一種抗豬圓環(huán)病毒病的組合物、混合凍干粉及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗豬圓環(huán)病毒病的組合物、混合凍干粉及制備方法，該組合物包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體94?97份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1?2份；混合凍干粉還包括防腐劑0.01?0.02份、滅活劑0.2?0.3份、砸0.05?0.1份、維生素C0.5?1份、聚乙烯吡咯烷酮1?2份、甘氨酸0.5?1份。本發(fā)明的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，將抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體與抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子進(jìn)行復(fù)配，并輔以多種輔料，各組分相互配合，協(xié)調(diào)作用，可以顯著提高其防治豬圓環(huán)病毒病的效果，具有針對性強(qiáng)、常溫下保存時間長、抗體效價高、生物活性良好的優(yōu)點，是一種具有廣泛應(yīng)用前景的強(qiáng)效生物制劑。
【專利說明】一種抗豬圓環(huán)病毒病的組合物、混合凍干粉及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種抗豬圓環(huán)病毒病的組合物，同時還涉及 一種抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉及該混合凍干粉的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 生豬養(yǎng)殖在我國養(yǎng)殖業(yè)中占有較重的份額，僅河南省2009年產(chǎn)出的豬肉就達(dá) 410. 32萬噸，由此可知，我國每年對于豬肉的需求量非常大。但是，隨著豬肉需求的逐年遞 增及養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，生豬養(yǎng)殖過程中也出現(xiàn)越來越多的問題，其中豬圓環(huán)病毒病是一種 急性傳染性疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
[0003] 豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV)是迄今發(fā)現(xiàn)的一種最小的動物病毒?，F(xiàn) 已知PCV有兩個血清型，即PCV1和PCV2, PCV2為致病性的病毒，它是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭 綜合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)的主要病原。豬對 PCV2 具有較強(qiáng)的易感性，感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，經(jīng)口腔、呼吸道途徑感染不 同年齡的豬。懷孕母豬感染PCV2后，可經(jīng)胎盤垂直傳播感染仔豬。
[0004] 目前防治豬圓環(huán)病毒病的方法較多，主要是使用西藥、接種免疫、中草藥等進(jìn)行防 治。其中，西藥使用的泛濫給豬肉類食品帶來了極大的安全隱患，藥物殘留已經(jīng)成為影響豬 肉產(chǎn)品安全的主要因素之一。接種免疫早期效果較好，但是需要多次接種，操作麻煩，成本 較高，容易造成應(yīng)激反應(yīng)；而且疫苗對于保藏條件要求較高，需要在2-8°C條件下冷藏，室 溫條件下一段時間則失去效果。中草藥飼料添加劑也是目前的研究方向之一，但是由于中 草藥的種類較多，相同的中藥材對不同的禽畜疾病的作用差異很大，且中草藥對疾病的免 疫效果極其有限，因此應(yīng)用也具有一定的局限性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種抗豬圓環(huán)病毒病的組合物，解決現(xiàn)有技術(shù)防治豬圓環(huán)病 毒病存在的操作不便、藥劑不易保存、效果較差的問題。
[0006] 本發(fā)明的第二個目的是提供一種抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉。
[0007] 本發(fā)明的第三個目的是提供一種抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法。
[0008] 為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種抗豬圓環(huán)病毒病的組合物， 包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體94?97份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子 1?2份。
[0009] -種抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒病 卵黃抗體94?97份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1?2份、防腐劑0. 01?0. 02份、滅活劑 0. 2?0. 3份、硒0.05?0. 1份、維生素 C0. 5?1份、聚乙烯吡咯烷酮1?2份、甘氨酸 0· 5?1份。
[0010] 所述滅活劑為甲醛。
[0011] 所述防腐劑為硫柳汞。
[0012] 一種上述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0013] a.采用豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株制備疫苗，免疫健康雞群獲得高免蛋，將高免蛋經(jīng)過消 毒、酸化處理、離心處理得到含有抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液；
[0014] b.將含有抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液與抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子、防腐 齊IJ、滅活劑、硒、維生素 C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再凍干即得。
[0015] 優(yōu)選的，抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0016] 1)取豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對健康產(chǎn)蛋 雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256 時，收集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0017] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢?，?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入酸化水溶液，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0018] 3)在步驟2)所得上清液中加入鈉鹽使鈉鹽體積占總體積的0. 8%，離心分離，得含 有抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液；
