小粒徑納米顆粒的制備方法及納米顆粒藥物載體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及納米藥物領域，具體公開一種小粒徑納米顆粒的制備方法，以及制得的納米顆粒藥物載體。本發(fā)明的方法包括步驟：配制溶液：PLGA溶于乙腈中，卵磷脂、DSPE-PEG分別溶于乙醇水溶液中；磷脂成膜：混合卵磷脂溶液與DSPE-PEG溶液，超聲混勻，并去除溶劑，以形成磷脂膜；納米沉淀自組裝：將PLGA溶液加入成膜的容器中，混合后，在60-65℃保溫，以使PLGA與磷脂納米沉淀自組裝成納米顆粒；以及超濾收集：超濾離心收集得到的納米顆粒。本發(fā)明的制備方法簡便，制得的小粒徑納米顆粒表面帶負電，腫瘤穿透性強，在生物體中具有更高的循環(huán)穩(wěn)定性?？梢宰鳛樗幬镙d體，包載多種疏水性、親水性和兩親性藥物，應用廣泛。
【專利說明】小粒徑納米顆粒的制備方法及納米顆粒藥物載體
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及納米藥物領域，具體涉及一種小粒徑納米顆粒的制備方法，以及由此制得的納米顆粒藥物載體。
【背景技術】
[0002]胰腺癌、膀胱癌等癌癥的致密瘤一直是癌癥治療的難題。在納米抗癌藥物的研究中，使用納米載體包載抗腫瘤藥物制備成納米藥物，并利用載體自身的代謝特點將藥物輸送到腫瘤部位，從而實現對腫瘤的高效治療。以聚合物、脂質體或脂-聚合物為原料的納米載體因具有生物相容性好、高效包載和傳輸藥物與基因等優(yōu)勢被廣泛應用于臨床研究。
[0003]然而常規(guī)的納米抗癌藥物多存在生物安全性低的問題，且因粒徑過大(通常大于IOOnm)和生物相容性差等原因，無法在致密瘤中有效富集，因此療效甚微。無法用于活體實驗或抑制這類腫瘤的生長和復發(fā)。
[0004]通過改善納米藥物的理化性質(粒徑、表面電荷、化學修飾等)可以改善納米抗癌藥物在致密瘤中的有效富集,并因此實現對此類腫瘤的有效抑制。Chauhan等通過腫瘤血管模擬實驗，證明了粒徑小于40nm的納米顆粒能夠最快的透過腫瘤血管，但粒徑過小或過大都會使降低顆粒在腫瘤組織中的累積量；Cabral等設計了 30nm、50nm、70nm和IOOnm四種粒徑大小的聚合物納米膠束，并證明小于50nm的小粒徑納米膠束具有更好的腫瘤穿透能力和治療效果。因此需要設計一種簡易的、粒徑在30~50nm之間的小粒徑納米顆粒，解決現有技術中的問題，并用于致密瘤的藥物治療研究。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明旨在提供一種表面帶負電的小粒徑納米藥物載體，以及制備這種納米藥物載體的方法。
[0006]本發(fā)明包括一種小粒徑納米顆粒的制備方法，包括步驟:配制溶液:PLGA溶于乙腈中；卵磷脂、DSPE-PEG分別溶于乙醇水溶液中；磷脂成膜:混合卵磷脂溶液與DSPE-PEG溶液，超聲混勻，并去除溶劑，以形成磷脂膜；納米沉淀自組裝:將PLGA溶液加入成膜的容器中，混合后，在60-65°C保溫，以使PLGA與磷脂納米沉淀自組裝成納米顆粒；以及超濾收集:超濾離心收集得到的納米顆粒。
[0007]一些實施例中，磷脂成膜步驟中，混合溶液中包含相等質量的卵磷脂與DSPE-PEG。
[0008]一些實施例中，磷脂成膜步驟包括將卵磷脂溶液和DSPE-PEG溶液與乙醇水溶液混合，并超聲混合的操作。
[0009]一些實施例中，納米沉淀自組裝步驟中的保溫時間可以為2-3小時。
[0010]一些實施例中，納米沉淀自組裝步驟中，PLGA與總磷脂的質量比可以為3-5:1。[0011 ] 一些實施例中，納米沉淀自組裝步驟包括先將PLGA溶液與乙醇水溶液混合，再加入成膜的容器中的操作。
[0012]一些實施例中，超濾收集步驟中，使用IOkDa的超濾膜收集納米顆粒。[0013]本法另一方面提供根據以上方法制備得到的納米顆粒藥物載體，該納米顆粒藥物載體的平均粒徑可以為30-50nm，并且表面帶負電，其表面電位可以為-30至_60mV。
