抗人il-21單克隆抗體的制作方法【專利摘要】本發(fā)明提供了人抗人IL-21單克隆抗體以及產(chǎn)生它們的雜交瘤細胞。這些抗體中的一些具有結(jié)合天然人IL-21、突變重組IL-21蛋白和/或人IL-2的肽區(qū)的能力。這些人抗IL-21抗體可用于治療自身免疫和炎性疾病，尤其是由T濾泡輔助性細胞、B細胞TH細胞或TH17細胞介導(dǎo)的疾病?！緦＠f明】抗人IL-21單克隆抗體[0001]本申請為分案申請，其原申請的申請日為2008年12月8日，申請?zhí)枮?00880126330.8(國際申請?zhí)枮镻CT/IB2008/005011)，名稱為“抗人IL-21單克隆抗體”?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]免疫系統(tǒng)是機體抵抗由病原體即細菌、病毒、真菌等引起的疾病，以及對由機體自身的細胞和組織的異常生長引起的疾病(即癌性腫瘤)的主要防御。在正常情況下，免疫系統(tǒng)能夠區(qū)分機體正常細胞或“自體”細胞與異質(zhì)病原體或異常細胞或“非自體”細胞。免疫系統(tǒng)避免與自體反應(yīng)的過程被稱為耐性。有時，免疫系統(tǒng)失去將“自體”識別為正常的能力并因此發(fā)生抵抗該組織或細胞的反應(yīng)，從而導(dǎo)致自身免疫的一種狀態(tài)——耐性喪失。由自身免疫引起的病理通常具有嚴重臨床后果并且是世界上尤其是發(fā)達國家的主要健康問題之一。[0003]IL-21是一種強效免疫調(diào)制四-α-螺旋束I型細胞因子，其與由IL-21R和公共Y鏈構(gòu)成的異二聚受體結(jié)合(見綜述SpolskiandLeonard,AnnuRevTmmunol.Nov8:2007)。IL-21由NK-T和⑶4+T細胞(包括對生發(fā)中心反應(yīng)重要的促炎性Thl7細胞和濾泡輔助性Tfh細胞)產(chǎn)生，并對先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)都具有多效性，包括B和T細胞增殖的增強、CD8+T細胞和自然殺傷(NK)細胞細胞毒性的增加、B細胞向分泌免疫球蛋白的漿細胞的分化，和Thl7細胞譜系的調(diào)控(見下)。IL-21還可抑制樹突細胞的抗原遞呈功能并可在某些條件下誘導(dǎo)B細胞和NK細胞的凋亡。IL-21具有強效抗腫瘤活性，但也與多種自身免疫疾病(包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、炎性腸病(IBD)和銀屑病)有關(guān)(見綜述SpolskiandLeonard,AnnuRevTmmunol.Nov.8,2007)。[0004]IL-21已被證明通過直接作用于B細胞而調(diào)制抗體反應(yīng)(Mehtaetal^_T.1mmunol.,170:4111-4118,2003:Ozakietal.,Science,298:1630-1634,2002；Sutoetal.，Blood,100:4565-4573,2002)。IL-21可誘導(dǎo)人的幼稚B細胞分化為分泌抗體的漿細胞(Ozakieta.1.T.TniMino1.173:5361,2004:Ettingereta.1.,TTmmuriol.175:7867-79,2005；Ettingeretal,TImmunol.178:2872-82,2007:Kuchenetal.JTmmunol.179:5886-96,2007)并刺激人B細胞中IgE的產(chǎn)生(Kobayashietal.HumanImmunol,do1:10:1016/1.humimm.2008.10)。在IL-21或IL-21R缺陷的動物中，從生發(fā)中心反應(yīng)生成的分泌抗體細胞減少并且親和力成熟下降(Zotosetal.,已提交)。濾泡外抗體形成細胞——其參與自身免疫——需要分泌IL-21的部分特化⑶4T細胞的一個亞組輔助(Odegard，etal.，TEM205(12):2873-2886,2008)。[0005]抗同種異體MHC的抗體的生成是移植排斥中的關(guān)鍵現(xiàn)象。形成抗MHC抗體的滴定度的移植受體(高度敏感的移植患者)有慢性排斥的危險，并且由于可能會出現(xiàn)抗體介導(dǎo)的對新移植體的排斥而不太適合接受新移植物(Smithetal.,AM.1Transplantation8:1-11，2008)。在急性腎同種異體移植物排斥的大鼠模型中，IL-21和IL-21R在腎同種異體移植物但不在同系移植物的血管內(nèi)單核細胞中有著獨特的增加(Hecker，etal.，Immunobiology:do1:10.1016/1.1mbi0.2008.04.004，(2008))。在人心臟移植物遇到的排斥中，IL-21和IL-21R的表達水平與ISHLT排斥等級有關(guān)，最高表達水平存在于IR和2R級(Baan,etal.,Transplantation83(11):1485-1492,2007)。[0006]在移植物抗宿主病(GVHD)中，抗同種異體反應(yīng)由來自移植物的T淋巴細胞的不受控活化介導(dǎo)，所述細胞引導(dǎo)抗宿主組織的炎性反應(yīng)。調(diào)控性T細胞(Treg)可調(diào)制動物模型中的這一反應(yīng)。IL-21已被證明反作用于Treg的調(diào)控功能(Cloughetal.,TImmunol180:5395-5401，2008)。在GVHD小鼠模型中，與WTT細胞相比，IL-21缺陷的T細胞的轉(zhuǎn)移導(dǎo)致臨床癥狀的顯著減輕和組織學(xué)評分的顯著降低以及存活率的顯著增加。在結(jié)腸粘膜中觀察了分泌IFN-Y的T細胞的減少率和Treg的增加。使用抗mIL_21mAb阻斷IL-21和WTT細胞轉(zhuǎn)移產(chǎn)生了相似的結(jié)果(Bucheretal.,Blood(ASHAnnualMeetingAbstracts)2008112:Abstract#2342)。[0007]最近已經(jīng)證明，IL-21由小鼠促炎性Thl7細胞產(chǎn)生,并且為后者分化所必需(Kornetal.Nature.448:484-487,2007；Nurievaetal.Nature448:480-483,2007:Zhoueta.1.,Na.tTmmunol.8:967~974,2007:ffeietal.TBiolChem.282:34605-34610,2007)。人Thl7細胞也產(chǎn)生IL-21，正在進行研究以確定IL-21是否與其在小鼠Thl7細胞中的作用一樣，作為人Thl7細胞的自分泌因子。Ozakietal.(T.1mmunol.173:5361,2004)證明，在狼瘡易感BXSB-Yaa小鼠(一種系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的模型)的自身免疫過程早期特征開始變得明顯的年齡時IL-21的表達增加。用可溶性小鼠IL-21受體(mIL-21R-Fc)處理這些BXSB-Yaa小鼠可部分抑制多種疾病，包括腎小球腎炎(Bubieretal.,AnnNYAcadSc1.1110:590-601，2007)。用mIL-21R-Fc處理還被證明在另一種SLE臨床前疾病模型——MRL/lpr小鼠(Herberetal.T.1mmunol.178:3822-3830,2007)中以及在類風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎的膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)模型(Youngetal.,ArthrRheum56:1152-1163,2007)中有效。人的初步數(shù)據(jù)也表明SLE中IL-21和IL-21R的調(diào)節(jié)異常(Mitomaetal.1ntTMolMed.16:609-615,2005；ffangetal.,ChineseT.Cell.Mol.1mmunol.23(11):1041-1042,2007；Sawalhaetal.AnnRheumDis67:458-461,2008)。最近，Rus等人從24名SLE患者和15名健康對照身上獲得了數(shù)據(jù)(Nguyenetal.,ACR/ARHPScientificMeeting,1760/482，20080ct24-29SanFrancisco，CA)。Rus等人證明:1)與對照相比，IL-2ImRNA的表達在狼瘡患者的CD4+T細胞中顯著增加；2)與緩解期SLE患者或?qū)φ障啾?，IL-21水平在活動期SLE患者的血清中顯著升高；3)IL-21以劑量依賴的方式增強⑶4+T細胞和⑶19+B細胞在患者和對照中的增殖；4)IL-21增強抗-CD40誘導(dǎo)的漿細胞在正常對照和SLE患者中的分化；以及5)IL-21水平的升高可能有助于SLE中自體反應(yīng)性CD4+T細胞的增殖和漿細胞分化。[0008]Monteleone等人證明IL-21RNA和蛋白表達在克羅恩病(⑶)和潰瘍性結(jié)腸炎患者的炎性組織中增加，但不在非炎性組織中增加，其中在潰瘍性結(jié)腸炎患者中的增加較少；并且由⑶患者的固有層單核細胞的⑶3+細胞產(chǎn)生的IL-21也增加(Monteleoneetal.Gastroenterology128:687-694,2005;Monteleoneetal.Gut55:1774-1780,2006；Pelusoetal.,JImmunol178:732_739，2007)。這些作者提出IL-21通過調(diào)制調(diào)控性T細胞(Tregs)和Thl7細胞之間的平衡而調(diào)控實驗性結(jié)腸炎(Fantinietal.Eur.T.1mmunol.37:3155-3163,2007)。在小鼠或大鼠結(jié)腸炎模型中用可溶性IL-21受體對IL-21的體內(nèi)抑制導(dǎo)致結(jié)腸炎臨床癥狀的顯著減輕(Youngetal.US2006/0039902)。[0009]所述IL-21受體由NK細胞表達，NK細胞已被證明在體內(nèi)和體外都響應(yīng)于用IL-21進行的處理。在用重組人IL-21處理的腫瘤患者中，觀察到了在包括NK細胞在內(nèi)的部分淋巴細胞中再循環(huán)模式的改變，以及NK細胞活化標記表達和溶細胞效應(yīng)器容量的增加(Frederiksen,etal.，CancerTmmunolTmmunother57(10):1439-1449,2008)。在自身免疫疾病中，NK細胞活性可起到促進炎癥和相關(guān)組織破壞的作用。NK細胞的組織歸巢受到在炎癥位點上釋放的化學(xué)引誘物的引導(dǎo)(MorrisandLey,CurrMolMed.:4(4):431-8，2004)。與對照的LPNK細胞相比，在用IL-21和IgG進行體外刺激時，克羅恩病患者的固有層NK細胞釋放出更大量的IFN-Y和TNF-a(LiuandTiu,ChronicInflammationofLiverandGut,FalkSymposiumabst.N0.163,2008Marl4~15)。NK細胞還被手艮道通過殺死未成熟或激活的樹突細胞(DC)以及通過釋放影響DC的活化狀態(tài)和抗原呈遞功能的細胞因子，從而通過與DC相互作用而調(diào)控自身免疫和移植排斥(Vivieretal.,NatImmunol9(5):503-510,2008；Laffontetal.,Blood112:661-671,2008)。耐性和非耐性肝臟同種異體移植受體的周圍血單核細胞的對比顯示了NK細胞轉(zhuǎn)錄程序中的變化(Martinez-Llordellaetal.，TClinInvest118(8):2845-2857,2008)。因此，IL-21的阻斷可調(diào)制NK細胞的活化狀態(tài)，降低其對自身免疫疾病中組織炎癥的促進作用，并改變移植排斥的臨床過程。NK細胞還被報道通過殺死未成熟或激活的樹突細胞(DC)以及通過釋放影響DC的活化狀態(tài)和改變DC抗原呈遞功能的細胞因子，從而與DC相互作用而調(diào)控自身免疫和移植排斥。因此，IL-21的阻斷可調(diào)制NK細胞的活化狀態(tài)，降低其對自身免疫疾病中組織炎癥的促進作用。[0010]本申請?zhí)峁┛谷薎L-21單克隆抗體和使用那些抗體的方法，所述抗體抑制表現(xiàn)為自身免疫和炎性疾病并且與IL-21/IL-21受體相互作用有關(guān)的癥狀和生物學(xué)活性?！緦＠綀D】【附圖說明】[0011]圖1是對包含由克隆編號62.78.1.44(78),362.597.3(597),362.75.1.1(75)、366.552.11(552),366,328.10(328)標識的抗體可變重鏈區(qū)的氨基酸殘基的比對。[0012]圖2是對包含上述抗體的可變輕鏈區(qū)的氨基酸殘基的比對。[0013]圖3示出了從單獨的IL-21和從IL-21免疫復(fù)合物獲得的IL-21肽序列區(qū)的MALDI/T0F質(zhì)譜。游離狀態(tài)IL-21的IL-21肽序列，EKKPPKEF(SEQIDNO:2的殘基129-136)(m/z,1002.5619Da)和LERFKSLL(SEQIDNO:2的殘基137-144)(m/z,1005.6091Da)(A)。在IL-21mAb的存在下因酰胺氚化的保留而發(fā)生的肽質(zhì)量偏移(B)。游離狀態(tài)IL-21的另一IL-21肽序列，KSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQIDNO:2的殘基141-162)(m/z,2519.2451)(C)。在IL-21mAb的存在下因酰胺氚化的保留而發(fā)生的部分肽質(zhì)量偏移(D)。[0014]圖4示出了乙?；头且阴；碾牡倪x擇離子色譜圖。從單獨的IL-21分離的乙酰化TCPSCDSYEKKPPKEF(SEQIDNO:2的殘基119-136)(m/z,1986Da)的選擇單離子色譜圖(A)和IL-21免疫復(fù)合物⑶的相同色譜圖曲線(B)。所插入的質(zhì)譜圖是帶三個電荷狀態(tài)的肽質(zhì)量(m/z，662.9)。第三條曲線示出了m/z為IOlSDa的肽離子的選擇離子色譜圖，所述肽離子為從單獨的IL-21分離的乙?；疜SLLQKMI(SEQIDNO:2的殘基141-148)(C)以及IL-21免疫復(fù)合物的相同色譜曲線(D)。所插入的質(zhì)譜圖是該帶兩個電荷狀態(tài)的肽質(zhì)量(m/z,509.1)?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0015]在一個方面，本發(fā)明提供與SEQIDNO:29的氨基酸殘基20-145具有至少80%同一性并與SEQIDNO:37的氨基酸殘基21-126具有至少80%同一性的抗人IL-21單克隆抗體。在某些實施方案中，所述抗體包含的具有至少80%同一性的變化在SEQIDN0:31的重鏈可變區(qū)⑶Rl中。[0016]在另一方面，本發(fā)明提供一種抗人IL-21單克隆抗體，包含:(a)重鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:31的重鏈可變區(qū)CDRl；(ii)包含SEQIDNO:33的重鏈可變區(qū)CDR2;和(iii)包含SEQIDNO:35的重鏈可變區(qū)CDR3;以及(b)輕鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:33的輕鏈可變區(qū)⑶Rl；(ii)包含SEQIDNO:41的輕鏈可變區(qū)⑶R2;和(iii)包含SEQIDNO:43的輕鏈可變區(qū)⑶R3。在某些實施方案中，本發(fā)明提供包含SEQIDNO:29的氨基酸殘基20-145和SEQIDNO:37的氨基酸殘基21-126的抗人IL-21單克隆抗體。在其他實施方案中，所述抗體還包含SEQIDNO:29的氨基酸殘基1_145和SEQIDNO:37的氨基酸殘基1-126。本發(fā)明的另一實施方案提供標識為362.78.1.44的雜交瘤細胞，其中所述雜交瘤細胞保藏于美國典型菌種保藏中心(ATCC),ATCC專利保藏號為PTA-8790，保藏日期為2007年11月15日，分類命名為小鼠雜交瘤，本發(fā)明包括由所述雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。