復方丹參滴丸治療氧化應激損傷的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了長期給予臨床劑量的復方丹參滴丸(cardiotonic?CP)可以抑制缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)引起的氧化應激損傷，降低I/R后組織中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和外周血中過氧化物(peroxide)的含量；并且，通過對機制的深入研究，揭示了CP通過抑制尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶亞基的轉(zhuǎn)位和活化來發(fā)揮其抗氧化應激的作用。
【專利說明】復方丹參滴丸治療氧化應激損傷

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物的應用，特別涉及復方丹參滴丸治療氧化應激損傷。

【背景技術(shù)】
[0002] 復方丹參滴丸為天士力公司開發(fā)的活血化瘀、理氣止痛中藥，用于胸中憋悶、心絞 痛，其主要成分為丹參、三七、冰片，其藥理作用包括1增加冠脈血流量，2增加心肌耐缺氧 保護缺血心肌,3抗血小板聚集防止血栓形成，4改善微循環(huán)。
[0003] 缺血再灌注（Ischemia/Reperfusion, I/R)引起的死亡在各類缺血性疾病中占據(jù) 絕大部分，然而臨床上并沒有非常有效的藥物干預。前期實驗證明復方丹參滴丸可以抑制 I/R損傷，然而其作用機制尚未完全清晰。
[0004] 本發(fā)明意外的發(fā)現(xiàn)，復方丹參滴丸可以抑制I/R引起的氧化應激損傷，降低1/ R后組織中丙二醒（malondialdehyde，MDA)和外周血中過氧化物（peroxide)的含量；并 且，本實驗通過對機制的深入研究，揭示CP通過抑制尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 (nicotinamide adenosine dinucleotide phosphate oxidase, NADPH oxidase)亞基的轉(zhuǎn) 位和活化來發(fā)揮其抗氧化應激的作用。
[0005] 過氧化物損傷由兩方面的因素決定，一是：體內(nèi)抗過氧化物酶功能下降，體內(nèi)清除 過氧化物的能力降低；二是：過氧化物的生成增多。本次實驗對抗過氧化物酶超氧化物歧 化酶（superoxide dismutase, S0D)和過氧化氫酶（catalase, CAT)的含量進行檢測，結(jié)果 表明CP并不能顯著性的增加體內(nèi)抗過氧化物酶S0D、CAT的含量，證實復方丹參滴丸并不是 通過增強抗過氧化酶來發(fā)揮其抗氧化功能的。
[0006] 因此，本實驗又檢測產(chǎn)生過氧化物的主要來源之一NADPH oxidase的活性。在靜息 狀態(tài)時，NADPH oxidase的催化亞基gp91ph°x位于細胞內(nèi)的囊泡膜上，而NADPH oxidase調(diào)節(jié) 亞基p67ph°\ p47ph°x和p40ph°x位于胞漿中，當NADPH oxidase被激活時，催化亞基和調(diào)節(jié)亞 基結(jié)合形成一個復合體，并從細胞漿中轉(zhuǎn)移到細胞膜上。轉(zhuǎn)位到細胞膜上的NADPH oxidase 將胞漿內(nèi)NADPH的一個電子轉(zhuǎn)移到細胞外的氧分子上，產(chǎn)生氧自由基。本次實驗結(jié)果表明， 復方丹參滴丸可以顯著性的抑制由I/R引起的NADPH oxidase亞基從細胞漿到細胞膜的轉(zhuǎn) 位，抑制NADPHoxidase的活化，從而減少過氧化物的產(chǎn)生。


