一種載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束及其制備方法和應(yīng)用。所述膠束是由載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束經(jīng)RGD肽表面修飾而得，所述的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束是由端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物及端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物和多烯紫杉醇藥物經(jīng)薄膜水化法制備而得。實(shí)驗(yàn)表明：本發(fā)明膠束為均勻球形、不連續(xù)納米顆粒，粒徑小且分布均勻，能夠改變多烯紫杉醇的藥代動力學(xué)性質(zhì)，具有明顯的緩釋作用，且與血漿相容性良好，對細(xì)胞無明顯毒性。另外，本發(fā)明制備方法簡單，適合規(guī)?；a(chǎn)；具有較高的臨床應(yīng)用前景和良好的社會效益。
【專利說明】一種載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束及其制備方法和應(yīng)用，屬于靶向給藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]多烯紫杉醇(Docetaxel)又名多西紫杉醇、多西他賽(商品名:泰素帝，Taxotere),是從衆(zhòng)果紫杉的針葉中所提取的化合物紫杉醇再經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾而合成的化合物，為白色粉末狀固體，難溶于水。本品屬于紫杉烷類新型抗腫瘤藥物，其抗腫瘤機(jī)制與紫杉醇相同，都是通過形成非功能性微管束，破壞有絲分裂和細(xì)胞增殖，但活性約為紫杉醇的2倍，是現(xiàn)有藥物中治療轉(zhuǎn)移乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌最有效的單劑化療藥物(BreastCancer Res Tr，2005，94:279-284.)。但因其具有高度親脂性，不溶于水，使用時(shí)常用聚山梨酯80和乙醇增溶，臨床應(yīng)用中大部分病人出現(xiàn)劇烈的過敏反應(yīng)；聚山梨酯80會與一些聯(lián)合使用的藥物發(fā)生瞬間相互作用，在使用多烯紫杉醇注射液治療的同時(shí)，需要使用皮質(zhì)激素和H1、H2受體拮抗劑(如口服地塞米松和H2受體拮抗劑西咪替丁、苯海拉明)，以消除不良反應(yīng)的發(fā)生(Food and Drug Administration, 1997:2204-2207.);此外，作為抗腫瘤藥物，多烯紫杉醇本身具有較大的不良反應(yīng)，這些因素都極大的限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。因此，為了增大多烯紫杉醇的溶解度，提高其對腫瘤部位的靶向性，減小副作用，提高其治療效果，亟需開發(fā)一種新的安全有效的遞藥系統(tǒng)。
[0003]脂質(zhì)核膠束(Lipid core micelles)是祀向給藥系統(tǒng)中的一種新劑型，是目前藥劑學(xué)領(lǐng)域中的熱門研究對象。它是以兩親性聚合物的親水端為外殼、疏水端為內(nèi)核形成的膠束，它可以將藥物選擇性地運(yùn)送到腫瘤部位，發(fā)揮治療作用，同時(shí)減少藥物在正常細(xì)胞、組織或器官的蓄積，從而達(dá)到提高療效、減少毒副作用的目的。脂質(zhì)核膠束具有眾多優(yōu)點(diǎn)，比如核的疏水作用強(qiáng)，穩(wěn)定性好，對親脂性藥物的載藥量高；粒徑小，在IO-SOnm之間，通過EPR效應(yīng)使藥物蓄積于腫瘤組織，實(shí)現(xiàn)被動靶向作用(J DrugTargeting, 2003, 11 (2):87-92.);臨界膠束濃度低，體內(nèi)給藥后稀釋穩(wěn)定性好；制備材料合成簡單，易于規(guī)模化和商業(yè)化；與血漿作用48h后仍能保持其粒徑穩(wěn)定性，適宜用作靜脈給藥(Pharm Res, 2002，19:1424-1429.);外殼與特異性配體相連后，能通過主動靶向更有效地提高包載藥物的生理效應(yīng)(Mol Pharm, 2008,6(2):468-479.)等。
[0004]在眾多特異性配體當(dāng)中，近年來研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織不同于正常組織，其血管系統(tǒng)過度表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合整合素受體如ανβ3和ανβ 5等，成為化療藥物治療的新靶點(diǎn)。RGD肽是一類含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽，能夠介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞之間的相互作用，識別表達(dá)在腫瘤血管和腫瘤細(xì)胞表面的ανβ3受體。據(jù)報(bào)道(J Nucl Med, 2008, 49 (2): 255-259.)，乳腺癌血管及腫瘤細(xì)胞表面α ν β 3受體表達(dá)均較高。