奈莫司他的制藥用途
【專利摘要】本發(fā)明提供奈莫司他在制備用于治療脊髓損傷的藥物中的用途。本發(fā)明將奈莫司他應(yīng)用于脊髓損傷的治療干預(yù)，試驗(yàn)表明奈莫司他能夠降低細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)神經(jīng)元的存活，抑制膠質(zhì)瘢痕的形成，并顯著提高治療后動(dòng)物的BBB評(píng)分。與目前臨床上應(yīng)用的藥物甲強(qiáng)龍相比，給藥窗口更寬，治療效果更加持久，遠(yuǎn)期效果更好。
【專利說明】奈莫司他的制藥用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及奈莫司他在制備脊髓損傷的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]奈莫司他(nafamostat)為人工合成的絲氨酸蛋白水解酶抑制劑,具有抗凝、抗纖維蛋白溶酶和抗血小板聚集的作用，其對(duì)胰蛋白酶、激肽釋放酶(血管舒緩素)、血纖維蛋白溶酶、纖維蛋白酶以及補(bǔ)體系統(tǒng)經(jīng)典途徑的CL-r、CL-s等胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶具有很強(qiáng)的選擇性抑制作用。奈莫司他可以抑制炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1 β及NOS的產(chǎn)生，目前臨床上主要用于急性胰腺炎的治療。而關(guān)于奈莫司他對(duì)于除胰腺之外的器官的炎癥反應(yīng)的抑制作用還有待于進(jìn)一步研究。
[0003]由各類事故引發(fā)的急性脊髓損傷(Spinal cord injury, SCI)的發(fā)生率近年來逐年增高，已成為骨科臨床的常見病。對(duì)其發(fā)病機(jī)制的研究表明，脊髓損傷主要是由兩種機(jī)制引起:原發(fā)性損傷(損害、出血等)和繼發(fā)性損傷(炎性反應(yīng)、缺血再灌注、細(xì)胞因子等)。原發(fā)性損傷被動(dòng)地發(fā)生在損傷后短時(shí)間內(nèi)(一般認(rèn)為4小時(shí)內(nèi))，且產(chǎn)生的神經(jīng)損害是不可逆的，而脊髓繼發(fā)性損傷是一種細(xì)胞和分子水平的主動(dòng)調(diào)節(jié)過程，具有可逆性且可被調(diào)控。脊髓損傷后，脊髓組織周圍可以招募一系列免疫活性細(xì)胞，包括中性粒細(xì)胞、激活的巨噬細(xì)胞等，這些細(xì)胞可以產(chǎn)生許多前炎癥趨化因子/細(xì)胞因子，如TNFa、IL-1 β、蛋白激酶(類胰蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶和彈性蛋白酶等)以及由中性粒細(xì)胞氧化爆發(fā)反應(yīng)產(chǎn)生的自由基，從而加重了脊髓的損傷。急性期劇烈的炎性反應(yīng)導(dǎo)致大量的細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致局部空洞的產(chǎn)生。在慢性期，由于膠質(zhì)細(xì)胞的遷移增殖修復(fù)空洞缺損而最終形成膠質(zhì)瘢痕。膠質(zhì)瘢痕阻礙了再生軸突向遠(yuǎn)端的延伸，最終嚴(yán)重影響遠(yuǎn)期的功能恢復(fù)。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004]針對(duì)上述問題，本發(fā)明的主要目的在于提供一種奈莫司他在制備用于治療脊髓損傷的藥物中的用途。本發(fā)明將奈莫司他應(yīng)用于脊髓損傷的治療干預(yù)，以抑制脊髓損傷局部劇烈的酶促炎性反應(yīng)，減輕脊髓的繼發(fā)性損傷，從而促進(jìn)損傷后的功能恢復(fù)。
[0005]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種奈莫司他在制備用于治療脊髓損傷的藥物中的用途。
[0006]進(jìn)一步地，所述奈莫司他用于制備治療急性脊髓損傷的藥物。
[0007]進(jìn)一步地,所述奈莫司他的給藥劑量為成人0.2mg/kg體重。
[0008]進(jìn)一步地，所述藥物包含奈莫司他和藥學(xué)上可接受的輔料。
[0009]進(jìn)一步地，所述藥物為適于靜脈全身給藥的藥物劑型。
[0010]進(jìn)一步地,所述藥物為凍干粉或針劑。
