一種可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架，組成材料包括絲素蛋白、角蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，其中，所述絲素蛋白和角蛋白的質(zhì)量比為（3-9）:（2-6），所述明膠和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為（1-5）:15，所述自產(chǎn)氧物和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為（0.2-3）:15。本發(fā)明提供的可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架復(fù)合了角蛋白、絲素蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，物理強(qiáng)度要優(yōu)于利用單純絲素蛋白溶液和單純蛋白組合溶液所構(gòu)建的膜結(jié)構(gòu)材料，同時(shí)明膠成份對自產(chǎn)氧物構(gòu)成一定的包裹作用，使得本發(fā)明提供的蛋白復(fù)合支架能夠恒速且高水平的釋放氧氣，更適合于實(shí)際手術(shù)操作的需要，最終提高尿道修復(fù)重建的成功率。
【專利說明】一種可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種蛋白復(fù)合支架，尤其涉及一種可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]由于各種原因所導(dǎo)致的復(fù)雜性尿道疾病，歷來是泌尿外科臨床治療中的一個(gè)難題。雖然多種自體組織作為替代材料已經(jīng)在尿道修復(fù)重建中獲得理想的效果，但相比而言組織工程技術(shù)沒有前者“犧牲正常組織為代價(jià)，以手術(shù)創(chuàng)傷修復(fù)組織缺損”的固有缺陷，因而更可作為未來尿道重建發(fā)展的主要方向?，F(xiàn)有國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道中對于各種組織工程材料或者材料-種子細(xì)胞復(fù)合體在尿道修復(fù)重建中的研究已逐漸從實(shí)驗(yàn)室向臨床拓展。其中不乏有小范圍實(shí)際尿道疾病臨床治療的案例，并且獲得另人滿意的初步療效。
[0003]但是相對于種子細(xì)胞研究的日趨完善，在尿道組織工程修復(fù)重建中選擇何種支架材料最為理想?yún)s始終未能達(dá)成共識。目前在尿道的組織工程研究中主要采用兩大類支架:天然脫細(xì)胞膠原基質(zhì)(SIS、BAMG、脫細(xì)胞真皮基質(zhì)等)和人工合成材料(聚乙醇酸、聚乳酸/聚乙醇酸共聚物)。前者雖然制備方便，適合商品化的生產(chǎn)，但由于多取材于異種乃至異體生物組織，因而在生物安全性方面一直受到部分學(xué)者質(zhì)疑，很難被所有患者所接受。同時(shí)其在空間結(jié)構(gòu)，生物力學(xué)特性以及促進(jìn)微血管和細(xì)胞滲透方面也同時(shí)存在著固有缺陷。后者雖然將生物安全性方面的風(fēng)險(xiǎn)降到了最低，但支架在降解過程中的代謝產(chǎn)物對周圍的細(xì)胞以及微環(huán)境會(huì)造成不可避免的負(fù)面影響，另外人工合成類支架因缺乏相應(yīng)的生長因子，在促進(jìn)種子細(xì)胞黏附，增殖方面也有著先天的不足。
[0004]人發(fā)提取角蛋白是一類廣泛存在于人毛發(fā)以及指甲內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)。因其含有豐富的半胱氨酸殘基，其彼此之間通過氧化作用形成大量分子內(nèi)和分子間的二硫鍵，從而使得制備的生物支架材料擁有了相應(yīng)的生物彈性。在生物相容性方面，現(xiàn)有的研究結(jié)果顯示不同種子細(xì)胞均能在該類蛋白支架上很好的生長。同時(shí)由于還原型的角蛋白不含極性，在水中的溶解度較小且能耐受極端的PH環(huán)境，因而擁有相對較慢的降解速率，可作為替代支架在體內(nèi)發(fā)揮作用長達(dá)3 — 6月之久。
[0005]雖然角蛋白擁有著上述的諸多優(yōu)點(diǎn)，但單純采用此種蛋白進(jìn)行支架材料制備時(shí)，不可避免的會(huì)遇到生物力學(xué)特性不足的問題。因此在制備支架的過程中將角蛋白和其余天然材料進(jìn)行有效結(jié)合可以進(jìn)一步提升材料的力學(xué)性能，從而更能夠滿足類似尿道組織修復(fù)重建的需要。相比而言，自蠶絲內(nèi)獲取的絲素蛋白擁有提取簡易，制作成本低的優(yōu)勢。不僅如此，絲素蛋白極佳的彈性以及較好的抗拉強(qiáng)度也為其與角蛋白的結(jié)合提供了理論基礎(chǔ)。
[0006]制備完成的角蛋白-絲素蛋白復(fù)合支架如同其它合成的尿道組織工程修復(fù)材料一樣會(huì)擁有一定的厚度，而支架材料的厚度勢必會(huì)對微血管的長入、氧氣以及營養(yǎng)補(bǔ)給起到限制作用。而這一問題也是導(dǎo)致利用組織工程材料進(jìn)行尿道重建術(shù)后出現(xiàn)狹窄復(fù)發(fā)的主要原因之一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于克服上述不足，提供一種具有自體供氧能力的可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架及其制備方法。
