專利名稱：一種仙臺病毒抗原肽及其在仙臺病毒感染檢測中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術領域，尤其涉及一種仙臺病毒抗原肽及其在仙臺病毒感染檢測中的應用。
背景技術：
仙臺病毒(Sandaivirus)屬于副粘病毒科副粘病毒亞科、呼吸道病毒屬病毒,為單股負鏈RNA病毒，是一種實驗嚙齒類常見和高發(fā)的感染性副流感病毒，是引起嚙齒類動物呼吸系統(tǒng)疾病的主要病原，小鼠、大鼠、倉鼠和豚鼠等嚙齒類實驗動物均易感。仙臺病毒多數(shù)情況下無明顯臨床表現(xiàn)，但會對實驗動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生影響，在合并其他細菌性病原體的感染后造成致死性的影響，是嚙齒類實驗動物必須排查的病原體，其傳染性強，容易擴散，在多數(shù)情況下呈隱性感染，可影響幼鼠發(fā)育成長和降低成年鼠的繁殖率，改變體內(nèi)細胞免疫反應，且很難從鼠群中清除。1953年在日本仙臺的一次新生兒肺炎流行中首次分離出，又名Hemagglutinating virus of Japan (HVJ),即Fushimi株。由于許多特性與流感不同，以后又陸續(xù)分離到其他毒株，故命名為副流感病毒。仙臺病毒幾乎可凝集所有種類的紅血球，而且有溶血性。其表面具有血凝素和溶血素，溶血素有溶細胞作用，能溶解某些動物的紅細胞，與病毒的感染性有關，血凝素則能凝集某些哺乳類和禽類的紅細胞。仙臺病毒感染可侵犯呼吸道的表層組織，在上皮細胞中增殖，所致的免疫反應不牢固易再次感染，成人中通常引起輕型呼吸道感染，而5歲以下兒童發(fā)病率高、病情重，表現(xiàn)為急性阻塞性喉-支氣管-氣管炎和肺炎。由于仙臺病毒不僅感染動物，而且還會導致兒童患嚴重的呼吸道疾病，所以開發(fā)一種能夠及時的、準確的檢測仙臺病毒感染的產(chǎn)品，對動 物和人類的健康具有重要意義。目前的檢測多采用血清學的方法包括ELISA、IFA以及血凝抑制實驗等。這些血清學的檢測方法比較經(jīng)典，在實際應用中卻存在一些問題，而最為主要的是血清學檢測使用的抗原質(zhì)量的穩(wěn)定性和適用性。在血清學檢測中最為關鍵的因素是抗原的質(zhì)量。抗原的特異性和代表性，抗原的免疫原性和抗原性，這些因素均會影響到最終對血清學檢測結果的判定。近年來隨著多肽展示技術的應用，已經(jīng)針對許多病原體的特異抗原表位進行了相關分析，也找到了一些有用的多肽表位，有些在微生物檢測中也得到了應用。使用的線性表位多肽庫，雖然不能包含天然空間構象表位，但是仍有許多線性表位具有良好的抗原性，多個抗原表位的組合可以很好的滿足血清學檢測的需要。在目前的國家標準推薦的檢測方法中使用病毒全顆粒作為抗原物質(zhì)來檢測實驗動物血清中可能存在的抗體。但是由于病毒全顆粒在實驗室的擴增培養(yǎng)以及分離純化等過程中存在著許多的變量，包括病原體本身的變異、每次生產(chǎn)病毒可能摻入的非特異性抗原成分等，這些因素均會影響到抗原的穩(wěn)定性。雖然病毒全顆粒保證了全部抗原位點的存在，但是抗原暴露的不同方式也會影響到抗原表位的展示最后影響檢測工作的結果。而且病毒全顆?？乖瓡推渌≡w的產(chǎn)生交叉抗原最終影響檢測的準確性。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術問題在于提供一種仙臺病毒抗原肽及其在仙臺病毒感染檢測中的應用，本發(fā)明提供的仙臺病毒抗原肽提高了多肽組合的特異性和針對性，因此可提高實驗動物微生物檢測的準確性。本發(fā)明提供了一種仙臺病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本發(fā)明還提供了一種仙臺病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一個或多個氨基酸殘基得到的氨基酸序列。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的仙臺病毒抗原肽的氨基酸序列與SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于85%。本發(fā)明提供的抗原肽是仙臺病毒的優(yōu)勢抗原表位，且分子量較小，因此降低了與其他分子發(fā)生交叉反應的可能 ，提高了多肽組合的特異性和針對性，從而提高了對仙臺病毒感染檢測的準確率。本發(fā)明提供了一種編碼SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子，具有如SEQ IDN0:2所示的核苷酸序列。本發(fā)明還提供了一種仙臺病毒疫苗，包括本發(fā)明提供的仙臺病毒抗原肽及藥學上可接受的輔料。本發(fā)明提供的仙臺病毒疫苗中抗原肽為具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一個或多個氨基酸殘基得到的氨基酸序列。優(yōu)選地，本發(fā)明提供給的仙臺病毒疫苗的劑型為口服制劑或注射劑。由于本發(fā)明提供的抗原肽是仙臺病毒的優(yōu)勢抗原表位，所以在制備疫苗時，可減少仙臺病毒對動物的危害。本發(fā)明提供的仙臺病毒抗原肽在仙臺病毒感染檢測中的應用。本發(fā)明提供的仙臺病毒疫苗中抗原肽為具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一個或多個氨基酸殘基得到的氨基酸序列。