[0011]進(jìn)一步地，所述藥物的給藥時(shí)間范圍為脊髓損傷后8小時(shí)至24小時(shí)內(nèi)。
[0012]進(jìn)一步地，所述藥物的給藥時(shí)間范圍為脊髓損傷后8小時(shí)內(nèi)。
[0013]進(jìn)一步地，所述脊髓損傷為由(例如車禍或墜落等外傷所致的)脊柱骨折或脫位引起的急性脊髓損傷。
[0014]進(jìn)一步地，所述脊髓損傷的癥狀包括感覺過敏或喪失、肌力降低或癱瘓、或大小便自主控制障礙。
[0015]本發(fā)明通過對(duì)脊髓損傷造模動(dòng)物的試驗(yàn)治療，發(fā)現(xiàn)奈莫司他能夠降低細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)神經(jīng)元的存活，抑制膠質(zhì)瘢痕的形成，并顯著提高治療后動(dòng)物的BBB評(píng)分，表明奈莫司他對(duì)于脊髓損傷后的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)具有顯著的促進(jìn)作用。
[0016]本發(fā)明將奈莫司他作為一種蛋白酶抑制劑治療脊髓損傷，與目前臨床上用于治療脊髓損傷的常用藥物甲強(qiáng)龍相比，給藥窗口更寬，治療效果更加持久，遠(yuǎn)期效果更好。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]以下，結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中:
[0018]圖1示出了采用BBB評(píng)分法分析損傷后8小時(shí)給藥的大鼠治療后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)情況；
[0019]圖2示出了采用TUNEL染色觀察損傷后8小時(shí)給藥的大鼠損傷局部的細(xì)胞凋亡情況；
[0020]圖3示出了采用NF200染色觀察損傷后8小時(shí)給藥的大鼠損傷局部神經(jīng)元的數(shù)量;
[0021]圖4顯示了采用GFAP染色觀察損傷后8小時(shí)給藥的大鼠損傷局部慢性期膠質(zhì)瘢痕的形成情況；
`[0022]圖5示出了采用NF200染色觀察不同時(shí)間給藥的大鼠脊髓內(nèi)神經(jīng)元的數(shù)量；
[0023]圖6示出了采用GFAP染色觀察不同時(shí)間給藥的大鼠損傷局部慢性期膠質(zhì)瘢痕的形成情況；
[0024]圖7示出了采用不同濃度奈莫司他治療大鼠的BBB評(píng)分。
[0025]其中圖1-7中，*表示與對(duì)照組相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05 表示與對(duì)照組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p〈0.001 ;#表示與相同給藥時(shí)間的甲強(qiáng)龍治療組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P〈0.05 ;##表示與相同給藥時(shí)間的甲強(qiáng)龍治療組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P〈0.001。
【具體實(shí)施方式】
[0026]以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0027]下述實(shí)施例中的試驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。
[0028]本發(fā)明應(yīng)用大鼠的脊髓損傷模型研究奈莫司他對(duì)脊髓損傷的治療作用，并將奈莫司他的治療效果與甲基強(qiáng)的松龍(甲強(qiáng)龍)進(jìn)行比較，甲強(qiáng)龍作為目前臨床上治療脊髓損傷的標(biāo)準(zhǔn)藥物，其療效已得到了廣泛認(rèn)可。
[0029]實(shí)施例1奈莫司他對(duì)脊髓損傷的治療試驗(yàn)