[0008]本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供一種可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架，所述蛋白復(fù)合支架的組成材料包括絲素蛋白、角蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物。
[0009]優(yōu)選地，所述絲素蛋白和角蛋白的質(zhì)量比為(3-9): (2-6)，更優(yōu)選為(3.5-8.5):(2.5-5.5)，更優(yōu)選為(4-8): (3-5.2)，更優(yōu)選為(5-7): (3-5)，更優(yōu)選為(5.5-6.5):(3.5-4.5)，例如 6:4 或 6:4.2。。
[0010]優(yōu)選地，所述明膠和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(1-5): 15，更優(yōu)選為(1.5-4.5): 15，更優(yōu)選為(2-4): 15，更優(yōu)選為(2.5-3.5):15，例如 2.8:15 或 3:15。
[0011]優(yōu)選地，所述自產(chǎn)氧物和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(0.2-3):15，更優(yōu)選為(0.5-2.5):15,更優(yōu)選為(0.5-2): 15，更優(yōu)選為(0.8-1.5):15,更優(yōu)選為(0.9-1.2):15,例如 0.95:15 或 1:15。
[0012]其中，所述自產(chǎn)氧物優(yōu)選為過氧化鈣、過碳酸鈉、過碳酸鉀、過氧化硫脲等中的一種或幾種的混合物，更優(yōu)選為過氧化鈣。
[0013]其中，所述角蛋白優(yōu)選為還原型人發(fā)角蛋白。
[0014]本發(fā)明的第二個(gè)方面是提供一種上述用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架的制備方法，包括以下步驟:
[0015]步驟1，將角蛋白溶液與絲素蛋白溶液混合得到蛋白混合液，控制絲素蛋白和角蛋白的質(zhì)量比為(3-9): (2-6)，且蛋白混合液中角蛋白與絲素蛋白的總濃度為0.05-0.2g/mL ；
[0016]步驟2，將明膠加入到蛋白混合液中，待明膠完全溶解后，加入自產(chǎn)氧物，溶解完全，其中，所述明膠和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(1-5): 15，所述自產(chǎn)氧物和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(0.2-3):15 ；
[0017]步驟3，將步驟2得到的混合溶液密封靜置，直至凝膠化，敞口自蒸發(fā)，得到蛋白復(fù)合支架。
[0018]步驟I中，所述絲素蛋白和角蛋白的質(zhì)量比優(yōu)選為(3.5-8.5): (2.5-5.5)，更優(yōu)選為(4-8): (3-5.2)，更優(yōu)選為(5-7): (3-5)，更優(yōu)選為(5.5-6.5): (3.5-4.5)，例如 6:4或 6:4.2。
[0019]步驟I中，蛋白混合液中角蛋白與絲素蛋白的總濃度優(yōu)選為0.06-0.17g/mL，更優(yōu)選為 0.07-0.15g/mL，更優(yōu)選為 0.08-0.13g/mL，更優(yōu)選為 0.09-0.llg/mL，例如 0.lg/mL 或0.105g/mL。
[0020]步驟2中，所述明膠和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比優(yōu)選為(1.5-4.5):15，更優(yōu)選為(2-4): 15，更優(yōu)選為(2.5-3.5):15，例如 2.8:15 或 3:15。
[0021]步驟2中，所述自產(chǎn)氧物和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比優(yōu)選為(0.5-2.5):15,更優(yōu)選為(0.5-2): 15，更優(yōu)選為(0.8-1.5):15,更優(yōu)選為(0.9-1.2):15,例如 0.95:15 或 1:15。
[0022]步驟2中，所述自產(chǎn)氧物優(yōu)選為過氧化鈣、過碳酸鈉、過碳酸鉀、過氧化硫脲等中的一種或幾種的混合物，更優(yōu)選為過氧化鈣。
[0023]步驟I中，所述角蛋白優(yōu)選為還原型人發(fā)角蛋白，制備方法如下:將人頭發(fā)置于提取液中，50-150°C (優(yōu)選為70-130°C，更優(yōu)選為80-120°C，更優(yōu)選為100-110°C )下浸泡10-60min (優(yōu)選為15_50min,更優(yōu)選為25_35min),過濾,將濾液透析,濃縮,得到還原型人發(fā)角蛋白，其中，人頭發(fā)的質(zhì)量與提取液的體積的比為(0.5-4g): (5-20mL)。
