含有脂肪細胞的細胞制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種對于骨接合部的疾病的治療、及引起變性或損傷的肌肉的修復有用的細胞制劑。本發(fā)明提供一種含有脂肪細胞的用于治療骨接合部的疾病的細胞制劑、以及含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的肌肉修復用細胞制劑。
【專利說明】含有脂肪細胞的細胞制劑

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種對于起因于骨接合部的疾病的疼痛的緩和、及該疾病的治療有用 的細胞制劑。另外，本發(fā)明涉及一種對于變性或損傷的肌肉的修復有用的細胞制劑。

【背景技術】
[0002] 作為使人的軟組織的體積增大的方法，已知有透明質酸注入、脂肪細胞的移植等， 多在面部的皺紋除去、凹陷治療、乳房重建等美容外科、形成外科等領域中使用。然而，通過 透明質酸注入進行的治療雖然容易，但所注入的透明質酸在約半年被吸收，因此，存在缺乏 效果的持續(xù)性這樣的問題。另外，對于脂肪細胞的移植，有時在移植后脂肪細胞在生物體內 壞死或被吸收。因此，存在需要重新手術或根據(jù)情況產(chǎn)生瘢痕這樣的缺點。
[0003] 為了消除這些缺點，提出有脂肪干細胞的移植，開發(fā)有一種有效地分離脂肪干細 胞的方法（例如參照專利文獻1及2)。通過移植脂肪干細胞，改善移植后的細胞的存留率， 對軟組織再生確認到一定的效果。然而，通過這樣的方法得到的脂肪干細胞中有時含有雜 質，其有可能導致脂肪細胞在移植后壞死或發(fā)硬（鈣化）。脂肪細胞一般而言通過脂肪抽吸 得到，但所抽吸的脂肪為除脂肪細胞及脂肪干細胞以外還含有各種雜質的混合物。作為應 從這樣的混合物中除去的雜質，可以舉出：血液（特別是紅血球）、死活細胞、衰老細胞等。 與此相對，提出有一種注入含有使用專利文獻3中所記載的安裝有重力過濾器的注射器經(jīng) 過離心分離從通過脂肪抽吸采集的含有脂肪細胞及脂肪干細胞的混合物中除去了成為鈣 化及脂肪壞死的原因的雜質的健康的濃縮脂肪細胞和脂肪干細胞的細胞制劑（Condensed Rich Fat :CRF(注冊商標））的方法。根據(jù)這樣的方法，細胞的存留率提高，也不易產(chǎn)生硬 塊等問題，因此，正被廣泛接受。
[0004] 如上所述，關于脂肪細胞及脂肪干細胞的分離及濃縮，開發(fā)有各種技術，正在提供 安全且存留性優(yōu)異的脂肪細胞及脂肪干細胞。然而，迄今為止，脂肪細胞及脂肪干細胞的移 植大部分應用于軟組織的再生，對于例如有關關節(jié)痛的緩和及關節(jié)內的組織再生的這些細 胞的有效性未充分進行研究。另外，關于通過向損傷的肌肉給藥脂肪細胞及脂肪干細胞來 進行肌肉的修復也未被知曉。
[0005] 現(xiàn)有技術文獻
[0006] 專利文獻
[0007] 專利文獻1 :日本特表2005-519883號公報
[0008] 專利文獻2 :日本特表2007-509601號公報
[0009] 專利文獻3 :日本特表2007-533396號公報


【發(fā)明內容】

[0010] 發(fā)明所要解決的課題
[0011] 本發(fā)明的主要的目的在于，提供一種對于起因于骨接合部的疾病的疼痛的緩和、 及該疾病的治療有用的細胞制劑。另外，本發(fā)明的其它的目的在于，提供一種對于損傷的肌 肉的修復有用的細胞制劑。
[0012] 用于解決課題的手段
[0013] 本發(fā)明人等為了解決上述課題進行了潛心研究，結果發(fā)現(xiàn)，如果向申訴關節(jié)痛的 患者注入脂肪細胞，則在早期癥狀得到緩和且其效果持續(xù)。進而，發(fā)現(xiàn)如果組合注入脂肪細 胞和脂肪干細胞，則除所述關節(jié)痛的緩和以外，還可高效地再生關節(jié)內的骨組織及軟骨組 織。另外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過向肌肉損傷部位給藥含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞 制劑，可修復損傷的肌肉。本發(fā)明是基于這些見解進一步重復進行了研究而完成的。
[0014] 即，本發(fā)明提供下述樣態(tài)的細胞制劑、骨接合部的疼痛緩和方法、骨接合部的組織 再生方法、肌肉修復方法等。
[0015] 項1. 一種用于治療骨接合部的疾病的細胞制劑，其含有脂肪細胞。
[0016] 項2.根據(jù)項1所述的細胞制劑，其還含有中胚層系干細胞。
[0017] 項3.根據(jù)項1所述的細胞制劑，其中，所述中胚層系干細胞為脂肪干細胞。
[0018] 項4.根據(jù)項1所述的細胞制劑，其中，相對于1個脂肪細胞，含有1?10個中胚 層系干細胞。
[0019] 項5.根據(jù)項1所述的細胞制劑，其中，所述脂肪細胞為經(jīng)Y射線照射的細胞。
[0020] 項6.根據(jù)項1所述的細胞制劑，其中，所述骨接合部的疾病為選自由脊椎疾病、關 節(jié)疾病、自身免疫性疾病及骨壞死癥構成的組中的任一種。
[0021] 項7.含有脂肪細胞的細胞制劑在制造骨接合部的疾病的治療劑中的應用。
[0022] 項8. -種骨接合部的疾病的治療中所使用的含有脂肪細胞的細胞制劑。
[0023] 項9. 一種緩和骨接合部的疼痛的方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的 骨接合部給藥含有脂肪細胞的細胞制劑的工序。
[0024] 項10. -種骨接合部的組織再生方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨 接合部給藥含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑的工序。
