含有重組腺病毒質(zhì)粒的大腸桿菌及重組腺病毒的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及重組質(zhì)粒、重組腺病毒質(zhì)粒及重組腺病毒的應(yīng)用。本發(fā)明提供了獲得的含有雙基因共表達(dá)同源重組質(zhì)粒pAd.Easy-1(RGD)-pAdTrack-CMV-ING4-polyA-promoter-PTEN的大腸桿菌(其保藏編號為CCTCC?No.M2013212)和重組腺病毒Ad.(RGD)--ING4-PTEN能夠用于制備治療惡性腫瘤和/或白血病的藥物或應(yīng)用于制備化療增敏劑。
【專利說明】含有重組腺病毒質(zhì)粒的大腸桿菌及重組腺病毒的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及含有RGD修飾的雙基因共表達(dá)重組腺病毒質(zhì)粒的大腸桿菌及RGD修飾的雙基因共表達(dá)重組腺病毒的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤已取代心腦血管疾病成為全球頭號殺手，據(jù)美國癌癥協(xié)會(ACS)最新發(fā)表的全球癌癥統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)報告顯示，2008年全球癌癥新發(fā)病例約為1270萬，癌癥死亡例數(shù)為760萬；其中發(fā)展中國家的癌癥新發(fā)病例和死亡病例分別占到56%和64%。在中國，惡性腫瘤發(fā)病率上升尤其迅猛，每年癌癥新發(fā)病例為220萬人，因癌癥死亡人數(shù)為160萬人。預(yù)計2020年發(fā)病和死亡人數(shù)將比2002年上升60%，目前對于腫瘤的常規(guī)治療手段主要為手術(shù)、放療、化療等。手術(shù)是腫瘤最常用治療手段，也是多數(shù)早期腫瘤的首選，雖然手術(shù)療效顯著，無生物抗性和敏感性，但風(fēng)險高，成功率低，創(chuàng)傷大，易產(chǎn)生一系列并發(fā)癥，常限用于早期腫瘤。放療雖作用直接、迅速，對敏感度較高的早期癌種效果較好，可治療手術(shù)困難的癌種，但對分化程度高的癌組織不敏感，且副作用大，對正常人體細(xì)胞和免疫系統(tǒng)會造成傷害?；熤饕c手術(shù)切除和放療相配合，但其容易產(chǎn)生抗藥性，且對腫瘤細(xì)胞并無特異性，易引起各種副作用，過度化療甚至可能縮短患者的存活期，殘存的腫瘤干細(xì)胞將成為腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的根源。綜上所述各種腫瘤常規(guī)治療手段均無法達(dá)到理想的治療效果，迫使尋找新的治療的方式。
[0003]近年來，隨著人們對腫瘤發(fā)生發(fā)展機制的深入以及腫瘤免疫學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程技術(shù)的發(fā)展，腫瘤的生物治療發(fā)展迅速，成為一種新的腫瘤治療模式。腫瘤生物治療通?？筛爬?任何生物學(xué)物質(zhì)或生物制劑在腫瘤的治療中的應(yīng)用。已有的研究和臨床應(yīng)用已經(jīng)展示出廣闊的應(yīng)用前景，有望成為常規(guī)的抗癌療法。目前腫瘤的生物治療研究得較多的技術(shù)主要包括細(xì)胞因子技術(shù)，過繼免疫療法，單克隆抗體及其偶聯(lián)技術(shù)，腫瘤疫苗技術(shù)以及基因治療。
[0004]腫瘤是一種多基因疾病。是多種基因在時空上異常的結(jié)果。隨著對腫瘤分子機制認(rèn)識的加深及生物技術(shù)的發(fā)展，基因治療已成為腫瘤治療的焦點之一?；蛑委熂夹g(shù)可以概括為兩大類:一類為替代或添加技術(shù)。即將治療基因用各種方法送入腫瘤或正常細(xì)胞?？梢允且职┗?，也可以是各種細(xì)胞因子或免疫性基因。如將多種抑癌基因或凋亡誘導(dǎo)基因?qū)爰?xì)胞可以抑制腫瘤生長及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。另一類為基因封閉技術(shù)。如反義基因技術(shù)、核酶技術(shù)、RNA干擾技術(shù)等，利用以上技術(shù)封閉過度表達(dá)的癌基因及其產(chǎn)物、腫瘤耐藥基因、細(xì)胞周期基因等可以封閉或降解基因或其產(chǎn)物以達(dá)到治療目的。腫瘤基因治療將成為繼手術(shù)、化療、放療之后令人矚目的臨床腫瘤治療的第四種模式，將給腫瘤患者帶來新的希望。
