7，，4，)，149.0(C_3’ )，166.1(C_9，)，177.6 (C_7)。本發(fā)明的總酚酸，其特征還在于含1，3_ 二 -O-咖啡?？鼘幩?4)0.0l 2% (重量)。該化合物又稱(chēng)萊薊素(cynarin)，具有抑制膽固醇生物合成的作用，已作為降血脂藥物用于臨床(ArzneimitteIforschung.1975,25(8): 1311-4 ；Z Gastroenterol.1973,11(3): 183-6) 0由此推定，該成分對(duì)短葶飛蓬總酚酸的藥效也有重要貢獻(xiàn)。附圖3顯示了該化合物在總酚酸中的存在。發(fā)明人應(yīng)用色譜方法從短葶飛蓬中分離得到了該化合物單體，并測(cè)定了分子結(jié)構(gòu)，其波譜數(shù)據(jù)如下:UV λ max(nm):219，243，309(sh)，324。1H-Nmr(Cd3Cocd·3JoomHz) δ:1.78 (m, dd, J = 13.6, ll.3Hz, H-6a) ,2.26 (m, dd,J = 16.0，3.0Hz, H-2a)，2.42 (1H, dt, J = 13.6，3.0Hz, H_6b)，2.72 (1H, dt，.J = 16.0，
3.0Hz，H-2b)，3.64(lH，dd，J = 9.5,3.0Hz，H_4)，4.21(lH，ddd，J = 11.3,9.5,3.0Hz，H_5)，
5.32 (1H, q, J = 3.0Hz, H_3)，6.09 (1H, d, J = 15.9Hz, H_8’ ) ,6.20 (1H, d, J = 15.9Hz,H-8”)，6.53 (1H, d, J = 8.2Hz, H_5’ ) ,6.59 (1H, dd, J = 8.2，1.8Hz, H_6’ ) ,6.66 (1H, d,J = 8.2Hz, H-5”)，6.77 (1H, dd, J = 8.2，1.8Hz, H_6”)，6.88 (1H, d, J = 1.8Hz, H_2’ )，7.00 (1H, d, J = 1.8Hz, H_2”)，7.39 (1H, d, J = 15.9Hz, H_7’)，7.42 (1H, d, J = 15.9Hz,H-7”)。13C-NMR (DMS0-d6,100MHz) δ ppm:81.1 (C-1)，32.9 (C_2)，73.0 (C_3)，75.3 (C_4)，67.8 (C-5) ,41.3 (C_6) , 174.6 (C_7) , 127.4 (C_l，)，115.1 (C_2，) , 146.5 (C_3，)，149.3(C-4，) ,116.1 (C_5，)，122.0(C_6，)，147.2(C_7，) ,115.5(C_8，)，167.8(C_9，)，127.5(C-1”)，115.4(C-2”)，146.7 (C_3”)，149.7(C_4”)，116.6 (C_5”)，122.9 (C_6”)，147.7(C-7”)，115.4(C-8”)，168.9 (C_9”)。本發(fā)明的總酚酸，其特征還在于進(jìn)一步含1，5_ 二-O-咖啡酰奎寧酸(5)、3，4- 二 -O-咖啡酰奎寧酸(6)、綠原酸(7) ,3-0-咖啡酰奎寧酸⑶、4-0_咖啡?？鼘幩?9)、咖啡酸(10)、丁香酸(11)、原兒茶酸(12)、對(duì)羥基苯甲酸(13)、香草酸(14)、香豆酸(15)、5，7_ 二羥基色原酮(16)、莨菪亭(17)、傘形花內(nèi)酯(18)、七葉內(nèi)酯(19)、多舌飛蓬苷(20)、高黃芩素(21)、芹菜素(22)、槲皮素(23)、圣草酚(24)、芹菜素-7-0-葡萄糖醛酸苷(25)、芹菜素-7-0-葡萄糖苷(26，見(jiàn)附圖2)、芹菜素-7-0-半乳糖醛酸苷(27)、柚皮素-7-0-葡萄糖醛酸苷(28)、圣草酚-7-0-葡萄糖醛酸苷(29)、槲皮素-3-0-半乳糖醛酸苷(30)、槲皮素-7-0-葡萄糖醛酸苷(31)等成分中的至少I(mǎi)種以上成分。