一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物及其制備方法，其原料重量份配比為：白頭翁4-6份、莪術(shù)2-4份、生姜1-3份。加入藥材重量的12倍量70%的乙醇提取三次，每次2h；合并濾液，濃縮成1比1.3流浸膏，置65-75℃恒溫箱中烘干到成硬脆塊，低溫干燥保存即得。本發(fā)明可顯著抑制皮鱗癌A431細(xì)胞的增殖，同時(shí)其還有明顯的誘導(dǎo)A431細(xì)胞凋亡的作用，并能阻制細(xì)胞停留在G0/G1期，使S期的DNA合成受阻，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
【專利說明】一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物，同時(shí)還涉及該用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物的制備方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)系起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞的一種惡性腫瘤。其發(fā)病率在皮膚非黑色素細(xì)胞癌中僅次于基底細(xì)胞癌，約占全部非黑色素細(xì)胞癌的20%。皮膚鱗癌發(fā)病近年來呈逐年上升的趨勢(shì)，病情發(fā)展快，破壞性大，可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，晚期可發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移，皮膚鱗狀細(xì)胞癌已成為威脅人類生命的主要的皮膚腫瘤。
[0004]現(xiàn)有的治療皮膚鱗癌的方法主要有以下幾種:1、手術(shù)治療是最常用的術(shù)式，選擇手術(shù)時(shí)，除了考慮病灶部位、大小、深淺外，還要考慮美容修復(fù)，盡量降低對(duì)外貌的影響。但手術(shù)對(duì)專業(yè)技術(shù)要求較高，耗時(shí)長(zhǎng)，且費(fèi)用昂貴。2放射治療:放射治療是利用具有電離密度大和有一定射程的特點(diǎn)，高能射線照射腫瘤細(xì)胞，破壞其DNA雙鏈結(jié)構(gòu)使之凋亡和/或其生物膜結(jié)構(gòu)使之變性壞死，從而達(dá)到治療目的。放射治療主要是應(yīng)用X線、鐳和電子束等。對(duì)特殊部位如顏面耳鼻等處的皮膚癌，放射治療比手術(shù)優(yōu)越，不影響美容。但放射治療療程長(zhǎng)，且存在使皮膚暫時(shí)紅腫、疼痛，甚至形成潰瘍的潛在危險(xiǎn)；還可導(dǎo)致色素沉著，周圍組織如汗腺功能的受損，斑禿，疤痕惡化等。3藥物治療:目前有各咪喹莫特軟膏、5-氟尿嘧啶軟膏、注射干擾素、Bec-5軟膏、平陽霉素、順鉬等藥物進(jìn)行化療，但常見有皮膚紅腫、疼痛、脫屑、硬化結(jié)痂等副作用。4冷凍療法:冷凍最大的優(yōu)點(diǎn)是瘢痕菲薄，在保持病損部位的生理功能和美容上，具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，且簡(jiǎn)便、安全、見效快、并發(fā)癥少，花費(fèi)低。冷凍本身雖不會(huì)帶來疼痛，但解凍后的組織會(huì)產(chǎn)生疼痛、腫脹和滲出等不良反應(yīng)。5光動(dòng)力療法(PDT):光動(dòng)力療法(photo dynamic therapy, F1DT)是一種聯(lián)合應(yīng)用光敏劑及相應(yīng)光源,通過光動(dòng)力學(xué)反應(yīng)選擇性破壞病變組織的全新治療技術(shù)，光動(dòng)力治療腫瘤靶向性強(qiáng)能快速有效殺傷局部腫瘤細(xì)胞，而對(duì)正常細(xì)胞無影響，保護(hù)了容顏不受損傷、重要器官功能不受影響。激光治療可單獨(dú)應(yīng)用，也可與外科手術(shù)聯(lián)用，耗時(shí)少，但需由?？漆t(yī)生完成，故費(fèi)用高昂。
[0005]近年來，隨著生命科學(xué)的飛速發(fā)展，惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)等過程基本被闡明。以一些與腫瘤細(xì)胞分化增殖相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵酶作為藥物篩選的靶點(diǎn)，開發(fā)選擇性作用于特定靶點(diǎn)的高效、低毒、特異性強(qiáng)的新型抗癌藥物已成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研究開發(fā)的重要方向。近年來，大量研究表明，中藥在抗腫瘤血管形成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化以及提高免疫功能方面有著其獨(dú)有的優(yōu)勢(shì)。
[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的在于克服上述缺點(diǎn)而提供的一種可顯著抑制皮鱗癌A431細(xì)胞的增殖，同時(shí)其還有明顯的誘導(dǎo)A431細(xì)胞凋亡的作用，并能阻制細(xì)胞停留在G0/G1期，使S期的DNA合成受阻，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖的用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物。