[0005]基因治療本身的特性以及載體系統(tǒng)轉(zhuǎn)導(dǎo)目的細(xì)胞的效率是基因治療的兩個最關(guān)鍵的要素。腺病毒載體作為基因治療常用的載體系統(tǒng)具有以下優(yōu)點:1.可以感染增殖和非增殖細(xì)胞，2.能夠高效制備和 純化高滴度重組病毒，3.它的基因組可以容納大片段的外源基因，4.腺病毒載體與宿主細(xì)胞基因組不整合，屬于條件復(fù)制缺陷性病毒，不產(chǎn)生具有感染性和致病性的子代病毒，安全性較高等。
[0006]腺病毒用于腫瘤基因治療，感染目的細(xì)胞的第一步是其與細(xì)胞表面的柯薩斯受體(CAR)相結(jié)合，很多腫瘤細(xì)胞及白血病淋巴細(xì)胞表面CAR的缺失導(dǎo)致腺病毒對其感染效率低下。如何提高感染效率是需要克服的困難之一。
[0007]多基因聯(lián)合治療在腫瘤基因治療領(lǐng)域具有重要的價值，通常采用兩種辦法來達(dá)到外源性基因的導(dǎo)入:一是使用多個獨立載體分別向靶細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)目的基因，二是在一個載體上表達(dá)多個目的基因。目前基因治療的瓶頸是轉(zhuǎn)染和表達(dá)效率低下。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]有鑒于此，本發(fā)明提供一種含有R⑶修飾的pAd.Easy-1 (RGD) -pAdTrack-CMV-1NG4-p0 lyA-promoter-PTEN雙基因共表達(dá)同源重組腺病毒質(zhì)粒的大腸桿菌，其保藏編號為CCTCC Νο.Μ2013212。本發(fā)明采用雙啟動子(插入polyA+promoter)構(gòu)建ING4或/和PTEN單、雙基因共表達(dá)腺病毒載體，并使用RGD-4C修飾的骨架質(zhì)粒進(jìn)行同源重組，以提升腺病毒載體對靶細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率和目的基因的表達(dá)效率。獲得的重組腺病毒Ad.(RGD)-1NG4-PTEN能夠用于制備治療惡性腫瘤和/或白血病的藥物或應(yīng)用于制備放療增敏劑。
[0009]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0010]由實驗室發(fā)明提供了一種雙基因共表達(dá)轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTENo
[0011]精氨酸(R)-甘氨酸(G)-天冬氨酸(D)三肽序列(RGD)存在于多種細(xì)胞外基質(zhì)中，可與11種整合素特異性結(jié)合，能有效地與細(xì)胞表面的整合素蛋白相粘附。Dmitriev等成功的將RGD-4C序列插入到腺病毒鞭毛區(qū)域的HI莖環(huán)上，使得腺病毒可以使用α V β 3整合素作為其粘附受體。這樣的改造增加了腺病毒對柯薩斯受體(CAR)表達(dá)缺陷細(xì)胞的感染能力。
[0012]PTEN基因是在1997年由3個不同的研究小組分別用不同的方法獲得，分別命名為 PTEN(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten)、MMACl (mutated in multiple advanced cancers-1)和 TEP-1 (TGF-β-regulated andepithelial cell-enriched phosphatase),它是一種具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因，不僅有脂質(zhì)磷酸酶活性，而且有蛋白磷酸酶活性，定位于人類染色體10q23.3。PTEN蛋白主要呈網(wǎng)格狀分布位于細(xì)胞胞漿中，近年發(fā)現(xiàn)其在核膜、核內(nèi)都有表達(dá)。相比其他磷酸酶，PTEN活性中心有三個堿性氨基酸，如果產(chǎn)生突變失去了脂質(zhì)磷酸酶活性,失去大多數(shù)腫瘤抑制功能，但不影響蛋白質(zhì)磷酸酶活性。因此腫瘤抑制基因PTEN的抑癌效應(yīng)主要取決于其脂質(zhì)磷酸酶活性，但是蛋白質(zhì)磷酸酶活性仍然可以影響細(xì)胞增殖、附著力和細(xì)胞遷移。