此外，RGD 肽與藥物直接相連(Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2008，35:1489-1498.)，RGD介導(dǎo)的載藥空間免疫脂質(zhì)體(J Control Release, 2005，107:262-275.)在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均顯示出良好的腫瘤抑制效果，RGD介導(dǎo)的陽離子納米粒(BioconjugateChem, 2009, 20:1270-1280.)也在體外實(shí)驗(yàn)中顯示出良好的腫瘤靶向性。因此，RGD肽適宜用作腫瘤治療系統(tǒng)，尤其是乳腺癌治療的靶向功能分子。在已公開或授權(quán)的國內(nèi)外專利中，國內(nèi)的有:注射用整合素配體修飾的載藥腫瘤靶向陽離子聚合物(CN101284133)，其涉及的藥物載體為聚乙二醇-聚乙烯亞胺或聚酰胺樹狀分子等陽離子聚合物；RGD-脂肪胺系列化合物作為腫瘤靶向載體材料的制備及應(yīng)用(CN101538312) ；RGD-脂肪醇系列化合物作為腫瘤靶向載體材料的制備及應(yīng)用(CN101401941);脂肪酰-RGD引導(dǎo)的多烯紫杉醇靶向脂質(zhì)體的制備和應(yīng)用(CN102250205A)等。國外專利中，已有RGD介導(dǎo)抗腫瘤藥物的磁性納米粒(US7329638) ;RGD介導(dǎo)pH敏感或溫敏性納米粒(US7371781);用于腫瘤顯像的RGD介導(dǎo)的全氟納米粒(US7566442)及RGD介導(dǎo)陽離子聚合物納米粒(US2009142842A1)等專利，但尚未見RGD肽介導(dǎo)的以兩親性聚合物為載體材料的脂質(zhì)核膠束遞藥系統(tǒng)的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束及其制備方法和應(yīng)用。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0007]—種載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束，是由載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束經(jīng)RGD肽表面修飾而得，所述的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束是由端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物及端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物和多烯紫杉醇藥物經(jīng)薄膜水化法制備而得。
[0008]作為一種優(yōu)選方案，所述的靶向納米脂質(zhì)核膠束中:端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(40:1)~(100:1)，所述的兩種聚乙二醇聚合物的總摩爾量與多烯紫杉醇藥物的摩爾量比值為(30:1)~(60:1)，R⑶肽與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(2:1)~(4:1)，多烯紫杉醇的終濃度為 50 ~500 μ g/mL。
[0009]作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所`述的端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物選自聚乙二醇-二硬酯酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)、聚乙二醇-二油酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DOPE)中的至少一種。
[0010]作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述的端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物選自馬來酰亞胺-聚乙二醇-二硬酯?；字Ｒ掖及?mal-PEG-DSPE)、馬來酰亞胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(mal-PEG-PE)、馬來酰亞胺-聚乙二醇-二油酰基磷脂酰乙醇胺(ma1-PEG-DOPE)中的至少一種。
[0011]作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述的RGD肽選用含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)序列的鏈狀肽或環(huán)狀肽。
[0012]一種制備上述的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束的方法，包括如下步驟:
[0013]a)將端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物和端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物按配比溶于鹵代烴類溶劑中；將多烯紫杉醇藥物按配比溶于醇類溶劑中；
[0014]b)將上述兩種溶液混合均勻后，去除有機(jī)溶劑，凍干；
