專利名稱：一種小牛血去蛋白提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種小牛血去蛋白提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
牛血去蛋白提取物，是由小牛血中分離得到的一組小分子生物活性物質(zhì)，含有寡糖、核酸衍生物、氨基酸和小分子肽類等有機(jī)物和磷、鈣等無(wú)機(jī)物。小牛血去蛋白提取物能改善氧和葡萄糖的吸收及利用(不依賴于胰島素)，從而提高ATP的周轉(zhuǎn)，為細(xì)胞提供較高的能量。在腦功能降低(低血氧)和能量需求增加(修復(fù)，再生)等情況下，本品可增進(jìn)與能量有關(guān)的功能代謝，保持細(xì)胞功能，促使供血量增加。適用于腦卒中、腦外傷。周圍血管病及腿部潰瘍?？捎糜谄ひ浦病齻?、燙傷、糜爛、創(chuàng)傷、褥瘡的傷口愈合，放射所引起的皮膚、黏膜損傷。小牛血去蛋白提取物現(xiàn)行的提取方法大致有以下幾種工藝方法，一類是較早期工藝路線，在提取工藝中的步驟中使用蛋白酶類，目的是將大分子蛋白水解成小分子肽類，這種工藝雖然可以提高小分子肽的含量，但缺點(diǎn)是，原有的天然小分子肽類也會(huì)被酶破壞，降低或是去除原有的生物活性 ，如國(guó)內(nèi)發(fā)明專利CN100374123C、和CN1062135C等，另一類是在分離提取工藝中采用PH值調(diào)酸、調(diào)堿的方式，利用酸和堿使大分子蛋白變性而去除，再采用超濾法進(jìn)行分子分級(jí)而獲得小分子物質(zhì)，此種工藝的缺點(diǎn)是調(diào)酸、調(diào)堿過(guò)程引入了較多的外源性無(wú)機(jī)離子，如國(guó)內(nèi)發(fā)明專利CN101366727B等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是要解決現(xiàn)有方法會(huì)破壞小牛血去蛋白提取物中天然的分子活性并且在提取工藝中引入不必要的外源性無(wú)機(jī)離子的問(wèn)題，提供了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法。本發(fā)明一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進(jìn)行:一、制備小牛血清:取小牛血，攪拌20 30min,在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心15 20min,收集上清液，即得小牛血清；二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至0 30°C，裝入容器中，置于-20°C的條件下，冷凍24 28h，再在30 400C的水浴中融化，然后在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心5 lOmin，收集上清液；三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對(duì)步驟二得到的上清液進(jìn)行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液；四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對(duì)步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的20%，收集濃縮液，經(jīng)0.22 y m濾膜除菌過(guò)濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。本發(fā)明在提取工藝中既不使用蛋白酶，保證了天然的分子活性不遭到破壞，保留原有生物活性。同時(shí)，在提取工藝中不添加任何化學(xué)物質(zhì)，又克服了引入不必要的外源性無(wú)機(jī)離子，而且工藝簡(jiǎn)單，易于生產(chǎn)化。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一:本實(shí)施方式一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進(jìn)行:一、制備小牛血清:取小牛血，攪拌20 30min，在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心15 20min，收集上清液，即得小牛血清；二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至O 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24 28h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心5 lOmin，收集上清液；三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對(duì)步驟二得到的上清液進(jìn)行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液；四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對(duì)步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的20 %，收集濃縮液，經(jīng)0.22 μ m濾膜除菌過(guò)濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。本實(shí)施方式在提取工藝中既不使用蛋白酶，保證了天然的分子活性不遭到破壞，保留原有生物活性。同時(shí)，在提取工藝中不添加任何化學(xué)物質(zhì)，又克服了引入不必要的外源性無(wú)機(jī)離子，而且工藝簡(jiǎn)單，易于生產(chǎn)化。
具體實(shí)施方式
二:本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同的是:步驟一中攪拌25min。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三:本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二的不同的是:步驟一中在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心18min。其它與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四:本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一的不同的是:步驟二中在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心8min。其它與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五:本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至四之一的不同的是:小牛血去蛋白提取物溶液制成注射液，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物灌裝于安瓿中，經(jīng)濕熱滅菌，即得到小牛血去蛋白提取物注射液。其它與具體實(shí)施方式
一至四之一相同。
具體實(shí)施方式
