專利名稱：呼吸道合胞病毒F蛋白與Fc的融合蛋白及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及呼吸道合胞病毒(RSV)抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fe的融合蛋白(F-Fc)，及其作為RSV亞單位疫苗的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是在世界范圍內(nèi)存在并引起嬰幼兒下呼吸道感染的主要病原體之一，RSV感染可引起一系列的呼吸道疾病，從簡(jiǎn)單的感冒癥狀到嚴(yán)重的下呼吸道感染及并發(fā)癥。RSV的首次感染多發(fā)生于2月齡的嬰兒，感染率高達(dá)83%，而且感染后不會(huì)產(chǎn)生持久的免疫力，有50%的嬰幼兒會(huì)在首次感染后的I 2年內(nèi)再次感染。同時(shí)，RSV在青少年、老年人以及免疫缺陷人群中也是一種常見且嚴(yán)重的病原體。RSV屬于副粘病毒科、肺炎病毒屬的單股-負(fù)鏈-非節(jié)段性RNA病毒，其核心是核衣殼包裹的RNA，外層包被有出芽時(shí)來自宿主的脂質(zhì)雙分子層以及嵌合其中的跨膜蛋白。RSV的RNA共編碼10種蛋白質(zhì):三個(gè)跨膜蛋白(G、F、SH)、兩個(gè)基質(zhì)蛋白(M、M2)、三個(gè)核衣殼蛋白(N、P、L)和兩個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2)。其中三種跨膜蛋白與免疫保護(hù)以及致病毒力密切相關(guān)，分別是粘附糖蛋白(G)、膜融合蛋白(F)以及小疏水蛋白(SH)?？笹蛋白抗體可以阻止RSV向宿主細(xì)胞的吸附，抗F蛋白抗體可以阻止RSV與宿主細(xì)胞融合，這使得G蛋白和F蛋白被認(rèn)為是RSV的主要抗原。最新的研究顯示，F(xiàn)蛋白是RSV的最重要的保護(hù)性抗原，它是保護(hù)性中和抗體的重要靶位點(diǎn)，同時(shí)也有證據(jù)表明，F(xiàn)蛋白還是⑶8+T細(xì)胞的一個(gè)重要靶位點(diǎn)。G蛋白有一個(gè)疏水的N末端，通過該N末端把G蛋白錨定在病毒脂質(zhì)包膜上。同時(shí)，G蛋白還存在另外一種分泌型G蛋白，分泌型G蛋白缺少了N末端的65個(gè)氨基酸殘基，只 保留高度糖基化的胞外區(qū)，分泌型G蛋白有可能導(dǎo)致免疫應(yīng)答向Th2方向發(fā)展。眾所周知，疫苗是防控傳染病的最有效的手段，但至今還沒有被批準(zhǔn)的疫苗用于RSV免疫防治。在上世紀(jì)70年代，美國首次推出福爾馬林滅活RSV疫苗(F1-RSV疫苗)，并接種2 7個(gè)月的嬰幼兒，有80%的嬰幼兒出現(xiàn)了病情加重，而且有2例死亡，發(fā)現(xiàn)死者肺部出現(xiàn)了大量的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤和炎癥因子，使得Thl/Th2平衡紊亂。進(jìn)一步研究表明F1-RSV引起了過高的Th2免疫應(yīng)答，造成⑶4+T細(xì)胞激活和增殖后分泌一些炎癥與趨化因子，加速了肺部的嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的產(chǎn)生和浸潤，并產(chǎn)生低親和力的針對(duì)G蛋白等的保護(hù)性抗體。F1-RSV也損傷了 CD8+T細(xì)胞活性和功能，最終導(dǎo)致RSV清除過程緩慢、肺部損傷及病毒大量傳播，F(xiàn)1-RSV疫苗以失敗而告終。因此，尋找新的技術(shù)策略，是研制安全、有效RSV疫苗的重要任務(wù)。目前，國內(nèi)外學(xué)者開展了溫度敏感型RSV弱毒疫苗、攜帶RSVF蛋白的重組人/牛副流感病毒活載體疫苗、重組RSV F蛋白的亞單位疫苗及佐劑與免疫途徑等一系列研究，其目的是誘導(dǎo)更強(qiáng)的保護(hù)性中和抗體，改變免疫應(yīng)答類型?？贵w的新生受體(neonatal Fe receptor,FcRn)廣泛分布于上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞等細(xì)胞表面，其主要作用是:與抗體Fe結(jié)合后，保護(hù)抗體免于降解、延長(zhǎng)抗體半衰期，將抗體從母體通過胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)至胎兒。本發(fā)明將RSV抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fe融合，形成F-Fc融合蛋白，滴鼻免疫后，融合蛋白F-Fc通過Fe與FcRn結(jié)合,隨FcRn的遷移將融合蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至體內(nèi)；通過抗原遞呈細(xì)胞將抗原F遞呈至免疫細(xì)胞，從而有效地激活粘膜免疫、體液免疫以及偏向于“Thl型”并且“Thl/Th2平衡”的T細(xì)胞免疫，有效抵抗RSV感染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種RSV抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fe的融合蛋白(F-Fc)的制備方法，及其作為RSV亞單位疫苗的應(yīng)用，克服福爾馬林滅活疫苗(F1-RSV疫苗)免疫后產(chǎn)生低中和活性抗體以及偏向Th2型免疫應(yīng)答的弊病。