一種用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿的提取物，所述的塞北紫堇總生物堿提取物中總生物堿的含量不低于50wt%，包括10-12wt%的原阿片堿，8-10wt%的α-比枯枯靈和10-15wt%的黃紫堇明堿；上述提取物的提取步驟包括，將塞北紫堇藥材粉碎，并利用飽和的堿性乙醇或飽和的堿性甲醇回流提取，再濃縮、干燥得到塞北紫堇提取物；然后利用酸溶液溶解過濾，其濾液加堿溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值至9-10，得到酸堿處理液；所述酸堿處理液中加入有機溶劑萃取，得到塞北紫堇總生物堿粗提物，然后再進行純化得到塞北紫堇總生物堿提取物。采用本發(fā)明所述方法得到的生物堿提取物具用抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌和肺癌的作用。
【專利說明】一種用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中草藥的提取物的應(yīng)用，具體地說，涉及一種藏藥材塞北紫堇的總生物堿提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]藏藥塞北紫堇為罌科紫堇屬植物塞北紫堇(別名賽北紫堇)的干燥全草，分布在青海、西藏、甘肅、四川等地，為藏成藥中的常用藥，數(shù)據(jù)顯示有25%的藏成藥中含有該藥材，其藥材中所含成分主要是各種生物堿。藏醫(yī)中多用紫堇屬植物的全草入藥，有些也用該植物的根、莖、葉等不同部位單獨入藥，主要用于治療各種出血癥狀，發(fā)燒、流感、胃腸及肝膽的炎癥性疾病，也可用于治療跌打損傷或其它外傷等。目前，從該植物中分離得到的各類生物堿成分已經(jīng)有許多，這些生物堿具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗氧化、消炎、抗心律失常和保護肝傷等等。此外，該植物中的生物堿能夠抑制乙酰膽堿酯酶活性，可以改善記憶，所以還用來治療老年癡呆癥。李吉昌、王俊等發(fā)表的《云南紫堇屬植物的研究進展》中對紫堇屬植物目前的功效進行了概括，其中明確表明賽北紫堇全草入藥，具有治療疥癬瘡毒、胃炎、胃潰瘍、跌打損傷的功效。宋曉楠、吳訓(xùn)等發(fā)表的《賽北紫堇總生物堿抗炎作用研究》(湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52 (6))對賽北紫堇總生物堿的抗炎性能進行了系統(tǒng)研究。 [0003]生物堿是存在于自然界中的一類含氮的堿性有機化合物，有似堿的性質(zhì)，又稱為贗堿，大多數(shù)有復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，氮素多包含在環(huán)內(nèi)，有顯著的生物活性，是中草藥中重要的有效成分之一。具有光學(xué)活性，有些不含堿性而來源于植物的含氮有機化合物，有明顯的生物活性，也包括在生物堿的范圍內(nèi)。目前，已知的生物堿種類很多，約在一萬種左右，有一些結(jié)構(gòu)式還沒有完全確定，它們的結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可分為59種類型。隨著新的生物堿的發(fā)現(xiàn)，分類也將隨之而更新，由于生物堿的種類很多，各具有不同的結(jié)構(gòu)式，因此，彼此間的性質(zhì)會有所差異。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中，提取植物中總生物堿的方法為有機溶劑萃取法和色譜法兩種，色譜法中常用的為硅膠柱色譜、氧化鋁柱色譜和離子交換樹脂三種，上述方法雖然都可以制備總生物堿，但存在產(chǎn)物得率低，雜質(zhì)含量高的問題，并且通過該方法直接得到的總生物堿的藥用性能稍差，不能滿足臨床的研究及應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本申請解決的技術(shù)問題是，現(xiàn)有技術(shù)中對于藏藥塞北紫堇的研究僅集中于抗氧化、消炎、抗心律失常和保護肝傷，進而擴大其應(yīng)用領(lǐng)域，提供一種具有抗癌作用的塞北紫堇總生物喊。
[0006]為此，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0007]—種用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物，所述塞北紫堇總生物堿提取物中總生物堿的含量不低于50wt%,包括β -比枯枯靈、β -hydrystine、10_12wt%的原阿片堿，8_10wt%的α -比枯枯靈和10_15wt%的黃紫堇明堿。
