高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，是將穿心蓮藥材粉碎后經(jīng)甲醇回流提取、再經(jīng)過水沉、反相色譜和親水色譜的純化制得穿心蓮內(nèi)酯組份，產(chǎn)物為淡黃色；其主要成分為穿心蓮內(nèi)酯，新穿心蓮內(nèi)酯，脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯。采用高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯組份中四個(gè)主要內(nèi)酯的含量占總質(zhì)量的75％以上，其中穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的41～44％，新穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的14～21％，脫氧穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的18～25％，脫水穿心蓮內(nèi)酯為余量。此方法具有工藝簡(jiǎn)單、易操作、成本低、可工業(yè)化生產(chǎn)等突出優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種從穿心蓮藥材中提取分離高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的方法，特別涉及一種依次用反相色譜、親水色譜分離制備高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f)Nees.是爵床科植物穿心蓮的全草或葉，干燥地上部分入藥。性寒味苦，具有消炎抗菌、涼血消腫功效，主治感冒發(fā)熱，咽喉腫痛，口舌生瘡，熱淋澀痛等，是重要的“中藥抗生素”。穿心蓮的主要化學(xué)成分為二萜內(nèi)酯類化合物和黃酮類化合物，穿心蓮葉主要為二萜內(nèi)酯類化合物，其中含量最多的為穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide),還包括新穿心蓮內(nèi)酯(NeoandrographoIide)、脫氧穿心蓮內(nèi)酯(Deoxyandrographolide)和脫水穿心蓮內(nèi)酯(14-Deoxy-ll,12-didehydroandrographoIide)等，穿心蓮根的主要活性成分為黃酮類化合物。
[0003]近年來(lái)對(duì)穿心蓮的研究，主要集中于穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的提取分離、精制、衍生、含量測(cè)定等方面。穿心蓮活性成分的提取常用的有滲漉法、浸潰法、堿水提取法、超聲提取法及微波輔助提取法等；穿心蓮活性成分的提純常用的有活性炭脫色、正相溶劑萃取、Sehadex LH-20柱色譜、硅膠柱純化等。而極少有研究是關(guān)于穿心蓮內(nèi)酯組份的提取精制。
[0004]目前市場(chǎng)上在售的穿心蓮產(chǎn)品涵蓋了片劑、膠囊、滴丸、注射液等多種劑型，其中穿心蓮片和穿心蓮膠囊是通過工藝提取制備得穿心蓮浸膏，制成相應(yīng)劑型；穿心蓮滴丸的主要成分為穿心蓮內(nèi)酷。市場(chǎng)分析研究表明，穿心蓮注射液在穿心蓮廣品中占有最大的市場(chǎng)份額。穿琥寧、炎琥寧、蓮必治等穿心蓮注射液`是以穿心蓮內(nèi)酯為原料，經(jīng)過一定工藝制備而成，但臨床試驗(yàn)及研究表明，其不穩(wěn)定性和某些副作用導(dǎo)致曾輝煌一時(shí)的穿心蓮注射液遭遇瓶頸期。喜炎平是穿心蓮總內(nèi)酯通過磺化而得的磺酸鹽注射劑，由于其在治療手足口病中的獨(dú)特療效，喜炎平廣獲市場(chǎng)認(rèn)可，2011年銷售量已經(jīng)突破8000萬(wàn)支，又由于喜炎平抗炎、抗病毒的顯著療效及其可靠的安全性，已成為國(guó)內(nèi)中藥抗炎、抗病毒類藥物的主要品種，未來(lái)市場(chǎng)空間巨大。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:
[0007]一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其具體步驟為:
[0008](I)回流提取:將穿心蓮葉粉碎后用甲醇水溶液回流提取兩次，合并兩次提取液；
[0009]所述的甲醇水溶液的體積濃度為70~100%，用量為10~15倍量(v:m)；
[0010]所述的提取時(shí)間為每次I~3小時(shí)；[0011](2)水沉:直接向步驟(1)所得提取液中加入純水稀釋至甲醇體積濃度為30~80 %，充分?jǐn)嚢韬箪o置，過濾，取濾液；
[0012]所述的靜置條件為:靜置溫度為O~4°C,靜置時(shí)間為6~15小時(shí)；
[0013](3)反相色譜純化:直接向步驟(2)所得濾液中加入純水稀釋后上樣，進(jìn)行反相色譜純化；上樣量與填料的質(zhì)量比為1:20~1:80，依次用甲醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫體積為2~5個(gè)柱體積；收集合并有效甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏；
[0014]所述的甲醇水溶液的體積濃度為30~70% ；
[0015]所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m ;[0016](4)親水色譜純化:將步驟(3)所得稠膏用乙酸乙酯或乙腈溶解后進(jìn)行親水色譜純化，上樣量與填料質(zhì)量比為1:3~1:6，依次用洗脫溶液進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫體積為3~10個(gè)柱體積，收集合并有效洗脫液并減壓濃縮，干燥得淡黃色穿心蓮內(nèi)酯組份干粉。
[0017]其中，淡黃色穿心蓮內(nèi)酯組份干粉的成分主要為穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯，四種成分以外標(biāo)法定量，含量占總質(zhì)量的75%以上，其中穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的41~44%，新穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的14~21%，脫氧穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的18~25%，脫水穿心蓮內(nèi)酯為余量。
[0018]所述的洗脫溶液為體積濃度為I~20%的甲醇-乙酸乙酯混合溶液或者乙腈、I%~15 %的甲醇-乙腈混合溶液。
[0019]所述的親水色譜填料粒徑為5~60 μ。
[0020]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的積極效果是:
[0021](I)穿心蓮內(nèi)酯組份純度高:由于穿心蓮藥材總內(nèi)酯含量高達(dá)1%~3%，本發(fā)明針對(duì)內(nèi)酯組份特性，有選擇性地進(jìn)行提取分離，制備所得穿心蓮總內(nèi)酯組份的含量占總質(zhì)量的75%以上。