【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0007] 本發(fā)明提供一種復方丹參滴丸的新的治療用途，特別是復方丹參滴丸的抗氧化應 激的作用。
[0008] 本發(fā)明所用藥物復方丹參滴丸屬于現(xiàn)有技術(shù)，為天士力公司獨家生產(chǎn)的已經(jīng)上市 的藥物，其由丹參三七冰片經(jīng)提取加工制備而成，市場上可以購買得到。
[0009] 為此本發(fā)明提供一種復方丹參滴丸在制備治療或預防氧化應激損傷的藥物中的 應用。
[0010] 本發(fā)明所述應用是復方丹參滴丸能減少心肌梗死區(qū)域，降低梗死面積的增加。 toon] 本發(fā)明所述應用是復方丹參滴丸能使再灌注后心肌細胞排列相對規(guī)整，細胞界限 清楚，間質(zhì)輕度水腫。
[0012] 本發(fā)明所述應用是復方丹參滴丸能使再灌注后TUNEL陽性心肌細胞減少，逆轉(zhuǎn)再 灌注引起的心肌凋亡的增加。
[0013] 本發(fā)明所述應用是復方丹參滴丸能抑制再灌注后過氧化物的產(chǎn)生。
[0014] 本發(fā)明所述應用是復方丹參滴丸能抑制I/R誘導的丙二醛的含量的增高。
[0015] 本發(fā)明所述應用是復方丹參滴丸能抑制I/R誘導的心肌細胞膜上gP91ph° x、p67ph°x、 p47ph°x蛋白表達量的增力口。逆轉(zhuǎn)由I/R誘導的心肌細胞漿中p67ph° x和p47ph°x蛋白表達量的 降低。
[0016] 本發(fā)明所述應用是指聯(lián)長期連續(xù)用復方丹參滴丸所達到的。
[0017] 本發(fā)明所述的治療用途是通過以下實驗證明的：
[0018] 復方丹參滴丸通過抑制NADPH oxidase亞基轉(zhuǎn)位改善缺血再灌注后的氧化應激損 傷
[0019] 1.實驗摘要
[0020] 我們已經(jīng)的研究證實了復方丹參滴丸對缺血再灌注引起的心臟微循環(huán)障礙和心 肌損傷有改善作用。本研究我們發(fā)現(xiàn)連續(xù)給投予復方丹參滴丸可以抑制尼克酰胺腺嘌呤二 核苷酸憐酸氧化酶（nicotinamide adenosine dinucleotide phosphate oxidase, NADPH oxidase)亞基的的轉(zhuǎn)位和活化，降低I/R引起的氧化應激損傷。
[0021] 2.實驗方法
[0022] 2. 1.動物
[0023] 雄性SD大鼠，體重240_260g，購于北京大學醫(yī)學部動物中心，合格證號： SCXK(京）2006 - 0008。動物飼養(yǎng)在溫度為22±2°C，濕度為40±5%的條件下，自由飲食、 飲水，12h光照/黑暗交替。動物于實驗前禁食12h，但可自由飲水。實驗操作規(guī)程按北 京大學動物研究委員會指南執(zhí)行。實驗草案獲北京大學醫(yī)學部實驗動物倫理委員會批準 (LA2010-001)〇
[0024] 2. 2. I/R 模型建立
[0025] 大鼠用20%的烏拉坦（1. 25g/kg)肌肉注射麻醉，臥位固定，頸部去毛，切開皮膚， 分離頸前肌，暴露氣管，行氣管插管。插管另一端連于小動物呼吸機行加壓呼吸（吸比 1 : 1，呼吸頻率75次/min，潮氣量12ml/kg)胸部去毛、消毒，沿胸骨左，右緣2?4肋開 胸暴露心臟，剪開心包膜，用穿有3-0縫合線的3/8彎針穿過肺動脈圓錐與左心耳交界稍 下（1?2)mm處，結(jié)扎縫合線并在絲線與心肌組間放一根聚乙烯小管，拉緊絲線形成造成缺 血，心肌顏色變白為結(jié)扎成功的標志。30分種后放松絲線即發(fā)生再灌注，缺血區(qū)域恢復紅色 為再灌注成功的標志，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。
[0026] 2.3.分組與給藥