[0008]優(yōu)選的，上述用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物中，所述塞北紫堇總生物堿提取物中總生物堿的含量不低于50wt%,包括β-比枯枯靈、β _hydrystine、llwt%原阿片堿，9wt%a -比枯枯靈和13wt%黃紫堇明堿。
[0009]上述用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物，其中所述抗癌藥物為抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌或肺癌的藥物。
[0010]本發(fā)明還提供了一種塞北紫堇總生物堿的提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用，其中，所述提取物由如下步驟提取，
[0011](I)將塞北紫堇藥材粉碎，并利用50-95%體積濃度的飽和的堿性乙醇或飽和的堿性甲醇，在40-80°C下回流提取，得到塞北紫堇提取液，其中所述飽和的堿性乙醇或所述飽和的堿性甲醇的用量所述塞北紫堇藥材質(zhì)量的7-10倍；
[0012](2)將所述塞北紫堇提取液濃縮、干燥得到塞北紫堇提取物；
[0013](3)向所述塞北紫堇提取物中加入體積濃度為0.5-4%的酸溶液溶解，其中，酸溶液的加入量與所述塞北紫堇提取物的質(zhì)量比為(1-6):1，過濾得到酸水液，向所述酸水液中加入體積濃度為4-15%的堿溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值至9-10，得到酸堿處理液；
[0014](4)向所述酸堿處理液中加入有機溶劑萃取，回收所述有機溶劑并得到塞北紫堇總生物堿粗提物，其中有機溶劑每次的加入量為所述酸堿處理液體積的2-4倍體積量。
[0015](5)取硅膠乙酸乙酯濕法裝柱，并將得到的所述塞北紫堇總生物堿粗提物加乙酸乙酯溶解后上樣，并采用乙酸乙脂洗脫，干燥，得到所需的塞北紫堇總生物堿，其中用于溶解總生物堿粗提物的乙酸乙酯的`用量為其質(zhì)量的1-3倍量，硅膠用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的5-10倍，用于洗脫的乙酸乙酯的用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的50-100倍。
[0016]上述塞北紫堇總生物堿的提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用，其提取步驟如下，
[0017](I)將塞北紫堇藥材粉碎至5-50目，并利用50-95%體積濃度的飽和的堿性乙醇或飽和的堿性甲醇，在40-80°C下回流提取3-8次，得到塞北紫堇提取液，其中所述飽和的堿性乙醇或所述飽和的堿性甲醇的用量所述塞北紫堇藥材質(zhì)量的7-10倍；
[0018](2)將所述塞北紫堇提取液濃縮至清膏、干燥得到塞北紫堇提取物；
[0019](3)向所述塞北紫堇提取物中加入體積濃度為0.5-4%的酸溶液溶解過濾若干次，每次的溶解過濾步驟中，酸溶液的加入量與所述塞北紫堇提取物的質(zhì)量比為(1-6):1，收集過濾得到所有濾液形成酸水液，向所述酸水液中加入體積濃度為4-15%的堿溶液，調(diào)節(jié)溶液PH值至9-10，得到酸堿處理液；
[0020](4)向所述酸堿處理液中加入有機溶劑萃取3-6次，回收所述有機溶劑并得到塞北紫堇總生物堿粗提物，其中有機溶劑每次的加入量為所述酸堿處理液體積的2-4倍體積量。
[0021](5)取硅膠乙酸乙酯濕法裝柱，并將得到的所述塞北紫堇總生物堿粗提物加乙酸乙酯溶解后上樣，并采用乙酸乙脂以每小時1-2個柱體積的洗脫流速進行洗脫，干燥，得到所需的塞北紫堇總生物堿，其中用于溶解總生物堿粗提物的乙酸乙酯的用量為其質(zhì)量的1-3倍量，硅膠用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的5-10倍，用于洗脫的乙酸乙酯的用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的50-100倍，所述干燥步驟為洗脫液先減壓回收乙酸乙酯，然后在60-70°C減壓干燥。
[0022]上述塞北紫堇總生物堿的提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用中，
