能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟：1）、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS,pH7.0）中加入100～150mg兒茶素和1.0～2.0g的Tween80于40～60℃攪拌，得兒茶素PBS溶液；2）、稱取100～200mg丙磺舒、0.1～0.5g卵磷脂和100～500mg膽固醇溶于10～20ml二氯甲烷中，使用注射器注入步驟1）所得的溫度為40～60℃的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌，得懸浮液；3）、將懸浮液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以除去二氯甲烷；再于350～400W功率的超聲波下超聲處理8～12min，得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體。
【專利說明】能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]兒茶素為茶葉中最主要的天然活性成分，具有多種藥理和保健活性。本發(fā)明涉及一種能夠提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]茶多酚(Tea Polyphenols, TP)是茶葉中多酚類及其衍生物的總稱，主要有兒茶素、黃酮類、花青素和酚酸等物質(zhì)組成，其中兒茶素類占茶多酚總量60%-90%。兒茶素具有很強(qiáng)的生物活性，大量研究均表明兒茶素具有抗氧化清除自由基、抗心血管疾病、抑菌消炎等多種保健和藥理作用。但是制約著兒茶素或茶多酚高效利用的關(guān)鍵技術(shù)問題一直沒有得到有效解決，其關(guān)鍵問題是兒茶素類化合物在機(jī)體內(nèi)的胃腸道生物膜轉(zhuǎn)運率較低，從而導(dǎo)致較低的生物利用度。因此，通過改變兒茶素類保健品的劑型來增強(qiáng)其生物利用度，必將為兒茶素的深入研究與開發(fā)奠定堅實的基礎(chǔ)。
[0003]痛風(fēng)是由單鈉尿酸鹽沉積所致的晶體相關(guān)性關(guān)節(jié)病，與嘌呤代謝紊亂和(或)尿酸排泄減少所致的高尿酸血癥直接相關(guān)，特指急性特征性關(guān)節(jié)炎和慢性痛風(fēng)石疾病，主要包括急性發(fā)作性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石形成、痛風(fēng)石性慢性關(guān)節(jié)炎、尿酸鹽腎病和尿酸性尿路結(jié)石，重者可出現(xiàn)關(guān)節(jié)殘疾和腎功能不全。痛風(fēng)常伴腹型肥胖、高脂血癥、高血壓、2型糖尿病及心血管病等 心腦血管性疾病。目前對高尿酸血癥的治療主要包括抑制尿酸生成的藥物，如別嘌醇類藥物；另一類為促進(jìn)尿酸排泄加快的藥物，如丙磺舒類藥物。
[0004]目前由于經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展、人們生活節(jié)奏的加快，加之生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變，導(dǎo)致的高尿酸血癥和各種心腦血管慢性病逐漸呈現(xiàn)升高的趨勢，往往相伴有高血壓、高血脂、高血糖等現(xiàn)代內(nèi)分泌、代謝紊亂性疾病。由于生活和工作壓力過大，往往導(dǎo)致內(nèi)分泌發(fā)生紊亂，從而導(dǎo)致機(jī)體機(jī)能和各種復(fù)合疾病進(jìn)一步發(fā)生和加劇，大部分人都處于亞健康狀態(tài)。加之各種應(yīng)酬增多、抽煙、酗酒、熬夜、長期處在電腦輻射狀態(tài)下，使得人們在不知不覺中體內(nèi)積聚了大量的自由基，同時可能會慢慢滋生各種疾病。因此，開發(fā)符合現(xiàn)代人生活方式并能夠快速清除體內(nèi)自由基的新型保健品，具有重要意義和市場前景。
[0005]由于高尿酸血癥和高血脂、高血壓等心腦血管類疾病往往伴隨發(fā)生，而且此類疾病一般需要長期連續(xù)服藥，同時由于丙磺舒具有抑制細(xì)胞上皮多藥耐藥外排蛋白的獨特功效。