本發(fā)明解決技術(shù)問題采用以下的技術(shù)方案:本發(fā)明提供的一種融合蛋白F-FC，是一種呼吸道合胞病毒抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fe的融合蛋白，該蛋白含有RSV的F蛋白與人IgGl恒定區(qū)Fe片段，其中編碼RSV F蛋白的基因序列為SEQ ID NO:1，氣基酸序列為SEQ ID NO:2 ;編碼抗體IgGl恒定區(qū)Fe片段的基因序列為SEQ ID NO:3，氣基酸序列為SEQ ID NO:4。所述編碼該蛋白的基因序列為SEQ ID NO:5，氨基酸序列為SEQ ID NO:6。本發(fā)明提供的上述呼吸道合胞病毒抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fe的融合蛋白，其通過以下方法得到:首先構(gòu)建含有SEQ ID NO:5基因序列的真核表達(dá)載體，然后轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，表達(dá)該融合蛋白，最后采用ProteinA親和層析,分離得到。

本發(fā)明提供的上述呼吸道合胞病毒抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fe的融合蛋白，其用作RSV的亞單位疫苗。所述的亞單位疫苗,是一種滴鼻液藥品，該滴鼻液藥品可激起針對(duì)RSV的特異性粘膜免疫、體液免疫以及偏向于“Thl型”并且“Thl/Th2平衡”的T細(xì)胞免疫，用于預(yù)防RSV的感染。術(shù)語“融合基因”是指利用DNA重組技術(shù)將兩個(gè)不同的基因拼接起來的組合基因。術(shù)語“融合蛋白”是指利用DNA重組技術(shù)得到的兩個(gè)不同的基因組合后的表達(dá)產(chǎn)物，即融合基因的表達(dá)產(chǎn)物。術(shù)語“Thl偏愛性免疫應(yīng)答”特征在于生成IL-2和IFN-Y的⑶4+T輔助細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)，分泌或存在IL-2和IFN- Y。比較而言，“Th2偏愛性免疫應(yīng)答”特征在于生成IL-4、IL-5和IL-13的⑶4+T輔助細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下的主要突出效果和優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明的創(chuàng)新在于將RSV抗原蛋白F與抗體效應(yīng)區(qū)Fe融合，構(gòu)建成融合蛋白F-Fc,形成抗原-抗體復(fù)合物。融合蛋白F-Fc含有的抗體效應(yīng)區(qū)Fe與分布于鼻腔粘膜、呼吸道粘膜等處上皮細(xì)胞的Fe新生受體(FcRn)結(jié)合，利用FcRn將F-Fc轉(zhuǎn)運(yùn)到體內(nèi)；隨后，F(xiàn)e與分布在粘膜層下的抗原遞呈細(xì)胞表面的Fe受體(FcRs)相結(jié)合，將抗原F呈遞至免疫細(xì)胞，激活免疫應(yīng)答。本發(fā)明提出的這種新型融合蛋白F-Fc，是一種RSV抗原與抗體的復(fù)合物，作為RSV的亞單位疫苗應(yīng)用，具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):首先，因?yàn)槿诤系鞍譌-Fc利用分布于鼻腔粘膜、呼吸道粘膜等處上皮細(xì)胞的Fe新生受體(FcRn)之間的相互作用而轉(zhuǎn)運(yùn)至體內(nèi)，所以可經(jīng)粘膜途徑，進(jìn)行滴鼻免疫，不需要進(jìn)行注射，是一種無針疫苗(no-needle vaccine);其次，融合蛋白F-Fc與抗原遞呈細(xì)胞表面的Fe受體結(jié)合，將抗原F呈遞至免疫細(xì)胞，刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)RSV的特異性抗體IgA (圖2-圖4)，激活粘膜免疫；同時(shí)，刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)RSV F蛋白的的特異性中和抗體IgG(圖5)，激活體液免疫；第三，與福爾馬林滅活疫苗相比，最大優(yōu)勢(shì)在于融合蛋白F-Fc激活的細(xì)胞免疫產(chǎn)生較多的IFN-Y和IL2，較少的IL4(圖6)，更偏向于“Thl型”，不引起免疫后病毒感染增強(qiáng)。