[0023]所述酸溶液為鹽酸、硫酸、磷酸或醋酸的水溶液；
[0024]所述堿溶液為氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉的水溶液；
[0025]所述有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
[0026]上述塞北紫堇總生物堿的提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用中，其提取物的提取步驟為，
[0027](I)將塞北紫堇藥材粉碎至5-50目，并利用80%體積濃度的飽和的堿性乙醇在40-80°C下回流提取4次，每次提到3小時，得到塞北紫堇提取液，其中飽和的堿性乙醇的加入量為塞北紫堇藥材質(zhì)量的10倍；
[0028](2)將所述塞北紫堇提取液在60°C減壓回收乙醇，再濃縮至清膏狀、噴霧干燥得到塞北紫堇提取物；
[0029](3)向所述塞北紫堇提取物中加入體積濃度為0.5%的鹽酸溶液溶解過濾3次，其中，每次酸溶液的加入量與固體的質(zhì)量比為5:1，合并3次過濾的濾液得到酸水液，向所述酸水液中加入體積濃度為10%的氫氧化鈉水溶液,調(diào)節(jié)溶液pH值至10，得到酸堿處理液；
[0030](4)向所述酸堿處 理液中加入有機溶劑萃取3-6次，回收所述有機溶劑并得到塞北紫堇總生物堿粗提物，其中有機溶劑每次的加入量為酸堿處理液體積的3倍體積量。
[0031](5)取硅膠乙酸乙酯濕法裝柱，并將得到的所述塞北紫堇總生物堿粗提物加乙酸乙酯溶解后上樣，并采用乙酸乙脂以每小時1-2個柱體積的洗脫流速進行洗脫，干燥，得到所需的塞北紫堇總生物堿，其中用于溶解總生物堿粗提物的乙酸乙酯的用量為其質(zhì)量的1-3倍量，硅膠用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的10倍，乙酸乙酯洗脫劑的用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的80倍，所述干燥步驟為洗脫液先減壓回收乙酸乙酯，然后在60-70°C減壓干燥。
[0032]上述塞北紫堇總生物堿的提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用中，所述抗癌藥物為抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌或肺癌的藥物。
[0033]本發(fā)明中采用的50-95%體積濃度的飽和的堿性乙醇或飽和的堿性甲醇的制備方法為，先制備50-95%體積濃度的乙醇或甲醇水溶液，然后向該水溶液中加入氫氧化鈉或氫氧化鉀至飽和，得到所需的50-95%體積濃度的飽和的飽和的堿性乙醇或飽和的堿性甲醇。
[0034]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點，
[0035](I)本發(fā)明提供的提取塞北紫堇總生物堿的方法中，采用50-95%的飽和的堿性乙醇和飽和的堿性甲醇，藥材中的生物堿，尤其是原阿片堿，α-比枯枯靈和黃紫堇明堿在堿性條件下由生物堿鹽轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x生物堿繼而溶于乙醇或甲醇中被提取出來，再加酸水，使得游離生物堿成鹽溶于酸水中，從而與脂溶性成分分離，進一步控制酸堿處理液的PH為9-10，使得生物堿鹽再游離出來，以有機溶劑萃取，從而得到本發(fā)明的總生物堿提取物，采用本發(fā)明所述方法得到的所述的塞北紫堇總生物堿提取物中總生物堿的含量不低于50wt%,包括10_12wt%的原阿片堿,8_10wt%的α -比枯枯靈和10_15wt%的黃紫堇明堿,研究表明該生物堿提取物具用抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌和肺癌的作用。
[0036](2)本發(fā)明提供的提取塞北紫堇總生物堿的方法中，總生物堿粗提物最后以硅膠柱層析技術(shù)進行純化，所用洗脫劑僅有乙酸乙酯，在得到目標產(chǎn)物的同時，溶劑可回收重復(fù)利用，操作簡便，節(jié)約資源。
[0037](3)本發(fā)明提供的提取塞北紫堇總生物堿的方法中，有機溶劑的萃取次數(shù)為3-6次，不僅能夠有效提取殘留于母液中的總生物堿，還能盡量減少萃取次數(shù)增多帶來的能源浪費。
[0038](4)本發(fā)明提供的提取塞北紫堇總生物堿的方法，總生物堿的產(chǎn)率高，總生物堿含量高，雜質(zhì)少，可直接藥用。同時操作簡單，有機溶劑可以重復(fù)使用，有利于在生產(chǎn)上推廣。
