一種異葉青蘭揮發(fā)油的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種異葉青蘭揮發(fā)油的制備方法及其應(yīng)用，與現(xiàn)有抗病毒合成藥相比，其毒性低，安全可靠，藥效作用強(qiáng)，而且異葉青蘭原料豐富，價(jià)廉，萃取工藝簡(jiǎn)單，制備成本低，可以制成各種劑型。
【專利說明】一種異葉青蘭揮發(fā)油的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬中藥鄰域，涉及一種抗呼吸道病毒藥物，具體涉及異葉青蘭揮發(fā)油在制備抗呼吸道病毒藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]藏藥異葉青蘭為唇形科植物異葉青蘭(Dracocephalum heterophyllum Benth)的干燥地上部分，屬多年生草本植物，又名白花枝子花、白花夏枯草、吉孜青保(藏藥名)，新疆維語稱馬爾贊居西、祖帕爾。異葉青蘭地上部分具有清瀉肝熱的功效，是維族、藏族用于治療咳喘病和胃病的傳統(tǒng)用藥。主要用于治療黃疸性發(fā)燒、肝熱、熱性病頭痛、眼翳、口腔潰瘍、支氣管炎、高血壓等多種病癥。是藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)收錄品種。異葉青蘭分布于山西，內(nèi)蒙古，寧夏，甘肅，四川西北部、西部，青海，西藏及新疆；生于山地草原及半荒漠的多石干燥地區(qū)，青海甘肅以東分布于海拔1100-2800米間，以西則可達(dá)5000米，新疆則在2200-3100米間，資源豐富。
[0003]異葉青蘭全草含有揮發(fā)油、黃酮、多糖、帖類、木脂素等成分，值得進(jìn)行開發(fā)利用。 王李梅通過對(duì)異葉青蘭地上全草進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，共分離得到21個(gè)化合物，并對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行了體外抗氧化活性研究，結(jié)果表明，黃酮類化合物和苯丙素類化合物均具有較強(qiáng)的抗氧化活性[山東大學(xué)碩士論文2011]。羅智敏等應(yīng)用HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地異葉青蘭中齊墩果酸和烏蘇甲酯的含量，為異葉青蘭藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供參考[《分析試驗(yàn)室》，2009，28 (zl) 8-10]。余江柳等采用分光光度法 ，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定異葉青蘭中的總黃酮含量，確定異葉青蘭總黃酮提取工藝的研究。秦波等采用毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)異葉青蘭揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行了研究，經(jīng)毛細(xì)管色譜分離出184多個(gè)峰，共確認(rèn)了其中154種成分，所鑒定化合物的含量占全油的的83.52% [《天然產(chǎn)物研究與開發(fā)》 2000年12(1)4-11期]。任愛梅等對(duì)異葉青蘭化學(xué)成分及抑菌活性研究進(jìn)行了分析，從甲醇提取物中分離得到9個(gè)化合物，其中化合物4對(duì)金黃色葡萄球菌有弱的抑制作用[《中草藥》2011,42(4)38-41]
