一種塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期測定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期的測定方法，主要通過在塔里木馬鹿生茸期針對不同年齡段的塔里木馬鹿進行鹿茸生長速度、鹿茸骨密度、外周血(頸靜脈血)及鹿茸中Ca2+含量的測定，以此來推測塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期。本發(fā)明對不同年齡段塔里木馬鹿的鹿茸生長速度、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量進行測定，明確鹿茸及外周血中Ca2+含量的變化規(guī)律，結(jié)合鹿茸生長速度和骨密度的相關(guān)關(guān)系，找出不同年齡段塔里木馬鹿鹿茸的骨化時間，并以此確定最佳收茸期，可為提高鹿茸的藥用價值提供理論依據(jù)。
【專利說明】一種塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期測定方法，屬于鹿茸【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]我國養(yǎng)鹿業(yè)歷史悠久，鹿類資源相當(dāng)豐富。目前馴養(yǎng)鹿的種類有梅花鹿、馬鹿、糜鹿、水鹿、坡鹿等，數(shù)量達100余萬頭。我國養(yǎng)鹿業(yè)主要是以生產(chǎn)鹿茸為目的，飼養(yǎng)種類以馬鹿和梅花鹿為主，馬鹿具有產(chǎn)茸量高，生產(chǎn)可利用年限長的特點。塔里木馬鹿世代棲息在新疆塔里木盆地(時孔民，1995)，它體型偏小、緊湊，產(chǎn)茸量高，耐粗飼，在地理隔離和自然選擇的雙重作用下，繁衍不息。近幾年外商競相搶購塔里木馬鹿鹿茸，說明其藥用價值具有一定的優(yōu)越性，是目前國際市場上的緊俏商品。
[0003]鹿茸的生長，即軟骨骨架上形成骨的過程。Ca是骨形成過程中的重要礦物質(zhì)元素，也是鹿茸中含量最高的礦物質(zhì)元素。生茸期的塔里木馬鹿鹿茸生長迅速，最快每天生長可達2cm左右，部分最終能達到120cm，鹿茸的生長需要大量的礦物質(zhì)元素，尤其是Ca。Ca即是保障生茸期的塔里木馬鹿鹿茸生長的“動力”，又是鹿茸過分骨化，降低藥用價值的“罪魁禍?zhǔn)住?，鹿茸骨化程度與其藥用價值密切相關(guān)，Ca2+含量越高，骨化程度越大，藥效越低。因此，對塔里木馬鹿生茸期鹿茸生長速度、骨密度、血液及鹿茸中Ca2+在時間和空間上的變化規(guī)律進行研究，確定最佳收茸期，有助于提高鹿茸的產(chǎn)量與藥用價值，對我國養(yǎng)鹿業(yè)的發(fā)展具有重要意義。
[0004]目前，國際上對鹿的研究主要是應(yīng)用分子生物學(xué)手段集中在鹿茸方面。英國、德國等國家投入了大量的財力、 物力研究鹿茸的再生及鹿茸干細胞的發(fā)育和調(diào)控機制(Parryet al，1996 ;Sadighi Μ, 2001 ；Mount J G，et al，2006)。而國內(nèi)對鹿茸的機制性研究剛剛開始，研究機構(gòu)較少，主要是中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，但其對鹿茸的研究處于國際同等水平。從外在形態(tài)的變化到分子水平調(diào)控，許多科學(xué)家對鹿茸的生長發(fā)育進行了深入研究(鮑加榮，李春義等，2008)。包括鹿茸如何再生成一個完整的器官(Gu L et al，2007);鹿茸生長組織的快速增殖是如何調(diào)控的(Peter Michael et al，2004);鹿茸干細胞如何受到激活，又是如何終止的；自身或環(huán)境的因素又是如何影響鹿茸干細胞生長發(fā)育的信號通路；哪些信號調(diào)控網(wǎng)絡(luò)參與其中；以及鹿茸的骨化等方面的研究上(Szuwart T et al，1998;Newbery Jff et al, 1989 ;T.Landete-Castillejos et al,2007)。鹿鸞的骨化及最終成為骨角是一種必然的結(jié)果，但迄今為止，對于鹿茸骨化的分子機理還不十分清楚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期測定方法，以便對不同年齡段塔里木馬鹿的鹿茸生長速度、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量的測定，明確鹿茸及外周血中Ca2+含量的變化規(guī)律，結(jié)合鹿茸生長速度和骨密度的相關(guān)關(guān)系，找出不同年齡段塔里木馬鹿的鹿茸骨化時間，并以此確定最佳收茸期。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:[0007]—種塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期的測定方法，主要通過針對不同年齡段的塔里木馬鹿，對鹿茸生長速度、鹿茸骨密度、外周血(頸靜脈血)及鹿茸中Ca2+含量進行測定，以此來推測塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期。