[0027] CP(天津天士力制藥股份有限公司提供，批號：20040502)，常溫下保存。實驗選用 的SD大鼠，隨機分成5組（n=6)，假手術(shù)組（Sham)、I/R模型（I/R)組、CP0. lg/kg/day連 續(xù) 6 天給藥 +I/R 組[CP0. 1 (6) +I/R]、CP0. 4g/kg/day 連續(xù) 6 天給藥 +I/R 組[CP0. 4 (6) +1/ R]、CP0. 8g/kg/day 連續(xù) 6 天給藥 +I/R 組[CP0. 8 (6) +I/R]。相應劑量的 CP (0· lg/kg/day， 0. 4g/kg/day，0. 8g/kg/day)分別用生理鹽水溶解，灌胃給藥，生理鹽水4ml/kg，在實驗前5 天至實驗前90分鐘，每24h給藥一次，假手術(shù)組和I/R組分別按照相同的給藥方法，給予等 體積的生理鹽水。
[0028] 2.4.心肌梗死面積的測定
[0029] 再灌注60分鐘后，取出大鼠心臟（n=6)，從心尖部開始延平行于房室間隔的方向 切成1mm厚的5個薄片放入0. 375%的TTC中在37°C下孵育15分鐘，行TTC染色。非梗塞區(qū)被 染成紅色，梗塞區(qū)被染成白色，拍攝心肌圖片，用圖像分析軟件Image-Pro plus5. 0 (Media Cybernetic, Maryland, USA)計算出每片心肌的梗死面積與左心室面積的百分比值，再以五 片心臟切片的心肌梗死面積的百分比的平均值來表示梗死面積。
[0030] 2. 5.組織形態(tài)學染色
[0031] 再灌注60分鐘后，打開胸腔，取出心臟，置于4%的多聚甲醛溶液固定48h，經(jīng)過脫 水、透明、浸蠟、包埋，制備蠟塊，最終制備成石蠟切片。石蠟切片（5ym)用于蘇木精伊紅染 色（HE 染色），用生物光學顯微鏡（Digital Sight DS-5M-U1, Nikon, Tokyo, Japan)進行觀 察和拍照。
[0032] 2.6.心肌細胞的TUNEL染色
[0033] 在再灌60min，取大鼠心臟，灌流固定。冰凍切6μπι的切片，行TUNEL染色。用激 光掃描共聚焦（Axiovert200M, Carl Zeiss, Jena, Germany)在心臟I/R區(qū)選擇5個視野， 用圖像分析軟件 Image-Pro plus5.0 (Media Cybernetic, Maryland, USA)計數(shù) TUNEL 陽性 細胞數(shù)，計算出5個視野的平均值，用TUNEL陽性細胞數(shù)/視野表示。
[0034] 2.7.心肌組織MDA的測定
[0035] 再灌注60min后，立即取下心臟，取大鼠 I/R區(qū)域的心肌組織100mg，液氮速冷，移 入-80°C冰箱。本實驗通過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的MDA可與硫代巴比妥酸縮合，形成紅色產(chǎn) 物，在532nm處有最大吸收峰來測定MDA的含量，用考馬斯亮蘭法測定組織蛋白含量。MDA 的含量常?？梢苑从硻C體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細胞的損傷程度。實驗選用 考馬斯亮蘭蛋白定量試劑盒和MDA試劑盒（Nanjing Jiancheng, Nanjing, China)，實驗過 程參照試劑盒說明。MDA測試方法及測定值計算：按說明書加試劑及標本，混勻后，置沸水 浴中40min，離心（3000rpm，20min)，取上清，分光光度計測532nm吸光度值。樣品中的MDA 含量（nmol/ml)=(測定管吸光度一測定空白管吸光度）八標準管吸光度一測定空白管吸光 度）X標準品濃度（10nmol/ml) +蛋白含量（mgprot/mg)。
[0036] 2. 8.外周血粒細胞過氧化物的測定
[0037] 再灌注時，從股靜脈緩慢注入過氧化物敏感的熒光探針-羅達明123 (2 μ mol/kg 溶解在3ml生理鹽水中）。再灌注60分鐘后，腹主動脈取血，肝素抗凝，用流式細胞儀（FACS Calibur, BD Company, New Jersey, USA)在激發(fā)光500nm，發(fā)射光在536nm的波長下測定粒 細胞羅達明的熒光強度。