[0004]目前病毒性疾病給人類的生命和健康造成了嚴(yán)重危害，從天然藥物中開發(fā)研制新的抗病毒藥物成為熱點(diǎn)。臨床上常用多種類型的抗病毒西藥除了對(duì)病毒有抑制作用外，或多或少都存在細(xì)胞毒作用，長(zhǎng)期用藥還易產(chǎn)生耐藥性，病毒株也會(huì)發(fā)生變異成為新的耐藥菌株，這使現(xiàn)有抗病毒西藥的臨床應(yīng)用和新的抗病毒西藥的研發(fā)面臨巨大的挑戰(zhàn)。而在我國(guó)中醫(yī)、藏醫(yī)長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中，應(yīng)用傳統(tǒng)中草藥和藏藥治療病毒性疾病取得了卓越成效， 但缺乏有關(guān)有效化學(xué)成份以及藥理學(xué)作用，抗病毒活性以及機(jī)制的研究。運(yùn)用現(xiàn)代藥理學(xué)理論去研究傳統(tǒng)民族藥，篩選分離有效化合物，明確其藥效學(xué)作用及機(jī)制，是目前抗病毒藥物研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。
[0005]流行性感冒病毒，簡(jiǎn)稱流感病毒，甲、乙、丙三型，引起人和動(dòng)物流感。甲型流感病毒是反復(fù)流行最為頻繁和引起流感全球流行的重要病原體。近些年來，H1N1，H7N9流感病毒的流行肆虐，造成嚴(yán)重危害，引起社會(huì)的恐慌。流感病毒呈球形或絲狀，球形直徑80-20nm，新分離株絲狀多于球形，是有包膜，單鏈分片段的RNA病毒。流感病毒包膜刺突的表面結(jié)構(gòu)為血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)。血凝素(HA)柱狀，為三聚體，它基本上以相同的間距覆蓋了病毒的全部表面。是病毒保護(hù)性抗原。神經(jīng)氨酸酶(NA)是四個(gè)亞單位組成的四聚體，并不平均分布在病毒表面，聚合成群，與病毒釋放有關(guān)。流感的爆發(fā)流行主要由病毒抗原漂移(antigenic drift)和抗原轉(zhuǎn)換(antigenic shift)引起,抗原漂移(antigenic drift)因HA或NA的點(diǎn)突變?cè)斐?，變異幅度小，屬量變，引起局部中、小型流行。抗原轉(zhuǎn)換 (antigenic shift)因HA或NA的大幅度變異造成,屬質(zhì)變,導(dǎo)致新亞型的出現(xiàn),引起世界性的暴發(fā)流行。近些年來，爆發(fā)流行的甲型HlNl流感，以及最新H7N9流感均是由變異后的新型甲型流感病毒所引起的急性呼吸道傳染病。
[0006]呼吸道合胞病毒(RSV)是一個(gè)世界范圍內(nèi)嬰幼兒最常見的呼吸道感染的病原體。 目前，對(duì)RSV的防治仍無有效的疫苗和藥物。RSV是有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，包膜刺突為G蛋白，RSV感染嬰幼兒致細(xì)支氣管炎和細(xì)支氣管肺炎，感染成人致上呼吸道感染，通過手、污染物品和呼吸道傳播，易在冬季流行，是醫(yī)源性感染的重要病原體。RSV在呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，支氣管壞死物與粘液、纖維蛋白粘連在一起，易導(dǎo)致氣道阻塞，可并發(fā)嚴(yán)重的細(xì)支氣管炎和肺炎，感染后免疫力不強(qiáng)，不能防止再感染，至今未有有效的預(yù)防疫苗。
[0007]在藏醫(yī)藥長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中，應(yīng)用傳統(tǒng)藏藥治療病毒性疾病取得了卓越成效，藏醫(yī)認(rèn)流感的易感人群為青壯年，是由赤巴之邪引起的熱性傳染疾病之一。異葉青蘭是清熱解毒類藥物，傳統(tǒng)藏醫(yī)中用來治療淋巴結(jié)炎、肺熱咳嗽，瘟病時(shí)疫。因此，從傳統(tǒng)藏藥中開發(fā)更好的抗呼吸道病毒藥物具有重要的應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)前景。
