一種海棠提取物及其制備、應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種海棠提取物，還涉及一種海棠提取物的制備方法，以及其制備降血糖和治療糖尿病藥物和在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑類(lèi)藥物方面的應(yīng)用。海棠提取物的制備方法，海棠葉經(jīng)醇提，醇提物分散于水中，萃取，揮干溶劑得到的萃取物即為海棠提取物。本發(fā)明的海棠提取物屬于天然提取物，毒性小，長(zhǎng)期使用無(wú)不良反應(yīng)，安全可靠。
【專(zhuān)利說(shuō)明】ー種海棠提取物及其制備、應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及ー種海棠提取物，還涉及ー種海棠提取物的制備方法，以及其制備降血糖和治療糖尿病藥物和在制備0.-葡萄糖苷酶抑制劑類(lèi)藥物方面的應(yīng)用。
[0002]【背景技術(shù)】
貼梗海棠ipmerwawles speciosa ( Sweet) Nakai )是薔薇科木瓜屬落葉小灌木，原產(chǎn)于我國(guó)西南地區(qū)，抗逆性強(qiáng)，耐寒。其花色艷麗，可廣泛用于庭院美化，是春賞花、秋觀果的優(yōu)良園林觀賞植物。貼梗海棠的果實(shí)為常用藥材，用于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和胃腸道疾病，治療關(guān)節(jié)炎和胃腸炎。藥理學(xué)研究和臨床實(shí)踐證明，它還具有消炎，鎮(zhèn)痛，抗腫瘤，免疫調(diào)節(jié)，抗菌活性等。但未見(jiàn)對(duì)貼梗海棠抑制葡萄糖苷酶活性的報(bào)道。
[0003]垂絲海棠(Malus halliana Koehne)為薔薇科蘋(píng)果屬落葉喬木，分布于陜西、四川、江蘇、安徽、浙江和云南等地，各地均有其花入藥具有調(diào)經(jīng)和血的功效，多用于治療吐血、尿血、便血、跌打損傷、骨折等疾病。垂絲海棠的果實(shí)還具有一定的食用功能。目前對(duì)垂絲海棠藥理作用研究極少，未見(jiàn)對(duì)垂絲海棠抑制葡萄糖苷酶活性的報(bào)道。
[0004]湖北海棠(Malus hupehensis ( Pamp.) Rehd.)為薔薇科蘋(píng)果屬植物，分布于湖北、陜西、湖南、山西、重慶各地。湖北海棠的葉和果實(shí)是常用藥物，具有抗氧化、保肝、抗菌、降血糖等多種作用。湖北海棠的主要成分為根皮苷，根皮苷具有抗氧化、降血糖、美白、祛斑等多種生物活性。已有對(duì)湖北海棠降血糖作用的研究，但未見(jiàn)其抑制葡萄糖苷酶活性的報(bào)道。
[0005]糖尿病是ー組由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用障礙所致的以高血糖為特征的代謝疾病。持續(xù)高血糖與長(zhǎng)期代謝紊亂等可導(dǎo)致全身組織器官的損害及其功能障礙和衰竭。全球糖尿病發(fā)病率增長(zhǎng)迅速，糖尿病已`經(jīng)成為繼腫瘤、心血管病變之后第三大嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的慢性疾病。目前全球糖尿病患者已超過(guò)1.2億人，我國(guó)患者人群居世界第二，目前中國(guó)的糖尿病發(fā)病率高達(dá)9.6%，未來(lái)的50年內(nèi)糖尿病仍將是中國(guó)一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。糖尿病一般主要分為三型:1.1型糖尿病，對(duì)胰島素治療敏感。其發(fā)病機(jī)制和遺傳因素密切相關(guān)，大多數(shù)病人屬于自身免疫性疾病，病人胰島素分泌功能表現(xiàn)逐漸減退，以致完全喪失，需要依賴(lài)補(bǔ)給胰島素才能生存。2.1I型糖尿病，患者血中胰島素水平不低，甚至有所升高。此型的病變?cè)谟诎屑?xì)胞膜上胰島素受體數(shù)目減少或缺陷，表現(xiàn)為激素ー受體親和カ減弱，有的則為正常結(jié)合，但結(jié)合后反應(yīng)異常，出現(xiàn)胰島素抗性現(xiàn)象。3.其它繼發(fā)性糖尿病，凡是由于其它已知原因的疾病引起的胰島素分泌受損，或胰島素不能正常發(fā)揮作用而引起的高血糖癥均屬于此型。糖尿病病發(fā)往往先出現(xiàn)餐后高血糖，而后發(fā)展成糖尿病。對(duì)于糖尿病患者，特別是II型病人，餐后高血糖對(duì)機(jī)體的危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)空腹高血糖。餐后高血糖不僅極易誘發(fā)各種并發(fā)癥，還會(huì)極大地提高糖尿病的死亡率，所以降低餐后血糖是預(yù)防糖尿病，減少并發(fā)癥和降低死亡率的重要措施之一。α -葡萄糖苷酶抑制劑作用機(jī)制主要通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制α -葡萄糖苷酶的活性，阻滯雙糖水解成單糖，延緩糖的吸收，使血糖平穩(wěn)并緩慢地維持在一定水平。有效的控制了餐后血糖的升高，并可預(yù)防糖尿病的發(fā)生，減少了并發(fā)癥和降低了死亡率。[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的在于提供ー種海棠提取物及其制備方法。