[0024]進(jìn)一步優(yōu)選地，人頭發(fā)的質(zhì)量與提取液的體積的比為(l_3g): (8_15mL)，更優(yōu)選為(1.5-2g): (10-12mL)。
[0025]優(yōu)選地，所述提取液為尿素、十二烷基硫酸鈉、Na2S2O5的混合水溶液。
[0026]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述提取液中，每10mL水中，含有30_70g(優(yōu)選為35_60g，更優(yōu)選為45-50g)尿素、40-80g (優(yōu)選為45-70g，更優(yōu)選為50_60g)十二烷基硫酸鈉、80_120g (優(yōu)選為 88-110g，更優(yōu)選為 92-100g) Na2S205。
[0027]步驟I中，所述絲素蛋白的制備方法如下:將脫膠蠶絲溶于MX溶液中，過濾，將濾液透析，濃縮，得到純化的絲素蛋白，其中，M為堿金屬(例如L1、Na、K等)，X為鹵素(例如F、Cl、Br、I 等)。
[0028]優(yōu)選地，步驟3中，凝膠化后，敞口自蒸發(fā)8_16h(優(yōu)選為10_14h，更優(yōu)選為ll_12h)后，倒入無水酒精0.5-2h (優(yōu)選為0.8-1.5h，更優(yōu)選為1-1.2h)后取出得到蛋白復(fù)合支架。
[0029]本發(fā)明提供的可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架復(fù)合了角蛋白、絲素蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，物理強(qiáng)度要優(yōu)于利用單純絲素蛋白溶液和單純蛋白組合溶液所構(gòu)建的膜結(jié)構(gòu)材料，同時(shí)明膠成份對自產(chǎn)氧物構(gòu)成一定的包裹作用，使得本發(fā)明提供的蛋白復(fù)合支架能夠恒速且高水平的釋放氧氣，更適合于實(shí)際手術(shù)操作的需要，最終提高尿道修復(fù)重建的成功率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1為本發(fā)明提供的用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架的HE染色圖；
[0031]圖2為本發(fā)明提供的用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架的掃描電鏡圖。

【具體實(shí)施方式】
[0032]下面參照附圖，結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，以更好地理解本發(fā)明。
[0033]實(shí)施例1
[0034]1、自理發(fā)店中獲取無染色的正常黑發(fā)，常規(guī)洗發(fā)精清洗1-2次，置放于常規(guī)室溫中進(jìn)行干燥。
[0035]2、將干燥處理后的頭發(fā)浸泡于乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中24小時(shí)，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比為3:1。
[0036]3、頭發(fā)再次干燥后，充分剪碎，將其按1.5g/10ml比例加入提取液(每100ml水中，溶解480.4g尿素、57.676g十二烷基硫酸鈉SDS、95.045gNa2S205)中，浸沒后在100°C油浴加熱30min。
[0037]4、真空抽濾，將黑色提取液置于透析袋中，透析5d，透析袋周圍水溶液中含有
0.lwt% 的 Na2S2O5。
[0038]5、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG(分子量10000)水溶液中，濃縮6小時(shí)，調(diào)節(jié)還原型人發(fā)角蛋白的的濃度為0.lg/mL后，行SDS蛋白電泳檢測提示蛋白電泳帶在45-60kD左右，說明得到還原型人發(fā)角蛋白。
[0039]6、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0040]7、將10g溴化鋰溶于60ml水中，配制成溴化鋰水溶液，攪拌溶液同時(shí)加熱至60。。。
[0041]8、將自市場上購置的脫膠蠶絲1g溶液溴化鋰水溶液中，5h后，多層紗布過濾，過濾后溶液置于透析袋中。
[0042]9、透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt%的Na2S2O5，每天換水一次。
[0043]10、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG (分子量20000)水溶液中，濃縮6h，調(diào)節(jié)至絲素蛋白的濃度為0.lg/mL，行SDS蛋白電泳檢測提示蛋白電泳帶在25-30kD左右，說明得到絲素蛋白。
[0044]11、將得到的絲素蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0045]12、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液和絲素蛋白溶液按體積比6:4進(jìn)行混合。
[0046]13、取步驟12得到的混合液15ml，將其融合攪拌并加熱至37°C，加入明膠，控制混合液中明膠的濃度為0.02g/mL。待明膠完全溶解后，加入過氧化鈣0.1g,高速攪拌30s后置入方型模具中。
