一種用于肺部給藥的干擾素-白蛋白中空性納米聚集顆粒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提出了一種具有中空性結構的干擾素-白蛋白納米聚集顆粒，制劑形式為干粉吸入劑。該顆粒圓整，表面有凹陷，顯示中空性球狀殼結構，空氣動力學半徑為3.47μm，可吸入粒子比例(FPF)為83.7％。該制劑在保持干擾素藥物活性、降低給藥劑量、減小副作用等方面具有一定的優(yōu)勢，是一種具有前景的新型干擾素干粉吸入劑。該顆粒的制備工藝為：采用吸附法和包載法制備干擾素-白蛋白納米溶液，然后通過噴霧干燥技術制得納米聚集顆粒，所用載體為乳糖。最優(yōu)工藝參數(shù)為：入口溫度：130℃，蠕動泵轉速為5，壓縮空氣壓力為0.6MPa；噴霧溶液固體含量為3％。
【專利說明】一種用于肺部給藥的干擾素-白蛋白中空性納米聚集顆粒
【技術領域】 [0001] 該發(fā)明提出了一種干擾素-白蛋白中空性納米聚集顆粒，其用途為肺 部給藥治療病毒性肺炎，制劑形式為干粉吸入劑。該制劑由干擾素-白蛋白納米溶液與乳 糖混合后經(jīng)噴霧干燥制備而得，本發(fā)明優(yōu)化了干擾素-白蛋白納米粒的制備工藝和處方， 以及篩選了噴霧干燥工藝參數(shù)，得到了肺部沉積率高、穩(wěn)定性好、具有肺部緩釋特征的一種 干擾素肺部給藥制劑，屬于藥學中納米給藥系統(tǒng)和生物制藥。
【背景技術】 [0002] 干擾素是一種多功能的高活性蛋白質(zhì)，分子量約為20000Da 【背景技術】 [1]。目前臨 床上應用最廣泛的是干擾素 α。作為一種廣譜抗病毒劑，干擾素作用機制主要是通過與細 胞表面受體作用使細胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，抑制病毒復制，同時還可增強ΝΚ細胞、巨噬細胞 和Τ淋巴細胞的活力，從而起到免疫調(diào)節(jié)作用 【背景技術】 [2]。
[0003] 1973年，Merigan等首先證實了干擾素能預防呼吸道病毒感染[3]，現(xiàn)在國內(nèi)外不 少學者開始將干擾素 α應用于小兒病毒性呼吸道感染，在急性上呼吸道感染，喘憋性肺 炎、病毒性肺炎等方面取得了一定療效?，F(xiàn)已有多種干擾素產(chǎn)品用于呼吸道病毒感染的防 治 [4]。但現(xiàn)行的干擾素干粉吸入劑仍存在一些問題：（1)肺部沉積率不高，僅為20%左右
[5]。經(jīng)口吸入給藥后，大部分滯留于口腔和咽喉部位，造成較大部分的藥物浪費；（2)干擾 素到達肺泡后快速釋放，易被肺清除系統(tǒng)快速清除，與細胞作用時間短，需要頻繁給藥；(3) 干擾素的不良反應如發(fā)熱、頭痛、寒戰(zhàn)等流感樣癥狀與劑量具有相關性 [6]。
[0004] 近期研究表明，在納米技術的基礎上，通過將納米粒溶液或納米粒和輔料的混 合液進行噴霧干燥，可制得的中空性納米聚集顆粒，也稱多孔性納米粒聚集顆粒（porous nanoparticle-aggregate particles, PNAPs)[7]。這種"中空顆粒"有助于提高顆粒的分散 性質(zhì)，提高肺部沉積率，同時，還能發(fā)揮納米給藥系統(tǒng)的優(yōu)勢，在病灶部位緩慢釋放藥物可 以達到長效、降低藥物不良反應等效果。2002年，Tsapis等人 [8]最先制備了這樣的中空納 米粒聚集顆粒。