一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途。所述具有抗癌作用的中藥組合物的原料藥主要由大黃：虻蟲組成。所述制備方法包括：按比例取原料藥，以水或與水相互溶的有機溶劑提??；或，按比例取原料藥，采用水提醇沉法制備；其中所述醇沉濃度為50-90%。所述用途是該中藥組合物在制備治療癌癥藥物特別是治療宮頸癌藥物中的應(yīng)用。該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成：大黃：虻蟲=1：0.2-4。本發(fā)明大黃和虻蟲配伍對Hela細(xì)胞具有協(xié)同抑制作用，具有較好的抗癌效果。
【專利說明】一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法和用途，具體涉及一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途，屬中醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]癌癥是危及人類健康的重大疾病，其致死率呈逐年上升的趨勢，它的發(fā)生和發(fā)展是多因素參與、多基因改變及多階段發(fā)展的復(fù)雜病變過程。目前對于癌癥的治療大多采用手術(shù)治療結(jié)合放、化療方法，但是該方法對病人的創(chuàng)傷大，危險性高，且費用昂貴，但療效卻并不理想。中藥作為我國傳統(tǒng)防病治病的武器，伴隨著近年來逐步深入的研究與探索，在癌癥治療中越來越受到重視。研究表明，在腫瘤防治過程中，中藥主要是從提高機體免疫功能、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移以及對化療的減毒增效等方面發(fā)揮作用的。
[0003]本發(fā)明所述中藥組合物配伍合理，既能調(diào)節(jié)氣血陰陽和臟腑功能，保護(hù)骨髓造血功能，又能啟動自身防御系統(tǒng)，提高機體免疫力，對于腫瘤的輔助治療很有益處。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的第一個目的在于提供一種具有抗癌作用的中藥組合物。
[0005]本發(fā)明的第二個目的在于提供該組合物的制備方法。
[0006]本發(fā)明的第三個目的在于提供該組合物在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的第四個目的在于提供該組合物在制備治療宮頸癌藥物中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0009]一種具有抗癌作用的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成:
[0010]大黃:虻蟲=1:(0.2-4)。
[0011]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0012]大黃:虻蟲=1: (0.3-3.5)。
[0013]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0014]大黃:虻蟲=1:(0.4-3)。
[0015]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0016]大黃:虻蟲=1: (0.5-2.5)。
[0017]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0018]大黃:虻蟲=1: (0.5-2.2)。
[0019]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0020]白芍:當(dāng)歸=1: (0.5-2)。
[0021]所述中藥組合物的原料藥進(jìn)一步優(yōu)選為:
[0022]大黃:虻蟲=1:0.5 ；
[0023]或，大黃:虻蟲=1:1;
[0024]或，大黃:蛇蟲=1:2。
[0025]本發(fā)明中藥組合物可采用如下方法制備:
[0026]按比例取原料藥，以水或與水相互溶的有機溶劑提??；
[0027]進(jìn)一步的，所述與水相互溶的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進(jìn)一步優(yōu)選為50-90%的乙醇；更進(jìn)一步優(yōu)選為60-80%的乙醇；更進(jìn)一步優(yōu)選為70%的乙醇；
[0028]所用的提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的任意一種方式，或者不同提取方法的組合。
[0029]本發(fā)明中藥組合物還可采用:按比例取原料藥，采用水提醇沉法制備；其中所述醇沉濃度為50-90% ；
[0030]進(jìn)一步的，所述醇沉濃度為60-80% ;更進(jìn)一步的所述醇沉濃度為70%。
[0031]上述制備方法中原料藥經(jīng)提取后還可經(jīng)純化、精制，如過大孔樹脂柱；并進(jìn)一步按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括顆粒、片劑、膠囊、滴丸、口服液、混懸液、乳濁液、注射劑。
[0032]為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括:淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括:甜味劑及各種香精；防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括:PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)中藥藥劑學(xué)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學(xué)》，上海科學(xué)出版社1997年12月第I版中各劑型記載的輔料)。
[0033]本發(fā)明所述中藥組合物除了以大黃、虻蟲原藥材投料的形式外，還可以采用以大黃、虻蟲提取物(有效部位)投料的形式，因此本發(fā)明進(jìn)一步公開了一種具有抗癌作用的中藥組合物:
[0034]一種具有抗癌作用的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料組成:
[0035]大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.2-4)。
[0036]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0037]大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.3-3.5)。
[0038]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0039]大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.4-3)。
[0040]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0041]大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.5-2.5)。
[0042]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0043]大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.5-2.2)。
[0044]所述中藥組合物的原料藥優(yōu)選為:
[0045]大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.5-2)。
[0046]所述中藥組合物的原料藥進(jìn)一步優(yōu)選為:
[0047]大黃提取物:虻蟲提取物=1:0.5 ；
[0048]或，大黃提取物:虻蟲提取物=1:1;
[0049]或，大黃提取物:虻蟲提取物=1:2。
[0050]本發(fā)明所述大黃提取物和虻蟲提取物分別為大黃、虻蟲的水提取物或與水相互溶的有機溶劑提取物；或，分別為大黃、虻蟲經(jīng)水提醇沉處理后得到的提取物。
[0051]進(jìn)一步的，所述與水相互溶的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進(jìn)一步優(yōu)選為50-90%的乙醇；更進(jìn)一步優(yōu)選為60-80%的乙醇；更進(jìn)一步優(yōu)選為70%的乙醇；
[0052]所用的提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的任意一種方式，或者不同提取方法的組合。
[0053]進(jìn)一步的，所述醇沉濃度為50-90% ;進(jìn)一步優(yōu)選醇沉濃度為60-80% ;更進(jìn)一步的所述醇沉濃度為70%。
[0054]本發(fā)明所述水提醇沉法系指在中藥水提濃縮液中，加入乙醇使達(dá)到規(guī)定的含醇量(即醇沉濃度)，某些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，濾過，取乙醇溶液，回收乙醇得提取物，使水提液得以精制的方法。
[0055]實驗結(jié)果表明， 大黃與虻蟲配伍對人宮頸癌Hela細(xì)胞起協(xié)同抑制作用CKl (0.l〈Fa〈0.9)。
[0056]實驗例I大黃藥對的研究
[0057]I 材料
[0058]人宮頸癌Hela細(xì)胞由天津市腫瘤研究所中心實驗室惠贈；RPMI_1640培養(yǎng)基，美國GIBCO公司產(chǎn)品；
[0059]大黃、桃仁、水蛭、虻蟲各單藥及大黃分別于桃仁、水蛭、虻蟲配伍的組合物(即為“藥對”)均采用如下方法制備:取原料藥，加水浸泡30min，加入8倍量水煎煮三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，離心、干燥，粉碎成粉。按實驗需要將干燥粉用DMEM高糖培養(yǎng)基配成相應(yīng)濃度的試藥并過濾除菌。
[0060]2實驗方法
[0061]Hela細(xì)胞細(xì)胞在5% CO2孵箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)基為含10%滅活小牛血清的RPM1-1640，含1%雙抗(青霉素和鏈霉素)。每2~3天傳代一次，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實驗。24孔板每孔接種5000/ml個Hela細(xì)胞，接種后24小時加藥培養(yǎng)，選取對Hela細(xì)胞增殖有明顯抑制作用的大黃，將其與其他藥物配伍使用作用于Hela細(xì)胞，設(shè)制大黃、虻蟲、桃仁、水蛭單用組及大黃與虻蟲配伍合用組(按1:2比例)、大黃與桃仁配伍合用組(按1:2比例)、大黃與水蛭配伍合用組(按1:2比例)。以下式換算大黃與不同藥物配伍中劑量組體外培養(yǎng)加藥物濃度:C(y g/mL)=ro(mg/Kg/d) ；C為體外實驗所需濃度，D為臨床用藥濃度。以此濃度為中間濃度，分別向上、向下2倍遞增遞減，連續(xù)設(shè)置6個濃度梯度。孵箱中培養(yǎng)96h，光經(jīng)鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化，后收集細(xì)胞，行臺盼藍(lán)計數(shù)。
[0062]運用中效原理判斷聯(lián)合藥效:中效濃度(Dm)，即半數(shù)抑制濃度(IC5tl)的計算，根據(jù)臺盼藍(lán)拒染活細(xì)胞數(shù)計算藥物組細(xì)胞fu (生存率fract1n of unaffeeted cells)及fa(抑制率 fraet1n of affected cells)
[0063]fu=試驗組平均活細(xì)胞數(shù)/對照組平均活細(xì)胞數(shù)
[0064]fa=l-fu
[0065]將中效方程fa/fu= (D/Dm)m兩邊取對數(shù)(D為藥物濃度；Dm為中效濃度)得方程:
[0066]log(fa/fu)=mLogD-mLogDm
[0067]從而Dx=DmX [fa/(l_fa) ]1/m
[0068]設(shè)Y=1g (fa/fu), X=1gD,則得直線方程:
[0069]Y=mX+a (m方程的斜率，a為方程截距)
[0070]Fa=0.5時，X=logDm=-a/m,計算出藥物單用及聯(lián)合應(yīng)用時的Dm值