[0025] 項11. 一種肌肉修復用細胞制劑，其含有脂肪細胞及中胚層系干細胞。
[0026] 項12.根據(jù)項11所述的細胞制劑，其中，所述中胚層系干細胞為脂肪干細胞。
[0027] 項13.根據(jù)項11所述的細胞制劑，其中，相對于1個脂肪細胞，含有1?10個中 胚層系干細胞。
[0028] 項14.根據(jù)項11所述的細胞制劑，其中，所述脂肪細胞為經(jīng)Y射線照射的細胞。
[0029] 項15.含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑在制造肌肉修復用制劑中的 應用。
[0030] 項16. -種肌肉修復中所使用的含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑。
[0031] 項17. -種肌肉修復方法，其包含向具有肌肉損傷的患者的肌肉損傷部位給藥含 有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑的工序。
[0032] 發(fā)明的效果
[0033] 根據(jù)本發(fā)明的含有脂肪細胞的細胞制劑，可通過脂肪細胞、存在于脂肪細胞周邊 的ECM (細胞外基質）等改善關節(jié)等的滑動而快速緩和關節(jié)痛，可得到起因于骨接合部的疾 病的疼痛緩和優(yōu)異的效果。另外，例如通過向椎間板等注入本發(fā)明的細胞制劑，起到緩沖的 作用，發(fā)揮使椎體的運動良好的（改善的）效果。進而，利用本發(fā)明的細胞制劑得到的關節(jié) 痛的緩和效果長期持續(xù)。
[0034] 另外，根據(jù)含有脂肪細胞和中胚層系干細胞的本發(fā)明的細胞制劑，利用脂肪細胞 緩和起因于骨接合部的疾病的疼痛，其間通過中胚層系干細胞促進骨組織、軟骨組織、軟組 織等關節(jié)內的組織再生。另外，通過組合使用脂肪細胞和中胚層系干細胞，不僅上述疼痛得 到緩和，而且通過脂肪細胞的作用將中胚層系干細胞保持于患部，可更進一步促進中胚層 系干細胞的植入效率及組織再生效率，因此，含有脂肪細胞和中胚層系干細胞的本發(fā)明的 細胞制劑對于骨接合部的疾病的治療進一步有效。
[0035] 另外，含有脂肪細胞和中胚層系干細胞的本發(fā)明的細胞制劑對于因肌肉的變性及 手術導致的肌肉的切除而損傷的肌肉具有優(yōu)異的修復效果。另外，根據(jù)該細胞制劑，可在早 期緩和肌肉損傷導致的疼痛，因此，也有助于患者的Q〇L(Quality of Life)的提高。
[0036] 目前，在采用培養(yǎng)脂肪干細胞等中胚層系干細胞進行組織修復的方法的情況下， 有可能在培養(yǎng)等的過程中被污染（contamination),也有在移植后引起感染癥的擔心。然 而，本發(fā)明的細胞制劑中所含的脂肪細胞及中胚層系干細胞可在不經(jīng)過細胞培養(yǎng)工序的情 況下從抽吸脂肪等中直接分離、濃縮，因此，可在不與大氣接觸的情況下制備。因此，也不存 在感染癥等的擔心。另外，本發(fā)明的細胞制劑通常使用從需要骨接合部的疾病的治療或肌 肉的修復的患者本人采集的脂肪細胞及中胚層系干細胞來制備，因此，沒有免疫排斥反應 的問題，安全性高。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0037] 圖1圖1 (a)為表示給藥細胞制劑前的受試者A的左膝關節(jié)的X射線照片，圖1 (b) 為表示自細胞制劑的給藥開始約1個月后的受試者A的左膝關節(jié)的X射線照片；
[0038] 圖2圖2(a)為表示給藥細胞制劑前的受試者β的左右膝關節(jié)的X射線照片，圖 2 (b)為自細胞制劑的給藥開始約1個月后的受試者Β的左右膝關節(jié)的X射線照片；
[0039] 圖3為表示通過給藥細胞制劑促進骨組織的再生，骨壞死改善、消失的MR圖像的 代表例。

【具體實施方式】
[0040] 1.細朐制劑
[0041] 本發(fā)明提供一種以下的用于治療骨接合部的疾病的細胞制劑、及肌肉修復用細胞 制劑。下面，對各細胞制劑進行詳述。
[0042] (1-1)用于治療骨接合部的疾病的細朐制劑
[0043] 本發(fā)明提供一種用于治療骨接合部的疾病的細胞制劑，其特征在于，含有脂肪細 胞。
[0044] 所謂脂肪細胞（fat cell)為具有合成、儲存、釋放脂肪的功能，形成脂肪組織的細 胞。另外，脂肪細胞由于完全分化，因此，不會引起細胞分裂。脂肪細胞中存在白色脂肪細 胞及褐色脂肪細胞，但在本發(fā)明中可以使用它們的任一者，也可以使用兩者的混合物。在 本發(fā)明中，脂肪細胞的來源沒有特別限定，但例如使用哺乳類的脂肪細胞，優(yōu)選使用靈長類 的脂肪細胞、進一步優(yōu)選使用人脂肪細胞。在本發(fā)明中，作為脂肪細胞，也可以僅單獨使用 脂肪細胞，但也可以使用存在于脂肪細胞周邊的細胞外基質（extracellular matrix :ECM) 和脂肪細胞的混合物。具體而言，在本發(fā)明中，作為脂肪細胞，可以直接使用所采集的脂肪 組織，另外，也可以使用從所采集的脂肪組織中除去了細胞外基質的材料。
[0045] 脂肪細胞可從脂肪組織中采集。作為脂肪組織的采集方法沒有特別限定，可從現(xiàn) 有公知的方法中適宜選擇，但可以舉出例如脂肪抽吸、脂肪切除、除脂術等。從較容易且微 創(chuàng)的方面考慮，優(yōu)選利用脂肪抽吸的采集。作為由所采集的脂肪得到脂肪細胞的方法，沒有 特別限定，但可優(yōu)選舉出：下述2.細胞制劑的制備方法中所記載的方法。
[0046] 另外，本發(fā)明的用于治療骨接合部的疾病的細胞制劑也可以進一步含有中胚層系 干細胞。通過進一步含有中胚層系干細胞，可促進骨接合部中的組織再生，更進一步提高本 發(fā)明的細胞制劑的治療效果。