[0008]本發(fā)明的另一目的在于提供該用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物的制備方法。
[0009]本發(fā)明的一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物，其原料重量份配比為:
白頭翁4-6份、莪術(shù)2-4份、生姜1-3份。
[0010]上述的一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物，其原料重量份配比優(yōu)選:
白頭翁5份、莪術(shù)3份、生姜2份。
[0011]本發(fā)明的一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物的制備方法，包括如下步驟:
(O加入藥材重量的12倍量70%的乙醇提取三次，每次2h ；
(2)合并濾液，濃縮成I比1.3流浸膏，置65-75°C恒溫箱中烘干到成硬脆塊，低溫干燥保存即得。
[0012]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有明顯的有益效果，從以上技術(shù)方案可知:中醫(yī)理論分析:皮鱗癌多因太陽照射，火熱久灼皮膚，導(dǎo)致熱結(jié)血滯，以白頭翁為君藥，清熱解毒；以莪術(shù)為臣藥，活血化瘀；以生姜為佐使，引藥入所，發(fā)揮作用。本方法白頭翁皂苷B4提取率不低于54.72，干膏率不低于28.78，綜合分值不低于41.75。
[0013]試驗(yàn)證明本發(fā)明藥物具有抑制人皮鱗癌A431細(xì)胞的增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用，并能阻滯細(xì)胞于G0/G1期，阻止S期DNA的合成和復(fù)制，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
[0014]本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】由以下實(shí)施例詳細(xì)給出。
[0015]
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，進(jìn)一步解釋和說明本發(fā)明的技術(shù)方案特點(diǎn)。
[0017]實(shí)施例1:
一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物的制備方法，包括如下步驟:
(1)白頭翁5份、莪術(shù)3份、生姜2份，加入藥材重量的12倍量70%的乙醇提取三次，每次2h ；
(2)合并濾液，濃縮成I比1.3流浸膏，置65-75°C恒溫箱中烘干到成硬脆塊，低溫干燥保存即得。
[0018]實(shí)施例2:
一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物的制備方法，包括如下步驟:
(1)白頭翁4份、莪術(shù)4份、生姜I份，加入藥材重量的12倍量70%的乙醇提取三次，每次2h ；
(2)合并濾液，濃縮成I比1.3流浸膏，置65-75°C恒溫箱中烘干到成硬脆塊，低溫干燥保存即得。
[0019]實(shí)施例3:
一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物的制備方法，包括如下步驟:
(I)白頭翁6份、莪術(shù)2份、生姜2份，加入藥材重量的12倍量70%的乙醇提取三次，每次2h ；
(2)合并濾液，濃縮成I比1.3流浸膏，置65-75°C恒溫箱中烘干到成硬脆塊，低溫干燥保存即得。
[0020]試驗(yàn)例:
以下通過實(shí)施例1制得藥物的藥效實(shí)驗(yàn)，來進(jìn)一步證明本發(fā)明的有益效果:
I材料
1.1藥物實(shí)施例1制得藥物，每ml相當(dāng)于生藥2g，以白頭翁皂苷B4含量及浸膏收率作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)(白頭翁皂苷B4提取率89.10，干膏率38.4，綜合分值63.75)，低溫保存?zhèn)溆谩?br> [0021]1.2試劑高糖的DMEM、胎牛血清購自Hyclone公司，MTT購自Amresco公司(201105)。
[0022]1.3細(xì)胞系A(chǔ)431細(xì)胞購自武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心。
[0023]2 方法
2.1細(xì)胞培養(yǎng)A431細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清、青霉素(100U/L)和鏈霉素(100U/L)的高糖DMEM培養(yǎng)基中，置于5%C02、37°C和飽和濕度的培養(yǎng)箱中。