用抗原的優(yōu)勢表位檢測動物體是否感染該抗原的原理是:當動物體感染抗原后，動物體就會產(chǎn)生針對該抗原的抗體，該抗體分布在動物的血清中，通過檢測血清中該抗體的存在與否，就能得知動物體是否感染抗原。動物體產(chǎn)生的抗體一般是針對抗原的優(yōu)勢表位，即所產(chǎn)生的抗體能特異性的與抗原的優(yōu)勢表位相結合。所以通過抗原優(yōu)勢表位檢測血清中是否存在與其結合的抗體，就能得知動物體是否感染該病毒。本發(fā)明提供了一種非診斷目的的檢測仙臺病毒感染的方法，包括以下步驟:步驟1:將本發(fā)明提供的抗原肽包被到酶標板上，經(jīng)第一洗滌后封閉，獲得封閉后的酶標板；步驟2:取待測樣品加入封閉后的酶標板中，經(jīng)孵育、第二洗滌、標記二抗、第三洗滌后顯色，獲得受檢溶液；步驟3:取受檢溶液，用酶標儀檢測OD45tl值，采用Cut off值法判斷檢測結果；Cut off值法判斷的標準為:受檢溶液的OD450值> I+3SD為陽性，
受檢溶液的OD450值< I+2SD為陰性，i+3SD>受檢溶液的OD450的值> i+2SD為可疑，重新測受檢溶液的OD450值，受檢溶液的OD450值小于；+3SD則判為陰性；其中， 為所有陰性對照樣品的OD45tl平均值，SD為所有陰性樣品OD45tl的標準差；陰性對照樣品與待測樣品的檢測方法一致；其中，本發(fā)明提供的仙臺病毒疫苗中抗原肽為具有如SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一個或多個氨基酸殘基得到的氨基酸序列。;'值和SD值對某一物種而言為固定值，可在檢測后保存，再次檢測時可不對陰性對照進行檢測。作為優(yōu)選，包被具體為:將100 μ L含有10 μ g/mL抗原肽的包被緩沖液加入酶標板上，4°C條件下放置過夜。優(yōu)選地，包被緩沖液的pH為9.6。更優(yōu)選地，包被緩沖液的溶劑為蒸餾水。更 優(yōu)選的，包被緩沖液中Na2CO3的質(zhì)量-體積濃度為1.59g/L，NaHCO3的質(zhì)量體積濃度為2.93g/L。作為優(yōu)選，第一洗滌采用洗滌緩沖液。優(yōu)選地，洗滌緩沖液洗滌緩沖液pH值為7.4。更優(yōu)選地，洗滌緩沖液的溶劑為蒸餾水。更優(yōu)選地，洗滌緩沖液中各組分的含量為:
權利要求
1.一種仙臺病毒抗原肽，其特征在于，具有如SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列。
2.一種仙臺病毒抗原肽，其特征在于，在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一個或多個氨基酸殘基得到的氨基酸序列。
3.一種編碼SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子，其特征在于，具有如SEQ IDN0:2所示的核苷酸序列。
4.一種仙臺病毒疫苗，其特征在于，包括如權利要求1 2任一項所述的抗原肽及藥學上可接受的輔料。
5.根據(jù)權利要求4所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗的劑型為口服制劑或注射劑。
6.如權利要求1 2任一項所述的抗原肽在仙臺病毒感染檢測中的應用。
7.一種非診斷目的的檢測仙臺病毒感染的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1:將如權利要 求1 2任一項所述的抗原肽包被到酶標板上，經(jīng)第一洗滌后封閉，獲得封閉后的酶標板； 步驟2:取待測樣品加入所述封閉后的酶標板中，經(jīng)孵育、第二洗滌、標記二抗、第三洗滌后顯色，獲得受檢溶液； 步驟3:取所述受檢溶液，用酶標儀檢測OD450值，采用Cut off值法判斷檢測結果； 所述Cut off值法判斷的標準為: 受檢溶液的OD450值> i+3SD為陽性， 受檢溶液的OD450值< S+2SD為陰性， i+3SD>受檢溶液的OD450的值> S+2SD為可疑，重新測受檢溶液的OD450值，受檢溶液的OD450值小于i+3SD則判為陰性； 其中，$為陰性對照樣品的OD450平均值，SD為陰性樣品OD45tl的標準差。
8.一種仙臺病毒感染檢測試劑盒，其特征在于，包括包被有如權利要求1 2任一項所述抗原肽的平板、洗滌緩沖液、樣品稀釋液、終止液和底物緩沖液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術領域，尤其涉及一種仙臺病毒抗原肽及其在仙臺病毒感染檢測中的應用。本發(fā)明提供的仙臺病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一個或多個氨基酸殘基得到的氨基酸序列。由于本發(fā)明提供的仙臺病毒抗原肽分子量較小，降低了與其他分子發(fā)生交叉反應的可能性，因此提高了多肽組合的特異性和針對性，從而提高了實驗動物微生物檢測的準確性。
文檔編號A61K39/155GK103159834SQ20131009512
公開日2013年6月19日 申請日期2013年3月22日 優(yōu)先權日2013年3月22日
發(fā)明者向志光, 楊志偉, 佟巍, 劉先菊, 李雨函, 魏強 申請人:中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所, 北京華阜康生物科技股份有限公司