[0047] 本發(fā)明的細胞制劑中所使用的中胚層系干細胞主要是指分化為骨、軟骨、心肌、月旨 肪等屬于中胚層系的組織的細胞的中間干細胞。中胚層系干細胞的來源沒有特別限定，但 例如使用哺乳類的中胚層系干細胞，優(yōu)選使用靈長類的中胚層系干細胞，進一步優(yōu)選人中 胚層系干細胞。
[0048] 作為中胚層系干細胞，具體而言，可例示脂肪干細胞、骨髄干細胞、造血干細胞等， 這些干細胞可依據(jù)現(xiàn)有公知的方法并根據(jù)細胞的種類由各組織得到。
[0049] 在本發(fā)明中，作為中胚層系干細胞，可優(yōu)選例示脂肪干細胞。脂肪干細胞可從脂肪 組織中采集。成為脂肪干細胞的供給源的脂肪組織與上述的脂肪細胞同樣，可通過脂肪抽 吸、脂肪切除、除脂術等的任一方法采集，但從防止脂肪干細胞的流出或損傷、可更安全地 采集這樣的觀點考慮，優(yōu)選為脂肪抽吸。另外，作為由采集脂肪得到脂肪干細胞的方法，可 優(yōu)選舉出下述2.細胞制劑的制備方法中所記載的方法。
[0050] 在本發(fā)明的細胞制劑含有中胚層系干細胞的情況下，優(yōu)選使用脂肪細胞和中胚層 系干細胞混合存在的狀態(tài)的材料。在本發(fā)明的細胞制劑含有中胚層系干細胞的情況下，作 為細胞制劑中的中胚層系干細胞的含量，只要在可得到骨接合部的疾病的治療效果的范圍 就有特別限定，認為中胚層系干細胞的含量越多，越可得到更進一步優(yōu)異的治療效果，例如 可以舉出：相對于1個脂肪細胞，中胚層系干細胞至少為1個以上，優(yōu)選為5個以上，更優(yōu) 選為1?10個，進一步優(yōu)選為5?10個。另外，在通過包含工序（lc)及（2c)的下述方法 (c)制備的細胞制劑的情況下，可以舉出：每lmL該細胞制劑中所含的中胚層系干細胞數(shù)通 常為10萬個以上，優(yōu)選為15萬個以上，進一步優(yōu)選為15?20萬個。
[0051] 在本發(fā)明的細胞制劑中，出于自身移植的目的，使用源自自身的脂肪細胞（及中 胚層系干細胞），由此除早期的癥狀改善以外，還可以避免免疫排斥反應。但是，并不限制使 用源自他人的脂肪細胞（及中胚層系干細胞）制備本發(fā)明的細胞制劑。在使用源自他人的 細胞的情況下，優(yōu)選相對于在移植前從他人采集的脂肪細胞（包含存在于脂肪細胞周邊的 細胞外基質（ECM))進行例如γ射線照射等用于除去抗原性的處理。中胚層系干細胞通常 為不具有免疫原性的細胞，但也可以根據(jù)需要使用供于上述處理的細胞。
[0052] 作為本發(fā)明的細胞制劑的優(yōu)選的一個例子，可以舉出：含有脂肪細胞和脂肪干細 胞的細胞制劑。通常，脂肪組織中含有脂肪細胞和脂肪干細胞。因此，作為含有脂肪細胞 和脂肪干細胞的細胞制劑，可以直接使用所采集的脂肪組織，另外，也可以使用從所采集的 脂肪組織中除去了雜質（例如在脂肪采集時所注入的麻醉液（所謂膨脹液）、老化的脂肪 細胞、血液、組織液等）的細胞制劑、從所采集的脂肪組織中除去了雜質和一部分的脂肪細 胞的細胞制劑等。作為該細胞制劑的制備方法的優(yōu)選的例子，可以舉出后述的方法（a)? (C)。
[0053] 另外，本發(fā)明的細胞制劑中可以根據(jù)需要添加現(xiàn)有公知的藥學上所容許的載體、 賦形劑、消炎劑、鎮(zhèn)痛劑、免疫抑制劑等。另外，也可以在不損害本發(fā)明的效果的范圍添加膠 原、成纖維細胞、生長因子、增殖因子、細胞因子等。
[0054] 另外，也可以將例如PRP (Platelet Rich Plasma :多血小板血楽）等已知有組織 再生作用的其它的細胞制劑與本發(fā)明的細胞制劑并用。進而，通過在PRP中添加氯沙坦 (Losartan)等血管緊張素 II受體拮抗藥，可更進一步提高軟骨組織的再生效果。但是，從 組織再生效率提高這樣的觀點考慮，在例如期待軟骨組織的再生的情況下，優(yōu)選從PRP中 除去VEGF (血管內皮細胞生長因子）來使用，在期待骨再生的情況下，優(yōu)選除去BMPs (骨形 成蛋白）來使用。
[0055] 本發(fā)明的用于治療骨接合部的疾病的細胞制劑對于骨接合部的疾病發(fā)揮優(yōu)異的 治療效果。所謂骨接合部是指骨的連結部分，包含通過軟骨或軟骨和纖維性結締組織的組 合連接的軟骨性連結、通過軟骨及包裹關節(jié)囊的滑膜進行連接的滑膜性連結、及通過纖維 性結締組織連接的纖維性的連結，但在本發(fā)明中，特別是指通過軟骨性連結及滑膜性連結 連接的具有可動性的部分。作為骨接合部，具體而言，可例示：脊椎關節(jié)、膝關節(jié)、足關節(jié)、足 趾關節(jié)、髖關節(jié)、手關節(jié)、肘關節(jié)、肩關節(jié)、手指關節(jié)、肩鎖關節(jié)、骶髂關節(jié)等。另外，例如在膝 關節(jié)的情況下，韌帶、半月板等軟組織也包含于上述骨接合部，在脊椎關節(jié)的情況下，椎間 盤（椎間板）等也包含于上述骨接合部。
[0056] 另外，所謂骨接合部的疾病，可以舉出：疝?。摮觯?、變形、變性、炎癥等，具體而 言，可例示椎間板疝、變形性脊椎癥等脊椎疾??；變形性關節(jié)癥（包含變形性髖關節(jié)癥、變 形性膝關節(jié)癥等）、慢性關節(jié)癥等關節(jié)疾病；類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾??；膝關節(jié)特 發(fā)性骨壞死癥、股骨頭壞死癥等骨壞死癥等，可優(yōu)選舉出椎間板疝、變形性關節(jié)癥、慢性關 節(jié)癥、膝關節(jié)特發(fā)性骨壞死癥、股骨頭壞死癥。