[0008]本發(fā)明提供了一種異葉青蘭揮發(fā)油可以在制備抗病毒藥物中應(yīng)用，與現(xiàn)有抗病毒合成藥相比，其毒性低，安全可靠，藥效作用強(qiáng)，而且異葉青蘭原料豐富，價(jià)廉，萃取工藝簡(jiǎn)單，制備成本低，可以制成各種劑型。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明提供一種異葉青蘭 揮發(fā)油的制備方法，該方法包括以下步驟:
[0010]第一步，稱取200g異葉青蘭全草，切碎成約Icm長(zhǎng)，加入2000ml圓底燒瓶，采用 95°C水蒸汽，蒸餾1.5h，收集餾出液。
[0011]第二步，用150ml無水乙醚分三次萃取餾出液，合并有機(jī)相約120ml。
[0012]第三步，取7g無水Na2SO4干燥有機(jī)相加入步驟二中所得的有機(jī)相中。；
[0013]第四步，在38°C下水浴蒸發(fā)溶劑乙醚，回收餾出液乙醚，并收集燒瓶中黃色油狀物，得到異葉青蘭揮發(fā)油0.1804g ；；
[0014]第五步，將第四步所制得的異葉青蘭揮發(fā)油在_20°C保藏，用紫外照射30min滅菌，既得。
[0015]一種異葉青蘭揮發(fā)油的制備方法，所制得的異葉青蘭揮發(fā)油可用于制備抗呼吸道病毒藥物。
[0016]有益效果:
[0017]本發(fā)明所提供的異葉青蘭揮發(fā)油可以在抑制病毒吸附，預(yù)防病毒侵染，抑制病毒基因復(fù)制、直接滅活病毒等多環(huán)節(jié)發(fā)揮明顯的抗病毒作用，故而異葉青蘭揮發(fā)油及提取物可以在制備抗病毒藥物中應(yīng)用。本發(fā)明提供的異葉青蘭揮發(fā)油及提取物可以在制備抗病毒藥物以以單味或者復(fù)方方式制備成藥物組合物。尤其是以單味或者復(fù)方方式在制備治療呼吸道病毒感染的藥物組合物中應(yīng)用。由于軟膠囊、硬膠囊、滴丸、片劑、分散片、顆粒劑、注射液、口服液、栓劑等藥物劑型的制備是本領(lǐng)域的研究人員所能理解的，可以方便地實(shí)現(xiàn)異葉青蘭揮發(fā)油及提取物與相應(yīng)載體組合而制備成各種藥物劑型；軟膠囊、或硬膠囊、或滴丸、 或片劑、或分散片、或顆粒劑、或注射液、或口服液、或栓劑。
[0018]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0019]1、異葉青蘭為純藏藥，毒性低，安全性高。
[0020]2、異葉青蘭揮發(fā)油及提取物可以在抑制病毒吸附，預(yù)防病毒侵染，抑制病毒基因復(fù)制、直接滅活病毒等多環(huán)節(jié)發(fā)揮明顯的抗呼吸道病毒作用，異葉青蘭揮發(fā)油及提取物可以在制備抗呼吸道病毒藥物中應(yīng)用。具有明顯抗流感病毒，抗腺病毒的作用。
[0021]3、能夠治療呼吸道疾病，有很好的藥用前景。
[0022]4、原料豐富、價(jià)廉、萃取工藝簡(jiǎn)單、制備成本低，可以方便地制備成各種劑型。 【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0024]實(shí)施例一異葉青蘭揮發(fā)油及提取物的制備
[0025](一)異葉青蘭揮發(fā)油的制備
[0026]取適量異葉青蘭全草(碎成約Icm長(zhǎng))加入2000ml圓底燒瓶，通水蒸汽，用水蒸汽蒸餾1.5h，收集餾出液；用無水乙醚少量多次萃取餾出液，收集有機(jī)相；加無水Na2SO4干燥有機(jī)相；將有機(jī)相在沸石存在的情況下常壓蒸餾，回收餾出液乙醚，收集燒瓶中黃色油狀物，得到異葉青蘭揮發(fā)油；將揮發(fā)油在-20°C保藏，用前紫外照射30min滅菌。
[0027](二)異葉青蘭分級(jí)提取物的制備
