竹節(jié)參皂苷Ib制備方法及在制備纖溶酶原激活物抑制劑（PAI-1）的抑制藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其制備主要步驟有：以竹節(jié)參作為原料破碎，用70%乙醇水提取，將提取液濃縮；正丁醇萃取，合并萃取層萃取液，濃縮成0.05-0.1g/ml濃縮液，向濃縮液中加入丙酮為沉淀劑，充分沉淀，減壓干燥得粗提物；取粗提物，經(jīng)MCI錐形吸附色譜富集，以30%乙醇-水混合液除雜，60-80%乙醇-水混合液洗脫，收集洗脫液，干燥得總皂苷；總皂苷經(jīng)錐形硅膠色譜分離，收集相應(yīng)餾分，減壓回收溶劑，干燥，得竹節(jié)參皂苷Ib。竹節(jié)參皂苷Ib具有PAI-1抑制活性，可用于臨床治療血纖紊亂引起的疾病，如深靜脈血栓和冠狀動(dòng)脈心臟病和肺纖維化等。
【專利說明】竹節(jié)參皂苷Ib制備方法及在制備纖溶酶原激活物抑制劑(PA卜1 )的抑制藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及竹節(jié)參中一種齊墩果烷型皂苷-竹節(jié)參皂苷Ib制備方法及在纖溶酶原激活物抑制劑(PA1-1)的抑制藥物方面的應(yīng)用，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]竹節(jié)參為五加科人參屬,植物竹節(jié)參Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根莖。秋季采挖，除去主根及外皮， 干燥。其根狀莖稱“竹節(jié)參”，塊根稱“明七”或“白三七”。含有多種皂苷、揮發(fā)油、糖類和氨基酸。竹節(jié)參主要分布于陜西、甘肅、安徽、浙江、江西、福建、河南、湖南、湖北、廣西、西藏等地。具有補(bǔ)虛強(qiáng)壯；止咳祛痰；散瘀止血；消腫止痛功效。含竹節(jié)人參阜式(chikusetsu-saponin) II1、IV、V，人參阜式(ginsenoside) RcU Re、Rgl、Rg2
坐寸ο
[0003]目前，有關(guān)竹節(jié)參化學(xué)成分的研究報(bào)道較多，但主要集中在化學(xué)成分的研究，楊小林研究了竹節(jié)參皂苷V和總皂苷在制備抗血栓藥物中的應(yīng)用，并申請了中國專利(竹節(jié)參皂苷V或/和總皂苷在制備抗血栓藥物中的應(yīng)用:201010615966.8),該發(fā)明專利，提供了竹節(jié)參皂苷V和總皂苷的制備方法，及其在抗血栓藥物方面的作用和應(yīng)用；楊中林等，研究了竹節(jié)參皂苷IV在制備降血脂藥物中的應(yīng)用，并申請了中國專利(竹節(jié)參皂苷IV在制備降血脂藥物中的應(yīng)用:201310165941.6)，該發(fā)明專利，公開了竹節(jié)參皂苷IV的制備，及在降血脂方面的應(yīng)用。但相關(guān)專利均未涉及竹節(jié)參皂苷Ib的制備，PA1-1抑制劑方面的藥理作用及其相關(guān)制劑制備的研究。
[0004]纖溶酶原激活物抑制劑-1 (PA1-1)是纖溶系統(tǒng)的主要抑制劑之一，纖溶系統(tǒng)包括酶原纖溶酶原，通過兩種組織的類型的纖溶酶原激活劑U-PA或t-PA)之一轉(zhuǎn)化為活性酶(纖溶酶)。PA1-1為U-PA和t-PA的主要抑生理學(xué)制劑。在纖溶系統(tǒng)中，不僅負(fù)責(zé)自循環(huán)中除去纖維蛋白，而且，參與多種其他生物學(xué)過程，包括排卵、胚胎發(fā)生、內(nèi)膜增生、血管生成、腫瘤發(fā)生和動(dòng)脈粥樣硬化。
[0005]PA1-1的水平升高與多種疾病和病癥有關(guān)，包括那些與纖溶系統(tǒng)損傷有關(guān)的疾病和病癥。例如，PA1-1的水平提高與血栓形成疾病有關(guān)，例如與血栓形成為特征的疾病，該血栓形成阻礙了血管內(nèi)血液在局部的流動(dòng)或分離和栓塞了，血液向下的流動(dòng)(Krishnamurti,blood,69,798 (1987);Reilly, Arteriosclerosis and Thrombosis, 11, 1276(1991);Carmeliet, Journal of Clinical investigation, 92, 2756(1993);Rocha, Fibrinolysis, 8, 294,1994; Aznar, Haemostasis, 24, 243(1994) aPA1-1活性的抗體中和導(dǎo)致內(nèi)源性血栓溶解和再灌注的提高(Biemond, Circulation, 91, 1175, (1995) ; Levi, Circulation, 85, 305 (1992)。PA1-1水平升高,也與下列疾病有關(guān):例如:多囊卵巢綜合征(Nordt, Journal of clinicEndocrinology and Metabolism, 85, 4, 1563 (2000);雌激素缺乏誘導(dǎo)的骨丟失(Daci,Journal of Bone and Mineral Research, 15，8，1510 (2000)、囊性纖維化、糖尿病、慢性牙周炎、淋巴瘤、與細(xì)胞外基質(zhì)積聚有關(guān)的疾病、與血管增生有關(guān)的疾病、與新血管生成有關(guān)的惡性疾病、炎性疾病、與感染有關(guān)的血管損傷以及與u-PA水平升高有關(guān)的疾病(例如乳癌和卵巢癌)。
[0006]綜上所述，人類亟需PA1-1活性的抑制劑，在PA1-1水平升高有關(guān)的疾病中使用它們來調(diào)節(jié)PA1-1表達(dá)或活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]發(fā)明提供了一種竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法及在PA1-1抑制劑方面的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。