在Tsapis的基礎上，Hadinoto等人[9' 1CI]發(fā)表了多篇關于PNAPs的研究文章。 他們首先使用了干粉制備中常用的乳糖作為輔料，分別以不載藥的多種粒徑（20_170nm) 的聚丙烯酸酯和二氧化硅納米粒為模型，通過噴霧干燥，制成大的孔性空殼顆粒。這種多孔 性納米粒聚集顆粒有利于藥物的儲存和吸收，將藥物遞送至支氣管和肺泡區(qū)域，能夠起到 局部或全身治療的效果。但需引起我們注意的是，該PNAPs中用到的聚丙烯酸酯和二氧化 硅為降解緩慢甚至為不能夠被生物降解的材料，其到達肺部后若不能及時被清除，很容易 造成納米粒在肺部的沉積，引起砂肺甚至肺組織纖維化，給用藥安全帶來隱患。
[0005] 白蛋白是一種不具有調(diào)理作用的蛋白，有毒性低、內(nèi)源性、生理相容性好等優(yōu)點， 此外，白蛋白還具有在腫瘤和炎癥組織中聚集的特性[11]，這些優(yōu)勢使其成為抗腫瘤藥物 及抗炎藥物傳遞系統(tǒng)的理想材料。在肺部給藥干粉吸入劑中，白蛋白和二棕櫚酰磷脂酰膽 堿也常用作內(nèi)源性物質(zhì)添加到干粉吸入劑中。如C 〇dr〇ns[12]在甲狀旁腺激素（PTH)干粉吸 入劑處方中、美國Inhale公司在制備以干擾素（IFN)為主的干粉配方中均添加了白蛋白。 白蛋白納米粒是以白蛋白為載體，包封或吸附藥物，經(jīng)過固化分離而形成的實心球體。20世 紀70年代已有制備自蛋白納米粒的相關報道。經(jīng)過40年的發(fā)展，白蛋白納米粒已經(jīng)成為 一種相對成熟的藥物傳遞系統(tǒng) [13]。目前人血清白蛋白紫杉醇納米粒已經(jīng)獲得FDA批準。然 而，長期以來，關于白蛋白納米粒的載藥研究多集中于化學藥物，對于載蛋白多肽類藥物鮮 見報道，曾一度有人懷疑，白蛋白納米粒載蛋白多肽類藥物的可行性。
[0006] 綜上所述，白蛋白用于肺部給藥的經(jīng)驗為本發(fā)明奠定了良好的基礎，但經(jīng)文獻檢 索，尚未見白蛋白納米粒應用于肺部給藥的研究，更沒有干擾素-白蛋白中空納米聚集顆 粒的研究報道。本發(fā)明從理論分子相互作用的角度，通過計算分析，找到了白蛋白分子和干 擾素分子的作用區(qū)域，為白蛋白納米粒裝載干擾素提供了理論依據(jù)；繼而，通過實驗進一步 驗證了白蛋白納米粒載干擾素的可行性，優(yōu)化得到了干擾素包封率高于70%、載藥率高于 1. 25%的干擾素-白蛋白納米粒制備工藝和處方。在此基礎上，應用噴霧干燥技術，制備了 干擾素-白蛋白中空性納米聚集顆粒作為肺部給藥的干粉吸入劑，其不僅具有良好的肺部 沉積率，而且具有較高的干擾素生物活性和較高的肺部藥物滯留濃度，在保持藥物活性、降 低給藥劑量、減小副作用等方面具有一定的優(yōu)勢，是一種具有前景的新型干擾素干粉吸入 劑。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 1.該發(fā)明的創(chuàng)新點之一是從理論和實驗兩個方面證實了白蛋白裝載干擾素形成 納米粒的可行性。
