棕矢車菊素在制備預防或治療肺纖維化的藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了棕矢車菊素的藥物新用途，具體涉及棕矢車菊素通過抑制肺上皮細胞間質轉化和肺血管內皮細胞間質轉化，抑制成纖維細胞增殖從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，達到預防或治療肺纖維化。在上述應用中，棕矢車菊素使用劑量范圍是20mg～1000mg；優(yōu)選20～500mg。
【專利說明】棕矢車菊素在制備預防或治療肺纖維化的藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及棕矢車菊素抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展從而預防或治療肺纖維化；具體涉及棕矢車菊素通過抑制肺上皮細胞-間質轉化和肺血管內皮細胞-間質轉化，抑制肺成纖維細胞異?；罨瘡亩种品卫w維化的發(fā)生發(fā)展，達到預防或治療肺纖維化。
【背景技術】:
[0002]特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)又稱為隱源性致纖維化性肺泡炎(cryptogenicfibrosing alveolitis, CFA),是一種慢性炎癥性間質性疾病，以普通型間質性肺炎(usual interstitialpneumonia,UIP)為特征性病理改變且病因不明。主要表現為成纖維細胞灶(fibroblastic foci)的出現致大量細胞外基質(extracellularmatrix, ECM)沉，膠原積聚，肺泡結構破壞，最終導致正常肺組織結構的破壞，是一種慢性、進行性、不可逆轉也是最常見的一種致命性肺疾病[King TJ, Pardo A, SelmanM.1diopathic pulmonary fibrosis [J].Lancet.2011, 378 (9807): 1949-1961.]。臨床表現為進行性呼吸困難并伴有刺激性干咳，肺功能限制性通氣障礙，病情持續(xù)惡化，最終因呼吸衰竭而死亡。流行病學研究顯示IPF發(fā)病率呈不斷上升趨勢，目前約為16.3 / 100,000,且 3 年內急性惡化發(fā)生率為 20.7 % [Navaratnam V, Fleming KM, West J et al.Therising incidence of idiopathic pulmonary fibrosis in the UK J.Thorax,2011,66(6):462-467.；Song Jff, Hong SB, Lim CM et al.Acute exacerbation of idiopathicpulmonary fibrosis !incidence, risk factors and outcome[J].Eur Respir J,2011,37(2):356-363.]。肺纖維化主要是肺組織受損后修復調節(jié)失控、重建異常所引起的病變，期間一系列細胞因子和生長因子等表達異常、炎癥反應參與肺纖維化的發(fā)病過程。由此造成上皮細胞缺損、成纖維細胞增生和ECM積聚等主要病變，最終結果是成纖維細胞替代了行使正常功能的肺泡上皮細胞，導致了纖維化的發(fā)生。肺泡上皮細胞(AECs)的上皮細胞-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是一種完全分化的肺泡上皮細胞經歷細胞表型改變轉化成完全分化的間質細胞的過程，通常轉化成肺成纖維細胞和肌纖維母細胞，與肺纖維化密切相關[Guarino M, Tosoni A, Nebuloni M.Direct contributionof epithelium to organ fibrosis:epithelial-mesenchymal transition.Hum Pathol,2009,40(10):1365-1376.].成纖維細胞異?；罨只杉〕衫w維細胞，是肺纖維化合成大量的細胞外基質(ECM)的來源(Coward WR, Saini G, Jenkins G.The pathogenesisof idiopathic pulmonary fibrosis.Ther Adv RespirDis.2010 ;4 (6):367-388.)。文獻報道肺內皮細胞-間質轉化(endoMT)是一種肺血管內皮細胞經歷細胞表型改變轉化成完全分化的間質細胞的過程，與肺纖維化密切相關[Piera-Velazquez S，JimenezSA.Molecular mechanisms of endothelial to mesenchymal cell transition(EndoMT)in experimentally induced ·fibrotic diseases.Fibrogenesis Tissue Repair.2012 ；5Suppll:S7.]。IPF瘢痕肌成纖維細胞參與失調傷口愈合反應，導致肺的結構扭曲和功能失調，破壞肺的氣體交換(Selman M,King TE,Pardo A.1diopathic pulmonary fibrosis:prevailing and evolving hypotheses aboutits pathogenesis and implications fortherapy.Ann Intern Med2001 ； 134 (2):136-151 ;Sime PJ, 0' Reilly KM.Fibrosis ofthe lung and other tissues:new concepts in pathogenesis and treatment.ClinImmuno12001 ；99(3):308-319.)，所以抑制成纖維細胞異常增殖很有意義。
[0003]艾葉(FoliumArtemisiae Argyi)來源于菊科蒿屬植物艾(Artemisia argyiLevi, et Vant.)的干燥葉，為臨床常用中藥。棕矢車菊素是從艾葉中提取獲得的單一化合物[唐生安，孫亮，翟慧媛，段宏泉，張彥文.艾葉化學成分的研究.天津醫(yī)科大學學報，2011,17(4):461-463.],掠矢車菊素具有抗炎作用[Clavin M, Gorzalczany S, Macho A,Muftoz E,Ferraro G,Acevedo C,Martino V.Ant1-1nflammatory activity of flavonoidsfrom Eupatorium amottianum.J Ethnopharmaco1.2007 ；112(3):585-589.],但掠矢車菊素在制備預防或治療肺纖維化的藥理作用未見報道。本發(fā)明人通過大量的研究發(fā)現棕矢車菊素可以通過抑制EMT和endoMT，抑制成纖維細胞異?；罨瘡亩陬A防或治療肺纖維化方面有明顯的作用?；诖?，本發(fā)明人發(fā)明了棕矢車菊素通過抑制EMT和肺成纖維細胞異?；罨瘡亩种品卫w維化的發(fā)生發(fā)展，以達到預防或治療IPF。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明提供了棕矢車菊素在制備預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
