一種從牡丹花中提取總黃酮的方法
【專利摘要】一種從牡丹花中提取總黃酮的方法。本發(fā)明屬于植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從牡丹花中提取牡丹精油的方法。包括采摘、制備復(fù)合酶液、超聲波處理、離心處理和減壓蒸餾。先在溫度為35℃的條件下對牡丹花酶處理20min，可以使牡丹花細(xì)胞壁及其間質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生局部的疏松、膨脹、崩潰等變化；之后對牡丹花施加短時間的超聲波處理，超聲波在液體的內(nèi)部產(chǎn)生強(qiáng)的沖擊波和微射流，這種強(qiáng)大的沖擊流能夠有效的減小、消除溶劑與水相之間的阻滯層，從而加大了傳質(zhì)速率，此外，沖擊流對細(xì)胞組織產(chǎn)生一種物理剪切力，使之變形、破裂，并釋放出內(nèi)含物，在細(xì)胞壁及其間質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生局部的疏松、膨脹、這大大加速了細(xì)胞內(nèi)黃酮類化合物的萃取過程，起到了事半功倍的效果。
【專利說明】一種從牡丹花中提取總黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從牡丹花中提取總黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]總黃酮是黃酮類化合物的總稱，具有抗氧化清除自由基、擴(kuò)張心血管、微量的雌激素樣作用，也可降低前列腺癌、結(jié)腸癌等癌癥以及心肌梗阻死，動脈粥硬化等疾病的發(fā)病率和死亡率。同時，黃酮類化合物也是重要的功能食品添加劑、飼料添加劑、天然抗氧化劑、具有保鮮盒護(hù)膚美容作用。因此，黃酮類化合物對防治疾病及健康有積極作用，具有廣闊的市場潛力。
[0003]牡丹屬毛茛科芍藥屬灌木，又有洛陽花、富貴花和“花中之王”之美稱。牡丹除了其根皮是一種重要的中藥外，花也具有重要的藥用價值，有調(diào)經(jīng)活血的功效。黃酮類化合物是花的重要活性成分，因此研究一種快速、高效的從牡丹花中提取牡丹花中總黃酮化合物的方法具有重要意義。
[0004]目前常用的從牡丹花中提取總黃酮化合物的方法有兩種。一種是酶法提取，另一種是超聲波提取。酶法提取作用時間長，浪費(fèi)工作時間，且要求長時間保持較高的溫度條件，浪費(fèi)能源，不利于大規(guī)模生產(chǎn)。超聲波提取可以在常溫下進(jìn)行，萃取率高，能耗低，但是當(dāng)樣品量大時，到達(dá)樣品內(nèi)部的超聲波能量衰減嚴(yán)重，提取效果差，且樣品用量多時，堆積厚度增大，試劑對樣品內(nèi)部的浸提作用就不充分，影響提取效果，而且超聲波提取對提取瓶的厚度和提取瓶放置位置要求較高，影響提取效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺點(diǎn)，提供一種從牡丹花中提取總黃酮的方法，能夠快速、高效的從牡丹花中提取牡丹花中總黃酮化合物。
[0006]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是，一種從牡丹花中提取總黃酮的方法，包括以下步驟:
步驟一、采摘成熟、無病害的牡丹花，將牡丹花置于溫度為25~30°C的烘箱中鼓風(fēng)干燥，之后取出牡丹花并粉碎至40目，備用；
步驟二、將質(zhì)量濃度為0.2mg/mL的纖維素酶水溶液和質(zhì)量濃度為0.lmg/mL的果膠酶水溶液等體積混合，向混合液中加入質(zhì)量百分比濃度為2%的醋酸溶液，直至混合液pH值達(dá)到5.0，將混合液攪拌均勻后靜置10~15min，得到復(fù)合酶液；
步驟三、將步驟一得到的牡丹花放入三角瓶中，在三角瓶中加入步驟二制備的復(fù)合酶液，復(fù)合酶液與牡丹花加入量的比例為45:1，其中復(fù)合酶液以毫升計，牡丹花以克計，之后先將帶有牡丹花的三角瓶放置到溫度為35°C的條件下靜置20min，然后保持該溫度，并三角瓶施加頻率為22 kHz的超聲波處理5min，最后將三角瓶轉(zhuǎn)移到溫度為40°C的條件下靜置40min,備用；
步驟四、向靜置后的三角瓶中加入質(zhì)量百分比濃度為95%的乙醇回流提取lh，乙醇加入量為三角瓶中溶液的5倍，之后將溶液轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心15min，得到上清液I，向離心后的殘渣中加入質(zhì)量百分比濃度為60%的乙醇回流提取0.5h，之后轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心,得到上清液II ；