[0008] 本發(fā)明首次系統(tǒng)研究了干擾素和白蛋白分子結合的可能性，在理論上使用蛋白質(zhì) 對接程序在線服務ZDOCK Server (http ：//zdock. umassmed. edu/)將兩個蛋白質(zhì)分子進行 剛性對接，并進行了拉伸動力學的模擬計算，結果發(fā)現(xiàn)氫鍵和鹽橋是白蛋白和干擾素結合 中的主要相互作用，其中白蛋白（BSA)的第503號殘基GLU和干擾素（IFN)的第125號殘 基ARG，BSA的第537號殘基LYS和IFN的第5號殘基GLU，BSA的第493號殘基ASP和IFN 的第2號殘基ASP更是起著至關重要的作用。在實驗中，通過PH值、兩種蛋白質(zhì)量比例及 固化劑戊二醛的用量篩選，得到了包封率約為70%，粒徑約為250nm的干擾素-白蛋白納米 溶液。
[0009] 白蛋白裝載化學藥物的研究已有40余年的歷史，人血清白蛋白載紫杉醇藥物已 經(jīng)FDA批準上市，但對于白蛋白載蛋白多肽類藥物，一直是這個領域的空白地帶。本發(fā)明在 理論上和實驗上同時證實了白蛋白裝載干擾素的可行性，為白蛋白作為納米粒載體裝載蛋 白多肽類藥物提供了依據(jù)，屬于新體系創(chuàng)新。
[0010] 2.該發(fā)明的創(chuàng)新點之二在于提出了具有中空結構的干擾素-白蛋白納米聚集顆 粒及其制備工藝。
[0011] 本發(fā)明以干擾素-白蛋白納米粒溶液為基礎，與乳糖等載體混合后，制備成一定 濃度的原溶液，經(jīng)對噴霧干燥參數(shù)進行優(yōu)化，得到了一種具有中空結構的干擾素-白蛋白 納米聚集顆粒及其制備工藝。
[0012] 制備工藝：將適量乳糖加入至干擾素-白蛋白納米溶液中，配制成總固體濃度為 1 %?5%的溶液，其中干擾素-白蛋白納米粒與乳糖的質(zhì)量比例為1 : 4?1 : 8;噴霧干 燥儀器參數(shù)為：入口溫度：90?130°C，出口溫度：50?70°C，蠕動泵轉速為5?10,氮氣流 量為20?50。
[0013] 最優(yōu)工藝參數(shù)為：入口溫度：130°c，蠕動泵轉速為5,氮氣流量為50 ;噴霧溶液固 體含量為3%。
[0014] 經(jīng)掃描電鏡觀測發(fā)現(xiàn)制備的干擾素-白蛋白納米聚集顆粒具有中空結構，幾何粒 徑約為2. 0?4. 0 μ m，納米粒聚集顆粒復溶效果較好，復溶系數(shù)Sf/Si接近于1，表明該聚集 顆粒復溶后粒徑基本上能恢復到原納米溶液水平。經(jīng)多級撞擊器測定該聚集顆粒的平均空 氣動力學半徑為3. 47 μ m，可吸入粒子比例FPF達到83. 7%。
[0015] 本發(fā)明所得到的干擾素-白蛋白納米聚集顆粒未曾見報道，填補了納米聚集顆粒 的空白，為新體系創(chuàng)新。本發(fā)明提出的制備工藝參數(shù)也未見相關系統(tǒng)性篩選的報道，屬于工 藝方法創(chuàng)新。
[0016] 3.該發(fā)明的創(chuàng)新點之三在于干擾素-白蛋白納米粒溶液的制備工藝。
[0017] 雖然曾有白蛋白裝載干擾素Y的研究報道，但其沒有系統(tǒng)地進行研究，所得到的 白蛋白干擾素載藥率僅為1 μ gIFN/mgBSA，即0. 1% [14]。而且其穩(wěn)定性欠佳，易于沉積聚 團。本發(fā)明在進行單因素考察的基礎上，優(yōu)化了 pH值、兩種蛋白質(zhì)量比例、固化劑用量等影 響因素，通過兩種方法，即包載法和吸附法兩種工藝制備了干擾素-白蛋白納米粒溶液，包 封率約70%，載藥率約為1. 25%，粒徑約為250nm。制劑具有良好穩(wěn)定性，4°C下放置一周， 能夠重新分散，分散后平均粒徑約為250nm。