[0019] 4)取步驟3)所得的含有94?97重量份的抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液，力口 入1?2重量份抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子，過濾，留濾液備用；
[0020] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入防腐劑0. 01?0. 02重量份、 滅活劑〇. 2?0. 3重量份、硒0. 05?0. 1重量份、維生素 C0. 5?1重量份、聚乙烯批咯燒 酮1?2重量份、甘氨酸0. 5?1重量份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干， 即得。
[0021] 步驟2)中所述酸化水溶液的pH為4. 9?5. 2 ;酸化水溶液的加入量為卵黃抗體 溶液體積的8倍。所述酸化水溶液可為鹽酸化水溶液。
[0022] 步驟3)中所述鈉鹽為NaCl與NaS04的質(zhì)量比為4:1的混合物。
[0023] 步驟3)中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為15000rpm，時間為20min。
[0024] 步驟4)中所述過濾是先用0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截留分子量大于200KD的大 分子，再將濾液用〇. 22 μ m的濾膜過濾。
[0025] 卵黃抗體是一種免疫球蛋白，由于機(jī)體受到外界抗原的刺激而產(chǎn)生的一種應(yīng)激產(chǎn) 物，可以和相應(yīng)抗原結(jié)合，消除病因。本發(fā)明將豬圓環(huán)病毒病的疫苗免疫接種健康的雞群， 可以使獲得的雞蛋蛋黃中產(chǎn)生有效的抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體，同時減少了毒株返祖的可 能性。
[0026] 轉(zhuǎn)移因子攜帶有致敏淋巴細(xì)胞的特異性免疫信息，能夠?qū)⑻禺愋悦庖咝畔⒊蔬f給 受體淋巴細(xì)胞，使受體無活性的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樘禺愋灾旅袅馨图?xì)胞，從而激發(fā)受體細(xì)胞 介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。
[0027] 本發(fā)明的抗豬圓環(huán)病毒病的組合物中，抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體是一種免疫球蛋 白，對豬圓環(huán)病毒病有很好的防治效果；抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子本身是一種特異抗病毒 因子，將兩者結(jié)合使用，可極大地提高預(yù)防和治療豬圓環(huán)病毒病的效果。
[0028] 本發(fā)明的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，將抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體與抗豬圓環(huán) 病毒病轉(zhuǎn)移因子進(jìn)行復(fù)配，并輔以防腐劑、滅活劑、硒、維生素 C、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酸 制備混合凍干粉，各組分相互配合，協(xié)調(diào)作用，可以顯著提高其防治豬圓環(huán)病毒病的效果， 具有針對性強(qiáng)、常溫下保存時間長、抗體效價高、生物活性良好的優(yōu)點，是一種具有廣泛應(yīng) 用前景的強(qiáng)效生物制劑；經(jīng)動物試驗證明，本發(fā)明的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，對豬圓 環(huán)病毒病的防治效果要明顯優(yōu)于抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子中任 意一種單獨(dú)使用的情況。
[0029] 本發(fā)明的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，使用時，可作為飼料添加劑按質(zhì)量分?jǐn)?shù) 2%?3%混入飼料中；發(fā)病時采用肌注方式給藥，每100ml注射液中含有混合凍干粉2g，注 射液的使用量為每次〇. 1?〇. 2ml/kg體重；首次用藥加倍，治療效果更好。
[0030] 本發(fā)明的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，將抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗 體、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子和多種輔料進(jìn)行復(fù)配，并通過調(diào)整輔料的成分、控制其用量， 進(jìn)一步延長了卵黃抗體的保存時間，保證了卵黃抗體在常溫下較長時間內(nèi)的活性，降低了 凍干粉制劑的保存和運(yùn)輸成本，使用方便，具有廣泛的應(yīng)用前景；制備方法工藝簡單，操作 方便，極大的降低了生產(chǎn)成本，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實施方式】
[0031] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0032] 本發(fā)明的【具體實施方式】中，所用豬圓環(huán)病毒為國家標(biāo)準(zhǔn)毒株。
[0033] 本發(fā)明的【具體實施方式】中，所用抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子，是由以下方法制備 的：
[0034] 1)用豬圓環(huán)病毒抗原對豬脾臟進(jìn)行免疫后，去其表面筋、脂肪，再用滅菌后的生理 鹽水沖洗；
[0035] 2)將沖洗后的豬脾臟破碎后，加入2倍體積的預(yù)冷后的PBS緩沖液，用組織勻漿儀 將其勻質(zhì)，得勻漿液；
[0036] 3)將勻漿液用超聲破碎儀處理5?lOmin后，調(diào)節(jié)pH為5. 5,在5000?6000rpm 轉(zhuǎn)速下離心30min，收集上清液；
[0037] 4)將步驟3)所得上清液用微濾膜過濾，截留分子量為7000道爾頓以上的物質(zhì)，將 所得濾液用除菌濾膜過濾，即得抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子原液，在4°C條件下保存?zhèn)溆谩?br> [0038] 實施例1
[0039] 本實施例的抗豬圓環(huán)病毒病的組合物，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒 病卵黃抗體94份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子2份。
[0040] 本實施例的使用上述組合物制成的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，包括以下重量 份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體94份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子2份、硫柳汞0. 02 份、甲醛0. 2份、硒0. 05份、維生素 C1份、聚乙烯吡咯烷酮2份、甘氨酸0. 5份。