[0047]14、混合溶液在方型模具中，模具加蓋，室溫下放置12h小時(shí)，帶凝膠化后，開蓋，自然蒸發(fā)12h，倒入酒精I(xiàn)h后取出，得到蛋白復(fù)合支架。
[0048]最終獲取的蛋白復(fù)合支架大體外觀為褐色半透明膜狀材料。其HE染色提示該材料為一伊紅染色陽性膜狀物(圖1所示)。掃描電鏡顯示支架表面存在散在分布的顆粒狀過氧化鈣，部分區(qū)域可見明膠包被過氧化鈣表現(xiàn)(圖2所示)。
[0049]經(jīng)力學(xué)拉伸檢測，該蛋白復(fù)合支架的最大伸長率52.43%，彈性模量0.202MPa。釋氧能力檢測提示每Icm2該種材料浸沒于8ml蒸餾水溶液中可使得該溶液的氧含量在2周之內(nèi)維持在HO-1OOmmHg之間。
[0050]實(shí)施例2
[0051]1、自理發(fā)店中獲取無染色的正常黑發(fā)，常規(guī)洗發(fā)精清洗1-2次，置放于常規(guī)室溫中進(jìn)行干燥。
[0052]2、將干燥處理后的頭發(fā)浸泡于乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中24小時(shí)，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比為3:1。
[0053]3、頭發(fā)再次干燥后，充分剪碎，將其按1.5g/10ml比例加入提取液(每100ml水中，溶解480.4g尿素、57.676g十二烷基硫酸鈉SDS、95.045gNa2S205)中，浸沒后在100°C油浴加熱30min。
[0054]4、真空抽濾，將黑色提取液置于透析袋中，透析5d，透析袋周圍水溶液中含有
0.lwt% 的 Na2S2O5。
[0055]5、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG(分子量10000)水溶液中，濃縮6小時(shí)，調(diào)節(jié)還原型人發(fā)角蛋白的的濃度為0.lg/mL后，行SDS蛋白電泳檢測提示蛋白電泳帶在45-60kD左右，說明得到還原型人發(fā)角蛋白。
[0056]6、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0057]7、將10g溴化鋰溶于60ml水中，配制成溴化鋰水溶液，攪拌溶液同時(shí)加熱至
60。。。
[0058]8、將自市場上購置的脫膠蠶絲1g溶液溴化鋰水溶液中，5h后，多層紗布過濾，過濾后溶液置于透析袋中。
[0059]9、透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt%的Na2S2O5，每天換水一次。
[0060]10、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG (分子量20000)水溶液中，濃縮6h，調(diào)節(jié)至絲素蛋白的濃度為0.lg/mL，行SDS蛋白電泳檢測提示蛋白電泳帶在25-30kD左右，說明得到絲素蛋白。
[0061]11、將得到的絲素蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0062]12、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液和絲素蛋白溶液按體積比4:6進(jìn)行混合。
[0063]13、取步驟12得到的混合液15ml，將其融合攪拌并加熱至37°C，加入明膠，控制混合液中明膠的濃度為0.02g/mL。待明膠完全溶解后，加入過氧化鈣0.4g，高速攪拌30s后置入方型模具中。
[0064]14、混合溶液在方型模具中，模具加蓋，室溫下放置12h小時(shí)，帶凝膠化后，開蓋，自然蒸發(fā)12h，倒入酒精I(xiàn)h后取出，得到蛋白復(fù)合支架。
[0065]實(shí)施例3
[0066]1、自理發(fā)店中獲取無染色的正常黑發(fā)，常規(guī)洗發(fā)精清洗1-2次，置放于常規(guī)室溫中進(jìn)行干燥。
[0067]2、將干燥處理后的頭發(fā)浸泡于乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中24小時(shí)，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比為3:1。
[0068]3、頭發(fā)再次干燥后，充分剪碎，將其按1.5g/10ml比例加入提取液(每100ml水中，溶解480.4g尿素、57.676g十二烷基硫酸鈉SDS、95.045gNa2S205)中，浸沒后在100°C油浴加熱30min。
[0069]4、真空抽濾，將黑色提取液置于透析袋中，透析5d，透析袋周圍水溶液中含有
0.lwt% 的 Na2S2O5。
[0070]5、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG(分子量10000)水溶液中，濃縮6小時(shí)，調(diào)節(jié)還原型人發(fā)角蛋白的的濃度為0.lg/mL后，行SDS蛋白電泳檢測提示蛋白電泳帶在45-60kD左右，說明得到還原型人發(fā)角蛋白。
[0071]6、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0072]7、將10g溴化鋰溶于60ml水中，配制成溴化鋰水溶液，攪拌溶液同時(shí)加熱至60。。。
