抗炎和抗氧化組合物和相關(guān)使用方法
【專利摘要】提供了具有高抗氧化能力、抗炎作用和/或DNA保護功能的至少一種的組合物。所述組合物包括來自云實屬植物例如刺云實的提取物，刺云實亦稱為塔拉。塔拉提取物可包括在營養(yǎng)補充劑或其它遞送載體中，并給予受試者。還提供了使用所述組合物的方法。
【專利說明】抗炎和抗氧化組合物和相關(guān)使用方法
[0001] 發(fā)明背景 本發(fā)明涉及可提供抗炎作用、抗氧化功能和/或有助于DNA保護的組合物。
[0002] 炎癥通常與外傷性損傷、衰老相關(guān)疾病和/或病況直接有關(guān)。炎癥有時還與其它 病況例如胃腸道疾病、阿爾茨海默?。ˋlzheimer' s disease)、免疫系統(tǒng)缺陷、某些癌癥形 式以及心血管疾病有關(guān)。炎癥可由各種情況、環(huán)境因素和/或遺傳引起。某些情況的一些 實例包括壓力、環(huán)境因素、肥胖癥、糖尿病、慢性感染等。通常與炎癥有關(guān)的環(huán)境因素包括飲 食或營養(yǎng)不良。此外，某些研究表明高單糖和高淀粉飲食以及高飽和反式脂肪飲食，可能與 某些炎癥類型有關(guān)或可引起某些炎癥類型。
[0003] 炎癥還可與體內(nèi)發(fā)生的化學(xué)氧化有關(guān)。例如，多不飽和脂肪的氧化可造成活性氧 物類的形成和一氧化氮的產(chǎn)生。這些產(chǎn)物可能與早期炎癥有關(guān)，并且如果不受控制，則最終 可能導(dǎo)致慢性炎癥。此外，這種活性氧物類可導(dǎo)致DNA損傷和不良突變。
[0004] 各種市售的營養(yǎng)補充劑試圖提供抗炎和抗氧化功能。許多的這類補充劑利用例如 維生素 C、多酚、生育酚等化合物和通常來源于植物材料的其它天然成分。雖然有各種各樣 的這類營養(yǎng)補充劑出售，但是仍有改進空間，特別是有關(guān)將天然源摻入可提供抗氧化或抗 炎作用的組合物中。
[0005] 發(fā)明概沭 組合物提供抗炎作用、抗氧化功能、DNA保護功能的至少一種或前述功能的組合。組合 物可包括有效量的來源于植物云實屬例如刺云實5/7//705?) (亦稱為"塔拉（Tara) "）的提取物。
[0006] 在一個實施方案中，包括塔拉（例如塔拉提取物）的組合物可用來在體內(nèi)對抗炎 癥。任選塔拉可提供提高的抗氧化能力，這進而可中和或減少可能存在于受試者中的自由 基，例如活性氧物類。組合物還任選可用于在體內(nèi)保護DNA免于例如由受試者體內(nèi)的某些 活性氧物類造成的氧化性損傷。
[0007] 在另一個實施方案中，提供通過以足以抑制或消除受試者不同系統(tǒng)和細胞內(nèi)的氧 化的量將包括塔拉的組合物給予受試者而減輕或消除炎癥的方法。任選組合物中和和/或 減少受試者不同系統(tǒng)和細胞內(nèi)的自由基，例如活性氧物類。
[0008] 在又一個實施方案中，提供通過以足以減輕或消除受試者的炎癥的量將組合物給 予受試者而治療炎癥的方法。
[0009] 在再一個實施方案中，提供通過以足以保護DNA的量將組合物給予受試者而保護 DNA即防止因某些活性氧物類所致DNA的突變和/或損傷的方法。
[0010] 參照本發(fā)明的實施方案和附圖的描述，將更完全面的認識和理解本發(fā)明的這些和 其它目的、優(yōu)勢和特征。
[0011] 在詳細描述本發(fā)明的實施方案前，要了解本發(fā)明不限于下列描述給出的或附圖中 說明的操作的詳情或構(gòu)建的詳情和成分的安排。本發(fā)明可以不同的其它實施方案執(zhí)行，并 且可以非本文明確公開的備選方法實施或進行。此外，要了解，本文所用措辭和術(shù)語用于描 述的目的，不應(yīng)視為限制性的。"包括"和"包含"及其變化的使用意在包括其后所列項目及 其等同項目以及其它項目及其等同項目。此外，枚舉可用于描述各種不同的實施方案。除非 另有明確說明，否則枚舉的使用不應(yīng)解釋為將本發(fā)明限于組分的任何特定的順序或數(shù)。枚 舉的使用不應(yīng)解釋為本發(fā)明的范圍不包括可與所枚舉的步驟或組分組合或并入其中的任 何其它的步驟或組分。
[0012] 附圖簡沭 圖1是說明通過給予本發(fā)明實施方案的包括塔拉的組合物而DNA損傷劑量依賴性減少 的示圖。