[0013]生長抑制因子蛋白家族(inhibitorof growth family, ING)包括 ING1, ING2,ING3，ING4和ING5，是一組重要的腫瘤抑制因子。ING4于2002年從人的腦垂體中被分離出，2003年由Shiseki等鑒定，2004年正式被確定為一種重要的抑癌基因。該基因跨度為13kb，定位于人類染色體12pl3.31。研究表明，ING4基因可以通過控制p53乙?；癄顟B(tài)來調(diào)節(jié)P53的功能，使p53的轉(zhuǎn)錄活性增強，腫瘤的發(fā)生即被抑制。在體內(nèi)ING4可抑制由原癌基因MYC或MYCN過度表達(dá)引起的細(xì)胞間接觸抑制的喪失從而恢復(fù)細(xì)胞間的接觸抑制。過表達(dá)ING4基因能夠抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移，通過抑制NF-K B，/IL-6通路影響腫瘤新生血管的形成。低氧時HIF的上調(diào)是腫瘤生長過程中重要的促進(jìn)因素，所以抑制HIF的活性可以抑制腫瘤的生長，提高腫瘤治療的療效。研究證實ING4能與缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)脯氨酰羥化酶的鐵依賴性氧化酶直接發(fā)生作用，通過ING4的募集反應(yīng)來調(diào)節(jié)HIF的活性。ING4誘導(dǎo)的p21的上調(diào)可以增強細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白BI (cyclin BI)和p21的結(jié)合，啟動細(xì)胞G2/M周期阻滯，最終抑制細(xì)胞的增殖，由此可見，ING4可通過多途徑發(fā)揮特異性抗腫瘤效應(yīng)，靶向誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，是一種潛在的新型抑癌基因。
[0014]本發(fā)明采用雙啟動子(插入polyA+promoter)構(gòu)建ING4或/和PTEN單、雙基因共表達(dá)腺病毒載體，并使用RGD-4C修飾的骨架質(zhì)粒進(jìn)行同源重組，提升腺病毒載體對靶細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率和目的基因的表達(dá)效率。
[0015]本發(fā)明還提供了含有RGD修飾的同源重組腺病毒質(zhì)粒pAd.Easy-1 (RGD) -pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN(簡稱 pAd.RGD-1NG4-PTEN)的大腸桿菌，其保藏編號為CCTCC N0.M2013212,該同源重組腺病毒質(zhì)粒 pAd.Easy-1 (RGD) -pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN 是由 pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter_PTEN 雙基因共表達(dá)轉(zhuǎn)移質(zhì)粒與RGD-4C修飾的骨架質(zhì)粒pAd.Easy-1 (RGD)同源重組獲得。
[0016]本發(fā)明還提供了 RGD修飾的重組腺病毒Ad(RGD)-1NG4-PTEN的制備方法，由同源重組腺病毒質(zhì)粒 pAd.Easy-1 (RGD) -pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN 在包裝細(xì)胞中包裝產(chǎn)生。
[0017]在本發(fā)明的一些實施例中，包裝細(xì)胞為QB1-293A人胚腎細(xì)胞。
[0018]本發(fā)明還提供了上述重組腺病毒Ad.(RGD)-1NG4-PTEN的制備方法獲得的重組腺病毒 AcL (RGD)-1NG4-PTEN。
[0019]本發(fā)明還提供了重組腺病毒Ad.(RGD) -1NG4-PTEN在制備治療惡性腫瘤和/或白血病的藥物中的應(yīng)用。
[0020]在本發(fā)明的一些實施例中，惡性腫瘤選自神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤移植瘤、鼻咽癌或鼻咽癌移植瘤。