[0014]本發(fā)明通過兩步磷脂成膜及納米沉淀兩步法合成納米顆粒藥物載體，制備方法簡便?？梢垣@得粒徑在30-50nm范圍的小粒徑納米顆粒,腫瘤穿透性強。納米顆粒表面帶負電，在生物體中具有更高的循環(huán)穩(wěn)定性。本發(fā)明制備得到的納米顆粒可以作為藥物載體，包載多種疏水性、親水性和兩親性藥物，應用廣泛。
【專利附圖】

【附圖說明】[0015]圖1為根據本發(fā)明的方法合成的小粒徑納米顆粒的TEM圖。
[0016]圖2為根據本發(fā)明的方法合成的納米顆粒的粒度分析結果。
【具體實施方式】
[0017]為了克服現有納米顆粒(NPs)藥物載體因粒徑過大、生物相容性差，而造成的在致密瘤中富集性差，進而導致療效差的問題，本發(fā)明設計了一種小粒徑納米顆粒的簡單制備方法，以提供一種包載多種藥物的，用于納米藥物治療致密腫瘤的載體平臺。
[0018]本發(fā)明制備小粒徑納米顆粒的方法使用聚乙交酯丙交酯(PLGA)和磷脂作為主要原料，制備形成磷脂包裹的PLGA納米顆粒。通過磷脂成膜、納米沉淀自組裝的兩步法合成小粒徑NPs。
[0019]具體地，本發(fā)明的制備方法主要包括四個步驟:配制溶液、磷脂成膜、納米沉淀自組裝，以及超濾收集。應理解，盡管以下按照該順序描述這些步驟，這些步驟的具體順序不限于此，例如不必須首先配制全部溶液，還可以僅在磷脂成膜、納米沉淀自組裝步驟之前配制該步驟中要使用的溶液。
[0020]配制溶液步驟:將PLGA溶于乙腈中，盡管濃度的大小對納米顆粒的制備幾乎沒有影響，但通常情況下，可以使用l-10mg/ml的濃度；將卵磷脂、DSPE-PEG分別溶于乙醇水溶液中，形成卵磷脂溶液和DSPE-PEG溶液，由于磷脂在水中的溶解度低，因此，選用乙醇水溶液作為溶劑，例如可以使用4%的乙醇水溶液，配置得到的磷脂濃度可以為約lmg/ml。
[0021]磷脂成膜步驟:混合卵磷脂溶液與DSPE-PEG溶液，并去除溶劑，以形成均勻的磷脂膜。為使混合更為均勻，該步驟可以通過超聲進行。為了合成小粒徑納米顆粒，卵磷脂與DSPE-PEG優(yōu)選具有相等的質量比。具體地，該步驟可以首先卵磷脂溶液和DSPE-PEG溶液與4%乙醇水溶液混合，然后進行超聲混合。
[0022]納米沉淀自組裝步驟:將PLGA溶液逐滴加入成膜的容器中，混合后，在60_65°C保溫，這樣的溫度范圍可使有機溶劑充分揮發(fā)，同時不會破壞顆粒的合成。具體地，可以例如使用水浴保溫2-3小時，并伴隨攪拌，以為顆粒合成與有機溶劑揮發(fā)提供充足時間。如此，PLGA與磷脂納米沉淀自組裝成納米顆粒。其中PLGA與總磷脂質量比為3_5:1。優(yōu)選地,可以先使PLGA溶液與4%乙醇水溶液混合，然后再加入成膜的容器中。
[0023]超濾收集:超濾離心收集得到的納米顆粒。該步驟可以使用IOkDa的超濾膜。
[0024]本發(fā)明的制備方法簡單，得到的聚乙交酯丙交酯-磷脂納米顆粒粒徑較小，使用Malvern粒度分析儀測得粒徑通常小于50nm,—般為30-50nm,這樣的粒徑大小使得納米藥物針對致密性腫瘤的治療更具可實現性。納米顆粒本身所使用的原料為磷脂和聚合物，生物毒性極小，且易被生物體通過吸收或降解等途徑排出體外具有因此具有良好的生物相容性。顆粒表面磷脂外殼中的DSPE-PEG帶負電荷，表面電荷通常在-30至_60mV的范圍，因此在生物體中具有更高的循環(huán)穩(wěn)定性，并提供了進一步修飾的位點，能作為藥物載體，包載多種疏水性、親水性和兩親性藥物，應用廣泛。
[0025]以下通過具體實施例進一步闡述本發(fā)明，然而應理解，具體實施例僅示出本發(fā)明的優(yōu)選范例，而非限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的范圍由權利要求限定。實施例中的具體操作，除特別說明以外，均為本領域常規(guī)操作方法。
