一種齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。齒緣草提取物的制備方法是以齒緣草為原料，提取揮發(fā)油后，再用不同濃度乙醇提取，通過大孔吸附樹脂純化得到，包括齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C。該齒緣草提取物，可與藥學(xué)上可接受的載體或其他適宜賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成口服給藥的劑型。本發(fā)明的齒緣草提取物可用于制備治療白血病藥物。
【專利說明】一種齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種中藥材提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用，具體是涉及一種齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]白血病是起源造血系統(tǒng)的、以骨髓或其他造血組織中產(chǎn)生和積聚大量幼稚和異常白細(xì)胞為特點(diǎn)的惡性疾病。從形式看白血病細(xì)胞大多數(shù)是未成熟和形態(tài)異常的白細(xì)胞；在功能上，白血病細(xì)胞有著與腫瘤細(xì)胞相同的特點(diǎn):白血病細(xì)胞呈腫瘤性增值，無法控制，常導(dǎo)致骨髓造血功能的抑制和衰竭，致病人出現(xiàn)貧血、中性粒細(xì)胞和血小板減少，白血病細(xì)胞可浸潤全身各種組織與臟器，使各個(gè)臟器的功能受損，如脾、肝、淋巴結(jié)、腦膜、皮膚等，產(chǎn)生肝、脾、淋巴結(jié)腫大、頭痛、頸強(qiáng)直等臨床癥狀和體征；也可表現(xiàn)為局部的腫瘤，例如浸潤骨膜下時(shí)，可聚集成淡綠色腫塊，俗稱綠色瘤，如乳突綠色瘤、硬腦膜綠色瘤、脊椎綠色瘤、骨盆綠色瘤等，并可早于白血病前出現(xiàn)于臨床。由于白血病細(xì)胞源于血液系統(tǒng)，又具有腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)，所以人們習(xí)慣上稱他為血癌。白血病的分布是世界性的，占癌癥總發(fā)病率的5%左右，發(fā)病以兒童和青年居多。我國白血病患者約為3-4人/10萬人口，男性多于女性。在我國各年齡組惡性腫瘤的死亡率中白血病占第6位(男性)和第8位(女性)，在兒童及35歲以下的人群中則占第I位。白血病按白細(xì)胞發(fā)育成熟的程度區(qū)分，可分為急性、慢性兩種；按白細(xì)胞的不同類型來區(qū)分，可分為淋巴細(xì)胞型、粒細(xì)胞型、單核細(xì)胞型、漿細(xì)胞型、巨核細(xì)胞型白血病，有時(shí)也可由兩種細(xì)胞混合而成，如粒一單細(xì)胞性白血病。
[0003]目前白血病的治療主要依靠化療，治療白血病的藥物也比較多，中藥西藥均有，常見的西藥有甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺、長春新堿、三尖杉酯堿、干擾素等，中成藥有珍香膠囊、復(fù)方斑蝥膠囊等，這些藥物通過不同的機(jī)制對白血病進(jìn)行治療，其中有細(xì)胞毒性藥物、誘導(dǎo)分化藥物等。細(xì)胞毒性藥物雖然可以殺傷大量的白血病細(xì)胞，減少體內(nèi)的白血病負(fù)荷，但副作用較多，如殺傷、抑制正常造血細(xì)胞，導(dǎo)致貧血、出血；抑制正常免疫功能，機(jī)體免疫力下降，容易合并感染；損傷胃腸道粘膜，導(dǎo)致厭食惡心、嘔吐；還會(huì)影響心肝腎功能，而且還可使第二腫瘤發(fā)生率增加。此外,這些藥物劑量再大，也不可能完全殺滅體內(nèi)的白血病細(xì)胞,而殘留的白血病細(xì)胞是疾病復(fù)發(fā)的根源。誘導(dǎo)分化治療是指應(yīng)用能夠促進(jìn)白血病細(xì)胞分化成熟或能夠調(diào)節(jié)白血病細(xì)胞表型以增強(qiáng)其對藥物敏感性的誘導(dǎo)分化劑。目前應(yīng)用最有效的是全反式維甲酸治療急性早幼粒細(xì)胞白血病，全反式維甲酸已成為急性早幼粒細(xì)胞白血病誘導(dǎo)緩解的首選藥物。
[0004]干擾素是一種單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。分為α、β、Y3種。自80年代以來，許多研究顯示，干擾素(尤其是α-干擾素及Y-干擾素)除具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)的作用外，還具有明顯的抗細(xì)胞增值作用。目前干擾素已被用于治療多種白血病。干擾素的治療主要顯示對慢粒(慢性期)、毛細(xì)胞白血病，慢淋等慢性白血病是有幫助的。由于干擾素治療費(fèi)用昂貴、大劑量是副作用多(如行動(dòng)能力降低、治理減退等)，目前國內(nèi)應(yīng)用尚不普遍。[0005]上述藥物有的具有較強(qiáng)的毒性，在治療白血病的同時(shí)對正常細(xì)胞液有殺傷作用，有的效果不明顯，有的效果雖然好但價(jià)格昂貴。中藥在白脈病治療上已表現(xiàn)出一定的效果，并且由于中藥毒性低，副作用少而越來越受到關(guān)注。
[0006]齒緣草為紫草科植物石生齒緣草(Eritrichium rupestre (Pall.)Bunge)的干燥地上部分。夏季花開時(shí)采收，除去根及雜質(zhì)，陰干。收載于1998年《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊》，其性涼，味苦、甘。具有殺“粘”，清熱，解毒。用于溫?zé)崃鞲校皡f(xié)日”人脈癥，“協(xié)日”熱。為我國藏蒙等少數(shù)民族地區(qū)的常用藥物。但有關(guān)齒緣草的基礎(chǔ)研究尚十分有限，使該藥材的后續(xù)推廣和應(yīng)用受到限制?，F(xiàn)代研究關(guān)于齒緣草的化學(xué)成分及藥理作用鮮有報(bào)道。
國內(nèi)專利檢索，未見齒緣草相關(guān)專利報(bào)道。
[0007]上述文獻(xiàn)及專利等，尚未見齒緣草或齒緣草提取物用于制備治療白血病藥物的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
本發(fā)明所用齒緣草為紫草科植物石生齒緣草(Eritrichium rupestre (Pall.)Bunge)的干燥地上部分。
[0010]本發(fā)明一種齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
[0011]所述齒緣草提取物的制備方法為:· (1)齒緣草，加水浸泡4-12小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間1-4小時(shí)，提取次數(shù)1-3次，加水量為齒緣草重量的8-15倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ；
(2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度50%-95%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-3次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B ;
(3)將步驟(1)得到的提取液A，濃縮至相對密度d=l.10-1.20，濾過，藥液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-95%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ；
(4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C，其中一種或兩種或三種按一定比例混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
[0012]齒緣草提取物的制備方法為:
(1)齒緣草，加水浸泡4-12小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間1-4小時(shí)，提取次數(shù)1-3次，加水量為齒緣草重量的8-15倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ；
(2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度50%-95%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-3次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B ；
(3)將步驟(1)得到的提取液A，濃縮至相對密度d=l.10-1.20，濾過，藥液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-95%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ；
(4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
[0013]優(yōu)選的齒緣草提取物的制備方法為:
(1)齒緣草，加水浸泡6小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間2小時(shí)，提取次數(shù)2次，加水量為齒緣草重量的14倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ；
(2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度70%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的12倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B ；
(3)將步驟(1)得到的藥液A，濃縮至相對密度d=l.12，濾過，藥液通過LSA-21大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度70%、95%的乙醇溶液依次洗脫，收集70%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ；
(4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
[0014]本發(fā)明的一種齒 緣草提取物的制備方法，其特征在于:所采用的大孔吸附樹脂為LSA-21大孔吸附樹脂、DM1 30大孔吸附樹脂、LSA-40大孔吸附樹脂。
[0015]本發(fā)明的的齒緣草提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
[0016]本發(fā)明的齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C，在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明的齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
[0018]本發(fā)明的齒緣草提取物，通過加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué)上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
[0019]本發(fā)明首次以菊科植物齒緣草(Picris japonica T hunb.)的干燥地上部分為原料，制備提取物用于治療白血病。本發(fā)明首次探索研究并分離得到了齒緣草具有治療白血病的提取物，治療白血病藥理試驗(yàn)結(jié)果表明，齒緣草提取物可以顯著抑制K562白血病細(xì)胞增殖；齒緣草提取物可以顯著抑制K562白血病細(xì)胞集落形成。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面通過具體實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例對齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用做進(jìn)一步說明，但不限于本發(fā)明。
[0021]實(shí)施例1:齒緣草提取物的制備
(1)齒緣草20kg，加水浸泡6小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間2小時(shí)，提取次數(shù)2次，加水量為齒緣草重量的14倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ；
(2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度70%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的12倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B;
(3)將步驟(1)得到的藥液A，濃縮至相對密度d=l.12，濾過，藥液通過LSA-21大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度70%、95%的乙醇溶液依次洗脫，收集70%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ；
(4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
[0022]實(shí)施例2:齒緣草提取物的制備
(1)齒緣草25kg，加水浸泡4小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間I小時(shí)，提取次數(shù)3次，加水量為齒緣草重量的8倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ； (2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度50%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為I次，每次提取時(shí)間為3小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B;
(3)將步驟(1)得到的藥液A，濃縮至相對密度d=l.10，濾過，藥液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%的乙醇溶液洗脫，收集30%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ；
(4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
[0023]實(shí)施例3:齒緣草提取物的制備
(O齒緣草19kg，加水浸泡12小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間4小時(shí)，提取次數(shù)I次，加水量為齒緣草重量的15倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ；
(2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度95%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的8倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B;
(3)將步驟(1)得到的藥液A，濃縮至相對密度d=l.20，濾過，藥液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度95%的乙醇溶液洗脫，收集95%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ；
(4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