[0039]實驗例
[0040]下述實驗例用于證明本發(fā)明的技術(shù)效果。
[0041]以本發(fā)明實施例1中得到的塞北紫堇總生物堿提取物為例，詳述如下，
[0042]塞北紫堇總生物堿提取物收率及含量的測定
[0043]取實施例1中的塞北紫堇總生物堿提取物細粉約50mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入體積份數(shù)比100:1的氯仿-氨水混合溶液50ml,稱定重量,超聲30min,放置過夜，濾過，殘渣加入體積份數(shù)比100:1的氯仿-氨水混合溶液50ml，振搖I小時，濾過，殘渣使用體積份數(shù)比100:1的氯仿-氨水混合溶液洗滌3次，每次15m，濾過；合并上述濾液及洗液，低溫減壓(40°C以下)蒸干，殘渣加入飽和的堿性乙醇IOml使溶解，加入活性炭lg，振搖脫色lOmin，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml至250ml錐形瓶中，精密加入硫酸滴定液(0.01mol/1)15ml、水15ml與甲基紅指示液3滴，使用氫氧化鈉滴定液(0.02mol/l)滴定至黃色。每Iml硫酸滴定液(0.01mol/1)相當(dāng)于7.07mg的原阿片堿(C20H19N05)
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一種用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物，其特征在于，所述塞北紫堇總生物堿提取物中總生物堿的含量不低于50wt%,包括β-比枯枯靈、β-hydrystine、10-12wt%的原阿片堿，8_10wt%的α -比枯枯靈和10_15wt%的黃紫堇明堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物，其特征在于，所述塞北紫堇總生物堿提取物中總生物堿的含量不低于50wt%，包括β-比枯枯靈、β-hydrystine、llwt%原阿片喊,9wt% α -比枯枯靈和13wt%黃紫堇明喊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于制備抗癌藥物的塞北紫堇總生物堿提取物，其特征在于，所述抗癌藥物為抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌或肺癌的藥物。
4.一種塞北紫堇總生物堿的提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述提取物由如下步驟提取， (1)將塞北紫堇藥材粉碎，并利用50-95%體積濃度的飽和的堿性乙醇或飽和的堿性甲醇，在40-80°C下回流提取，得到塞北紫堇提取液，其中所述飽和的堿性乙醇或所述飽和的堿性甲醇的用量所述塞北紫堇藥材質(zhì)量的7-10倍； (2)將所述塞北紫堇提取液濃縮、干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入體積濃度為0.5-4%的酸溶液溶解，其中，酸溶液的加入量與所述塞北紫堇提取物的質(zhì)量比為(1-6):1，過濾得到酸水液，向所述酸水液中加入體積濃度為4-15%的堿溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值至9-10，得到酸堿處理液； (4)向所述酸堿處理液中加入有機溶劑萃取，回收所述有機溶劑并得到塞北紫堇總生物堿粗提物，其中有機溶劑每次的加入量為所述酸堿處理液體積的2-4倍體積量。 (5)取硅膠乙酸乙酯濕法裝柱，并將得到的所述塞北紫堇總生物堿粗提物加乙酸乙酯溶解后上樣，并采用乙酸乙脂洗脫，干燥，得到所需的塞北紫堇總生物堿，其中用于溶解總生物堿粗提物的乙酸乙酯的用量為其質(zhì)量的1-3倍量，硅膠用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的5-10倍，用于洗脫的乙酸乙酯的用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的 50-100 倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的塞北紫堇總生物堿提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于，其提取步驟如下， (1)將塞北紫堇藥材粉碎至5-50目，并利用50-95%體積濃度的飽和的堿性乙醇或飽和的堿性甲醇，在40-80°C下回流提取3-8次，得到塞北紫堇提取液，其中所述飽和的堿性乙醇或所述飽和的堿性甲醇的用量所述塞北紫堇藥材質(zhì)量的7-10倍； (2)將所述塞北紫堇提取液濃縮至清膏、干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入體積濃度為0.5-4%的酸溶液溶解過濾若干次，每次的溶解過濾步驟中，酸溶液的加入量與所述塞北紫堇提取物的質(zhì)量比為(1-6):1，收集過濾得到所有濾液形成酸水液，向所述酸水液中加入體積濃度為4-15%的堿溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值至9-10，得到酸堿處理液； (4)向所述酸堿處理液中加入有機溶劑萃取3-6次，回收所述有機溶劑并得到塞北紫堇總生物堿粗提物，其中有機溶劑每次的加入量為所述酸堿處理液體積的2-4倍體積量。 (5)取硅膠乙酸乙酯濕法裝柱，并將得到的所述塞北紫堇總生物堿粗提物加乙酸乙酯溶解后上樣，并采用乙酸乙脂以每小時1-2個柱體積的洗脫流速進行洗脫，干燥，得到所需的塞北紫堇總生物堿，其中用于溶解總生物堿粗提物的乙酸乙酯的用量為其質(zhì)量的1-3倍量，硅膠用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的5-10倍，用于洗脫的乙酸乙酯的用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的50-100倍，所述干燥步驟為洗脫液先減壓回收乙酸乙酯，然后在60-70°C減壓干燥。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的塞北紫堇總生物堿提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于， 所述酸溶液為鹽酸、硫酸、磷酸或醋酸的水溶液； 所述堿溶液為氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉的水溶液； 所述有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的塞北紫堇總生物堿提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于， (1)將塞北紫堇藥材粉碎至5-50目，并利用80%體積濃度的飽和的堿性乙醇在40-80°C下回流提取4次，每次提到3小時，得到塞北紫堇提取液，其中飽和的堿性乙醇的加入量為塞北紫堇藥材質(zhì)量的10倍； (2)將所述塞北紫堇提取液在60°C減壓回收乙醇，再濃縮至清膏狀、噴霧干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入體積濃度為0.5%的鹽酸溶液溶解過濾3次，其中，每次酸溶液的加入量與固體的質(zhì)量比為5:1，合并3次過濾的濾液得到酸水液，向所述酸水液中加入體積濃度為10%的氫氧化鈉水溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值至10，得到酸堿處理液； (4)向所述酸堿處理液中加入有機溶劑萃取3-6次，回收所述有機溶劑并得到塞北紫堇總生物堿粗提物，其中有機溶劑每次的加入量為酸堿處理液體積的3倍體積量。 (5)取硅膠乙酸乙酯濕法裝柱，并將得到的所述塞北紫堇總生物堿粗提物加乙酸乙酯溶解后上樣，并采用乙酸乙脂以每小時1-2個柱體積的洗脫流速進行洗脫，干燥，得到所需的塞北紫堇總生物堿，其中用于溶解總生物堿粗提物的乙酸乙酯的用量為其質(zhì)量的1-3倍量，硅膠用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的10倍，乙酸乙酯洗脫劑的用量為所述塞北紫堇總生物堿粗提物質(zhì)量的80倍，所述干燥步驟為洗脫液先減壓回收乙酸乙酯，然后在60-70°C減壓干燥。
8.根據(jù)權(quán)利要求4-7任一所述的塞北紫堇總生物堿提取物用于制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述抗癌藥物為抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌或肺癌的藥物。
【文檔編號】A61P35/00GK103623066SQ201310680581
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月12日
【發(fā)明者】李懷平, 魏永義, 王海蘋, 王朔 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司