[0021]作為優(yōu)選，神經(jīng)膠質(zhì)瘤為U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞。
[0022]作為優(yōu)選，神經(jīng)膠質(zhì)瘤移植瘤為U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞移植瘤
[0023]作為優(yōu)選，鼻咽癌為人CNE鼻咽癌細(xì)胞
[0024]作為優(yōu)選，鼻咽癌移植瘤為人CNE鼻咽癌細(xì)胞移植瘤
[0025]作為優(yōu)選，白血病為MEG01白血病。
[0026]本發(fā)明還提供了重組腺病毒Ad.(RGD) -1NG4-PTEN在制備放療增敏劑中的應(yīng)用。
[0027]本發(fā)明還提供了一種含有RGD修飾的同源重組腺病毒質(zhì)粒pAd.Easy-1 (RGD)-pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN 的大腸桿菌，其保藏編號為 CCTCC N0.M2013212。本發(fā)明采用雙啟動子(插入polyA+promoter)構(gòu)建ING4或/和PTEN單、雙基因共表達(dá)腺病毒載體，并使用RGD-4C修飾的骨架質(zhì)粒進(jìn)行同源重組，提升腺病毒載體對靶細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率和目的基因的表達(dá)效率。
[0028]生物保藏說明
[0029]大腸桿菌DH5 a /pAdEasy-1 (RGD) -pAdtrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN,分類命名:大腸
桿菌
DH5 a /pAdEasy-1(RGD)-pAdtrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN,拉丁名Escherichia coli DH5 a /pAdEasy-1
(RGD) -pAdtrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN,于 2013 年 5 月 16 日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC )，保藏中心地址為武漢市武漢大學(xué)校內(nèi)，保藏編號為CCTCCN0.M2013212。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1示重組轉(zhuǎn)移載體PCR鑒定；其中，A示pAdTrack-CMV-1NG4_polyA-promoter-PTEN重組轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒PCR鑒定(Μ示DL2000Marker; I示PTEN目的條帶)；B示pAdTrack-CMV-polyA-promoter-PTEN重組轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒PCR鑒定(M:DL2000Marker;2:PTEN 目的條帶)；
[0031 ] 圖2示PTEN測序鑒定結(jié)果；
[0032]圖3示同源重組克隆質(zhì)粒(BJ5183)瓊脂糖電泳分子量大小鑒定；其中，
[0033]A示pAd.RGD-GFP同源重組:泳道I為轉(zhuǎn)移質(zhì)粒,泳道2、泳道3、泳道4為同源重組陽性克??；
[0034]B示pAd.RGD-1NG4同源重組:泳道4為轉(zhuǎn)移質(zhì)粒,泳道1、泳道2、泳道3為同源重組陽性克??；`
[0035]C示pAd.RGD-PTEN同源重組:泳道4為轉(zhuǎn)移質(zhì)粒，泳道1、泳道2、泳道3為同源重組陽性克??；
[0036]D示pAd.RGD-1NG4-PTEN同源重組:泳道4為轉(zhuǎn)移質(zhì)粒，泳道1、泳道2、泳道3為同源重組陽性克隆，泳道5為假陽性；
[0037]圖4示同源重組質(zhì)粒的pacl酶切鑒定；
[0038]其中A 中 I 不 pAdTrack-CMV-polyA-promoter, 2 不 pAd.RGD-pAdTrack-CMV-polyA-promote ；