[0018] 包載法制備工藝：用蒸餾水配制1%白蛋白溶液，加入一定量干擾素原液，調(diào)節(jié)pH 值7. 0,在500rpm電動攪拌下，逐滴滴加無水乙醇，然后加入適量戊二醛乙醇溶液，繼續(xù)攪 拌3小時。攪拌完成后，于40°C水浴中減壓蒸餾，除去乙醇，得到干擾素-白蛋白納米?；?懸液。
[0019] 吸附法制備工藝：用蒸饋水配制1%的白蛋白溶液，在500rpm?lOOOrpm電動攪 拌下，逐滴滴加無水乙醇，然后加入適量的戊二醛乙醇溶液，繼續(xù)攪拌3小時，得到空白白 蛋白納米粒；40°C水浴中減壓蒸餾，除去乙醇，剩余的溶液用適量蒸餾水稀釋后調(diào)節(jié)pH值 為5. 5,加入干擾素，持續(xù)攪拌一段時間，得到干擾素-白蛋白納米粒溶液。
[0020] 其中關鍵技術為pH值，包載法為7. 0,而吸附法為5. 5,白蛋白與干擾素質(zhì)量比為 80 : 1?160 : 1，固化劑選為戊二醛，其用量為0.032%?0.1%。
[0021] 4.該發(fā)明的創(chuàng)新點之四在于干擾素-白蛋白納米粒與干擾素相比較具有更高的 生物活性。
[0022] 干擾素為生物活性物質(zhì)，常會受到溶劑、溫度、攪拌等因素的影響。因此經(jīng)BSA納 米粒載藥后，有必要對其生物活性進行測定評價。
[0023] 本發(fā)明中，根據(jù)中國藥典中收載的細胞病變抑制法（CPE)來測定干擾素生物活性 效價。測定結果表明，本發(fā)明干擾素經(jīng)白蛋白納米粒包載或吸附后，其抗病毒活性不但沒有 因此被掩蓋或喪失，反而得到一定的提高，是干擾素藥物生物活性的150%。分析其原因，干 擾素抗病毒機制為干擾素通過與細胞表面的IFN特異性受體結合后，刺激產(chǎn)生N0,并誘導 抗病毒蛋白生成，如蛋白激酶、磷酸二酯酶、2'-5'寡腺苷酸合成酶等，從而抑制病毒蛋白的 翻譯，抑制病毒繁殖。干擾素被白蛋白納米粒包載或吸附后，有助于滯留在細胞外液中，與 細胞表面受體結合，促進了抗病毒活性的提高。
[0024] 終上所述，本發(fā)明所提出的干擾素-白蛋白納米粒與干擾素相比較，具有更高的 生物活性，這有助于降低給藥劑量、減小毒副作用，是-種極具應用前景的干擾素納米藥 物。這種提高生物活性的新制劑形式未見報道。
[0025] 5.該發(fā)明的創(chuàng)新點之五在于干擾素-白蛋白納米粒在小鼠肺部給藥中具有較好 的藥物滯留濃度，具有緩釋特征。
[0026] 本發(fā)明的干擾素-白蛋白納米粒經(jīng)小鼠氣管給藥后，在肺組織的分布濃度高于干 擾素組，給藥9小時藥物濃度為干擾素組的2. 6倍，消除速率為干擾素組的41. 4%，在肺部 滯留時間明顯提高，有利于降低給藥劑量和給藥頻率。白蛋白具有良好的生物相容性，其代 謝產(chǎn)物是組織的營養(yǎng)物質(zhì)，毒性低，因此干擾素經(jīng)白蛋白裝載后作為肺部給藥新制劑的載 體具有一定優(yōu)勢和良好的應用前景。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0027] 附圖1 ZD0CK評價體系給出的5個最優(yōu)的蛋白質(zhì)對接模型。灰色的是BSA，彩色的 是各個模型中IFN。IIIA區(qū)域BSA與IFN結合幾率最大的區(qū)域。