[0006]目前與兒茶素或茶多酚相關(guān)的保健品層出不窮，傳統(tǒng)保健品劑型有片劑、膠囊，新型保健品劑型有微球、微囊、脂質(zhì)體、環(huán)糊精包合劑及固體分散劑等，其中部分劑型(如茶多酚片劑、茶多酚膠囊等)在臨床進(jìn)行了推廣和應(yīng)用，但臨床效果并不十分理想。這些制劑均以單一的兒茶素作為主要活性成分，然而關(guān)于兒茶素和其他藥品或保健品組成的復(fù)方制劑，鮮見報道。結(jié)合本實驗室前期研究積累和大量文獻(xiàn)報道可知，由于兒茶素類化合物極性較大、水溶性較高，生物膜滲透性較差，加之小腸上皮細(xì)胞膜中轉(zhuǎn)運蛋白(P-糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白等)對兒茶素發(fā)揮“外排”作用，從而使得該類化合物口服后難以通過小腸上皮細(xì)胞進(jìn)入全身血液循環(huán)，以致兒茶素類化合物在機(jī)體內(nèi)的生物利用度較低，大部分在腸道中被各種酶或微生物所代謝和降解，或隨糞便排泄到體外，從而使得該類化合物難以在體內(nèi)發(fā)揮有效作用。因此，如何提高兒茶素類化合物生物膜轉(zhuǎn)運速率，從而提高其生物利用度和增強(qiáng)兒茶素類化合物在作用靶部位的富集，是解決限制兒茶素大規(guī)模應(yīng)用這一重要“瓶頸”的關(guān)鍵共性問題。
[0007]目前在提高兒茶素生物膜轉(zhuǎn)運方面的研究主要集中在兒茶素衍生化物的制備和應(yīng)用上，近來年也有學(xué)者開展了兒茶素/茶多酚納米粒制劑或注射用納米乳劑的研究，但此類研究主要是針對如何促進(jìn)兒茶素跨膜轉(zhuǎn)運進(jìn)行的有益探索。然而關(guān)于兒茶素與其他活性成分組成的復(fù)方制劑，從而發(fā)揮協(xié)同功效的研究尚未見報道。目前也沒有丙磺舒和兒茶素的復(fù)方制劑被報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，采用該方法能制備出能夠提高兒茶素生物利用度的復(fù)方制劑。
[0009]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟:
[0010]1、能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征是包括以下步驟:
[0011]I)、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.0)中加入100~150mg兒茶素和1.0~2.0g的Tween80于40~60°C (最佳為50°C)攪拌，直至兒茶素和Tween80均溶解；得兒茶素PBS溶液；
[0012]2)、稱取100~200mg丙橫舒、0.1~0.5g卵憐脂和100~500mg膽固醇溶于10~20ml 二氯甲烷中，使用注射器以1.5~2.5ml/分鐘的速度(較佳為2ml/分鐘)注入步驟I)所得的溫度為40~60°C (最佳為50°C)的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌20~40min (較佳為30min),得懸浮液；
[0013]3)、將懸浮液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以除去二氯甲烷；再于350~400W(較佳為380W)功率的超聲波下超聲處理8~12min (較佳為lOmin)，得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體。
[0014]該兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體一般為10-100納米。
[0015]作為本發(fā)明的能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法的改進(jìn):卵磷脂為蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂。
[0016]作為本發(fā)明的能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法的進(jìn)一步改進(jìn):依次進(jìn)行以下步驟:
[0017]1)、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.0)中加入150mg兒茶素和1.6g的Tween80于50°C攪拌，直至兒茶素和Tween80均溶解；得兒茶素PBS溶液；