[0013] 圖2是說明用于DNA保護的最大塔拉有效濃度的示圖。
[0014] 圖3是說明通過給予本發(fā)明實施方案的包括塔拉的組合物抑制已知與炎癥有關(guān) 的酶的示圖。
[0015] 圖4是說明本發(fā)明實施方案的包括塔拉的組合物針對多種主要自由基的抗氧化 能力的示圖。
[0016] 本發(fā)明的實施方案的描沭 本發(fā)明的實施方案基于云實屬的提取物顯示可提高DNA保護功能、抗炎作用和抗氧化 作用的出乎意料的發(fā)現(xiàn)。所研究的具體組合物包括來自云實屬植物（具體地為刺云實） 的提取物，刺云實亦稱為"塔拉"或備選稱為Molina、Kuntze或Spiny Holdback。具體而 言，如圖1所示，當(dāng)給予人成淋巴細胞時，塔拉提取物的組合物對DNA損傷保護提供劑量 依賴性的積極作用。同樣地，如圖3所示，不同劑量的塔拉提取物的組合物對抑制炎性酶 (inhibiting inflammatory enzyme)顯示劑量依賴性的積極作用。另如圖4所示，塔拉提 取物組合物說明針對多種氧化自由基有非常高的活性。以本文的發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)，本發(fā)明的實 施方案涉及包括云實屬植物（例如刺云實、"塔拉"）提取物的組合物，該提取物的量足以在 受試者和任選在有需要的受試者中提供抗炎作用、抗氧化功能和/或有助于DNA保護的至 少一種。
[0017] 如上所述，組合物可包括來自刺云實植物的提取物，然而，預(yù)期云實屬的其它植 物也可在受試者中提供抗炎作用、抗氧化功能和/或有助于DNA保護的至少一種，這樣的 才直4勿?列如 cacalaco^ Caesalpinia californica、Caesalpinia gilliesii、 $ ￠1? {Caesalpinia mexicana)、Caesalpinia platyloba 私備久取{Caesalpinia pulcherrima) 〇
[0018] 一般而言，包括塔拉提取物的組合物可具有任選介于6. 0與約8. 0之間、另任選介 于約6. 5與約7. 5之間的pH和另任選約7. 0的pH或通常實質(zhì)上是中性的。本文所用的塔 拉提取物可市購獲自各種資源，包括但不限于中國云南的云南易門明欣塔拉生物科技開發(fā) 有限公司（Yunnan Yimen Mingxin Tara Biotechnology Development Co.， Ltd)。另夕卜， 可采用任何常規(guī)提取技術(shù)獲得任何合適的塔拉提取物。
[0019] 按組合物的重量計，組合物中的塔拉提取物可以任選約0. 001%-約50%的量存 在，另任選按組合物的重量計以約〇. 1%-約30%的量存在，另任選按組合物的重量計以約 1%-約10%存在。根據(jù)應(yīng)用，可使用其它量的塔拉提取物。
[0020] 塔拉提取物和/或來自合適云實屬植物的其它提取物可單用或彼此聯(lián)用或與其 它成分、提取物和/或賦形劑聯(lián)用。其它合適的提取物可包括選自以下的提取物或成分： 薔薇果、越桔、黑莓、接骨木、酸果蔓、迷迭香、丁子香、小白菊、蕁麻根、洋薊、橄欖提取物、綠 茶提取物（表沒食子兒茶素沒食子酸酯）、葡萄籽提取物、白藜蘆醇、非洲豆蘧 齒葉乳香（boswellia serrata)提取物、boswellia forte、依普黃酮、生育 三烯酚類、月見草油、INM-176、琉璃苣油、磷蝦油、葉黃素的至少一種類型（例如變胞藻黃 素）、生咖啡提取物（綠原酸）和阿魏酸。此外，可通過各種方法包括但不限于Rana等人的 美國專利7, 897, 184 (其通過引用以其整體結(jié)合到本文中）中公開的那些提取方法，從植 物材料中獲得提取物。
[0021] 包括所述提取物的組合物還可包括一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑，例如硅化 微晶纖維素、二氧化硅、硬脂酸、羥丙基甲基纖維素（HPMC)、乳糖、葡萄糖、蔗糖、玉米淀粉、 馬鈴薯淀粉、醋酸纖維素、乙基纖維素等。組合物還可包括稀釋劑和其它添加劑，例如一 種或多種藥學(xué)上可接受的粘合劑、填充劑、載體、增稠劑、味覺改良劑、著色劑、防腐劑、蛋白 質(zhì)、甜味劑、抗微生物劑、螯合劑、惰性氣體、穩(wěn)定劑、調(diào)節(jié)劑、乳化劑或其混合物，這取決于 所采用的組合物的形式。