[0007]本發(fā)明的另一目的在于提供ー種海棠提取物的制備降血糖和治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用以及在制備〃-葡萄糖苷酶抑制劑類(lèi)藥物方面的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
ー種海棠提取物的制備方法，海棠葉經(jīng)醇提，醇提物分散于水中，萃取，揮干溶劑得到的萃取物即為海棠葉提取物。
[0009]萃取時(shí)分別用石油醚、こ酸こ酯或正丁醇進(jìn)行萃取，揮干溶劑，分別得到石油醚萃取物、こ酸こ酯萃取物和正丁醇萃取物。
[0010]萃取時(shí)依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇進(jìn)行萃取，揮干溶劑，依次得到石油醚萃取物、こ酸こ酯萃取物和正丁醇萃取物。
[0011]醇提的過(guò)程為:海棠葉經(jīng)干燥、粉碎，用60-80V%的こ醇浸提2-3次，每次1-3h，合并浸提液，過(guò)濾、濃縮得到醇提物。
[0012]浸提溫度50-70°C。
[0013]所述海棠葉為貼梗海棠speciosa ( Sweet) Nakai)葉、垂絲海棠{Malus halliana Koehne)葉或湖北海棠(Malus hupehensis ( Pamp.) Rehd.)葉。
[0014]以上制備方法制 得的海棠葉提取物。
[0015]海棠提取物在制備降血糖和治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用。
[0016]海棠提取物在制備α -葡萄糖苷酶抑制劑類(lèi)藥物方面的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明對(duì)貼梗海棠、垂絲海棠和湖北海棠的葉子經(jīng)過(guò)特定的方法處理制得了海棠提取物(石油醚萃取物、こ酸こ酯萃取物和正丁醇萃取物)，不同海棠、不同溶劑的萃取物可以單獨(dú)利用，也可以配合利用。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)以阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照，觀察海棠的石油醚萃取物、こ酸こ酯萃取物和正丁醇萃取物對(duì)o'-葡萄糖苷酶的抑制作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明得到的海棠提取物對(duì)葡萄糖苷酶有明顯的抑制作用，而且在一定濃度下呈量效關(guān)系。說(shuō)明本發(fā)明的可制備葡萄糖苷酶抑制劑類(lèi)藥物，也可制備降血糖和治療糖尿病藥物。
[0018]本發(fā)明的海棠提取物屬于天然提取物，毒性小，長(zhǎng)期使用無(wú)不良反應(yīng)，安全可靠。
[0019]【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
圖1為貼梗海棠提取物抑制劑濃度對(duì)葡萄糖苷酶抑制效果的影響曲線圖；
圖2為垂絲海棠提取物抑制劑濃度對(duì)〃-葡萄糖苷酶抑制效果的影響曲線圖；
圖3為湖北海棠提取物抑制劑濃度對(duì)〃-葡萄糖苷酶抑制效果的影響曲線圖。
[0020]【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1
海棠提取物，由以下方法制備而得:取干燥的貼梗海棠葉，將其粉碎，用70V%こ醇在50°C下浸提2次，毎次lh，合并浸提液，過(guò)濾，濃縮為醇提物，將醇提物分散于水里，依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇進(jìn)行萃取得到貼梗海棠石油醚萃取物、貼梗海棠こ酸こ酯萃取物和貼梗海棠正丁醇萃取物。
[0021]實(shí)施例2
海棠提取物，由以下方法制備而得:取自然干燥的垂絲海棠葉，將其粉碎，用60V%こ醇在60°C下浸提2次，毎次2h，合并浸提液，過(guò)濾，濃縮醇提物，將醇提物分散于水里，依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇進(jìn)行萃取得到垂絲海棠石油醚萃取物、垂絲海棠こ酸こ酯萃取物和垂絲海棠正丁醇萃取物。
[0022]實(shí)施例3
海棠提取物，由以下方法制備而得:取自然干燥的湖北海棠葉，將其粉碎，用80V%こ醇在80°C下浸提2次，毎次3h，合并浸提液，過(guò)濾，濃縮為醇提物，將醇提物分散于水里，依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇進(jìn)行萃取得到湖北海棠石油醚萃取物、湖北海棠こ酸こ酯萃取物和湖北海棠正丁醇萃取物。