[0018]2)、稱取150mg丙磺舒、0.5g蛋黃卵磷脂和200mg膽固醇溶于IOml 二氯甲燒中，使用注射器以2ml/分鐘注入步驟I)所得的溫度為50°C的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌30min,得懸浮液；
[0019]3)、將懸浮液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以除去二氯甲烷；再于380W功率的超聲波下超聲處理lOmin，得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體。
[0020]在本發(fā)明中，0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.0)的制備方法為:準(zhǔn)確稱取磷酸氫二鈉0.05396g、磷酸二氫鉀0.08432g于燒杯，加水至20ml，從而配制0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS, ρΗ7.0)。此為公知技術(shù)。
[0021]本發(fā)明在發(fā)明過程中，使用了如下的檢測方法:
[0022]方法一、
[0023]采用向0.3mL空白血漿中加入兒茶素EGCG標(biāo)準(zhǔn)品的方法，配制濃度范圍為
0.l-200mg/L的兒茶素EGCG標(biāo)準(zhǔn)樣品，再向其中加入30 μ L20% (質(zhì)量百分濃度)的抗壞血酸，再加入30 μ LlOO μ g/mL香蘭素作為內(nèi)標(biāo)，混合后加入3mL乙酸乙酯進(jìn)行萃取，振蕩lmin, 6000r/min高速離心5min,分別得有機(jī)相(位于上層)和水相(位于下層);將水相(位于下層)用3mL乙酸乙酯重復(fù)萃取一次(萃取條件同上)，合并兩次萃取有機(jī)相，于45°C水浴中氮氣流(弱氮氣流)吹干，所得殘渣用0.lmL20% (體積％)的乙腈水溶液溶解，超聲振蕩后，18000r/min高速離心3min,取20 μ L上清液HPLC進(jìn)樣分析。
[0024]具體為:以日本島津高效液相色譜，兩元高壓泵，紫外檢測器，大連伊利特Hypersil BDS C18柱(5 μ m, 250mmX 4.6mm),流動相為乙腈:0.1% (質(zhì)量％)檸檬酸水溶液=10: 90 ;柱溫 300C，波長 280nm ;流速為 1.0mL.mirT1 ;進(jìn)樣量為 20 μ L。
[0025]備注說明:空白血漿即為沒有加入EGCG的純血漿。
[0026]根據(jù)HPLC檢測結(jié)果，以兒茶素EGCG峰面積與內(nèi)標(biāo)香蘭素峰面積之比(Y)為縱坐標(biāo)，以兒茶素EGCG濃度的質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出曲線方程和相關(guān)系數(shù)(r)。同時制備含兒茶素EGCG曲線范圍內(nèi)高、中、低濃度血漿樣品0.2，10.0,50.0mg/L作為質(zhì)控樣品(QC)，分別按照上述樣品處理方法處理后進(jìn)樣分析，每個濃度樣品重復(fù)5次，以樣品中EGCG峰面積與直接溶于流動相下所測峰面積之比，計算高、中、低3種濃度下方法回收率(即，樣品中EGCG峰面積與直接溶于流動相下所測峰面積之比=EGCG回收率)。比較以上樣品于日內(nèi)5次和日間5次測定的峰面積的變化，計算日內(nèi)精密度和日間精密度。
[0027]備注說明:“日內(nèi)精密度和日間精密度”主要用于評價上述方法一(即HPLC檢測方法)的精密度和準(zhǔn)確性，以此來判斷最終檢測結(jié)果的可靠性。
[0028]結(jié)果為:
[0029]按照上述方法所得處理血漿中EGCG在0.l_200mg/L濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.004x+0.0002 Cr > 0.999)，在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)高、中、低濃度兒茶素EGCG回收率均大于85%以上，日內(nèi)精密度和日間精密度均小于10%，見表1。
[0030]表1.血漿中兒茶素EGCC的回收率和精密度(n=5)
1..............................'mmi bhw...(%>1....mg/L__日內(nèi)日間
[0031]IOJ8d2i 土 Iltf I 6.729.47
I10.09LS6±7J5 [ 5J87J?
