一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，它以厥麻為原料，加入石油醚后，采用不同溫度回流脫脂，揮干溶媒后用乙醇常溫浸泡洗滌，加入蒸餾水，轉(zhuǎn)入超聲波提取設(shè)備，超聲提取過(guò)濾，收集水提液，濾渣再加水超聲提取兩次，合并水提液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后加入木瓜蛋白酶液酶解，離心后取上清液，用微抽濾儀抽濾，進(jìn)一步除去較細(xì)的濾渣，濃縮收集到的濾液，再用正丁醇和氯仿的混合液，萃取3～5次，收集上層水相，向水相中加入乙醇，靜置后離心收集沉淀，冷凍干燥將得到純化的蕨蔴多糖。
【專利說(shuō)明】一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥化工【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖 的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蕨麻是青藏高原的一種特有經(jīng)濟(jì)作物，常用作保健品以及藏藥使用。食用蕨麻系 列食品能消除疲勞，恢復(fù)體力，提高抗應(yīng)激能力和抗缺氧能力，并可調(diào)節(jié)人體免疫功能。蕨 麻的藥用有效成分取決于其中含有的蕨麻多糖、酚酸以及黃酮類化合物，因此這些有效成 分的提取對(duì)于蕨麻的藥用價(jià)值至關(guān)重要。
[0003] 目前，對(duì)于蕨麻的提取方法已有很多報(bào)道。蕨麻多糖是水溶性的，因此常用的方法 是水提醇沉，具體是指采用熱水提取、乙醇沉淀法從蕨麻中提取多糖組分，采用酶法脫去粗 多糖中含有的淀粉等類似物，然后用蛋白酶脫去蛋白，就能得到蕨麻粗多糖，最后再對(duì)蕨麻 粗多糖進(jìn)行進(jìn)一步的理化性質(zhì)分析。
[0004] 為了進(jìn)一步提高蕨麻多糖的產(chǎn)率，通過(guò)單因素和正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化熱水浸提的方法 提取蕨麻多糖，并比較其與微波輔助提取法的提取產(chǎn)率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用微波法提取蕨麻多糖 的方法，優(yōu)于熱水浸提的方法。利用閃式提取法提取蕨麻中的酚酸，結(jié)果顯示，閃式提取法 比熱水回流法和超聲波法所提取的厥麻中的總酚酸含量高，并且具有用時(shí)短、無(wú)成分破壞、 常溫提取節(jié)能的優(yōu)點(diǎn)。另外，蕨麻的粉碎物用90%的乙醇回流提取，減壓除凈乙醇得到的乙 醇提取物具有抗氧化和抗缺氧的作用。
[0005] 傳統(tǒng)的蕨麻多糖的提取方法具有耗時(shí)比較長(zhǎng)，溶劑用量大，產(chǎn)率低、成本高等缺 點(diǎn)，因此，在提取過(guò)程中，如何能避免上述技術(shù)問(wèn)題、克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，得到目標(biāo)生物活性 物質(zhì)是有待解決的問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有提取方法耗時(shí)較長(zhǎng)，溶劑用量大，產(chǎn)率低、成本高等缺 點(diǎn)的不足，采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，研究蕨麻多糖的抗疲勞和疲勞恢復(fù) 作用，為科學(xué)體育運(yùn)動(dòng)提供有價(jià)值的參考。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，所采 用的技術(shù)方案具體如下：
[0008] 一：厥麻多糖的提取方法
[0009] (1)取200g蕨麻干粉，置于1000ml燒瓶中，加入400ml石油醚，采用70°C~90°C回 流脫脂lh;
[0010] (2)揮干溶媒后加入400ml、50%~90%的乙醇，常溫浸泡洗滌2次，每次4h，揮干溶媒 后加入200ml蒸餾水，轉(zhuǎn)入超聲波提取設(shè)備，40°C超聲(功率80W460W)提取20min~40min， 過(guò)濾，收集水提液，濾渣再加水超聲提取兩次，合并水提液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至200ml ;
[0011] (3)向其中加入10yg/ml木瓜蛋白酶液2ml，在40°C下酶解10h，將酶解液于 lOOOr/min離心5min，取上清液，用微抽濾儀抽濾(壓力為0. 05-0. IMPa)，進(jìn)一步除去較細(xì) 的濾渣，濃縮收集得到的濾液；
[0012] (4)再用正丁醇和氯仿體積比為1 : 2?4的混合液，萃取3?5次，收集上層 水相，向水相中加入80%的乙醇，靜置10h，然后在4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，收集沉 淀，冷凍干燥得到純化的蕨蔴多糖。