[0038] 2.9.酶聯(lián)免疫吸附（ELISA)測定SOD、CAT
[0039] 在再灌注60分鐘后，取缺血部位心肌組織100mg，加入PBS制成10%的組織 均菜· _2〇·? 冰箱中保存。本實驗米用 SOD Assay Kit(R&D, Minnesota, USA)、CAT Assay Kit (R&D, Minnesota, USA)測量SOD和CAT的含量。操作按試劑盒說明進行，具體如下。檢 測前從冰箱取出試劑盒及待測標本，室溫平衡20分鐘。除空白孔外（蒸餾水），分別將標本 和不同濃度的標準品（1〇〇μ1/孔）加入相應孔中，用封板膠紙封住反應孔，37°C溫箱孵育 120分鐘。洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液350 μ 1，靜置30秒后甩盡液體，在吸水紙上 拍干，洗板5次。除空白孔外，分別加入SOD、CAT第一抗體工作液（50 μ 1/孔），封住板孔， 37°C孵箱孵育60分鐘。洗板5次。除空白孔，加入酶標抗體工作液（100 μ 1/孔），封住板 孔，37°C孵箱孵育。洗板5次。加入底物工作液（100 μ 1/孔），37°C避光顯色10分鐘。加 入終止液（100 μ 1/孔），混勻后即刻用酶標儀，測吸光值（OD)。每個標準品和標本的OD值 減去零孔的OD值即為實際OD值，在標準曲線上查出其濃度，即為蛋白濃度。
[0040] 2. 10.免疫印跡分析NADPH oxidase亞基轉(zhuǎn)位
[0041] 在再灌注60分鐘后，取缺血部位心肌組織200mg，-80°C冰箱中保存。用胞核-胞 楽-胞膜制備試劑盒（Applygen Technologies, Beijing, China)提出膜蛋白和楽蛋白。 取樣品加等體積的2 X電泳樣品緩沖液混合后，經(jīng)10%SDS-PAGE電泳后（30mA，2hour)， 電轉(zhuǎn)膜至PVDF膜。5%脫脂奶粉封閉lhour，TBS-Tween漂洗3次X lOmin，剪取目的 蛋白區(qū)域標記 gp91ph〇x(l:2000;Abcam)、p67ph?(l:800;Abcam)、p47 ph〇x(l:300;Santa Cruz) > p40phox (1: 300 ；Santa Cruz) > GADPH(1: 3000 ；cell signaling technology) > Tublin (1:3000 ；cell signaling technology) 〇 一抗，4 °C 孵育過夜，TBS-Tween 沖洗 3 次X 10min，用過氧化物酶標記的二抗孵育，室溫lh，TBS-Tween沖洗3次X 10min。ECL顯 色5min，暗盒曝光。X光片上的顯色條帶進行光密度掃描，用Image-Pro plus5.0(Media Cybernetic, Maryland, USA)圖像分析軟件進行半定量分析。以GADPH、Tublin的值為基礎(chǔ) 值，計算其它各組值與基礎(chǔ)值比較的變化率。
[0042] 3.實驗結(jié)果
[0043] 3. 1. CP連續(xù)給藥對大鼠心肌I/R后心肌梗死面積的影響（圖1)
[0044] 圖 1A 表示 Sham 組（Al)、I/R 組（A2)、CP0. 1 (6) +I/R 組（A3)、CP0. 4 (6) +I/R 組 (A4)、CP0. 8 (6) +I/R組（A5)大鼠再灌注60分鐘時心臟TTC染色圖。Sham組大鼠心臟 未見梗死區(qū)域，I/R組大鼠心臟可見較大的呈白色染色的梗死區(qū)域。CP0. 1(6)+I/R組、 CP0. 4 (6)+I/R組和CP0. 8 (6)+I/R組心肌梗死區(qū)域與I/R組相比明顯地減少。