這些單體成分均由發(fā)明人從短葶飛蓬中分離得到，經(jīng)波譜分析鑒定了分子結(jié)構(gòu)。現(xiàn)有資料顯示，這些酚酸類(lèi)成分都具有抗氧化等有益于心腦血管的活性，是有效成分。本發(fā)明總酚酸的特征還在于基本不含焦袂康酸(32)。為了消除焦袂康酸可能對(duì)肝臟產(chǎn)生的毒副作用，本發(fā)明制備方法對(duì)焦袂康酸及其葡萄糖苷，即飛蓬苷(33)，進(jìn)行了定向去除，將其殘留量控制在IOppm以下。焦袂康酸遇三氯化鐵會(huì)發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)顯紅色，該反應(yīng)快速靈敏，可用于焦袂康酸的定性和限量檢測(cè)。此外，本發(fā)明總酚酸還含有若干辛酮糖酸與I 2分子咖啡酸、香豆酸或苯甲酸縮合而成的酯類(lèi)成分。總酚酸中一些含羧基的成分，在與酒精接觸過(guò)程中可發(fā)生縮合反應(yīng)，形成乙酯化產(chǎn)物，如芹菜素-7-0-葡萄糖醛酸苷可轉(zhuǎn)化為芹菜素-7-0-葡萄糖醛酸苷-6”-乙酯；3，5-二 -O-咖啡酰奎寧酸可轉(zhuǎn)化為3，5-二 -O-咖啡酰奎寧酸乙酯；導(dǎo)致成分?jǐn)?shù)目增加。酯化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率與接觸酒精的時(shí)間、溫度、pH、濃度等因素有關(guān)，通常次生產(chǎn)物很少，所以基本不會(huì)對(duì)總酚酸的藥效和安全性產(chǎn)生明顯影響。本發(fā)明總酚酸或其鈉鹽得率高達(dá)5%左右，外觀(guān)為棕褐色粉末，不吸潮，易流動(dòng)，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，可單獨(dú)或與其他藥用許可的物質(zhì)組合，方便地制成各種口服固體藥物劑型，如膠囊、片劑、顆粒劑、滴丸、軟膠囊。本發(fā)明總酚酸鈉鹽可溶于水，易吸收，還適合制成液體制齊U，如口服液、噴霧劑。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較具有顯著性差異，突出表現(xiàn)在:①本發(fā)明制備方法使用堿溶酸沉和有機(jī)溶劑脫脂作為主要精制手段，而不是現(xiàn)有技術(shù)所用的硅膠柱層析、大孔樹(shù)脂吸附、聚酰胺吸附、有機(jī)溶劑液-液萃取等手段，操作更簡(jiǎn)單，溶媒消耗更少，更適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)，特別是劑量較大的口服制劑原料生產(chǎn)本發(fā)明總酚酸不僅含有已知的野黃芩苷、3，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩?、4，5- 二 -O-咖啡?？鼘幩岬瘸煞?，還含有現(xiàn)有技術(shù)未曾涉及的多種活性成分，如3-0-咖啡酰-Y -奎尼內(nèi)酯、柚皮素-7-0-葡萄糖醛酸苷、圣草酚-7-0-葡萄糖醛酸苷等，其酚酸類(lèi)成分更齊全，結(jié)構(gòu)更明確；③本發(fā)明總酚酸去除了焦袂康酸和可水解為焦袂康酸的飛蓬苷，因此消除了長(zhǎng)期服藥可能造成肝毒副作用的重大隱患；④本發(fā)明總酚酸去除了大量油脂、揮發(fā)油、色素等親脂性雜質(zhì)，提高了藥品安全性 ’⑤本發(fā)明總酚酸去除了大量糖類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽、皂苷等水溶性雜質(zhì)，其外觀(guān)為粉末狀固體，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不吸潮，作為中 間體可方便地進(jìn)行質(zhì)量控制、儲(chǔ)存、調(diào)配和投料。本發(fā)明總酚酸具有抗血小板聚集、降血脂、改善血液流變性、抑制血栓形成，減輕自由基增高所致血管損傷和組織壞死等藥理作用，且未見(jiàn)明顯毒副作用，因此可用于制備防治缺血性心腦血管疾病的藥物和保健品，市場(chǎng)前景廣闊。