[0023]效果實(shí)驗(yàn)
以上實(shí)施例海棠提取物的體外抑制糖苷酶活性試驗(yàn) 方法:微孔板法
原理:a -D-葡萄糖苷酶催化水解4-硝基苯-a _D_吡喃葡萄糖苷(PNP-G)，產(chǎn)生硝基苯酹(PNP為ー種黃色物質(zhì)，在400nm左右有最大吸收)，糖苷酶抑制劑可抑制》-葡萄糖苷酶與底物結(jié)合從而降低PNP的釋放量。以一定時(shí)間內(nèi)反應(yīng)體系中PNP的含量變化來(lái)計(jì)算提取物的酶抑制活性。
[0024]儀器:旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Heidolph);Multiskan MK3 酶標(biāo)儀(Thermo Electron) ；DELTA320型PH計(jì)(Mettler-Toledo);LRH-150恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)；電子天平(Mettler-Toledo)。
[0025]試劑:阿卡波糖(卡博平，杭州中美華東制藥有限公司，批號(hào):110704);ひ-葡萄糖昔酶(Sigma 公司，EC 3.2.1.20, from baker’s yeast,批號(hào):105K1313) ;4_ 硝基苯基-σ-ガ-吡喃葡萄糖苷(PNPG，Sigma公司，批號(hào):026K1516);磷酸鹽緩沖液(PH 6.8);其他試劑均為分析純。
`[0026]檢測(cè)方法:112 L磷酸鉀緩沖液，加入20 μ L (濃度為0.2 U/mL)的a -葡萄糖苷酶，8 UL樣品溶液，37°C恒溫15 min，加入20 μ L2.5 mmol/L 4-硝基苯基-σ卩比喃葡萄糖苷，37°C恒溫反應(yīng)15 min。再加入80 yL (濃度為0.2 mol/L)的終止劑Na2C03溶液，于405 nm波長(zhǎng)下測(cè)0D值。實(shí)驗(yàn)設(shè)置4組，分別為:a.陰性對(duì)照組；b.空白組；c.樣品測(cè)定組；d.樣品對(duì)照組。按照下述公式計(jì)算出抑制率，并用Origin軟件求出相應(yīng)IC5(I值。
[0027]抑制率:/%= 1 -X100%
空 m.)
分別利用上述測(cè)定方法測(cè)定海棠提取物和陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖的IC5(I值。
[0028]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示
表1海棠提取物的-葡萄糖苷酶抑制活性
【權(quán)利要求】
1.ー種海棠提取物的制備方法，其特征在于:海棠葉經(jīng)醇提，醇提物分散于水中，萃取，揮干溶劑得到的萃取物即為海棠提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的海棠提取物的制備方法，其特征在于:萃取時(shí)分別用石油醚、こ酸こ酯或正丁醇進(jìn)行萃取，揮干溶剤，分別得到石油醚萃取物、こ酸こ酯萃取物和正丁醇萃取物。
3.如權(quán)利要求1所述的海棠提取物的制備方法，其特征在于:萃取時(shí)依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇進(jìn)行萃取，揮干溶剤，依次得到石油醚萃取物、こ酸こ酯萃取物和正丁醇萃取物。
4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的海棠提取物的制備方法，其特征在于:醇提的過(guò)程為:海棠葉經(jīng)干燥、粉碎，用60-80V%的こ醇浸提2-3次，每次1-3h，合并浸提液，過(guò)濾、濃縮得到醇提物。
5.如權(quán)利要求5所述的海棠提取物的制備方法，其特征在于:浸提溫度50-70°C。
6.如權(quán)利要求1所述的海棠提取物的制備方法，其特征在于:所述海棠葉為貼梗海棠葉、垂絲海棠葉或湖北海棠葉。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)制備方法制得的海棠提取物。
8.權(quán)利要求7所述 的海棠提取物在制備降血糖和治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求7所述的海棠提取物在制備葡萄糖苷酶抑制劑類(lèi)藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K36/732GK103446278SQ201310383033
【公開(kāi)日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月29日
【發(fā)明者】康文藝, 孔祥密, 彭濤, 尹震花 申請(qǐng)人:河南大學(xué)