[0022](2)溶劑利用率高，成本低:本發(fā)明通過四步操作完成對(duì)高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的提取制備，前三步操作中向溶液中直接加水即可進(jìn)行下一步操作，不存在溶劑倒換現(xiàn)象，溶劑利用率高，工業(yè)生產(chǎn)時(shí)可大幅降低成本。
[0023](3)反相及親水色譜技術(shù)聯(lián)用:依次利用反相及親水色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，充分利用填料及內(nèi)酯組份特性，達(dá)到高純度的分離結(jié)果。
[0024](4)方法簡(jiǎn)單易行，操作簡(jiǎn)便:本發(fā)明涉及的制備高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的方法，儀器自動(dòng)化程度高，操作方便簡(jiǎn)單，可適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
【【具體實(shí)施方式】】
[0025]以下提供本發(fā)明一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法的【具體實(shí)施方式】。
[0026]實(shí)施例1
[0027]IOg穿心蓮葉適當(dāng)粉碎后，每次加入6倍量80%甲醇溶液回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入一定量水稀釋至甲醇體積濃度為60%，在4°C冰箱內(nèi)靜置10小時(shí)后過濾，得黃綠色濾液。
[0028]向所得濾液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為40%并平均分為兩批進(jìn)行反相色譜純化。每批上樣固體質(zhì)量為0.96g，反相色譜填料質(zhì)量為20g。先用3VB體積濃度為40%的甲醇將大部分強(qiáng)極性雜質(zhì)及色素洗脫去除，然后依次用5VB體積濃度為55%的甲醇、2VB體積濃度為60%的甲醇對(duì)穿心蓮主要內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，合并55%甲醇和60%甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質(zhì)量為0.57g。所得稠膏用IOmL乙酸乙酯溶解后進(jìn)行親水色譜純化，親水填料質(zhì)量為3g。先用8VB甲醇-乙酸乙酯(5:95v:v)對(duì)穿心蓮內(nèi)酯，脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，再用4V B甲醇-乙酸乙酯(10:90v:v)對(duì)新穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后干燥得的最終產(chǎn)物淡黃色干粉，質(zhì)量為0.35g。經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定，該組份中穿心蓮總內(nèi)酯含量占產(chǎn)物總質(zhì)量的80 %，其中穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的43 %，新穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的14%，脫氧穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的23%，脫水穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的20%。
[0029]實(shí)施例2 [0030]20g穿心蓮葉適當(dāng)粉碎后，加入5倍量85%甲醇溶液回流提取兩次，每次2.5小時(shí)，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為50%，在4°C冰箱內(nèi)靜置9小時(shí)后過濾，得黃綠色濾液。
[0031]向所得濾液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為30%并將所得濾液平均分為四批進(jìn)行反相色譜純化。每批上樣固體質(zhì)量為0.98g，反相色譜填料質(zhì)量為20g。先用3VB體積濃度為30%的甲醇將大部分強(qiáng)極性雜質(zhì)及色素洗脫去除，然后依次用3VB體積濃度為55%的甲醇、3VB體積濃度為60%的甲醇對(duì)穿心蓮主要內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，合并55%甲醇和60%甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質(zhì)量為1.2g。所得稠膏用20mL乙酸乙酯溶解后平均分成兩批進(jìn)行親水色譜純化，親水色譜填料質(zhì)量為3g。先用7VB甲醇-乙酸乙酯(5:95v:v)對(duì)穿心蓮內(nèi)酯，脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，再用5VB甲醇-乙酸乙酯(10:90v:v)對(duì)新穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后真空干燥得的最終產(chǎn)物淡黃色干粉，質(zhì)量為0.64g。經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定，該組份中穿心蓮總內(nèi)酯含量占產(chǎn)物總質(zhì)量的76%，其中穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的43%，新穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的17 %，脫氧穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的21 %，脫水穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的19%。
[0032]實(shí)施例3
[0033]15g穿心蓮葉適當(dāng)粉碎后，加入7倍量80%甲醇溶液回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為65%，在4°C冰箱內(nèi)靜置12小時(shí)后過濾，得黃綠色濾液。