步驟五、合并上清液I和上清液II后，轉(zhuǎn)入壓強(qiáng)為-0.1MPA，溫度為55飛5°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，濃縮至溫度為55°C的條件下相對密度為1.20g/mL。
[0007]本發(fā)明的有益效果有以下幾個方面:
一、先在溫度為35°C的條件下對牡丹花酶處理20min，可以使牡丹花細(xì)胞壁及其間質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生局部的疏松、膨脹、崩潰等變化；之后對牡丹花施加短時間的超聲波處理，超聲波在液體的內(nèi)部產(chǎn)生強(qiáng)的沖擊波和微射流，這種強(qiáng)大的沖擊流能夠有效的減小、消除溶劑與水相之間的阻滯層，從而加大了傳質(zhì)速率，此外，沖擊流對細(xì)胞組織產(chǎn)生一種物理剪切力，使之變形、破裂，并釋放出內(nèi)含物，在細(xì)胞壁及其間質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生局部的疏松、膨脹、這大大加速了細(xì)胞內(nèi)黃酮類化合物的萃取過程，起到了事半功倍的效果；超聲波處理后，將牡丹花轉(zhuǎn)移到溫度為40°C的條件下繼續(xù)酶解40min，可以使細(xì)胞壁及其間質(zhì)徹底崩潰，大大提高了牡丹花細(xì)胞內(nèi)總黃酮的提取率，可以達(dá)到95.6%。
[0008]二、本發(fā)明中的超聲波頻率僅為22kHz，可以使纖維素酶和果膠酶的活性中心發(fā)生移動，使疏水性增強(qiáng)，促進(jìn)酶解反應(yīng)時與底物更好的結(jié)合，促進(jìn)牡丹花細(xì)胞壁及其間質(zhì)結(jié)構(gòu)更快的崩潰，使細(xì)胞內(nèi)的黃酮類化合物更快的進(jìn)入溶劑中。
[0009]三、本發(fā)明通過采取以酶提取為主、超聲波提取為輔的方法，避免了使用超聲波提取樣品量大時，到達(dá)樣品內(nèi)部的超聲波能量衰減嚴(yán)重，提取效果差的問題。
[0010]四、本發(fā)明提取條件溫和，所用試劑均無毒，提取的總黃酮可用于食用等用途，且通過薄層層析沒有發(fā)現(xiàn)對黃酮化合物性質(zhì)產(chǎn)生影響。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面對本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
[0012]一種從牡丹花中提取總黃酮的方法，包括以下步驟:
步驟一、采摘成熟、無病害的牡丹花，將牡丹花置于溫度為25~30°C的烘箱中鼓風(fēng)干燥，之后取出牡丹花并粉碎至40目，備用；
步驟二、將質(zhì)量濃度為0.2mg/mL的纖維素酶水溶液和質(zhì)量濃度為0.lmg/mL的果膠酶水溶液等體積混合，向混合液中加入質(zhì)量百分比濃度為2%的醋酸溶液，直至混合液pH值達(dá)到5.0，將混合液攪拌均勻后靜置10~15min，得到復(fù)合酶液；
步驟三、將步驟一得到的牡丹花放入三角瓶中，在三角瓶中加入步驟二制備的復(fù)合酶液，復(fù)合酶液與牡丹花加入量的比例為45:1，其中復(fù)合酶液以毫升計，牡丹花以克計，之后先將帶有牡丹花的三角瓶放置到溫度為35 V的條件下靜置20min，然后保持該溫度，并三角瓶施加頻率為22 kHz的超聲波處理5min，最后將三角瓶轉(zhuǎn)移到溫度為40°C的條件下靜置40min,備用；
步驟四、向靜置后的三角瓶中加入質(zhì)量百分比濃度為95%的乙醇回流提取lh，乙醇加入量為三角瓶中溶液的5倍，之后將溶液轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心15min，得到上清液I，向離心后的殘渣中加入質(zhì)量百分比濃度為60%的乙醇回流提取0.5h，之后轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心,得到上清液II ；
步驟五、合并上清液I和上清液II后，轉(zhuǎn)入壓強(qiáng)為-0.1MPA，溫度為55飛5°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，濃縮至溫度為55°C的條件下相對密度為1.20g/mL。[0013]實(shí)施例1