[0009]1.竹節(jié)參皂 苷Ib的制備方法，包括以下步驟:
[0010](I)將竹節(jié)參原材料破碎，將破碎物料用8-10倍量(W/V) 70%乙醇水溶解提取，得到提取液，收集提取液，過濾，將濾液減壓濃縮，得濃縮液；
[0011](2)將濃縮液加入萃取溶劑反復(fù)萃取1-3次，合并萃取層萃取液，濃縮成
0.05-0.lg/ml萃取濃縮液；
[0012](3)向萃取濃縮液中加入沉淀劑，充分混勻，靜置24h以上，過濾，收集沉淀，減壓干燥得粗提物；
[0013](4)粗提物溶于水，經(jīng)裝填樹脂的錐形吸附色譜富集，用30%乙醇-水混合液洗脫除去雜質(zhì),加入5-8倍量60-80%乙醇-水混合液洗脫，收集洗脫液，回收溶劑,減壓干燥得總皂苷；
[0014](5)按總皂苷1:10-60倍量進(jìn)行錐形層析色譜分離，再以三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脫，收集相應(yīng)餾分，減壓干燥，得竹節(jié)參皂苷Ib0
[0015]所述的濾液減壓濃縮是將濃縮液濃縮至無乙醇。
[0016]所述的萃取溶劑為正丁醇。
[0017]所述的沉淀劑為丙酮，萃取濃縮液和沉淀劑體積比為1:1-2。
[0018]所述的吸附柱色譜分離是MCI吸附柱，總皂苷與MCI的比例為l:l_10(g/g)，洗脫體系為60-80%乙醇水溶液洗脫，合并洗脫液，濃縮干燥得總皂苷。
[0019]所述的錐形層析色譜分離是硅膠層析，總皂苷與硅膠的比例為1:10-60 (g/g)，洗脫體系為三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脫，進(jìn)行等分收集，通過薄層層析檢測，合并洗脫液，濃縮干燥得竹節(jié)參皂苷lb。
[0020]所述的錐形層析柱夾角為15-45°。
[0021]所述的竹節(jié)參皂苷Ib在藥物制劑中的應(yīng)用，是竹節(jié)參皂苷Ib在PA1-1抑制藥物制劑中的應(yīng)用；制劑竹節(jié)參皂苷Ib與一種或多種醫(yī)藥載體/輔料制成固體口服制劑，竹節(jié)參皂苷Ib按照1:1-10重量比與藥物固體賦形劑混合，制備制成固體口服制劑。
[0022]竹節(jié)參皂苷Ib的結(jié)構(gòu)式為
[0023]
【權(quán)利要求】
1.竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將竹節(jié)參原材料破碎，將破碎物料用8-10倍量(W/V)70%乙醇水溶解提取，得到提取液，收集提取液，過濾，將濾液減壓濃縮，得濃縮液； (2)將濃縮液加入萃取溶劑反復(fù)萃取1-3次，合并萃取層萃取液，濃縮成0.05-0.lg/ml萃取濃縮液； (3)向萃取濃縮液中加入沉淀劑，充分混勻，靜置24h以上，過濾，收集沉淀，減壓干燥得粗提物； (4)粗提物溶于水，經(jīng)裝填樹脂的錐形吸附色譜富集，用30%乙醇-水混合液洗脫除去雜質(zhì)，加入5-8倍量60-80%乙醇-水混合液洗脫，收集洗脫液，回收溶劑,減壓干燥得總皂苷; (5)按總皂苷1:10-60倍量進(jìn)行錐形層析色譜分離，再以三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脫，收集相應(yīng)餾分，減壓干燥，得竹節(jié)參皂苷Ib。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其特征在于:所述的濾液減壓濃縮是將濃縮液濃縮至無乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其特征在于:所述的萃取溶劑為正丁醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其特征在于:所述的沉淀劑為丙酮，萃取濃縮液和沉淀劑體積比為1:1-2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其特征在于:所述的吸附柱色譜分離是MCI吸附柱，總皂苷與MCI的比例為1:1-10 (g/g)，洗脫體系為60-80%乙醇水溶液洗脫，合并洗脫液，濃縮干燥得總皂苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其特征在于:所述的錐形層析色譜分離是硅膠層析，總皂苷與硅膠的比例為1:10-60(g/g)，洗脫體系為三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脫，進(jìn)行等分收集，通過薄層層析檢測，合并洗脫液，濃縮干燥得竹節(jié)參皂苷Ib。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，其特征在于:所述的錐形層析柱夾角為15-45°。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹節(jié)參皂苷Ib的制備方法，竹節(jié)參皂苷Ib在藥物制劑中的應(yīng)用，其特征在于:竹節(jié)參皂苷Ib在PA1-1抑制藥物制劑中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的竹節(jié)參皂苷Ib在PA1-1抑制藥物制劑中的應(yīng)用，其特征在于:制劑竹節(jié)參皂苷Ib與一種或多種醫(yī)藥載體/輔料制成固體口服制劑，竹節(jié)參皂苷Ib按照1:1-10重量比與藥物固體賦形劑混合，制備制成固體口服制劑。
【文檔編號(hào)】A61P7/02GK103739651SQ201310726623
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月25日
【發(fā)明者】陳新, 李龍, 劉梁 申請人:武漢輕工大學(xué)