一種用于治療過(guò)敏的中藥藥劑及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于治療過(guò)敏的中藥藥劑及制備方法，該制劑的有效部位為款冬花的超臨界萃取物或乙醇提取物經(jīng)硅膠柱層析分離得到的款冬酮與其衍生物，款冬酮及其衍生物的質(zhì)量配比為60～95:5～40；本發(fā)明的中藥藥劑對(duì)過(guò)敏性疾病的治療作用明顯，無(wú)嗜睡，口干、頭暈等中樞抑制副作用，具有西藥不具備的優(yōu)勢(shì)。
【專利說(shuō)明】一種用于治療過(guò)敏的中藥藥劑及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥、天然藥物領(lǐng)域，特別地，涉及一種治療過(guò)敏的中藥制劑及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]過(guò)敏反應(yīng)又稱變態(tài)反應(yīng)(allergy)，是機(jī)體受抗原性物質(zhì)刺激后引起的組織損傷或生理功能紊亂，屬于異常的、病理性的免疫反應(yīng)。過(guò)敏性鼻炎、氣喘、瘙癢等都是較為常見(jiàn)的過(guò)敏癥。隨著全球生態(tài)環(huán)境的不斷惡化，過(guò)敏反應(yīng)疾病的發(fā)生不斷增加。國(guó)內(nèi)流行病學(xué)調(diào)查顯示，目前我國(guó)變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)病率高達(dá)37.5%。變態(tài)反應(yīng)性疾病已經(jīng)嚴(yán)重影響到人類的生命及生活，成為全球重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為21世紀(jì)重點(diǎn)研究和防治的三大疾病之一。
[0003]根據(jù)Gell和Coombs的建議，將變態(tài)反應(yīng)分為1、I1、II1、IV四型。近年又提出第V型和第VI型。I型變態(tài)反應(yīng)發(fā)病機(jī)制比較清楚，也是臨床最常見(jiàn)的一種變態(tài)反應(yīng)，它是由致敏原刺激機(jī)體效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體再次接觸相同致敏原時(shí)，IgE抗體與相應(yīng)的致敏原交聯(lián)結(jié)合到肥大細(xì)胞(mast cell)和嗜堿性粒細(xì)胞表面上的高親和受體Fe e Rl上，使肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞活化。肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞在活化過(guò)程中脫顆粒并產(chǎn)生炎性介質(zhì)組胺、白三烯、免疫反應(yīng)性前列腺素、腫瘤壞死因子-a (TNF-a )、白細(xì)胞介素-6 (IL — 6)、過(guò)量的NO等細(xì)胞因子及趨化因子，引起毛細(xì)血管擴(kuò)張、血管壁通透性增強(qiáng)、平 滑肌收縮和腺體分泌增多等，產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)(變態(tài)反應(yīng))的疾病癥狀，如過(guò)敏性哮喘、枯草熱、蕁麻疹、過(guò)敏性鼻炎、濕疹、過(guò)敏性皮炎、結(jié)膜炎及胃腸道功能障礙等。過(guò)敏介質(zhì)釋放的數(shù)量和范圍不同，導(dǎo)致臨床癥狀輕重和表現(xiàn)不同。TNF-a，IL-6等細(xì)胞因子，在機(jī)體免疫應(yīng)答中的表達(dá)還受到細(xì)胞核因子-kB (NF-kB)的調(diào)節(jié)。因此，過(guò)敏反應(yīng)與IgE、組胺、TNF-a、IL-6、NO及NF-k B等有密切聯(lián)系。此外，透明質(zhì)酸酶(hyaluronidase, HAase)也參與過(guò)敏反應(yīng),透明質(zhì)酸酶是一種能夠降低體內(nèi)透明質(zhì)酸的活性，從而提高組織中液體滲透能力的酶。透明質(zhì)酸酶的抑制試驗(yàn)用于抗過(guò)敏試驗(yàn)研究，與整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)具較好的相關(guān)性。