[0015]c)將上述凍干品用分散介質(zhì)進(jìn)行水化后再進(jìn)行稀釋，然后用微孔濾膜過濾，得到未經(jīng)修飾的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液；
[0016]d)將RGD肽用上述分散介質(zhì)配制成濃度為0.1~0.5mg/mL的溶液,在攪拌下滴加到上述的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液中；
[0017]e)滴畢，繼續(xù)攪拌10~20小時(shí)，即得經(jīng)RGD修飾的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束。
[0018]作為一種優(yōu)選方案，所述的鹵代烴類溶劑選用氯仿；所述的醇類溶劑選用甲醇。
[0019]作為一種優(yōu)選方案，所述的分散介質(zhì)選用水、HBS緩沖液、磷酸鹽緩沖液、0.9%生理鹽水或5%葡萄糖水溶液。
[0020]作為一種優(yōu)選方案，端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(40:1)~(100:1)，所述的兩種聚乙二醇聚合物的總摩爾量與多烯紫杉醇藥物的摩爾量比值為(30:1)~(60:1)，R⑶肽與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(2:1)~(4:1)，多烯紫杉醇的終濃度為50~500 μ g/mL。
[0021]上述的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束的一種用途是與可藥用輔料制備成液體制劑，例如注射劑、針劑等。
[0022]上述的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束的另一種用途是與可藥用輔料制備成凍干粉針劑。
[0023]作為一種優(yōu)選方案，所述的凍干粉針劑中含有凍干保護(hù)劑。
[0024]作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述的凍干保護(hù)劑選自蔗糖、甘露醇、海藻糖、氯化鈉、葡萄糖、乳糖、甘油、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸中的任意一種或幾種的任意組合。
[0025]上述的液體制劑或凍干粉`針劑均可以注射方式給藥，所述的注射方式可以是靜脈輸注、靜脈滴注、皮下注射、肌肉注射等，優(yōu)選靜脈輸注方式給予患者。
[0026]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下顯著效果:
[0027]實(shí)驗(yàn)表明:本發(fā)明提供的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束為均勻球形、不連續(xù)納米顆粒，粒徑小且分布均勻，能夠改變多烯紫杉醇的藥代動力學(xué)性質(zhì)，可以在更長時(shí)間內(nèi)維持有效血藥濃度，能顯著提高多烯紫杉醇在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，使其更有效地靶向于腫瘤部位，提高乳腺癌的治療效果，具有明顯的緩釋作用，且與血漿相容性良好，對細(xì)胞無明顯毒性。另外，本發(fā)明制備方法簡單，適合規(guī)?；a(chǎn)。因此，本發(fā)明具有較高的臨床應(yīng)用前景和良好的社會效益。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0028]圖1是實(shí)施例1所獲得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)的透射電鏡照片；
[0029]圖2是實(shí)施例1所獲得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)的體外釋放曲線，其中:A曲線表示實(shí)施例1制備的靶向納米脂質(zhì)核膠束在pH7.4的PBS緩沖液中的體外釋放情況曲線表示實(shí)施例1制備的靶向納米脂質(zhì)核膠束在含胎牛血清的pH7.4的PBS緩沖液中的體外釋放情況；C曲線為對照品多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)液在pH7.4的PBS緩沖液中的體外釋放情況。
[0030]圖3是實(shí)施例1所獲得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)對于小鼠心、肝、脾、肺、腎、腦各組織的病理學(xué)影響圖片?！揪唧w實(shí)施方式】
[0031]下面結(jié)合實(shí)施例及對比例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)、完整地說明。
[0032]實(shí)施例1
[0033]在室溫下:稱取PEG-DSPE80mg和mal-PEG_DSPE2mg溶于7.8mL氯仿中，稱取多烯紫杉醇2.05mg溶于ImL甲醇中；將兩者混勻后于38°C水浴旋蒸30min ;在_45°C凍干24小時(shí)；用8mL的HBS (pH=7.4)進(jìn)行水化，振搖lOmin，再加入8mL的HBS (pH=7.4)進(jìn)行稀釋；用
0.22 μ m濾膜過濾，得到載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液(未經(jīng)修飾)；
