專利名稱：五味子蜂花粉有效部位及其在預(yù)防肝臟損傷中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及五味子蜂花粉有效部位及其提取方法和在預(yù)防四氯化碳致肝臟損傷中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥和功能性食品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肝臟是人體重要的物質(zhì)代謝器官，在碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素等營(yíng)養(yǎng)素的吸收、轉(zhuǎn)化、貯存、分泌及排泄方面起著重要作用。肝臟也是人體重要的保護(hù)器官，具有解毒和吞噬功能，尤其對(duì)很多外來(lái)的化學(xué)性藥物具有代謝和生物轉(zhuǎn)化作用，通過(guò)新陳代謝將一些有毒的外源化合物代謝成無(wú)毒或毒性較小、易于排泄的物質(zhì)。然而，一些藥物經(jīng)肝臟代謝后可能轉(zhuǎn)化成毒性和蓄積性更大的物質(zhì)，從而影響肝臟的功能，甚至?xí)鸶闻K病變。大量研究表明，一些有機(jī)小分子對(duì)肝臟有一定損害作用，例如乙醇、甲醇、氯仿及四氯化碳等，特別是長(zhǎng)期從事有機(jī)小分子生產(chǎn)和科研的人員，很容易通過(guò)呼吸吸入大量有機(jī)小分子，從而對(duì)肝臟造成化學(xué)性損傷。目前，針對(duì)化學(xué)性肝臟損傷并無(wú)特效藥，一些對(duì)脂肪肝有效的西藥可能對(duì)肝臟也有一定的毒性，針對(duì)化學(xué)性肝臟損傷保護(hù)的功能性食品稀少，因此，從天然食品資源中尋找對(duì)化學(xué)性肝臟損傷有保護(hù)作用的產(chǎn)品迫在眉睫。蜂花粉是蜜蜂采集顯花植物花蕊中的花藥，然后加入自身腺體分泌物和花蜜，經(jīng)混合而成的一種不規(guī)則扁圓形狀物。蜂花粉被譽(yù)為“全能營(yíng)養(yǎng)食品”，除了含有多種營(yíng)養(yǎng)素夕卜，還含有酚類化合物、氨基酸、生物酶、多糖及留醇等生物活性化合物，具有抗氧化、增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)血脂、預(yù)防和治療前列腺炎及防輻射等作用。目前直接服用蜂花粉存在服用量大的不足。

發(fā)明內(nèi)容
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本發(fā)明的目的是提供一種五味子蜂花粉有效部位。本發(fā)明另一目的是提供上述五味子蜂花粉有效部位的提取方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述五味子蜂花粉有效部位在制備預(yù)防四氯化碳致小鼠肝臟損傷藥物或保健食品中的用途。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)過(guò)程如下:
五味子蜂花粉有效部位，該有效部位通過(guò)乙醇提取五味子蜂花粉獲得，其活性成份組成及含量為:沒(méi)食子酸15.78±1.64 mg/kg，原兒茶酸54.78±5.09 mg/kg，香草酸64.21 ±5.13 mg/kg，/7-香豆酸 57.32 ±5.25 mg/kg，槲皮素 273.63 ±20.84 mg/kg，橙皮苷741.56 ±76.84 mg/kg，堪菲醇 387.34 ±35.65 mg/kg，高良姜素 487.35 ±47.24 mg/kg。上述五味子蜂花粉有效部位采用如下方法提取得到:
(1)破壁五味子蜂花粉用8-15倍重量，體積比為50-95%的乙醇提取2-3次，提取溫度為50-80°C，每次提取5-15小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾；
(2)將濾液減壓濃縮到無(wú)醇味，溶于水，用AB-8型大孔樹(shù)脂吸附，體積比為50-95%乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮到無(wú)醇味，溶于水，再用XAD-2型大孔樹(shù)脂吸附，體積比為50-70%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮至干即可。上述五味子蜂花粉有效部位可用于制備預(yù)防或治療四氯化碳致肝臟損傷藥物或保健食品。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，五味子蜂花粉抗氧化活性高于已知的所有商品化蜂花粉，有望開(kāi)發(fā)成一種具有競(jìng)爭(zhēng)力的預(yù)防化學(xué)性肝臟損傷的功能性食品或護(hù)肝中藥。五味子蜂花粉有效部位添加輔料可以制成各種可接受的劑型，包括但不限于硬膠囊劑、顆粒劑、片劑、軟膠囊劑等劑型。本發(fā)明五味子蜂花粉有效部位經(jīng)動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，具有預(yù)防四氯化碳致肝臟損傷的作用，可用于制備預(yù)防四氯化碳致肝臟損傷的藥物或保健食品。