[0008]上述4項指標(biāo)具體檢測方式及過程如下:
[0009](1)塔里木馬鹿鹿茸生長速度的測定步驟為:
[0010]第一步:于試驗期內(nèi)，從塔里木馬鹿脫盤開始，每隔一段時間(t)對每頭塔里木馬鹿鹿茸長度進行測量，即用軟尺從鹿茸基部順延測到主干頂端，至鹿鋸茸時結(jié)束；
[0011]第二步:根據(jù)相鄰兩次測定值hi和h2及間隔天數(shù)t，按照公式V= (h2_hl)/t(其中h1、h2分別為前后兩次測量的茸長度；t為時間間隔)計算出每頭塔里木馬鹿每天的平均日增長速度。
[0012](2)塔里木馬鹿鹿茸骨密度的測定步驟為:以便攜式X射線透射儀對準(zhǔn)鹿茸基部上約3cm處進行拍片，觀察并記錄鹿茸骨密度的變化情況。
[0013](3)塔里木馬鹿外周血中Ca2+含量的測定，具體步驟為:
[0014]第一步:于塔里木馬鹿頸靜脈處采集外周血約10ml ；
[0015]第二步:將采集的無污染、無凝塊的全血于_20°C保存，備測；
[0016]第三步:運用火焰原子吸收分光光度法對血液中Ca2+含量進行測定，具體步驟如下:
[0017]①樣本處理:將采集準(zhǔn)確、無污染、無凝塊的全血，用移液槍準(zhǔn)確吸取適量，加入原子吸收分光光度計專用的稀釋液中，4-8°C保存，測量前l(fā)h將樣本放置于室溫。于血樣中加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在電爐上消解，同時制作空白對照溶液。待樣品完全消解，溶液呈澄清、淺黃色或無色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化鑭溶液2mL，用0.1%鹽酸溶液稀釋至刻度待用。
[0018]②儀器參數(shù)設(shè)定:調(diào)節(jié)儀器的波長、燃氣流量、燈電流、負高壓在合適的范圍內(nèi)。
[0019]③稀釋劑及標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液制備:用優(yōu)級純鹽酸配置體積分?jǐn)?shù)為0.1%的鹽酸，作為鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋劑；配置0.2%氧化鑭溶液作為鈣釋放劑；空白溶液為0.1%鹽酸。
[0020]④樣品含量檢測:制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時將消化好的樣品用原子吸收法按設(shè)定好的儀器參數(shù)對樣品溶液中Ca2+含量進行測定。
[0021]第四步:根據(jù)公式(C_C0)XV1/V2(其中C0為空白濃度，C為樣品測量濃度，VI為定容體積，V2為取樣體積)計算結(jié)果。
[0022](4)塔里木馬鹿鹿茸中Ca2+含量的測定，具體步驟為:
[0023]第一步:將塔里木馬鹿分別于茸生長初期、快速生長期、茸骨化初期、茸骨化后期采集不同部位的鹿茸(上、中、下三段)；鋸茸前以吹管法將馬鹿麻醉后實施鋸茸；
[0024]第二步:將采集的鹿茸于上、中、下三段分別取樣約10g左右，_20°C保存。
[0025]第三步:運用火焰原子吸收分光光度法測定鹿茸中Ca2+含量，按照稱重一消煮一定容一稀釋一上機的步驟，對Ca2+含量進行測定，具體如下:
[0026]①樣本處理:
[0027]鹿茸的處理:稱取約1.5g干燥并粉碎后的鹿茸，加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在電爐上消解，同時制作空白對照溶液。待樣品完全消解，溶液呈澄清、淺黃色或無色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化鑭溶液2mL，用0.1 %鹽酸溶液稀釋至刻度待用。[0028]②儀器參數(shù)設(shè)定:調(diào)節(jié)儀器的波長、燃氣流量、燈電流、負高壓在合適的范圍內(nèi)。
[0029]③稀釋劑及標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液制備:
[0030]用優(yōu)級純鹽酸配置體積分?jǐn)?shù)為0.1%的鹽酸，作為鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋劑；配置
0.2%氧化鑭溶液作為鈣釋放劑；空白溶液為0.1%鹽酸。
[0031]④樣品含量檢測:
[0032]制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時將消化好的樣品用原子吸收法按設(shè)定好的儀器參數(shù)對樣品溶液中Ca2+含量進行測定。
[0033]第四步:根據(jù)公式(C-CO) XV1/V2(其中C0為空白濃度，C為樣品測量濃度，VI為定容體積，V2為取樣體積)計算結(jié)果。
[0034]本發(fā)明方案中，鹿茸是唯一失去后能夠完全再生的器官，生茸期的塔里木馬鹿，鹿茸生長迅速，最快每天可達到2cm左右。鹿茸的生長需要大量的礦物質(zhì)元素，尤其是Ca。骨化過程的關(guān)鍵是血漿中含有正常的[Ca2+]，可見血液中Ca2+含量與鹿茸的生長及骨化具有密切的關(guān)系。本發(fā)明綜合鹿茸生長速率、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量這4個指標(biāo)，能夠確定鹿茸的最佳收茸期。
[0035]該發(fā)明的有益效果在于:塔里木馬鹿的鹿茸具有極高的藥用和保健價值，而其藥用價值的高低直接取決于收茸時間及鹿茸的骨化程度。鹿茸骨化后藥用價值有所下降，其骨化程度取決于Ca2 +的沉積量，以生茸期塔里木馬鹿鹿茸中Ca2+的沉積量為主線開展研究，尋找鹿茸生長期與骨化期的分界線，確定塔里木馬鹿的最佳收茸期，將有助于提高鹿茸的藥用價值。故本發(fā)明對不同年齡段塔里木馬鹿的鹿茸生長速度、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量的測定，明確鹿茸及外周血中Ca2+含量的變化規(guī)律，結(jié)合鹿茸生長速度和骨密度的相關(guān)關(guān)系，找出不同年齡段塔里木馬鹿的鹿茸骨化時間，并以此確定最佳收茸期，可為提高鹿茸的藥用價值提供理論依據(jù)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0036]圖1是本發(fā)明實施例中青年組08-0號5月21日拍攝的馬鹿鹿茸骨密度圖
[0037]圖2是本發(fā)明實施例中青年組08-0號6月3日拍攝的馬鹿鹿茸骨密度圖。
[0038]圖3是本發(fā)明實施例中青年組08-0號6月17日拍攝的馬鹿鹿茸骨密度圖。
[0039]圖4是本發(fā)明實施例中青年組08-0號7月3日拍攝的馬鹿鹿茸骨密度圖。
【具體實施方式】
[0040]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明【具體實施方式】進行描述，以便更好的理解本發(fā)明。
[0041]實施例
[0042]本實施例選擇體質(zhì)健康、胎次相近的老、中、青3個年齡段的塔里木馬鹿各6頭(其中青年組為3-4歲；中年組6-7歲；老年組10-12歲)，編號分組，日喂三次，自由飲水。試驗于2012年3月至7月進行，試驗期內(nèi)觀察記錄塔里木馬鹿的臨床癥狀，并完成了對鹿茸生長速度、骨密度、外周血(頸靜脈血)及鹿茸中Ca2+含量的測定。
[0043]上述4項指標(biāo)具體檢測情況如下:
[0044](1)塔里木馬鹿鹿茸生長速度的測定:[0045](la)測定步驟:
[0046]第一步:于試驗期內(nèi)，從塔里木馬鹿脫盤開始，每隔一段時間(t)對每頭塔里木馬鹿鹿茸長度進行測量，即用軟尺從鹿茸基部順延測到主干頂端，至鹿鋸茸時結(jié)束；
[0047]第二步:根據(jù)相鄰兩次測定值hi和h2及間隔天數(shù)t，按照公式V= (h2_hl)/t(其中h1、h2分別為前后兩次測量的茸長度；t為時間間隔)計算出每頭塔里木馬鹿每天的平均日增長速度。
[0048](lb)塔里木馬鹿鹿茸生長速度測定結(jié)果:
[0049]表1為生茸不同時期3組塔里木馬鹿鹿茸日平均生長速率表。由表1可知:4月2日時，青年組3頭馬鹿均尚未脫盤，而中年組和老年組鹿茸已開始生長；至6月3日中、老年組馬鹿的日平均生長速率均到達最大值，至6月17日兩組中留茸觀察的鹿茸生長速率均降低，推測中、老年組的馬鹿其最佳收茸時間以6月3日為宜。而由表1可知，青年組馬鹿托盤時間明顯晚于中、老年組，對于茸生長速率這個指標(biāo)，其由6月17日至7月3日期間3頭馬鹿均呈下降的趨勢，推測青年組最佳收茸時間以6月17日為宜。
[0050]表1塔里木馬鹿鹿茸生長速率
[0051]
【權(quán)利要求】