[0045] 圖 2B 表示 Sham 組、I/R 組、CP0. 1 (6) +I/R 組、CP0. 4 (6) +I/R 組、CP0. 8 (6) +I/R 組 大鼠再灌注60分鐘時心臟心肌梗死面積統(tǒng)計分析結(jié)果。I/R組大鼠心肌梗死區(qū)面積較Sham 組顯著性增加，而〇. lg/kg/day，0. 4g/kg/day，0. 8g/kg/day CP連續(xù)給藥顯著性地降低由 I/R引起的梗死面積的增加。
[0046] 3. 2. CP連續(xù)給藥對心肌I/R損傷誘發(fā)組織學改變的影響（圖2)
[0047] 圖 2 顯示表示 Sham 組（A)、I/R 組（B)、CP0. 1 (6) +I/R 組（C)、CP0. 4 (6) +I/R 組 (D)、CP0.8(6)+I/R組（E)大鼠再灌注后心臟HE染色圖。從圖中可以看到Sham組：心肌細 胞結(jié)構(gòu)基本正常，心肌纖維染色均勻，細胞界限清晰，間質(zhì)無水腫及炎性細胞侵潤。I/R組： 心肌細胞水腫嚴重，細胞界限不清，間質(zhì)水腫明顯，有大量炎性細胞浸潤。CP0. 1 (6)+I/R組： 肌漿分布不勻，間質(zhì)中度水腫，有少量炎細胞浸潤。CP0. 4 (6) +I/R組和CP0. 8 (6) +I/R組心 肌細胞排列相對規(guī)整，細胞界限清楚，間質(zhì)輕度水腫，散在極少量炎性細胞浸潤。
[0048] 2. 3. CP連續(xù)給藥對心肌I/R后心肌細胞凋亡的影響（圖3)
[0049] 圖 3A 為 Sham 組（Al)、I/R 組（A2)、CP0. 1 (6) +I/R 組（A3)、CP0. 4 (6) +I/R 組（A4)、 CP0. 8(6)+I/R組（A5)大鼠再灌注90時心臟TUNEL染色的圖象。Sham組大鼠偶見TUNEL 陽性的心肌細胞，I/R組大鼠心臟可以觀察到大量的TUNEL陽性的心肌細胞，CP0. 1 (6)+1/ R組、CPO. 4 (6) +I/R組、CPO. 8 (6) +I/R組的TUNEL陽性心肌細胞均明顯地減少。
[0050] 圖 3B 表示 Sham 組、I/R 組、CPO. 1 (6) +I/R 組、CPO. 4 (6) +I/R 組、CPO. 8 (6) +I/R 組大鼠心臟TUNEL陽性心肌細胞結(jié)果。I/R組大鼠心肌凋亡細胞較Sham組顯著性增加，而 0· lg/kg/day，0. 4g/kg/day，0. 8g/kg/day CP連續(xù)給藥顯著性的逆轉(zhuǎn)由I/R引起的心肌凋 亡的增加。
[0051] 2. 4. CP連續(xù)給藥對I/R后外周血粒細胞過氧化物的影響（圖4)
[0052] 圖 4 表示 Sham 組、I/R 組、CPO. 1 (6) +I/R 組、CPO. 4 (6) +I/R 組、CPO. 8 (6) +I/R 組 大鼠在再灌注60分鐘時外周血粒細胞過氧化物的結(jié)果。I/R后外周血粒細胞過氧化物的熒 光強度值顯著性高于假手術(shù)組的熒光強度值。〇. lg/kg/day CP連續(xù)給藥組的過氧化物的熒 光強度值與缺血再灌組比較沒有明顯的差異。〇. 4g/kg/day，0. 8g/kg/day CP連續(xù)給藥組過 氧化物的熒光強度值分別顯著性低于I/R組，結(jié)果顯示CP可對I/R后過氧化物的產(chǎn)生有顯 著的抑制作用。
[0053] 2. 5. CP對心臟I/R后心肌細胞內(nèi)MDA含量的影響（圖5)
[0054] 圖 5 表示在灌 60min 后，Sham 組、I/R 組、CPO. 1(6)+I/R 組、CP0.4(6)+I/R 組、 CPO. 8 (6) +I/R組大鼠心臟左心室I/R區(qū)域組織的MDA含量。I/R60分鐘后心肌組織MDA的 含量相比于假手術(shù)組顯著增加。CP連續(xù)預給藥各劑量組均可以顯著地抑制I/R誘導的丙二 醒的含量的增高。CPO. lg/kg/day，0.4g/kg/day，(X8g/kg/day連續(xù)給藥組和I/R組相比， MDA含量顯著性的降低。結(jié)果顯示CP可對I/R后氧化應激損傷的產(chǎn)生顯著的抑制作用。