[0017]本發(fā)明的另一方面提供一種抗人IL-21單克隆抗體，包含:(a)重鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:47的重鏈可變區(qū)CDRl；(ii)包含SEQIDNO:49的重鏈可變區(qū)CDR2;和(iii)包含SEQIDNO:51的重鏈可變區(qū)CDR3;以及(b)輕鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:55的輕鏈可變區(qū)⑶Rl；(ii)包含SEQIDNO:57的輕鏈可變區(qū)⑶R2;和(iii)包含SEQIDNO:59的輕鏈可變區(qū)⑶R3。在某些實施方案中，本發(fā)明提供包含SEQIDNO:45的氨基酸殘基20-145和SEQIDNO:53的氨基酸殘基21-126的抗人IL-21單克隆抗體。在其他實施方案中，本發(fā)明還包含SEQIDNO:45的氨基酸殘基1_145和SEQIDNO:53的氨基酸殘基21-126。本發(fā)明的另一實施方案提供標識為362.597.3的雜交瘤細胞，其中所述雜交瘤細胞保藏于美國典型菌種保藏中心(ATCC)，ATCC專利保藏號為PTA-8786，保藏日期為2007年11月15日，分類命名為小鼠雜交瘤，本發(fā)明包括由所述雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。[0018]在另一方面，本發(fā)明提供與SEQIDNO:13的殘基20-141具有至少80%同一性并與SEQIDNO:21的殘基21-126具有至少80%同一性的抗人IL-21單克隆抗體。在一個實施方案中，本發(fā)明包括任何氨基酸改變都是保守性氨基酸改變的單克隆抗體。[0019]在另一方面，本發(fā)明提供一種抗人IL-21單克隆抗體，包含:(a)重鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:15的重鏈可變區(qū)⑶Rl;(ii)包含SEQIDNO:17的重鏈可變區(qū)⑶R2;和(iii)包含SEQIDNO:19的重鏈可變區(qū)CDR3;以及(b)輕鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:23的輕鏈可變區(qū)⑶Rl；(ii)包含SEQIDNO:25的輕鏈可變區(qū)⑶R2;和(iii)包含SEQIDN0:27的輕鏈可變區(qū)⑶R3。在某些實施方案中，本發(fā)明包括包含SEQIDN0:13的氨基酸殘基20-141和SEQIDNO:21的氨基酸殘基21-126的抗人IL-21單克隆抗體。在另一實施方案中，本發(fā)明還包含SEQIDNO:13的氨基酸殘基1_141和SEQIDNO:21的氨基酸殘基1-126。本發(fā)明的另一實施方案提供標識為362.75.1.1的雜交瘤細胞，其中所述雜交瘤細胞保藏于美國典型菌種保藏中心(ATCC)，ATCC專利保藏號為PTA-8791，保藏日期為2007年11月15日，分類命名為小鼠雜交瘤；以及由所述雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。[0020]在另一方面，本發(fā)明提供一種抗人IL-21單克隆抗體，包含:(a)重鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:79的重鏈可變區(qū)CDRl；(ii)包含SEQIDNO:81的重鏈可變區(qū)CDR2;和(iii)包含SEQIDNO:83的重鏈可變區(qū)CDR3;以及(b)輕鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:87的輕鏈可變區(qū)CDRl；(ii)包含SEQIDNO:89的輕鏈可變區(qū)CDR2;和(iii)包含SEQIDN0:91的輕鏈可變區(qū)⑶R3。在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含SEQIDNO:77的氨基酸殘基20-136和SEQIDNO:85的氨基酸殘基23-129的抗人IL-21單克隆抗體。在另一實施方案中，本發(fā)明還包含SEQIDNO:77的氨基酸殘基1_136和SEQIDNO:85的氨基酸殘基1-129。本發(fā)明的另一實施方案提供標識為366.552.11的雜交瘤細胞，其中所述雜交瘤細胞保藏于美國典型菌種保藏中心(ATCC)，ATCC專利保藏號為PTA-8787，保藏日期為2007年11月15日，分類命名為小鼠雜交瘤；以及由所述雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。[0021]在另一方面，本發(fā)明提供一種抗人IL-21單克隆抗體，包含:(a)重鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:63的重鏈可變區(qū)CDRl；(ii)包含SEQIDNO:65的重鏈可變區(qū)CDR2;和(iii)包含SEQIDNO:67的重鏈可變區(qū)CDR3;以及(b)輕鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:71的輕鏈可變區(qū)⑶Rl；(ii)包含SEQIDNO:73的輕鏈可變區(qū)⑶R2;和(iii)包含SEQIDNO:75的輕鏈可變區(qū)⑶R3。在某些實施方案中，本發(fā)明提供包含SEQIDNO:61的氨基酸殘基20-139和SEQIDNO:69的氨基酸殘基23-129的抗人IL-21單克隆抗體。在其他實施方案中，本發(fā)明還包含SEQIDNO:61的氨基酸殘基卜139和SEQIDNO:69的氨基酸殘基1-129。本發(fā)明的另一實施方案提供標識為366.328.10的雜交瘤細胞，其中所述雜交瘤細胞保藏于美國典型菌種保藏中心(ATCC)，ATCC專利保藏號為PTA-8789，保藏日期為2007年11月15日，分類命名為小鼠雜交瘤；以及由所述雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。[0022]在另一方面，本發(fā)明提供標識為366.345.6.11的雜交瘤細胞，其中所述雜交瘤細胞保藏于美國典型菌種保藏中心(ATCC)，ATCC專利保藏號為PTA-8788，保藏日期為2007年11月15日，分類命名為小鼠雜交瘤，本發(fā)明包括由所述雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。[0023]在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供一種與不連續(xù)表位結(jié)合的分離單克隆抗體，所述表位包含IL-21蛋白上的至少兩個區(qū)，其中第一區(qū)由SEQIDNO:2的殘基Ile45至殘基Leu56的至少一個氨基酸構(gòu)成，第二區(qū)由SEQIDNO:2的殘基Glul29至殘基Leul44的至少一個氨基酸構(gòu)成。在一個實施方案中，本發(fā)明提供:第一區(qū)由SEQIDN0:2的殘基Ile45到殘基Leu56中的I至12個氨基酸構(gòu)成，第二區(qū)由SEQIDNO:2的殘基Glul29至殘基Leul44中的I至16個氨基酸構(gòu)成。[0024]上述本發(fā)明的每個方面都包括其中所述單克隆抗體還包含F(xiàn)e片段的實施方案，和其中所述Fe片段選自IgGl、IgG2和IgG4的另一實施方案，以及其中所述Fe片段的效應(yīng)器作用降低的另一實施方案。[0025]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的T濾泡輔助細胞介導(dǎo)或B細胞介導(dǎo)的疾病的方法，其中所述T濾泡輔助細胞介導(dǎo)或B細胞介導(dǎo)的疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性聽力喪失、格雷夫斯氏病(Graves’disease)、尋常型天皰瘡、重癥肌無力、視神經(jīng)脊髓炎、古德帕斯徹氏綜合征(Goodpasture’ssyndrome)、自身免疫性腎炎、冷球蛋白血癥、格林-巴利綜合征、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(CIDP)、自身免疫性溶血性貧血和特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)。[0026]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的THl細胞介導(dǎo)或TH17細胞介導(dǎo)的疾病的方法，其中所述THl細胞介導(dǎo)或TH17細胞介導(dǎo)的疾病選自銀屑病、脊柱關(guān)節(jié)病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、腸病性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性心肌炎、)11崎病、腹腔疾病、葡萄膜炎、白塞氏病、冠狀動脈疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)和肺間質(zhì)病。[0027]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的炎性腸病(IBD)的方法，其中所述炎性腸病選自克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎和腸易激綜合征。[0028]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。[0029]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的多發(fā)性硬化的方法。[0030]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的I型糖尿病(IDDM)的方法。[0031]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的斯耶格倫氏綜合征(sjogren'ssyndrome)的方法。[0032]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療移植受試者的方法，其中抑制了移植排斥，形成了移植前治療方案中的耐性或者降低了所述受試者中同種異體抗體的滴度。[0033]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的自身免疫疾病的方法，其中所述自身免疫疾病選自胰腺炎、炎性肌病(多肌炎、皮肌炎)、顯微鏡下多血管炎、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性肝炎、韋格納氏綜合征(Wegener’ssyndrome)、憩室病、強直性脊柱炎、硬皮病、系統(tǒng)性硬化癥、銀屑病關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、異位性皮炎、白癜風(fēng)、移植物抗宿主病(GVHD)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、腎小球性腎炎、IgA腎病、高敏移植患者、抗磷脂綜合征和哮喘，以及其他自身免疫疾病，或者其他由IL-21和IL-21受體激動劑介導(dǎo)的疾病。[0034]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的方法。[0035]在另一方面，本發(fā)明提供通過給予治療量的要求保護的本文所述的抗人IL-21單克隆抗體來治療受試者的銀屑病的方法?！揪唧w實施方式】[0036]下面給出如下定義以幫助理解本文所述的發(fā)明。[0037]術(shù)語“氨基末端的”和“羧基末端的”在本文中用于表示多肽內(nèi)的位置。當上下文允許時，這些術(shù)語在述及多肽的具體序列或部分時，用于表示鄰近或相關(guān)位置。例如，位于多肽內(nèi)的參照序列羧基末端的某一序列的位置鄰近所述參照序列的羧基末端，但不一定位于所述完整多肽的羧基末端。[0038]術(shù)語“拮抗劑”是指降低另一分子的活性、活化或功能的任何化合物，包括蛋白、多肽、肽、抗體、抗體片段、大分子或小分子(小于IOkD)。IL-21拮抗劑導(dǎo)致下列情形的至少一種:NK細胞、樹突細胞、T細胞亞組和B細胞亞組的免疫功能下降；與IL-21結(jié)合從而阻斷、抑制、降低或中和IL-21蛋白與其受體的相互作用。[0039]“抗體”(Ab)和“免疫球蛋白”(Ig)是具有相同結(jié)構(gòu)特征的糖蛋白?？贵w具有與特定抗原的結(jié)合特異性，而免疫球蛋白包括抗體和其他無抗原特異性的抗體樣分子。無抗原特異性的抗體樣分子的多肽是例如由淋巴系統(tǒng)以低水平以及由骨髓瘤以高水平產(chǎn)生的。因此，本文所用的術(shù)語“抗體”或“抗體肽”是指完整抗體或者與完整抗體進行特異性結(jié)合競爭的完整抗體的結(jié)合片段，并包括嵌合抗體、人源化抗體、完全人源化抗體和雙特異性抗體。在某些實施方案中，結(jié)合片段是用重組DNA技術(shù)制備的。在其他實施方案中，結(jié)合片段是通過對完整抗體的酶法或化學(xué)切割制備的。結(jié)合片段包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和單鏈抗體ScFv。“天然抗體和免疫球蛋白”通常為約150000道爾頓的異四聚體糖蛋白，由兩條相同的輕(L)鏈和兩條相同的重(H)鏈構(gòu)成。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與重鏈連接，而二硫鍵的數(shù)量在不同免疫球蛋白同種型的重鏈之間有變動。每條重鏈和輕鏈還都具有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫鍵。每條重鏈在一個末端具有一個可變區(qū)(VH)，隨后具有多個恒定區(qū)。每條輕鏈在一個末端具有一個可變區(qū)(VL)并在其另一個末端具有一個恒定區(qū)；輕鏈的恒定區(qū)與重鏈的第一個恒定區(qū)對齊，并且輕鏈的可變區(qū)與重鏈的可變區(qū)對齊。特定氨基酸殘基被認為在輕鏈和重鏈可變區(qū)之間形成界面(Chothiaetal.,.1.Mol.Biol.186:651(1985)；NovotnyandHaber,Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.82:4592(1985))。[0040]術(shù)語“嵌合抗體”或“嵌合抗體(復(fù)數(shù))”是指其輕鏈和重鏈基因是從屬于不同物種的免疫球蛋白的可變區(qū)和恒定區(qū)基因，通常通過遺傳工程構(gòu)建的抗體。例如，可將小鼠單克隆抗體基因的可變區(qū)段與人恒定區(qū)段例如Yl和Y3連接。因此，一種典型的治療性嵌合抗體是由小鼠抗體的可變或抗原結(jié)合區(qū)和人抗體的恒定區(qū)構(gòu)成的雜合蛋白，也可使用其他哺乳動物物種。具體地，嵌合抗體是用重組DNA技術(shù)制備的，其中免疫球蛋白輕鏈、重鏈或兩者的全部或部分鉸鏈以及恒定區(qū)被另一種動物的免疫球蛋白輕鏈或重鏈的對應(yīng)區(qū)所替代。這樣，親代單克隆抗體的抗原結(jié)合部分被嫁接到另一物種的抗體的骨架上。[0041]術(shù)語“表位”是指能夠與免疫球蛋白或T細胞受體特異性結(jié)合的任何蛋白決定簇。表位決定簇通常由分子例如氨基酸或糖側(cè)鏈具有化學(xué)活性的表面組群構(gòu)成，并通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征以及特定的電荷特征。更具體地，本文所用的術(shù)語“IL-21表位”是指在動物中(優(yōu)選在哺乳動物中，最優(yōu)選在小鼠或人中)具有抗原性或免疫原性活性的IL-21多肽的一部分。具有免疫原性活性的表位是在動物中引起抗體反應(yīng)的IL-21多肽的一部分。