圖1:短葶飛蓬化合物I 25的結(jié)構(gòu)式圖2:短葶飛蓬化合物26 33的結(jié)構(gòu)式圖3:短葶飛蓬總酚酸的HPLC圖譜[色譜條件:色譜柱VP-ODS，150LX4.6 ;流動(dòng)相甲醇-0.1 % TFA 梯度(時(shí)間 O — 40 — 50 — 60min，甲醇 20%—60%— 100%— 100%,0.1% TFA80%— 40%^ 0%^ 0% );流速 lml/min ;波長(zhǎng) 254nm ;柱溫 25°C ]圖4:3-0-咖啡酰-Y -奎尼內(nèi)酯的1H-NMR和UV譜5:1，3- 二 -O-咖啡?？鼘幩岬?H-NMR和UV譜圖下面提供具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步加以說(shuō)明，但這些實(shí)施例僅是范例，不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1短葶飛蓬總酚酸及其鈉鹽的制備和檢驗(yàn)總酚酸制備:取短葶飛蓬干燥全草10kg，切段，用80%酒精提取3次(120L/2h/次)，合并提取液，減壓濃縮，得醇浸膏1.7kg (比重1.2)。往浸膏中加入水8kg使混懸，攪拌下緩慢加入10%氫氧化鈉使充分溶解，調(diào)節(jié)pH值為8，離心，濾過(guò)，濾液用5%硫酸酸化至PH值為2，靜置5小時(shí)，濾集沉淀，用少量水洗至流出液近中性，抽干，40°C真空干燥，研細(xì)，用石油醚(沸程60 90°C)浸潰提取4次(2L/10h/次)，揮干，得棕褐色粉末565g，即為總酚酸?？偡铀徕c鹽制備:取上述總酚酸100g，加入純化水400ml使混懸，攪拌下緩慢加入10%氫氧化鈉溶液，使充分溶解，調(diào)節(jié)pH值7.5±0.5，濾過(guò)，減壓濃縮，噴霧干燥，得棕褐色粉末95g，即為總酚酸鈉鹽。焦袂康酸檢測(cè):取上述總酚酸或其鈉鹽lg，加入氯仿超聲提取3次(10ml/10分鐘/次)，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)覫ml水溶解，滴加三氯化鐵試液I滴，未顯紅色，表明總酚酸樣品基本不含焦袂康酸。含量測(cè)定:用HPLC外標(biāo)法同步測(cè)定野黃芩苷等5種成分的含量。色譜條件:色譜柱VP-ODS150LX 4.6 ;流動(dòng)相乙腈-0.1 % TFA梯度洗脫(時(shí)間O — 40min，乙腈10%—50%，
0.1%TFA90%- 50% )為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為325nm ;流速lml/min ;柱溫30°C。樣品溶液:8mg/lml甲醇溶液；對(duì) 照品:各50 μ g/lml甲醇溶液。進(jìn)樣體積:10μ I。測(cè)定結(jié)果:里予黃岑苷13.5% ;4，5_ 二 -O-咖啡酰奎寧酸2.6% ;3，5_ 二 -O-咖啡?？鼘幩?.1% ;3_0_咖啡酰-Y-奎尼內(nèi)酉旨0.08% ;1，3-二-O-咖啡?？鼘幩?.15%。實(shí)施例2短葶飛蓬總酚酸片劑的制備取實(shí)施例1所得總酚酸60g，加入淀粉80g、糊精5g，混合均勻，加入10%淀粉漿制軟材，用14目尼龍篩網(wǎng)制粒，60 70°C通風(fēng)干燥，16目篩整粒，加硬脂酸鎂1.5g、羧甲基纖維素鈉5g混勻，壓制成1000片，包衣即得。