[0057] 關于本發(fā)明的細胞制劑的給藥量，只要在可得到相對于骨接合部的疾病的治療效 果的范圍就沒有特別限定，可根據(jù)給藥處的大小、疾病的部位、疾病的程度、患者的性別、體 格等適宜設定，例如可以舉出：換算為脂肪細胞數(shù)為10萬?400萬個，優(yōu)選為20萬?200 萬個，進一步優(yōu)選為20萬?100萬個。例如在使用通過包含工序（lc)及（2c)的下述方法 (c)得到的細胞制劑的情況下，可以舉出其給藥量為0. 5?20mL，優(yōu)選為1?10mL，進一步 優(yōu)選為1?5mL。另外，例如可以相對于膝關節(jié)給藥細胞制劑1?20mL、優(yōu)選1?10mL、進 一步優(yōu)選5?10mL。另外，可相對于椎間板給藥細胞制劑0. 5?20mL、優(yōu)選1?15mL、進一 步優(yōu)選1?2mL。
[0058] 作為給藥方法，可以舉出；在骨接合部的疾病處（例如關節(jié)腔、椎間板（椎間圓 板）等）中使用注射器、插管等注入的方法，但并不限定于這些。另外，在注入時，通過用注 射針或插管的前端刺激注入處，可得到更進一步優(yōu)異的治療效果。刺激的方法沒有特別限 定，例如可以舉出：使前端被傾斜切斷的插管在注入細胞制劑時前后左右旋轉來刺激注入 部位的方法。
[0059] 在對具有這些疾病的患者給藥本發(fā)明的細胞制劑的情況下，可以根據(jù)需要在利 用公知的方法進行處置后給藥。例如如果為椎間板疝的情況，則可以將脫出的椎間板用 PLDD (Percutaneous Laser Disc Decompression)等現(xiàn)有公知的方法除去后，給藥（注入） 本發(fā)明的細胞制劑。通過本發(fā)明的細胞制劑中所含的脂肪細胞的作用，起因于骨接合部的 疾病的疼痛（關節(jié)痛）得到緩和，進而，在含有中胚層系干細胞的情況下，通過該細胞的作 用，可再生骨接合部中的骨組織、軟骨組織、軟組織等。
[0060] (1-2)肌肉修復用細朐制劑
[0061] 本發(fā)明提供一種可在肌肉損傷部位修復肌肉的細胞制劑，其特征在于，含有脂肪 細胞及中胚層系干細胞。
[0062] 關于本發(fā)明的肌肉修復用細胞制劑中所使用的脂肪細胞及中胚層系干細胞、以及 細胞制劑中的兩者的含量等，如上述"（1-1)用于制造骨接合部的疾病的細胞制劑"的欄中 所記載所述。另外，作為本發(fā)明的肌肉修復用細胞制劑的優(yōu)選的樣態(tài)，可例示含有脂肪細胞 和作為中胚層系干細胞的脂肪干細胞的細胞制劑。作為得到脂肪干細胞的方法，可以舉出 例如下述2.細胞制劑的制備方法中所記載的方法。
[0063] 另外，在肌肉修復用細胞制劑中，除脂肪細胞及中胚層系干細胞以外，還可以根據(jù) 需要添加現(xiàn)有公知的藥學上允許的載體、賦形劑、消炎劑、鎮(zhèn)痛劑、免疫抑制劑等。另外，也 可以在不損壞本發(fā)明的效果的范圍添加膠原、成纖維細胞、生長因子、增殖因子、細胞因子 等。
[0064] 另外，只要不損壞本發(fā)明的效果，貝U也可以將例如PRP(Platelet Rich Plasma :多 血小板血漿）等已知有組織再生作用的其它的細胞制劑與本發(fā)明的細胞制劑并用。但是， 從更進一步提高肌肉組織的再生效率的觀點考慮，優(yōu)選除去轉化生長因子i3 1(TGFi3 1)而 使用。
[0065] 本發(fā)明的肌肉修復用細胞制劑在應用于肌肉損傷部位時發(fā)揮優(yōu)異的肌肉修復效 果。肌肉損傷除肌肉變性、肌肉的纖維化、肌肉纖維的破壞及壞死、肌肉萎縮、肌肉麻痹、肌 無力等以外，也包含因手術或外傷等切除肌肉的情況。另外，應用本發(fā)明的細胞制劑的肌 肉的部位及種類沒有特別限定，例如可以舉出：軀干肌肉（包含上肢或下肢的肌肉、大胸 ?。┑裙歉窦。话螂桌s肌等平滑肌；心肌。例如通過對上肢的肌肉的損傷部位給藥本發(fā) 明的細胞制劑，肌肉損傷所致的疼痛在早期得到緩和，進而，通過修復肌肉，可實現(xiàn)上肢的 ROM (Range of Motion :關節(jié)可動域）的擴大及運動功能的改善。另外通過對膀胱括約肌的 肌無力或損傷等所致的尿失禁、頻尿等呈現(xiàn)排尿障礙的患者的膀胱括約肌給藥本發(fā)明的細 胞制劑，可提高膀胱括約肌的肌肉力量而安全且容易地消除尿失禁、漏尿等問題。另外，也 可以應用于具有心肌梗塞、缺血再灌注損傷、肌肉萎縮（例如Duchenne肌肉萎縮（DMD))、肌 炎（肌?。┑燃∪饧膊〉幕颊叩募∪鈸p傷部位。
[0066] 另外，肌肉損傷多伴有疼痛，但通過對肌肉損傷部位給藥本發(fā)明的肌肉修復用細 胞制劑，可在早期緩和疼痛。并不期望本發(fā)明的限定性的解釋，但認為這樣的疼痛緩和效果 取決于肌肉修復用細胞制劑中所含的脂肪細胞。
[0067] 出于肌肉修復的目的使用本發(fā)明的細胞制劑時的給藥量只要在可得到肌肉修復 效果的范圍就沒有特別限定，可根據(jù)給藥處的大小、疾病的部位、疾病的程度、患者的性別、 體格等適宜設定。例如作為損傷肌肉的每單位容積10mL的給藥量，可以舉出：換算為脂肪 細胞數(shù)為10?400萬個，優(yōu)選為20?200萬個，進一步優(yōu)選為20?100萬個。另外，在使 用通過包含工序（lc)及（2c)的下述方法（c)得到的細胞制劑的情況下，可以舉出例如損 傷肌肉的每單位容積10mL為0. 5?20mL，優(yōu)選為1?10mL，進一步優(yōu)選為1?5mL。
[0068] 出于肌肉修復的目的使用本發(fā)明的細胞制劑時的給藥方法沒有特別限定，可以采 用現(xiàn)有公知的給藥方法，例如可以舉出：用注射器、插管等向肌肉損傷部位注入的方法。
[0069] 2.細朐制劑的制各方法
[0070] 在本發(fā)明中，可以采集脂肪細胞，根據(jù)需要進行分離、濃縮，制備成本發(fā)明的細胞 制劑。另外，在制備含有脂肪細胞和中胚層系干細胞的細胞制劑的情況下，可以使用以這些 細胞的混合物的形式采集的材料，也可以分別采集各自的細胞，然后，混合兩者而制成本發(fā) 明的細胞制劑。例如在中胚層系干細胞為脂肪干細胞的情況下，由于可以由與脂肪細胞相 同的組織同時制備且簡單，因此，可以由脂肪組織得到脂肪細胞和脂肪干細胞的混合物，優(yōu) 選制成本發(fā)明的細胞制劑。另外，更簡單而言，也可以使用含有這些細胞的脂肪組織。