[0039]圖 B 中 I 不 pAdTrack-CMV-polyA-promoter-PTEN, 2 不 pAd.RGD-pAdTrack-CMV-1NG4-poIyA-promoter ；
[0040]圖 C 中 I 不 pAdTrack-CMV-polyA-promoter-PTEN,2:pAd.RGD-pAdTrack-CMV-polyA-promoter-PTEN ；
[0041]圖 D 中 I 不 pAdTrack-CMV-polyA-promoter-PTEN,2 不 pAd.RGD-pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN ；
[0042]圖5示重組腺病毒感染QB1-293A光鏡和熒光照片；
[0043]圖6示重組腺病毒介導(dǎo)的ING4和/或PTEN基因在QB1-293A細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄鑒定；其中，A示 QB1-293 ;B*QB1-293A+Ad.RGD ;(:示 QBI_293A+Ad.RGD-1NG4 ;D 示 QBI_293A+Ad.RGD-PTEN;E 示 QBI_293A+Ad.RGD-1NG4-PTEN ；
[0044]圖7示熒光顯微鏡觀察腺病毒感染不同細(xì)胞系；其中A示Ad-GFP ；B示Ad_ING4 ；C 示 Ad-PTEN ；D 示 Ad-1NG4-PTEN ；E 示 Ad.RGD-GFP ；F 示 Ad.RGD-1NG4 ；G 示 Ad.RGD-PTEN ；H 示 Ad-RGD-1NG4-PTEN ；
[0045]圖8示流式細(xì)胞儀檢測各感染細(xì)胞組GFP陽性細(xì)胞率；其中A示Ad-GFP ;B示Ad-1NG4 ；C 示 Ad-PTEN ；D 示 Ad-1NG4_PTEN ；E 示 Ad.RGD-GFP ；F 示 Ad.RGD-1NG4 ；G 示Ad.RGD-PTEN ;H 示 Ad-RGD-1NG4-PTEN ;其中，圖 8 (&)示邯7，圖8 (b)示 U251，圖 8 (c)示A549，圖 8 (d)示 MCF-7，圖 8 (e)示 K562，圖 8 (f)示 THP-1，圖 8 (g)示 MEG-01;
[0046]圖9示流式細(xì)胞儀檢測GFP陽性細(xì)胞率;其中，W?示AD-GFP, _'示AD-1NG4,B-示 AD-PTEN, {10 示 AD-1NG4-PTEN, Cl 示 AD.RGD-GFP, B 示 AD.RGD-1NG4, O 示AD.RGD-PTEN，隱示六0.RGD-1NG4-PTEN ;其中，圖 9 (a)示 U87、U251、A549、MCF_7，圖 9 (b)示 K562、THP-UMEG-OI ；
[0047]圖10示ING4和PTEN基因表達(dá)的Real-Time PCR鑒定；其中，示PBS,畫示AD，
E3 示 AD.RGD，C3 示 AD.RGD-1NG4，Gl示 AD.RGD-PTEN，示 AD.RGD-1NG4-PTEN ;其中，
圖10 (a) ING4基因表達(dá)的Real-Time PCR鑒定，圖10 (b)示PTEN基因表達(dá)的Real-TimePCR鑒定；
[0048]圖11示ING4和PTEN蛋白表達(dá)的Western blot鑒定；其中，泳道A示PBS，泳道B示AD.RGD-PTEN,泳道 C 示 AD.RGD-1NG4-PTEN,泳道 D 示 AD.RGD-1NG4,泳道 E 示 AD.RGD-GFP，泳道F示AD.RGD ；
[0049]圖12示各組腺病毒對U87細(xì)胞增殖的影響;其中，令示PBS, 示AD-GFP, -示 AD.RGD-GFP,辛示 AD.RGD-1NG4, ?示 AD.RGD-PTEN, ?示 AD.RGD-1NG4-PTEN ；
[0050]圖13示各組腺病毒對U87細(xì)胞的生長抑制率；其中ING4、PTEN單雙基因重組腺病毒組分別與Ad-GFP、Ad.RGD-GFP組比較，*P〈0.05; Ad.RGD-1NG4-PTEN組分別與
Ad.RGD-1NG4、Ad.RGD-PTEN單基重組腺病毒組比較，Δ Ρ〈0.05，Q=L 21 ;其中，警示AD,效
示 AD.RGD，?示 AD.RGD-1NG4，震示 AD.RGD-PTEN，.示 AD.RGD-1NG4-PTEN ；