[0004]西醫(yī)治療過(guò)敏性疾病多采用抗組胺藥、激素類及受體拮抗劑等。藥物起效快、對(duì)癥治療效果明顯。如抗組胺藥物，在結(jié)構(gòu)上與組胺相似，可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)組胺受體而阻斷其對(duì)外周組織的效應(yīng)。但治療上仍存在很大的缺陷，往往作用時(shí)間短，停藥后易復(fù)發(fā)，特別是可引起中樞抑制、抗膽堿作用甚至心臟毒性作用等副作用，如常用的撲爾敏、苯海拉明、非那根、賽庚啶等，用后多有嗜睡，口干、頭暈等副作用，病人不樂(lè)于接受，高空、高速作業(yè)者在工作期間不能使用，在長(zhǎng)期使用時(shí)又易產(chǎn)生耐藥性。因此，研究和尋找高效低毒、結(jié)構(gòu)新型的抗過(guò)敏藥物仍是一項(xiàng)重要而迫切的全球性課題。中藥抗過(guò)敏研究已經(jīng)有一定的歷史，中藥在抗過(guò)敏反應(yīng)中的作用往往是多環(huán)節(jié)的，如抑制IgE的產(chǎn)生、保護(hù)和穩(wěn)定靶細(xì)胞膜(減少和防止其脫顆粒、釋放過(guò)敏介質(zhì))、對(duì)抗過(guò)敏介質(zhì)、中和變應(yīng)原等，并且中藥抗過(guò)敏沒(méi)有現(xiàn)有西藥的中樞抑制等副作用，具有西藥不具備的優(yōu)勢(shì)。從中藥中研制更好的抗過(guò)敏藥物具有很大意義。
[0005]款冬花系菊科植物款冬(Tussilago farfara L.)的干燥花蕾，又名冬花、九九花等。歷版《中國(guó)藥典》均有收載，款冬花性溫，味辛、微苦。歸肺經(jīng)，具有潤(rùn)肺下氣、止咳化痰等功能。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品。現(xiàn)代臨床上多用于治療慢性支氣管炎、哮喘等。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從款冬花中提取的化學(xué)成分主要包括黃酮類、三萜類、倍半萜、生物堿類等。采用藥典附錄XD揮發(fā)油測(cè)定方法提取款冬花揮發(fā)油，用乙醚萃取后，倍半萜占揮發(fā)油40.5%。石油醚部位以倍半萜及三萜類為主，乙酸乙酯部位以黃酮類及三萜類為主。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于治療過(guò)敏性疾病的中藥藥劑及制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:一種用于治療過(guò)敏的中藥藥劑，它的有效部位為款冬花的超臨界萃取物或乙醇提取物經(jīng)硅膠柱層析分離得到的款冬酮及其衍生物，款冬酮與其衍生物的質(zhì)量配比為60~95:5~40。[0008]上述中藥藥劑的制備方法，包括以下幾個(gè)步驟:
[0009]( I)稱取款冬花干燥花蕾，粉碎成粗粉，過(guò)20~40目篩。
[0010](2)通過(guò)溶劑法或超臨界萃取法得到款冬花提取物；所述溶劑法具體為:將款冬花粗粉置于提取器中，加入5倍質(zhì)量的體積濃度為80%的乙醇，回流提取2次，每次2h，趁熱過(guò)濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏；浸膏加入3-5倍質(zhì)量的水分散后，用乙酸乙酯萃取至無(wú)色，合并萃取液，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯提取物(Kdr)，備用。所述臨界萃取法具體為:將款冬花粗粉置于超臨界萃取釜中萃取，工藝條件為:萃取釜溫度45°C，分離釜溫度30。。，C02流速45kg ? hr-1，壓力25MPa，萃取時(shí)間2hr,得超臨界提取物(Kdj)，備用。
[0011](4)取上述溶劑法或超臨界萃取法得到的款冬花提取物，溶于等質(zhì)量的甲醇中，加入等質(zhì)量的硅膠攪拌，揮去甲醇，上柱，進(jìn)行硅膠柱層析分離，依次用石油醚和乙酸乙酯按體積比70: 1,60: 1、35:1和15:1組成的混合溶液和甲醇洗脫，TLC檢測(cè)，合并相同斑點(diǎn)的流分，回收溶劑，干燥，得款冬花抗過(guò)敏有效部位KdrI，Kdr2、Kdj2，備用。