[0028] 附圖2 Modell和Model2中BSA和IFN之間的靜電作用能（a)和范德華作用能 (b)在拉伸動力學（SMD)中隨時間的變化趨勢。附圖2(a)表示了 Modell和Model2中BSA 和IFN之間的靜電作用能隨時間的變化趨勢。可以看到Model2中的靜電作用能（紅）約 在-550kJ/mol上下波動，Modell中的靜電作用能（黑）約在-350kJ/mol上下波動。在 5000ps以后，Model2中的BSA與IFN之間的靜電作用能明顯比Modell中更大。附圖2(b) 表示了 Modell和Model2中BSA和IFN之間的范德華作用能隨時間的變化趨勢。Model2 中BSA和IFN之間的范德華作用能（紅）在-200kJ/mol至-400kJ/mol之間波動，最后穩(wěn) 定在-300kJ/mol左右。而Modell中BSA和IFN之間的范德華作用能（黑）在-50kJ/mol 至-250kJ/mol之間波動。整個過程中，Model2中的BSA與IFN之間的范德華作用能始終 比Modell中更大。綜上，Model2中的BSA和IFN之間相互作用能量比Modell更大，這也 進一步證明了 Model2中BSA和IFN之間的結合方式比Modell更加合理穩(wěn)定。
[0029] 附圖3拉力與質(zhì)心距離隨時間的變化關系。從此圖上還可以看出某些力的峰值與 氫鍵斷裂的對應關系。經(jīng)分析，存在氫鍵1 :BSA的GLU5030El-IFN-alb的ARG125HE ;氫鍵 2 :BSA 的 GLU5030E2-IFN-alb 的 ARG125HE。
[0030] 附圖4附圖4-a :GLU503-ARG125形成的氫鍵。附圖4-b :LYS537-GLU5形成的氫 鍵；附圖4-CASP493-ASP2形成的氫鍵白色的虛線表示氫鍵，形成氫鍵的原子由綠色的字母 和數(shù)字表示。白色數(shù)字表示氫鍵的長短，單位是又。
[0031] 附圖5干擾素-白蛋白納米粒小鼠肺部給藥后，在肺組織（a)和在血（b)中的藥 物濃度隨時間的變化。從圖中可見，干擾素-白蛋白納米粒組在肺組織的藥物濃度高于游 離干擾素組，入血濃度低于干擾素組。顯示干擾素經(jīng)白蛋白納米粒裝載后在肺組織有較高 的藥物滯留濃度，對發(fā)揮藥效具有一定積極意義。
[0032] 附圖6干擾素-白蛋白納米聚集顆粒掃描電鏡圖譜。從圖中可見，顆粒圓整，幾何 粒徑約為2.0?4.0 μ m，表面凹陷，為中空球狀殼結構。
[0033] 附圖7干擾素-白蛋白納米聚集顆粒的空氣動力學半徑分布圖。Stage : 1) 8. 1 μ m， 2) 4. 4 μ m, 3) 2. 8 μ m, 4) 1. 7 μ m, 5) 0. 94 μ m, 6) 0. 55 μ m, 7) 0. 34 μ m. 【具體實施方式】
[0034] 實施例1白蛋白裝載干擾素可行性的理論佐證
[0035] (1)模擬方法：
[0036] 蛋白質(zhì)的對接：為了找到兩個蛋白質(zhì)的潛在結合位點，使用蛋白質(zhì)對接程序在線 服務ZDOCK Server (http ://zdock. umassmed. edu/)將兩個蛋白質(zhì)講行剛件對接。將經(jīng)過 MD優(yōu)化后的兩個蛋白質(zhì)三維結構提交至該在線服務，找到可能的潛在位點。
[0037] 蛋白質(zhì)潛在位點的篩選和比較：使用GR0MACS4. 5對Modell和Model2進行30ns 的動力學模擬，優(yōu)化結構，根據(jù)時間的變化篩選出最合理的結合方式。
