厄貝沙坦在預(yù)防和治療乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及化合物2-丁基-3-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]芐基]-1，3-二氮雜螺-[4.4]壬-1-烯-4-酮(厄貝沙坦，Irbesartan，CAS號138402-11-6，結(jié)構(gòu)式見圖1)的一種醫(yī)藥新用途，具體地說，本發(fā)明涉及厄貝沙坦及其藥物組合物在預(yù)防和治療乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)感染疾病中的新用途。本發(fā)明利用過表達(dá)人NTCP分子的HepG2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染單克隆細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)厄貝沙坦可以顯著抑制HBV感染肝細(xì)胞，從而為抗HBV感染提供了一種新藥物。因此，本發(fā)明涉及的厄貝沙坦及其藥物組合物有望成為治療HBV感染相關(guān)疾病的新型治療藥物和手段。
【專利說明】厄貝沙坦在預(yù)防和治療乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，本發(fā)明涉及厄貝沙坦及其藥物組合物在預(yù)防和治療乙型肝炎病毒(h印atitis B virus, HBV)感染疾病中的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]HBV感染是當(dāng)前威脅人類健康嚴(yán)重的傳染病之一，與HBV感染相關(guān)的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌每年約導(dǎo)致100多萬人死亡。我國是HBV感染大國屬于高流行區(qū)，HBV感染不僅危害我國人民的健康，給患者及其家庭造成巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，而且給國家造成了巨大的勞動力和經(jīng)濟(jì)損失，乃至導(dǎo)致嚴(yán)重的就業(yè)等社會問題。目前臨床有效的治療HBV藥物主要包括干擾素和核苷類藥物。干擾素治愈率有限，副作用較多，，核苷類藥物存在容易引起HBV突變耐藥和停藥后易復(fù)發(fā)，因此新型抗HBV藥物的研發(fā)具有重要的社會和經(jīng)濟(jì)價值。
[0003]厄貝沙坦是一種臨床廣泛應(yīng)用于高血壓和II型糖尿病治療的藥物，其安全性已經(jīng)得到了廣泛驗證。本研究應(yīng)用自主構(gòu)建的NTCP分子HepG2穩(wěn)轉(zhuǎn)單克隆細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)厄貝沙坦可以有效抑制HBV感染肝細(xì)胞，與目前核苷類藥物作用機(jī)制不同，其作用機(jī)制主要體現(xiàn)在抑制HBV進(jìn)入肝細(xì)胞，從而為抗HBV治療提供了一種潛在的新型治療藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于發(fā)現(xiàn)了厄貝沙坦在治療HBV感染中的新用途，具體地說，本發(fā)明涉及厄貝沙坦及其藥物組合在制備治療HBV感染引起的相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明還涉及包含厄貝沙坦的藥物組合，已達(dá)到防止病毒變異引起的逃逸并提高病毒抑制效果的目的。
[0006]本發(fā)明的實(shí)施對嚴(yán)重危害人類健康的乙型肝炎及其相關(guān)疾病的治療具有重要的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將結(jié)合附圖來對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明。
[0008]圖1為厄貝沙坦化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
[0009]圖2顯示了厄貝沙坦抑制HBV感染HepG2.N9細(xì)胞后HBcAg的免疫熒光結(jié)果。
[0010]圖3顯示了厄貝沙坦抑制HBV感染HepG2.N9細(xì)胞后HBeAg的表達(dá)情況。
[0011]圖4顯示了厄貝沙坦抑制IfepG2.N9細(xì)胞生長活性的毒性結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0012]本發(fā)明涉及厄貝沙坦在預(yù)防和治療乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途，以下通過實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)例僅僅用于解釋本發(fā)明，除非特別說明， 本發(fā)明的術(shù)語具有本領(lǐng)域通常使用的含義。[0013]實(shí)施例一厄貝沙坦抑制HBV感染實(shí)驗
[0014]材料與方法
[0015]1.細(xì)胞培養(yǎng)
[0016]所用細(xì)胞為肝癌細(xì)胞H印G2的人NTCP分子穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞H印G2.N9，用含10%胎牛血清(FBS，Gibco)的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液37°C、5% C02條件下培養(yǎng)。
[0017]2.HBV病毒為Ad38細(xì)胞上清PEG濃縮液，保存于_80°C。
[0018]3.病毒感染
[0019]感染前2h，HBV感染多肽抑制劑m47F(200nM)、小分子陽性對照Ezetimibe (50uM)、厄貝沙坦(50 μ M用于HBcAg免疫熒光實(shí)驗，3、10、30和100 μ M用于HBeAg梯度抑制實(shí)驗)預(yù)先與H印G2.Ν9細(xì)胞孕育2h，然后在相應(yīng)藥物濃度和5% PEG8000的條件下進(jìn)行HBV感染，
[0020]MOI為200，感染后培養(yǎng)于含1.5% DMSO的William E培養(yǎng)基。
[0021]4.HBcAg 免疫熒光
[0022]感染后第10天進(jìn)行免疫突光實(shí)驗,按免疫突光通用流程進(jìn)行，HBcAg多抗為Dako公司產(chǎn)品，抗兔二抗為life technology公司產(chǎn)品,共聚焦顯微鏡拍攝。
[0023]5.HBeAg 檢測
[0024]感染后每2天換一次液，收集第8-10天細(xì)胞培養(yǎng)液，按照HBeAg ELISA檢測試劑盒(上?？迫A生物工程股份有限公司)說明書操作`步驟檢測。
[0025]實(shí)施例二厄貝沙坦細(xì)胞毒性實(shí)驗
[0026]1.細(xì)胞培養(yǎng)
[0027]所用細(xì)胞為肝癌細(xì)胞H印G2的NTCP分子穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞H印G2.N9，用含10%胎牛血清(FBS，Gibco)的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液37°C、5% C02條件下培養(yǎng)。
[0028]2.CCK8 實(shí)驗
[0029]厄貝沙坦在相應(yīng)濃度作用H印G2.N9細(xì)胞24h后換液，72h后按照CCK-8說明書檢測厄貝沙坦的細(xì)胞毒性，細(xì)胞加入CCK-8后于37°C孵育箱中孵育0.5~lh，酶標(biāo)儀上檢測450nm處吸光度。
【權(quán)利要求】
1.化合物2-丁基-3-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]芐基]_1，3-二氮雜螺-[4.4]壬-1-烯-4-酮(厄貝沙坦，Irbesartan)用于預(yù)防和治療乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus, HBV)感染的新用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物厄貝沙坦包含其藥物制劑上可接受的衍生物。
3.—種藥物組合物，其特征在于含有權(quán)利要求1和權(quán)利要求2所述的厄貝沙坦及其藥物制劑上可接受的衍生物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2和權(quán)利要求3所述的厄貝沙坦及其藥物組合物，其特征在于所述厄貝沙坦有效預(yù)防和治療劑量的范圍是每kg體重0.1mg至20mg,優(yōu)選劑量范圍是每kg體重Img至10mg。
【文檔編號】A61K31/4184GK103638019SQ201310646579
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月6日
【發(fā)明者】王升啟, 王學(xué)軍, 胡偉, 張婷玉 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所