[0022] 組合物可呈具有不同遞送系統(tǒng)的各種形式。例如，組合物可被加工并納入片劑、膠 囊劑、凝膠片（gel tab)、錠劑、條、顆粒劑、散劑、濃縮物、溶液劑、洗劑、乳膏劑、混懸劑和/ 或其組合中。組合物可口服、通過攝入或在口腔中經(jīng)舌下給予受試者，或可通過呼吸道（例 如通過噴霧劑、細霧劑（mist)或氣霧劑）給予。
[0023] 組合物可單獨配制或與其它食物或營養(yǎng)補充品等組合配制。舉例來說，組合物可 包括片劑形式中組合物的一部分和以膠囊劑形式給予的組合物的另一部分。
[0024] 此外，組合物可按各種不同的時間增量以不同的劑量給予，這取決于所述病況或 組合物的所需作用。例如，組合物可以多個連續(xù)劑量給予，通常間隔約6-約12小時，或間 隔長達約1、2或3周?？山o予每日劑量一天1、2或3次持續(xù)一段時間以獲得某些癥狀（例 如炎癥）的系統(tǒng)緩解?？烧{(diào)整劑量以保持這些系統(tǒng)的緩解。組合物的給予可持續(xù)數(shù)周或數(shù) 月的時間，或任選長期作為營養(yǎng)補充方案的部分。
[0025] 組合物一般可按任何合適的方案給予以便達到所需結(jié)果，例如炎癥減輕、活性氧 物類和/或自由基減少，和/或受試者DNA的突變或損傷減少。此外，組合物的給藥頻率可 取決于若干因素，包括減輕或消除炎癥所需要的水平、抗氧化功能和/或DNA保護。
[0026] -般而言，可將組合物給予患有急性或慢性炎癥的受試者?？赏ㄟ^炎癥的各種常 規(guī)試驗或診斷程序，鑒定受試者患有炎癥。例如，組合物可用來減輕與疾病和/或異常情況 有關(guān)的炎性反應(yīng)。任選組合物可用來減輕與以下疾病有關(guān)的癥狀和/或治療以下疾?。宏P(guān) 節(jié)炎、心血管疾病、骨質(zhì)疏松癥、阿爾茨海默病和外傷性損傷的炎性反應(yīng)或與炎癥有關(guān)的其 它異常情況或疾病，例如疼痛和僵硬。另任選可以治療有效量將組合物給予患有以下至少 一種的受試者：關(guān)節(jié)炎、心血管疾病、骨質(zhì)疏松癥、炎性反應(yīng)和/或與炎癥相關(guān)的病況或疾 病，例如疼痛和/或僵硬。
[0027] 實施例1 為了分析組合物特別是塔拉提取物對DNA保護的作用，進行了測定。為了測試DNA保 護，進行了單細胞凝膠電泳測定，亦稱為彗星測定法（comet assay)，以檢測用塔拉提取物 預(yù)處理的真核細胞、特別是人成淋巴細胞的DNA損傷。彗星測定法描述于Singh等（1988), Ck// TfesearcA，175(1) : 184-191，其通過引用結(jié)合到本文中。在該測定中， 按照Singh等人提供的用于彗星測定法的標準方法制備人成淋巴細胞，并用不同量的塔拉 提取物、具體而言為6. 25Pg、12. 5Pg、25Pg、5(^g、10(^g和20(^g的塔拉提取物預(yù)處理1小 時。細胞經(jīng)洗滌，用1〇〇μΜ的過氧化氫處理20分鐘。用過氧化氫處理的細胞顯示不同水平 的DNA損傷，這取決于用塔拉提取物的預(yù)處理。
[0028] 如圖1中可見，塔拉提取物顯示濃度依賴性DNA保護功能。例如，在較低水平的濃 度下，塔拉提取物不會保護細胞至明顯的程度，因此，過氧化氫略微損傷DNA。然而，用較高 劑量的塔拉提取物處理的細胞受到保護，使得這些細胞的DNA通常保持未受損，如圖1右側(cè) 所示。一般，將任選大于約9(^g-約lOOPg、另任選大于20(^g的水平的劑量的塔拉提取物 給予細胞，顯示非常好的DNA保護。
[0029] 基于這個發(fā)現(xiàn)，認為本文所述組合物可用來在給予組合物的受試者中提供DNA損 傷保護，或一般可保護DNA免于異常突變或受損，使得不能在受試者中適當(dāng)復(fù)制。
[0030] 圖2說明上述和圖1所示彗星測定法中塔拉提取物的有效濃度EC50值。其中可 見塔拉提取物的EC50值為95. 06Pg/mL，此濃度在彗星測定法下提供DNA保護。認為在約 8〇Pg/mL-約12〇Pg/mL的任意范圍內(nèi)、另任選大于12〇Pg/mL、甚至還任選大于200Pg/mL的 給予塔拉提取物的濃度，在彗星測定法下可提供DNA保護。