50J9436±627 6 64TM
[0032]根據(jù)上述結(jié)果，我們能得知:本發(fā)明所設(shè)置的上述檢測方法一能滿足本發(fā)明的兒茶素生物利用度的檢測的要求。
[0033]方法二、[0034]在本發(fā)明中，將一定體積(約2mL)的兒茶素納米脂質(zhì)體懸浮液(本發(fā)明步驟2)所得的懸浮液)用超濾離心管(10000MWC0，密理博中國有限公司)在4000r/min下離心IOmin,取濾膜(10000MWC0孔徑濾膜，即，為留在濾膜上的化合物最小分子量為10000的超濾膜)下層的濾液lmL，置于離心管中，按照方法一中相同色譜條件，取離心管中的超速離心(6000r/min離心5min)后得到的過濾液進(jìn)樣分析。計算脂質(zhì)體包封率，包封率(％) ={(兒茶素初始含量-濾液中兒茶素含量)/兒茶素初始含量} X 100%。
[0035]方法三、
[0036]80只SPF級ICR雄性小鼠購于浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，合格證號SCXK(浙)20080033,體重25±2g，實驗組40只小鼠隨機(jī)分為8組，每組5只，于實驗前適應(yīng)性養(yǎng)殖一周，口灌前12h禁食、不禁水，按照120mg兒茶素/kg體重給小鼠口灌配制的兒茶素復(fù)方制劑(即，本發(fā)明所得的兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體，上述120mg為兒茶素復(fù)方制劑中的兒茶素量)，同時設(shè)立兒茶素生理鹽水溶液組作為對照。
[0037]對照中:兒茶素生理鹽水溶液的濃度為15mg/mL，兒茶素的有效用量同上述兒茶素復(fù)方制劑中兒茶素的有效用量；對照組也為:40只小鼠隨機(jī)分為8組，每組5只，于實驗前適應(yīng)性養(yǎng)殖一周，口灌前12h禁食、不禁水。
[0038]將上述實驗組和對照組，分別按照上述劑量口灌兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體和兒茶素生理鹽水溶液，均于口灌后 5min、lOmin、15min、30min、60min、120min> 180min 和 240min眼球取血，每組采血5只小鼠，然后將所取血液于肝素化離心管中，6000r/min離心后，取
0.3mL血漿于IOmL離心管中，同時參照上述方法一處理后進(jìn)HPLC分析。將所測血漿中兒茶素EGCG峰面積代入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程(方法一所得)中，計算血漿中兒茶素EGCG濃度，繪制血藥濃度——時間曲線，比較兒茶素復(fù)方制劑(本發(fā)明)和市售片劑及單方制劑血藥濃度，以此來評價復(fù)方制劑中丙磺舒對」L茶素在機(jī)體內(nèi)生物利用度的影響。
[0039]即，本發(fā)明利用實驗動物整體小腸吸收模型，通過定量檢測本發(fā)明所得的兒茶素與丙磺舒復(fù)方制劑在體內(nèi)生物利用度，制備一種能夠發(fā)揮丙磺舒和兒茶素協(xié)同功效的新型制劑，在發(fā)揮治療高尿酸血癥同時治療心腦血管疾病中的應(yīng)用。
[0040]綜上所述，本發(fā)明采用了 RP-HPLC方法分析檢測了血漿等生物樣品中兒茶素EGCG的準(zhǔn)確、定量檢測手段，檢測限達(dá)到微克級，完全能夠滿足小鼠血樣中兒茶素EGCG的檢測。在兒茶素復(fù)方制劑配制中，采用丙磺舒與兒茶素制成復(fù)方脂質(zhì)體，丙磺舒在吸收和代謝消除過程中均能增強(qiáng)兒茶素的生物利用度，同時兩者又那能起到協(xié)同功效。
[0041]即，本發(fā)明在制備兒茶素和丙磺舒復(fù)方納米脂質(zhì)體基礎(chǔ)上，探索丙磺舒與兒茶素的協(xié)同作用，從而拓展兒茶素新型功效和應(yīng)用領(lǐng)域，充分發(fā)揮兒茶素的生物活性，服務(wù)于臨床。
[0042]本發(fā)明的兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體的實際用法和用量為:口服，2~IOg兒茶素/人.天。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0043]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施結(jié)果作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0044]圖1是兒茶素EGCG的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖；