具有抗原性活性的表位是IL-21多肽的這樣一部分，即抗體免疫特異性地與所述部分結(jié)合，這可用本領(lǐng)域熟知的任何方法例如免疫測定而測定。抗原性表位沒有必要一定是免疫原性的?！安贿B續(xù)表位”是由IL-21蛋白的一級序列中的至少兩個獨立區(qū)域構(gòu)成的構(gòu)象表位。構(gòu)象表位在變性溶劑的存在下(如在蛋白雜交分析中)會喪失特異性結(jié)合的能力。[0042]本發(fā)明提供與IL-21蛋白和多肽特異性結(jié)合的單克隆抗體和抗體片段。Parrish-Novaketal.,Nature408:57-63,2003;美國專利N0.6，307，024和6，686，178;以及7，250，274中公開了人和小鼠IL-21多肽、蛋白以及編碼所述多肽的多核苷酸。本文描述了被治療性單克隆抗體識別為標靶的人IL-21蛋白的結(jié)構(gòu)和功能特征限定區(qū)域(表位)。給出了典型人抗人IL-21單克隆抗體。這些抗體中的某一些具有結(jié)合天然人IL-21、重組野生型人IL-21、重組突變型IL-21蛋白和/或人IL-21肽區(qū)的能力。[0043]本發(fā)明提供可用于治療自身免疫和炎性疾病的抗IL-21抗體。例如，抗-1L-21抗體可用于治療銀屑病、胰腺炎、I型糖尿病(IDDM)、Graves’病、炎性腸病(IBD)、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、腸易激綜合征、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、腸病性關(guān)節(jié)炎、脊柱關(guān)節(jié)病、自身免疫性心肌炎、川崎病、腹腔疾病、葡萄膜炎、白塞氏病、冠狀動脈疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺間質(zhì)病、炎性肌病(多肌炎、皮肌炎)、顯微鏡下多血管炎、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性肝炎、韋格納氏綜合征、憩室病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、強直性脊柱炎、硬皮病、系統(tǒng)性硬化癥、銀屑病關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、異位性皮炎、白癜風(fēng)、移植物抗宿主病(GVHD)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、斯耶格倫氏綜合征、腎小球性腎炎、IgA腎病、自身免疫性腎炎、尋常型天皰瘡、重癥肌無力、自身免疫性聽力喪失、視神經(jīng)脊髓炎、古德帕斯徹氏綜合征、冷球蛋白血癥、格林-巴利綜合征、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(CIDP)、自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)的、移植排斥、高敏移植患者、抗磷脂綜合征、過敏癥和哮喘，以及其他自身免疫疾病，或者其他由IL-21和IL-21受體激動劑介導(dǎo)的疾病。[0044]在高等脊椎動物中已識別出五類免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。IgG、IgD和IgE蛋白的特征在于為二硫鍵連接的由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈構(gòu)成的異四聚體。通常，IgM作為四聚體的五聚體存在，而IgA作為四聚體的二聚體存在?？稍诿庖咔虻鞍撞糠种幸胄揎棥0045]IgG構(gòu)成主要的一類免疫球蛋白，因為其通常作為血漿中第二豐富的蛋白存在。在人中，IgG由四個亞類組成，分別稱為IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。每條免疫球蛋白重鏈都具有由對于給定亞類不變的恒定區(qū)蛋白結(jié)構(gòu)域(CH1、鉸鏈、構(gòu)成的恒定區(qū)。IgG類的重鏈恒定區(qū)以希臘符號Y標識。例如，IgGl亞類免疫球蛋白含有YI重鏈恒定區(qū)。[0046]Fe片段或Fe區(qū)由二硫鍵連接的重鏈鉸鏈區(qū)、Ch2和CH3結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。在免疫球蛋白的融合蛋白中，IgGl亞類的Fe區(qū)經(jīng)常用作免疫球蛋白部分，因為IgGl在所有血清蛋白中具有最長的血清半衰期。長血清半衰期對于動物研究和潛在人治療應(yīng)用是一個理想的蛋白特性。此外，IgGl亞類具有最強的實現(xiàn)抗體介導(dǎo)的效應(yīng)器作用的能力。在免疫球蛋白的融合蛋白中最有用的主要效應(yīng)器作用是IgGl抗體介導(dǎo)抗體依賴的細胞毒性的能力。另一方面，這對于主要作為拮抗劑起作用的融合蛋白可能為一種不利的功能。已經(jīng)識別出了對于IgGl亞類中抗體恒定區(qū)介導(dǎo)的活性是重要的數(shù)個特定氨基酸殘基。因此包括或不包括這些特定氨基酸使得包括或不包括特定免疫球蛋白恒定區(qū)介導(dǎo)的活性(見美國專利5，648，260；5，624，821)。[0047]已經(jīng)生成修飾的人IgGlFc以用于制備Fe融合蛋白。例如，美國專利申請2006-0034852描述了通過降低FeYRI結(jié)合和補體Clq結(jié)合而降低由Fe介導(dǎo)的效應(yīng)器作用的Fc4、Fc5和Fc6突變，此文獻以引用的方式全文納入本文中。具體地,引入了三種氨基酸置換以降低FeYRI結(jié)合。這些是在EU索引位置234、235和237上的置換。在這些位置上的置換已被證明可降低與FeYRI的結(jié)合(Duncanetal.,Nature332:563(1988))。這些氨基酸置換還可降低FeYRIIa結(jié)合以及FeyRIII結(jié)合(Sondermannetal.,Nature406:267(2000)；ffinesetal.,T.1mmunol.164:5313(2000))。這勝突奪不改奪與FcRn的結(jié)合,所述結(jié)合通過經(jīng)胞吞收再循環(huán)途徑回收IgG而有利于長血清半衰期。[0048]數(shù)個研究小組已描述了EU索引位置330和331在補體Clq結(jié)合和隨后的補體結(jié)合中的相關(guān)性(CanfieldandMorrison,T.Exp.Med.173:1483(1991)；Taoetal.,T.Exp.Med.178:661(1993))0在Fc4中引入這些位置上的氨基酸置換以降低補體結(jié)合。Fc4的CH3結(jié)構(gòu)域與在對應(yīng)的野生型多肽中發(fā)現(xiàn)的相同，但終止密碼子由TGA變?yōu)門AA以消除當所克隆DNA在大腸桿菌(E.coli)的dam+菌株中生長時可能的dam甲基化位點。在Fc5中，EU索引位置218上的精氨酸殘基為賴氨酸，并且Fc5序列的其余部分符合上面對Fc4的描述。[0049]本發(fā)明還包括遺傳上改變但在功能上與上述抗體相同的抗體。優(yōu)選提供改進的穩(wěn)定性和/或治療有效性的修飾抗體。修飾抗體的實例包括具有氨基酸殘基保守置換的修飾抗體，以及具有不明顯不利地改變抗原結(jié)合效用的一個或多個氨基酸缺失或添加的修飾抗體。置換的范圍可從改變或修飾一個或多個氨基酸殘基到一個區(qū)的完全重新設(shè)計，只要治療效用得以保持。本發(fā)明的抗體可被翻譯后修飾(例如乙?；土姿峄?或可被合成修飾(例如連接標記基團)。[0050]本發(fā)明的抗體可用它們識別或特異性結(jié)合的本發(fā)明IL-21多肽的表位或一部分來進行描述或限定。表位或多肽的一部分可如本文所描述的那樣用例如N-末端和C末端的位置或用連續(xù)氨基酸的長度進行限定。本發(fā)明的抗體也可用它們的交叉反應(yīng)性來進行描述或限定。包括不與本發(fā)明多肽的任何其他類似物、直系同源物或同源物結(jié)合的抗體。[0051]表位建倉(epitopebinning)是指使用競爭性結(jié)合測定以識別能或不能同時結(jié)合IL-21蛋白的抗體對，從而識別與蛋白上相同或重疊表位結(jié)合的抗體。因此具有相同或重疊結(jié)合特異性的抗體家族(或倉(bin))可用于幫助確定IL-21上的特異性表位。表位建倉實驗證明存在抗原性不同的表位。然而，通過這些實驗自身并不能將表位與IL-21蛋白分子上的具體氨基酸序列或位置對應(yīng)起來或者將前者“繪制”到后者。[0052]可對任何一對抗體或片段評估結(jié)合競爭。例如，使用合適的檢測試劑，可將任何物種/來源的抗體或結(jié)合片段的結(jié)合特異性與本文所公開的單克隆抗體的結(jié)合特異性進行比較。表位建倉可用“分離抗體”或用細胞培養(yǎng)上清液進行。通常，用第一輪克隆的上清液進行建倉以指導(dǎo)對要進一步培養(yǎng)的克隆的選擇。要比較的抗體應(yīng)具有基本同質(zhì)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。對于“雙特異性”或“雙功能”抗體，兩個不同結(jié)合位點的結(jié)合特異性需要獨立地進行評估或建倉。[0053]本發(fā)明著重描述配體特異性抗體。除了抗體的競爭性結(jié)合以外，表位建倉也可用于將抗體與受體或者配體對應(yīng)起來，所述抗體競爭性干擾配體與其受體的結(jié)合或者配體介導(dǎo)的其受體的活化。通常，抗體家族(或倉)的有利性質(zhì)可以將與通過表位倉確定的特異性表位的結(jié)合關(guān)聯(lián)起來。[0054]競爭性結(jié)合實驗不直接測量結(jié)合親和力，然而要檢測的抗體必須結(jié)合得足夠強以用作競爭物。通常將實驗條件設(shè)計為使結(jié)合親和力差異的影響最小。[0055]抗IL-21抗體也可用于IL-21蛋白的診斷性測定，例如檢測其在特定細胞、組織或血清中的表達。被分配到不同的倉并且能夠與IL-21的不同免疫原性部分或表位結(jié)合的抗體可用作夾心檢測的試劑。在夾心測定中，檢測樣品分析物被固定在固體支架上的第一抗體捕獲，然后用也與該分析物結(jié)合的第二抗體檢測，從而形成不可溶的三部分復(fù)合物。參見例如美國專利N0.4，376，110。第二抗體本身可被可檢測部分標記(直接夾心檢測)，或可使用以可檢測部分標記的抗免疫球蛋白抗體進行檢測(間接夾心檢測)。例如，一種夾心檢測為ELISA檢測，其中所述可檢測部分為一種酶。[0056]本發(fā)明的抗體可用任何本領(lǐng)域所知的方法測定特異性結(jié)合。許多不同的競爭性結(jié)合測定形式都可用于表位建倉?？墒褂玫拿庖邷y定包括但不限于:使用諸如蛋白質(zhì)印跡、放射免疫測定、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)、“夾心”免疫測定、免疫沉淀反應(yīng)測定、沉淀素反應(yīng)、凝膠擴散沉淀素反應(yīng)、免疫擴散測定、凝集試驗、補體結(jié)合測定、免疫放射測定、熒光免疫測定、蛋白A免疫測定等技術(shù)的競爭性和非競爭性測定系統(tǒng)。這些測定在本領(lǐng)域內(nèi)是常規(guī)和廣為人知的(參見例如Ausubeletal，eds，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vol.1，JohnWiley&Sons,Inc.，NewYork)。下面簡述不例性免疫測定(但并非出于限制的目的)。此外，還可進行在例如Antibodies，ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratory，EdHarlowandDavidLane(1988)中描述的常規(guī)交叉阻斷(cross-blocking)測定。[0057]BIACORE?(GEHealthcare，Piscataway,NJ)是多種表面等離子體共振測定形式中唯一一種常規(guī)用于單克隆抗體的表位倉組的形式。許多參考文獻(例如TheEpitopeMappingProtocols,MethodsinMolecularBiology,Volume66GlennE.Morrised.HumanaPress,1996)描述了可用于對抗體建倉并且被預(yù)期可提供關(guān)于抗體與IL-21蛋白之間結(jié)合特異性的可比較信息的其他方法。當使用BIACORE?系統(tǒng)時，表位建倉實驗用可溶性天然或重組抗原進行。表位建倉研究可在BIACORE1000?系統(tǒng)(GEHealthcare，Piscataway,NJ)上進行。BIA1gue?1.2版軟件可用于程序化運行方法。對于使用BIACORE?以對抗IL-21的小鼠單克隆抗體建倉的實例，可將多克隆山羊抗小鼠IgGFe抗體(JacksonImmunoResearchLaboratories,WestGrove,PA)共價固定在BIACORE?CM5傳感芯片上并用其將檢測系列的第一單克隆抗體結(jié)合(捕獲)到所述芯片上。然后使用多克隆IgGFe片段(JacksonImmunoResearchLaboratories,WestGrove,PA)阻斷芯片上未被占據(jù)的Fe結(jié)合位點。隨后，注入IL-21蛋白并使其與所捕獲的第一單克隆抗體特異性結(jié)合。所述BIACORE?設(shè)備測量結(jié)合于所述傳感芯片上的蛋白質(zhì)量，并且第一抗體和IL-21抗原的結(jié)合在每輪中都可進行驗證。在第一抗體和抗原結(jié)合到芯片后，注入可溶性第二抗體并使其與預(yù)先結(jié)合的抗原結(jié)合。如果第二單克隆抗體能夠與第一單克隆抗體同時結(jié)合IL-21抗原，那么BIACORE?就檢測到其結(jié)合。然而，如果第二單克隆抗體不能與第一單克隆抗體同時結(jié)合IL-21抗原，那么就檢測不到額外的結(jié)合。每種單克隆抗體的檢測都以其自身作為陰性對照來建立背景(無結(jié)合)信號水平。[0058]無標記的競爭性ELISA形式(LFC-ELISA)也可用于進行對抗體建倉。Nagataetal.,T.1mmunoMethods292:141-155,2004.描述了此方法。這種表位建倉方法使用生物素化的IL-21。對于對抗IL-21的小鼠單克隆抗體建倉的實例，用在ELISAB(PBS,0.1%Tween20,1%BSA)中稀釋的Iμg/mL的山羊抗小鼠IgGFe-Y特異性抗體(JacksonImmunoResearch)以100μL/孔包被微量滴定板。在這種包被抗體在室溫下結(jié)合3小時后，將每種含mAb的條件培養(yǎng)基在ELISAB中稀釋以使mAb濃度約為0.5μg/mL并使其與山羊抗小鼠IgG包被的滴定板在4°C下結(jié)合過夜(mAb#l)。平行地，將第二組條件培養(yǎng)基(mAb#2)在聚苯乙烯試管中用ELISAB稀釋至mAb濃度為約0.5μg/mL,與50ng/mL生物素化的IL-21抗原混合,在4°C下孵育過夜。在用包被抗體孵育mAb#I后,用無關(guān)抗體充滿滴定板上未占據(jù)的結(jié)合位點以封閉滴定板。將mAb#2-生物素-1L-21混合物加入到該板中并使它們結(jié)合。作為所述測定中的(非競爭)對照，將50ng/mL生物素化的IL-21直接(不用mAb#2預(yù)先孵育)加入含有固定的mAb#l的孔中。在用生物素化IL-21_mAb#2復(fù)合物孵育后，將鏈霉抗生物素蛋白-HRP以0.5μg/mL加入到所述滴定板中。用TMB底物(BioFXLaboratories,OwingsMills,MD)使所述滴定板顯色，然后用讀板器(MolecularDevicesSPECTRAMAX?340,Sunnyvale,CA)測量每孔在450nm處的吸光度。如果mAb#l與mAb#2結(jié)合不同的表位，那么生物素-1L-21_mAb#2復(fù)合物就會與所述滴定板結(jié)合，產(chǎn)生高吸光度讀數(shù)。如果mAb#l與mAb#2結(jié)合相同的表位，那么生物素-1L-21_mAb#2復(fù)合物就不會與所述滴定板結(jié)合，產(chǎn)生低吸光度讀數(shù)。[0059]本發(fā)明的配體特異性抗體可以只是與IL-21拮抗劑結(jié)合或用作IL-21拮抗劑。