每片含總酚酸60mg。實(shí)施例3短葶飛蓬總酚酸膠囊的制備取實(shí)施例1所得總酚酸110g，與淀粉68g、硬脂酸鎂2g混勻，過(guò)20目篩，填充膠囊1000粒，拋光，即得。每粒含總酚酸11Omg。實(shí)施例4短葶飛蓬總酚酸滴丸的制備取實(shí)施例1所得總酚酸10g，投入32g加熱熔融的聚乙二醇6000中，攪拌至溶解，轉(zhuǎn)移至貯液瓶中，密閉并保溫在80 90°C，調(diào)節(jié)滴丸機(jī)液滴定量閥門(mén)，由上往下滴入10 15°C的液狀石蠟中，共制1000粒，將形成的滴丸浙干并擦除液狀石蠟，干燥即得。每粒含總酹酸10mg。實(shí)施例5短葶飛蓬總酚酸軟膠囊的制備取PEG400280g，置適宜容器內(nèi)，加入PEG600010g，水浴加熱至PEG6000溶解，攪勻，加入甘油18g，加入實(shí)施例1所得總酚酸110g，用膠體磨研磨成均勻膏體，轉(zhuǎn)移至軟膠囊機(jī)的貯料桶，用0.3ml的模具壓制成軟膠囊1000粒，定型，洗去表面潤(rùn)滑劑，于20 30 %相對(duì)濕度、28°C條件下干燥，即得。每粒含總酚酸llOmg。
實(shí)施例6短葶飛蓬總酚酸與三七皂苷的復(fù)方膠囊的制備取實(shí)施例1所得總酚酸IOOg和符合中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)的市售三七總皂苷20g，與藥用淀粉80g、硬脂酸鎂2g混勻，過(guò)20目篩，填充膠囊1000粒，拋光，即得。每粒含總酚酸lOOmg，含三七總皂苷20mg。實(shí)施例7短葶飛蓬總酚酸急性毒性試驗(yàn)選用 體重在18 22g的健康小鼠,采用灌胃給藥方式,一次性給予總酹酸14g/kg,連續(xù)觀(guān)察7天，結(jié)果未見(jiàn)動(dòng)物出現(xiàn)明顯毒副反應(yīng)及死亡。該劑量為臨床擬用劑量的400倍以上。實(shí)施例8短葶飛蓬總酚酸長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)取大鼠180只，體重70 90g，雌雄各半，隨機(jī)分成四組:對(duì)照組50只、大劑量組50只、中劑量組40只、低劑量組40只，每組雌雄各半。三個(gè)劑量組的給藥劑量分別為3g/kg、1.8g/kg、0.6g/kg，藥物臨用前加土溫-80混懸，灌胃給藥，每日一次，連續(xù)六個(gè)月。對(duì)照組灌服等量土溫-80。實(shí)驗(yàn)期間每天觀(guān)察記錄動(dòng)物一般狀態(tài)，每周稱(chēng)量動(dòng)物體重一次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)各組動(dòng)物進(jìn)行心電圖、血液、生化及病理學(xué)檢查。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第三個(gè)月時(shí)處死大劑量組和對(duì)照組動(dòng)物各10只；在第六個(gè)月時(shí)各組處死30只，保留10只，停藥一個(gè)月觀(guān)察藥物可能有的毒性影響和恢復(fù)情況；第七個(gè)月時(shí)全部處死。結(jié)果顯示，大鼠灌服短葶飛蓬總酚酸六個(gè)月后，三個(gè)劑量組動(dòng)物的活動(dòng)、食欲、大小便及生長(zhǎng)發(fā)育均無(wú)顯著性變化；各給藥組動(dòng)物的血象、肝腎功能、心電圖及主要臟器指標(biāo)與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(經(jīng)t檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)，P > 0.05)，且均在正常生理范圍內(nèi)。