[0055] 2. 6. CP連續(xù)給藥對心肌I/R后大鼠心肌SOD，CAT的影響（圖6)
[0056] 圖 6 表示 Sham 組、I/R 組、CPO. 1 (6) +I/R 組、CPO. 4 (6) +I/R 組、CPO. 8 (6) +I/R 組 大鼠心肌組織SOD(A)，CAT(B)的含量。假手組，I/R組以及CP連續(xù)預給藥各劑量組S0D， CAT含量沒有明顯差異。
[0057] 2. 7. CP 連續(xù)給藥對心肌 I/R 后大鼠心肌 NADPH oxidase 亞基 gp91ptox、p67phox、 p47ph°x 和 p40ph°x 的影響（圖 7)
[0058] 圖7A顯示各組大鼠心肌組織中細胞膜上gp91ph°x、p67 ph°x、p47ph°x和p40ph° x蛋白表 達的蛋白質(zhì)印跡分析圖像。與假手術(shù)組相比，I/R組大鼠心肌組織gp91ph° x、p67ph°x、p47ph°x 蛋白表達明顯增加；CP連續(xù)給藥各劑量組顯著性的逆轉(zhuǎn)由I/R誘導的大鼠心肌細胞膜上 gp91ph°x、p67ph°x、p47 ph°x蛋白表達量的增加。假手組，I/R組以及CP連續(xù)預給藥各劑量組 p40ph°x蛋白表達沒有明顯差異。
[0059] 圖7B顯示各組大鼠心肌組織中g(shù)p91ph°x、p67 ph°x、p47ph°x和p40ph° x蛋白表達量的統(tǒng) 計結(jié)果。以各組大鼠心肌組織中g(shù)p91ph°x、p67 ph°x、p47ph°x和p40ph° x蛋白表達量/GADPH為 100%，I/R組大鼠心肌組織中g(shù)p91ph°x、p67 ph°x和p47ph°x蛋白表達量與假手術(shù)組相比顯著性 增加。CP連續(xù)給藥各劑量組可以顯著性抑制I/R引起的大鼠心肌組織細胞膜上gp91 ph°x、 p67ph°x和p47ph°x蛋白表達的增加。各組p40 ph°x蛋白表達量均沒有明顯差異。
[0060] 圖7C顯示各組大鼠心肌組織胞漿中p67ph°x、p47 ph°x和p40ph°x蛋白表達的蛋白質(zhì) 印跡分析圖像。與假手術(shù)組相比，I/R組大鼠心肌組織中P67 ph°x和p47ph°x蛋白表達明顯降 低；CP連續(xù)給藥各劑量組顯著性的逆轉(zhuǎn)由I/R誘導的大鼠心肌細胞漿中p67 ph°x和p47ph°x蛋 白表達量的降低。假手組，I/R組以及CP連續(xù)預給藥各劑量組p40 ph°x蛋白表達沒有明顯差 異。
[0061] 圖7D顯示各組大鼠心肌組織胞漿中p67ph°x，p47 ph°x和p40ph°x蛋白表達量的統(tǒng)計結(jié) 果。以各組大鼠心肌組織胞漿中p67 ph°x，p47ph°x和p40ph° x蛋白表達量/Tublin為100%，I/R 組大鼠心肌組織胞漿中p67ph°x和p47ph°x蛋白表達量與假手術(shù)組相比顯著性降低。CP連續(xù) 給藥各劑量組可以顯著性抑制I/R引起的大鼠心肌組織細漿中P67 ph°x和p47ph°x蛋白表達 的降低。各組P40 ph°x蛋白表達量均沒有明顯差異。
[0062] 實驗結(jié)果表明，CP可以顯著性抑制由I/R引起的膜上gp91ph°x含量的增加，以及 NADPH oxidase亞基p67ph°x和p47ph°x從細胞漿中轉(zhuǎn)移到細胞膜上。
[0063] 4.實驗結(jié)論
[0064] CP連續(xù)給藥可以通過抑制NADPH oxidase亞基的轉(zhuǎn)位和活化，降低I/R引起的氧 化應激損傷。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0065] 圖1CP連續(xù)給藥對大鼠心肌I/R后心肌梗死面積的影響
[0066] 圖2CP連續(xù)給藥對心肌I/R損傷誘發(fā)組織學改變的影響
[0067] 圖3CP連續(xù)給藥對心肌I/R后心肌細胞凋亡的影響