[0038] 拉伸動力學（SMD)對結合方式的論證：固定BSA的骨架原子，以保持BSA的位置不 變，但允許BSA的側鏈原子自由運動。而對于IFN則沒有任何限制，骨架和側鏈均可以自由 運動。將拉力作用于IFN上，沿Y軸負方向，以lnm/ns的恒定速度將IFN和BSA拉開，拉動 時間2. 8ns，以獲得這個拉動過程中拉力和兩個蛋白質(zhì)的質(zhì)心距離隨時間的變化情況，尋求 拉力與相互作用位點的關系。
[0039] (2)模擬結果：
[0040] ZDOCK Server根據(jù)其評價體系，一共給出了排名前5的最優(yōu)的蛋白質(zhì)對接模型， 分別為此(^11，]\1〇(1612，]\1〇(1613，]\1〇(1614，]\1〇(1615。如附圖1所示，灰色的是854，彩色的是各 個模型中IFN。其中Model2，Model3，Model4中的IFN都集中在BSA的IIIA區(qū)域。我們選 擇IIIA區(qū)域中排名最靠前的Model2進一步分析。同時，由于Modell是排名第一的模型， 也不能隨意忽略，因此將Modell和Model2 -起進行動力學模擬，作比較分析。
[0041] 經(jīng)過了 30ns的分子動力學模擬以后，分析出Modell和Model2在整個MD過程中 的能量變化。Modell和Model2的靜電作用能和范德華能圖譜見附圖2,從圖中可以看出， Model2中的BSA和IFN之間相互作用能量比Modell更大，進一步證明了 Model2中BSA和 IFN之間的結合方式比Modell更加合理穩(wěn)定。
[0042] 使用VMD可視化軟件，通過拉伸動力學對BSA與IFN質(zhì)點距離和拉力進行相關性 分析，發(fā)現(xiàn)了拉力與氫鍵的斷裂之間的對應關系（附圖3)，BSA的第503號殘基GLU和IFN 的第125號殘基形成氫鍵的情況如附圖4所示，在這兩個殘基之間可以形成1至4個氫鍵， 其中GLU5030E1-ARG125HE和GLU5030E2-ARG125HE形成的氫鍵強度最大（附圖4-a)。同 時，BSA的第537號殘基LYS和IFN的第5號殘基GLU也可以形成氫鍵（附圖4-b)，BSA的 第493號殘基ASP和IFN的第2號殘基ASP之間的氫鍵（附圖4-c)存在時間長達1450ps， 且一直保持著較強的相互作用。
[0043] BSA和IFN在形成某些氫鍵的過程，存在帶正電的氨基和帶負電的羧基，則氨基與 羧基通過靜電作用相互吸引形成鹽橋。鹽橋也被認為有增強蛋白質(zhì)之間的相互作用的效 果。
[0044] 【結論】：IFN與BSA的IIIA區(qū)域相互作用的可能性最大，IIIA區(qū)域是兩者的結合 位點。氫鍵和鹽橋是蛋白質(zhì)結合中的主要相互作用。其中BSA的第503號殘基GLU和IFN 的第125號殘基ARG，BSA的第537號殘基LYS和IFN的第5號殘基GLU，BSA的第493號 殘基ASP和IFN的第2號殘基ASP更是起著至關重要的作用。
[0045] 實施例2干擾素-白蛋白納米粒的制備工藝和性質(zhì)
[0046] (1)包載法：