圖1為用免疫印跡(WesternBlot)檢測(cè)CHO細(xì)胞表達(dá)的融合蛋白F-Fc和重組蛋白F。圖2為用F-Fc、F和PBS混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，檢測(cè)小鼠唾液中的IgA抗體滴度(5只小鼠的均值)。圖3為用F-Fc、F和PBS混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，檢測(cè)小鼠肺洗液中的IgA抗體滴度(5只小鼠的均值)。圖4為用F-Fc、F和PBS混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，檢測(cè)小鼠鼻洗液中的IgA抗體滴度(5只小鼠的均值)。圖5為用F-Fc、F和PB S混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，檢測(cè)小鼠血清IgG的滴度(5只小鼠的均值)。圖6為用F_Fc、F和PBS混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，處死小鼠，分離培養(yǎng)脾細(xì)胞，用F蛋白刺激，用ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IFN-Y、IL-2和IL_4(5只小鼠的均值)。圖7為用F-Fc、F和PBS混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，用RSV感染小鼠，5天后，用定量PCR測(cè)定鼻洗液、肺洗液和肺中RSV滴度。圖8為用F-Fc混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，用RSV感染小鼠，5天后，肺部病理切片。圖9為用F混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，用RSV感染小鼠，5天后，肺部病理切片。圖10為用PBS混合佐劑CpG免疫小鼠，第三次免疫2周后，用RSV感染小鼠，5天后，肺部病理切片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明，以下實(shí)施例是在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1:克隆RSV F蛋白的基因在培養(yǎng)細(xì)胞的6孔板中每孔接種2 X IO6個(gè)HEp-2細(xì)胞，培養(yǎng)12 14h，細(xì)胞長(zhǎng)成單層。移除培養(yǎng)基，按照50TCID5(I接種500ul病毒到孔板中，37°C孵育lh，然后移除病毒液，每孔加入2ml含有2%胎牛血清(FBS)的新鮮MEM培養(yǎng)基，37 °C培養(yǎng)48h。用TrizolReagent (Invitrogen公司)抽提細(xì)胞總RNA,得到的細(xì)胞總RNA溶解于50ul無RNA酶的水中。然后用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒(Promega公司)，采用隨機(jī)引物,逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。根據(jù)RSV的基因序列(GenBank Accession:AY911262.1)，設(shè)計(jì)F基因的正、反向引物:正向引物GGGGTACCATGGGATCTAAGGTCCTG (橫線標(biāo)注為Kpn I酶切位點(diǎn))；反向引物CCGCTCGAGCTAATTTGTGGTTGAT (橫線標(biāo)注為XhoI酶切位點(diǎn))。以cDNA為模板，使用KOD DNA聚合酶(MBI公司)，PCR擴(kuò)增得到F基因片段。瓊脂糖凝膠電泳回收F基因片段，用KpnI和XhoI雙酶切F基因和載體pcDNA3.1 (+)，回收后將F基因與載體pcDNA3.1 (+)連接起來，構(gòu)建成載體pcDNA3.1 (+) -F，測(cè)序鑒定載體序列正確。實(shí)施例2.克隆人抗體IgGl恒定區(qū)Fe基因從新鮮的血衆(zhòng)中分離B細(xì)胞，用Trizol Reagent (Invitrogen公司)抽提細(xì)胞總RNA，得到的細(xì)胞總RNA溶解于50ul無RNA酶的水中。然后用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒(Promega公司)以oligo(dT)為引物,逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。設(shè)計(jì)Fe基因的正、反向引物:正向引物GAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTC ;反向引物TTTACCCGGAGACAGGGAGAGGC。以 cDNA 為模板，用 KOD DNA 聚合酶(MBI 公司)PCR 擴(kuò)增得到Fe基因片段。瓊脂糖凝膠電泳回收Fe基因片段,連接到pGEM-T-easy載體(Promega公司)上，構(gòu)建成載體pGEM-T-easy-Fc，測(cè)序鑒定載體序列正確。實(shí)施例3.