[0034]稱取RGD環(huán)狀肽0.45mg用HBS (pH=7.4) 1.5mL配制成約0.3mg/mL的溶液；取上述的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液6mL,在1000rpm磁力攪拌下,往里滴加RGD肽溶液ImL ;加畢，繼續(xù)攪拌12小時(shí)，即得所述的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束溶液(經(jīng)R⑶修飾)。
[0035]1、對制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)進(jìn)行形態(tài)觀察:
[0036]取適量膠束溶液，滴到碳銅膜網(wǎng)上，加3%磷鎢酸溶液負(fù)染，用濾紙吸干溶劑，置于透射電鏡下觀察形態(tài)；觀察結(jié)果如圖1所示，由圖1可見:在水性介質(zhì)中，所得膠束為均勻球形、不連續(xù)顆粒，且粒徑分布均勻。
[0037]2、對制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)進(jìn)行粒徑和zeta電位測定:
[0038]取適量膠束溶液 ，用適量水代替HBS緩沖液稀釋，然后以NIC0MPZLS380激光粒徑和zeta電位測定儀進(jìn)行測定 ，測定結(jié)果為:平均粒徑約為16nm，zeta電位平均值約為-19mV。
[0039]3、對制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)進(jìn)行包封率和載藥量測定:
[0040]采用高效液相色譜法，色譜條件為:依利特C18柱(5 μ m，4.6mmX 25mm)，流動相為乙腈-水(55:45)，流速LOmL/min，進(jìn)樣量10 μ L，檢測波長230nm，柱溫30°C ；
[0041]精密稱取多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品5mg于50mL容量瓶，用乙腈溶解并稀釋至刻度，再稀釋成0.25,0.5、1、2、4μ g/mL的溶液，進(jìn)樣測定后得到回歸方程:y=24954x-100.57 (R2=I)；
[0042]取制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束溶液(經(jīng)R⑶修飾)10 μ L，加乙腈100 μ L，漩渦Imin,加乙腈1000 μ L,鏇潤lmin, 12000rpm離心IOmin,進(jìn)樣測定,平行測定3份，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算平均值；
[0043]經(jīng)檢測，本實(shí)施例制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)中的多烯紫杉醇的包封率為 96.52 ± 0.43%，載藥量為 2.33 ± 0.01%。
[0044]4、對制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)進(jìn)行體外釋放考察:
[0045]所得膠束，按理論計(jì)算濃度約112 μ g/mL,根據(jù)溶解度和漏槽條件，吸取2.2mL所得膠束溶液，用釋放介質(zhì)稀釋至IOmL,濃度約24.64μ g/mL，釋放介質(zhì)定為50mL (需事先于37°C、50rpm中預(yù)熱20min);所述釋放介質(zhì)采用含0.1% (w/v)吐溫80的pH7.4的PBS緩沖液，透析袋截留分子量為3500。
[0046]樣品:
[0047]A、取3份各0.5mL于透析袋中；
[0048]B、取3份各0.5mL于透析袋中，再各加0.1mL胎牛血清，用于考察膠束與血漿相容性和穩(wěn)定性；
[0049]C、取100 μ g/mL多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)液用上述釋放介質(zhì)稀釋至25 μ g/mL,取0.5mL于透析袋中，用于對照。
[0050]將上述樣品每隔I分鐘投入介質(zhì)中，在37°C、50rpm下，于各時(shí)間點(diǎn)取樣lmL，補(bǔ)充ImL釋放介質(zhì)。
[0051]對所取樣品直接取IOyL采用上述高效液相色譜條件:依利特C18柱(5μπι，
4.6mmX25mm),流動相為乙腈-水(55:45),流速1.0mL/min,進(jìn)樣量10 μ L,檢測波長230nm,柱溫30°C測定多烯紫杉醇濃度，計(jì)算累計(jì)釋放百分率。
[0052]圖2是所獲得的體外釋放曲線，其中:A曲線是樣品A的體外釋放情況；B曲線是樣品B的體外釋放情況；C曲線是樣品C的體外釋放情況。
[0053]由圖2可見:本實(shí)施例制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)具有緩釋作用，且與血漿相容性良好。
[0054]5、對制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)進(jìn)行體外腫瘤靶向性評價(jià):