[0013] 二：厥麻多糖的檢測(cè)
[0014] (1)使用碘一碘化鉀反應(yīng)法證實(shí)提取的蕨麻多糖中不含淀粉，具體操作為：在白瓷 板的凹槽中加入200ul蕨麻多糖水溶液，加入碘一碘化鉀溶液50ul，觀察顏色變化，以蒸餾 水做陰性對(duì)照，1%淀粉溶液做陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果顯示蕨麻多糖水溶液顯陰性，說(shuō)明該方法提取 的蕨麻多糖中不含淀粉；
[0015] (2)通過(guò)茚三酮反應(yīng)檢測(cè)蕨麻多糖中是否含有氨基酸或蛋白質(zhì)，具體操作為：取 1%蕨麻多糖水溶液lml，加入0. 1%茚三酮溶液0. 5ml，混勻，煮沸5min，觀察顏色變化，以蒸 餾水做陰性對(duì)照，0. 5%甘氨酸溶液做陽(yáng)性對(duì)照，顏色反應(yīng)顯示，蕨麻多糖中不含氨基酸或蛋 白質(zhì)等雜質(zhì)。
[0016] 三：厥麻多糖提取方法的優(yōu)化
[0017] 通過(guò)單因素法和正交法，選擇合適的溫度和乙醇濃度(表1 )，然后在最佳溫度和乙 醇濃度條件下，選擇最優(yōu)的功率和提取時(shí)間(表2)。通過(guò)不同的提取方法，每一條件下平行 做5組，統(tǒng)計(jì)分析比較，優(yōu)化提取方法，脫脂溫度在70°C，90%乙醇浸泡洗滌2次，超聲功率 選擇80W提取時(shí)間30min條件下，蕨麻多糖的提取率為12. 38%，苯酚-硫酸法測(cè)得總糖含量 超過(guò)95%。常規(guī)的超聲波提取方法，蕨麻多糖的提取率為11. 89%，總糖含量為92. 44% ;水提 醇沉法蕨麻多糖的提取率為11. 47%，苯酚-硫酸法測(cè)得總糖含量為82. 19%。與已報(bào)道的超 聲波提取方法相比，本方法對(duì)蕨麻先脫脂處理，這個(gè)過(guò)程也有利于蕨麻多糖從有機(jī)質(zhì)中脫 落，進(jìn)一步提1?廣率。另外，功率和提取時(shí)間上都有所降低，進(jìn)一步節(jié)約時(shí)間和成本。
[0018] 表1提取溫度與乙醇濃度為變量條件下比較提取率與總糖含量
[0019]

【權(quán)利要求】
1. 一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，其特征是該方法的步驟為： (1) 稱取200. OOg蕨麻干粉，置于1000ml燒瓶中，加入400ml石油醚，采用70°C ~90°C 回流脫脂lh ; (2) 揮干溶媒后加入400ml、50%~90%的乙醇常溫浸泡洗滌2次，每次4h，揮干溶媒后加 200ml蒸餾水，轉(zhuǎn)入超聲波提取設(shè)備，40°C超聲(功率為80W460W)提取20min~40min，過(guò)濾， 收集水提液，濾渣再加水超聲提取兩次，合并水提液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至200ml ; (3) 向其中加入10 μ g/ml木瓜蛋白酶液2ml在溫度40°C下酶解10h，然后將酶解液于 1000r/min離心5分鐘，取上清液，用微抽濾儀抽濾(壓力為0. IMPa)，進(jìn)一步除去較細(xì)的濾 渣，濃縮收集到的濾液； (4) 再用正丁醇和氯仿體積比為1 : 2的混合液，萃取5次，收集上層水相，向水相中 加入80%乙醇，靜置10h，然后在4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，收集沉淀，冷凍干燥將得到 純化的蕨蔴多糖。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，其特征在于： 步驟（1)中采用的最佳溫度為70°C。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，其特征在 于：步驟（2)中所用的乙醇最佳濃度為90%，超聲設(shè)備的最佳功率為80W，提取最佳時(shí)間為 30min〇
4. 如權(quán)利要求1所述的一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，其特征在于： 步驟（1)中先對(duì)厥麻進(jìn)行脫脂處理，有利于厥麻多糖從有機(jī)質(zhì)中脫落，可以提高厥麻多糖的 提取產(chǎn)率，還可以降低提取方法中所用的功率和提取時(shí)間。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK104231096SQ201310233865
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2013年6月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月13日
【發(fā)明者】段玉虎, 田曉柱 申請(qǐng)人:段玉虎