[0071]應(yīng)用此公式Dx=DmX [fa/ (1-fa) ] l//m 計算出達(dá)到各種效應(yīng)(fa=0.1, 0.2, 0.3...0.9)時兩種藥物單用及聯(lián)合應(yīng)用所需要的藥物濃度(D)
[0072]根據(jù)周-特氏聯(lián)合指數(shù)法中的量-效公式計算兩藥合用時的Cl (The Combinat1nindex)值
[0073]Clx=Dl/Dxl+D2/Dx2
[0074]注意:式中Dl，D2為合用時，效應(yīng)達(dá)X時兩藥物所占濃度，Dxl，Dx2為兩藥單用時，效應(yīng)達(dá)X時各自的濃度。系數(shù)α根據(jù)中效作圖確定，兩藥作圖相互平行時α取值為0，反之為I。
[0075]結(jié)果判定:CI〈1表示兩藥合用時產(chǎn)生協(xié)同(synergism)作用；CI=1表示兩藥合用時產(chǎn)生相加(additivity)作用；CI>1表示兩藥合用時產(chǎn)生拮抗(antagonism)作用。
[0076]中效濃度及聯(lián)合藥效通過CalcuSyn軟件計算并擬合圖表。
[0077]3統(tǒng)計方法
[0078]應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件包，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(?土S)表示，在檢驗數(shù)據(jù)正態(tài)分布及方差齊性的條件下，多組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析，各組組間差異的比較用LSD — t檢驗。以P < 0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0079]4實驗結(jié)果
[0080]4.1大黃與虻蟲配伍對Hela細(xì)胞增殖的影響
[0081]臺盼藍(lán)計數(shù)法檢測不同實驗組:大黃和虻蟲單用及合用(按1:2比例配伍)用于人宮頸癌Hela細(xì)胞株96h后的活細(xì)胞數(shù)，計算各實驗組各濃度下的Fa。應(yīng)用Excel及CalcuSyn軟件計算大黃、蛇蟲的IC50分別為56.18 μ g/mL、241.108 μ g/mL。計算大黃和蛇蟲合用在不同效應(yīng)時對Hela細(xì)胞的Cl值，統(tǒng)計分析顯示，大黃與虻蟲配伍對Hela細(xì)胞起協(xié)同抑制作用CKl (0.l〈Fa〈0.9)(詳見表1-表2)。
[0082]表1不同濃度大黃及虻蟲單用及合用對Hela細(xì)胞生長抑制的效應(yīng)Fa
[0083]

【權(quán)利要求】
1.一種具有抗癌作用的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物的原料藥主要由大黃:虻蟲組成。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 大黃:虻蟲=1:(0.2-4)； 或，大黃:虻蟲=1:(0.3-3.5)； 或，大黃:虻蟲=1:(0.4-3)； 或，大黃:虻蟲=1:(0.5-2.5)； 或，大黃:虻蟲=1:(0.5-2.2)。
3.如權(quán)利要求2所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 大黃:虻蟲=1:0.5 ； 或，大黃:虻蟲=1:1 ； 或，大黃:虻蟲=1:2。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述中藥組合物的制備方法，其特征在于，該方法包括: 按比例取原料藥，以水或與水相互溶的有機溶劑提??； 或，按比例取原料藥，采用水提醇沉法制備；其中所述醇沉濃度為50-90%。
5.如權(quán)利要求4所述中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述與水相互溶的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；所述提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的任意一種方式，或者不同提取方法的組合。
6.一種具有抗癌作用的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料組成: 大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.2-4)。
7.如權(quán)利要求6所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料組成: 大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.3-3.5)； 或，大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.4-3)； 或，大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.5-2.5)； 或，大黃提取物:虻蟲提取物=1: (0.5-2.2)。
8.如權(quán)利要求7所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料組成: 大黃提取物:虻蟲提取物=1:0.5 ； 或，大黃提取物:虻蟲提取物=1:1; 或，大黃提取物:虻蟲提取物=1:2。
9.如權(quán)利要求1-3、6-8任一所述的中藥組合物在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1-3、6-8任一所述的中藥組合物在制備治療宮頸癌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK104069192SQ201310100487
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年3月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月26日
【發(fā)明者】姚華, 王軍, 杜軍, 郭潔, 李芳
申請人:成都地奧集團(tuán)天府藥業(yè)股份有限公司