構(gòu)建RSV F基因與人抗體IgGl恒定區(qū)Fe基因的融合基因設(shè)計(jì)引物，利用PCR將RSV F基因與人抗體IgGl恒定區(qū)Fe基因連接起來，構(gòu)建成F-Fc融合的形式。具體方法如下:首先以F基因?yàn)槟０?，用正向引?GGGGTACCATGGGATCTAAGGTCCTG (描線標(biāo)注為KpnI酶切位點(diǎn))和反向引物:CCGCCTCCACCATTTGTGGTTGAT進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在F基因3’端延伸一段與Fe基因重疊的序列；同時(shí)，以Fe基因?yàn)槟０?，用正向引?GGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGATCAGAGCCCAAATC 和反向引物:CCGCTCGAGTCATTTACCCGGAGACAG (橫線標(biāo)注為 XhoI 酶切位點(diǎn))進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在Fe基因5’端延伸一段與F基因重疊的序列；回收PCR得到的基因片段，將二者按摩爾比1:1混合作為模板，用正向引物:GGGGTACCATGGGATCTAAGGTCCTG和反向引物:CCGCTCGAGTCATTTACCCGGAGACAG進(jìn)行PCR，將兩段基因序列拼接成一個(gè)融合基因F-Fc?；厥誔CR得到的融合基因F-Fc片段，用KpnI和XhoI雙酶切融合基因F-Fc和載體pcDNA3.1(+)，回收后將融合基因F-Fc與載體pcDNA3.1 (+)連接起來，構(gòu)建成載體pcDNA3.1 (+)-F-Fc，測(cè)序鑒定載體序列正確。實(shí)施例4.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)融合蛋白F-Fc的CHO細(xì)胞株
將30ml懸浮培養(yǎng)的CH0-S細(xì)胞傳代，控制細(xì)胞密度為5 6X 105個(gè)/ml，120 135轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24h，細(xì)胞密度達(dá)到1.2 1.5X IO6個(gè)/ml，轉(zhuǎn)移至125ml培養(yǎng)瓶中。用0ptiPro SFM(Invitrogen公司)稀釋37.5ug質(zhì)粒至終體積0.6ml,輕輕混勻；用0ptiPro SFM(Invitrogen 公司)稀釋 3L 5ul FreeStyle MAX 轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen 公司)至終體積0.6ml，輕輕混勻；將二者混合，室溫放置10分鐘。將1.2ml的混合液加入含有30ml細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中，135轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時(shí)。將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞分至24孔板，加入終濃度為400ug/ml的新霉素，繼續(xù)培養(yǎng)，每天更換含有新霉素的培養(yǎng)液，觀察細(xì)胞的存活率，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株。收集細(xì)胞培養(yǎng)基上清，用免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)F-Fc蛋白的表達(dá)量，篩選融合蛋白F-Fc表達(dá)量最高的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，表達(dá)量為1.2mg/L。實(shí)施例5.表達(dá)并純化融合蛋白F-Fc在篩選得到穩(wěn)轉(zhuǎn)高表達(dá)融合蛋白F-Fc細(xì)胞株后，擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模，使用多個(gè)T125細(xì)胞培養(yǎng)瓶大量表達(dá)F-Fc蛋白。收集培養(yǎng)基上清，用截留分子量為30kDa的超濾離心管(Millipore公司)超濾濃縮融合蛋白F_Fc。隨后用Protein A樹脂(GE公司)純化融合蛋白F-Fc，純化的融合蛋白F-Fc得率為0.41mg/L。實(shí)施例6.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)將融合蛋白F-Fc和重組蛋白F(作為對(duì)照)與CpG(5’ -TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’，Invitrogen 公司)混合，蛋白終濃度為 2mg/ml。將4 6周齡的雌性BABL/c鼠分為3組，每組10只，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉小鼠后，分別用20ul融合蛋白F-Fc和重組蛋白F滴鼻免疫小鼠，PBS做陰性對(duì)照。