[0051]圖14示各重組腺病毒誘導(dǎo)U87細(xì)胞凋亡的流式細(xì)胞儀檢測；其中，A示PBS ；B 示 Ad-GFP ；C 示 Ad.RGD-GFP ；D 示 Ad.-1NG4 ；E 示 Ad.RGD-1NG4 ；F 示 Ad-PTEN ；G 示Ad.RGD-PTEN ；H 示 Ad-1NG4_PTEN ;1 示 Ad.RGD-1NG4-PTEN ；
[0052]圖15示流式細(xì)胞術(shù)檢測U87細(xì)胞凋亡率的變化，其中，*Ad.RGD-1NG4、Ad.RGD-PTEN單基因重組腺病毒組分別與PBS、Ad-GFP, Ad.RGD-GFP組比較，*P〈0.05; Ad.RGD-1NG4-PTEN組分別與Ad.RGD-1NG4、Ad.RGD-PTEN單基重組腺病毒組比較，Ρ〈0.05，Q=L 23 ;其中，示 PBS，_ 示 Ad-GFP, O 示 Ad.RGD-GFP, Ε3 示 Ad_ING4，示 Ad.RGD-1NG4, m 示 Ad-PTEN，E3 示 Ad.RGD-PTEN，_ 示 Ad-1NG4_PTEN，EU 示Ad.RGD-1NG4-PTEN ；
[0053]圖16示細(xì)胞創(chuàng)口劃痕；
[0054]圖17示細(xì)胞創(chuàng)口劃痕寬度均值統(tǒng)計圖;其中，令示PBS,.示Ad，令示Ad.R⑶，?示 Ad.RGD-1NG4, ?示 Ad.RGD-PTEN，?示 Ad.RGD-1NG4-PTEN ；
[0055]圖18示Transwell侵襲小室檢測各組穿膜細(xì)胞數(shù)統(tǒng)計;其中，麵示PBS，E3示AD, S 示 AD.RGD, _示 AD.RGD-1NG4，El.示 AD.RGD-PTEN，O 示 AD.RGD-1NG4-PTEN ；
[0056]圖19示real time PCR檢測各組U87細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶MMP_2、MMP_9 ;其中，圖19 (a)示real time PCR檢測各組U87細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶MMP_2，圖19 (b)
【權(quán)利要求】
1.一種含有 RGD 修飾的 pAd.Easy-1 (RGD) -pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter-PTEN雙基因共表達(dá)同源重組腺病毒質(zhì)粒的大腸桿菌，其保藏編號為CCTCC N0.M2013212。
2.重組腺病毒Ad(RGD)-1NG4-PTEN的制備方法，其特征在于，由如權(quán)利要求1所述的pAd.Easy-1 (RGD) -pAdTrack-CMV-1NG4-polyA-promoter_PTEN 雙基因共表達(dá)同源重組腺病毒質(zhì)粒在包裝細(xì)胞中包裝產(chǎn)生。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述包裝細(xì)胞為QB1-293A人胚腎細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的制備方法獲得的重組腺病毒Ad(RGD)-1NG4-PTEN。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組腺病毒Ad(RGD)-1NG4-PTEN在制備治療惡性腫瘤和/或白血病的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述惡性腫瘤選自神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤移植瘤、鼻咽癌或鼻咽癌移植瘤。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組腺病毒Ad.(RGD) -1NG4-PTEN在制備放療增敏劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/02GK103602625SQ201310359040
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年8月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月16日
【發(fā)明者】楊吉成, 繆競誠, 劉濟生 申請人:蘇州大學(xué)