[0071] 在由脂肪組織制備本發(fā)明的細胞制劑的情況下，作為優(yōu)選的方法，可例示下述方 法（a)?（c)。但是，并不限制由脂肪以外的組織制備本發(fā)明的細胞制劑，即使在由脂肪組 織以外的組織（例如血液、骨髓液、肌肉等）制備本發(fā)明的細胞制劑的情況下，也可以依據(jù) 下述方法，考慮細胞的種類及性質，適宜設定條件來制備本發(fā)明的細胞制劑。以下，對方法 (a)?（c)分別進行詳述。
[0072] 方法（a)
[0073] 制備本發(fā)明的細胞制劑的方法（a)包含（la)從所采集的脂肪中除去液體級分，得 到細胞級分的工序。
[0074] 在此，所采集的脂肪是指通過脂肪抽吸、脂肪切除、除脂術等從脂肪組織中所采集 的源自脂肪組織的細胞級分及液體級分的混合物。細胞級分中包含脂肪細胞、脂肪干細胞 及雜質（血球、死活細胞、衰老細胞等）。另外，液體級分中包含膨脹液、細胞組織液等。
[0075] 液體級分和細胞級分的分離簡單而言可通過將所采集的脂肪靜置使細胞級分沉 降來分離。液體級分的除去方法沒有特別限定，例如可以舉出：傾析、抽吸等。另外，也可以 根據(jù)需要進行離心分離、過濾等。
[0076] 離心分離及過濾的條件只要不會使脂肪細胞及脂肪干細胞損傷，且可除去雜質就 沒有特別限定，例如可以舉出：700?2500 X g且1?15分鐘、優(yōu)選2000?2200 X g且5? 10分鐘的條件。
[0077] 另外，如果在進行過濾的情況下，可以使所采集的脂肪通過具有例如10? 300 μ m、優(yōu)選10?150 μ m、更優(yōu)選10?100 μ m、進一步優(yōu)選15?20 μ m的孔大小的網(wǎng)格 狀過濾器來除去在采集血液、組織液、脂肪處所給藥的麻醉藥（膨脹液）等，在過濾器上得 到脂肪細胞及脂肪干細胞的混合物。另外，也可以在備有這樣的網(wǎng)格狀過濾器的容器中填 充所采集的含有雜質的脂肪，供于離心分離。
[0078] 這樣，可得到除去了液體級分的含有脂肪細胞（包含細胞外基質）及脂肪干細胞 的脂肪組織，可將其用作本發(fā)明的細胞制劑。
[0079] 方法（b)
[0080] 制備本發(fā)明的細胞制劑的方法（b)的特征在于，包含下述工序。
[0081] (lb)從所采集的脂肪中除去液體級分，得到細胞級分的工序；及
[0082] (2b)從上述工序（lb)中得到的細胞級分的至少一部分中分離脂肪細胞和脂肪干 細胞的工序。
[0083] 在此，工序（lb)如上述方法（la)中記載所述。在工序（2b)中，在制備含有脂肪細 胞的細胞制劑的情況下，將工序（lb)中得到的全部細胞級分供于工序（2b)的處理，可以僅 使用所分離的脂肪細胞。另外，在制備含有脂肪細胞和脂肪干細胞的細胞制劑的情況下，從 工序（lb)中得到的細胞級分的至少一部分、優(yōu)選一半量中分離脂肪干細胞，進而將其添加 在工序（lb)中得到的細胞級分中，由此可以制成含有脂肪細胞和脂肪干細胞的細胞制劑。
[0084] 在此，作為分離脂肪干細胞的方法，例如可以舉出：專利文獻1中記載的方法。更 具體而言，為了通過分解細胞間的結合來易于分離脂肪細胞和脂肪干細胞，在細胞級分中 添加蛋白質分解酶。作為蛋白質分解酶，可例示：膠原酶、胰蛋白酶、脂酶等，可以單獨使用 選自它們中的1種，也可以組合使用2種以上。
[0085] 作為從經(jīng)酶處理的細胞級分中分離脂肪細胞和脂肪干細胞的方法，沒有特別限 定，可從現(xiàn)有公知的方法中適宜選擇，例如可以舉出離心分離、過濾等。作為離心分離的 條件，只要可不損傷脂肪細胞及脂肪干細胞地分離就沒有特別限定，例如可以舉出：1〇〇? 500Xg且1?20分鐘、優(yōu)選100?300Xg且5?10分鐘的條件。通過供于這樣的離心分 離，可以以沉淀物的形式得到脂肪干細胞，在上清液中將脂肪細胞濃縮。另外，如果在進行 過濾的情況下，可通過使細胞級分或其懸浮液通過具有10?1〇〇 μ ΠΚ優(yōu)選10?50 μ m、進 一步優(yōu)選15?20 μ m的孔大小的網(wǎng)格狀過濾器在過濾器上得到脂肪干細胞，可在濾液中得 到脂肪細胞。
[0086] 經(jīng)酶處理的脂肪細胞及脂肪干細胞優(yōu)選在分離后供于清洗處理，清洗通過磷酸緩 沖溶液（PBS)、生理鹽水、林格氏液、葡聚糖等來進行。清洗處理可根據(jù)需要重復多次，也可 以在清洗后回收細胞時，根據(jù)需要供于離心分離。作為離心分離的條件，只要依據(jù)在從上述 的經(jīng)酶處理的細胞級分中分離脂肪細胞和脂肪干細胞時所采用的條件即可。
[0087] 將本工序（2b)中所分離的脂肪細胞清洗后，可用作本發(fā)明的細胞制劑。使用本方 法（b)中得到的脂肪細胞得到的本發(fā)明的細胞制劑對于起因于骨接合部的疾病的疼痛的 緩和發(fā)揮優(yōu)異的效果。
[0088] 進而，本方法（b)在上述工序（2b)之后，也可以包含將上述工序（lb)中得到的細 胞級分和工序（2b)中得到的脂肪干細胞混合的工序（3b)。在本工序（3b)中，可以將工序 (lb)中得到的細胞級分和工序（2b)中得到的脂肪干細胞混合，得到含有脂肪細胞及脂肪 干細胞的細胞制劑。如上制備的細胞制劑以高濃度含有脂肪干細胞，不僅對于起因于骨接 合部的疾病的疼痛的緩和有效，而且，可以相對于骨接合部的組織再生發(fā)揮優(yōu)異的效果。另 夕卜，含有這樣的脂肪細胞及脂肪干細胞的細胞制劑可以相對于損傷的肌肉發(fā)揮優(yōu)異的肌肉 修復效果，并且對于起因于肌肉損傷的疼痛的緩和也發(fā)揮優(yōu)異的效果。
[0089] 方法（c)
[0090] 制備本發(fā)明的細胞制劑的方法（c)包含下述工序：
[0091] (lc)從所采集的脂肪中除去液體級分，得到細胞級分的工序；以及
[0092] (2c)從上述工序（lc)中得到的細胞級分中除去雜質，得到脂肪細胞及脂肪干細 胞的濃縮物的工序。