[0041] 本實施例的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0042] 1)取豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株（2型）進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對 健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康雞群接種滅活疫苗1. 5ml，第二次、 第三次免疫接種加量1倍，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256時，收 集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0043] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢?，?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0044] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗豬 圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液；
[0045] 4)取步驟3)所得的含有94重量份的抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液，加入2 重量份抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子，用〇. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截流分子量大于200KD的大 分子物質(zhì)，再將濾液經(jīng)〇. 22 μ m濾膜過濾，留濾液備用；
[0046] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 02重量份、甲醛0. 2 重量份、硒〇. 05重量份、維生素 C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮2重量份、甘氨酸0. 5重量份進(jìn) 行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0047] 實施例2
[0048] 本實施例的抗豬圓環(huán)病毒病的組合物，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒 病卵黃抗體95份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1. 5份。
[0049] 本實施例的使用上述組合物制成的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，包括以下重 量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體95份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1. 5份、硫柳汞 0. 01份、甲醛0. 3份、硒0. 1份、維生素 C0. 5份、聚乙烯吡咯烷酮1. 5份、甘氨酸1份。
[0050] 本實施例的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0051] 1)取豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株（2型）進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對 健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康雞群接種滅活疫苗1. 5ml，第二次、 第三次免疫接種加量1倍，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256時，收 集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0052] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢?，?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0053] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗豬 圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液；
[0054] 4)取步驟3)所得的含有95重量份的抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液，加入1. 5 重量份抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子，用〇. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截流分子量大于200KD的大 分子物質(zhì)，再將濾液經(jīng)〇. 22 μ m濾膜過濾，留濾液備用；
[0055] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 01重量份、甲醛0. 3 重量份、硒〇. 1重量份、維生素 C0. 5重量份、聚乙烯吡咯烷酮1. 5重量份、甘氨酸1重量份 進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0056] 實施例3
[0057] 本實施例的抗豬圓環(huán)病毒病的組合物，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒 病卵黃抗體97份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1份。
[0058] 本實施例的使用上述組合物制成的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，包括以下重量 份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體97份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1份、硫柳汞0. 01 份、甲醛0. 25份、硒0. 08份、維生素 C1份、聚乙烯吡咯烷酮1份、甘氨酸0. 5份。
[0059] 本實施例的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下列步驟：
[0060] 1)取豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株（2型）進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對 健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康雞群接種滅活疫苗1. 5ml，第二次、 第三次免疫接種加量1倍，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256時，收 集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0061] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢瑁?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0062] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗豬 圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液；