1.一種塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期測定方法，其特征在于:主要通過在塔里木馬鹿生茸期內(nèi)針對不同年齡段的塔里木馬鹿進行鹿茸生長速度、鹿茸骨密度、外周血(頸靜脈血)及鹿茸中Ca2+含量的測定，以此來推測塔里木馬鹿鹿茸的最佳收茸期；上述4項指標(biāo)具體檢測方式及過程如下:(1)塔里木馬鹿鹿茸生長速度的測定步驟為:第一步:于試驗期內(nèi)，從塔里木馬鹿脫盤開始，每隔一段時間(t)對每頭塔里木馬鹿鹿茸長度進行測量，即用軟尺從鹿茸基部順延測到主干頂端，至鹿鋸茸時結(jié)束；第二步:根據(jù)相鄰兩次測定值hi和h2及間隔天數(shù)t，按照公式V = (h2-hl)/t (其中hl、h2分別為前后兩次測量的茸長度；t為時間間隔)計算出每頭塔里木馬鹿每天的平均日增長速度；(2)塔里木馬鹿鹿茸骨密度的測定步驟為:以便攜式X射線透射儀(上海博進BJ1-1型)對準(zhǔn)鹿茸基部上約3cm處進行拍片，觀察并記錄鹿茸骨密度的變化情況；(3)塔里木馬鹿外周血中Ca2+含量的測定，具體步驟為:第一步:于塔里木馬鹿頸靜脈處采集外周血約10ml ；第二步:將采集的無污染、無凝塊的全血于_20°C保存，備測；第三步:運用火焰原子吸收分光光度法對血液中Ca2+含量進行測定；第四步:根據(jù)公式(C-CO) XV1/V2(其中C0為空白濃度，C為樣品測量濃度，VI為定容體積，V2為取樣體積)計算結(jié)果；(4)塔里木馬鹿鹿茸中Ca2+含量的測定，具體步驟為:第一步:將塔里木馬鹿分別于茸生長初期、快速生長期、茸骨化初期、茸骨化后期采集不同部位的鹿茸(上、中、下三段)；鋸茸前以吹管法將馬鹿麻醉后實施鋸茸；第二步:將采集的鹿茸于上、中、下三段分別取樣約10g左右，-20°C保存；第三步:運用火焰原子吸收分光光度法測定鹿茸中Ca2+含量，按照稱重一消煮一定容—稀釋一上機的步驟，對Ca2+含量進行測定；第四步:根據(jù)公式(C-CO) XV1/V2(其中C0為空白濃度，C為樣品測量濃度，VI為定容體積，V2為取樣體積)計算結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期測定方法，其特征在于:所述步驟(3)中運用火焰原子吸收分光光度法對血液中Ca2+含量進行測定的具體步驟如下:①樣本處理:將采集準(zhǔn)確、無污染、無凝塊的全血，用移液槍準(zhǔn)確吸取適量，加入原子吸收分光光度計專用的稀釋液中，4-8°C保存，測量前l(fā)h將樣本放置于室溫；于血樣中加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在電爐上消解，同時制作空白對照溶液；待樣品完全消解，溶液呈澄清、淺黃色或無色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化鑭溶液2mL，用0.1%鹽酸溶液稀釋至刻度待用；②儀器參數(shù)設(shè)定:調(diào)節(jié)儀器的波長、燃氣流量、燈電流、負高壓在合適的范圍內(nèi)；③稀釋劑及標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液制備:用優(yōu)級純鹽酸配置體積分?jǐn)?shù)為0.1%的鹽酸，作為鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋劑；配置0.2%氧化鑭溶液作為鈣釋放劑；空白溶液為0.1%鹽酸；④樣品含量檢測:制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時將消化好的樣品用原子吸收法按設(shè)定好的儀器參數(shù)對樣品溶液中Ca2+含量進行測定。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的塔里木馬鹿鹿茸最佳收茸期測定方法，其特征在于:所述步驟(4)中運用火焰原子吸收分光光度法測定鹿茸中Ca2+含量過程具體如下:①樣本處理:稱取約1.5g干燥并粉碎后的鹿茸，加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在電爐上消解，同時制作空白對照溶液；待樣品完全消解，溶液呈澄清、淺黃色或無色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化鑭溶液2mL，用0.1 %鹽酸溶液稀釋至刻度待用；②儀器參數(shù)設(shè)定:調(diào)節(jié)儀器的波長、燃氣流量、燈電流、負高壓在合適的范圍內(nèi)；③稀釋劑及標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液制備:用優(yōu)級純鹽酸配置體積分?jǐn)?shù)為0.1%的鹽酸，作為鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋劑；配置0.2%氧化鑭溶液作為鈣釋放劑；空白溶液為0.1%鹽酸；④樣品含量檢測:制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時將消化好的樣品用原子吸收法按設(shè)定好的儀器參數(shù)對樣品溶液中Ca2+ 含量進行測定。
【文檔編號】A61B6/00GK103690242SQ201310703161
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月12日
【發(fā)明者】趙金香, 矯繼峰, 陶大勇, 蔣濤, 陳榮, 劉利林 申請人:塔里木大學(xué)