[0093] 在此，關于工序（lc)，如上述方法（la)中記載所述。在工序（2c)中，從細胞級分 中除去雜質進行濃縮。作為雜質除去及濃縮的方法，沒有特別限定，可從現(xiàn)有公知的方法中 適宜選擇，簡單而言，通過使用具備例如專利文獻3中所記載的重力過濾器的注射器，可以 除去從破裂的脂肪細胞中游離的游離油、死活細胞、衰老細胞等雜質，得到健康的脂肪細胞 及脂肪干細胞的濃縮物。這樣的注射器可商業(yè)獲得，具體而言，可例示LIPOMAX-SC用中所 制造的注射器（Medikan Corp.制，韓國首爾）。
[0094] 更具體而言，在內部具備過濾器的注射器中填充所采集的脂肪，通過離心分離將 脂肪分離為液體級分和細胞級分，進而，利用過濾器分離游離油（排液油）。在此所分離的 液體級分在工序（lc)中不會完全分離而混合存在于細胞級分中。即，在注射器中，在上層 分離有游離油、在中間層中分離有脂肪細胞及脂肪干細胞的濃縮物以及在下層分離有液體 級分，通過將中間層以外廢棄，可得到健康的脂肪細胞及脂肪干細胞的濃縮物，可將其用作 本發(fā)明的細胞制劑。如上得到的細胞制劑濃縮、選擇有健康的脂肪細胞和脂肪干細胞，因 此，不易產(chǎn)生移植后的壞死、鈣化等，對于骨接合部的疾病的癥狀的緩和及治療、以及損傷 的肌肉的修復及肌肉損傷所致的疼痛的緩和進一步有用。
[0095] 作為用于將上述脂肪分離為液體級分和細胞級分的離心分離的條件，只要為不會 損傷脂肪細胞及脂肪干細胞，且可分離雜質和脂肪細胞及脂肪干細胞的條件就沒有特別限 定，例如可以舉出：700?2500Xg且1?15分鐘、優(yōu)選2000?2200Xg且5?10分鐘的 條件。
[0096] 另外，過濾器的孔大小只要為脂肪細胞及脂肪干細胞不會通過、且雜質可通過的 程度就沒有特別限定，例如為10?300 μ m，優(yōu)選為10?150 μ m，更優(yōu)選為10?100 μ m，進 一步優(yōu)選為15?20 μ m。
[0097] 另外，本方法（c)也可以含有工序（3c'），所述工序（3c'）從工序（2c)中得到的 濃縮物的至少一部分中分離脂肪細胞和脂肪干細胞，將得到的脂肪干細胞進一步混合在上 述工序（2c)中得到的濃縮物中。脂肪干細胞的分離的方法如上述方法（b)的工序（2b)中 記載所述。在本工序（3c'）中，在使用蛋白質分解酶分離脂肪干細胞的情況下，每lcc工序 (2c)中得到的濃縮物，通?？傻玫郊s70萬個以上、優(yōu)選約150萬個以上、進一步優(yōu)選約200 萬個以上的脂肪干細胞。經(jīng)過本工序（3c'）制備的細胞制劑除選擇、濃縮有健康的脂肪細 胞以外，還以高濃度含有脂肪干細胞，因此，可以相對于骨接合部的疾病的治療、及損傷的 肌肉的修復發(fā)揮更進一步優(yōu)異的治療效果。
[0098] 另外，可以將本工序（3c'）中所分離的脂肪細胞在清洗后用作本發(fā)明的細胞制 齊U。在此得到的脂肪細胞由于選擇、濃縮有健康的脂肪細胞，因此，可以對于起因于骨接合 部的疾病或肌肉損傷的疼痛的緩和發(fā)揮進一步優(yōu)異的效果。
[0099] 另外，本方法（c)也可以含有工序（3c")，所述工序（3c"）在上述工序（2c)之后， 將得到的濃縮物中的脂肪細胞微細化，將微細化的脂肪細胞及脂肪干細胞以混合物的形式 分離。脂肪細胞的微細化可通過該【技術領域】中通常采用的方法進行，沒有特別限定，例如根 據(jù)需要利用鉆頭等將脂肪細胞切割后，將微細化的脂肪細胞和脂肪干細胞的混合物分離。 作為分離方法，可以采用上述離心分離的條件。在進行本工序（3c"）時，在上述工序（2c) 之后，將濃縮物直接填充在注射器中，供于脂肪細胞的微細化及離心分離。離心分離后，在 注射器中分離有游離油和微細化的脂肪細胞及脂肪干細胞的混合物，因此，將游離油廢棄， 可得到微細化的脂肪細胞及脂肪干細胞的混合物。
[0100] 通過經(jīng)過這樣的分離工序，可制備以高濃度含有微細的脂肪細胞和脂肪干細胞的 細胞制劑。在此，微細的脂肪細胞是指具有可通過26?30G (Gauge)、優(yōu)選18?30G的注射 針的程度的大小的脂肪細胞。在本工序（3c"）中，可以進行至少1次、優(yōu)選1?多次、更優(yōu) 選1?2次將脂肪細胞微細化的處理。通過將脂肪細胞微細化，可以提高細胞制劑的每單 位容積的脂肪干細胞的濃度，可更進一步顯著地發(fā)揮源自骨接合部的疾病或肌肉損傷的疼 痛的緩和效果、骨接合部內的組織再生效果、及肌肉修復效果。
[0101] 另外，也可以含有工序（4c"），所述工序（4c"）從工序（3c"）中得到的微細化的 脂肪細胞和脂肪干細胞的混合物的至少一部分中分離脂肪干細胞，將得到的脂肪干細胞混 合在上述工序（2c)中得到的濃縮物中。脂肪干細胞的分離的方法如上述方法（b)的工序 (2b)中記載所述。
[0102] 將通過本工序（4c"）分離脂肪干細胞而得到的脂肪細胞清洗后，可用作本發(fā)明的 含有脂肪細胞的細胞制劑。清洗可通過對上述的脂肪干細胞進行清洗處理同樣的方法進 行。在此得到的脂肪細胞由于選擇、分離有健康的微細化的脂肪細胞，因此，對于起因于骨 接合部的疾病或肌肉損傷的疼痛的緩和發(fā)揮進一步顯著優(yōu)異的效果。
[0103] 在本方法（c)中，通過使用專利文獻3中所記載的注射器，可以在不使細胞與大氣 接觸的情況下實施全部工序。例如，在專利文獻3中所記載的注射器上安裝插管等并填充 通過脂肪抽吸采集的脂肪，直接供于雜質的除去及濃縮處理等，可以得到細胞制劑。然后， 在給藥細胞制劑時，也可以從注射器直接移至用于注入細胞制劑的注射器，對患部進行給 藥，因此，可以制成沒有污染等問題的安全性高的細胞制劑。簡單而言，也可以使用可商業(yè) 獲得的試劑盒進行本方法（c)，作為這樣的試劑盒，具體而言，可例示LIPOMAX-SC(MEDIKAN Corp.制）等。