[0031] 實施例2 為了分析組合物、特別是塔拉提取物對炎癥的作用，進行了下列測定。一般，測量負責(zé) 誘導(dǎo)炎癥的某些酶的抑制以測定塔拉提取物的有效性。具體地講，在該測定中測量MMP1和 MMP9酶抑制。在不同濃度的稀釋的塔拉提取物存在下（如圖3曲線圖各點標示的一樣），將 常規(guī)純化的重組MMP蛋白（市購可獲自北美的EMD Biosciences)與熒光肽底物IX (市購 可獲自 R&D Systems，Minneapolis，Minnesota)混合。用突光讀板儀，具體為 SpectraMax M5讀板儀監(jiān)測熒光肽底物隨時間推移的轉(zhuǎn)化，該讀板儀可市購獲自Molecular Devices， LLC，Sunnyvale，California，United States。收集數(shù)據(jù)，計算各孔的Vmax和百分比控制 (即MMP抑制百分比），并與酶以及底物最大反應(yīng)對照進行比較。
[0032] 根據(jù)圖3所示結(jié)果，塔拉提取物有效地抑制例如所測量的炎癥相關(guān)酶MMP1和 MMP9,特別隨塔拉提取物的濃度增加時。因此，認為含塔拉提取物的組合物可能有效地減輕 和/或抑制受試者的炎性反應(yīng)。
[0033] 實施例3 為了分析組合物、特別是塔拉提取物的抗氧化作用，研究了其中和多種主要自由基的 能力。具體地講，在常規(guī)的過氧化氫、羥基、過氧亞硝酸鹽、超氧化物和單線態(tài)氧（single oxygen)測定中，測試了不同濃度的塔拉提取物。測定包括過氧化氫自由基、輕基自由基、 超氧化物自由基陰離子、單線態(tài)氧和過氧亞硝酸鹽陰離子的各個測試。測定在Brunswick Laboratories，Southborough，Massachusetts進行。米用曲線下面積動力學(xué)分析，例如公 開于 Dubost，0u 和 Beelman，2007 ;Huang，0u，Hampsch-Woodill，F(xiàn)lanagan 和 Prior，2002 ; 011等，2002;011，]^115)8〇11-￥〇〇(1;[11和？1'；[01'，2001;211311〖等，2009 (其通過引用結(jié)合到本文 中）的曲線下面積動力學(xué)分析，針對各參數(shù)量化抗氧化能力。各測定包括使用試劑以產(chǎn)生 特定的RN0S物類（一種還用作測量的分析探針的氧化用靶分子）和待評價的樣品抗氧劑。 使各測定標準化至Trolox，并以微摩爾Trolox當(dāng)量/克樣品（Mmol TE/克）的單位報告。 Huang, D·，0u，B·，Hampsch-Woodill，M·，F(xiàn)lanagan, J. A.和Prior, R. L. (2002)， High-throughput assay of oxygen radical absorbance capacity (0RAC) using a multichannel liquid handling system coupled with a microplate fluorescence reader in 96-well format (使用偶聯(lián)96孔格式的微板突光讀數(shù)器的多通道液體處理系 統(tǒng)對氧自由基吸收能力（0RAC)進行高通量測定）· J Agric Food Chem，50,4437-4444,其 通過引用結(jié)合到本文中。
[0034] 如圖4所示，包括塔拉提取物的組合物顯示針對活性氧物類過氧化氫、羥基、過氧 亞硝酸鹽、超氧化物和單線態(tài)氧的高抗氧化能力。如所示，當(dāng)在類似測定組中分析時，塔拉 提取物的抗氧化能力是酸果蔓的15倍多，是接骨木的3倍多。因此，認為當(dāng)給予受試者時， 包括塔拉提取物的組合物將同樣地顯示顯著的抗氧化作用。