一個(gè)月滴鼻免疫一次，共免疫三次。第三次免疫兩周后，分別取小鼠唾液、鼻洗液和肺洗液，用ELISA法(Greiner公司)測(cè)定RSV特異的IgA抗體 (圖2-圖4);同時(shí)，分離小鼠血清，用ELISA法(Greiner公司)測(cè)定RSV特異性的IgG抗體(圖5)。結(jié)果顯示，用融合蛋白F-Fc免疫的小鼠，可產(chǎn)生針對(duì)RSV的特異性抗體IgA和IgG，并且明顯高于重組蛋白F免疫的小鼠和對(duì)照組。第三次免疫兩周后，無菌取小鼠脾臟，分離培養(yǎng)脾細(xì)胞，用重組蛋白F刺激脾細(xì)胞，產(chǎn)生特異的細(xì)胞因子。用ELISA (Greiner公司)檢測(cè)培養(yǎng)基上清中細(xì)胞因子IFN-Y、IL-2和IL-4(圖6)。結(jié)果顯示，用融合蛋白F-Fc免疫小鼠后主要刺激機(jī)體產(chǎn)生IFN- Y和IL-2，基本不產(chǎn)生IL-4，說明，融合蛋白F-Fc激起的⑶4+T細(xì)胞免疫應(yīng)答主要是“Thl型”。第三次免疫兩周后，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉小鼠，用20ullX107pfu/ml的RSV滴鼻感染小鼠。感染5天后，處死小鼠，收集小鼠鼻洗液、肺洗液和左肺。用TRIzol法(Invitrogen公司)提取鼻洗液、肺洗液以及肺部的RNA，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)鼻洗液、肺洗液以及肺部RSV的基因拷貝數(shù)(圖7)，結(jié)果顯示，用融合蛋白F-Fc免疫的小鼠，用RSV攻毒后，鼻洗液、肺洗液以及肺中病毒量明顯低于重組蛋白F免疫的小鼠和對(duì)照組；取小鼠右肺，用福爾馬林固定，制作HE染色肺部病理切片(武漢谷歌生物科技有限公司)，從病理切片看(圖8-圖10)，用融合蛋白F-Fc免疫的小鼠肺部的炎癥反應(yīng)和白細(xì)胞浸潤現(xiàn)象低于重組蛋白F免疫的小鼠和對(duì)照組，說明用融合蛋白F-Fc滴鼻免疫小鼠可有效地抵抗RSV的感染。
權(quán)利要求
1.一種融合蛋白F-FC，其特征是一種呼吸道合胞病毒抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fe的融合蛋白，該蛋白含有RSV的F蛋白與人IgGl恒定區(qū)Fe片段，其中編碼RSV F蛋白的基因序列為SEQ ID NO:1，氣基酸序列為SEQ ID NO:2 ;編碼抗體IgGl恒定區(qū)Fe片段的基因序列為SEQ ID NO:3，氨基酸序列為SEQ ID NO:4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白F-Fc，其特征在于編碼該蛋白的基因序列為SEQIDNO:5，氨基酸序列為SEQ ID NO:6。
3.一種融合蛋白F-Fc，該融合蛋白是通過以下方法得到的:首先構(gòu)建含有SEQ ID NO:5基因序列的真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，表達(dá)融合蛋白F-Fc，采用Protein A親和層析，分離純化得到融合蛋白F-Fc。
4.一種融合蛋白F-Fc，用作RSV的亞單位疫苗。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的亞單位疫苗，其特征在于該亞單位疫苗是一種滴鼻液藥品，該滴鼻液藥品可激起針對(duì)RSV的特異性粘膜免疫、體液免疫以及偏向于“Thl型”并且“Thl/Th2平衡”的T細(xì)胞免 疫，用于預(yù)防RSV的感染。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥工程技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種呼吸道合胞病毒(RSV)抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fc的融合蛋白(F-Fc)的生產(chǎn)方法，及其作為RSV亞單位疫苗的用途。本發(fā)明首先利用分子克隆方法構(gòu)建了含有RSV F蛋白與人IgG1Fc融合蛋白的真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)，表達(dá)融合蛋白；采用Protein A親和層析，得到高純度的融合蛋白；以CpG為佐劑，用融合蛋白滴鼻免疫BABL/c鼠，激起針對(duì)RSV的特異性粘膜免疫、體液免疫以及偏向于“Th1型”且“Th1/Th2平衡”的細(xì)胞免疫，有效抑制RSV感染。
文檔編號(hào)A61K39/155GK103204943SQ20131009004
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月20日
發(fā)明者肖庚富, 祖向陽, 龔睿, 張哲 , 周拯, 王薇, 王宗林, 金卉, 侯政, 劉海濱, 劉洋, 徐婷 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院武漢病毒研究所