[0104] 通過以上的任一方法，均可以得到本發(fā)明的細胞制劑，但優(yōu)選為含有經(jīng)過優(yōu)選方 法（b)或（c)，更優(yōu)選方法（c)、進一步優(yōu)選方法（c)的工序（3"）或工序（4"）制備的微 細化的脂肪細胞的細胞制劑。含有經(jīng)過方法（c)的工序（4"）得到的微細化的脂肪細胞的 細胞制劑除去雜質，以高濃度含有微細化的健康的脂肪細胞，對于骨接合部的疾病的治療 (特別是疼痛的緩和）發(fā)揮顯著的效果。含有經(jīng)過方法（c)的經(jīng)過工序（3"）得到的微細 化的脂肪細胞及脂肪干細胞的細胞制劑除微細化的健康的脂肪細胞以外，以高濃度含有脂 肪干細胞。這樣的細胞制劑對于骨接合部的疾病的治療、及肌肉修復發(fā)揮進一步顯著優(yōu)異 的效果。
[0105] 3.起閔于骨接合部的疾病的疼痛緩和方法
[0106] 本發(fā)明提供一種緩和骨接合部的疼痛的方法，特征在于，包含向具有骨接合部的 疾病的患者的骨接合部給藥含有脂肪細胞的細胞制劑的工序。
[0107] 關于本發(fā)明的緩和疼痛的方法中所使用的脂肪的采集方法、脂肪細胞的分離方 法、細胞制劑的制備方法、對患者的給藥方法等，如上述"1.細胞制劑"及"2.細胞制劑的制 備方法"的欄中記載所述。在本發(fā)明的緩和疼痛的方法中，對需要緩和骨接合部的疼痛的 患者給藥治療有效量的細胞制劑。給藥形態(tài)沒有特別限定，可根據(jù)期待疼痛緩和的位置、范 圍、患者的年齡等從現(xiàn)有公知的方法中適宜選擇。
[0108] 4.骨接合部的鉬織再牛方法
[0109] 本發(fā)明提供一種骨接合部的組織再生方法，其特征在于，包含向具有骨接合部的 疾病的患者的骨接合部給藥含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑的工序。
[0110] 關于本發(fā)明的組織再生方法中所使用的脂肪的采集方法、中胚層系干細胞的分離 方法、細胞制劑的制備方法、對患者的給藥方法等，如上述"1.細胞制劑"及"2.細胞制劑的 制備方法"的欄記載所述。在本發(fā)明的組織再生方法中，向需要組織再生的患者給藥治療有 效量的細胞制劑。給藥形態(tài)沒有特別限定，可根據(jù)期待再生的組織的種類、位置、范圍、患者 的年齡等從現(xiàn)有公知的方法中適宜選擇。
[0111] 5.肌肉修復方法
[0112] 本發(fā)明提供一種肌肉修復方法，其特征在于，包含向具有肌肉損傷的患者的肌肉 損傷部位給藥含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑的工序。
[0113] 關于本發(fā)明的肌肉修復方法中所使用的脂肪的采集方法、中胚層系干細胞的分離 方法、細胞制劑的制備方法、對患者的給藥方法等，如上述"1.細胞制劑"及"2.細胞制劑的 制備方法"的欄中記載所述。在本發(fā)明的肌肉修復方法中，向需要肌肉修復的患者的肌肉損 傷部位給藥治療有效量的細胞制劑。給藥形態(tài)沒有特別限定，可根據(jù)期待肌肉修復的位置、 范圍、患者的年齡等從現(xiàn)有公知的方法中適宜選擇。
[0114] 6.其它
[0115] 本發(fā)明提供含有脂肪細胞的細胞制劑在制造骨接合部的疾病的治療劑中的應用、 用于骨接合部的疾病的治療的含有脂肪細胞的細胞制劑。進而，本發(fā)明提供含有脂肪細胞 及中胚層系干細胞的細胞制劑在制造肌肉修復劑中的應用、以及用于肌肉修復的含有脂肪 細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑。關于脂肪細胞、中胚層系干細胞、細胞制劑、骨接合部 的疾病、肌肉損傷等，如上所述。
[0116] 實施例
[0117] 細朐制劑的制各
[0118] 細胞制劑的制備使用LIPOMAX_SC(Medikan Corp.制，韓國首爾）試劑盒。在本細 胞制劑的制備工序中，可在使細胞完全不與大氣接觸的情況下進行。具體的方法如下所述。
[0119] (i)使用注射器（LIP0MAX-SC用中所制造的注射器：Medikan Corp.制，韓國首爾） 由各受試者進行脂肪抽吸。將含有所采集的脂肪的注射器在約10分鐘室溫（約25°c )下 靜置，分離成細胞級分和液體級分，將含有膨脹液的液體級分作為廢液。將剩余的細胞級分 作為脂肪組織使用于試驗例2。然后，將注射器以2200Xg進行8分鐘離心分離。通過離心 分離分離為上層（游離油）、中間層（脂肪細胞及脂肪干細胞）、下層（細胞組織液等液體 級分）這三層。然后，僅將中間層殘留在注射器內并廢棄上下層，由此得到脂肪細胞和脂肪 干細胞的濃縮物。對該濃縮物進行凝膠化（Gelling)處理，進行較大的脂肪細胞的微細化。 凝膠化處理進行1?3次。凝膠化使用鉆頭（Filler Geller Cutter :MEDIKAN公司制）切 割脂肪細胞進行微細化，進而以2200 X g進行5分鐘離心分離，由此，得到含有微細化的脂 肪細胞和脂肪干細胞的混合物。將如上得到的混合物作為含有微細化的脂肪細胞和脂肪干 細胞的細胞制劑用于下述試驗例2?5。
[0120] (ii)接著，進行脂肪干細胞的提取。在上述工序（i)中得到的脂肪細胞及 脂肪干細胞的混合物中添加與該混合物等量的蛋白質分解酶（商品名：Collagenase ; Worthington Biochemical Corp.制）的0.4%水溶液，平穩(wěn)地振蕩，然后，在38°C下進行 45分鐘培養(yǎng)。
[0121] (iii)培養(yǎng)后，以200Xg進行5分鐘離心分離，采集上清液。在該上清液中濃縮有 脂肪細胞，在沉淀中濃縮有脂肪干細胞。
[0122] (iv)接著，對工序（iii)中得到的沉淀（脂肪干細胞的濃縮物）2?3mL添加葡聚 糖（大塚制藥（株）制）約50mL，平穩(wěn)地振蕩后，以200Xg進行5分鐘離心分離并將上清 液廢棄，由此進行脂肪干細胞的清洗。重復3次該操作。將通過本工序得到的脂肪干細胞 的濃縮物用于下述試驗例1的比較對照組。另外，將工序（iii)中得到的含有脂肪細胞的 上清供于同樣的清洗處理后，作為脂肪細胞（及細胞外基質）用于下述試驗例1。