[0047] 用蒸餾水配制1 % BSA溶液，加入一定量IFN原液，調(diào)節(jié)pH值，在500rpm電動攪 拌下，逐滴滴加無水乙醇，然后加入適量戊二醛乙醇溶液，繼續(xù)攪拌3小時。攪拌完成后，于 40°C水浴中減壓蒸餾，除去乙醇，得到干擾素-白蛋白納米?；鞈乙骸２捎酶咚匐x心法測定 納米粒的包封率，激光光散射儀測定粒徑。
[0048] pH值、BSA與IFN的比例、戊二醛用量三個因素對包封率有顯著影響，結果如表1 所示。
[0049] 表1.包載法中影響因素考察
[0050]
【權利要求】
1. 一種用于肺部給藥的干擾素（IFN)-白蛋白（BSA)中空性納米聚集顆粒。其特征在 于，該制劑由干擾素-白蛋白納米粒與載體組成，具有中空的球狀殼結構，干擾素-白蛋白 納米粒分散在載體中，構成顆粒的殼，所述載體選自乳糖。
2. 根據(jù)權利要求1所述的干擾素-白蛋白中空性納米聚集顆粒的劑型，其特征在于干 粉吸入劑。
3. 根據(jù)權利要求1所述的制劑的制備工藝，其特征在于先制備干擾素-白蛋白納米粒 溶液，然后將適量乳糖加入至干擾素-白蛋白納米溶液中，配制成1 %?5%的溶液，其中干 擾素-白蛋白納米粒與乳糖的質(zhì)量比例為80 : 1?160 : 1;噴霧干燥儀器參數(shù)為：入口 溫度：90?130°C，蠕動泵轉速為5?10,氮氣流量為20?50。
4. 根據(jù)權利要求1所述的制劑的性質(zhì)，其特征在于空氣空力學平均粒徑為3. 47 μ m，可 吸入粒子比例（FPF)高于80%，比表面積為2. 38 士 0. 23m2/g，休止角為42. 3±3. 5°，復溶 后粒徑為250nm左右，復溶系數(shù)接近為1。
5. 根據(jù)權利要求3所述的干擾素-白蛋白納米粒溶液的制備方法，其特征在于采用吸 附法制備，用蒸饋水配制1%的白蛋白溶液，在500rpm?lOOOrpm電動攪拌下，逐滴滴加無 水乙醇，然后加入0. 4%的戊二醛乙醇溶液，繼續(xù)攪拌3小時，得到空白白蛋白納米粒；40°C 水浴中減壓蒸餾，除去乙醇，剩余的溶液用適量蒸餾水稀釋后調(diào)節(jié)pH值為5. 5,加入干擾素 原液，4°C下持續(xù)攪拌一段時間，得到干擾素-白蛋白納米粒溶液。
6. 根據(jù)權利要求3所述的干擾素-白蛋白納米粒溶液的制備方法，其特征在于采用包 載法制備，用蒸餾水配制1 % BSA溶液，加入一定量IFN原液，調(diào)節(jié)pH值為7. 0,在500rpm 電動攪拌下，逐滴滴加無水乙醇，然后加入適量戊二醛乙醇溶液，繼續(xù)攪拌3小時；攪拌完 成后，于40°C水浴中減壓蒸餾，除去乙醇，得到干擾素-白蛋白納米粒溶液。
7. 根據(jù)權利要求5和權利要求6所述的干擾素-白蛋白納米粒溶液的性質(zhì)，其特征在 于其包封率為70 %以上，載藥率高于1. 25 %，粒徑為250nm左右，貯存穩(wěn)定性好，4°C貯存1 周后粒徑無明顯變化，生物學活性為游離干擾素的150%。
8. 根據(jù)權利要求5所述的干擾素-白蛋白納米粒溶液的體內(nèi)性質(zhì)，經(jīng)氣管穿刺給藥后， 在小鼠肺部的藥物滯留濃度明顯高于游離干擾素，并具有緩釋特征。
【文檔編號】A61K9/14GK104116712SQ201310141203
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月23日 優(yōu)先權日:2013年4月23日
【發(fā)明者】謝英, 王藝輝, 劉暢, 涂盈鋒, 丁源, 徐海峰 申請人:北京大學