[0030]采用8周齡雌性Wistar大鼠，應(yīng)用紐約大學(xué)(NYU)標(biāo)準(zhǔn)脊髓損傷打擊器(ImpactorModel II)在大鼠胸10節(jié)段打擊脊髓，構(gòu)建脊髓損傷的動(dòng)物模型。損傷后8小時(shí)，將奈莫司他以10mg/kg的劑量腹腔注射給藥,而將甲強(qiáng)龍以30mg/kg的劑量尾靜脈注射給藥,每天一次持續(xù)至損傷后2周；同時(shí)采用生理鹽水作為對(duì)照。應(yīng)用BBB評(píng)分、TUNEL、NF-200和GFAP染色觀察治療后試驗(yàn)動(dòng)物的功能恢復(fù)、損傷后細(xì)胞凋亡、神經(jīng)元存活數(shù)量以及膠質(zhì)瘢痕的大小。[0031]圖1-4示出了上述試驗(yàn)中損傷后8小時(shí)給藥時(shí)，奈莫司他治療組與甲強(qiáng)龍治療組及生理鹽水照組的治療效果比較。其中，圖1示出了采用BBB評(píng)分法分析損傷后8小時(shí)給藥的大鼠治療后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)情況，從圖1看出，奈莫司他治療組的BBB評(píng)分顯著高于甲強(qiáng)龍組與對(duì)照組，表明采用奈莫司他治療可以顯著促進(jìn)大鼠損傷后的功能恢復(fù)。圖2示出了采用TUNEL染色觀察損傷后8小時(shí)給藥的大鼠損傷局部的細(xì)胞凋亡情況，從圖2看出，奈莫司他治療組的大鼠的細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著低于對(duì)照組的大鼠的細(xì)胞凋亡數(shù)量，表明奈莫司他在損傷后對(duì)局部組織細(xì)胞具有保護(hù)作用。圖3示出了采用NF200染色觀察損傷后8小時(shí)給藥的大鼠損傷局部神經(jīng)元的數(shù)量，從圖3看出，奈莫司他治療組的大鼠的神經(jīng)元數(shù)量顯著高于對(duì)照組的大鼠的神經(jīng)元數(shù)量，表明奈莫司他可在損傷后保護(hù)神經(jīng)元的存活，促進(jìn)神經(jīng)元的再生修復(fù)。圖4顯示了采用GFAP染色觀察損傷后8小時(shí)給藥的大鼠損傷局部慢性期膠質(zhì)瘢痕的形成情況，從圖4看出，奈莫司他治療組的大鼠的GFAP表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組的大鼠的GFAP表達(dá)水平，表明奈莫司他可以抑制慢性期膠質(zhì)瘢痕的形成，促進(jìn)損傷后的組織修復(fù)與功能恢復(fù)。
[0032]上述試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，奈莫司他顯著降低了損傷后急性期細(xì)胞的壞死及凋亡，促進(jìn)了神經(jīng)元的存活與修復(fù)；遠(yuǎn)期則縮小了膠質(zhì)瘢痕的范圍、促進(jìn)了大鼠損傷后的功能恢復(fù)。由此表明，奈莫司他對(duì)脊髓損傷具有確定的療效。
[0033]實(shí)施例2不同時(shí)間給藥時(shí)奈莫司他與甲強(qiáng)龍的治療效果對(duì)比
[0034]本實(shí)施例通過不同時(shí)間給藥時(shí)奈莫司他與甲強(qiáng)龍的療效對(duì)比，確定奈莫司他對(duì)于脊髓損傷臨床治療方案的有效性。
[0035]將8周齡雌性Wistar大鼠分為三組(每組30只)，應(yīng)用紐約大學(xué)(NYU)標(biāo)準(zhǔn)脊髓損傷打擊器(Impactor Model II)在大鼠胸10節(jié)段打擊脊髓，選取打擊后即刻(O小時(shí))、3小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)4個(gè)給藥時(shí)間,對(duì)3組動(dòng)物分別進(jìn)行生理鹽水、甲強(qiáng)龍和奈莫司他治療并持續(xù)2周，觀察大鼠的恢復(fù)情況。
[0036]圖5-6示出了損傷后不同時(shí)間給藥時(shí)奈莫司他治療組與甲強(qiáng)龍治療組及生理鹽水對(duì)照組的治療效果的比較。其中圖5示出了采用NF200染色觀察不同時(shí)間給藥的奈莫司他治療組與甲強(qiáng)龍治療組及生理鹽水對(duì)照組的大鼠脊髓內(nèi)神經(jīng)元數(shù)量的差異，從圖5看出，在大鼠損傷后8小時(shí)給藥時(shí)，奈莫司他治療組大鼠的神經(jīng)元數(shù)量顯著高于甲強(qiáng)龍治療組大鼠的神經(jīng)元數(shù)量，而甲強(qiáng)龍治療在早期療效較明顯，但隨著給藥時(shí)間的推遲其效果顯著下降；圖6示出了采用GFAP染色觀察不同時(shí)間給藥的大鼠損傷局部慢性期膠質(zhì)瘢痕的形成情況。從圖6看出，在大鼠損傷后8小時(shí)給藥時(shí)，奈莫司他治療組對(duì)膠質(zhì)瘢痕的抑制作用最顯著，且其對(duì)膠質(zhì)瘢痕的抑制效果顯著高于甲強(qiáng)龍組。綜上，損傷后8小時(shí)給藥能夠更好地發(fā)揮奈莫司他對(duì)脊髓損傷的治療效果。