[0024]實(shí)施例4:齒緣草提取物片劑的制備
取實(shí)施例1齒緣草提取物325g，加入淀粉60g，混勻，制粒，干燥，過篩，加微晶纖維素45g，硬脂酸鎂3.5g，混勻，壓制成1000片，即得齒緣草提取物片劑。
[0025]實(shí)施例5:齒緣草提取物顆粒劑的制備
取實(shí)施例2齒緣草提取物335g，加入糊精200g，混勻，制粒，整粒，即得齒緣草提取物顆粒劑。
[0026]實(shí)施例6:齒緣草提取物膠囊的制備
取實(shí)施例3齒緣草提取物315g，加入淀粉85g，混勻，制粒，干燥，整粒，裝膠囊1000粒，即得齒緣草提取物膠囊。[0027]實(shí)驗(yàn)例1:齒緣草提取物對K562白血病細(xì)胞的增殖抑制作用。
[0028]藥物:齒緣草提取物、齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C (按本發(fā)明實(shí)施例1方法制備得到，批號分別為:20110707、20110708、20110709、20110710)，XTT (美國Sigma公司)。
[0029]儀器:ELX_800酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek公司)。
[0030]細(xì)胞:K562白血病細(xì)胞(中國科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心)。
[0031]實(shí)驗(yàn)分組:(I)空白對照組；(2)10_5mol/L羥基脲對照組；(3)100mg/ml齒緣草提取物組；(4) 100mg/ml齒緣草提取物A組；(5) 100mg/ml齒緣草提取物B組；(6) IOOmg/ml齒緣草提取物C組。
[0032]統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS13.0軟件，細(xì)胞計(jì)數(shù)多組間比較采用重復(fù)測量方差分析，多均數(shù)間比較采用單因素方差分析，以p〈0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0033]結(jié)果:齒緣草提取物可以顯著抑制K562白血病細(xì)胞增殖，與空白對照組相比，具有顯著性差異(p〈0.05);與10_5mol/L羥基脲對照組相比，無顯著性差異((P > 0.05)。
[0034]表1齒緣草提取物對K562白血病細(xì)胞XTT的影響
【權(quán)利要求】
1.一種齒緣草提取物在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用；所述齒緣草提取物的制備方法為: (1)齒緣草，加水浸泡4-12小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間1-4小時(shí)，提取次數(shù)1-3次，加水量為齒緣草重量的8-15倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ； (2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度50%-95%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-3次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B ； (3)將步驟(1)得到的提取液A，濃縮至相對密度d=l.10-1.20，濾過，藥液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-95%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ； (4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C，其中一種或兩種或三種按一定比例混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述齒緣草提取物的制備方法為: (1)齒緣草，加水浸泡4-12小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間1-4小時(shí)，提取次數(shù)1-3次，加水量為齒緣草重量的8-15倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ； (2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度50%-95%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-3次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B ； (3)將步驟(1)得到的提取液A，濃縮至相對密度d=l.10-1.20，濾過，藥液通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-95%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ； (4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述齒緣草提取物的制備方法為: (1)齒緣草，加水浸泡6小時(shí)，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間2小時(shí)，提取次數(shù)2次，加水量為齒緣草重量的14倍，收集揮發(fā)油，即得齒緣草提取物A ;將齒緣草水提取液濾過，分別得到提取液A和藥渣A ； (2)將步驟(1)得到藥渣A用濃度70%乙醇為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為齒緣草重量的12倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得齒緣草提取物B ； (3)將步驟(1)得到的藥液A，濃縮至相對密度d=l.12，濾過，藥液通過LSA-21大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度70%、95%的乙醇溶液依次洗脫，收集70%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得齒緣草提取物C ； (4)上述齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C混勻，即得本發(fā)明的齒緣草提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2所述的齒緣草提取物的制備方法，其特征在于:所采用的大孔吸附樹脂為LSA-21大孔吸附樹脂、DM130大孔吸附樹脂、LSA-40大孔吸附樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒緣草提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療白血病藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C，在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒緣草提取物A、齒緣草提取物B、齒緣草提取物C與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療白血病藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的齒緣草提取物，通過加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué) 上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
【文檔編號】A61P35/02GK103585238SQ201310525326
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】孔倩倩 申請人:濟(jì)南星懿醫(yī)藥技術(shù)有限公司