[0045]圖2是空白血漿的色譜圖；[0046]圖3是服用實施例1所述的兒茶素復(fù)方制劑后小鼠血漿色譜圖；
[0047]圖4是實施例1所述的兒茶素復(fù)方制劑與市售片劑組EGCG濃度——時間曲線對比圖； [0048]圖5是實施例1所述的兒茶素復(fù)方制劑與兒茶素單方制劑EGCG濃度——時間曲線對比圖；
[0049]圖6是實施例1所述的兒茶素復(fù)方制劑與兒茶素+丙磺舒的混合物的EGCG濃度——時間曲線對比圖；
[0050]圖7是實施例2和實施例3所述的EGCG濃度——時間曲線對比圖；
[0051]其中峰I為兒茶素EGCG色譜峰；峰2為內(nèi)標(biāo)。
【具體實施方式】
[0052]實施例1、一種能提高兒茶素生物利用度的兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，依次進(jìn)行以下步驟:
[0053]I)、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.0)中加入150mg兒茶素和1.6g的Tween80于50°C攪拌，直至兒茶素和Tween80均溶解；得兒茶素PBS溶液；
[0054]2)、稱取150mg丙磺舒、0.5g蛋黃卵磷脂和200mg膽固醇溶于IOml 二氯甲燒中，使用注射器以一定速度(2ml/分鐘)注入步驟I)所得的溫度為50°C的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌30min，得懸浮液；
[0055]3)、將懸浮液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以除去二氯甲烷(45°C水浴加熱)；再于380W功率的超聲波(頻率為28KHZ)下超聲處理lOmin，得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體約24.15g。
[0056]實施例2、一種兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備，依次進(jìn)行以下步驟:
[0057]I)、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.0)中加入150mg兒茶素和1.6g的Tween80于50°C攪拌，直至兒茶素和Tween80均溶解；得兒茶素PBS溶液；
[0058]2)、稱取IOOmg丙磺舒、0.5g蛋黃卵磷脂和200mg膽固醇溶于IOml 二氯甲燒中，使用注射器以一定速度(2ml/分鐘)注入步驟I)所得的溫度為50°C的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌30min，得懸浮液；
[0059]3)、同實施例1 ;得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體約23.86g。
[0060]實施例3、一種兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備，依次進(jìn)行以下步驟:
[0061]I)、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.0)中加入150mg兒茶素和1.6g的Tween80于50°C攪拌，直至兒茶素和Tween80均溶解；得兒茶素PBS溶液；
[0062]2)、稱取200mg丙磺舒、0.4g蛋黃卵磷脂和400mg膽固醇溶于IOml 二氯甲燒中，使用注射器以一定速度(2ml/分鐘)注入步驟I)所得的溫度為50°C的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌30min，得懸浮液；
[0063]3)、同實施例1 ;得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體約24.21g。
[0064]實驗1、檢測脂質(zhì)體包封率:
[0065]將實施例1、實施例2、實施例3的步驟2)所得的懸浮液按照上述方法二進(jìn)行檢測，結(jié)果如下:
[0066]實施例1所得的懸浮液的包封率(％) =99.21% ；
[0067]實施例2所得的懸浮液的包封率(％) =98.84% ；[0068]實施例3所得的懸浮液的包封率(％) =82.94%。
[0069]實驗2、將實施例1、實施例2、實施例3所得的兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體按照上述方法三所述的方法進(jìn)行檢測；同時設(shè)立兒茶素生理鹽水溶液組、市售片劑組EGCG、兒茶素+丙磺舒的混合物(由150mg兒茶素和150mg丙磺舒組成)作為對照。
[0070]備注說明:
[0071]市售片劑組EGCG中:EGCG的有效量為3.5mg/g。