[0055]將人乳腺癌細(xì)胞株]\0^-]\^-231接種于24孔板，培育至每孔約3\105個(gè)；分別給予20 μ g/mL的多烯紫杉醇溶液、未經(jīng)修飾的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液和經(jīng)RGD修飾的靶向納米脂質(zhì)核膠束溶液后，在2h后用0.05%的十二烷基硫酸鈉裂解細(xì)胞后刮下，取一定量用2，2-聯(lián)喹啉-4，4-二甲酸試劑盒經(jīng)酶標(biāo)儀測定蛋白濃度，另取一定量處理后用上述高效液相色譜條件測定多烯紫杉醇濃度。
[0056]引入評價(jià)指標(biāo)“攝取指數(shù)”，等于單位濃度細(xì)胞蛋白所含有的多烯紫杉醇濃度，指數(shù)越大表明細(xì)胞對藥物的攝取越好，靶向性越強(qiáng)。
[0057]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:多烯紫杉醇溶液(濃度為20 μ g/mL)的攝取指數(shù)為1.55 ;未經(jīng)修飾的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液(濃度為20 μ g/mL)的攝取指數(shù)為19.36 ;經(jīng)RGD修飾的靶向納米脂質(zhì)核膠束溶液(濃度為20 μ g/mL)的攝取指數(shù)為31.67 ;可見:本實(shí)施例制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)具有良好的體外靶向性。
[0058]6、對制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)進(jìn)行藥代動力學(xué)研究:
[0059]a)空白血漿樣品的采集
[0060]實(shí)驗(yàn)前將體重210±20g的雌性SD大鼠禁食12h，自由飲水。實(shí)驗(yàn)時(shí)從大鼠的眼眶靜脈叢穿刺取血,采集空白血液標(biāo)本,放入肝素化的離心管中，于8000rpm離心3min，取上清血漿，_20°C冰箱中冷凍備用。
[0061]b)多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
[0062]精密稱取多烯紫杉醇5.0mg置于50mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，即得多烯紫杉醇儲備液(100 μ g/mL)，分別稀釋制成濃度為0.02,0.05,0.10,0.20,0.50和1.0 μ g/mL,即得多烯紫杉醇的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光低溫保存?zhèn)溆谩?br> [0063]c)樣品的處理
[0064]取體重為210±20g的健康雌性SD大鼠在實(shí)驗(yàn)前禁食12h，自由飲水。將本實(shí)施例制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)溶液和多西他賽注射液(商品名:艾素)均用HBS稀釋成250 μ g/mL，采用尾靜脈給藥方式每只大鼠注射劑量2mg/kg，然后分別于給藥后O、
0.083,0.25,0.5、l、2、4、8、12h自大鼠眼眶靜脈叢穿刺取血0.5mL，置于肝素化的塑料離心管中，于8000rpm離心3min,取上清部分50 μ L,凍干24h以上,加入乙腈450 μ L,旋潤混合3min,于12000rpm離心15min,取上清液10 μ L進(jìn)行液相分析,計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)。
[0065]d)結(jié)果[0066]本實(shí)施例所制的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)溶液的AUC為1771.65h.μ g/L，CL 為 1.07L/kg *h，相對于多西他賽注射液(AUC 為 557.55h.μ g/L，CL 為 3.59L/kg.h)，在血液中的滯留時(shí)間明顯增加(P〈0.05)，血漿清除率顯著降低(p〈0.05);說明本實(shí)施例所制的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)能夠改變多烯紫杉醇的藥代動力學(xué)性質(zhì)，可以在更長時(shí)間內(nèi)維持有效血藥濃度，具有一定的緩釋效果。
[0067]7、對制得的靶向納米脂質(zhì)核膠束(經(jīng)RGD修飾)進(jìn)行藥效學(xué)研究:
[0068]取生長良好的7-11天的S180瘤種，將瘤組織制成1_2X 107/mL細(xì)胞懸液，在雌性42 ±2日齡、體重20±2g的KM小鼠右側(cè)腋部皮下接種0.2mL/只。
[0069]接種24h后隨機(jī)分6組:①HBS組；②空白膠束(未載藥，相當(dāng)于20mg/kg劑量的材料濃度)組！③20mg/kg的多西他賽注射液組20mg/kg的上述未修飾的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束組20mg/kg的上述經(jīng)RGD修飾的祀向納米脂質(zhì)核膠束組10mg/kg的上述經(jīng)RGD修飾的靶向納米脂質(zhì)核膠束組。
[0070]分別于接種第I天和第5天各靜脈注射給藥I次。第0、9天逐個(gè)稱量小鼠體重，并于第9天處死動物，稱瘤重，計(jì)算各組平均瘤重、腫瘤抑制率并進(jìn)行t檢驗(yàn)。
[0071]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示:
[0072]表1