病理學(xué)檢查表明，對(duì)照組和三個(gè)給藥組動(dòng)物各臟器組織結(jié)構(gòu)均未見(jiàn)明顯病理性改變。實(shí)施例9短葶飛蓬總酚酸對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥家兔血脂的影響取基礎(chǔ)飼料穩(wěn)定2周的家兔，按體重隨機(jī)分為4組(生理鹽水組、總酚酸I組、總酚酸II組、脂必妥組)，各組動(dòng)物在給予基礎(chǔ)飼料的同時(shí)，灌胃給予膽固醇0.2g/kg，一日一次；給藥組每天給藥一次；對(duì)照組給予生理鹽水；連續(xù)8周，于建模后2、4、6、8周由耳靜脈取血，3000rpm離心，分離血清備測(cè)。結(jié)果顯示，總酚酸能顯著降低高脂血癥家兔的甘油三脂和血清膽固醇水平(表1、2)。表1:總酚酸對(duì)甘油三酯的影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種短葶飛蓬[Erigeron breviscapus (Vant) Hand-Mazz]總酹酸及其鈉鹽的制備方法，其特征在于包括如下操作步驟: A.藥材用含水酒精、甲醇或水之一，優(yōu)選濃度為60% 95%的酒精，回流提取2 5次，合并提取液，減壓濃縮，得浸膏； B.浸膏用2 15倍量水混懸，攪拌下緩慢加入稀氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值7.0 8.5,離心，濾過(guò)； C.濾液用稀鹽酸或稀硫酸調(diào)pH值I 3，靜置，分取沉淀，水洗至pH近中性，干燥，粉碎； D.沉淀用親脂性有機(jī)溶劑脫脂，揮干，得總酚酸； E.總酚酸進(jìn)一步用稀氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉溶液溶解，調(diào)pH近中性，濾過(guò)，濃縮，干燥，得總酚酸鈉鹽。
2.權(quán)利要求1所述制備方法中的脫脂，其特征是用正己烷、環(huán)己烷、石油醚或汽油之一，優(yōu)選沸程為60 90°C的石油醚，在常溫或加熱下對(duì)總酚酸粗品進(jìn)行浸潰或回流提取2 10次。
3.權(quán)利要求1所述總酚酸，其特征在于含野黃芩苷4% 20%(重量)、3，5_ 二-O-咖啡?？鼘幩?.1 % 5% (重量)和4，5-二-O-咖啡?？鼘幩?.5% 8% (重量)。
4.權(quán)利要求1所述總酚酸，其特征在于含3-0-咖啡酰-Y-奎尼內(nèi)酯0.01 % I % (重量)和1，3-二-O-咖啡酰奎寧酸0.01 2% (重量)。
5.權(quán)利要求1所述總酚酸，其特征在于焦袂康酸的含量低于lOppm。
6.權(quán)利要求1所述總酚酸或其鈉鹽，單獨(dú)或與其它藥用許可的物質(zhì)組合，在制備防治缺血性心腦血管疾病的藥品或保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種藥用植物提取物及其制備方法和用途，它是以菊科植物短葶飛蓬為原料，經(jīng)提取、濃縮、堿溶酸沉、脫脂等步驟得到的一種粉末狀總酚酸或其鈉鹽。該提取物富集了各種酚酸類(lèi)藥效物質(zhì)，并充分去除焦袂康酸、糖類(lèi)、油脂、皂苷等雜質(zhì)，其有效成分全面，不吸潮，可單獨(dú)或與其它藥用許可的物質(zhì)組合，用于制備防治缺血性心腦血管疾病的藥品和保健品。
文檔編號(hào)A61K36/28GK103110680SQ20131006228
公開(kāi)日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月27日
發(fā)明者黃睿, 李瀟, 楊石平 申請(qǐng)人:黃睿