[0012]款冬花有效部位抗過(guò)敏作用的研究:取上述款冬花有效部位，采用透明質(zhì)酸酶抑制實(shí)驗(yàn)、肥大細(xì)胞膜脫顆粒實(shí)驗(yàn)、豚鼠離體回腸實(shí)驗(yàn)、小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)及小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，研究其抗過(guò)敏的藥理作用。
[0013]①透明質(zhì)酸酶抑制試驗(yàn)-Elson-Morgan法
[0014]透明質(zhì)酸酶是一種能分解粘多糖的溶酶體，能夠水解透明質(zhì)酸生成P -N-乙酰葡糖胺，該物質(zhì)在堿性條件下與乙酰丙酮縮合生成生色原2-甲基-3-二乙酰吡咯衍生物。生色原與Ehrich試劑在濃鹽酸乙醇中顯色。透明質(zhì)酸酶與炎癥、過(guò)敏有強(qiáng)相關(guān)性，是I型過(guò)敏反應(yīng)的參與者。
[0015]實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、KdrU Kdr2和Kdj2組，共5組，每組平行做3管。將 0.1mL 的 2.5mol/L CaC12 加入 0.5mL 透明質(zhì)酸酶(500U/mL)中，37°C保溫 20min ;加入樣品液0.5mL, 37°C保溫20min ;加入透明質(zhì)酸鈉(0.4mg/mL) 2mL, 37°C保溫40min,加入乙酰丙酮溶液(乙酰丙酮1.5mL，溶于50mLl.25mol/L碳酸鈉溶液中，用時(shí)配)lmL，90°C保溫lh，用水冷卻，慢慢加入96%的乙醇10mL，然后加入Ehrlich試劑(1.6g DMAB溶于30mL濃鹽酸和301^96%乙醇中)1.0mL,混合均勻，室溫放置Ih后于530nm處測(cè)定吸光值。
[0016]透明質(zhì)酸酶抑制率(％)=[(A-B)- (C-D)]/ (A-B) X100%o
[0017]A:對(duì)照溶液(去離子水代替款冬樣品)的OD值；B:對(duì)照空白溶液(酶鈍化、去離子水代替款冬樣品)的OD值；C:試樣溶液的OD值；D:試樣空白(酶鈍化、各種試劑)的OD值。
[0018]與空白對(duì)照組比較，Kdrl、Kdr2、Kdj2組和撲爾敏陽(yáng)性藥對(duì)照組均能顯著抑制透明質(zhì)酸酶的活性。與撲爾敏陽(yáng)性藥組比較，Kdrl、Kdr2、Kdj2組無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0019]表1:款冬花各有效部位對(duì)透明質(zhì)酸酶抑制的影響(n=3，
【權(quán)利要求】
1.一種用于治療過(guò)敏的中藥藥劑，其特征在于，它的有效部位為款冬花的超臨界萃取物或乙醇提取物經(jīng)硅膠柱層析分離得到的款冬酮及其衍生物，款冬酮與其衍生物的質(zhì)量配比約為60~95:5~40。
2.—種上述中藥藥劑的制備方法，其特征在于，包括以下幾個(gè)步驟: (1)稱取款冬花干燥花蕾，粉碎成粗粉，過(guò)20~40目篩； (2)通過(guò)溶劑法或超臨界萃取法得到款冬花提取物；所述溶劑法具體為:將款冬花粗粉置于提取器中，加入5倍質(zhì)量的體積濃度為80%的乙醇，回流提取2次，每次2 h，趁熱過(guò)濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏；浸膏加入3-5倍質(zhì)量的水分散后，用乙酸乙酯萃取至無(wú)色，合并萃取液，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯提取物，備用；所述臨界萃取法具體為:將款冬花粗粉置于超臨界萃取釜中萃取，工藝條件為:萃取釜溫度45°C，分離釜溫度30°C，C02流速45 kg ? hr-1，壓力25MPa，萃取時(shí)間2hr，得超臨界提取物，備用； (4)取上述溶劑法或超臨界萃取法得到的款冬花提取物，溶于等質(zhì)量的甲醇中，加入等質(zhì)量的硅膠攪拌，揮去甲醇，上柱，進(jìn)行硅膠柱層析分離，依次用石油醚和乙酸乙酯按體積比70: 1,60: 1、35:1和15:1組成的系列混合溶液和甲醇洗脫，TLC檢測(cè)，合并相同斑點(diǎn)的流分，回收溶劑，干燥，得款冬花抗過(guò)敏有效部位Kdr LKdr 2、Kdj 2，備用。
【文檔編號(hào)】A61K36/28GK103585218SQ201310462787
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】楊蘇蓓, 張如松, 王溶溶, 毛培江, 楊毅, 陳雪園 申請(qǐng)人:浙江省中藥研究所有限公司