例如，本發(fā)明包括不破壞IL-21的受體/配體相互作用或者部分或完全破壞IL-21的受體/配體相互作用的抗體。本發(fā)明著重描述阻止受體活化的配體特異性抗體。本發(fā)明包括結(jié)合配體并阻止所述配體與受體結(jié)合的中和抗體，以及這樣的抗體，即所述抗體結(jié)合配體——從而阻止受體活化——但不阻止所述配體結(jié)合所述受體。受體活化(即信號轉(zhuǎn)導(dǎo))可用本文所述或本領(lǐng)域所知的技術(shù)測定。例如，受體活化可通過用免疫沉淀繼之以蛋白質(zhì)印跡或基于發(fā)光材料的分析(例如上述那些)檢測受體或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸)而測定。在具體實施方案中，相對于不存在抗體時配體或受體的活性，提供的抗體可將配體或受體的活性抑制至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%。[0060]抗11-21抗體的制備[0061]IL-21的抗體可例如使用IL-21表達載體產(chǎn)生的蛋白或分離自天然來源的IL-21作為抗原而制備。本發(fā)明的抗IL-21抗體與IL-21“特異性結(jié)合”。如果抗體具有下面兩個特性中的至少一個，那么抗體就被認為是特異性結(jié)合的:(I)抗體與IL-21以閾水平的結(jié)合活性相結(jié)合，和(2)抗體與IL-21相關(guān)的多肽不發(fā)生明顯交叉反應(yīng)。相關(guān)多肽可包括結(jié)合含有Y共用鏈(Yc)的受體的I型細胞因子的其他成員，例如IL-2、IL-4，IL-7、IL-9和IL-15。[0062]就第一個特性而言，如果抗體與IL-21多肽、肽或表位的結(jié)合具有如測量的親和常數(shù)所反映的結(jié)合親和力，那么抗體就是特異性結(jié)合的。為測定親和特性，通過表面等離子體共振評估了IL-21拮抗劑與IL-21抗原的相互作用的動力學(xué)速率常數(shù)、平衡結(jié)合常數(shù)和平衡離解常數(shù)的測量情況。結(jié)合速率常數(shù)(ka(Μ—1,))是反映抗原-拮抗劑復(fù)合物形成速率的值。離解速率常數(shù)(kjs—1))是反映此復(fù)合物穩(wěn)定度的值。平衡結(jié)合親和力通常表示為離解平衡常數(shù)(Kd(M))或結(jié)合平衡常數(shù)(Ka(MI)。Kd由離解速率常數(shù)除以結(jié)合速率常數(shù)而獲得0^/\)，而1由結(jié)合速率常數(shù)除以離解速率常數(shù)而獲得(ka/kd)。具有相似Kd(或相似Ka)的拮抗劑可具有變動很大的結(jié)合和離解速率常數(shù)。因此，測量匕和^以及KA*KD可幫助更獨特地描述拮抗劑-抗原相互作用的親和力。優(yōu)選的抗體親和力反映為Ka(平衡結(jié)合常數(shù))為IO6IT1或更大，優(yōu)選地為IOl1或更大，更優(yōu)選地為IO8M-1或更大，最優(yōu)選地為IO9IVr1或更大?？贵w的結(jié)合親和力可通過例如Scatchard分新(Scatchard,Ann.NYAcad.Sc1.51:660,1949)或使用市售的生物傳感設(shè)備由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地測定。就第二個特性而言，例如，如果使用標準蛋白質(zhì)印跡分析或捕獲ELISA，抗體可檢測IL-21而非其他已知多肽，則它們與相關(guān)多肽分子不發(fā)生明顯交叉反應(yīng)。已知相關(guān)多肽的實例包括IL-21所屬的IL-2家族的已知成員(例如IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15)。[0063]單克隆抗IL-21抗體可使用帶有抗原性IL-21表位的肽和多肽來制備。本發(fā)明的抗體結(jié)合帶有抗原性表位的肽和多肽，所述肽和多肽含有SEQIDNO:2或其他本文所公開氨基酸序列中至少9個或15至約30個氨基酸的一段序列。然而，包含含有多肽的30-50個氨基酸或者長度最長至整個氨基酸序列的更大部分的氨基酸序列和包括多肽整個氨基酸序列的肽或多肽也可用于誘導(dǎo)與IL-21結(jié)合的抗體。理想的是選擇帶有表位的肽的氨基酸序列以提供在水性溶劑中的高溶解度(即序列包含高度親水的殘基，而通常避免疏水殘基)。此外，含有脯氨酸殘基的氨基酸序列對于大規(guī)?？贵w生產(chǎn)也可能是理想的。[0064]單克隆抗IL-21抗體可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。例如，抗特定抗原的嚙齒動物單克隆抗體可通過已知方法獲得(參見，例如，Kohleretal.，Nature256:495(1975):Coliganetal.(eds.),CurrentProtocolsinImmunology,Vol.1,pages2.5.1-2.6.7(JohnWiley&Sonsl991)[“Coligan，，]；Picksleyetal.，“ProductionofmonoclonalantibodiesagainstproteinsexpressedinE.coli,，，inDNACloning2:ExpressionSystems,2ndEdition,Gloveretal.(eds.),page93(OxfordUniversityPressl995))。[0065]本發(fā)明的抗體可用任何本領(lǐng)域所知的合成抗體的方法，尤其是通過化學(xué)合成或優(yōu)選地通過重組表達技術(shù)而制備。本發(fā)明抗體，或其片段、衍生物或類似物，例如本發(fā)明抗體的重鏈或輕鏈的重組表達，需要構(gòu)建含有編碼該抗體的多核苷酸的表達載體。一旦獲得編碼本發(fā)明抗體分子或抗體的重鏈或輕鏈或其一部分(優(yōu)選地含有重鏈或輕鏈可變區(qū))的多核苷酸，那么就可使用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)通過重組DNA技術(shù)而制備用于產(chǎn)生該抗體分子的載體。因此，本文描述了通過表達含有抗體編碼核苷酸序列的多核苷酸而制備蛋白的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法可用于構(gòu)建含有抗體編碼序列以及合適的轉(zhuǎn)錄和翻譯控制信號的表達載體。這些方法包括，例如，體外重組DNA技術(shù)、合成技術(shù)和體內(nèi)遺傳重組。因此，本發(fā)明提供包含與啟動子可操作地連接的編碼本發(fā)明抗體分子、或其重鏈或輕鏈、或重鏈或輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列的可復(fù)制載體。這些載體可包含編碼抗體分子恒定區(qū)的核苷酸序列(參見例如PCT公布文本W(wǎng)086/05807；PCT公布文本W(wǎng)089/01036;和美國專利N0.5，122，464)，并且可將抗體的可變區(qū)克隆到這一載體中以表達完整的重鏈或輕鏈。[0066]用常規(guī)技術(shù)將所述表達載體轉(zhuǎn)移到宿主細胞中，然后用常規(guī)技術(shù)培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細胞以產(chǎn)生本發(fā)明抗體。因此，本發(fā)明包括含有與異源啟動子可操作地連接的編碼本發(fā)明抗體或者其重鏈或輕鏈的多核苷酸的宿主細胞。在表達雙鏈抗體的優(yōu)選實施方案中，編碼重鏈和輕鏈的載體可在宿主細胞中共表達以表達完整的免疫球蛋白分子，詳述如下。[0067]多種宿主-表達載體系統(tǒng)可用于表達本發(fā)明的抗體分子。這些宿主表達系統(tǒng)不僅表示可用其產(chǎn)生繼而純化目的編碼序列的載體，而且表示當被合適的核苷酸編碼序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染時，可原位表達本發(fā)明的抗體分子的細胞。這些包括但不限于微生物例如被含有抗體編碼序列的重組噬菌體DNA、質(zhì)粒DNA或粘粒DNA表達載體轉(zhuǎn)化的細菌(例如大腸桿菌、枯草桿菌(B.subtilis));被含有抗體編碼序列的重組酵母表達載體轉(zhuǎn)化的酵母(例如酵母屬、畢赤酵母屬)；被含有抗體編碼序列的重組病毒表達載體(例如桿狀病毒)感染的昆蟲細胞系統(tǒng)；被含有抗體編碼序列的重組病毒表達載體(例如花椰菜花葉病毒CaMV;煙草花葉病毒TMV)感染或被含有抗體編碼序列的重組質(zhì)粒表達載體(例如Ti質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細胞系統(tǒng)；或者包含含有源自哺乳動物細胞基因組的啟動子(例如金屬硫蛋白啟動子)或源自哺乳動物病毒的啟動子(例如MPSV、CMV、腺病毒晚期啟動子；牛痘病毒7.5K啟動子)的重組表達構(gòu)建體的哺乳動物細胞系統(tǒng)(例如C0S、CH0、BHK、293、3T3細胞)。優(yōu)選地，使用細菌細胞例如大腸桿菌，更優(yōu)選地，使用真核細胞，尤其是使用表達完整重組抗體分子的細胞進行重組抗體分子的表達。例如，哺乳動物細胞例如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)，連同含有例如人類巨細胞病毒的主要立即早期基因啟動子元件、CMV增強子或MPSV啟動子的載體是一種有效的抗體表達系統(tǒng)(Foeckingetal.,1986,Gene45:101；Cockettetal.,1990，Bio/Technology8:2)。[0068]在細菌系統(tǒng)中，可根據(jù)待表達抗體分子的擬定用途有利地選擇多種表達載體。例如，當要生產(chǎn)大量這種蛋白以制備抗體分子的藥物組合物時，指導(dǎo)高水平表達易純化的融合蛋白產(chǎn)物的載體是理想的。這些載體包括但不限于:大腸桿菌表達載體pUR278(Rutheretal.,1983,EMBOT.2:1791),其中杭體編碼序列可單獨地連梓到載體中IacZ編碼區(qū)的閱讀框中從而產(chǎn)生融合蛋白；pIN載體(Inouye&Inouye,NucleicAcidsRes.13:3101-3109,1985；VanHeeke&Schuster,T.Biol.Chem.24:5503-5509,1989);等等。pGEX載體也可用于表達與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)的融合蛋白形式的外來多肽。一般而言，這些融合蛋白是可溶的并可通過通過以下方法容易地從裂解細胞中純化:吸附和結(jié)合于谷胱甘肽瓊脂糖小球基質(zhì)，繼而在游離谷胱甘肽的存在下洗脫。PGEX載體被設(shè)計為包括凝血酶或Xa因子蛋白酶酶切位點從而克隆的目的基因產(chǎn)物可被從GST部分釋放。[0069]在昆蟲系統(tǒng)中，使用草地貪夜蛾(Autographacalifomica)核型多角體病毒(AcNPV)作為表達外來基因的載體。所述病毒在草地貪夜蛾細胞中生長?？蓪⒖贵w編碼序列單獨地克隆到病毒的不重要區(qū)域(例如多角體蛋白基因)中并置于AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)的控制之下。[0070]在哺乳動物宿主細胞中，可利用多種基于病毒的表達系統(tǒng)。在使用腺病毒作為表達載體的情況下，可將目的抗體編碼序列連接到腺病毒轉(zhuǎn)錄/翻譯控制復(fù)合物例如晚期啟動子和三聯(lián)前導(dǎo)序列。然后可將此嵌合基因通過體外或體內(nèi)重組插入到腺病毒基因組中。插入到病毒基因組的不重要區(qū)域(例如El或E3區(qū))會形成可存活并能夠在感染的宿主中表達抗體分子的重組病毒(例如參見Logan&Shenk,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81:355-359,1984)。插入的抗體編碼序列的高效翻譯可能還需要特定的起始信號。這些信號包括ATG起始密碼子和鄰接序列。此外，所述起始密碼子必須與所要編碼序列的閱讀框同相(inphase)以確保整個插入物的翻譯。這些外源翻譯控制信號和起始密碼子可來自天然和合成的多種來源。表達效率可通過包括合適的轉(zhuǎn)錄增強子元件、轉(zhuǎn)錄終止子等而得以增強(參見Bittneretal.,MethodsinEnzymo1.153:51-544,1987)。[0071]此外，可選擇調(diào)制插入序列的表達或者以特定形式修飾和加工基因產(chǎn)物的宿主細胞株。這些蛋白產(chǎn)物的修飾(例如糖基化)和加工(例如裂解)對于所述蛋白的功能可能是非常重要的。不同的宿主細胞具有用于對于蛋白和基因產(chǎn)物的翻譯后加工和修飾的特征性和特定機制。可選擇合適的細胞系或宿主系統(tǒng)以確保正確修飾和加工所表達的外來蛋白。為此，可使用具有正確加工初始轉(zhuǎn)錄物、糖基化和磷酸化基因產(chǎn)物的細胞機制的真核宿主細胞。這些哺乳動物宿主細胞包括但不限于CH0、VERO,BHK、Hela,COS、MDCK、293、3T3、W138，尤其是乳腺癌細胞系例如BT483、Hs578T、HTB2、BT20和T47D，以及正常哺乳動物腺細胞系例如CRL7030和Hs578Bst。[0072]為長期、高產(chǎn)地生產(chǎn)重組蛋白，優(yōu)選穩(wěn)定的表達。例如，可改造穩(wěn)定表達抗體分子的細胞系。宿主細胞可被由合適的表達控制元件(例如啟動子、增強子、序列、轉(zhuǎn)錄終止子、多腺苷酸化位點等)控制的DNA以及可選擇標記轉(zhuǎn)化，而不使用含有病毒復(fù)制原點的表達載體轉(zhuǎn)化。引入外來DNA后,可使所改造細胞在增菌培養(yǎng)基(enrichedmedia)中生長1_2天，然后轉(zhuǎn)移至選擇培養(yǎng)基。重組質(zhì)粒中的可選擇標記賦予選擇抗性并使得細胞可將質(zhì)粒穩(wěn)定整合到其染色體中并生長形成細胞點，所述細胞點繼而可被克隆并擴展成細胞系。此方法可有利地用于改造表達抗體分子的細胞系。這些經(jīng)改造的細胞系可特別地用于對與抗體分子直接或間接相互作用的化合物的篩選和評估。[0073]可使用多種選擇系統(tǒng)，包括但不限于單純皰疫病毒的胸苷激酶(Wigleretal.,Cellll:223,1977)、次昔嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Szybalska&Szybalski，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA48:202,1992),和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Lowyetal.,Cell22:817，1980)，這些酶基因可分別用于tk細胞、hgprt細胞或aprt細胞。此外，抗代謝物抗性可用作下面基因的選擇基礎(chǔ):Dhfr,其賦予甲氨蝶呤抗性(Wigleretal.,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA77:357，1980;0'Hareetal.，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA78:1527，1981);gpt,其賦予霉酌.酸抗性(Mulligan&Berg,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA78:2072,1981)；neo,其賦予氨基糖苷G-418抗性(WuandWu,Biotherapy3:87-95,1991；Tolstoshev,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596,1993；Mulligan,Science260:926-932,1993；和MorganandAnderson,Ann.Rev.Biochem.62:191-217,1993；TIBTECH11(5):155-215)；以及hygro,其賦予潮霉素抗性(Santerreetal.,Gene30:147,1984)。