[0024]2.2 MTT法測(cè)定實(shí)施例1制得藥物對(duì)A431細(xì)胞的增殖抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1.25X 105/ml，160l.! I/孔接種于96孔板。培養(yǎng)24h后，每孔加40 μ I不同濃度的藥物，藥物濃度設(shè)5個(gè)梯度，分別為原藥的1/400、1/200、1/100、1/50、1/25。同時(shí)設(shè)空白調(diào)零組(加200μ I無血清培養(yǎng)基)、陰性對(duì)照組(不加藥物)、陽性對(duì)照組(5-Ful0yg/ml)。因?qū)嵤├?制得藥物有顏色，加設(shè)不同濃度顏色對(duì)照組。分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，棄去上清，加200 μ I無血清培養(yǎng)基及20 μ IMTT (5mg/ml),置于二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h后，棄上清，加150μ 1DMS0，振蕩IOmin后，于酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)定吸光度值(0D值)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
[0025]細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(％)=1_ (實(shí)驗(yàn)組OD-顏色對(duì)照組OD/陰性對(duì)照組OD-空白調(diào)零組0D) X100%
2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)及分析收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以6.25 X 105/ml的細(xì)胞密度接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)48h后，待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底約50%-60%，隨機(jī)分組，各組給予相應(yīng)的干預(yù)因素，陰性對(duì)照組加入等量無血清培養(yǎng)基。培養(yǎng)48h后，收集用藥組和陰性對(duì)照組各組細(xì)胞上清，用胰酶消化細(xì)胞后，與上清一起離心，1000r/min, 3min。
[0026]調(diào)整細(xì)胞密度為1.0X106 /ml，小心棄去上清，加PBS清洗2遍，加入Iml冰乙醇，-20°C固定過夜。陰性對(duì)照管加入100 μ I細(xì)胞懸液，樣本管每管加2.5μ I Annexin V/?11^、2.5111?1，加入10(^1細(xì)胞懸液，混勻后室溫避光孵育30min。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
[0027]2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有計(jì)量資料用#±0表示，多組間比較采用單因素方差分析，所有檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，并以α =0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。Ρ〈0.05時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0028]3 結(jié)果
3.1 MTT法測(cè)定實(shí)施例1制得藥物對(duì)Α431細(xì)胞的增殖抑制作用
在濃度為 1/400，1/200，1/100，1/50，1/25 作用于 Α431 細(xì)胞 24h、48h、72h 后，與陰性對(duì)照組比較，各濃度組對(duì)A431細(xì)胞均有增殖抑制作用，且隨著藥物濃度的增高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其對(duì)A431細(xì)胞的增殖抑制作用愈明顯。見表1。
[0029]表1 實(shí)施例1制得藥物對(duì)A431細(xì)胞的增殖抑制作用(n=5) (x±s)
【權(quán)利要求】
1.一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物，其原料重量份配比為: 白頭翁4-6份、莪術(shù)2-4份、生姜1-3份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物，其原料重量份配比: 白頭翁5份、莪術(shù)3份、生姜2份。
3.如權(quán)利要求1或者所述的一種用于治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌的藥物的制備方法，包括如下步驟: Cl)加入藥材重量的12倍量70%的乙醇提取三次，每次2h ； (2)合并濾液，濃縮成I比1.3流浸膏，置65-75°C恒溫箱中烘干到成硬脆塊，低溫干燥保存即得。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103463602SQ201310423796
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月17日
【發(fā)明者】潘年松, 羅俊, 劉英波, 許俏 申請(qǐng)人:遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校