【權(quán)利要求】
1.一種載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束，其特征在于:是由載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束經(jīng)RGD肽表面修飾而得，所述的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束是由端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物及端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物和多烯紫杉醇藥物經(jīng)薄膜水化法制備而得。
2.如權(quán)利要求1所述的靶向納米脂質(zhì)核膠束，其特征在于:所述的端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(40:1)~(100:1)，所述的兩種聚乙二醇聚合物的總摩爾量與多烯紫杉醇藥物的摩爾量比值為(30:1)~(60:1), R⑶肽與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(2:1)~(4:1)，多烯紫杉醇的終濃度為50~500 μ g/mL。
3.如權(quán)利要求1所述的靶向納米脂質(zhì)核膠束，其特征在于:所述的端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物選自聚乙二醇-二硬酯?；字Ｒ掖及贰⒕垡叶?磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二油?；字Ｒ掖及分械闹辽僖环N。
4.如權(quán)利要求1所述的靶向納米脂質(zhì)核膠束，其特征在于:所述的端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物選自馬來酰亞胺-聚乙二醇-二硬酯?；字Ｒ掖及贰ⅠR來酰亞胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、馬來酰亞胺-聚乙二醇-二油?；字Ｒ掖及分械闹辽僖环N。
5.如權(quán)利要求1所述的靶向納米脂質(zhì)核膠束，其特征在于:所述的RGD肽選用含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的鏈狀肽或環(huán)狀肽。
6.一種制備權(quán)利要求1所述的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束的方法，其特征在于，包括如下步驟: a)將端基為甲氧基的聚乙`二醇聚合物和端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物按配比溶于鹵代烴類溶劑中；將多烯紫杉醇藥物按配比溶于醇類溶劑中； b)將上述兩種溶液混合均勻后，去除有機(jī)溶劑，凍干； c)將上述凍干品用分散介質(zhì)進(jìn)行水化后再進(jìn)行稀釋，然后用微孔濾膜過濾，得到未經(jīng)修飾的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液； d)將RGD肽用上述分散介質(zhì)配制成濃度為0.1~0.5mg/mL的溶液,在攪拌下滴加到上述的載運(yùn)多烯紫杉醇的納米脂質(zhì)核膠束溶液中； e)滴畢，繼續(xù)攪拌10~20小時(shí)，即得經(jīng)RGD修飾的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于:所述的鹵代烴類溶劑選用氯仿；所述的醇類溶劑選用甲醇；所述的分散介質(zhì)選用水、HBS緩沖液、磷酸鹽緩沖液、0.9%生理鹽水或5%葡萄糖水溶液。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于:端基為甲氧基的聚乙二醇聚合物與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(40:1)~(100:1)，所述的兩種聚乙二醇聚合物的總摩爾量與多烯紫杉醇藥物的摩爾量比值為(30:1)~(60:1)，R⑶肽與端基為馬來酰亞胺基的聚乙二醇聚合物的摩爾比為(2:1)~(4:1)，多烯紫杉醇的終濃度為50~500 μ g/mL。
9.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述的載運(yùn)多烯紫杉醇的靶向納米脂質(zhì)核膠束與可藥用輔料制成的液體制劑或凍干粉針劑。
10.如權(quán)利要求9所述的凍干粉針劑，其特征在于:所述的凍干粉針劑中含有凍干保護(hù)劑，所述的凍干保護(hù)劑選自蔗糖、甘露醇、海藻糖、氯化鈉、葡萄糖、乳糖、甘油、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸中的至少一種。`
【文檔編號】A61K47/34GK103505442SQ201310176282
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年5月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月28日
【發(fā)明者】奉建芳, 胡凱莉, 陳王彥, 劉梅 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)