Ausubeletal.(eds.),1993,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Johnffiley&Sons,NY；Kriegler,1990,GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY;和Chaptersl2andl3,Dracopolietal.(eds),1994,CurrentProtocolsinHumanGenetics,Johnffiley&Sons,NY.；CoIberre-Garapinetal.,J.Mol.Biol.150:1,1981中描述了可用的重組DNA技術(shù)的本領(lǐng)域公知方法；這些文獻以引用的方式全文納入本文中。[0074]抗體分子的表達水平可通過載體擴增而升高(綜述參見BebbingtonandHentschel,TheuseofvectorsbasedongeneamplificationfortheexpressionofclonedgenesinmammaliancellsinDNAcloning,Vol.3.(AcademicPress,NewYork,1987))。當表達抗體的載體系統(tǒng)中的標記可擴增時，存在于宿主細胞培養(yǎng)物中的抑制物水平的升高會增加標記基因的拷貝的數(shù)量。由于擴增區(qū)域與抗體基因連接，因此抗體的產(chǎn)量也會增加(Crouseetal.,Mol.Cell.Biol.3:257,1983)。[0075]可用兩種本發(fā)明載體共轉(zhuǎn)染宿主細胞，其中第一種載體編碼重鏈衍生的多肽，第二種載體編碼編碼輕鏈衍生的多肽。所述兩種載體可含有能夠使重鏈和輕鏈多肽等量表達的相同可選擇標記?；蛘撸墒褂镁幋a重鏈和輕鏈多肽的單一載體。在這種情況下，輕鏈可置于重鏈之前以避免多余的有毒游離重鏈(Proudfoot，Nature322:52，1986；Kohler,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA77:2197,1980)。重鏈和輕鏈的編碼序列可包括cDNA或基因組DNA。[0076]一旦本發(fā)明的抗體分子被重組表達，那么其就可通過本領(lǐng)域所知的純化免疫球蛋白分子的任何方法純化，例如通過色譜法(例如離子交換色譜法、親和色譜法，尤其是蛋白A后的特異性抗原的親和色譜法以及分級柱色譜法)、離心、差別溶解法，或通過任何其他純化蛋白的標準技術(shù)純化。[0077]對于特別的應(yīng)用，可能需要制備抗IL-21抗體的片段。這些抗體片段可例如通過抗體的蛋白水解而獲得。抗體片段可通過用常規(guī)方法進行完整抗體的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化而獲得。作為示例，抗體片段可通過用胃蛋白酶對抗體進行酶切以提供稱為F(ab)2的5S片段來產(chǎn)生。此片段還可使用硫醇還原劑進一步切割以產(chǎn)生3.5SFab'單價片段。任選地，可使用針對二硫鍵切割形成的巰基的封閉基團進行所述切割反應(yīng)。或者，使用胃蛋白酶的酶切可直接產(chǎn)生兩個單價Fab片段和一個Fe片段。例如，Goldenberg,U.S.patentN0.4,331,647,Nisonoffetal.,ArchBiochem.Biophys.89:230,1960:Porter,Biochem.J..73:119,1959；Edelmanetal.,inMethodsinEnzymologyVol.1,page422(AcademicPressl967)和Coliganatpages2.8.1-2.8.10and2.10.-2.10.4中描述了這些方法。[0078]也可使用切割抗體的其他方法，例如分離重鏈以形成單價輕-重鏈片段，進一步切割片段，或其他酶學(xué)技術(shù)、化學(xué)技術(shù)或遺傳技術(shù)，只要所述片段與為完整抗體所識別的抗原結(jié)合。[0079]例如，F(xiàn)v片段包括VH和VL鏈的結(jié)合。此結(jié)合可為非共價的，如Inbaretal.，Proc.NatfIAcad.Sc1.USA69:2659，1972所述?；蛘?，可變區(qū)鏈可通過分子間二硫鍵連接或通過化學(xué)物質(zhì)例如戍二醒交聯(lián)(參見例如Sandhu,Crit.Rev.Biotech.12:437,1992)。[0080]Fv片段可包括通過肽接頭連接的VH和VL鏈。這些單鏈抗原結(jié)合蛋白(scFv)是通過構(gòu)建包含通過一段寡核苷酸相連的編碼VH和VL結(jié)構(gòu)域的DNA序列的結(jié)構(gòu)基因而制備的。將所述結(jié)構(gòu)基因插入到表達載體中，然后將所述表達載體引入到宿主細胞例如大腸桿菌中。所述重組宿主細胞合成一種以接頭肽橋接所述兩個V結(jié)構(gòu)域的單條多肽鏈。生產(chǎn)scFv的方法的描述見例如Whitlowetal.，Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology2:97(1991)(也參見Birdetal.,Science242:423,1988,Ladneretal.,U.S.PatentN0.4,946,778,Packetal.,Bio/Technology11:1271,1993,andSandhu,見上文)。[0081]也可通過使用單體蛋白的集合構(gòu)建替代結(jié)構(gòu)以形成單體結(jié)構(gòu)域。這些單體結(jié)構(gòu)域小到足以穿透組織。所述單體結(jié)構(gòu)域可為天然或非天然變體或它們的組合。單體結(jié)構(gòu)域可形成兩個或多個結(jié)構(gòu)域的多體。所述單體結(jié)構(gòu)域結(jié)合標靶分子上與本文所述的表位相似的位置。在某些情況下，所述多體可由多個單體結(jié)構(gòu)域構(gòu)成(參見例如美國專利申請2004-0132028和美國專利申請2006-0177831。)[0082]本發(fā)明的抗體包括所修飾的衍生物，即被任何類型的分子與所述抗體的共價結(jié)合以使得所述共價結(jié)合不阻止所述抗體結(jié)合IL-21或阻斷受體活化。例如，但并非限制，所述抗體衍生物包括通過例如糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、任何保護/封閉基團的衍生化、蛋白酶切、與細胞配體或其他蛋白的連接等而被修飾的抗體?？捎靡阎夹g(shù)進行多種化學(xué)修飾的任何一種，所述修飾包括但不限于特異性化學(xué)裂解、乙?；⒓柞；?、衣霉素的代謝合成等。此外，所述衍生物可含有一個或多個非標準氨基酸。[0083]抗IL-21抗體可與可檢測標記綴合形成抗IL-21免疫綴合物。合適的可檢測標記包括例如放射性同位素、熒光標記、化學(xué)發(fā)光標記、酶標記、生物發(fā)光標記或膠體金。制備和檢測這種可檢測標記的免疫綴合物的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并在下面進行詳細描述。所述可檢測標記可以為可通過放射自顯影術(shù)檢測的放射性同位素。特別可用于本發(fā)明目的的同位素為3h、1251、1311、35s和14c。[0084]抗IL-21免疫綴合物也可由熒光化合物標記。熒光標記抗體的存在通過將所述免疫綴合物暴露在合適波長的光下并檢測產(chǎn)生的熒光而測定。熒光標記化合物包括異硫氰酸熒光素、羅丹明、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯二甲醛、Alexa染料、熒光納米粒子(例如Qdot)和熒光胺。[0085]也可通過偶聯(lián)抗體成分與化學(xué)發(fā)光化合物而可檢測地標記抗IL-21免疫綴合物?；瘜W(xué)發(fā)光標記的免疫綴合物的存在是通過檢測在化學(xué)反應(yīng)過程中產(chǎn)生的發(fā)光的存在而測定?；瘜W(xué)發(fā)光標記化合物的實例包括魯米諾、異魯米諾(isoluminol)、芳香吖唳酯、咪唑、吖啶鹽和草酸酯。[0086]類似地，生物發(fā)光化合物可用于標記本發(fā)明的抗IL-21免疫綴合物。生物發(fā)光是一種在生物學(xué)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)發(fā)光，其中催化蛋白增加化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的效率。生物發(fā)光蛋白的存在通過檢測發(fā)光的存在而檢測?？捎糜跇擞浀纳锇l(fā)光化合物包括熒光素、熒光素酶和水母發(fā)光蛋白。[0087]或者，可通過連接抗IL-21抗體組分與酶而可檢測地標記抗IL-21免疫綴合物。當在合適底物的存在下孵育所述抗IL-21-酶綴合物時，其酶部分與所述底物反應(yīng)而產(chǎn)生可通過例如分光光度計、熒光光度計或肉眼檢測的化學(xué)部分。可用于可檢測地標記多特異性免疫綴合物的酶的實例包括β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、過氧化物酶和堿性磷酸酶。[0088]本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉本發(fā)明可用的其他的合適標記。標記部分與抗IL-21抗體的結(jié)合可使用本領(lǐng)域已知的標準技術(shù)而實現(xiàn)。以下文獻描述了此方面的典型方法=Kennedyetal.，Clin.Chim.Acta70:1，1976；Schursetal.，Clin.Chim.Acta81:1，1977；Shihetal.，Int'IJ.Cancer46:1101,1990；Steinetal.，CancerRes.50:1330,1990；以及Coligan，supra.[0089]此外，免疫檢測的便利和多樣性可通過使用與抗生物素蛋白、鏈霉親和素和生物素綴合的抗IL-21抗體而加強(參見例如Wilcheketal.(eds.)，“Avidin-BiotinTechnology，，，MethodsInEnzymology,Vol.184(AcademicPressl990)，和Bayeretal.，“ImmunochemicalApplicationsofAvidin-BiotinTechnology，，，inMethodsInMolecularBiology，Vol.10，Manson(ed.)，pagesl49_162(TheHumanaPress,Inc.1992))。[0090]進行免疫測定的方法被廣為接受。參見例如CookandSelf，“MonoclonalAntibodiesinDiagnosticImmunoassays，，，inMonoclonalAntibodies:Production,Engineering,andClinicalApplication,RitterandLadyman(eds.),pagesl80_208，(CambridgeUniversityPress，1995);Perry，“TheRoleofMonoclonalAntibodiesintheAdvancementofImmunoassayTechnology,”inMonoclonalAntibodies:PrinciplesandApplications,BirchandLennox(eds.),pagesl07_120(Wiley-Liss，Inc.1995);以及Diamandis，Immunoassay(AcademicPress，Inc.1996)。[0091]體內(nèi)半衰期延長的抗體或其片段可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法生成。例如，體內(nèi)半衰期延長的抗體或其片段可通過修飾(如置換、缺失或者添加)被認為參與Fe結(jié)構(gòu)域與FcRn受體之間的相互作用的氨基酸殘基而生成(參見例如國際公布文本N0.W097/34631和W002/06099，所述公布文本以引用的方式全文納入本文中)。體內(nèi)半衰期延長的抗體或其片段可通過在所述抗體或抗體片段上連接聚合物分子例如高分子量聚乙二醇(PEG)而生成。通過PEG與例如所述抗體或抗體片段的N或C末端的的位點特異性綴合或經(jīng)位于賴氨酸殘基上的ε氨基，借助或不借助多官能接頭，可以將PEG連接到所述抗體或抗體片段。將使用使生物活性損失最小的直鏈或支鏈聚合物衍生化。綴合程度將用SDS-PAGE和質(zhì)譜測定緊密檢測以確保PEG分子與所述抗體的正確綴合。未反應(yīng)的PEG可通過例如分子篩或離子交換色譜而與抗體-PEG綴合物分離。[0092]藥物纟目合物[0093]本發(fā)明還包括藥物組合物，其包含藥學(xué)可接受的載體以及本文所述的多肽或抗體。所述藥物組合物可包括其他治療劑，包括但不限于細胞毒性劑細胞毒素例如細胞生長抑制劑或殺細胞劑，治療劑或放射性金屬離子。細胞毒素或細胞毒性劑包括對細胞有害的任何試劑。實例包括紫杉醇、細胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根堿、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長春新堿、長春堿、秋水仙堿、阿霉素、柔紅霉素、二羥基蒽二酮、米托蒽醌、光神霉素、放線菌素D、l-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、心得安和嘌呤以及它們的類似物或同系物。治療劑包括但不限于抗代謝藥物(如甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧唳、氨烯咪胺)、烷基化劑(如氮芥、thioepa苯丁酸氮芥、美法侖、卡氮芥(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲霉素、絲裂霉素C和順-二氯二氨絡(luò)鉬(II)(DDP，順鉬))、蒽環(huán)類抗生素(如柔紅霉素(原道諾霉素)和阿霉素)、抗生素(如更生霉素(原放線菌素)、博萊霉素、光神霉素和氨茴霉素(AMC))和抗有絲分裂劑(如長春新堿和長春堿)。例如，所述藥物組合物可包含具有所需生物活性的蛋白或多肽。這些蛋白可包括，例如，毒素例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒A、假單胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白如腫瘤壞死因子、a-1FN、β-1FN、神經(jīng)生長因子、血小板衍生生長因子、組織血纖維蛋白酶原激活蛋白、血栓形成劑或抗血管生成劑如血管生成抑素或內(nèi)皮抑素；或生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑如淋巴因子、白細胞介素I(IL-1)、白細胞介素2(IL-2)、白細胞介素6(IL-6)，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、旨在拮抗生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的抗體、其他抗體、其他Fe融合蛋白或其他生長因子。[0094]出于治療的目的，將抗IL-21抗體分子和藥學(xué)可接受的載體以治療有效量給予患者。如果給予本發(fā)明的治療性分子和藥學(xué)可接受的載體的結(jié)合物的量在生理學(xué)上有意義，那么就稱以“治療有效量”給藥。如果一種試劑的存在造成接受患者的可檢測的生理學(xué)變化，那么所述試劑就在生理學(xué)上有意義。例如，如果一種用于治療炎癥的試劑的存在減輕了炎性反應(yīng)，那么其就在生理學(xué)上有意義。[0095]已設(shè)計了可降解聚合物微球體以保持治療性蛋白的高系統(tǒng)水平。