圖1空白對(duì)照組(正常組)；
圖2模型對(duì)照組；
圖3蜂花粉組；
圖4蜂花粉提取物小劑量組；
圖5蜂花粉提取物大劑量組。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:五 味子蜂花粉有效部位的制備
取破壁五味子蜂花粉IOOOgJp 95%乙醇8000ml，60°C回流提取8小時(shí)，共提取2次，合并兩次提取液、過(guò)濾，將濾液減壓濃縮，濃縮溫度為40 °C，濃縮到無(wú)醇味，并呈一定體積，用水轉(zhuǎn)移，加熱溶解。將溶解物用AB-8樹(shù)脂吸附，用體積比為50%乙醇洗脫，洗脫物減壓回收乙醇至醇味，并呈一定體積，用水轉(zhuǎn)移，加熱溶解，再用XAD-2型樹(shù)脂吸附，用體積比為50%的乙醇洗脫物濃縮至干，即為本發(fā)明有效部位。其活性成份組成及含量為:沒(méi)食子酸15.78 ± 1.64 mg/kg，原兒茶酸54.78 ±5.09mg/kg,香草酸 64.21 ±5.13 mg/kg,香豆酸 57.32 ±5.25 mg/kg,槲皮素 273.63 ±20.84mg/kg,橙皮苷 74L56±76.84 mg/kg,堪菲醇 387.34±35.65 mg/kg,高良姜素487.35±47.24 mg/kg。實(shí)施例2:五味子蜂花粉有效部位的制備
取破壁五味子蜂花粉IOOOgJn 75%乙醇10000ml，70°C回流提取6小時(shí)，共提取2次，合并兩次提取液、過(guò)濾，將濾液減壓濃縮，濃縮溫度為40 °C，濃縮到無(wú)醇味，并呈一定體積，用水轉(zhuǎn)移，加熱溶解。將溶解物用AB-8樹(shù)脂吸附，用體積比為70%乙醇洗脫，洗脫物減壓回收乙醇至醇味，并呈一定體積，用水轉(zhuǎn)移，加熱溶解，再用XAD-2型樹(shù)脂吸附，用體積比為60%的乙醇洗脫物濃縮至干，即為本發(fā)明有效部位。其活性成份組成及含量為:沒(méi)食子酸15.78 ± 1.64 mg/kg，原兒茶酸54.78 ±5.09mg/kg,香草酸 64.21 ±5.13 mg/kg,香豆酸 57.32 ±5.25 mg/kg,槲皮素 273.63 ±20.84mg/kg,橙皮苷 74L56±76.84 mg/kg,堪菲醇 387.34±35.65 mg/kg,高良姜素487.35±47.24 mg/kg。
實(shí)施例3:五味子蜂花粉有效部位的制備
取破壁五味子蜂花粉IOOOgJp 55%乙醇12000ml，50°C回流提取12小時(shí)，共提取2次，合并兩次提取液、過(guò)濾，將濾液減壓濃縮，濃縮溫度為40 °C，濃縮到無(wú)醇味，并呈一定體積，用水轉(zhuǎn)移，加熱溶解。將溶解物用AB-8樹(shù)脂吸附，用體積比為80 %乙醇洗脫，洗脫物減壓回收乙醇至醇味，并呈一定體積，用水轉(zhuǎn)移，加熱溶解，再用XAD-2型樹(shù)脂吸附，用體積比為60%的乙醇洗脫物濃縮至干，即為本發(fā)明有效部位。其活性成份組成及含量為:沒(méi)食子酸15.78 ± 1.64 mg/kg，原兒茶酸54.78 ±5.09mg/kg,香草酸 64.21 ±5.13 mg/kg,香豆酸 57.32 ±5.25 mg/kg,槲皮素 273.63 ±20.84mg/kg,橙皮苷 74L56±76.84 mg/kg,堪菲醇 387.34±35.65 mg/kg,高良姜素487.35±47.24 mg/kg。實(shí)施例4:五味子蜂花粉有效部位的制備
破壁五味子蜂花粉加10倍重量積比50%的乙醇溶液，在50°C攪拌提取10小時(shí)，過(guò)濾，將濾渣再用相同重量和濃度的乙醇提取I次，合并兩次提取液，40°C減壓濃縮回收乙醇直至無(wú)醇味。將提取液轉(zhuǎn)入水中，將溶解物用AB-8樹(shù)脂吸附，用體積比為70%乙醇洗脫，洗脫物減壓回收乙醇至醇味，并呈一定體積，用水轉(zhuǎn)移，加熱溶解，再用XAD-2型樹(shù)脂吸附，用體積比為70%的乙醇洗脫，將洗脫物濃縮至干為五味子蜂花粉有效部位。其活性成份組成及含量為:沒(méi)食子酸15.78 ± 1.64 mg/kg，原兒茶酸54.78 ±5.09mg/kg,香草酸 64.21 ±5.13 mg/kg,香豆酸 57.32 ±5.25 mg/kg,槲皮素 273.63 ±20.84mg/kg,橙皮苷 74L56±76.84 mg/kg,堪菲醇 387.34±35.65 mg/kg,高良姜素487.35±47.24 mg/kg。實(shí)施例5:藥效學(xué)研究 (I)試驗(yàn)材料: 受試物為上述提取物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為雄性昆明種小白鼠，體重18-22克。取小白鼠72只，隨即分6組，每組12只，第一、二組為正常對(duì)照組和模型組，灌胃蒸餾水20 g/kg體重，第三組為五味子蜂花粉組，灌胃20g/kg ;第四、五組為實(shí)驗(yàn)組，分別灌胃五味子蜂花粉提取物lg/kg和3 g/kg體重，在實(shí)驗(yàn)第42天，正常灌胃后2小時(shí)，對(duì)照組腹腔注射花生油0.1 mL/10g體重，模型組和實(shí)驗(yàn)組腹腔注射0.2%四氯化碳花生油溶液0.1 mL/10 g體重。