[0073]8、將自市場上購置的脫膠蠶絲1g溶液溴化鋰水溶液中，5h后，多層紗布過濾，過濾后溶液置于透析袋中。
[0074]9、透析5d，透析袋周圍水溶液中含有0.lwt%的Na2S2O5，每天換水一次。
[0075]10、完成透析后將透析帶置于20wt%PEG (分子量20000)水溶液中，濃縮6h，調(diào)節(jié)至絲素蛋白的濃度為0.lg/mL，行SDS蛋白電泳檢測提示蛋白電泳帶在25-30kD左右，說明得到絲素蛋白。
[0076]11、將得到的絲素蛋白溶液在4°C環(huán)境下予以保存。
[0077]12、將得到的還原型人發(fā)角蛋白溶液和絲素蛋白溶液按體積比7:3進(jìn)行混合。
[0078]13、取步驟12得到的混合液15ml，將其融合攪拌并加熱至37°C，加入明膠，控制混合液中明膠的濃度為0.0lg/mL。待明膠完全溶解后，加入過氧化鈣0.2g，高速攪拌30s后置入方型模具中。
[0079]14、混合溶液在方型模具中，模具加蓋，室溫下放置12h小時(shí)，帶凝膠化后，開蓋，自然蒸發(fā)12h，倒入酒精I(xiàn)h后取出，得到蛋白復(fù)合支架。
[0080]以上對本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種可以用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，組成材料包括絲素蛋白、角蛋白、明膠和自產(chǎn)氧物，其中，所述絲素蛋白和角蛋白的質(zhì)量比為(3-9): (2-6)，所述明膠和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(1-5): 15，所述自產(chǎn)氧物和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(0.2-3):15ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述絲素蛋白和角蛋白的質(zhì)量比為(5-7): (3-5)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述明膠和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(2-4):15ο
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述自產(chǎn)氧物和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(0.5-2):15ο
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述自產(chǎn)氧物為過氧化鈣、過碳酸鈉、過碳酸鉀、過氧化硫脲中的一種或幾種的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白復(fù)合支架，其特征在于，所述角蛋白為還原型人發(fā)角蛋白。
7.—種如權(quán)利要求1所述的用于尿道修復(fù)重建的蛋白復(fù)合支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1，將角蛋白溶液與絲素蛋白溶液混合得到蛋白混合液，控制絲素蛋白和角蛋白的質(zhì)量比為(3-9): (2-6)，且蛋白混合液中角蛋白與絲素蛋白的總濃度為0.05-0.2g/mL; 步驟2，將明膠加入到蛋白混合液中，待明膠完全溶解后，加入自產(chǎn)氧物，溶解完全，其中，所述明膠和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(1-5): 15，所述自產(chǎn)氧物和角蛋白與絲素蛋白總量的質(zhì)量比為(0.2-3):15 ； 步驟3，將步驟2得到的混合溶液密封靜置，直至凝膠化，敞口自蒸發(fā)，得到蛋白復(fù)合支架。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述角蛋白為還原型人發(fā)角蛋白，制備方法如下: 將人頭發(fā)置于提取液中，50-150°C下浸泡10-60min，過濾，將濾液透析，濃縮，得到還原型人發(fā)角蛋白，其中，人頭發(fā)的質(zhì)量與提取液的體積的比為(0.5-4g): (5-20mL)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述提取液為尿素、十二烷基硫酸鈉、Na2S2O5的混合水溶液，其中，每10mL水中，含有30_70g尿素、40_80g十二烷基硫酸鈉、80-120gNa2S205o
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述絲素蛋白的制備方法如下: 將脫膠蠶絲溶于MX溶液中，過濾，將濾液透析，濃縮，得到純化的絲素蛋白，其中，M為堿金屬，X為鹵素。
【文檔編號】A61L27/22GK104288835SQ201310476346
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年10月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月12日
【發(fā)明者】馮超, 李喆, 徐月敏, 呂向國 申請人:上海市第六人民醫(yī)院