由可降解聚合物例如聚(丙交酯共聚乙交酯)(PLG)、聚酐、聚(原酸酯)、非可生物降解性醋酸乙基乙烯酯聚合物制備微球體，其中蛋白位于所述聚合物中(GombotzandPettit,BioconjugateChem.6:332,1995:Ranade，“RoleofPolymersinDrugDelivery，，，inDrugDeliverySystems,RanadeandHollinger(eds.),pages51_93(CRCPressl995)；RoskosandMaskiewiczZiDegradableControlledReleaseSystemsUsefulforProteinDelivery,”inProteinDelivery!PhysicalSystems.SandersandHendren(eds.)，pages45_92(PlenumPressl997)；Bartusetal.，Science281:1161,1998:PutneyandBurke,NatureBiotechnology16:153，1998;Putney，Curr.0pin.Chem.Biol.2:548，1998)。聚乙二醇(PEG)涂覆的納米球也可提供用于治療性蛋白的靜脈內(nèi)給藥的載體(參見例如Grefetal.，Pharm.Biotechnol.10:167，1997)。[0096]本領(lǐng)域技術(shù)人員也可設(shè)計其他劑型，如例如AnselandPopovich，PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,5thEdition(Lea&Febigerl990):Gennaro(ed.)，RemingtonrsPharmaceuticalSciences,19thEdition(MackPublishingCompanyl995)和RanadeandHollinger，DrugDeliverySystems(CRCPressl996)中所述。[0097]藥物組合物可作為試劑盒提供，所述試劑盒包含裝有抗IL-21中和抗體的容器。治療性多肽可以單劑或多劑可注射溶液的形式，或作為在注射前復(fù)水的無菌粉末形式提供?；蛘撸@一試劑盒可包含用于治療性多肽給藥的干粉擴散器、液體氣霧發(fā)生器或噴霧器。這一試劑盒還可包含關(guān)于所述藥物組合物的適應(yīng)癥和用法的書面信息。[0098]包含抗IL-21抗體的藥物組合物可以液體形式、氣霧劑形式或固體形式提供。液體形式的實例包括可注射溶液、氣霧劑、滴劑、局部用溶液和口服懸浮液。示例性固體形式包括膠囊、片劑和緩釋形式。緩釋形式的實例包括微型滲透泵和植入物(Bremeretal.，Pharm.Biotechnol.10:239,1997:Ranade，“ImplantsinDrugDelivery，，，inDrugDeliverySystems,RanadeandHollinger(eds.),pages95_123(CRCPressl995)；Bremeretal.,“ProteinDeliverywithInfusionPumps，”inProteinDelivery:PhysicalSystems,SandersandHendren(eds.)，pages239_254(PlenumPressl997)；Yeweyetal.，“DeliveryofProteinsfromaControlledReleaseInjectableImplant,”inProteinDelivery!PhysicalSystems,SandersandHendren(eds.)，pages93-l17(PlenumΡι^%1997))。其他固體形式包括霜劑、糊劑、其他局部使用形式等。[0099]抗IL-21抗體的治療性應(yīng)用[0100]IL-21是一種來源于⑶4+T細胞的細胞因子，其對⑶8+T細胞介導(dǎo)的最佳免疫、NK細胞活化和最佳體液應(yīng)答例如抗體產(chǎn)生和B細胞成熟起重要作用。IL-21已被證明誘導(dǎo)多種促炎性趨化因子和細胞因子、例如IL-18、IL-15、IL-5、IL_6、IL-7A、IL-17F、TNFRI1、s⑶25和RANTES。當通過IV或SC注射給藥時，IL-21還在非人靈長類和人中誘導(dǎo)急性期反應(yīng)(Doddsetal.,CancerTmmunolImmunother20080ctl7[electronicpublication])。在體外，IL-21刺激某些腫瘤免疫細胞群例如多種骨髓瘤細胞和急性T細胞白血病細胞的生長(BrenneetalBlood99(10):3756-62(2002),diCarloE,etalCancerTmmunolTmmunother56(9):1323-1324(2007))。IL-21也由霍奇金淋巴瘤中的霍奇金Reed-Sternberg細胞產(chǎn)生(Lamprechtetal.,Bloodll2(8):3339-47,2008)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IL-21受體在系統(tǒng)性硬化癥患者的表皮(Distleretal.,Arthritis&Rheumatism52:865-864,2004)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細胞(Jungeletal.,Arthritis&Rheumatism50:1468-1476,2004)中的表達增加。此外，自身免疫性糖尿病NOD小鼠的IL-21受體的表達增加(Kingetal.,Cellll7:265-277,2004.)。已經(jīng)證明IgG和IL-21的表達在出現(xiàn)自身免疫性紅斑狼瘡類疾病的BXSB-Yaa小鼠模型中增加(Ozakietal.，T.1mmunol.173:5361-5371,2004);IL_21的表達在狼瘡易感sanroque小鼠中較高(Vinuesaetal.Nature435:452,2005):IL~21的表汰在克羅恩病患者發(fā)炎的腸鉬織中比在其不發(fā)炎的腸組織中高(Monteleone,etal.,Gastroentero1gy128:687-694,2005)。IL-21還在腹腔疾病患者的粘膜中過表達(Finnetal.Gut,PMID:17965065,2007)。[0101]治療有效量的抗IL-21抗體是指當給予受試者時,可有效阻止、延緩、減輕或抑制與疾病或障礙有關(guān)的癥狀或生物學(xué)活性的抗體的量。給藥可為單劑給藥或多劑給藥，并可與其他藥物組合物組合給藥。[0102]本發(fā)明提供在炎性和免疫疾病或病癥中使用抗IL-21單克隆抗體的組合物和方法，所述炎性和免疫疾病或病癥例如銀屑病、胰腺炎、I型糖尿病(IDDM)、Graves’病、炎性腸病(IBD)、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、腸易激綜合征、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、腸病性關(guān)節(jié)炎、脊柱關(guān)節(jié)病、自身免疫性心肌炎、川崎病、腹腔疾病、葡萄膜炎、白塞氏病、冠狀動脈疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺間質(zhì)病、炎性肌病(多肌炎、皮肌炎)、顯微鏡下多血管炎、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性肝炎、韋格納氏綜合征、憩室病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、強直性脊柱炎、硬皮病、系統(tǒng)性硬化癥、銀屑病關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、異位性皮炎、白癜風(fēng)、移植物抗宿主病(GVHD)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、斯耶格倫氏綜合征、腎小球性腎炎、IgA腎病、自身免疫性腎炎、尋常型天皰瘡、重癥肌無力、自身免疫性聽力喪失、視神經(jīng)脊髓炎、古德帕斯徹氏綜合征、冷球蛋白血癥、格林-巴利綜合征、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(CIDP)、自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、移植排斥、高敏患者移植、抗磷脂綜合征、變應(yīng)反應(yīng)和哮喘，以及其他自身免疫疾病。本發(fā)明提供在某些免疫細胞癌癥例如多發(fā)性骨髓瘤、急性T細胞白血病或霍金奇淋巴瘤的治療中使用抗IL-21單克隆抗體的組合物和方法。[0103]接觸性皮炎[0104]變應(yīng)性接觸性皮炎被定義為T細胞介導(dǎo)的對與皮膚接觸的抗原的免疫反應(yīng)。CLA+T細胞群被認為參與皮炎的發(fā)生，因為變應(yīng)原依賴的T細胞應(yīng)答主要限制于CLA+細胞群(參見Santamaria-Babi,etal.,T.ExpMedl81:1935,(1995))。最近的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，在對鎳——一種常見的接觸超敏變應(yīng)原——的應(yīng)答中，只有記憶(⑶45R0+)⑶4+CLA+細胞而非⑶8+T細胞增殖并產(chǎn)生I型(IFN-Y)和2型(IL-5)細胞因子。此外，表達CLA連同⑶4、⑶45R0(記憶)或⑶69的細胞在鎳特異性刺激后增加并表達趨化因子受體CXCR3、CCR4、CCR10，但不表達CCR6。參見Moedetal.,BrTDermatol51:32,(2004)。[0105]在動物模型中，已經(jīng)證明變應(yīng)性接觸性皮炎是T細胞依賴的，并且發(fā)現(xiàn)變應(yīng)應(yīng)答的T細胞遷移到變應(yīng)原作用的位點。主要參見:Engeman,etal.,TImmunol164:5207,(2000):Ferguson&Kunner,TTmmunol150:1172,(1993);和Gorbachev&Fairchild,CritRevTmmunol.21:451(2001)。[0106]對接觸超敏小鼠模型給予抗IL-21抗體用于評估抗IL-21抗體對改善疾病癥狀和改變疾病進程的臨床效用。[0107]異位性皮炎[0108]異位性皮炎(AD)是一種在過去十年間發(fā)病率急劇增加的慢性復(fù)發(fā)性炎性皮膚疾病。臨床上AD的特征是極度瘙癢、表皮經(jīng)常脫落、有斑塊和丘疹，表現(xiàn)為慢性復(fù)發(fā)性過程。AD的診斷主要基于主要和次要臨床所見。參見HanifinJ.M.,ArchDermatol135:1551(1999)。組織病理學(xué)揭示了急性損傷中的海綿層水腫、過度角化不全、灶性角化不全，而伴隨過度角化不全和角化不全的顯著表皮過度增生、棘層肥厚/顆粒層增厚和淋巴細胞和過多的肥大細胞對真皮的血管周圍浸潤是慢性損傷的標志。[0109]T細胞在組織中的局部免疫反應(yīng)的啟動中起關(guān)鍵作用，有證據(jù)表明特別是皮膚浸潤的T細胞可在皮膚失控免疫反應(yīng)的啟動和維持中起關(guān)鍵作用。皮膚炎性位點中約90%的浸潤T細胞均表達皮膚淋巴細胞相關(guān)抗原,所述抗原結(jié)合內(nèi)皮選擇素(Ε-selectin)-一種內(nèi)皮上誘導(dǎo)型粘附分子(綜述見Santamaria-Babi,etal.,EurJDermatol14:13,(2004))。已經(jīng)有人報道AD患者中循環(huán)CLA+T細胞較對照個體的顯著增加(參見Teraki，etal.,BrTDermatol143:373(2000)),同時其他人已經(jīng)證明AD患者的記憶CLA+T細胞較CLA-細胞群優(yōu)先應(yīng)答變應(yīng)原提取物。在人中，皮膚異位性病變的發(fā)病機理與CLA+T細胞的增加有關(guān)，所述細胞表達水平增加的Th-2型細胞因子如IL-5和IL-13。參見Akdisetal.,EurTTmmunol30:3533(2000)；andHamidetal.,TAllergyClinTmmunol98:225(1996)。[0110]當將約6-8周齡的NC/Nga小鼠籠養(yǎng)在不含非特定病原體(non-SPF)條件下時，它們會自發(fā)地出現(xiàn)在許多方面與人的AD相似的AD樣損傷。相反，飼養(yǎng)在SPF條件下的NC/Nga小鼠不發(fā)生皮膚損傷。然而，通過每周皮內(nèi)注射粗塵螨抗原可使籠養(yǎng)在SPF鼠房中的NC/Nga小鼠同時出現(xiàn)自發(fā)性皮膚損傷和抓撓行為。參見Matsuokaetal.,AllerRy58:139(2003)。因此，NC/Nga中出現(xiàn)AD是一種評估治療AD的新療法的有用模型。[0111]除了自發(fā)性AD的NC/Nga莫型以外，使用OVA對小鼠進行上皮敏化也可用作誘導(dǎo)抗原依賴的表皮和真皮增厚的模型，并且在敏化小鼠的皮膚中有單核細胞浸潤物。這通常伴隨總IgE和特定IgE的血清水平的升高，然而此模型中通常不出現(xiàn)皮膚屏障失調(diào)或瘙癢。參見Spergeletal.,TClinInvest,101:1614,(1998)?？尚薷拇朔桨敢酝ㄟ^用OVA敏化D011.100VATCR轉(zhuǎn)基因小鼠而誘導(dǎo)皮膚屏障失調(diào)和瘙癢。能識別所述敏化抗原的抗原特異性T細胞數(shù)量的增加可增加皮膚的炎癥水平，從而導(dǎo)致可見的抓撓行為和皮膚的苔蘚樣硬化/剝落。[0112]對異位性皮炎小鼠模型給予抗IL-21抗體以用于評估抗IL-21抗體對改善疾病癥狀和改變疾病進程的臨床效用。[0113]關(guān)節(jié)炎[0114]關(guān)節(jié)炎，包括骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)損傷造成的關(guān)節(jié)炎等，是可受益于抗炎性抗體和結(jié)合多肽的治療性應(yīng)用的常見炎性病癥。例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是影響全身的全身性疾病并且是最常見的關(guān)節(jié)炎形式之一。其特征是關(guān)節(jié)滑膜發(fā)炎，導(dǎo)致疼痛、僵硬、發(fā)熱、發(fā)紅和腫脹。炎性細胞釋放可消化骨和軟骨的酶。做為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的后果，發(fā)炎的關(guān)節(jié)膜滑膜可入侵并破壞骨和軟骨，導(dǎo)致關(guān)節(jié)損害和劇烈疼痛以及其他生理影響。波及到的關(guān)節(jié)可喪失其形狀和結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致疼痛和運動能力的喪失。[0115]類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[0116]類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種免疫介導(dǎo)的疾病，具體特征是發(fā)炎和后續(xù)的組織損害，從而導(dǎo)致嚴重的殘疾和死亡率的增加。在患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)中局部產(chǎn)生多種細胞因子。多項研究證明，兩種原發(fā)性促炎細胞因子IL-1和TNF-α在滑膜發(fā)炎和進行性關(guān)節(jié)破壞涉及的機制中起重要作用。實際上，在RA患者中給予TNF-α和IL-1抑制劑已使炎癥的臨床和生物學(xué)體征得到巨大改善，并且使骨侵蝕和軟骨破壞的輻射性征兆減輕。然而，盡管有這些令人鼓舞的結(jié)果，但是很大百分比的患者對這些試劑無反應(yīng)表明其他介導(dǎo)物也參與關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制(Gabay，Expert.0pin.Biol.Ther.2(2):135-149,2002)。[0117]有數(shù)種本領(lǐng)域已知的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動物模型。