所有動(dòng)物斷糧不斷水，16小時(shí)后摘眼球采血，頸部脫臼處死，取肝臟測(cè)定。血清中谷丙、谷草轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定:采集全血，3000轉(zhuǎn)每分鐘離心，分離血清，用試劑盒測(cè)定谷丙(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)。肝臟中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的測(cè)定:取右葉肝臟制備10%肝勻漿，4°C 2500轉(zhuǎn)離心20分鐘，上清液用于測(cè)定丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶。肝臟組織切片:取左葉肝臟約3克，于10%福爾馬林溶液中浸泡24小時(shí)以上，修整后石蠟包埋，切出約5微米厚度的薄片，脫蠟，脫水，HE染色，觀察肝臟組織的壞死情況，包括總細(xì)胞壞死，炎細(xì)胞侵潤(rùn)等，肝竇充血，脂肪變性，氣球樣變。如圖1所示，肝小葉結(jié)構(gòu)紋理清晰，細(xì)胞索排列整齊，肝竇正常。圖2模型對(duì)照組顯示，炎細(xì)胞大量浸潤(rùn)，肝細(xì)胞廣泛壞死，壞死灶分布于肝小葉中央靜脈周圍和肝被膜下，肝竇增加，肝細(xì)胞呈氣球樣變。圖3蜂花粉組顯示，肝組織損傷沒(méi)有明顯減輕，出現(xiàn)多灶性肝細(xì)胞壞死伴有炎癥。圖4蜂花粉提取物小劑量組顯示，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝竇比模型組縮小，細(xì)胞索排列較整齊，大多數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰。圖5蜂花粉提取物大劑量組顯示，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，接近正常狀態(tài)，多數(shù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰。(2)結(jié)果:
權(quán)利要求
1.五味子蜂花粉有效部位，其特征在于該有效部位通過(guò)乙醇提取五味子蜂花粉獲得，其活性成份組成及含量為:沒(méi)食子酸15.78±1.64 mg/kg，原兒茶酸54.78±5.09 mg/kg，香草酸 64.21 ±5.13 mg/kg,香豆酸 57.32 ±5.25 mg/kg,槲皮素 273.63 ±20.84 mg/kg,橙皮苷 741.56 ±76.84 mg/kg，堪菲醇 387.34 ±35.65 mg/kg，高良姜素 487.35 ±47.24 mg/kg ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的五味子蜂花粉有效部位，其特征在于該有效部位采用如下方法提取得到: (1)破壁五味子蜂花粉用8-15倍重量，體積比為50-95%的乙醇提取，合并提取液，過(guò)濾； (2)將濾液減壓濃縮到無(wú)醇味，溶于水，用AB-8型大孔樹(shù)脂吸附，體積比為50-95%乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮到無(wú)醇味，溶于水，再用XAD-2型大孔樹(shù)脂吸附，體積比為50-70%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮至干即可。
3.權(quán)利要求1所述的五味子蜂花粉有效部位在制備預(yù)防或治療四氯化碳致肝臟損傷藥物中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述的五味子蜂花粉有效部位在制備預(yù)防或治療四氯化碳致肝臟損傷保健食品中的應(yīng)用。`
全文摘要
本發(fā)明涉及五味子蜂花粉有效部位及其提取方法和在預(yù)防肝臟損傷中的應(yīng)用。該有效部位通過(guò)乙醇提取五味子蜂花粉獲得，其活性成份組成及含量為沒(méi)食子酸15.78±1.64mg/kg，原兒茶酸54.78±5.09mg/kg，香草酸64.21±5.13mg/kg，p-香豆酸57.32±5.25mg/kg，槲皮素273.63±20.84mg/kg，橙皮苷741.56±76.84mg/kg，堪菲醇387.34±35.65mg/kg，高良姜素487.35±47.24mg/kg。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，五味子蜂花粉抗氧化活性高于已知的所有商品化蜂花粉，可用于制備預(yù)防四氯化碳致肝臟損傷的藥物或保健食品。
文檔編號(hào)A61K31/352GK103181930SQ20131008352
公開(kāi)日2013年7月3日 申請(qǐng)日期2013年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月16日
發(fā)明者曹煒, 程妮, 雷興生, 高慧, 鄧建軍 申請(qǐng)人:西北大學(xué), 陜西蜂產(chǎn)品工程技術(shù)研究中心