[0063] 4)取步驟3)所得的含有97重量份的抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液，加入1 重量份抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子，用〇. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截流分子量大于200KD的大 分子物質(zhì)，再將濾液經(jīng)〇. 22 μ m濾膜過濾，留濾液備用；
[0064] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 01重量份、甲醛0. 25 重量份、硒〇. 08重量份、維生素 C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1重量份、甘氨酸0. 5重量份進(jìn) 行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0065] 實驗例1
[0066] 本實驗例對實施例1?3所得混合凍干粉進(jìn)行性能檢測，結(jié)果如表1、2所示。 [0067] 常溫效價檢測實驗方法：將實施例1?3所得混合凍干粉制劑保存在37°C培養(yǎng)箱 中，保存24個月，分別在1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后，用瓊脂 擴(kuò)散(AGP)法，測定每個時間點所取樣品的卵黃抗體效價變化。
[0068] 表1實施例1?3所得混合凍干粉常溫效價檢測實驗結(jié)果(項目：PRRS)
[0069]

【權(quán)利要求】
1. 一種抗豬圓環(huán)病毒病的組合物，其特征在于：包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬圓環(huán) 病毒病卵黃抗體94?97份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1?2份。
2. -種抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，其特征在于：包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬 圓環(huán)病毒病卵黃抗體94?97份、抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子1?2份、防腐劑0. 01?0. 02 份、滅活劑〇. 2?0. 3份、硒0. 05?0. 1份、維生素 C0. 5?1份、聚乙烯吡咯烷酮1?2份、 甘氨酸〇. 5?1份。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，其特征在于：所述滅活劑為 甲醛。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，其特征在于：所述防腐劑為 硫柳萊。
5. -種如權(quán)利要求2所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于： 包括下列步驟： a. 采用豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株制備疫苗，免疫健康雞群獲得高免蛋，將高免蛋經(jīng)過消毒、酸 化處理、離心處理得到含有抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液； b. 將含有抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液與抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子、防腐劑、滅 活劑、硒、維生素 C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再凍干即得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：包 括下列步驟： 1) 取豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成疫苗，每間隔7天對健康產(chǎn)蛋雞群 進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達(dá)到1 :256時，收 集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用； 2) 將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢?，得到?黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入酸化水溶液，混勻、靜置沉淀，取上清液備用； 3) 在步驟2)所得上清液中加入鈉鹽使鈉鹽體積占總體積的0. 8%，離心分離，得含有抗 豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液； 4) 取步驟3)所得的含有94?97重量份的抗豬圓環(huán)病毒病卵黃抗體的上清液，加入 1?2重量份抗豬圓環(huán)病毒病轉(zhuǎn)移因子，過濾，留濾液備用； 5) 將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入防腐劑0. 01?0. 02重量份、滅活 劑0. 2?0. 3重量份、硒0. 05?0. 1重量份、維生素 C0. 5?1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1? 2重量份、甘氨酸0. 5?1重量份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟2)中所述酸化水溶液的pH為4. 9?5. 2 ;酸化水溶液的加入量為卵黃抗體溶液體積的8 倍。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟3)中所述鈉鹽為NaCl與NaS04的質(zhì)量比為4:1的混合物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟3)中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為15000rpm，時間為20min。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，其特征在于：步 驟4)中所述過濾是先用0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過濾，截留分子量大于200KD的大分子，再將 濾液用0. 22 μ m的濾膜過濾。
【文檔編號】A61K9/19GK104208679SQ201310463387
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】徐進(jìn), 郭俊清, 陳建暉 申請人:鄭州后羿制藥有限公司