[0072]具體為:[0073]按照120mg兒茶素/kg體重給小鼠口灌配制的實施例1所得的兒茶素復(fù)方制劑，
[0074]按照120mg兒茶素/kg體重給小鼠口灌配制的實施例2所得的兒茶素復(fù)方制劑，
[0075]按照120mg兒茶素/kg體重給小鼠口灌配制的實施例3所得的兒茶素復(fù)方制劑，
[0076]按照120mg兒茶素/kg體重給小鼠口灌配制的市售片劑組(將市售片劑組溶于生理鹽水而得)，
[0077]按照120mg兒茶素/kg體重給小鼠口灌配制的兒茶素生理鹽水溶液(EGCG溶于生理鹽水而得)，
[0078]按照120mg兒茶素/kg體重給小鼠口灌配制的兒茶素+丙磺舒的混合物(將該混合物溶于生理鹽水而得)。
[0079]結(jié)果如圖4、圖5、圖6、圖7所述。
[0080]上述結(jié)果表明:本發(fā)明中所制備的復(fù)方兒茶素納米脂質(zhì)體在不同采血時間點血液中EGCG濃度均顯著高于市售片劑和兒茶素單方制劑，說明復(fù)方制劑生物利用度顯著高于市售片劑和單方制劑。
[0081]對比例1、將實施例1中的丙磺舒由150g改成200g ;其余同實施例1。
[0082]對比例2、將Tween80由1.6g改成3.2g，其余同實施例1。
[0083]對比例3、將蛋黃卵磷脂改成大豆卵磷脂；其余同實施例1。
[0084]對比例4、將步驟I)和步驟2)中的溫度由50°C改成80°C ;其余同實施例1。
[0085]對比例5、將步驟I)中的0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液改成0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液，其余同實施例1。
[0086]對比例6、將步驟3)中的超聲功率由380W改成480W，其余同實施例1。
[0087]對比實驗:將上述對比例I~6按照上述方法三所述的方法進(jìn)行檢測；即，控制上述每個組別中EGCG用量同實施例1中EGCG用量。
[0088]最終結(jié)果如下表2。
[0089]表2不同對比例中兒茶素EGCG血藥濃度——時間數(shù)據(jù)(mg/L)
[0090]
【權(quán)利要求】
1.能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征是包括以下步驟: 1)、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS, pH7.0)中加入100~150mg兒茶素和1.0~2.0g的Tween80于40~60°C攪拌,直至兒茶素和Tween80均溶解；得兒茶素PBS溶液； 2)、稱取100~200mg丙橫舒、0.1~0.5g卵憐脂和100~500mg膽固醇溶于10~20ml 二氯甲烷中，使用注射器以1.5~2.5ml/分鐘的速度注入步驟I)所得的溫度為40~600C的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌20~40min，得懸浮液； 3)、將懸浮液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以除去二氯甲烷；再于350~400W功率的超聲波下超聲處理8~12min，得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征是:所述卵磷脂為蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的能提高兒茶素生物利用度的復(fù)方納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征是依次進(jìn)行以下步驟: 1)、在20mL0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS，ρΗ7.0)中加入150mg兒茶素和1.6g的Tween80于50°C攪拌，直至兒茶素和Tween80均溶解；得兒茶素PBS溶液； 2)、稱取150mg丙磺舒、0.5g蛋黃卵磷脂和200mg膽固醇溶于IOml 二氯甲燒中，使用注射器以2ml/分鐘注入步驟I)所得的溫度為50°C的兒茶素PBS溶液中，恒溫攪拌30min，得懸浮液； 3)、將懸浮液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以除去二氯甲烷；再于380W功率的超聲波下超聲處理IOmin,得兒茶素復(fù)方納米脂質(zhì)體。
【文檔編號】A61K9/127GK103536589SQ201310462701
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】葛建, 韓寶瑜, 王夢馨 申請人:中國計量學(xué)院