例如，在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型中，小鼠發(fā)生與人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎非常相似的慢性炎性關(guān)節(jié)炎。由于CIA具有與RA相似的免疫和病理特征，這使得它成為用于篩選潛在的人用抗炎化合物的理想模型。CIA模型是一種廣為人知的依賴免疫反應(yīng)和炎性反應(yīng)而發(fā)生的小鼠模型。所述免疫反應(yīng)包括對膠原應(yīng)答的B細胞和CD4+T細胞的相互作用，所述膠原作為抗原被給予并導(dǎo)致抗膠原抗體的產(chǎn)生。炎性階段是炎癥介導(dǎo)物發(fā)生組織反應(yīng)造成的，而所述炎癥是這些抗體中的一些與小鼠天然膠原交叉反應(yīng)并激活補體級聯(lián)反應(yīng)的后果。使用CIA模型的一個優(yōu)點是其發(fā)病的基本機制是已知的。已經(jīng)鑒定出了II型膠原上與T細胞和B細胞相關(guān)的表位，并且測定了與免疫介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎有關(guān)的多種免疫(例如延遲型超敏性和抗膠原抗體)和炎性(例如細胞因子、趨化因子和基質(zhì)降解酶)參數(shù)，并因此可用于評價測試化合物在CIA模型中的效力(Wooley,Curr.0pin.Rheum.3:407-20,1999；ffilliamsetal.，Tmmunol.89:9784-788,1992；Myersetal.,LifeSc1.61:1861-78,1997jPWangetal.,Tmmunol.92:8955-959,1995)。[0118]對這些CIA模型小鼠給予抗IL-21抗體以用于評估抗IL-21抗體對改善疾病癥狀和改變疾病進程的應(yīng)用。[0119]炎性腸病(IBD)[0120]在美國約有500000患有炎性腸病(IBD)，其可影響結(jié)腸和直腸(潰瘍性結(jié)腸炎)或同時影響小腸和大腸(克羅恩病)。這些疾病的發(fā)病機制尚不清楚，但它們涉及被影響組織的慢性炎癥。潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種大腸一通常稱為結(jié)腸一的炎性疾病，其特征為結(jié)腸粘膜或最內(nèi)層腸壁的炎癥和潰瘍。這種炎癥導(dǎo)致結(jié)腸頻繁排空，從而造成腹瀉。癥狀包括大便松散并伴隨腹絞痛、發(fā)熱和體重減輕。盡管UC的確切原因還未知，然而最近的研究表明其是身體自然防護系統(tǒng)對被免疫系統(tǒng)認為“非自身”的體內(nèi)蛋白進行的反應(yīng)(“自身免疫反應(yīng)”)。也許由于這些蛋白與腸道中的細菌蛋白相似，因此它們可能會促使或刺激開始破壞所述結(jié)腸內(nèi)壁的炎性過程。由于所述結(jié)腸內(nèi)壁遭到破壞，因此形成釋放出粘液、膿和血的潰瘍。該病通常開始于直腸區(qū)并可最終蔓延到整個大腸。炎癥的反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致腸壁增厚并在直腸出現(xiàn)疤痕組織。對于嚴重疾病的情況，可發(fā)生結(jié)腸組織的壞死或膿毒癥。潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀的嚴重程度不同，并且其發(fā)病可為漸進性或突發(fā)性的。許多因素包括呼吸道感染或應(yīng)激都可引起發(fā)病。[0121]盡管目前尚無可治愈UC的療法，但是治療方法集中于抑制結(jié)腸內(nèi)壁的異常炎性過程。可使用包括皮質(zhì)留類免疫抑制劑(例如咪唑硫嘌呤(azathioprine)、巰基嘌呤(mercaptopurine)和氨甲蝶呤(methotrexate))和氨基水楊酸鹽的治療方法以治療該病。然而，長期使用免疫抑制劑(例如皮質(zhì)留類和咪唑硫嘌呤)會產(chǎn)生嚴重的副作用，包括骨質(zhì)疏松、白內(nèi)障、感染以及肝和骨髓影響。在目前療法無效的患者中也可采用外科手術(shù)。然而，這種外科手術(shù)涉及整個結(jié)腸和直腸的切除。[0122]存在數(shù)種可部分模仿潰瘍性結(jié)腸炎的動物模型。最廣泛使用的模型是2，4，6_三硝基苯磺酸/乙醇(TNBS)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型，其引起結(jié)腸中的慢性炎癥和潰瘍。當通過直腸內(nèi)灌注將TNBS引入易感染小鼠的結(jié)腸時，TNBS會誘導(dǎo)結(jié)腸粘膜中T細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，在這種情況下造成特征為T細胞和巨噬細胞在全部大腸壁上致密浸潤的大面積粘膜炎癥。此外，這種組織病理學(xué)狀況伴隨進行性體重減輕(消瘦)、出血性腹泄、直腸脫垂和大腸壁增厚的臨床癥狀(Neurathetal.1ntern.Rev.Tmmunol.1^:51-62,2000)。將幼稚T細胞過繼性轉(zhuǎn)移到較低組織相容性不匹配或同系免疫缺陷的小鼠中會導(dǎo)致結(jié)腸炎(LeachMWetall996,PowrieFetal,1997)以及類似銀屑病的皮膚損傷(SchonMPetal.,NatMed.2:183-8,1997；DavenportCMeta.1.,TntTmmunoDharmacol.5:653-72,2002)的發(fā)生。將少至0.2X106BALB/C或BI0.D2小鼠的⑶4+⑶25-T細胞轉(zhuǎn)移到免疫缺陷的C.B-17SCID小鼠中切割導(dǎo)致體重減輕，潛血檢測陽性大便和皮膚損傷的發(fā)生。這些小鼠的癥狀在群與群之間不同。該結(jié)腸炎/銀屑病模型與人類克羅恩病和銀屑病有某些相似性，已被廣泛用于檢測對人類中這些疾病的治療的效力。[0123]另一種結(jié)腸炎模型使用葡聚糖硫酸鈉(DSS)，其誘導(dǎo)具有如下表現(xiàn)的急性結(jié)腸炎:出血性腹瀉、體重減輕、結(jié)腸縮短和伴隨中性白細胞浸潤的粘膜潰瘍。DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的組織學(xué)特征為炎性細胞浸潤到固有層，伴隨淋巴樣增生、灶性隱窩破壞和上皮潰瘍。這些變化被認為是由于以下原因而發(fā)生:DSS對于上皮細胞的毒性作用并通過固有層細胞的吞噬以及TNF-α和IFN-Y的產(chǎn)生。盡管被常規(guī)使用，然而DSS誘導(dǎo)的疾病在數(shù)個組織中的機制以及DSS與人類疾病的相關(guān)性仍未解決。DSS被認為是一種不依賴T細胞的模型，因為其見于T細胞缺失的動物例如SCID小鼠中。[0124]對這些TNBS、DSS或CD4+T細胞轉(zhuǎn)移模型給予抗IL-21抗體可用于評估IL-21拮抗物改善胃腸疾病的癥狀和改變胃腸疾病進程的應(yīng)用。IL-21可在結(jié)腸炎的炎性反應(yīng)中起重要作用，通過給予IL-21拮抗劑中和IL-21活性是一種潛在的治療IBD的方法。[0125]銀屑病[0126]銀屑病是一種影響超過七百萬美國人的慢性皮膚病。銀屑病發(fā)生在新生皮膚細胞生長異常時，導(dǎo)致角質(zhì)形成細胞的最終分化被改變的皮膚出現(xiàn)發(fā)炎、腫脹和鱗狀的斑塊。最常見的形式斑塊狀銀屑病的特征為上覆銀白鱗片的皮膚的發(fā)炎斑塊(“損傷”)。銀屑病可限于少數(shù)斑塊或者波及中等至大片面積的皮膚，最常見于頭皮、膝蓋、肘和軀干上。盡管高度可見，然而銀屑病并不是一種傳染性疾病。該病的發(fā)病機理涉及T細胞活化，抗原呈遞改變和炎性樹突細胞的細胞因子的產(chǎn)生，以及受影響組織的慢性炎癥。本發(fā)明的抗IL-21抗體可用作減輕銀屑病、其他炎性皮膚病、皮膚和粘膜變應(yīng)性以及相關(guān)疾病中的炎癥和病理影響的有用治療劑。[0127]銀屑病是一種導(dǎo)致極大不適的T細胞介導(dǎo)的炎性皮膚病。其是一種無法治愈并影響所有年齡的人的疾病。銀屑病影響歐洲和北美大約2%的人口。盡管患有輕微銀屑病的人通?？捎镁植克巹┛刂扑麄兊募膊?，然而全世界超過一百萬患者需要紫外線治療或系統(tǒng)免疫抑制治療。不幸的是，紫外輻射的不便和危險以及許多治療劑的毒性限制了它們的長期使用。此外，患者經(jīng)常在停止免疫抑制治療不久后遭受銀屑病的復(fù)發(fā)，并在某些情況下反彈?？笽L-21抗體可使用最近開發(fā)的基于CD4+CD45RB轉(zhuǎn)移模型的銀屑病模型進行測試(Davenporteta.1.,Tnternat.Tmmunopharmaco1.,2:653-672,2002)。[0128]除了本文所述的其他疾病模型以外，抗IL-21抗體對由人銀屑病損傷引起的炎性組織的活性還可使用基于嚴重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)的小鼠模型在體內(nèi)測量。已經(jīng)開發(fā)了將人細胞或組織移植物植入免疫缺陷小鼠中的數(shù)種小鼠模型(總稱為異種移植模型)；參見例如CattanandDouglas,Leuk.Res.18:513-22,1994和Flavell,HematologicalOncoloRyH:67_82，1996。作為銀屑病體內(nèi)異種移植模型，將人銀屑病皮膚組織移植到SCID小鼠上，然后用合適的拮抗劑對小鼠進行攻擊。此外，本領(lǐng)域其他銀屑病動物模型也可用于評價IL-21拮抗劑，例如將人銀屑病皮膚移植物移植到AGR129小鼠模型上并用合適的拮抗劑進行攻擊(例如參見Boymanetal.,T.Exp.Med.0nlinepublication#20031482,2004)。類似地，來自人結(jié)腸炎、IBD、關(guān)節(jié)炎或其他炎性損傷的組織或細胞可用于SCID模型中以評價本文所述的IL-21抗體的抗炎性能。[0129]使用本領(lǐng)域廣為人知的方法測量治療效果，并以一段時間里接受治療的人群中抗炎作用的增加來從統(tǒng)計學(xué)上對其評價。一些示例性方法包括但不限于例如在銀屑病模型中測量表皮厚度、上真皮中炎性細胞的數(shù)量和角化不全的程度。這些方法在本領(lǐng)域中已知并在本文中進行了描述。例如，參見Zeigleretal.,LabInvest81:1253,2001；Zollneretal.,J.Clin.1nvest.109:671,2002；Yamanakaetal.,Microbiol.Tmmunol.45:507,2001；Raychaudhurietal.,Br.J.Dermatol.144:931,2001；Boehnckeetal.,Arch.Dermatol.Res.291:104,1999；Boehnckeetal.,J.1nvest.Dermatol.116:596,2001；Nickoloffetal.，Am.J.Pathol.146:580,1995；Boehnckeetal.，J.Cutan.Pathol.24:1,1997；Sugaietal.,J.Dermatol.Sc1.17:85,1998;和Villadsenetal.,J.Clin.1nvest.112:1571,2003。也可使用廣為人知的方法例如流式細胞術(shù)(或PCR)來定量樣品中的炎性或損傷細胞的數(shù)量、IBD評分(體重減輕、腹瀉、直腸出血、結(jié)腸長度)、CIARA模型的爪疾病評分和炎癥評分從而在一段時間里監(jiān)測炎癥。[0130]對這些銀屑病模型小鼠給予抗IL-21抗體以用于評估抗IL-21抗體對改善疾病癥狀和改變疾病進程的應(yīng)用。[0131]系統(tǒng)件紅斑狍瘡[0132]系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種與免疫復(fù)合物有關(guān)的疾病，其特征為針對普遍存在的自身抗原的IgG抗體(例如抗dsDNA抗體)的長期產(chǎn)生。SLE的影響是全身性的,而不定位在于特定組織，盡管在一些情況下會引起腎小球性腎炎(即狼瘡腎炎)。多個染色體位點與該疾病有關(guān)并可對該疾病的不同方面起促進作用，例如抗dsDNA抗體和腎小球性腎炎。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CD4+T細胞在SLE小鼠模型中活躍(Horwitz,LupusIO=319-320,2001；YellinandThieneLCurr.Rheumatol.Rep.，2:24_37，2000)。CD8+T細胞的作用尚未清楚地確定，但有證據(jù)表明“抑制劑”CD8+T細胞的功能在狼瘡患者中受到破壞(Filacietal.,.T-1mmunol.，166:6452~6457,2001:Sakaneeta.1,T.TniMino1.,137:3809-3813,1986)。[0133]IL-21已經(jīng)被令人信服地證明誘導(dǎo)人幼稚B細胞分化為抗體分泌漿細胞(Ozakietal.,T.T^mmunol.173:5361,2004；Ettingeretal.,TTmmuriol.175:7867-79,2005；Ettingereta.1,TTmmunol.178:2872-82,2007；Kucheneta.1.TTmmunol.179:5886-96,2007)。Ozaki等人(T.1mmunol.173:5361,2004)也證明了，IL-21的表達在年齡處于自身免疫過程的早期特征開始變得明顯時的狼瘡易感BXSB-Yaa小鼠(一種SLE模型)中增加。用小鼠IL-21拮抗劑治療這些BXSB-Yaa小鼠部分抑制多種疾病癥狀，包括腎小球性腎炎(Bubieretal.,AnnNYAcadSc1.1110:590-601,2007)。相同的IL-21拮抗劑也被證明在另一種SLE臨床前疾病模型-MRL/lpr小鼠中有效(Herberetal.T.1mmunol.178:3822-3830，2007)。此外，由于IL-21限制Treg細胞的發(fā)育，因此給予抗IL-21抗體可在T細胞抑制劑功能受到損害的狼瘡患者中提供更強的T細胞抑制劑功能(Lamprechtetal.Blood.112(8):3339-47,2008)。[0134]從24名SLE患者和15名健康對照者中獲得的數(shù)據(jù)顯示:I)與對照相比，IL-21mRNA的表達在狼瘡患者的⑶4+T細胞中顯著增加；2)如使用商業(yè)IL-21ELISA試劑盒(Invitrogen,Carlsbad,CA)所測量的，與緩解期SLE患者或?qū)φ障啾?，IL-21水平在活動期SLE患者的血清中顯著升高；3)IL-21以劑量依賴的方式增強⑶4+T細胞和⑶19+B細胞在患者和對照中的增殖；4)IL-21增強抗-⑶40誘導(dǎo)的漿細胞在正常對照和SLE患者中的分化；以及5)IL-21水平的升高可能促進SLE中自體反應(yīng)性CD4+T細胞的增殖和漿細胞分化(Rus,V.,ACRPresentation#1760,2008AmericanCollegeofRheumatologymeeting,0ctober24-29,2008)。[0135]抗IL-21抗體可結(jié)合其他已用于自身免疫的試劑包括免疫調(diào)節(jié)劑例如IFNY、NOVANTRONE?、ENBREL?、BETAFERON?、REMICADE?、LEUKINE?和PROLEUKIN?而給藥?？笽L-21抗體可可結(jié)合其他已用于多發(fā)性骨髓瘤、霍金奇淋巴瘤或急性τ細胞白血病的癌癥治療的試劑例如THALOIVIir)?或結(jié)合以甾體例如地塞米松或強的松而給藥。通過多種方法來確定最優(yōu)化劑量水平并安排抗IL-21抗體，所述多種方法包括:對抗IL-21抗體的藥物代謝動力學(xué)和藥效學(xué)研究；測定動物模型中的有效劑量并評估抗IL-21抗體的毒性。在靈長類和臨床試驗中完成的直接藥物代謝動力學(xué)測量隨后可用于預(yù)測患者中的理論劑量，使所述患者達到量和持續(xù)時間足以在患者中實現(xiàn)生物學(xué)反應(yīng)的血漿抗IL-21抗體水平。[0136]移植排斥[0137]固體器官移植的受體可能因組織相容性不匹配而發(fā)生對同種異體移植物的急性或慢性排斥?？笻LA分子的抗體(同種異體抗體)在這些患者中的產(chǎn)生是由于外來抗原在T細胞上的呈遞造成的。