一種從牡丹花中提取總黃酮的方法，包括以下步驟:
步驟一、采摘成熟、無病害的牡丹花，將牡丹花置于溫度為27°C的烘箱中鼓風(fēng)干燥，之后取出牡丹花并粉碎至40目，備用；
步驟二、將質(zhì)量濃度為0.2mg/mL的纖維素酶水溶液和質(zhì)量濃度為0.lmg/mL的果膠酶水溶液等體積混合，向混合液中加入質(zhì)量百分比濃度為2%的醋酸溶液，直至混合液pH值達(dá)到5.0，將混合液攪拌均勻后靜置12min，得到復(fù)合酶液；
步驟三、將步驟一得到的牡丹花放入三角瓶中，在三角瓶中加入步驟二制備的復(fù)合酶液，復(fù)合酶液與牡丹花加入量的比例為45:1，其中復(fù)合酶液以毫升計，牡丹花以克計，之后先將帶有牡丹花的三角瓶放置到溫度為35°C的條件下靜置20min，然后保持該溫度，并三角瓶施加頻率為22 kHz的超聲波處理5min，最后將三角瓶轉(zhuǎn)移到溫度為40°C的條件下靜置40min,備用；
步驟四、向靜置后的三角瓶中加入質(zhì)量百分比濃度為95%的乙醇回流提取lh，乙醇加入量為三角瓶中溶液的5倍，之后將溶液轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心15min，得到上清液I，向離心后的殘渣中加入質(zhì)量百分比濃度為60%的乙醇回流提取0.5h，之后轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心,得到上清液II ；
步驟五、合并上清液I和上清液II后，轉(zhuǎn)入壓強(qiáng)為-0.1MPA，溫度為55飛5°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，濃縮至溫度為55°C的條件下相對密度為1.20g/mL。
[0014]步驟六、將步驟四得到的上清液和只用乙醇回流提取的提取液在聚酰胺薄膜上展開，晾干后，噴灑氯化鋁的乙醇溶液，并于紫外燈下觀察比較。
[0015]結(jié)果表明:采取本發(fā)明方法從牡丹花中提取的黃酮素，化學(xué)成分沒有發(fā)生變化。且本發(fā)明總黃酮的提取率達(dá)到95.6%，提取用時僅需65min，與現(xiàn)有技術(shù)相比，能夠快速、高效的從牡丹花中提取牡丹花中總黃酮化合物。
【權(quán)利要求】
1.一種從牡丹花中提取總黃酮的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、采摘成熟、無病害的牡丹花，將牡丹花置于溫度為25~30°C的烘箱中鼓風(fēng)干燥，之后取出牡丹花并粉碎至40目，備用； 步驟二、將質(zhì)量濃度為0.2mg/mL的纖維素酶水溶液和質(zhì)量濃度為0.lmg/mL的果膠酶水溶液等體積混合，向混合液中加入質(zhì)量百分比濃度為2%的醋酸溶液，直至混合液pH值達(dá)到5.0，將混合液攪拌均勻后靜置10~15min，得到復(fù)合酶液； 步驟三、將步驟一得到的牡丹花放入三角瓶中，在三角瓶中加入步驟二制備的復(fù)合酶液，復(fù)合酶液與牡丹花加入量的比例為45:1，其中復(fù)合酶液以毫升計，牡丹花以克計，之后先將帶有牡丹花的三角瓶放置到溫度為35 V的條件下靜置20min，然后保持該溫度，并三角瓶施加頻率為22 kHz的超聲波處理5min，最后將三角瓶轉(zhuǎn)移到溫度為40°C的條件下靜置40min,備用； 步驟四、向靜置后的三角瓶中加入質(zhì)量百分比濃度為95%的乙醇回流提取lh，乙醇加入量為三角瓶中溶液的5倍，之后將溶液轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心15min，得到上清液I，向離心后的殘渣中加入質(zhì)量百分比濃度為60%的乙醇回流提取0.5h，之后轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)速為10000r/min的離心機(jī)中離心,得到上清液II ； 步驟五、合并上清液I和上清液II后，轉(zhuǎn)入壓強(qiáng)為-0.1MPA，溫度為55飛5°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，濃縮至溫度為55°C的條件下相對密度為1.20g/mL。
【文檔編號】A61K133/00GK103520301SQ201310506060
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月24日
【發(fā)明者】詹鎰萌, 馬明, 羅娟 申請人:洛陽祥和牡丹科技有限公司