[0037]綜上，甲強(qiáng)龍?jiān)趽p傷早期的治療效果較顯著，但其療效隨給藥時(shí)間的推遲而降低，給藥窗口較窄，遠(yuǎn)期效果有限；而奈莫司他的治療效果更加持久，給藥窗口期更寬，遠(yuǎn)期療效顯著。[0038]實(shí)施例3奈莫司他給藥劑量試驗(yàn)
[0039]為確定奈莫司他的最佳給藥劑量,設(shè)計(jì)梯度濃度奈莫司他(lmg/kg、3mg/kg、10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg)對(duì)脊髓損傷大鼠進(jìn)行治療，以單純PBS注射組作為對(duì)照。圖7示出了采用不同濃度奈莫司他治療大鼠的BBB評(píng)分，從圖7看出，隨著給藥濃度的升高，BBB評(píng)分同步升高，采用10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg給藥時(shí)BBB評(píng)分較高,考慮到10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg三組的BBB評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,將10mg/kg作為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用劑量。
[0040]綜合以上研究結(jié)果，對(duì)于脊髓損傷的病人，依據(jù)通常動(dòng)物(大鼠)與人50:1的劑量換算關(guān)系，以0.2mg/kg作為成人的奈莫司他給藥劑量。優(yōu)選地，臨床上在脊髓損傷后24小時(shí)之內(nèi)，特別是8小時(shí)內(nèi)，應(yīng)用0.2mg/kg奈莫司他進(jìn)行靜脈給藥治療是有效的。
[0041]以上對(duì)本發(fā)明【具體實(shí)施方式】的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出 各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。
【權(quán)利要求】
1.奈莫司他在制備用于治療脊髓損傷的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述脊髓損傷為急性脊髓損傷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述奈莫司他的給藥劑量為成人0.2mg/kg 體重。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于，所述藥物包含奈莫司他和藥學(xué)上可接受的輔料。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于，所述藥物為適于靜脈全身給藥的藥物劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述藥物為凍干粉或針劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于，所述藥物的給藥時(shí)間范圍為脊髓損傷后8小時(shí)至24小時(shí)內(nèi)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述藥物的給藥時(shí)間范圍為脊髓損傷后8小時(shí)內(nèi)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于，所述脊髓損傷 為由脊柱骨折或脫位引起的急性脊髓損傷。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述脊髓損傷的癥狀包括感覺過敏或喪失、肌力降低或癱瘓、或大小便自主控制障礙。
【文檔編號(hào)】A61P25/00GK103479612SQ201310377653
【公開日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月27日
【發(fā)明者】馮世慶, 周新福, 劉燊, 安魯凡, 吳秋麗, 史宏宇 申請(qǐng)人:馮世慶