同種異體抗體可通過免疫復(fù)合物的形成、補體結(jié)合和抗體介導(dǎo)的針對所結(jié)合的同種異體抗體的細胞毒性而介導(dǎo)移植物中的組織損害。補體級聯(lián)反應(yīng)也釋放激活內(nèi)皮細胞并導(dǎo)致移植物中血管病變的局部因子。補體產(chǎn)物C4d是急性和慢性移植排斥中都存在的一種早期標記，并可在出現(xiàn)明顯病理變化前的亞臨床情況下被檢測(RacusenandHaas,ClinIAmSocNephroll:415-420,2006；MollandPascual,AmITransplantation5:2611-2618,2005；TinkamandChandraker，ClinJAmSocNephroll:404-414,2006)。在移植前對患者進行抗HLA同種異體抗體(群體反應(yīng)性抗體)的篩選?；颊呖梢蚯按瓮N異體移植失敗、輸血或多次懷孕而被高度敏化。高度敏化移植患者中同種異體抗體的存在使對他們的護理復(fù)雜化，因為可能需要更多的免疫抑制治療并且發(fā)生急性排斥的機會很高(Baidetal.,CurrOpinImmunoll3:577-581,2001)。在某些情況下,使用針對B細胞的試劑(霉酚酸或利妥昔單)，盡管這種治療方法不直接針對抗體分泌漿細胞。血漿除去法也用于減少循環(huán)免疫球蛋白。在所有情況下，都用針對T細胞的免疫抑制劑治療移植受體以降低發(fā)生排斥的危險，并隨著所述受體對移植物耐性的建立而慢慢“停止”這種治療(Seyfort-MargolisandTurka,TClinInvestll8(8):2684~2685,2008:Tayloretal.，CritRevOncolHematol56:23-46,2005；AmanteandEjercito,TransplantProc40:2274-2280,2008)。[0138]除了支持漿細胞存活的特殊微環(huán)境之外，抗體分泌漿細胞的發(fā)育還需要CD4T細胞的同源輔助(Tarlingtonetal.,CurrOpinTmMinoI20:162-169,2008)η激活的T細胞分泌細胞因子對于漿細胞的分化和存活是必需的，并已知影響抗體反應(yīng)和Ig同種型的性質(zhì)。在小鼠和非人靈長類中存在監(jiān)測T細胞依賴的抗體反應(yīng)的模型。這些方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所深刻理解。使用檢測受治療動物的血清中的總抗體或抗原特異性抗體包括IgG亞型、IgM、IgE或IgA的測定來監(jiān)測抗模型肽抗原例如卵白蛋白、破傷風(fēng)類毒素、綿羊紅細胞或三硝基苯基修飾的鑰孔戚血藍蛋白的一抗或二抗反應(yīng)的動力學(xué)和幅度。在某些模型中，還可監(jiān)測抗體的親和力成熟。這些模型可用于檢測治療藥物的效果，所述治療藥物改變T細胞對B細胞的輔助并阻斷被認為對漿細胞分化和存活重要的細胞因子。[0139]在許多動物種中進行了同種異體移植物排斥的研究。例如，食蟹猴(cynomolgusmonkey)的腎移植模型可顯示人中同種異體抗體介導(dǎo)的慢性腎同種異體移植排斥的影響。在某些病例中在移植前進行同種異體移植物耐受療法。通過對外周血白細胞不匹配的受體血清的流式細胞術(shù)分析來監(jiān)測供體特異的同種異體抗體的存在情況，并在腎同種異體移植物的活檢組織中檢測補體產(chǎn)物C4d的沉積情況(Smithetal.,AmJTransplant6:1790-1798,2006；Smithetal.,AmTTransplant8:1-11,2008)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可在小鼠中進行急性和慢性移植模型。[0140]在T細胞依賴的抗體反應(yīng)模型中或同種異體移植物排斥模型中給予抗IL-21抗體用于評價抗IL-21抗體對于減輕同種異體抗體反應(yīng)、緩解同種異體移植物排斥癥狀的臨床效用，或者用作移植受體(包括高度敏化移植患者)的移植前治療或耐受療法的一部分。[0141]本發(fā)明通過以下非限制性實施例進行進一步說明。[0142]實施例[0143]實施例1.1L-21蛋白和抗體的制備[0144]A.免疫接種和雜交瘤細胞[0145]如美國專利7，250，274中所述，制備IL-21蛋白，所述文獻全文納入本文中。如美國專利申請2007-0122413和美國專利6，777，539中所述，制備可溶性IL-21受體蛋白，所述兩份文獻全文納入本文中。在產(chǎn)生小鼠抗體的野生型小鼠和產(chǎn)生完全人源性抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠(Medarex，Princeton，NJ)中制備抗IL-21單克隆抗體。用人IL-21蛋白免疫接種小鼠。簡單地說，通過用30μg綴合有BSA(ImjectPharmalinkImmunogenKit,Pierce)的純化重組IL-21(由ZymoGenetics在大腸桿菌中產(chǎn)生)進行皮下注射來初次免疫接種小鼠，并按照廠商說明書聯(lián)合給予CpG寡核苷酸(小鼠TLR9配體)和GM-CSF(粒細胞巨噬細胞集落刺激因子，R&D，Minneapolis，MN)和Emulsigen?-P佐劑(MVPLaboratories,INC,Omaha,NE)。初次免疫接種后,每只小鼠以周為間隔經(jīng)皮下途徑再接受三次含30μgIL_21的Enm丨sigen?-p佐劑。第四次免疫接種后7天，經(jīng)眼眶靜脈叢對所述小鼠采血并從血中分離血清以分析其與IL-21結(jié)合的能力。[0146]從兩只高效價BALB/c小鼠或轉(zhuǎn)基因小鼠中采集并合并脾細胞，然后以單次融合方案使用PEG1450將其融合到P3-X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤細胞(脾細胞與骨髓瘤細胞的融合比例為2:1,“Antibodies:ALaboratoryManual”，E.HarlowandD.Lane,ColdSpringHarborPress)。融合后生長9天后,用未標記的或人IgGFe標記的重組IL-21蛋白作為特異性抗體標靶，通過直接和捕獲ELISA識別產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞池。進一步分析陽性雜交瘤細胞池阻斷配體與受體結(jié)合的能力，所述能力以純化重組IL-21蛋白在表達IL-21受體序列的BaF3細胞上的配體-受體相互作用(“磷-STAT3中和測定”)后STAT3磷酸化的水平作為量度。從組織培養(yǎng)基中純化得到的單克隆抗體的特征在于其具有阻斷純化重組IL-21蛋白在表達IL-21受體序列的BaF3細胞上的配體-受體相互作用(“磷-STAT3中和測定”)的能力。以這種方式識別出“中和的”單克隆抗體。[0147]通過有限稀釋將在“磷-STAT3中和測定”和ELISA方法中產(chǎn)生陽性結(jié)果的雜交瘤細胞池克隆至少兩次。在這些測定中，使用標準的低密度稀釋物(每孔少于一個細胞)滴定樣品以觀察哪個克隆保持最高的OD值。利用中和和滴定測定的結(jié)果，從每個初始主孔中選擇兩個特異性克隆進行進一步分析。將這些克隆再進行一輪克隆以確保培養(yǎng)物均勻性，然后使用直接ELISA進行篩選。在再一次滴定測定后，選出兩個最終的IL-21克隆。在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)雜交瘤細胞克隆，所述培養(yǎng)基含有90%的含有2mML-谷氨酰胺、100μg/mL青霉素和100μg/mL硫酸鏈霉素的伊思考夫改良杜爾貝可培養(yǎng)基以及10%的FetalCloneI血清(HycloneLaboratories)。通過以2xl05細胞/ml接種培養(yǎng)物來繁殖所述克隆,并在37°C和5-6%CO2的條件下維持在IxlO5和5xl05細胞/ml之間。在后續(xù)轉(zhuǎn)移時使細胞適應(yīng)不含血清的條件。將細胞冷凍在90%血清、10%DMSO中并存放在液氮冷凍室的蒸汽相。[0148]由所述雜交瘤細胞克隆產(chǎn)生的純化單克隆抗體以多種方法進行表征，所述方法包括建倉(即測定是否每種抗體均能抑制任何其他抗體的結(jié)合)、使用肽進行表位作圖、相對親和力以及中和。[0149]從轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生異源抗體的方法是已知的，參見例如Lonberg，Nat.Biotech.23(9):1117-25,2005:Tomizukaetal.PNAS97(2):722-727,2000;和美國專利5，625，126。[0150]已在美國典型菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,VA.)保藏了以下產(chǎn)生小鼠抗人IL-21單克隆抗體的雜交瘤細胞:克隆338.5.4ATCCN0.(PTA-8317)、克隆338.11.5ATCCN0.(PTA-8314)、克隆338.14.3ATCCN0.(PTA-8313)、克隆338.15.5ATCCN0.(PTA-8315)、克隆338.17.3ATCCN0.(PTA-8316)，以上生物材料的保藏日期均為2007年4月3日，分類命名為小鼠雜交瘤；克隆338.24.5ATCCN0.(PTA-8430)、克隆338.25.6ATCCN0.(PTA-8431)、克隆338.39.5ATCCN0.(PTA-8432)、克隆338.29.2ATCCN0.(PTA-8433)、克隆338.28.6ATCCN0.(PTA-8434)，以上生物材料的保藏日期均為2007年5月15日，分類命名為小鼠雜交瘤。[0151]已在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassas，VA.)保藏下面的產(chǎn)生人抗人IL-21單克隆抗體的雜交瘤細胞。表1提供所述抗體的可變重鏈(VH)和可變輕鏈(VL)的完整氨基酸序列。該表還包括每種抗體的VH和VL區(qū)的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。對應(yīng)的核苷酸序列見序列表。標識為366.345.6.11，ATCCN0.PTA-8788的雜交瘤細胞包括在保藏中但不在表1中。[0152]【權(quán)利要求】1.一種抗人IL-21的單克隆抗體，包含:(a)重鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:63中所示的CDRl序列；(ii)包含SEQIDNO:65中所示的CDR2序列；和(iii)包含SEQIDNO:67中所示的CDR3序列；以及(b)輕鏈區(qū)，包含:(i)包含SEQIDNO:71中所示的CDRl序列；(ii)包含SEQIDNO:73中所示的CDR2序列；和(iii)包含SEQIDNO:75中所示的CDR3序列。2.權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗體，其中所述重鏈包括SEQIDNO:61的氨基酸殘基20-139;并且其中所述輕鏈包括SEQIDNO:69的氨基酸殘基23-129。3.權(quán)利要求1或2的抗人IL-21的單克隆抗體，其中所述抗體還包含F(xiàn)e部分。4.權(quán)利要求3的抗人IL-21的單克隆抗體，其中所述Fe部分選自IgGl、IgG2和IgG4。5.權(quán)利要求3的抗人IL-21的單克隆抗體，其中所述Fe部分具有降低的效應(yīng)器功能。6.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述分離的抗體或其抗原結(jié)合部分能夠與權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗`體競爭。7.一種標識為366.328.10的雜交瘤細胞，其中所述雜交瘤細胞保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，ATCC專利保藏號為PTA-8789。8.一種由權(quán)利要求7的雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。9.權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗體用于制備治療受試者中的炎性腸病(IBD)的藥劑的用途，其中所述炎性腸病選自克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎和腸易激綜合征。10.權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗體用于制備治療受試者中的類風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、I型糖尿病(IDDM)、斯耶格倫氏綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)或銀屑病的藥劑的用途。11.權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗體用于制備治療移植受試者的藥劑的用途，其中抑制了移植排斥，形成了移植前治療方案中的耐性或者降低了所述受試者中同種異體抗體的滴度。12.權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗體用于制備治療受試者中的自身免疫疾病的藥劑的用途，其中所述自身免疫疾病選自胰腺炎、炎性肌病(多肌炎、皮肌炎)、顯微鏡下多血管炎、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性肝炎、韋格納氏綜合征、腸憩室病、強直性脊柱炎、硬皮病、系統(tǒng)性硬化癥、銀屑病關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、異位性皮炎、白癜風(fēng)、移植物抗宿主病(GVHD)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、腎小球性腎炎、IgA腎病、高敏移植患者、抗磷脂綜合征和哮喘，以及其他自身免疫性疾病，或者其他由IL-21和IL-21受體激動劑介導(dǎo)的疾病。13.權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗體用于制備治療受試者中的T濾泡輔助細胞介導(dǎo)或B細胞介導(dǎo)的疾病的藥劑的用途，其中所述T濾泡輔助細胞介導(dǎo)和B細胞介導(dǎo)的疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性聽力喪失、格雷夫斯氏病、尋常型天皰瘡、重癥肌無力、視神經(jīng)脊髓炎、古德帕斯徹氏綜合征、自身免疫性腎炎、冷球蛋白血癥、格林-巴利綜合征、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(CIDP)、自身免疫性溶血性貧血和特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)。14.權(quán)利要求1的抗人IL-21的單克隆抗體用于制備治療受試者中的THl細胞介導(dǎo)或TH17細胞介導(dǎo)的疾病的藥劑的用途，其中所述THl細胞介導(dǎo)或TH17細胞介導(dǎo)的疾病選自銀屑病、脊柱關(guān)節(jié)病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、腸病性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性心肌炎、川崎病、腹腔疾病、葡萄膜炎、白塞氏病、冠狀動脈`疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)和肺間質(zhì)病。【文檔編號】A61P17/06GK103772502SQ201310148259【公開日】2014年5月7日申請日期:2008年12月8日優(yōu)先權(quán)日:2007年12月7日【發(fā)明者】S·R·雅斯帕斯,M·W·里克森,S·R·狄龍,F·J·拉姆斯德爾,C·M·克賴薩,E·C·易申請人:津莫吉尼蒂克斯公司