六:本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一的不同點(diǎn)是:小牛血去蛋白提取物溶液制成片劑，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物溶液經(jīng)過(guò)減壓干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉，以小牛血去蛋白提取物粉為主藥，以淀粉、蔗糖和硬脂酸鎂為輔料；其中小牛血去蛋白提取物粉:淀粉:蔗糖:硬脂酸鎂的比例為1.8: 1.0: 1.0: 0.4。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。通過(guò)以下試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果:試驗(yàn)1、本試驗(yàn)一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進(jìn)行:一、制備小牛血清:取檢疫合格的小牛血1000L，攪拌25min，在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心ISmin,收集上清液，即得小牛血清920L ;二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至O 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心8min，收集上清液900L ;三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對(duì)步驟二得到的上清液進(jìn)行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液700L ;四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對(duì)步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的20%，收集濃縮液140L，經(jīng)0.22 μ m濾膜除菌過(guò)濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
對(duì)本試驗(yàn)制備的小牛血去蛋白提取物溶液進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果顯示本試驗(yàn)制備的小牛血去蛋白提取物溶液總固體物含量為5.5%。游離氨基酸含量為每Iml中含1.2mg，符合現(xiàn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)2、本試驗(yàn)一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，是按以下步驟進(jìn)行:一、制備小牛血清:取檢疫合格的小牛血1000L，攪拌30min，在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心20min,收集上清液，即得小牛血清920L ;二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至0 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心lOmin，收集上清液900L ;三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對(duì)步驟二得到的上清液進(jìn)行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液700L ;四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對(duì)步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的20%，收集濃縮液140L，經(jīng)0.22 y m濾膜除菌過(guò)濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。將本試驗(yàn)制得的140L小牛血去蛋白提取物溶液，放入減壓干燥機(jī)中，在溫度不超過(guò)60°C的情況下減壓干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉8.08公斤(含水5% )。處方:
權(quán)利要求
1.一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物的制備方法按以下步驟進(jìn)行:一、制備小牛血清:取小牛血，攪拌20 30min，在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心15 20min，收集上清液，即得小牛血清；二、熱處理:將步驟一得到的小牛血清用水浴加熱到80°C，恒溫保持15min，然后用水浴冷卻至O 30°C，裝入容器中，置于_20°C的條件下，冷凍24 28h，再在30 40°C的水浴中融化，然后在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心5 lOmin，收集上清液；三、超濾:依次用截留分子量為100000道爾頓、10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器對(duì)步驟二得到的上清液進(jìn)行超濾，收集分子量小于5000道爾頓的超濾液；四、納濾濃縮:用NF90型納濾膜對(duì)步驟三得到的分子量小于5000道爾頓的超濾液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的20 %，收集濃縮液，經(jīng)0.22 μ m濾膜除菌過(guò)濾，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于步驟一中攬拌25min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于步驟一中在3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心18min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于步驟二中在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心8min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物溶液制成注射液，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物灌裝于安瓿瓶中，經(jīng)濕熱滅菌，即得到小牛血去蛋白提取物注射液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物溶液制成片劑，制備方法為:將小牛血去蛋白提取物溶液經(jīng)過(guò)減壓干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉，以小牛血去蛋白提取物粉為主藥，以淀粉、蔗糖和硬脂酸鎂為輔料；其中小牛血去蛋白提取物粉 :淀粉:蔗糖:硬脂酸鎂的比例為1.8: 1.0: 1.0: 0.4。
全文摘要
一種小牛血去蛋白提取物的制備方法，它涉及一種小牛血去蛋白提取物的制備方法。本發(fā)明是要解決現(xiàn)有方法會(huì)破壞小牛血去蛋白提取物中天然的分子活性并且在提取工藝中引入不必要的外源性無(wú)機(jī)離子的問(wèn)題，方法為一、制備小牛血清；二、熱處理；三、超濾；四、納濾濃縮。本發(fā)明在提取工藝中既不使用蛋白酶，保證了天然的分子活性不遭到破壞，同時(shí)，在提取工藝中不添加任何化學(xué)物質(zhì)，又克服了引入不必要的外源性無(wú)機(jī)離子，而且工藝簡(jiǎn)單，易于生產(chǎn)化。本發(fā)明應(yīng)用于制藥領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A61K9/20GK103191151SQ20131011333
公開(kāi)日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月2日
發(fā)明者董繼勝, 王金富, 馮文善, 李永久, 趙波 申請(qǐng)人:黑龍江迪龍制藥有限公司