[0035] 上述描述是本發(fā)明的實施方案的描述?？蛇M行各種改動和變化而不偏離隨附權(quán)利 要求書中限定的本發(fā)明的精神和更寬方面，其將按照專利法的包括等同原則在內(nèi)的原則來 解釋。提供本公開內(nèi)容用于說明目的，且本公開內(nèi)容不應(yīng)解釋為本發(fā)明全部實施方案的窮 盡性說明或?qū)?quán)利要求書的范圍限于聯(lián)合這些實施方案說明和描述的有關(guān)具體要素。例如 而不限于，所述發(fā)明的任何個別要素可被提供大致類似的功能或另提供適當(dāng)操作的替代要 素替換。這包括，例如目前已知的替代要素，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員目前已知的替代要素，和 未來可開發(fā)的替代要素，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員在開發(fā)時可認定為替代的那些要素。此外，所 公開的實施方案包括一致描述的和可能協(xié)同提供一系列益處的多個特征。除已發(fā)布的權(quán)利 要求書中另有明確說明外，否則本發(fā)明不僅限于包括所有這些特征或提供所有所述益處的 那些實施方案。任何以單數(shù)提及權(quán)利要求要素時，例如使用冠詞"一個"、"一種"、"特定一 個"或"所述"不得解釋為將要素限于單數(shù)。任何以"X、Y和Z的至少一個"提及權(quán)利要求 要素時，意在包括X、Y或Z各自的任一個和X、Y和Z的任何組合，例如X、Y、Z ;X、Y ;X、Z和 Y、Z。
【權(quán)利要求】
1. 一種用于給予受試者的組合物，所述組合物包含有效減輕受試者的炎癥的量的來自 云實屬植物的提取物。
2. 權(quán)利要求1的組合物，其中所述提取物獲自刺云實5/7//7(053)0
3. 權(quán)利要求2的組合物，其中所述提取物以按組合物的重量計約0. 001%-約50%的量 存在。
4. 權(quán)利要求3的組合物，其中所述提取物以按組合物的重量計約1%-約10%的量存在。
5. 權(quán)利要求4的組合物，所述組合物包含賦形劑和至少一種其它提取物，其中所述組 合物為作為營養(yǎng)補充方案的部分在周期性基礎(chǔ)上給予受試者的營養(yǎng)補充劑的形式。
6. -種用于給予受試者的組合物，所述組合物包含在受試者中有效提供抗氧化作用的 量的云實屬植物的提取物。
7. 權(quán)利要求4的組合物，其中所述提取物獲自刺云實。
8. 權(quán)利要求5的組合物，其中所述提取物以按組合物的重量計約0. 001%-約50%的量 存在。
9. 權(quán)利要求8的組合物，其中所述提取物以按組合物的重量計約1%-約10%的量存在。
10. 權(quán)利要求9的組合物，所述組合物包含賦形劑和至少一種其它提取物，其中所述組 合物為作為營養(yǎng)補充方案的部分在周期性基礎(chǔ)上給予受試者的營養(yǎng)補充劑的形式。
11. 一種用于給予受試者的組合物，所述組合物包含有效抑制和減輕受試者的DNA損 傷的至少一種的量的云實屬植物的提取物。
12. 權(quán)利要求7的組合物，其中所述提取物獲自刺云實。
13. 權(quán)利要求8的組合物，其中所述提取物以按組合物的重量計約0. 001%-約50%的量 存在。
14. 權(quán)利要求8的組合物，其中所述提取物以按組合物的重量計約1%-約10%的量存 在。
15. 權(quán)利要求9的組合物，所述組合物包含賦形劑和至少一種其它提取物，其中所述組 合物為作為營養(yǎng)補充方案的部分在周期性基礎(chǔ)上給予受試者的營養(yǎng)補充劑的形式。
16. -種用于減輕有需要的受試者的炎癥的方法，所述方法包括： 鑒定患有炎癥的受試者； 以有效減輕受試者的炎癥的量將包括云實屬植物的提取物的組合物給予受試者。
17. -種減少受試者中的氧自由基的方法，所述方法包括： 以有效減少存在于受試者中的活性氧物類的量給予包括云實屬植物的提取物的組合 物。
18. -種用于保護受試者的DNA的方法，所述方法包括： 以對受試者有效而減少或削弱DNA損傷和DNA突變的至少一種的量給予包括云實屬植 物的提取物的組合物。
【文檔編號】A61K36/48GK104066434SQ201380007315
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2013年1月28日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月30日
【發(fā)明者】A.拉戈帕爾, J.拉納 申請人:捷通國際有限公司