[0123] 另外，由于脂肪細胞及脂肪干細胞使用源自各患者的細胞，因此，上述操作對各患 者進行。
[0124] 試駘例1.起閔于奪形件關節(jié)癥的疼痛的緩和效果（1)
[0125] 向具有變形性膝關節(jié)癥的受試者給藥上述工序（iv)中得到的脂肪細胞（含有細 胞外基質），觀察癥狀的變化。
[0126] 受試者為女性2名（4癥例（兩受試者均在兩膝關節(jié)具有疾?。浩骄挲g68. 5 歲）。脂肪使用從各受試者的下腹部采集的脂肪。脂肪采集量分別為102mL、95mL。依據(jù)上 述細胞制劑的制備方法由所采集的脂肪得到脂肪細胞（含有細胞外基質），向各受試者的 膝關節(jié)分別注入7mL。另外，將具有變形性膝關節(jié)癥的另2名受試者作為比較對照組，向膝 關節(jié)注入透明質酸（Suvenyl(中外制藥（株）制）：2.5mL)、或上述工序（iv)中得到的脂 肪干細胞7mL(脂肪采集部位均為下腹部；脂肪采集量分別為102mL、95mL)。在本試驗例1 中，在向膝關節(jié)進行注入時，未進行使插管的前端前后左右旋轉而刺激注入部位的操作。
[0127] 其結果，在注入脂肪細胞的受試者中，從注入當天減輕膝關節(jié)痛，其效果持續(xù)約1 個月。另外，如果與注入透明質酸或脂肪干細胞的受試者相比，早期明顯表現(xiàn)出膝關節(jié)痛的 緩和效果，疼痛的緩和效果也顯著。
[0128] 試駘例2.起閔于奪形件關節(jié)癥的疼痛的緩和效果（2)
[0129] 對具有變形性膝關節(jié)癥的受試者給藥上述工序（i)中得到的脂肪組織，觀察癥狀 的變化。另外，受試者為女性3名出癥例（各受試者均在兩膝關節(jié)中存在疾病）：平均年齡 69.7歲）。脂肪使用從各受試者的下腹部中采集的脂肪。脂肪采集量分別為95!^、10〇!^、 105mL。依照上述細胞制劑的制備方法的工序⑴從所采集的脂肪得到脂肪組織，向各受試 者的膝關節(jié)分別注入7mL。另外，具有變形性膝關節(jié)癥的另1名的受試者作為比較對照，向 膝關節(jié)注入透明質酸（Suvenyl (中外制藥（株）制）：2. 5mL)。在本試驗例2中，在向膝關 節(jié)進行注入時，未進行使插管的先端前后左右旋轉而刺激注入部位的操作。
[0130] 其結果，注入了脂肪組織的3名受試者與注入了透明質酸的受試者相比，均迅速 出現(xiàn)關節(jié)痛的緩和效果，其效果持續(xù)1個月以上。
[0131] 試駘例3.相對于奪形件關節(jié)癥的纟目織再牛效果
[0132] 對于變形性膝關節(jié)癥的女性9名（14癥例：平均年齡68. 7歲），使用前端被傾斜 切割的插管向膝關節(jié)注入含有上述工序（i)中制備的微細化的脂肪細胞及脂肪干細胞的 細胞制劑（5?10mL、含有約75萬?200萬個脂肪干細胞）。將疾病部位、脂肪抽吸的具體 的部位、所采集的脂肪的量、細胞制劑的注入量、有無通過使插管的前端前后左右旋轉來刺 激注入部位的操作示于下表1。將相對于各受試者的處置、膝關節(jié)間隙的測量結果、及利用 成為變形性膝關節(jié)癥的X射線觀察結果的評價基準的Kellgren&Lawrence分類得到的評價 結果歸納于下表1。
[0133] [表 1]
[0134]

【權利要求】
1. 一種用于治療骨接合部的疾病的細胞制劑，其含有脂肪細胞。
2. 根據(jù)權利要求1所述的細胞制劑，其中，所述細胞制劑還含有中胚層系干細胞。
3. 根據(jù)權利要求1所述的細胞制劑，其中，所述中胚層系干細胞為脂肪干細胞。
4. 根據(jù)權利要求1所述的細胞制劑，其中，所述細胞制劑相對于1個脂肪細胞含有1? 10個中胚層系干細胞。
5. 根據(jù)權利要求1所述的細胞制劑，其中，所述脂肪細胞為經(jīng)Y射線照射的細胞。
6. 根據(jù)權利要求1所述的細胞制劑，其中，所述骨接合部的疾病為選自由脊椎疾病、關 節(jié)疾病、自身免疫性疾病及骨壞死癥構成的組中的任一種。
7. 含有脂肪細胞的細胞制劑在制造骨接合部的疾病的治療劑中的應用。
8. -種用于骨接合部的疾病的治療的含有脂肪細胞的細胞制劑。
9. 一種緩和骨接合部的疼痛的方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部 給藥含有脂肪細胞的細胞制劑的工序。
10. -種骨接合部的組織再生方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部 給藥含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑的工序。
11. 一種肌肉修復用細胞制劑，其含有脂肪細胞及中胚層系干細胞。
12. 根據(jù)權利要求11所述的細胞制劑，其中，所述中胚層系干細胞為脂肪干細胞。
13. 根據(jù)權利要求11所述的細胞制劑，其中，所述細胞制劑相對于1個脂肪細胞含有 1?10個中胚層系干細胞。
14. 根據(jù)權利要求11所述的細胞制劑，其中，所述脂肪細胞為經(jīng)γ射線照射的細胞。
15. 含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑在制造肌肉修復用制劑中的應用。
16. -種用于肌肉修復的含有脂肪細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑。
17. -種肌肉修復方法，其包含向具有肌肉損傷的患者的肌肉損傷部位給藥含有脂肪 細胞及中胚層系干細胞的細胞制劑的工序。
【文檔編號】A61K35/12GK104203257SQ201380010803
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2013年2月22日 優(yōu)先權日:2012年2月24日
【發(fā)明者】佐伯正典 申請人:佐伯正典