[0034]所得濾液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為40%并平均分為三批進(jìn)行反相色譜純化。每批上樣固體質(zhì)量為1.10g，反相色譜填料質(zhì)量為20g。先用3VB體積濃度為40%的甲醇將大部分強(qiáng)極性雜質(zhì)及色素洗脫去除，然后依次用4VB體積濃度為55%的甲醇、3VB體積濃度為60 %的甲醇對(duì)穿心蓮主要內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，合并55 %甲醇和60 %甲醇的洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質(zhì)量為0.86g。所得稠膏用IOmL乙腈溶解后進(jìn)行親水色譜的純化，親水色譜填料質(zhì)量為3g。先用8VB乙腈對(duì)穿心蓮內(nèi)酯，新穿心蓮內(nèi)酯，脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，再用4VB甲醇-乙腈(5:95v:v)對(duì)新穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后真空干燥得的最重產(chǎn)物淡黃色干粉，質(zhì)量為0.45g。經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定，該組份中穿心蓮總內(nèi)酯含量占產(chǎn)物總質(zhì)量的75%，其中穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的44%，新穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的21%，脫氧穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的18%，脫水穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的17%。[0035]實(shí)施例4
[0036]30g穿心蓮葉適當(dāng)粉碎后，加入5倍量90%甲醇溶液回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為40%，在4°C冰箱內(nèi)靜置6小時(shí)后過濾，得黃綠色濾液。
[0037]將所得濾液平均分為六批進(jìn)行反相色譜純化。每批上樣固體質(zhì)量為1.20g,反相色譜填料質(zhì)量為20g。先用4VB體積濃度為40%的甲醇將大部分強(qiáng)極性雜質(zhì)及色素洗脫去除，然后依次用2VB體積濃度為55%的甲醇、3VB體積濃度為60%的甲醇對(duì)穿心蓮主要內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，合并有效洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質(zhì)量為1.77g。所得稠膏用27mL乙腈溶解后平均分為三批進(jìn)行親水色譜純化，親水填料質(zhì)量為3g。先用IOVB乙腈對(duì)穿心蓮內(nèi)酯，新穿心蓮內(nèi)酯，脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯組份進(jìn)行洗脫并收集，再用4VB甲醇-乙腈(10:90v:v)對(duì)新穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后真空干燥得的最終產(chǎn)物淡黃色干粉，質(zhì)量為1.05g。經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定，該組份中穿心蓮總內(nèi)酯含量占總質(zhì)量的75%，其中穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的41 %，新穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的15 %，脫氧穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的25 %，脫水穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的19%。
[0038]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，其具體步驟為:(1)回流提取:將穿心蓮葉粉碎后用甲醇水溶液回流提取兩次，合并兩次提取液；(2)水沉:直接向步驟(1)所得提取液中加入純水稀釋至甲醇體積濃度為30~80%，充分?jǐn)嚢韬箪o置，過濾，取濾液；(3)反相色譜純化:直接向步驟(2)所得濾液中加入純水稀釋后上樣，進(jìn)行反相色譜純化；上樣量與填料的質(zhì)量比為1:20~1:80，依次用甲醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫體積為2~5個(gè)柱體積；收集合并有效甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏；(4)親水色譜純化:將步驟(3)所得稠膏用乙酸乙酯或乙腈溶解后進(jìn)行親水色譜純化，上樣量與填料質(zhì)量比為1:3~1:6，依次用洗脫溶液進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫體積為3~10個(gè)柱體積，收集合并有效洗脫液并減壓濃縮，干燥得淡黃色穿心蓮內(nèi)酯組份干粉。
2.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，所述的甲醇水溶液的體積濃度為70~100%，用量為10~15倍量。
3.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，所述的提取時(shí)間為每次I~3小時(shí)。
4.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟⑵中，所述的靜置條件為:靜置溫度為O~4°C,靜置時(shí)間為6~15小時(shí)。
5.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，所述的甲醇水溶液的體積濃度為30~70%。
6.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m。
7.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(4)中，所述的淡黃色穿心蓮內(nèi)酯組份干粉的成分主要為穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯。
8.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(4)中，所述的淡黃色穿心蓮內(nèi)酯組份干粉的成分主要為穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯；穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的41~44 %，新穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的14~21%，脫氧穿心蓮內(nèi)酯占總內(nèi)酯組份的18~25%，脫水穿心蓮內(nèi)酯為余量。
9.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟⑷中，所述的洗脫溶液為體積濃度為I~20%的甲醇-乙酸乙酯混合溶液或者乙腈、I%~15 %的甲醇-乙腈混合溶液。
10.如權(quán)利要求1所述的一種高品質(zhì)穿心蓮內(nèi)酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(4)中,所述的親水色譜填料粒徑為5~60 μ m。
【文檔編號(hào)】A61K36/19GK103585208SQ201310577892
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月18日
【發(fā)明者】金郁, 付青, 朱文亞, 梁鑫淼, 柯燕雄 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)