[0005]本發(fā)明提供了棕矢車菊素通過抑制EMT達到預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
[0006] 本發(fā)明提供了棕矢車菊素通過抑制endoMT達到預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
[0007]本發(fā)明提供了棕矢車菊素通過抑制成纖維細胞異常活化達到預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
[0008]發(fā)明提供的藥物在用于肺纖維化時，其使用劑量范圍是20mg~1000mg;優(yōu)選20 ~500mg。
[0009]本發(fā)明還提供了由棕矢車菊素和藥學上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可以以藥學常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑，優(yōu)選以片劑形式存在。
【具體實施方式】
[0010]制備例1:制備棕矢車菊素
[0011]Ikg干燥的艾葉粉碎，用6倍量95%的乙醇加熱回流提取3次，每次6h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至浸膏狀，得提取物，加適量蒸餾水混懸后，于IOL的分液漏斗中以乙酸乙酯萃取，收集萃取物以硅膠柱層析(硅膠600g，300-400目)分離，依次用CH2C12 —CH2C12:EtoAc (5:1 — 2:1) — EtoAc — MeOH梯度洗脫，通過TLC合并類似組分，過硅膠柱常壓柱，得棕矢車菊素460mg。
[0012]實施例2棕矢車菊素片劑制備
[0013]稱取20.0g棕矢車菊素、55.0g糖粉、100.0g乳糖和23.0g羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過100目篩，加入適量的3% PVPk3ci水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60°C干燥3小時，18目篩整粒，加入2.0g硬脂酸鎂，混合均勻后淺凹沖壓，調節(jié)片重約200mg，即得。[0014]【具體實施方式】
[0015]試驗例I棕矢車菊素對TGF-β I刺激Α549細胞鈣粘蛋白(E_cadherin)表達的影響
[0016]1.1實驗材料
[0017]DMEM培養(yǎng)基為Gibco公司產品，新生牛血清為杭州四季青公司產品，TGF-β I購自PeproTech公司,A549細胞購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心,用含10%胎牛血清(Hyclone公司)的低糖DMEM培養(yǎng)基(GIBC0公司)，常規(guī)培養(yǎng)于5%的C02，37°C人工培養(yǎng)箱中，細胞呈貼壁生長。E-cadherin —抗購買于sigma公司。
[0018]棕矢車菊素(純度98.5%，濱州醫(yī)學院藥物化學研究室制備)
[0019]1.2試驗方法
[0020]當細胞生長融合至70% -80%，用無血清培養(yǎng)基饑餓24h，換新鮮培養(yǎng)液，將傳代的A549細胞分為:(I)陰性對照組；(2) TGF- β I處理組(10 μ g/L作用時間48h) ； (3)TGF- β I處理組(10 μ g/L作用時間48h) +棕矢車菊素0.3 μ M ； (4) TGF- β I處理組(10 μ g/L作用時間48h) +棕矢車菊素ΙμΜ ;(5)TGF-P I處理組(10 μ g / L作用時間48h) +棕矢車菊素3μΜ ;(6)TGF-P I處理組(10 μ g/L作用時間48h) +棕矢車菊素10 μ M。48h后收獲并裂解細胞提取細胞總蛋白。BCA蛋白測定試劑盒(Pierce公司)測定蛋白濃度后，取50 μ g樣品蛋白進行10%的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,加入上皮細胞鈣粘蛋白(E-cadherin) —抗，β-actin作內參,Western blot檢測細胞E-cadherin(上皮細胞標記物)蛋白的表達。以TGF-βΙ未刺激組作為對照，分析E-cadherin蛋白的表達差異。
`[0021]1.3試驗結果
[0022]表1棕矢車菊素對TGF- β I刺激Α549細胞的E-cadherin表達影響(n=6)
[0023]
【權利要求】
1.棕矢車菊素在制備預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
2.棕矢車菊素是通過抑制肺上皮細胞-間質轉化達到預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
3.棕矢車菊素是通過抑制肺血管內皮細胞-間質轉化達到預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
4.棕矢車菊素是通過抑制成纖維細胞異?；罨_到預防或治療肺纖維化的藥物中的應用。
5.棕矢車菊素在用于肺纖維化治療時，其使用劑量范圍是20mg~1000mg;優(yōu)選使用劑量 20 ~500mg。
6.由棕矢車菊素和藥學上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可以以藥學常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑；優(yōu)選 以片劑形式存在。
【文檔編號】A61K31/352GK103655546SQ201310659082
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月2日 優(yōu)先權日:2013年12月2日
【發(fā)明者】蔣王林, 亢澤春 申請人:濱州醫(yī)學院