鉑類配合物、由該鉑類化合物制得的蛋白質(zhì)復(fù)合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類含有咪唑基團的四價鉑配合物及其與天青蛋白突變體結(jié)合形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物及其制備方法。具體涉及天青蛋白和一類四價鉑類配合物，所述的天青蛋白在其銅結(jié)合位點上有一個組氨酸被突變，所用的鉑配合物含有一個咪唑基團，二者通過配位結(jié)合構(gòu)建成為蛋白復(fù)合物。四價鉑類配合物與天青蛋白突變體的結(jié)合方式為四價鉑類配合物通過咪唑基團取代天青蛋白中被突變的組氨酸的咪唑基團與銅原子配位，將四價鉑類配合物配位結(jié)合到天青蛋白突變體的銅原子中心上。腫瘤細胞生長抑制實驗結(jié)果表明，含四價鉑配合物的天青蛋白具有較好的腫瘤細胞生長抑制作用，具有作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用前景。
【專利說明】鉑類配合物、由該鉑類化合物制得的蛋白質(zhì)復(fù)合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于蛋白藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及蛋白藥物及其制備方法，具體涉及天青蛋白和一類四價鉬類配合物，所述的天青蛋白在其銅結(jié)合位點上有一個組氨酸被突變，所用的鉬配合物含有一個咪唑基團，二者通過配位結(jié)合構(gòu)建成為蛋白復(fù)合物。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥歷來是不治之癥的代名詞。21世紀以來，隨著工業(yè)化的發(fā)展，人類的生存環(huán)境在不斷的惡化，而癌癥患者的數(shù)量也逐年遞增。2010年國際抗癌聯(lián)盟在第21屆世界抗癌大會上發(fā)布的數(shù)據(jù)表明，2008年，全世界有1270萬人患癌癥，而且死亡人數(shù)高達760萬，占當(dāng)年全世界死亡人數(shù)的13%。在我國，每年約新增220萬癌癥患者，而有130萬人死于癌癥。癌癥以代替心血管疾病成為我國奪取人民生命的第一殺手。
[0003]鉬類化合物是目前臨床治療癌癥的主要藥物，目前主要用于臨床治療的是二價鉬類配合物，如順鉬、卡鉬、奧沙利鉬等，但其對機體的毒副作用和耐藥性等問題仍有待解決。而四價鉬類化合物也因為對機體的毒副作用小、脂溶性增加被廣泛關(guān)注。順式-二氯-反式-二乙?；?氨-甲胺合鉬(IV) (JM216)，及 JP-A61-33192，JP-A-61-7283,JP-A-1-294684中提到的四價鉬都具有優(yōu)秀的水溶性和低腎毒性，然而其抗腫瘤效果并不是很令人滿意，所以需要尋找新的途徑。
[0004]細菌蛋白作為潛在的抗癌藥物如今也漸漸變熱，天青蛋白是其中的熱點之一。繼2002年，美國伊利諾斯大學(xué)Yamada等發(fā)現(xiàn)其對于腫瘤細胞生長的抑制以來，引起了科學(xué)界的廣泛關(guān)注。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了其對 于多種腫瘤細胞(MCF-7、J774、U20S cells等)具有抑制細胞生長的作用，而對于相應(yīng)的正常細胞沒有類似作用。而本專利描述的就是細菌蛋白天青蛋白的一個突變體與一類配基含有咪唑環(huán)的四價鉬類配合物通過配位結(jié)合形成的一類藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是通過細菌蛋白天青蛋白的一類突變體與一類配基含有咪唑環(huán)的四價鉬類配合物通過配位結(jié)合形成的一類復(fù)合物，使之具有二者共同的優(yōu)點，希望該復(fù)合物在增加了天青蛋白的腫瘤細胞殺傷能力同時，又減少四價鉬類配合物對正常細胞的毒副作用。
[0006]為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，首先，本發(fā)明提供了一種鉬類配合物，其結(jié)構(gòu)式如下:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.一種鉬類配合物，其結(jié)構(gòu)式如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬類配合物，其特征在于，所述取代胺為一乙基胺、二乙基胺、一正丙基胺、二正丙基胺、一異丙基胺、二異丙基胺、一正丁基胺、二正丁基胺、一異丁基胺、二異丁基胺、一正戊基胺、二正戊基胺、一異戊基胺、二異戊基胺或環(huán)己二胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬類配合物，其特征在于，所述鹵素為Cl、Br或I;所述羧酸根為乙酸根、丙酸根、正丁酸根、丁二酸根、苯甲酸根、苯乙酸根或?qū)谆郊姿岣?；所述取代羧酸根為一氯乙酸根、二氯乙酸根或三氯乙酸根?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬類配合物，其特征在于，所述含咪唑基團的取代基包括C(O)NHCH(COOH)CH2-1m 或(CH2)n-1m,其中 n=l_6，Im 為咪唑基團。
5.一種蛋白復(fù)合物，其特征在于，其用天青蛋白突變體作為藥物載體，將權(quán)利要求1~4任意一項所述含有咪唑環(huán)的鉬類配合物與該天青蛋白突變體配位結(jié)合得到；其中，所述天青蛋白突變體具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或其具有等同生物學(xué)活性的片段或其保守性變體或衍生物。`
6.一種天青蛋白突變體，其具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或其具有等同生物學(xué)活性的片段或其保守性變體或衍生物。
7.一種制備所述蛋白復(fù)合物的方法，其特征在于，這種方法采用天青蛋白突變體作為藥物載體，將含有咪唑環(huán)的鉬類配合物的配體與該天青蛋白突變體配位結(jié)合得到。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，其具體包括如下步驟: 第一步:將天青蛋白的cDNA連接到原核表達載體上,得到一個天青蛋白的表達質(zhì)粒； 第二步:運用定點突變技術(shù)將第一步中得到的表達質(zhì)粒中的編碼天青蛋白銅結(jié)合位點上的組氨酸的密碼子突變?yōu)楦拾彼峄虮彼岬拿艽a子，得到用于表達天青蛋白突變體的表達質(zhì)粒; 第三步:將上述表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入原核表達體系中，表達得到天青蛋白突變體，并進行純化分離； 第四步:制備所述含有咪唑基團的四價鉬配合物； 第五步:將銅離子存在的條件下，向天青蛋白突變體中加入含有咪唑基團的四價鉬配合物，混勻后即可得到蛋白復(fù)合物。
9.一種藥物組合物，其特征在于，其含有治療有效劑量的所述蛋白復(fù)合物，還含有其他藥學(xué)上可接受的輔料。
10.一種腫瘤治療劑，其特征在于，其含有治療有效劑量的所述蛋白復(fù)合物，還含有其他藥學(xué)上可接受的輔料；還任選的包含一種或多種有效劑量的其它已知抗腫瘤藥物。
【文檔編號】A61K31/555GK103554187SQ201310428915
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】王震, 劉揚中, 師紅東, 程芹芹, 張文星 申請人:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)