[0068] 圖4CP連續(xù)給藥對I/R后外周血粒細胞過氧化物的影響
[0069] 圖5CP對心臟I/R后心肌細胞內(nèi)MDA含量的影響
[0070] 圖6CP連續(xù)給藥對心肌I/R后大鼠心肌SOD，CAT的影響
[0071] 圖7CP連續(xù)給藥對心肌I/R后大鼠心肌NADPH oxidase亞基gp91ptox、p67ptox、 p47ph°x 和 p40ph°x 的影響

【具體實施方式】：
[0072] 以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
[0073] 實施例1
[0074] 配方：丹參 82. 87%，三七 16. 21%，冰片 0· 92%。
[0075] 制備方法：
[0076] 步驟1，丹參、三七用8倍重量的水煮沸提取2次，第一次2小時，第二次1小時，混 合提取液。
[0077] 步驟2,提取液過濾濃縮。
[0078] 步驟3,以提取物和冰片一起作為藥物活性成分，基質(zhì)為聚乙二醇，投料比為：提 取物藥物：基質(zhì)=1 :5. 5,加入冰片，液體石蠟為冷凝劑，藥物溫度90°C，化料時間1. 5小時， 冷凝液溫度1°C，滴距7cm，滴速每分鐘35滴制備成滴丸。
[0079] 實施例2
[0080] 配方：丹參20%，三七79%，冰片1%。
[0081] 步驟1，丹參、三七用2倍重量的水提取，提取次數(shù)為2次，每次提取1小時，混合 提取液。
[0082] 步驟2,提取液過濾濃縮。
[0083] 步驟3,用步驟2提取物和冰片一起作為藥物活性成分，基質(zhì)為木糖醇與淀粉低 共熔混合物，投料比為：提取物藥物：基質(zhì)=1 :3,加入冰片，液體石蠟為冷凝劑，藥物溫度 85°C，化料時間1小時，冷凝液溫度-2°C，滴距5cm，滴速每分鐘30滴。
[0084] 實施例3
[0085] 市售復方丹參滴丸說明書
[0086]【功能主治】
[0087] 活血化瘀，理氣止痛，用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶，心前區(qū)刺痛冠心病心 絞痛見上述證候者。
[0088] 【主要成分】
[0089] 復方丹參滴丸主要成分：丹參、三七、冰片。
[0090] 【包裝規(guī)格】
[0091] 薄膜衣滴丸每丸重27mg，180丸/瓶。
[0092] 【用法用量】
[0093] 口服或舌下含服，一次10丸，一日3次，4周為一個療程：或遵醫(yī)囑。
【權(quán)利要求】
1. 復方丹參滴丸在制備治療或預防氧化應激損傷的藥物中的應用。
2. 如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，其中所述的應用是通過抑制NADPH氧化酶亞 基的轉(zhuǎn)位和活化實現(xiàn)的。
3. 如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用是復方丹參滴丸能抑制再灌注誘 導的心肌細胞膜上gp91phox、p67phox、p47phox蛋白表達量的增加，逆轉(zhuǎn)由再灌注誘導的 心肌細胞楽中p67phox和p47phox蛋白表達量的降低。
4. 如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用是復方丹參滴丸能降低再灌注后 組織中丙二醛和外周血中過氧化物的含量。
5. 如權(quán)利要求1-4所述的應用，其特征在于，所述應用是指長期連續(xù)用復方丹參滴丸 所達到的。
【文檔編號】A61K36/537GK104147111SQ201310176412
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2013年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月14日
【發(fā)明者】韓晶巖 申請人:天士力制藥集團股份有限公司