[0028]將異葉青蘭在酒精中浸泡7天，期間經(jīng)常攪動(dòng)浸出有效成分。析出上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回流蒸發(fā)回收酒精，得到總浸膏。將總浸膏用500ml蒸餾水溶解，用石油醚萃取，將石油醚相回流蒸發(fā)，收集剩余液體即石油醚提取物；將剩余水相用乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯相回流蒸發(fā)，收集剩余液體即乙酸乙酯提取物；將剩余水用正丁醇萃取，將正丁醇相回流蒸發(fā)，收集剩余液體即正丁醇提取物；剩余的水相回流蒸發(fā)，收集剩余液體即為水相。收集四種提取物室溫靜置干燥，4°C保藏，用紫外照射30min滅菌。
[0029]實(shí)施例二異葉青蘭揮發(fā)油氣質(zhì)聯(lián)用分析
[0030]異葉青蘭揮發(fā)油成分用氣相色譜-質(zhì)譜分析(Trace DSQ GC-MS聯(lián)用儀,美國(guó)熱電公司)。氣相色譜條件為:色譜柱DB-5ms ;柱長(zhǎng):30m ;液膜厚度:0.25 y m ;內(nèi)徑:0.25mm ;載氣:He ;流速:1.0mL / min ;柱溫:程序升溫40?250°C (10°C / min),恒溫20min ;進(jìn)樣量 IuLo質(zhì)譜條件:分流模式進(jìn)樣，分流比30:1 ;進(jìn)樣口溫度:250°C ;輔助線溫度:280°C ;離子源溫度:250°C ;電離方式:EI ;電子能量:70eV ;電子倍增管電壓:1256kV ;采集方式:掃描；掃描質(zhì)量范圍:40?600amu。
[0031]用氣-質(zhì)聯(lián)用對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行分析，各種成分的保留時(shí)間(按先后順序)、名稱、分子式、相對(duì)百分含量及符合度見表I。異葉青蘭揮發(fā)油得率0.083% (W / W)。從異葉青蘭揮發(fā)油中初步鑒定了 40個(gè)化合物。其中有19個(gè)組分含量大于1%，占揮發(fā)油總量的 87.53%。含量較高的有桉葉油素(22.18% )，6，6-二甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-2-甲醇(11.28% )，順式萜品醇(11.11% )，4-(1-甲基乙基)-苯甲醛(5.79% )，[1S-(1，
2，5) ]-4，6，6-三甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-3-烯-2-醇(4.91%),4-(1-甲基乙基)-2-環(huán)乙烯-1-酮(4.74%)，[13-(1，3，5)]-6，6-二甲基-2-亞甲基-二環(huán)[3,1,1]庚烷 _3_ 醇 (4.13% )，(1,2, 5)-2,6,6-甲基-二環(huán)[3，1，1]庚烷-3-酮(4.03% )。異葉青蘭揮發(fā)油含萜69.20%，其中萜醇占34.45%，單萜28.76%、倍半萜5.99%。
[0032]表I異葉青蘭揮發(fā)油化學(xué)成分
[0033]
【權(quán)利要求】
1.一種異葉青蘭揮發(fā)油的制備方法，其特征在在于該方法包括以下步驟:第一步，稱取200g異葉青蘭全草，切碎成約Icm長(zhǎng)，加入2000ml圓底燒瓶，采用95°C水蒸汽，蒸餾1.5h，收集餾出液；第二步，用150ml無水乙醚分三次萃取餾出液，合并有機(jī)相約120ml:第三步，取7g無水Na2SO4干燥有機(jī)相加入步驟二中所得的有機(jī)相中；第四步，在38 °C下水浴蒸發(fā)溶劑乙醚，回收餾出液乙醚，并收集燒瓶中黃色油狀物，得到異葉青蘭揮發(fā)油0.1804g ；第五步，將第四步所制得的異葉青蘭揮發(fā)油在_20°C保藏，用紫外照射30min滅菌，既得。
2.如權(quán)利要求 1所述一種異葉青蘭揮發(fā)油的制備方法，所制得的異葉青蘭揮發(fā)油可用于制備抗呼吸道病毒藥物。
【文檔編號(hào)】A61P11/00GK103436364SQ201310377188
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月26日
【發(fā)明者】張春江 申請(qǐng)人:蘭州大學(xué)