[0026]原料:
[0027]PLGA (聚乙交酯丙交酯):分子量5000-15000，丙交酯:乙交酯=1:1，購自Sigma-Aldrich (美國)
[0028]卵磷脂:大豆卵磷脂,購自Avanti (美國)。
[0029]DSPE-PEG (二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺)=DSPE-PEG2000-馬來酰亞胺，購自Sigma-Aldrich (美國)。
[0030]實施例1
[0031 ] 配制溶液:PLGA的乙腈溶液，濃度為2.5mg/ml ；卵磷脂、DSPE-PEG在4%乙醇水溶液中的溶液，濃度均為lmg/ml。
[0032]磷脂成膜:將各800 μ I的卵磷脂溶液和DSPE-PEG溶液加入2ml的4%乙醇溶液中，其中卵磷脂=DSPE-PEG質量比為1:1，超聲混勻后旋干，形成均勻的磷脂薄膜。
[0033]納米沉淀自組裝:將3.2ml的PLGA溶液混入4ml的4%乙醇水溶液，振蕩混勻，逐滴加至成膜的容器中，滴加期間加熱至65°C并不斷攪拌。PLGA與總磷脂的質量比為5:1。滴加完成后于65°C水浴保溫攪拌2小時。
[0034]超濾收集:以IOkDa的超濾管離心收集，得到小粒徑納米顆粒。
[0035]經粒度分析儀測得平均粒徑為39.4±2.8nm，表面電位為-53.6±0.3mV。
[0036]圖1示出實施例1制備得到的納米顆粒的TEM圖，顯示了 NPs的球形核殼結構和良好的單分散性。
[0037]圖2示出實施例1制備得到的納米顆粒的粒徑分布結果，圖中顯示了顆粒的平均大小及粒徑分布。
[0038]以上所述本發(fā)明的【具體實施方式】，并不構成對本發(fā)明保護范圍的限定。任何根據本發(fā)明的技術構思所作出的各種其他相應的改變與變形，均應包含在本發(fā)明權利要求的保護范圍內。
【權利要求】
1.一種小粒徑納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 配制溶液=PLGA溶于乙腈中；卵磷脂、DSPE-PEG分別溶于乙醇水溶液中； 磷脂成膜:混合卵磷脂溶液與DSPE-PEG溶液，超聲混勻，并去除溶劑，以形成磷脂膜； 納米沉淀自組裝:將PLGA溶液加入成膜的容器中，混合后，在60-65 °C保溫，以使PLGA與磷脂納米沉淀自組裝成納米顆粒；以及 超濾收集:超濾離心收集得到的納米顆粒。
2.如權利要求1所述的制備方法，其中，磷脂成膜步驟中，混合溶液中包含相等質量的卵磷脂與DSPE-PEG。
3.如權利要求1所述的制備方法，其中，磷脂成膜步驟包括將卵磷脂溶液和DSPE-PEG溶液與乙醇水溶液混合，并超聲混合的操作。
4.如權利要求1所述的制備方法，其中，納米沉淀自組裝步驟中，保溫時間為2-3小時。
5.如權利要求1所述的制備方法，其中，納米沉淀自組裝步驟中，PLGA與總磷脂的質量比為3-5:1。
6.如權利要求1所述的制備方法，其中，納米沉淀自組裝步驟包括先將PLGA溶液與乙醇水溶液混合，再加入成膜的容器中的操作。
7.如權利要求1所述的制備方法，其中，超濾收集步驟中，使用IOkDa的超濾膜收集納米顆粒。
8.根據權利要求1至7所述的制備方法得到的納米顆粒藥物載體，其特征在于，所述納米顆粒藥物載體的平均粒徑為30-50nm,并且表面帶負電。
9.根據權利要求8所述的納米顆粒藥物載體，其中，所述納米顆粒藥物載體的表面電位為-30至-60mV。
【文檔編號】A61K47/34GK103520112SQ201310516245
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月28日 優(yōu)先權日:2013年10月28日
【發(fā)明者】蔡林濤, 趙鵬飛, 鄭明彬, 龔萍, 岳彩霞, 羅震宇, 鄭翠芳 申請人:深圳先進技術研究院